JP2003252876A

JP2003252876A - 新規セスキテルペン系化合物、その製造方法及び組成物

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Publication number: JP2003252876A
Application number: JP2002052140A
Authority: JP
Inventors: Yoshiteru Oshima; 吉輝大島; Haruhisa Kikuchi; 晴久菊地; Norimichi Nakahata; 則道中畑; Satoshi Inatomi; 聡稲冨; Ryosuke Enoki; 良祐榎; Hiroko Sahashi; 裕子佐橋; Takeshi Hibino; 健日比野
Original assignee: Nitto Denko Corp; Hokuto Corp
Current assignee: Nitto Denko Corp; Hokuto Corp
Priority date: 2002-02-27
Filing date: 2002-02-27
Publication date: 2003-09-10
Anticipated expiration: 2022-02-27
Also published as: JP3911427B2

Abstract

(57)【要約】【課題】神経細胞の分化誘導活性及び／又は癌細胞の
増殖抑制活性を有する新規化合物、その製造方法、及び
該化合物を含有する医薬組成物もしくは食品組成物を提
供する。【解決手段】冬虫夏草から採取する新規セスキテルペ
ン系化合物の製造方法、ならびに得られた化合物および
それを用いた医薬組成物、食品組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、神経細胞の分化誘
導活性及び／又は癌細胞の増殖抑制活性を有する新規セ
スキテルペン系化合物、その製造方法、及び該化合物を
含有する医薬組成物もしくは食品組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】アルツハイマー病、老人性痴呆症、パー
キンソン病、糖尿病性神経障害及びダウン症等の脳神経
細胞の細胞死を伴う疾患に対して、種々の治療薬が開発
されている。しかし、これらの治療薬は、病気の進行を
遅らせるためのものであり、疾患そのものの治癒効果は
なく、また種々の副作用も報告されている。また、直接
その細胞を賦活することにより前記疾患を予防又は治療
する薬剤は広く探索されているが、事実上有効な薬剤は
未だ見出されていない。

【０００３】癌に対しては、従来より種々の抗癌剤や免
疫増強剤が開発されている。なかでも、従来から用いら
れているキノコ由来の医薬品としてクレスチンが臨床使
用されている。しかし、その免疫増強効果は、臨床上何
人にも発現するわけではなく、また副作用として食欲不
振、下痢、嘔吐等が認められるという問題点がある。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、神経細胞の
分化誘導活性及び／又は癌細胞の増殖抑制活性を有する
新規化合物、その製造方法、及び該化合物を含有する医
薬組成物もしくは食品組成物を提供することを目的とす
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するために鋭意研究を重ねた結果、冬虫夏草の一
種であるハナサナギタケ（Isaria japonica）の栽培品
の低級アルコール、アセトン、酢酸エチル、エーテル、
又はクロロホルム等による抽出エキスより新規なセスキ
テルペン系化合物の単離精製に成功し、更にこれらの化
合物が神経細胞の分化誘導活性及び／又は骨髄性白血病
細胞の増殖抑制活性を有することを見出し、これらの知
見をもとに本発明を完成させるに至った。

【０００６】本発明は、以下の化合物及び製造方法を提
供する。即ち、（１）式

【０００７】

【化７】

【０００８】で表されるセスキテルペン系化合物。（２）式

【０００９】

【化８】

【００１０】で表されるセスキテルペン系化合物。（３）式

【００１１】

【化９】

【００１２】で表されるセスキテルペン系化合物。（４）式

【００１３】

【化１０】

【００１４】で表されるセスキテルペン系化合物。（５）式

【００１５】

【化１１】

【００１６】で表されるセスキテルペン系化合物。（６）式

【００１７】

【化１２】

【００１８】で表されるセスキテルペン系化合物。（７）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物を
冬虫夏草から採取することを特徴とする、セスキテルペ
ン系化合物の製造方法。（８）上記（５）または（６）に記載の化合物を上記
（１）に記載の化合物から合成することを特徴とする、
セスキテルペン系化合物の製造方法。（９）上記冬虫夏草が、穀類、又は穀類及び酵母もしく
はその抽出物を添加した培地で人工栽培されたものであ
る、上記（７）に記載の製造方法。（１０）上記（１）〜（６）のいずれかに記載の化合物
と、医薬として許容できる担体を含む、神経細胞の分化
誘導活性を有する医薬組成物。（１１）上記（４）に記載の化合物と、医薬として許容
できる担体を含む、癌細胞の増殖抑制活性を有する医薬
組成物。（１２）上記（１）〜（６）のいずれかに記載の化合物
と、医薬として許容できる担体を含む、脳神経細胞の細
胞死を伴う疾患の予防用及び／又は治療用の医薬組成
物。（１３）上記（４）に記載の化合物と、医薬として許容
できる担体を含む、癌の予防用及び／又は治療用の医薬
組成物。（１４）冬虫夏草からの部分精製品を含有する医薬組成
物であって、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及び／又は
癌の予防用及び／又は治療用の医薬組成物。（１５）冬虫夏草からの部分精製品を含有する食品組成
物であって、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及び／又は
癌の予防及び／又は治療に有効な食品組成物。

【００１９】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳述する。まず、
上記（１）〜（４）に記載した本発明のセスキテルペン
系新規化合物を、麦角菌科冬虫夏草属のキノコであるハ
ナサナギタケ（Isaria japonica）から取得する方法に
ついて説明する。本化合物が取得される麦角菌科冬虫夏
草属のキノコであるハナサナギタケは、日本、台湾、中
国、ネパール等に分布し、発生時期は３〜１１月であ
る。ガの蛹、幼虫等に寄生して養分を摂取して増殖し、
虫の死骸より淡黄色の子実体を発生する。上記（１）〜
（４）に記載した本発明のセスキテルペン系化合物は、
その子実体から抽出される。即ち、子実体乾燥物を、例
えば、低級アルコール（例えば、メタノール、エタノー
ル、イソプロパノール、ｎ−ブタノールなど）、アセト
ン、酢酸エチル、エーテル、クロロホルム、又はクロロ
ホルム−メタノール等に、例えば、室温で半日から３日
浸漬する。得られた抽出エキスを減圧下濃縮し、得られ
た飴状のエキスを水に溶解後、酢酸エチル、エーテル、
クロロホルム、アセトン、ヘキサン等で抽出する。得ら
れた抽出物を通常の分離に用いられるシリカゲルクロマ
トグラフィーや分取薄層クロマトグラフィー、更には高
速液体コロマトグラフィー等を組合わせて精製すること
により、上記（１）〜（４）に示した本発明のセスキテ
ルペン系新規化合物４種、即ち、化合物ＩＪ−１、ＩＪ
−２、ＩＪ−３及びＩＪ−４を、それぞれ無色針状結晶
として単離精製することができる。また、上記（１）に
記載した化合物から、誘導体として、上記（５）または
（６）に記載したセスキテルペン系新規化合物を得るこ
とができる。具体的には、上記で得られた化合物ＩＪ−
１に、無水酢酸を用いたアセチル化または四酸化オスミ
ウムによる酸化を行うことで、上記（５）および（６）
に示した本発明のセスキテルペン系新規化合物ＩＪ−５
及びＩＪ−６を取得することができる。

【００２０】得られたＩＪ−１、ＩＪ−２、ＩＪ−３、
ＩＪ−４、ＩＪ−５及びＩＪ−６の ¹ＨＮＭＲ、¹³Ｃ
ＮＭＲを図１〜図１２に示した。またこれらのマスス
ペクトルに関しては下記表１の通りである。

【００２１】

【表１】

【００２２】これらの結果より、ＩＪ−１、ＩＪ−２、
ＩＪ−３、ＩＪ−４、ＩＪ−５及びＩＪ−６の構造を以
下の構造であると決定した。

【００２３】ＩＪ−１（上記（１）に記載した化合物）

【００２４】

【化１３】

【００２５】ＩＪ−２（上記（２）に記載した化合物）

【００２６】

【化１４】

【００２７】ＩＪ−３（上記（３）に記載した化合物）

【００２８】

【化１５】

【００２９】ＩＪ−４（上記（４）に記載した化合物）

【００３０】

【化１６】

【００３１】ＩＪ−５（上記（５）に記載した化合物）

【００３２】

【化１７】

【００３３】ＩＪ−６（上記（６）に記載した化合物）

【００３４】

【化１８】

【００３５】上述した本発明の製造方法においては、冬
虫夏草自体を天然から大量に入手することが非常に難し
く、また、冬虫夏草中の上記化合物ＩＪ−１〜ＩＪ−４
の含有量が極微量であるため、その回収が困難である場
合が多い。冬虫夏草の人工栽培方法としては種々提案さ
れており、なかでも特開平１０−４２６９１号に示され
るような、蚕の蛹成分を培地の主成分とする方法など、
動物性成分を培地に含有させ、自然界と近い栄養状態を
作り出すことで人工栽培する方法が多い。しかし、この
ような方法では、新規化合物は、極微量か、又は検出で
きない場合も多く、これを回収することが非常に困難で
ある。そこで、上述した本発明の製造方法は、上記冬虫
夏草を、穀類、又は穀類及び酵母もしくはその抽出物を
添加した培地で人工栽培する工程を、さらに含むことが
好ましい。

【００３６】本発明に係わる冬虫夏草の人工栽培は、穀
類、又は穀類及び酵母もしくはその抽出物を添加した培
地で栽培することを特徴とする。まず、米、米糠、粟、
麦等の穀類に、豆皮、おから等の豆類、サナギ粉、魚
粉、煮干粉粉砕物等の動物粉、又は酵母もしくはその抽
出物、のいずれか一つ又は複数を添加する。又は、おが
屑、コーンコブ粉砕物等の培養基材に、穀類、又は穀類
及び酵母もしくはその抽出物を加え、更に豆類、動物粉
等を添加しても良い。このように冬虫夏草を穀類、又は
穀類及び酵母もしくはその抽出物を添加した培地で人工
栽培することで、上述した本発明の新規化合物ＩＪ−１
〜ＩＪ−４、ひいては化合物ＩＪ−５及びＩＪ−６を、
効率よく取得することができる。

【００３７】上記人工栽培は、具体的には、上述した培
地にハナサナギタケ等の冬虫夏草の種菌を接種する。そ
の後、菌糸培養工程、菌掻き工程、芽出し工程、生育工
程を経て冬虫夏草子実体の収穫が行われる。このように
して人工栽培した冬虫夏草の子実体から、前述した方法
により、本発明のセスキテルペン系化合物を得ることが
できる。

【００３８】このようにして得られた本発明のセスキテ
ルペン系化合物は、グリア細胞からの神経栄養因子を介
した神経細胞の分化誘導活性及び／又は癌細胞の増殖抑
制活性を有することを特徴とする。

【００３９】中枢神経系を構成する細胞には、神経細胞
と、その周囲に存在するグリア細胞がある。グリア細胞
は外的刺激により神経栄養因子などの様々な生理活性物
質を分泌する。その中でも代表的なものとしてＮＧＦ
（Nerve Growth Factor）がある。ＮＧＦは、神経細胞
のモデルであるＰＣ１２（実施例４に記載）又はＰＣ１
２ｈ細胞を刺激して神経細胞様に分化せしめ、その細胞
形態を４〜９日後に扁平にし、神経突起又は神経線維を
伸展させる作用を有する。また、大脳のコリン作動神経
に作用してその分化を誘導し、アセチルコリン合成を促
進する。しかし、ＮＧＦはペプチドであるため血液−脳
関門を通過することができず、ＮＧＦそのものを薬とし
て用いるのは困難である。そこで、ＮＧＦ作用を有する
低分子化合物、又はグリア細胞からの様々な神経栄養因
子の分泌を促進する低分子化合物の探索が行われてき
た。本発明のセスキテルペン系化合物ＩＪ−１、ＩＪ−
２、ＩＪ−３、ＩＪ−４、ＩＪ−５及びＩＪ−６は、グ
リア細胞の神経栄養因子分泌を介した神経細胞の分化誘
導活性を有する。更に、前記化合物ＩＪ−１〜ＩＪ−６
はいずれも低分子であり、脳への到達が可能である。

【００４０】また、前記化合物のうち、エポキシド構造
を有する化合物ＩＪ−４は、骨髄性白血病細胞ＨＬ−６
０の増殖抑制能も有する。ＨＬ−６０細胞は、癌細胞の
アポトーシス研究によく利用されているが、エポキシド
構造をもつ類似の既知物質（4-Acetyl-12,13-epoxy-9-t
richothecene-3,15-diol）も、ＨＬ−６０の増殖抑制、
アポトーシス作用があることが報告されている（Gi-Su
OH et al., Biol. Pharm. Bull., 24(7), 785(200
1)）。

【００４１】なお本発明のセスキテルペン系化合物ＩＪ
−１〜ＩＪ−６は、上述した化学構造を有するものであ
れば上記効果を奏するものであって、上述した本発明の
製造方法にて得られたものに限定されるものではない。

【００４２】本発明は、上記セスキテルペン系化合物Ｉ
Ｊ−１〜ＩＪ−６から選ばれるいずれかと、医薬として
許容できる担体とを含む、神経細胞の分化誘導活性を有
する医薬組成物をも提供する。このような本発明の医薬
組成物は、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患の予防用及び
／又は治療用の医薬組成物として有用である。なお上記
「脳神経細胞の細胞死を伴う疾患」としては、例えば、
アルツハイマー病、老人性痴呆症、パーキンソン病、糖
尿病性神経障害及びダウン症等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。

【００４３】また本発明は、上記セスキテルペン系化合
物ＩＪ−４と、医薬として許容できる担体とを含む、癌
細胞の増殖抑制活性を有する医薬組成物を提供する。こ
のような本発明の医薬組成物は、癌の予防用及び／又は
治療用の医薬組成物として有用である。

【００４４】なお本明細書における「医薬として許容で
きる担体」は、添加剤も含む。当該「医薬として許容で
きる担体」としては、例えば、賦形剤（例えば、デンプ
ン、ブドウ糖、果糖、ソルビトール、マンニトール、カ
ルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、乳糖、ショ糖、ヒドロキシプロピルセル
ロース、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸
カルシウム、デキストリン）、結合剤（例えば、アラビ
アゴム、カルボキシメチルセルロース、カルボシキメチ
ルセルロースナトリウム、ゼラチン、デキストリン、ヒ
ドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、
ポリエチレングリコール、デンプン、ショ糖）、崩壊剤
（例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム、デンプン、ヒドロキシプロ
ピルセルロース）、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸
ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポ
リオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル）、滑沢剤
（例えば、ケイ酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸ケイ酸マグネシウム、タルク）、希釈
剤（例えば、水、食塩水、大豆油、ゴマ油、オリーブ油
のような植物油）、軟膏基材（例えば、パラフィン、ラ
ノリン、白色ワセリン）、矯味剤（例えば、パラオキシ
安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキ
シ安息香酸プロピルのようなパラオキシ安息香酸エステ
ル類、安息香酸ナトリウム）、等張化剤（例えば、塩化
ナトリウム、グリセリン、ブドウ糖、マンニトール）な
どの、当業者公知の種々のものが挙げられるが、これら
に限定されるものではない。

【００４５】本発明はまた、冬虫夏草からの「部分精製
品」を用いて、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及び／又
は癌の予防用及び／又は治療用の医薬組成物、あるい
は、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及び／又は癌の予防
及び／又は治療に有効な食品組成物を提供するものであ
る。

【００４６】ここで、本明細書中における「部分精製
品」とは、冬虫夏草子実体（キノコ）の乾燥物等から、
例えば有機溶媒や熱水等で抽出した抽出エキス、及び抽
出エキスを完全精製に至るまでの任意の純度まで精製し
たものをいう。「部分精製品」は、任意の純度の前記化
合物ＩＪ−１〜ＩＪ−６から選ばれる少なくともいずれ
かを含有する。「部分精製品」の形態としては、水性液
や、減圧濃縮し乾固させた固体、凍結乾燥品などの液状
物や固形物の形態を挙げることができる。本発明の上記
化合物が生理的に有害な溶媒中に存在するようにして上
記医薬組成物又は食品組成物に用いる場合には、「部分
精製品」は、乾燥させたものか、又はその乾燥物を生理
的に許容できる溶媒中に溶解、懸濁又は乳化させたもの
を指す。

【００４７】本発明においては「部分精製品」そのもの
を用いて、上記医薬組成物（主に、経口用）とすること
ができる。また、上述した「医薬上許容される担体」や
適宜の香料、色素等とともに用いて、ペレット、錠剤、
顆粒等に加工したり、ゼラチン等で被覆してカプセルに
加工して利用することもできる。医薬組成物の形態とし
て、当業者公知の種々の形態の医薬製剤、例えば、錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、丸剤、液剤、
乳剤、懸濁剤、シロップ剤及びトローチ剤等の経口剤、
並びに注射剤、点眼剤、エアゾール剤、経皮吸収剤及び
坐剤等の非経口剤が挙げられる。注射剤の場合は、安定
性の点から、バイアル等に充填後、冷凍し、通常の凍結
乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から
液剤を再調製することもできる。

【００４８】本発明の医薬組成物の投与量は、患者の年
齢、体重、疾患の程度により異なるが、経口の場合、通
常、成人１日当たり、前記化合物を単独又は複数で、１
〜１，０００ｍｇを１日１回から数回に分けて服用する
のが適当である。非経口の場合、通常、成人１日当た
り、前記化合物を単独又は複数で、０．５〜５００ｍｇ
を１日１回から数回に分けて静注、皮下注射、筋肉注射
するのが好ましい。

【００４９】本発明のセスキテルペン系化合物は、従来
から用いられてきた生薬材料を原料とするもので、有効
投与量での毒性は極めて低く、副作用はほとんど認めら
れない。したがってこのような化合物を用いた本発明の
医薬組成物は、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ等の哺乳
類に対し安全に投与することができる。

【００５０】また本発明においては、「部分精製品」そ
のものを用いて食品組成物とすることができる。また、
「部分精製品」を、例えば、ジュース、清涼飲料、茶、
スープ、豆乳、豆腐、サラダ油、ドレッシング、ヨーグ
ルト、ゼリー、プリン、フリカケ、育児用粉乳、ケー
キ、パン、クッキー、スナック菓子等に含有させること
もできる（このようにして得られた組成物も、本発明に
おける「食品組成物」に含まるものとする。）。あるい
は、「部分精製品」を、デキストリン、乳糖、デンプン
等の賦形剤などや、香料、色素等とともに、ペレット、
錠剤、顆粒等に加工したり、ゼラチン等で被覆してカプ
セルに加工して、健康食品や栄養補助食品等として利用
してもよい。

【００５１】食品組成物における「部分精製品」の配合
量は、食品や組成物の種類や状態により一律に規定しが
たいが、通常、０．０１〜５０重量％、好ましくは０．
１〜３０重量％である。配合量が０．０１重量％未満で
は経口摂取による効果が期待できない虞があり、５０重
量％を超えると食品の種類によっては風味を損なった
り、当該食品を調製できなくなる虞がある。

【００５２】

【実施例】以下、本発明を更に詳細に説明するために実
施例を記載するが、本発明は、これらの実施例に限定さ
れるものではない。実施例１（本発明の新規化合物ＩＪ−１〜ＩＪ−４の抽
出・精製）ハナサナギタケ子実体を熱風で乾燥し、得られた乾燥子
実体６．５ｋｇを７０％メタノール７０Ｌに浸漬して室
温で３日間抽出した。得られたメタノールエキス２．０
ｋｇを酢酸エチル−水で分配し、酢酸エチル可溶画分１
４９ｇを得た。また、そのとき得られた水相を用いて、
ｎ−ブタノール−水で分配し、ｎ−ブタノール可溶画分
３５５ｇを得た。

【００５３】酢酸エチル可溶画分１４９ｇをシリカゲル
カラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−ヘキサン−酢酸
エチル、酢酸エチル−メタノールの混合溶媒系で溶出を
行った。得られた１０画分のうち、酢酸エチル−メタノ
ール（９：１）で溶出した画分５．９ｇを更にシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メ
タノールの混合溶媒系で溶出を行った。得られた９画分
のうち、クロロホルム−メタノール（２０：１）で溶出
した画分１．６ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーに付し、ｎ−ヘキサン−酢酸エチルの混合溶媒系で溶
出を行った。得られた７画分のうち、ｎ−ヘキサン−酢
酸エチル（１：１）で溶出した画分２５９ｍｇをフラク
ションＡ、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：４）で溶出
した画分７９５ｍｇをフラクションＢとする。

【００５４】フラクションＡをＯＤＳカラムクロマトグ
ラフィーに付し、アセトニトリル−水の混合溶媒系で溶
出を行い、アセトニトリル−水（１：２０）で溶出した
画分より、化合物ＩＪ−１（１０３ｍｇ）を得た。

【００５５】また、フラクションＢをＯＤＳカラムクロ
マトグラフィーに付し、アセトニトリル−水の混合溶媒
系で溶出を行った。得られた６画分のうち、アセトニト
リル−水（１：２０）で溶出した画分２６０ｍｇを更に
シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホ
ルム−メタノールの混合溶媒系で溶出を行い、クロロホ
ルム−メタノール（５０：１）で溶出した画分より化合
物ＩＪ−２（９．５ｍｇ）を、クロロホルム−メタノー
ル（４０：１）で溶出した画分より、化合物ＩＪ−３
（２８２．５ｍｇ）を得た。

【００５６】ブタノール可溶画分３５５ｇをシリカゲル
カラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−メタノ
ールの混合溶媒系で溶出を行った。得られた５画分のう
ち、酢酸エチルで溶出した画分５．３ｇを更にシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メ
タノールの混合溶媒系で溶出を行った。得られた８画分
のうち、クロロホルム−メタノール（５０：１）で溶出
した画分３２０ｍｇをＯＤＳカラムクロマトグラフィー
に付し、アセトニトリル−水の混合溶媒系で溶出を行っ
た。得られた６画分のうち、アセトニトリル−水（１：
１００）で溶出した画分９８ｍｇを更にシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メタノー
ルの混合溶媒系で溶出を行い、クロロホルム−メタノー
ル（５０：１）で溶出した画分より、化合物ＩＪ−４
（５２ｍｇ）を得た。

【００５７】得られた化合物ＩＪ−１、ＩＪ−２、ＩＪ
−３及びＩＪ−４の¹ＨＮＭＲ、¹ ³ＣＮＭＲのスペ
クトルを、それぞれ図１〜図８に示す。マススペクトル
は、上記表１のとおりであった。

【００５８】実施例２（化合物ＩＪ−５（化合物ＩＪ−
１の誘導体）の合成）上記実施例１で得られた化合物ＩＪ−１（２．８ｍｇ）
をピリジン（０．５ｍＬ）に溶かし、無水酢酸（０．１
ｍＬ）、４，４−ジメチルアミノピリジン（２．０ｍ
ｇ）を加えた。室温で８時間攪拌後、残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィに付し、クロロホルム−メタノ
ール（４９：１）で溶出した画分より化合物ＩＪ−５
（２．６ｍｇ）を得た。得られた化合物ＩＪ−５の¹Ｈ
ＮＭＲと¹³ＣＮＭＲのスペクトルを、それぞれ図
９、図１０に示す。マススペクトルは、上記表１のとお
りであった。

【００５９】実施例３（化合物ＩＪ−６（化合物ＩＪ−
１の誘導体）の合成）上記実施例１で得られた化合物ＩＪ−１（５．５ｍｇ）
を水−アセトン−アセトニトリル（１：１：１）の混合
溶媒（１．０ｍＬ）に溶かし、４％四酸化オスミウム水
溶液（０．１ｍＬ）、４−メチルモルホリン−Ｎ−オキ
シド（５．０ｍｇ）を加えた。室温で２時間攪拌後、溶
媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
に付し、クロロホルム−メタノール（１９：１）で溶出
した画分より化合物ＩＪ−６を得た。得られた化合物Ｉ
Ｊ−６の¹ＨＮＭＲと¹³ＣＮＭＲのスペクトルを、
それぞれ図１１、図１２に示す。マススペクトルは、上
記表１のとおりであった。

【００６０】実施例４（本発明の新規化合物の神経細胞
に対する作用）１３２１Ｎ１アストロサイトーマ細胞はグリア細胞の一
種であるアストロサイトが癌化したものであり、アスト
ロサイトと同様に外部からの刺激により神経栄養因子を
分泌する。また、神経細胞のモデルであるＰＣ１２細胞
は、ラット副腎髄質由来褐色細胞腫より樹立された細胞
株（親クロム細胞腫細胞）であり、神経成長因子（ＮＧ
Ｆ）に応答して神経突起を伸展し、神経細胞様に変化す
る。これらの細胞をポリリジン又はコラーゲンで細胞接
着面をコーティングしたプラスチック製の培養フラスコ
又はシャーレの中で静置培養し、新規化合物ＩＪ−１〜
ＩＪ−６の神経突起伸展作用、即ち神経細胞の分化誘導
活性について検討した。１３２１Ｎ１アストロサイトー
マ細胞に関しては、５（ｖ／ｖ）％牛胎児血清を含んだ
ダルベッコ変法イーグル培地中で、３７℃、５％二酸化
炭素混有空気（水蒸気飽和）中でｐＨ７．２〜７．４で
培養した。ＰＣ１２細胞に関しては、１０（ｖ／ｖ）％
牛胎児血清及び５（ｖ／ｖ）％馬血清を含んだダルベッ
コ変法イーグル培地中で、３７℃、５％二酸化炭素混有
空気（水蒸気飽和）中でｐＨ７．２〜７．４で培養し
た。

【００６１】本発明の新規化合物ＩＪ−１〜ＩＪ−６
（実施例１〜３記載の方法によりそれぞれ調製）を、ジ
メチルスルホキシドに溶解し、ミリポアフィルター
（０．２μｍ）にて濾過滅菌後、ＰＣ１２細胞培養液に
最終濃度１０ｎＭになるように添加した。分化誘導の陽
対照は、ホルボール１２−ミリステート１３−アセ
テート（ＰＭＡ）をジメチルスルホキシドに溶解させ、
最終濃度１００ｎＭになるように添加した。３５ｍｍシ
ャーレに細胞を約２万個ずつ１３２１Ｎ１アストロサイ
トーマ細胞を分注し、翌日細胞が容器に付着したことを
確認し、試料を添加した。２日後その培養上清を取り、
あらかじめ培養しておいたＰＣ１２細胞の培養用培地と
交換した。ＰＣ１２細胞を２日間培養後、位相差顕微鏡
により形態観察を行い、その分化の程度を評価した。そ
の評価方法は、個々の細胞について、全く変化していな
いものを０点、細胞体の直径と同程度の突起伸展が見ら
れるものを１点、細胞体の２〜３倍の突起伸展が見られ
るものを２点、非常に長い突起伸展やシナプス形成が見
られるものを３点とし、１００個の細胞について得られ
た点数の平均値を細胞分化の指標とした。この結果を表
２に示した。また、化合物ＩＪ−１、ＩＪ−３及びＩＪ
−４の場合の細胞の形態（位相差光学顕微鏡像）の写真
を図１３に示した。表２に示すように、ＩＪ−１〜ＩＪ
−６いずれの場合にも神経突起の伸展が見られた。図１
３の化合物ＩＪ−１、ＩＪ−３及びＩＪ−４についても
同様の結果を示した。

【００６２】

【表２】

【００６３】実施例５（本発明の新規化合物の骨髄性白
血病細胞に対する作用）ヒト白血病細胞ＨＬ−６０は、前骨髄性白血病由来の癌
細胞株（原ＡＴＣＣ株ＣＣＬ−２４０、浮遊細胞）であ
り、好中球、マクロファージに分化できる能力を持ち、
分化及びアポトーシス研究に多用される。この細胞をシ
ャーレの中で静置培養し、新規化合物ＩＪ−１、ＩＪ−
３及びＩＪ−４を添加して、該細胞に対する増殖抑制能
について検討した。培養液は、ＲＰＭＩ１６４０培地
に１０（ｖ／ｖ）％牛胎児血清を含み、３７℃、５％二
酸化炭素混有空気（水蒸気飽和）中でｐＨ７．２〜７．
４に保った。

【００６４】２４穴プレート（浮遊細胞用）を用い、８
〜２０万細胞／ｍｌになるように、１ｍｌ／穴の細胞懸
濁液を接種し、細胞培養２〜３日目に、希釈した試料を
１０μｌ／穴で添加した。本発明の新規化合物ＩＪ−
１、ＩＪ−３及びＩＪ−４（実施例１記載の方法により
調製）は、ジメチルスルホキシドに溶解・希釈し、ミリ
ポアフィルター（０．２μｍ）にて濾過滅菌後、ＨＬ−
６０細胞培養液に最終濃度が０．１〜１００μｇ／ｍｌ
になるように添加した。負対照には、希釈液ジメチルス
ルホキシド１０μｌ／穴を添加した。

【００６５】培養１日後、細胞懸濁液１５μｌ／穴を取
り、培地で１０倍に希釈した。この細胞希釈液のＡＴＰ
活性をＡＴＰアナライザー（東亜電波工業製）で測定し
た。また、細胞形態を顕微鏡で観察した。細胞がつぶれ
て、培養液中に顆粒が散乱しているものを、細胞増殖抑
制＋（有り）、細胞形態がきれいで変化しないものを、
−（無し）とした。

【００６６】各試料は、ｎ＝３穴でＡＴＰ活性を測定
し、平均と標準偏差を求めた。無添加（ＤＭＳＯのみ）
の平均値を１００とし、各試料の平均値と標準偏差値を
算出し、Ｔ−検定法を用いて、無添加に対する有意差を
求めた。ｐ＜０．０５を有意差有りとした。

【００６７】表３に示すように、ＩＪ−１及び３には、
１０μｇ／ｍｌの濃度で、ＨＬ−６０に対する増殖抑制
は見られなかったが、エポキシド構造を有するＩＪ−４
は、１０μｇ／ｍｌの濃度で、増殖抑制能を示した。

【００６８】

【表３】

【００６９】実施例６（新規化合物の製造方法）割麦１５０ｇ、乾燥ビール酵母３０ｇ、及び水３００ｍ
ｌを混合し、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌器にて
殺菌してから室温になるまで放置し、その後無菌状態
で、滅菌容器に培地を充填し、試験区とした。ハナサナ
ギタケの菌糸を接種し、２４℃、湿度９０％以上、２１
日間培養する。菌糸が覆った培地の表面を菌掻き処理を
行い、子実体の発生を促した後、食用キノコを栽培する
時に使用する施設内において、１８℃、湿度９０％以
上、光照射を行って子実体を発生させる。この環境下で
更に２０〜４０日栽培した後、子実体を収穫し、乾燥さ
せる。対照区として、おが屑１５０ｇ、サナギ粉３０
ｇ、グルコース３ｇ、及び水３００ｍｌを混合した培地
で同様に試験を行った。得られた子実体より３０％メタ
ノールにてエキスを抽出した後、酢酸エチル−水で分配
した。また、その時得られた水相をｎ−ブタノール−水
で分配し、ｎ−ブタノール可溶画分を得、更にシリカゲ
ルクロマトグラフィーに付し、酢酸エチルで溶出した。
得られたこれらの粗精製物を、ガスクロマトグラフィー
にて分析し、新規化合物の総含有量を求めた。子実体湿
重量及び新規化合物総量を表４に示した。

【００７０】

【表４】

【００７１】実施例７（本発明の新規化合物の製造方
法）培地は、Ｎｏ．１（米１２０ｇ、コーンコブ粉砕物３０
ｇ、煮干粉砕物３０ｇ）、Ｎｏ．２（割麦１２０ｇ、コ
ーンコブ粉砕物３０ｇ、煮干粉砕物３０ｇ）、Ｎｏ．３
（割麦１２０ｇ、おが屑３０ｇ、煮干粉砕物３０ｇ）、
Ｎｏ．４（コーンコブ粉砕物１００ｇ、ビール酵母３０
ｇ、麦粉５０ｇ）、Ｎｏ．５（コーンコブ粉砕物５０
ｇ、酵母エキス３０ｇ、割麦１００ｇ）、Ｎｏ．６（割
麦１２０ｇ、酵母エキス３０ｇ、コーンコブ粉砕物３０
ｇ）、Ｎｏ．７（割麦１６０ｇ、酵母エキス１０ｇ、コ
ーンコブ粉砕物１０ｇ）、Ｎｏ．８（割麦１２０ｇ、酵
母エキス１５ｇ、豆皮１５ｇ、コーンコブ粉砕物３０
ｇ）、Ｎｏ．９（割麦５０ｇ、サナギ粉３０ｇ、コーン
コブ粉砕物１００ｇ）、Ｎｏ．１０（割麦５０ｇ、サナ
ギ粉１５ｇ、酵母１５ｇ、コーンコブ粉砕物１００ｇ）
を使用し、水３００ｍｌを加えて、実施例６と同様に培
地を作成し、栽培を行い比較した。子実体乾燥重量及び
新規化合物総量を表５に示した。

【００７２】

【表５】

【００７３】実施例８（本発明の新規化合物を含む固形
組成物の製造）実施例１の方法により、適当な純度まで精製した部分精
製品（固形物）に、倍量の重量のコーンスターチを加
え、均一になるまで混合・練合する。この練合物を乾燥
機にて６０〜７０℃で２４時間乾燥する。乾燥物をミキ
サーにて粉砕して粉末とした。この粉末は、医薬組成物
又は食品組成物として利用できるものである。

【００７４】実施例９（本発明の新規化合物を含む固形
組成物の製造）実施例１の方法により、適当な純度まで精製した部分精
製品（水性液）を、デキストリン及びグアガムの混合物
に噴霧して顆粒を形成した。この顆粒は、実施例８と同
様に医薬組成物又は食品組成物として利用できるもので
ある。

【００７５】実施例１０（本発明の新規化合物を含む液
状組成物の製造）実施例１の方法により、適当な純度まで精製した部分精
製品（固形物）１５０ｍｇ、精製大豆油１２５ｇ、ミツ
ロウ１５ｍｇ及びビタミンＥ１０ｍｇを窒素ガス雰囲気
下で約４０℃に加温し、十分に混合し、均質な液状物と
した。これをカプセル充填機に供給して１粒内容量３０
０ｍｇのゼラチンカプセル製剤を試作した。この製剤
は、実施例８と同様に医薬組成物又は食品組成物として
利用できるものである。

【００７６】

【発明の効果】本発明の新規なセスキテルペン系化合物
は、神経細胞の分化誘導活性及び／又は骨髄性白血病細
胞の増殖抑制活性を有し、アルツハイマー病、老人性痴
呆症、パーキンソン病、糖尿病性神経障害及びダウン症
等の脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及び／又は癌に対す
る予防及び／又は治療に有用である。また、本発明は、
前記化合物を含有する冬虫夏草を人工栽培を行うこと
で、前記化合物を効率的、安定的に大量に製造する方法
を提供することができる。また、この冬虫夏草の栽培体
より、抽出・精製を行うことで、前記化合物を効率良く
回収する方法を提供することができる。更に、前記化合
物を含有する組成物を製造することで、脳神経細胞の細
胞死を伴う疾患及び／又は癌に対する予防用及び／又は
治療用の医薬組成物及び／又は食品組成物を提供するこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−１
の¹ＨＮＭＲのスペクトルである。

【図２】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−１
の¹³ＣＮＭＲのスペクトルである。

【図３】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−２
の¹ＨＮＭＲのスペクトルである。

【図４】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−２
の¹³ＣＮＭＲのスペクトルである。

【図５】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−３
の¹ＨＮＭＲのスペクトルである。

【図６】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−３
の¹³ＣＮＭＲのスペクトルである。

【図７】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−４
の¹ＨＮＭＲのスペクトルである。

【図８】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−４
の¹³ＣＮＭＲのスペクトルである。

【図９】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−５
の¹ＨＮＭＲのスペクトルである。

【図１０】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−
５の¹³ＣＮＭＲのスペクトルである。

【図１１】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−
６の¹ＨＮＭＲのスペクトルである。

【図１２】本発明のセキステルペン系新規化合物ＩＪ−
６の¹³ＣＮＭＲのスペクトルである。

【図１３】本発明の新規化合物ＩＪ−１、ＩＪ−３及び
ＩＪ−４のＰＣ１２細胞に対する効果を示した位相差光
学顕微鏡像の写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 25/28 Ａ６１Ｐ 25/28 35/00 35/00 43/00 １０５ 43/00 １０５Ｃ０７Ｄ 493/10 Ｃ０７Ｄ 493/10 Ｆ 493/20 493/20 Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｄ //(Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:645）Ｃ１２Ｒ 1:645 (72)発明者菊地晴久宮城県仙台市太白区八木山南１丁目４番地 11号202号室 (72)発明者中畑則道宮城県仙台市太白区山田上ノ台町18番21号 (72)発明者稲冨聡長野県長野市大字下駒沢800−８ホクト産業株式会社きのこ総合研究所内 (72)発明者榎良祐長野県長野市大字下駒沢800−８ホクト産業株式会社きのこ総合研究所内 (72)発明者佐橋裕子大阪府茨木市下穂積１丁目１番２号日東電工株式会社内 (72)発明者日比野健大阪府茨木市下穂積１丁目１番２号日東電工株式会社内Ｆターム(参考） 4B064 AC13 AC21 CA05 CC03 CD21 CE02 CE03 CE08 CE10 DA01 4C071 AA03 AA04 AA08 BB01 BB02 BB06 CC12 CC13 DD11 DD21 EE02 EE05 EE07 FF15 FF17 GG01 GG03 HH05 JJ01 KK17 LL01 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 CA01 MA01 MA04 NA14 ZA01 ZA02 ZA15 ZB22 ZB26 4C087 AA01 AA02 AA03 BB21 NA14 ZA01 ZA02 ZA15 ZB21 ZB26 4C088 AA01 AC18 AD09 AD19 BA32 NA14 ZA01 ZA02 ZA15 ZB21 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表されるセスキテルペン系化合物。
【請求項２】式【化２】で表されるセスキテルペン系化合物。
【請求項３】式【化３】で表されるセスキテルペン系化合物。
【請求項４】式【化４】で表されるセスキテルペン系化合物。
【請求項５】式【化５】で表されるセスキテルペン系化合物。
【請求項６】式【化６】で表されるセスキテルペン系化合物。
【請求項７】請求項１〜４のいずれかに記載の化合物
を冬虫夏草から採取することを特徴とする、セスキテル
ペン系化合物の製造方法。
【請求項８】請求項５または６に記載の化合物を請求
項１に記載の化合物から合成することを特徴とする、セ
スキテルペン系化合物の製造方法。
【請求項９】上記冬虫夏草が、穀類、又は穀類及び酵
母もしくはその抽出物を添加した培地で人工栽培された
ものである、請求項７に記載の製造方法。
【請求項１０】請求項１〜６のいずれかに記載の化合
物と、医薬として許容できる担体を含む、神経細胞の分
化誘導活性を有する医薬組成物。
【請求項１１】請求項４に記載の化合物と、医薬とし
て許容できる担体を含む、癌細胞の増殖抑制活性を有す
る医薬組成物。
【請求項１２】請求項１〜６のいずれかに記載の化合
物と、医薬として許容できる担体を含む、脳神経細胞の
細胞死を伴う疾患の予防用及び／又は治療用の医薬組成
物。
【請求項１３】請求項４に記載の化合物と、医薬とし
て許容できる担体を含む、癌の予防用及び／又は治療用
の医薬組成物。
【請求項１４】冬虫夏草からの部分精製品を含有する
医薬組成物であって、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及
び／又は癌の予防用及び／又は治療用の医薬組成物。
【請求項１５】冬虫夏草からの部分精製品を含有する
食品組成物であって、脳神経細胞の細胞死を伴う疾患及
び／又は癌の予防及び／又は治療に有効な食品組成物。