JP2003204781A - 有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 - Google Patents
有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法Info
- Publication number
- JP2003204781A JP2003204781A JP2002328928A JP2002328928A JP2003204781A JP 2003204781 A JP2003204781 A JP 2003204781A JP 2002328928 A JP2002328928 A JP 2002328928A JP 2002328928 A JP2002328928 A JP 2002328928A JP 2003204781 A JP2003204781 A JP 2003204781A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- organochlorine compound
- organochlorine
- tce
- degrading
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】有機塩素化合物を共代謝基質無しで、環境基準
値以下まで、短時間に分解することができる微生物及び
それを用いた水又は土壌中の有機塩素化合物の分解方法
を提供する。 【解決手段】該微生物は、ラルストニア属のラルストニ
アｓｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からな
る有機塩素化合物分解性微生物である。該有機塩素化合
物分解性微生物は、フェノール、トルエン等の共代謝基
質無しで有機塩素化合物を分解する酸化酵素を発現す
る。有機塩素化合物としては、汚染環境中の塩素化脂肪
族炭化水素化合物、特にトリクロロエチレン（ＴＣＥ）
又は／及びジクロロエチレン（ＤＣＥ）が好適に採択さ
れ、それらに上記微生物（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）
を接触させて分解することにより汚染環境が浄化され
る。
値以下まで、短時間に分解することができる微生物及び
それを用いた水又は土壌中の有機塩素化合物の分解方法
を提供する。 【解決手段】該微生物は、ラルストニア属のラルストニ
アｓｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からな
る有機塩素化合物分解性微生物である。該有機塩素化合
物分解性微生物は、フェノール、トルエン等の共代謝基
質無しで有機塩素化合物を分解する酸化酵素を発現す
る。有機塩素化合物としては、汚染環境中の塩素化脂肪
族炭化水素化合物、特にトリクロロエチレン（ＴＣＥ）
又は／及びジクロロエチレン（ＤＣＥ）が好適に採択さ
れ、それらに上記微生物（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）
を接触させて分解することにより汚染環境が浄化され
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】 本発明は、有機塩素化合物
分解性新規微生物及び同新規微生物を用いる有機塩素化
合物の分解方法に係り、特にフェノール、トルエン等の
共代謝基質無しで有機塩素化合物を分解する有機塩素化
合物分解性新規微生物及び同新規微生物を用いる有機塩
素化合物の分解方法に関する。
分解性新規微生物及び同新規微生物を用いる有機塩素化
合物の分解方法に係り、特にフェノール、トルエン等の
共代謝基質無しで有機塩素化合物を分解する有機塩素化
合物分解性新規微生物及び同新規微生物を用いる有機塩
素化合物の分解方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】 従
来、機械、金属系の工場等で脱脂洗浄剤として利用され
ているトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びテトラクロロ
エチレン（ＰＣＥ）は、ほ乳類における試験で発ガン性
を有することが複数の報告で明らかになっており、我が
国では平成５年３月、水質汚濁防止法において環境基準
が設定された。ところが、ＴＣＥ・ＰＣＥはこれ以前に
土壌・地下水中に蓄積され、環境庁が実施した全国の地
下水質調査においても、環境基準値を越えた事例が多数
報告されており、最近においても、土壌・地下水の高濃
度汚染が見つかった事例が新聞等で報道されている。従
来、ＴＣＥやＰＣＥで汚染された土壌・地下水の物理的
浄化法としては、主に土壌ガス吸引法と揚水ばっ気法が
ある。これらの方法は多大な動力が必要で、ＴＣＥやＰ
ＣＥの含有量が低濃度のものでは処理効率が悪く、完全
な浄化は困難である。近年、欧米では、ＴＣＥやＰＣＥ
を分解する微生物などを用いた有害化学物質の生物的環
境修復（バイオレメディエーション）が一部実用化され
ており、我が国においてもこのようなＴＣＥを分解する
微生物による土壌修復に関する報告が多数なされてい
る。
来、機械、金属系の工場等で脱脂洗浄剤として利用され
ているトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びテトラクロロ
エチレン（ＰＣＥ）は、ほ乳類における試験で発ガン性
を有することが複数の報告で明らかになっており、我が
国では平成５年３月、水質汚濁防止法において環境基準
が設定された。ところが、ＴＣＥ・ＰＣＥはこれ以前に
土壌・地下水中に蓄積され、環境庁が実施した全国の地
下水質調査においても、環境基準値を越えた事例が多数
報告されており、最近においても、土壌・地下水の高濃
度汚染が見つかった事例が新聞等で報道されている。従
来、ＴＣＥやＰＣＥで汚染された土壌・地下水の物理的
浄化法としては、主に土壌ガス吸引法と揚水ばっ気法が
ある。これらの方法は多大な動力が必要で、ＴＣＥやＰ
ＣＥの含有量が低濃度のものでは処理効率が悪く、完全
な浄化は困難である。近年、欧米では、ＴＣＥやＰＣＥ
を分解する微生物などを用いた有害化学物質の生物的環
境修復（バイオレメディエーション）が一部実用化され
ており、我が国においてもこのようなＴＣＥを分解する
微生物による土壌修復に関する報告が多数なされてい
る。
【０００３】従来、ＴＣＥ分解菌の例としてはＭｅｔｈ
ｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ＯＢ
３ｂ（特開平４−５０１６６７、特開平５−２１２３７
１、）、Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐ
ｏｒｉｕｍ ＴＵＫＵＢＡ（特開平２−９２２７４、特
開平３−２９２９７０、特開平６−２２６２３０）、Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｆ１（特開昭６
４−３４４９９）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉ
ｄａ ＢＨ（ケミカルエンジニアリング、３９，
（６）、４９４−４９８，１９９４）、Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ ＵＣ−Ｒ５，ＵＣ−Ｐ２（特
開昭６２−８４７８０）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐ
ｕｔｉｄａ ＫＷＩ−９（特開平６−７０７５３）、Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉｎａ ＫＲ−１
（特開平２−５０３８６６、５−５０２５９３）、Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ Ｇ４（特開平４
−５０２２７７）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃ
ｉａ ＫＫ０１（特開平６−２９６７１１）、Ｂｕｒｋ
ｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐ．Ｎ１６−１（特開平１０−５
２２５９）、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａ
ＫＳ０１（特開２０００−１０２３７７）、Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｕｓ ＪＭＰ１３４（Ａｐ
ｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．，５６，
（４），１１７９−１１８１，１９９０）、Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｕｓ ＫＳ０１（特開平７
−１２３９７６）、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｅｕｒ
ｏｐａｅａ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１５９，（２），６４０−６４
３，１９８９）などが知られている。
ｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ＯＢ
３ｂ（特開平４−５０１６６７、特開平５−２１２３７
１、）、Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐ
ｏｒｉｕｍ ＴＵＫＵＢＡ（特開平２−９２２７４、特
開平３−２９２９７０、特開平６−２２６２３０）、Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｆ１（特開昭６
４−３４４９９）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉ
ｄａ ＢＨ（ケミカルエンジニアリング、３９，
（６）、４９４−４９８，１９９４）、Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ ＵＣ−Ｒ５，ＵＣ−Ｐ２（特
開昭６２−８４７８０）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐ
ｕｔｉｄａ ＫＷＩ−９（特開平６−７０７５３）、Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉｎａ ＫＲ−１
（特開平２−５０３８６６、５−５０２５９３）、Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ Ｇ４（特開平４
−５０２２７７）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃ
ｉａ ＫＫ０１（特開平６−２９６７１１）、Ｂｕｒｋ
ｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐ．Ｎ１６−１（特開平１０−５
２２５９）、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａ
ＫＳ０１（特開２０００−１０２３７７）、Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｕｓ ＪＭＰ１３４（Ａｐ
ｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．，５６，
（４），１１７９−１１８１，１９９０）、Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｕｓ ＫＳ０１（特開平７
−１２３９７６）、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｅｕｒ
ｏｐａｅａ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１５９，（２），６４０−６４
３，１９８９）などが知られている。
【０００４】また最近、千葉県君津市においてトルエン
資化性菌であるＲａｌｓｔｏｎｉａｅｕｔｒｏｐｈａ
ＫＴ−１を用いて野外実証テストが行われた。しかしな
がら、既に知られているＴＣＥ分解菌は、誘導物質とし
てメタン、トルエン、フェノールなど環境や人体に悪影
響を及ぼす物質を必要とする。このような場合、有害な
物質は地下水・土壌に添加できないことから、分解酵素
をこのような物質で誘導した後、遠心分離して、培地成
分を除いて菌体を地下水や土壌に添加しなければならな
いため、操作が非常に煩雑となる。そこで、このような
有害な誘導物質を必要としない菌として、人為的な突然
変異によって酵素を構成的に発現する菌の取得方法及び
その菌を用いた環境修復法が報告されている。（特開平
８−２９４３８７） また、トリクロロエチレンなどによって、酸化酵素が誘
導された例として、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄ
ｏｃｉｎａ ＫＲ−１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．Ｓｔｒａｉｎ ＥＮＶＰＣ５において、トリクロロ
エチレンの存在下でトルエン酸化活性を示し、ＴＣＥが
分解された例（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ, ６１，（９）．３４７９−３４８１．１９９
５）があり、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｉａ ｃｅｐａｃｉａ
Ｇ４、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｉａｐｉｃｋｅｔｔｉｉ
ＰＫ ０１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉ
ｎａ ＫＲ−１において、トルエンの分解やトリクロロ
エチレンの分解を誘導することが示された（Ａｐｐｌ．
Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２．（３）．
８２５−８３３．１９９６）。しかし、それらはトリク
ロロエチレンなどの有機塩素化合物の分解試験例が少な
く、詳細な分解力については明らかでなく実用化には至
っていない。一方、安全な基質を誘導物質として用いる
方法としてトリプトファンを用いる方法が報告されてい
るが、地下水等に用いるには高価な物質である。
資化性菌であるＲａｌｓｔｏｎｉａｅｕｔｒｏｐｈａ
ＫＴ−１を用いて野外実証テストが行われた。しかしな
がら、既に知られているＴＣＥ分解菌は、誘導物質とし
てメタン、トルエン、フェノールなど環境や人体に悪影
響を及ぼす物質を必要とする。このような場合、有害な
物質は地下水・土壌に添加できないことから、分解酵素
をこのような物質で誘導した後、遠心分離して、培地成
分を除いて菌体を地下水や土壌に添加しなければならな
いため、操作が非常に煩雑となる。そこで、このような
有害な誘導物質を必要としない菌として、人為的な突然
変異によって酵素を構成的に発現する菌の取得方法及び
その菌を用いた環境修復法が報告されている。（特開平
８−２９４３８７） また、トリクロロエチレンなどによって、酸化酵素が誘
導された例として、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄ
ｏｃｉｎａ ＫＲ−１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．Ｓｔｒａｉｎ ＥＮＶＰＣ５において、トリクロロ
エチレンの存在下でトルエン酸化活性を示し、ＴＣＥが
分解された例（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ, ６１，（９）．３４７９−３４８１．１９９
５）があり、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｉａ ｃｅｐａｃｉａ
Ｇ４、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｉａｐｉｃｋｅｔｔｉｉ
ＰＫ ０１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉ
ｎａ ＫＲ−１において、トルエンの分解やトリクロロ
エチレンの分解を誘導することが示された（Ａｐｐｌ．
Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２．（３）．
８２５−８３３．１９９６）。しかし、それらはトリク
ロロエチレンなどの有機塩素化合物の分解試験例が少な
く、詳細な分解力については明らかでなく実用化には至
っていない。一方、安全な基質を誘導物質として用いる
方法としてトリプトファンを用いる方法が報告されてい
るが、地下水等に用いるには高価な物質である。
【０００５】本発明の目的は環境に対して問題のあるフ
ェノール、トルエン等の共代謝基質を必要とせずに、有
機塩素化合物、特にＴＣＥ又はＤＣＥを効率よく分解す
る微生物を提供すること及びそれを用いた有機塩素化合
物の分解方法、さらには有機塩素化合物で汚染された地
下水・土壌等環境の浄化法を提供することにある。
ェノール、トルエン等の共代謝基質を必要とせずに、有
機塩素化合物、特にＴＣＥ又はＤＣＥを効率よく分解す
る微生物を提供すること及びそれを用いた有機塩素化合
物の分解方法、さらには有機塩素化合物で汚染された地
下水・土壌等環境の浄化法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】 すなわち本発明は、フ
ェノール、トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合
物を分解するラルストニア属に属する有機塩素化合物分
解性新規微生物及び同微生物を用いた有機塩素化合物の
分解方法、あるいは有機塩素化合物で汚染された環境の
浄化法を提供するものであり、下記構成の有機塩素化合
物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の
分解方法である。 （１） ラルストニア属のラルストニアｓｐ．ＴＥ２６
（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩素化合物
分解性微生物。 （２） 有機塩素化合物分解性微生物が、フェノール、
トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合物を分解す
るものであることを特徴とする前記（１）に記載の有機
塩素化合物分解性微生物。 （３） 有機塩素化合物分解性微生物が、フェノール、
トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合物を分解す
る酸化酵素が発現されるものであることを特徴とする
（１）又は（２）のいずれか１項に記載の有機塩素化合
物分解性微生物。 （４） 有機塩素化合物が、塩素化脂肪族炭化水素化合
物であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれか１
項に記載の有機塩素化合物分解性微生物。
ェノール、トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合
物を分解するラルストニア属に属する有機塩素化合物分
解性新規微生物及び同微生物を用いた有機塩素化合物の
分解方法、あるいは有機塩素化合物で汚染された環境の
浄化法を提供するものであり、下記構成の有機塩素化合
物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の
分解方法である。 （１） ラルストニア属のラルストニアｓｐ．ＴＥ２６
（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩素化合物
分解性微生物。 （２） 有機塩素化合物分解性微生物が、フェノール、
トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合物を分解す
るものであることを特徴とする前記（１）に記載の有機
塩素化合物分解性微生物。 （３） 有機塩素化合物分解性微生物が、フェノール、
トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合物を分解す
る酸化酵素が発現されるものであることを特徴とする
（１）又は（２）のいずれか１項に記載の有機塩素化合
物分解性微生物。 （４） 有機塩素化合物が、塩素化脂肪族炭化水素化合
物であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれか１
項に記載の有機塩素化合物分解性微生物。
【０００７】（５） 有機塩素化合物が、トリクロロエ
チレン（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のい
ずれかあるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジク
ロロエチレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする（１）
〜（３）のいずれか１項に記載の有機塩素化合物分解性
微生物。 （６） 有機塩素化合物が、塩素化芳香族化合物である
ことを特徴とする（１）〜（３）のいずれか１項に記載
の有機塩素化合物分解性微生物。 （７） 有機塩素化合物に、前記（１）〜（６）のいず
れか１項に記載のラルストニア属のラルストニアｓｐ．
ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩
素化合物分解性微生物を接触させることを特徴とする有
機塩素化合物の分解方法。 （８） 有機塩素化合物が、トリクロロエチレン（ＴＣ
Ｅ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のいずれかあるい
はトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジクロロエチレン
（ＤＣＥ）であることを特徴とする（７）に記載の有機
塩素化合物の分解方法。 （９） 汚染環境中に含まれる有機塩素化合物に、
（１）〜（６）のいずれか１項に記載のラルストニア属
のラルストニアｓｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３
５３）からなる有機塩素化合物分解性微生物を接触させ
て汚染環境を浄化することを特徴とする有機塩素化合物
を含む汚染環境を浄化する方法。
チレン（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のい
ずれかあるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジク
ロロエチレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする（１）
〜（３）のいずれか１項に記載の有機塩素化合物分解性
微生物。 （６） 有機塩素化合物が、塩素化芳香族化合物である
ことを特徴とする（１）〜（３）のいずれか１項に記載
の有機塩素化合物分解性微生物。 （７） 有機塩素化合物に、前記（１）〜（６）のいず
れか１項に記載のラルストニア属のラルストニアｓｐ．
ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩
素化合物分解性微生物を接触させることを特徴とする有
機塩素化合物の分解方法。 （８） 有機塩素化合物が、トリクロロエチレン（ＴＣ
Ｅ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のいずれかあるい
はトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジクロロエチレン
（ＤＣＥ）であることを特徴とする（７）に記載の有機
塩素化合物の分解方法。 （９） 汚染環境中に含まれる有機塩素化合物に、
（１）〜（６）のいずれか１項に記載のラルストニア属
のラルストニアｓｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３
５３）からなる有機塩素化合物分解性微生物を接触させ
て汚染環境を浄化することを特徴とする有機塩素化合物
を含む汚染環境を浄化する方法。
【０００８】（１０） 有機塩素化合物が、トリクロロ
エチレン（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）の
いずれかあるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジ
クロロエチレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする
（９）に記載の有機塩素化合物を含む汚染環境を浄化す
る方法。 （１１）有機塩素化合物を分解させる際に、鉄以外の成
分を含まない溶液中か、又は鉄以外の成分を４０ｍＭ以
下にした溶液中で、ラルストニア属のラルストニアｓ
ｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有
機塩素化合物分解性微生物を接触させて、分解させるこ
とを特徴とする（７）〜（１０）のいずれか１項に記載
の有機塩素化合物の分解方法。 （１２）無機塩培地と、炭素源としての炭酸ガス又は炭
酸イオン、及び無機の電子供与体よりなる培地を用いて
増殖させて得られた有機塩素化合物分解性微生物（菌
体）を用いることを特徴とする（７）〜（１１）のいず
れか１項に記載の有機塩素化合物の分解方法。 （１３）有機塩素化合物によって酸化酵素を誘導する菌
株を得るための選抜方法として、リン酸塩、無機態窒
素、塩化ナトリウム、カルシウム塩、微量金属塩の合計
が４０ｍＭを越えない低濃度の無機塩培地に有機塩素化
合物を添加した培地を用いて、添加した有機塩素化合物
の濃度の減少によって選抜する集積培養法。 （１４）有機塩素化合物によって（１）〜（６）のいず
れか１項に記載のラルストニア属のラルストニアｓｐ．
ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩
素化合物によって酸化酵素を誘導する有機塩素化合物分
解性微生物を得るための選抜方法として、リン酸塩、無
機態窒素、塩化ナトリウム、カルシウム塩、微量金属塩
の合計が４０ｍＭを越えない低濃度の無機塩培地に有機
塩素化合物を添加した培地を用いて、添加した有機塩素
化合物の濃度の減少によって選抜する集積培養法。
エチレン（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）の
いずれかあるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジ
クロロエチレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする
（９）に記載の有機塩素化合物を含む汚染環境を浄化す
る方法。 （１１）有機塩素化合物を分解させる際に、鉄以外の成
分を含まない溶液中か、又は鉄以外の成分を４０ｍＭ以
下にした溶液中で、ラルストニア属のラルストニアｓ
ｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有
機塩素化合物分解性微生物を接触させて、分解させるこ
とを特徴とする（７）〜（１０）のいずれか１項に記載
の有機塩素化合物の分解方法。 （１２）無機塩培地と、炭素源としての炭酸ガス又は炭
酸イオン、及び無機の電子供与体よりなる培地を用いて
増殖させて得られた有機塩素化合物分解性微生物（菌
体）を用いることを特徴とする（７）〜（１１）のいず
れか１項に記載の有機塩素化合物の分解方法。 （１３）有機塩素化合物によって酸化酵素を誘導する菌
株を得るための選抜方法として、リン酸塩、無機態窒
素、塩化ナトリウム、カルシウム塩、微量金属塩の合計
が４０ｍＭを越えない低濃度の無機塩培地に有機塩素化
合物を添加した培地を用いて、添加した有機塩素化合物
の濃度の減少によって選抜する集積培養法。 （１４）有機塩素化合物によって（１）〜（６）のいず
れか１項に記載のラルストニア属のラルストニアｓｐ．
ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩
素化合物によって酸化酵素を誘導する有機塩素化合物分
解性微生物を得るための選抜方法として、リン酸塩、無
機態窒素、塩化ナトリウム、カルシウム塩、微量金属塩
の合計が４０ｍＭを越えない低濃度の無機塩培地に有機
塩素化合物を添加した培地を用いて、添加した有機塩素
化合物の濃度の減少によって選抜する集積培養法。
【０００９】
【発明の実施の形態】以下に本発明の実施の形態につい
て説明する。本発明において提供される菌株としては、
ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６が挙げられ、本菌株は５ｐ
ｐｍのトリクロロエチレンを２４時間で１００％分解す
る能力を有する。
て説明する。本発明において提供される菌株としては、
ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６が挙げられ、本菌株は５ｐ
ｐｍのトリクロロエチレンを２４時間で１００％分解す
る能力を有する。
【００１０】本発明の微生物としてはラルストニア属の
ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６が挙げられる。この菌株は
地下水・土壌などから分離される新規な菌株で、その単
離方法は後記実施例に具体的に記載するが、以下に単離
したＴＥ２６株の菌学的性質について記載する。
ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６が挙げられる。この菌株は
地下水・土壌などから分離される新規な菌株で、その単
離方法は後記実施例に具体的に記載するが、以下に単離
したＴＥ２６株の菌学的性質について記載する。
【００１１】
形態
形 桿菌
大きさ ０．８×１．０〜１．５μm
胞子 無
運動性 有
グラム染色 陰性
生理的性質
酸素に対する態度 好気性
ＯＦテスト −
カタラーゼ 陽性
オキシダーゼ 陽性
硝酸還元 陽性
ＶＰテスト 陰性
インドールの生成 陰性
硫化水素生成 陰性
デンプンの分解 陰性
クエン酸利用 陽性
アルギニンヒドラーゼ 陰性
ウレアーゼ 陽性
β一グルコシダーゼ 陰性
プロテアーゼ 陰性
β一ガラクトシダーゼ 陰性
資化性
グルコース 陰性
アラビノース 陰性
マンノース 陰性
マンニトール 陰性
グルコサミン 陰性
マルトース 陰性
グルコン酸 陽性
カプロン酸 陽性
アジピン酸 陽性
リンゴ酸 陽性
クエン酸 陽性
酢酸フェニル 陰性
【００１２】以上の菌学的性質を有する菌株をＢｅｒｇ
ｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第１巻１９８６年に従って同
定した結果、この菌株はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ）属に属する菌株と同定し、シュードモナス
ｓｐ．ＴＥ２６と命名した。そして同菌株は平成１３年
６月４日付けで独立行政法人産業技術総合研究所生物寄
託センターへＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３として寄託し
た。しかし、その後同菌株は、１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基
配列の相同性から、ラルストニアに最も近い菌と判明し
たことから、ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６と微生物の識
別のための表示を変更し、平成１３年８月１０日付けで
独立行政法人産業技術総合研究所生物寄託センターへ記
載事項変更届を提出した。
ｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第１巻１９８６年に従って同
定した結果、この菌株はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ）属に属する菌株と同定し、シュードモナス
ｓｐ．ＴＥ２６と命名した。そして同菌株は平成１３年
６月４日付けで独立行政法人産業技術総合研究所生物寄
託センターへＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３として寄託し
た。しかし、その後同菌株は、１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基
配列の相同性から、ラルストニアに最も近い菌と判明し
たことから、ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６と微生物の識
別のための表示を変更し、平成１３年８月１０日付けで
独立行政法人産業技術総合研究所生物寄託センターへ記
載事項変更届を提出した。
【００１３】本発明の微生物のラルストニア属のラルス
トニアｓｐ．ＴＥ２６菌株の培養に用いる培地として
は、通常使用されるものであればいずれでもよい。炭素
源としてはクエン酸、エタノール等が好ましい。窒素源
としてはペプトン、肉エキス、酵母エキス等の有機窒素
源のほか、無機窒素源としてはアンモニウム塩、硝酸塩
等が使用できる。無機塩類としては、カリウムイオン、
カルシウムイオン、マグネシウムイオン、鉄（ＩＩ）イ
オン、銅（ＩＩ）イオン、マンガンイオン、コバルトイ
オン、モリブデンイオン、亜鉛イオン等の金属イオンと
硫酸イオン、リン酸イオン等の陰イオンとからなる塩類
を組み合わせて用いることができる。また、無機栄養に
よる培地としては、上記無機窒素源、無機塩類に加え
て、炭素源として、二酸化炭素、炭酸ナトリウム、重炭
酸ナトリウムなどの炭酸ガス又は炭酸イオンを含むもの
であればよい。無機の電子供与体としては、水素、チオ
硫酸ナトリウム、還元鉄など通常使用されるものならい
ずれでもよい。
トニアｓｐ．ＴＥ２６菌株の培養に用いる培地として
は、通常使用されるものであればいずれでもよい。炭素
源としてはクエン酸、エタノール等が好ましい。窒素源
としてはペプトン、肉エキス、酵母エキス等の有機窒素
源のほか、無機窒素源としてはアンモニウム塩、硝酸塩
等が使用できる。無機塩類としては、カリウムイオン、
カルシウムイオン、マグネシウムイオン、鉄（ＩＩ）イ
オン、銅（ＩＩ）イオン、マンガンイオン、コバルトイ
オン、モリブデンイオン、亜鉛イオン等の金属イオンと
硫酸イオン、リン酸イオン等の陰イオンとからなる塩類
を組み合わせて用いることができる。また、無機栄養に
よる培地としては、上記無機窒素源、無機塩類に加え
て、炭素源として、二酸化炭素、炭酸ナトリウム、重炭
酸ナトリウムなどの炭酸ガス又は炭酸イオンを含むもの
であればよい。無機の電子供与体としては、水素、チオ
硫酸ナトリウム、還元鉄など通常使用されるものならい
ずれでもよい。
【００１４】培養は好気的に行われ、振とう培養又はジ
ャーファメンターを用いて通気条件下で行うことができ
る。培地のｐＨは５〜８の範囲が好ましく、培養温度は
２０〜３５℃の範囲内が好ましく、培養時間は１〜３日
間が好ましい。本発明の前記微生物を有機塩素化合物に
汚染された地下水・土壌に添加することにより有機塩素
化合物を分解・除去して、浄化することができる。該微
生物の菌体を添加する方法としては、培養液を添加す
る、菌体を添加する、菌体を担体に吸着させて添加
する、のいずれの方法でもよい。添加する菌体量は１０
5〜１０9 個／ｍｌが好ましい。本発明により分解でき
る好ましい有機塩素化合物としては、特にトリクロロエ
チレン及びジクロロエチレンが挙げられる。
ャーファメンターを用いて通気条件下で行うことができ
る。培地のｐＨは５〜８の範囲が好ましく、培養温度は
２０〜３５℃の範囲内が好ましく、培養時間は１〜３日
間が好ましい。本発明の前記微生物を有機塩素化合物に
汚染された地下水・土壌に添加することにより有機塩素
化合物を分解・除去して、浄化することができる。該微
生物の菌体を添加する方法としては、培養液を添加す
る、菌体を添加する、菌体を担体に吸着させて添加
する、のいずれの方法でもよい。添加する菌体量は１０
5〜１０9 個／ｍｌが好ましい。本発明により分解でき
る好ましい有機塩素化合物としては、特にトリクロロエ
チレン及びジクロロエチレンが挙げられる。
【００１５】
【実施例】 以下、実施例により本発明を具体的に説明
する。 実施例１：「微生物の単離」 「微生物の単離方法」沼津市の雑木林内の土壌を採取
し、同土壌１ｇを１０ｍｌの蒸留水とともに１時間振と
うした後、上澄１ｍｌを取り出して容量１２５ｍｌのね
じ口ガラス瓶に投入し、さらに表１記載の無機塩培地
（液体培地）と、炭素源としてのエタノール及びＴＣＥ
を加え合わせて総量で２０ｍｌになるようにして混合
し、テフロン（登録商標）コートセプタムとキャップで
密栓し、２５℃、１３０ｒｐｍ（レシプロ）で１週間振
とう培養した。なお、エタノールの濃度は２００ｍｇ／
Ｌ、ＴＣＥの濃度は１０ｍｇ／Ｌとした。
する。 実施例１：「微生物の単離」 「微生物の単離方法」沼津市の雑木林内の土壌を採取
し、同土壌１ｇを１０ｍｌの蒸留水とともに１時間振と
うした後、上澄１ｍｌを取り出して容量１２５ｍｌのね
じ口ガラス瓶に投入し、さらに表１記載の無機塩培地
（液体培地）と、炭素源としてのエタノール及びＴＣＥ
を加え合わせて総量で２０ｍｌになるようにして混合
し、テフロン（登録商標）コートセプタムとキャップで
密栓し、２５℃、１３０ｒｐｍ（レシプロ）で１週間振
とう培養した。なお、エタノールの濃度は２００ｍｇ／
Ｌ、ＴＣＥの濃度は１０ｍｇ／Ｌとした。
【００１６】
【表１】
【００１７】上記の振とう培養を開始してから１週間後
に、菌液２００μｌを取り出してＧＣ／ヘッドスペース
測定用の容量２７ｍｌのバイアルに投入し、さらに上記
振とう培養と同様に表１記載の無機塩培地（液体培地）
とエタノール、ＴＣＥを加えて総量で合わせて４ｍｌに
なるように混合し、テフロンコートシリコンセプタムと
穴あきキャップで密栓し、２５℃１３０ｒｐｍ（レシプ
ロ）で振とうし、５日間振とう培養した後、そのままオ
ートサンプラーに設置し、ＧＣ／ヘッドスペースにより
ＴＣＥ濃度を測定した。さらに、イオンクロマトグラフ
により塩素濃度を測定し、分解の見られた集積培養は、
一週間毎に植え継ぎ、ＴＣＥ分解を継続調査した。微生
物の単離方法は、まず、集積培養を６週間継続した後、
表１の基本培地に酵母エキス４００ｍｇ／Ｌと寒天１６
ｇ／Ｌを加えて調製した寒天培地に、上記分解の見られ
た集積培養液を１０，０００倍に希釈し、塗沫した。そ
れを、３０℃で２〜３日培養し形成された各コロニーを
取り出し、それらを表１記載の基本培地に酵母エキス２
００ｍｇ／Ｌを加えて調製した液体培地に投入して、２
５℃１３０ｒｐｍ（レシプロ）で、２４時間振とう培養
した後、形成されたコロニーをさらに前述と同じ組成の
寒天培地に、１０，０００倍に希釈した菌液を塗沫し
た。このような純粋分離操作を複数回行い、コロニーが
純粋になるまで繰り返した。単離した各菌株を、ＮａＣ
ｌを除いたＬＢ培地（表２：以下「ＬＢ（−ＮａＣｌ）
培地」という）１０ｍｌで３０℃、２３０ｒｐｍで１７
時間振とう培養した。
に、菌液２００μｌを取り出してＧＣ／ヘッドスペース
測定用の容量２７ｍｌのバイアルに投入し、さらに上記
振とう培養と同様に表１記載の無機塩培地（液体培地）
とエタノール、ＴＣＥを加えて総量で合わせて４ｍｌに
なるように混合し、テフロンコートシリコンセプタムと
穴あきキャップで密栓し、２５℃１３０ｒｐｍ（レシプ
ロ）で振とうし、５日間振とう培養した後、そのままオ
ートサンプラーに設置し、ＧＣ／ヘッドスペースにより
ＴＣＥ濃度を測定した。さらに、イオンクロマトグラフ
により塩素濃度を測定し、分解の見られた集積培養は、
一週間毎に植え継ぎ、ＴＣＥ分解を継続調査した。微生
物の単離方法は、まず、集積培養を６週間継続した後、
表１の基本培地に酵母エキス４００ｍｇ／Ｌと寒天１６
ｇ／Ｌを加えて調製した寒天培地に、上記分解の見られ
た集積培養液を１０，０００倍に希釈し、塗沫した。そ
れを、３０℃で２〜３日培養し形成された各コロニーを
取り出し、それらを表１記載の基本培地に酵母エキス２
００ｍｇ／Ｌを加えて調製した液体培地に投入して、２
５℃１３０ｒｐｍ（レシプロ）で、２４時間振とう培養
した後、形成されたコロニーをさらに前述と同じ組成の
寒天培地に、１０，０００倍に希釈した菌液を塗沫し
た。このような純粋分離操作を複数回行い、コロニーが
純粋になるまで繰り返した。単離した各菌株を、ＮａＣ
ｌを除いたＬＢ培地（表２：以下「ＬＢ（−ＮａＣｌ）
培地」という）１０ｍｌで３０℃、２３０ｒｐｍで１７
時間振とう培養した。
【００１８】
【表２】
【００１９】次に前記培養物を、１５，０００ｇで５分
間高速遠沈しながら、基本培地で３回洗浄して、沈殿物
の菌体を得た。ＧＣヘッドスペース測定用の容量２７ｍ
ｌのバイアルに、表１の基本培地、ＴＣＥ５ｍｇ／Ｌ、
前記洗浄により得られた菌体のＯＤ６００が１〜１．５
となるように混合し、合わせて４ｍｌになるようにし、
テフロンコートシリコンセプタムと穴あきキャップで密
栓、５日間振とう培養した後、そのままオートサンプラ
ーに設置し、ＧＣ／ヘッドスペースによりＴＣＥ濃度を
測定した。ＴＣＥの減少が見られたサンプルは、さら
に、イオンクロマトグラフにより塩素濃度を測定し、Ｔ
ＣＥの分解を確認した。以上のようにしてＴＣＥの分解
が確認された菌株を単離した。得られた該菌は分析の結
果、前述のラルストニア属のラルストニアｓｐ．ＴＥ２
６（ＦＥＲＭＰ−１８３５３）であることが判明した。
間高速遠沈しながら、基本培地で３回洗浄して、沈殿物
の菌体を得た。ＧＣヘッドスペース測定用の容量２７ｍ
ｌのバイアルに、表１の基本培地、ＴＣＥ５ｍｇ／Ｌ、
前記洗浄により得られた菌体のＯＤ６００が１〜１．５
となるように混合し、合わせて４ｍｌになるようにし、
テフロンコートシリコンセプタムと穴あきキャップで密
栓、５日間振とう培養した後、そのままオートサンプラ
ーに設置し、ＧＣ／ヘッドスペースによりＴＣＥ濃度を
測定した。ＴＣＥの減少が見られたサンプルは、さら
に、イオンクロマトグラフにより塩素濃度を測定し、Ｔ
ＣＥの分解を確認した。以上のようにしてＴＣＥの分解
が確認された菌株を単離した。得られた該菌は分析の結
果、前述のラルストニア属のラルストニアｓｐ．ＴＥ２
６（ＦＥＲＭＰ−１８３５３）であることが判明した。
【００２０】実施例２：ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６株
におけるＴＣＥによる分解酵素の発現 寒天培地に１５℃で保存しておいた前記実施例１で得ら
れたラルストニアｓｐ．ＴＥ２６の１白金耳をＬＢ（−
ＮａＣｌ）培地１０ｍｌに植菌し、３０℃、２３０ｒｐ
ｍで１７時間振とう培養した。それを次に１５，０００
ｇで５分間高速遠沈しながら、基本培地で３回洗浄し
た。その後、８０ｍ１容バイアルにＯＤ６００を５に調
整した菌液を２０ｍｌとＴＣＥを５ｍｇ／Ｌとなるよう
に入れ、２５℃、１３０ｒｐｍで４時間振とうした。対
照として、ＴＣＥを入れない菌液を同様に４時間振とう
した。その後、上記と同様に、１５，０００ｇで５分間
高速遠沈しながら、基本培地で２回洗浄して、沈殿物の
菌体を得た。２７ｍ１容のバイアル（ヘッドスペース測
定用）に表１記載の無機塩培地と、ＴＣＥ５ｍｇ／Ｌと
上記菌体を濃度がＯＤ６００で１．２となるように添加
した。培地の総量は４ｍｌとなるようにした。一定時間
後、ＧＣ／ヘッドスペースによりＴＣＥ濃度を測定し
た。その結果、ＴＣＥであらかじめ４時間振とう培養
（前培養）した区では、無処理区に比較して常に分解が
進んでいた。その結果は図１に示すとおりであり、これ
により、ＴＣＥによって分解酵素が誘導されていること
が理解される。
におけるＴＣＥによる分解酵素の発現 寒天培地に１５℃で保存しておいた前記実施例１で得ら
れたラルストニアｓｐ．ＴＥ２６の１白金耳をＬＢ（−
ＮａＣｌ）培地１０ｍｌに植菌し、３０℃、２３０ｒｐ
ｍで１７時間振とう培養した。それを次に１５，０００
ｇで５分間高速遠沈しながら、基本培地で３回洗浄し
た。その後、８０ｍ１容バイアルにＯＤ６００を５に調
整した菌液を２０ｍｌとＴＣＥを５ｍｇ／Ｌとなるよう
に入れ、２５℃、１３０ｒｐｍで４時間振とうした。対
照として、ＴＣＥを入れない菌液を同様に４時間振とう
した。その後、上記と同様に、１５，０００ｇで５分間
高速遠沈しながら、基本培地で２回洗浄して、沈殿物の
菌体を得た。２７ｍ１容のバイアル（ヘッドスペース測
定用）に表１記載の無機塩培地と、ＴＣＥ５ｍｇ／Ｌと
上記菌体を濃度がＯＤ６００で１．２となるように添加
した。培地の総量は４ｍｌとなるようにした。一定時間
後、ＧＣ／ヘッドスペースによりＴＣＥ濃度を測定し
た。その結果、ＴＣＥであらかじめ４時間振とう培養
（前培養）した区では、無処理区に比較して常に分解が
進んでいた。その結果は図１に示すとおりであり、これ
により、ＴＣＥによって分解酵素が誘導されていること
が理解される。
【００２１】実施例３：ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６株
におけるＴＣＥの各濃度の分解 寒天培地に１５℃で保存しておいた前記実施例１で得ら
れたラルストニアｓｐ．ＴＥ２６の１白金耳を表２記載
のＬＢ（−ＮａＣｌ）培地１０ｍｌに植菌し、３０℃、
２３０ｒｐｍで１７時間振とう培養した。次に１５，０
００ｇで５分間高速遠沈しながら、基本培地で３回洗浄
した。２７ｍ１容のバイアル（ヘッドスペース測定用）
に表１記載の無機塩培地（液体培地）、ＴＣＥ各量と菌
液を濃度がＯＤ６００で１．８となるように添加した。
培地の総量は４ｍｌとなるようにした。２５℃、１３０
ｒｐｍで振とう培養し、一定時間後、ＧＣ／ヘッドスペ
ースによりＴＣＥ濃度を測定した。その結果の、ＴＣＥ
の各濃度毎の分解の経時変化を図２に示す。これによ
り、ＴＣＥ濃度５〜９０ｍｌ／Ｌの範囲で分解可能で、
濃度が高いほどＴＣＥの分解量が増加することが解る。
におけるＴＣＥの各濃度の分解 寒天培地に１５℃で保存しておいた前記実施例１で得ら
れたラルストニアｓｐ．ＴＥ２６の１白金耳を表２記載
のＬＢ（−ＮａＣｌ）培地１０ｍｌに植菌し、３０℃、
２３０ｒｐｍで１７時間振とう培養した。次に１５，０
００ｇで５分間高速遠沈しながら、基本培地で３回洗浄
した。２７ｍ１容のバイアル（ヘッドスペース測定用）
に表１記載の無機塩培地（液体培地）、ＴＣＥ各量と菌
液を濃度がＯＤ６００で１．８となるように添加した。
培地の総量は４ｍｌとなるようにした。２５℃、１３０
ｒｐｍで振とう培養し、一定時間後、ＧＣ／ヘッドスペ
ースによりＴＣＥ濃度を測定した。その結果の、ＴＣＥ
の各濃度毎の分解の経時変化を図２に示す。これによ
り、ＴＣＥ濃度５〜９０ｍｌ／Ｌの範囲で分解可能で、
濃度が高いほどＴＣＥの分解量が増加することが解る。
【００２２】実施例４：シス−ジクロロエチレン分解
トリクロロエチレンをシス−ジクロロエチレンに変えた
以外は、実施例３と同様の方法で培養２４時間後に分解
量を測定した。濃度別分解率を図３に示す。これにより
シス−ジクロロエチレンにおいても酸化酵素が誘導さ
れ、これを分解していることが解る。
以外は、実施例３と同様の方法で培養２４時間後に分解
量を測定した。濃度別分解率を図３に示す。これにより
シス−ジクロロエチレンにおいても酸化酵素が誘導さ
れ、これを分解していることが解る。
【００２３】実施例５：土壌中のＴＣＥの分解
菌液の調整は、実施例３と同様に行った。２７ｍｌ容の
バイアル（ヘッドスペース測定用）に、乾燥させた滅菌
土壌５ｇ、菌液及びＴＣＥを合わせて３ｍｌ添加した。
ＴＣＥ濃度は６．２ｍｇ／Ｌ（土壌水分）、菌濃度は、
２．６×１０8個 ／土壌１ｇ（乾重）とした。分解の経
時変化を図４に示す。ＴＣＥ残存率は、菌液を処理しな
い対照区のＴＣＥ残存量を１００としたときの処理区の
割合で示した。これにより土壌処理においてもＴＣＥが
分解されることが解る。
バイアル（ヘッドスペース測定用）に、乾燥させた滅菌
土壌５ｇ、菌液及びＴＣＥを合わせて３ｍｌ添加した。
ＴＣＥ濃度は６．２ｍｇ／Ｌ（土壌水分）、菌濃度は、
２．６×１０8個 ／土壌１ｇ（乾重）とした。分解の経
時変化を図４に示す。ＴＣＥ残存率は、菌液を処理しな
い対照区のＴＣＥ残存量を１００としたときの処理区の
割合で示した。これにより土壌処理においてもＴＣＥが
分解されることが解る。
【００２４】上記のように、本発明の新規微生物は、Ｔ
ＣＥなどの有機塩素化合物により、酸化酵素が生成さ
れ、この酵素が直接有機塩素化合物を分解するため、従
来必要とされた共代謝基質が不要であることが解った。
ＣＥなどの有機塩素化合物により、酸化酵素が生成さ
れ、この酵素が直接有機塩素化合物を分解するため、従
来必要とされた共代謝基質が不要であることが解った。
【００２５】実施例６：分解溶液中の成分、濃度とＴＣ
Ｅの分解 菌液の調製は、実施例３と同様に行った。２７ｍｌ容の
バイアル（ヘッドスペース測定用）に、（ａ）１０，４
０，８０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．
０）、（ｂ）無機塩培地、（ｃ）無機塩培地＋１００ｍ
ｇ／Ｌグルタミン酸ナトリウム、（ｄ）蒸留水、（ｅ）
蒸留水＋２０μＭ硫酸第一鉄、のいずれかに菌濃度がＯ
Ｄ６００＝０．５となるように菌体を処理し、２５℃、
１３０ｒｐｍで振とう培養した。２４時間後のＴＣＥ分
解の残存率を図５に示す。その結果からみて、無機塩や
炭素源などが高濃度に含まれる培地では、ＴＣＥの分解
が阻害され、蒸留水に硫酸第一鉄を２０μＭ含む培地に
おいて最も分解が進んだことが解った。
Ｅの分解 菌液の調製は、実施例３と同様に行った。２７ｍｌ容の
バイアル（ヘッドスペース測定用）に、（ａ）１０，４
０，８０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．
０）、（ｂ）無機塩培地、（ｃ）無機塩培地＋１００ｍ
ｇ／Ｌグルタミン酸ナトリウム、（ｄ）蒸留水、（ｅ）
蒸留水＋２０μＭ硫酸第一鉄、のいずれかに菌濃度がＯ
Ｄ６００＝０．５となるように菌体を処理し、２５℃、
１３０ｒｐｍで振とう培養した。２４時間後のＴＣＥ分
解の残存率を図５に示す。その結果からみて、無機塩や
炭素源などが高濃度に含まれる培地では、ＴＣＥの分解
が阻害され、蒸留水に硫酸第一鉄を２０μＭ含む培地に
おいて最も分解が進んだことが解った。
【００２６】実施例７：無機栄養による増殖菌体のＴＣ
Ｅ分解 菌体の培養は、表１の無機塩培地に炭素源として二酸化
炭素又は炭酸ナトリウム、電子供与体として水素又は還
元鉄、チオ硫酸ナトリウムを用いて増殖させた。 増殖
の結果は表３に示した。これらの菌体によるＴＣＥ分解
を検討するため、表４の組み合わせで炭素源及び電子供
与体を用いて菌を培養し、この菌体を用いた他は実施例
３と同様に行った。その結果、無機栄養によって増殖さ
せた菌体は、菌体ｍｇ当たりのＴＣＥ分解量（トータル
キャパシティ：Ｔｃ）が高く、通常菌体増殖に用いられ
るトリプトン・酵母エキス培地に比較して、６倍から２
０倍のＴｃがあり、低濃度の菌体でＴＣＥを効率良く分
解できることが解った。
Ｅ分解 菌体の培養は、表１の無機塩培地に炭素源として二酸化
炭素又は炭酸ナトリウム、電子供与体として水素又は還
元鉄、チオ硫酸ナトリウムを用いて増殖させた。 増殖
の結果は表３に示した。これらの菌体によるＴＣＥ分解
を検討するため、表４の組み合わせで炭素源及び電子供
与体を用いて菌を培養し、この菌体を用いた他は実施例
３と同様に行った。その結果、無機栄養によって増殖さ
せた菌体は、菌体ｍｇ当たりのＴＣＥ分解量（トータル
キャパシティ：Ｔｃ）が高く、通常菌体増殖に用いられ
るトリプトン・酵母エキス培地に比較して、６倍から２
０倍のＴｃがあり、低濃度の菌体でＴＣＥを効率良く分
解できることが解った。
【００２７】
【表３】
【００２８】
【表４】
【００２９】実施例８：土壌中のＴＣＥ分解
菌液の調製は、実施例３と同様に行った。２７ｍｌ容の
バイアル（ヘッドスペース測定用）に、土壌８．７ｇ
（乾燥重で４ｇ）、菌液及びＴＣＥを添加した。菌濃度
は、１×１０7個／土壌１ｇ（乾重）、ＴＣＥ濃度は、
５．８ｍｇ／Ｌ（土壌水分）とした。分解の経時変化を
図６に示す。ＴＣＥ残存率は、菌液を処理しない対照区
のＴＣＥ残存量を１００としたときの割合で示した。そ
の結果、本菌体は、土壌に炭素源となるような基質を添
加しなくても、１×１０7個／土壌１ｇ（乾重）という
低濃度の菌体で５６日間の長期に渡ってＴＣＥを徐々に
分解し、５．８ｍｇ／Ｌ（土壌水分）のうち９０％を分
解することが解った。
バイアル（ヘッドスペース測定用）に、土壌８．７ｇ
（乾燥重で４ｇ）、菌液及びＴＣＥを添加した。菌濃度
は、１×１０7個／土壌１ｇ（乾重）、ＴＣＥ濃度は、
５．８ｍｇ／Ｌ（土壌水分）とした。分解の経時変化を
図６に示す。ＴＣＥ残存率は、菌液を処理しない対照区
のＴＣＥ残存量を１００としたときの割合で示した。そ
の結果、本菌体は、土壌に炭素源となるような基質を添
加しなくても、１×１０7個／土壌１ｇ（乾重）という
低濃度の菌体で５６日間の長期に渡ってＴＣＥを徐々に
分解し、５．８ｍｇ／Ｌ（土壌水分）のうち９０％を分
解することが解った。
【００３０】
【発明の効果】本発明の新規な微生物によれば、従来法
で必要としたメタン、フェノール、トルエンなどの環境
に問題のある誘導物質（共代謝基質）を不要として、直
接に有機塩素化合物を分解できる。そのため、有機塩素
化合物で汚染された環境を共代謝基質で汚染する危険な
しに環境を浄化することができる。しかも本発明で提案
される微生物は、突然変異や遺伝子組み換え処理によっ
て得られたものでなく、格別な有害性ないし危険性はな
い。
で必要としたメタン、フェノール、トルエンなどの環境
に問題のある誘導物質（共代謝基質）を不要として、直
接に有機塩素化合物を分解できる。そのため、有機塩素
化合物で汚染された環境を共代謝基質で汚染する危険な
しに環境を浄化することができる。しかも本発明で提案
される微生物は、突然変異や遺伝子組み換え処理によっ
て得られたものでなく、格別な有害性ないし危険性はな
い。
【図１】本発明の微生物による分解酵素の発現が理解さ
れるグラフ図、
れるグラフ図、
【図２】本発明の微生物によるトリクロロエチレンの分
解状態を示すグラフ図、
解状態を示すグラフ図、
【図３】本発明の微生物によるシス−ジクロロエチレン
の分解状態を示すグラフ図、
の分解状態を示すグラフ図、
【図４】本発明の微生物による土壌中のトリクロロエチ
レンの分解状態を示すグラフ図、
レンの分解状態を示すグラフ図、
【図５】本発明の微生物によるＴＣＥ分解の残存率に与
える分解溶液の影響を示すグラフ図、
える分解溶液の影響を示すグラフ図、
【図６】 本発明の微生物による土壌中のＴＣＥ分解の
経時変化を示すグラフ図、
経時変化を示すグラフ図、
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ１２Ｎ 1/00 Ｂ０９Ｂ 3/00 Ｅ
Ｆターム(参考） 4B065 AA01X AC12 AC20 BA23
BC11 BC50 CA56
4D004 AA41 AB06 CA15 CA18 CC07
CC08
4D040 DD01 DD11
Claims (14)
- 【請求項１】 ラルストニア属のラルストニアｓｐ．Ｔ
Ｅ２６（ＦＥＲＭＰ−１８３５３）からなる有機塩素化
合物分解性微生物。 - 【請求項２】 有機塩素化合物分解性微生物が、フェノ
ール、トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合物を
分解するものであることを特徴とする請求項１に記載の
有機塩素化合物分解性微生物。 - 【請求項３】有機塩素化合物分解性微生物が、フェノー
ル、トルエン等の共代謝基質無しで有機塩素化合物を分
解する酸化酵素が発現されるものであることを特徴とす
る請求項１又は２のいずれか１項に記載の有機塩素化合
物分解性微生物。 - 【請求項４】有機塩素化合物が、塩素化脂肪族炭化水素
化合物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか
１項に記載の有機塩素化合物分解性微生物。 - 【請求項５】有機塩素化合物が、トリクロロエチレン
（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のいずれか
あるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジクロロエ
チレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする請求項１〜３
のいずれか１項に記載の有機塩素化合物分解性微生物。 - 【請求項６】有機塩素化合物が、塩素化芳香族化合物で
あることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記
載の有機塩素化合物分解性微生物。 - 【請求項７】有機塩素化合物に、請求項１〜６のいずれ
か１項に記載のラルストニア属のラルストニアｓｐ．Ｔ
Ｅ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有機塩素
化合物分解性微生物を接触させることを特徴とする有機
塩素化合物の分解方法。 - 【請求項８】有機塩素化合物が、トリクロロエチレン
（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のいずれか
あるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジクロロエ
チレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする請求項７に記
載の有機塩素化合物の分解方法。 - 【請求項９】汚染環境中に含まれる有機塩素化合物に、
請求項１〜６のいずれか１項に記載のラルストニア属の
ラルストニアｓｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５
３）からなる有機塩素化合物分解性微生物を接触させて
汚染環境を浄化することを特徴とする有機塩素化合物を
含む汚染環境を浄化する方法。 - 【請求項１０】有機塩素化合物が、トリクロロエチレン
（ＴＣＥ）又はジクロロエチレン（ＤＣＥ）のいずれか
あるいはトリクロロエチレン（ＴＣＥ）及びジクロロエ
チレン（ＤＣＥ）であることを特徴とする請求項９に記
載の有機塩素化合物を含む汚染環境を浄化する方法。 - 【請求項１１】有機塩素化合物を分解させる際に、鉄以
外の成分を含まない溶液中か、又は鉄以外の成分を４０
ｍＭ以下にした溶液中で、ラルストニア属のラルストニ
アｓｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からな
る有機塩素化合物分解性微生物を接触させて、分解させ
ることを特徴とする請求項７〜１０のいずれか１項に記
載の有機塩素化合物の分解方法。 - 【請求項１２】無機塩培地と、炭素源としての炭酸ガス
又は炭酸イオン、及び無機の電子供与体よりなる培地を
用いて増殖させて得られた有機塩素化合物分解性微生物
（菌体）を用いることを特徴とする請求項７〜１１のい
ずれか１項に記載の有機塩素化合物の分解方法。 - 【請求項１３】有機塩素化合物によって酸化酵素を誘導
する菌株を得るための選抜方法として、リン酸塩、無機
態窒素、塩化ナトリウム、カルシウム塩、微量金属塩の
合計が４０ｍＭを越えない低濃度の無機塩培地に有機塩
素化合物を添加した培地を用いて、添加した有機塩素化
合物の濃度の減少によって選抜する集積培養法。 - 【請求項１４】有機塩素化合物によって請求項１〜６の
いずれか１項に記載のラルストニア属のラルストニアｓ
ｐ．ＴＥ２６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８３５３）からなる有
機塩素化合物によって酸化酵素を誘導する有機塩素化合
物分解性微生物を得るための選抜方法として、リン酸
塩、無機態窒素、塩化ナトリウム、カルシウム塩、微量
金属塩の合計が４０ｍＭを越えない低濃度の無機塩培地
に有機塩素化合物を添加した培地を用いて、添加した有
機塩素化合物の濃度の減少によって選抜する集積培養
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002328928A JP2003204781A (ja) | 2001-11-12 | 2002-11-12 | 有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001346778 | 2001-11-12 | ||
| JP2001-346778 | 2001-11-12 | ||
| JP2002328928A JP2003204781A (ja) | 2001-11-12 | 2002-11-12 | 有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003204781A true JP2003204781A (ja) | 2003-07-22 |
Family
ID=27667131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002328928A Pending JP2003204781A (ja) | 2001-11-12 | 2002-11-12 | 有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003204781A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100888273B1 (ko) | 2006-05-26 | 2009-03-10 | 명지대학교 산학협력단 | 바이오필터시스템에서 톨루엔의 생물학적 분해를 위한랄스토니아 속 균주 ｍｇ1 |
| CN104830725A (zh) * | 2015-05-06 | 2015-08-12 | 重庆理工大学 | 可降解氯代烯烃的贪铜菌及其应用 |
| CN106033067A (zh) * | 2015-03-09 | 2016-10-19 | 中国科学院南京土壤研究所 | 一种土壤共代谢作用的测定方法 |
-
2002
- 2002-11-12 JP JP2002328928A patent/JP2003204781A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100888273B1 (ko) | 2006-05-26 | 2009-03-10 | 명지대학교 산학협력단 | 바이오필터시스템에서 톨루엔의 생물학적 분해를 위한랄스토니아 속 균주 ｍｇ1 |
| CN106033067A (zh) * | 2015-03-09 | 2016-10-19 | 中国科学院南京土壤研究所 | 一种土壤共代谢作用的测定方法 |
| CN106033067B (zh) * | 2015-03-09 | 2019-01-11 | 中国科学院南京土壤研究所 | 一种土壤共代谢作用的测定方法 |
| CN104830725A (zh) * | 2015-05-06 | 2015-08-12 | 重庆理工大学 | 可降解氯代烯烃的贪铜菌及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3450518B2 (ja) | 新規微生物ｊ１、これを用いた芳香族化合物及び／又は有機塩素化合物の生物分解処理方法及び環境修復方法 | |
| JP3347596B2 (ja) | 新規微生物、芳香族化合物及び／或いは有機塩素化合物の生分解方法、及び媒体の浄化方法 | |
| JP3478619B2 (ja) | 新規微生物ｋｂ２及びそれを用いた芳香族化合物及び／又は揮発性有機塩素化合物の生物分解処理方法 | |
| JP3323746B2 (ja) | 新規微生物、有機化合物の生分解方法及び環境修復方法 | |
| US5998198A (en) | Microorganisms that decompose halogenated hydrocarbons and their use | |
| JPH0650980B2 (ja) | 脂肪族塩素化合物の微生物的分解方法及びその微生物 | |
| JP3083077B2 (ja) | 有機化合物の生分解方法及び環境修復方法 | |
| JP2003204781A (ja) | 有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 | |
| JP3461238B2 (ja) | 有機化合物の生分解方法および環境修復方法 | |
| JP3478620B2 (ja) | 新規微生物ｔｌ２及びそれを用いた芳香族化合物及び／又は揮発性有機塩素化合物の生物分解処理方法 | |
| JP3436654B2 (ja) | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 | |
| JP2004298057A (ja) | 有機塩素化合物分解用微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 | |
| JP3435426B2 (ja) | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 | |
| JP3437304B2 (ja) | 新規微生物ｔｌ１及びそれを用いた芳香族化合物及び／又は揮発性有機塩素化合物の生物分解処理方法 | |
| JP3640791B2 (ja) | 有機塩素化合物分解方法及び有機塩素化合物分解菌制御能を有する新規微生物 | |
| JP3382393B2 (ja) | トリクロロエチレンの生物分解浄化法 | |
| JPH10295366A (ja) | 新規な過酸化水素耐性微生物、その取得方法及びそれを用いた汚染媒体の修復方法 | |
| JP2003154382A (ja) | グルタチオンによる有機化合物で汚染された環境または媒体の微生物による修復の効率化方法 | |
| JPH10290687A (ja) | 微生物の培養方法、有機化合物の生合成方法、微生物の汚染物質分解活性の維持方法、汚染物質の分解方法及び環境の修復方法 | |
| JP2000069959A (ja) | 揮発性有機塩素化合物及び芳香族化合物の生物分解方法及び環境修復方法 | |
| JPH11113563A (ja) | 有機化合物で汚染された環境の微生物による分解浄化修復方法 | |
| JP2001218577A (ja) | 脂肪族塩素化合物の分解方法及びそれに用いる微生物 | |
| Chung | Polycyclic aromatic hydrocarbon degradation by novel bacteria isolated from burrow sediments of marine benthic macrofauna | |
| JPH06226230A (ja) | 好気性微生物を用いる汚染土壌の浄化法 | |
| JP2002065248A (ja) | 有機化合物で汚染された環境の微生物による修復をメタロチオネインにより効率化する方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060131 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060620 |