JP3436654B2 - ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 - Google Patents
ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用Info
- Publication number
- JP3436654B2 JP3436654B2 JP10481697A JP10481697A JP3436654B2 JP 3436654 B2 JP3436654 B2 JP 3436654B2 JP 10481697 A JP10481697 A JP 10481697A JP 10481697 A JP10481697 A JP 10481697A JP 3436654 B2 JP3436654 B2 JP 3436654B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- microorganism
- soil
- burkholderia
- tce
- ppm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Fire-Extinguishing Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ハロゲン化炭化水
素により汚染された水又は土壌の微生物浄化処理法に関
する。
素により汚染された水又は土壌の微生物浄化処理法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】近年、有機溶媒とくにハロゲン化炭化水
素は先端産業において洗浄剤等として多量に用いられて
おり、これらの物質またはこれらの物質を含む排水によ
る地下水や土壌の汚染が指摘されており、その対策が早
急に望まれている。これまでに物理的方法として、汚染
された土壌を掘削して空気を吹き込み、ハロゲン化炭化
水素を揮発せしめ、活性炭等で吸着させるエアストリッ
ピング法、汚染土壌にパイプを打ち込み、真空吸引する
ことで気化させ除去する真空抽出法などが知られ、さら
にこれらは地下水の除染にも適応できるとされている。
素は先端産業において洗浄剤等として多量に用いられて
おり、これらの物質またはこれらの物質を含む排水によ
る地下水や土壌の汚染が指摘されており、その対策が早
急に望まれている。これまでに物理的方法として、汚染
された土壌を掘削して空気を吹き込み、ハロゲン化炭化
水素を揮発せしめ、活性炭等で吸着させるエアストリッ
ピング法、汚染土壌にパイプを打ち込み、真空吸引する
ことで気化させ除去する真空抽出法などが知られ、さら
にこれらは地下水の除染にも適応できるとされている。
【０００３】しかしながら、これらの方法は空気吹き込
み等に多大な動力が必要で、前者の場合は土壌の掘削を
必要とし、後者の場合は汚染物質の濃度が低下すると抽
出効率が低下して浄化が進まないという欠点がある。さ
らに、これらの方法では大気汚染等の２次汚染を防止す
る観点から、活性炭等に吸着させるため別途汚染物質の
無害化処理が必要となる。一方、近年になり、微生物に
よって汚染物を効率よく分解し無害化するいわゆる生物
浄化法に関する研究が進められている。本方法は微生物
の分解機構を用いるため、上記の物理的処理法に比べて
多大なエネルギーを必要とせず、２次汚染もなく汚染物
質を完全に分解・無害化可能と考えられている。さら
に、低濃度の汚染でも浄化可能であり、原位置での広範
囲にわたった処理が可能である等の利点を有し、低コス
トな方法として期待が大きい。
み等に多大な動力が必要で、前者の場合は土壌の掘削を
必要とし、後者の場合は汚染物質の濃度が低下すると抽
出効率が低下して浄化が進まないという欠点がある。さ
らに、これらの方法では大気汚染等の２次汚染を防止す
る観点から、活性炭等に吸着させるため別途汚染物質の
無害化処理が必要となる。一方、近年になり、微生物に
よって汚染物を効率よく分解し無害化するいわゆる生物
浄化法に関する研究が進められている。本方法は微生物
の分解機構を用いるため、上記の物理的処理法に比べて
多大なエネルギーを必要とせず、２次汚染もなく汚染物
質を完全に分解・無害化可能と考えられている。さら
に、低濃度の汚染でも浄化可能であり、原位置での広範
囲にわたった処理が可能である等の利点を有し、低コス
トな方法として期待が大きい。
【０００４】汚染土壌を微生物により浄化処理するため
の方法としては、掘削した土壌にリン、窒素等の栄養源
と共に微生物を混合して汚染物質の分解を促進する固相
処理法、掘削した土壌に水、栄養源と共に微生物を混合
し、土壌を液体状で処理することにより汚染物質の分解
を促進するスラリー処理法、掘削せずに汚染土壌中に、
空気、栄養源等を注入し、土壌中に存在する微生物によ
る汚染物質の分解を促進する原位置処理法等がある。上
記生物処理技術のうち、固相処理法及びスラリー処理法
の場合は土壌の掘削が必要で適用範囲が狭い上、処理や
設備コストは比較的高い。
の方法としては、掘削した土壌にリン、窒素等の栄養源
と共に微生物を混合して汚染物質の分解を促進する固相
処理法、掘削した土壌に水、栄養源と共に微生物を混合
し、土壌を液体状で処理することにより汚染物質の分解
を促進するスラリー処理法、掘削せずに汚染土壌中に、
空気、栄養源等を注入し、土壌中に存在する微生物によ
る汚染物質の分解を促進する原位置処理法等がある。上
記生物処理技術のうち、固相処理法及びスラリー処理法
の場合は土壌の掘削が必要で適用範囲が狭い上、処理や
設備コストは比較的高い。
【０００５】一方、原位置処理法はこれらに比べコスト
が低く、広範囲にわたった処理が可能である。しかし、
土壌微生物の絶対数が少ないため浄化速度が遅い。特に
ハロゲン化炭化水素の様な難分解性の化合物では土壌中
で汚染物質を分解できる微生物が生息していない可能性
があり、その場合は浄化は不可能である。この場合は、
ハロゲン化炭化水素を分解し得る微生物を取得し、土壌
に接種することで浄化速度の向上や、汚染物質を分解で
きる微生物が生息していない土壌の浄化が可能とされて
いる。
が低く、広範囲にわたった処理が可能である。しかし、
土壌微生物の絶対数が少ないため浄化速度が遅い。特に
ハロゲン化炭化水素の様な難分解性の化合物では土壌中
で汚染物質を分解できる微生物が生息していない可能性
があり、その場合は浄化は不可能である。この場合は、
ハロゲン化炭化水素を分解し得る微生物を取得し、土壌
に接種することで浄化速度の向上や、汚染物質を分解で
きる微生物が生息していない土壌の浄化が可能とされて
いる。
【０００６】ハロゲン化炭化水素系の汚染物質のうちト
リクロロエチレン（ＴＣＥ）は、ＩＣ産業、ドライクリ
ーニングなどで多量に用いられており、汚染物質として
は特に重要である。ＴＣＥを分解する公知の微生物とし
ては、メタン資化性菌であるメチロシナス・トリコスポ
リウム(Methyrosinus tricosporium) ＯＢ３（特表平４
−５０１６６７、特開平５−２１２３７１）や、メチロ
シナス・トリコスポリウム(Methyrosinus tricosporiu
m) ＴＵＫＵＢＡ（特開平２−９２２７４、特開平３−
２９２９７０）、
リクロロエチレン（ＴＣＥ）は、ＩＣ産業、ドライクリ
ーニングなどで多量に用いられており、汚染物質として
は特に重要である。ＴＣＥを分解する公知の微生物とし
ては、メタン資化性菌であるメチロシナス・トリコスポ
リウム(Methyrosinus tricosporium) ＯＢ３（特表平４
−５０１６６７、特開平５−２１２３７１）や、メチロ
シナス・トリコスポリウム(Methyrosinus tricosporiu
m) ＴＵＫＵＢＡ（特開平２−９２２７４、特開平３−
２９２９７０）、
【０００７】シュードモナス属であるシュードモナス・
プチダ (Pseudomonus putida) Ｆ１（特開昭６４−３４
４９９）、シュードモナス・プチダ (Pseudomonus puti
da)ＢＨ（藤田ら；ケミカルエンジニアリング、３９，
（６），ｐ４９４−４９８，１９９４）、シュードモナ
ス・プチダ (Pseudomonus putida) ＵＣ−Ｒ５，ＵＣ−
Ｐ２（特開昭６２−８４７８０）、シュードモナス・プ
チダ (Pseudomonus putida) ＫＷＩ−９（特開平６−７
０７５３）、シュードモナス・メンドシナ(Pseudomonus
mendocina) ＫＲ−１（特開平２−５０３８６６、５−
５０２５９３）、シュードモナス・セパシア(Pseudomon
us cepacia) Ｇ４（特開平４−５０２２７７）、シュー
ドモナス・セパシア(Pseudomonus cepacia) ＫＫ０１
（特開平６−２９６７１１）、
プチダ (Pseudomonus putida) Ｆ１（特開昭６４−３４
４９９）、シュードモナス・プチダ (Pseudomonus puti
da)ＢＨ（藤田ら；ケミカルエンジニアリング、３９，
（６），ｐ４９４−４９８，１９９４）、シュードモナ
ス・プチダ (Pseudomonus putida) ＵＣ−Ｒ５，ＵＣ−
Ｐ２（特開昭６２−８４７８０）、シュードモナス・プ
チダ (Pseudomonus putida) ＫＷＩ−９（特開平６−７
０７５３）、シュードモナス・メンドシナ(Pseudomonus
mendocina) ＫＲ−１（特開平２−５０３８６６、５−
５０２５９３）、シュードモナス・セパシア(Pseudomon
us cepacia) Ｇ４（特開平４−５０２２７７）、シュー
ドモナス・セパシア(Pseudomonus cepacia) ＫＫ０１
（特開平６−２９６７１１）、
【０００８】その他アルカリジーナス・ユートロフス
（Alcaligenes eutropus) ＪＭＰ１３４（A.R.Harker A
ppl.Environ.Microbiol., 56, (4), 1179-1181, 1990)
、アルカリジーナス・ユートロフス（Alcaligenes eut
ropus) ＫＳ０１（特開平７−１２３９７６）、アンモ
ニア細菌であるニトロソモナス・ユーロパエア（Nitros
omonus europaea)(D.Arciero et al. Biochem.Biophys.
Res.Commun., 159, (2), 640-643, 1989) 等が知られて
いる。
（Alcaligenes eutropus) ＪＭＰ１３４（A.R.Harker A
ppl.Environ.Microbiol., 56, (4), 1179-1181, 1990)
、アルカリジーナス・ユートロフス（Alcaligenes eut
ropus) ＫＳ０１（特開平７−１２３９７６）、アンモ
ニア細菌であるニトロソモナス・ユーロパエア（Nitros
omonus europaea)(D.Arciero et al. Biochem.Biophys.
Res.Commun., 159, (2), 640-643, 1989) 等が知られて
いる。
【０００９】これらのうち、シュードモナス・セパシア
(Pseudomonus cepacia) ＫＫ０１は初期濃度３０ppm の
ＴＣＥを液体培養液中で１５ppm まで分解し、初期濃度
が５ppm の土壌を１ppm まで分解するとの報告がある
（特開平６−２９６７１１）。また、アルカリジーナス
・ユートロフス（Alcaligenes eutropus) ＫＳ０１は液
体培養液中で５０ppm のＴＣＥを検出限界以下に、１pp
m の土壌を検出限界以下に分解する能力を持つとされて
いる（特開平７−１２３９７６）。
(Pseudomonus cepacia) ＫＫ０１は初期濃度３０ppm の
ＴＣＥを液体培養液中で１５ppm まで分解し、初期濃度
が５ppm の土壌を１ppm まで分解するとの報告がある
（特開平６−２９６７１１）。また、アルカリジーナス
・ユートロフス（Alcaligenes eutropus) ＫＳ０１は液
体培養液中で５０ppm のＴＣＥを検出限界以下に、１pp
m の土壌を検出限界以下に分解する能力を持つとされて
いる（特開平７−１２３９７６）。
【００１０】しかしながら、これらの分解菌の分解能を
試験する際には、いずれも非常に高濃度の菌体密度（１
×１０8 ／ml）で行っており、実際の土壌環境中では非
現実的な密度であることを考えるとこれらの分解菌の分
解能は必ずしも高くないと考えられる。従って、微生物
を土壌浄化に用いる場合にはその条件として、十分な分
解能を持ち、土壌中という特殊な環境中において土着菌
のなかにおいても分解能を発揮できるものであることが
必要である。また、分解対象であるＴＣＥに対して分解
菌の耐性はできるだけ高いことが好ましく、さらにＴＣ
Ｅだけでなく部分分解物であるジクロロエチレン（ＤＣ
Ｅ）に対しても分解能を有していることが好ましい。
試験する際には、いずれも非常に高濃度の菌体密度（１
×１０8 ／ml）で行っており、実際の土壌環境中では非
現実的な密度であることを考えるとこれらの分解菌の分
解能は必ずしも高くないと考えられる。従って、微生物
を土壌浄化に用いる場合にはその条件として、十分な分
解能を持ち、土壌中という特殊な環境中において土着菌
のなかにおいても分解能を発揮できるものであることが
必要である。また、分解対象であるＴＣＥに対して分解
菌の耐性はできるだけ高いことが好ましく、さらにＴＣ
Ｅだけでなく部分分解物であるジクロロエチレン（ＤＣ
Ｅ）に対しても分解能を有していることが好ましい。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ハロ
ゲン化炭化水素化合物、特に高濃度のＴＣＥ，ＤＣＥ等
を効率よく分解する微生物およびそれを用いた水または
土壌の浄化方法に関する。
ゲン化炭化水素化合物、特に高濃度のＴＣＥ，ＤＣＥ等
を効率よく分解する微生物およびそれを用いた水または
土壌の浄化方法に関する。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明はハロゲン化炭化
水素を分解する能力を有し、バークホルデリア（Burkho
lderia）属に属する微生物、およびバークホルデリア・
セパシア（Burkholderia cepacia) 種に属する微生物を
提供する。このような菌株の例としてバークホルデリア
Ｎ１６−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０４）、バークホル
デリア・セパシアＮ１５−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０
２）、バークホルデリア・セパシアＮ１５−２（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５５０３）が挙げられる。本発明はさらに、
ハロゲン化炭化水素を含有する水または土壌に、上記の
微生物を添加する方法を提供する。
水素を分解する能力を有し、バークホルデリア（Burkho
lderia）属に属する微生物、およびバークホルデリア・
セパシア（Burkholderia cepacia) 種に属する微生物を
提供する。このような菌株の例としてバークホルデリア
Ｎ１６−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０４）、バークホル
デリア・セパシアＮ１５−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０
２）、バークホルデリア・セパシアＮ１５−２（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５５０３）が挙げられる。本発明はさらに、
ハロゲン化炭化水素を含有する水または土壌に、上記の
微生物を添加する方法を提供する。
【００１３】この本発明においては、上記微生物と共
に、微生物活性化剤を添加することを特徴としている。
これらの微生物は、３０ppm のトリクロロエチレンを１
８時間で１００％、または１００ppm のトリクロロエチ
レンを２日間で５０％分解する能力を有する。
に、微生物活性化剤を添加することを特徴としている。
これらの微生物は、３０ppm のトリクロロエチレンを１
８時間で１００％、または１００ppm のトリクロロエチ
レンを２日間で５０％分解する能力を有する。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明の微生物としては、バーク
ホルデリア（Burkholderia）属に属する微生物またはバ
ークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia) 種
に属する微生物であればよいが、具体例としてバークホ
ルデリアＮ１６−１、バークホルデリア・セパシアＮ１
５−１、バークホルデリア・セパシアＮ１５−２を挙げ
ることができる。これらの菌株は河川水、土壌など自然
界から分離される新規な菌株であり、その単離方法及び
分類学的特性は実施例に具体的に記載する。これらの菌
株は、 Burkholderia Ｎ１６−１， Burkholderia cepa
cia Ｎ１５−１， Burkholderia cepacia Ｎ１５−２と
して各々工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−５５０４、ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０２及びＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５５０３として平成８年４月１２日に寄託
された。
ホルデリア（Burkholderia）属に属する微生物またはバ
ークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia) 種
に属する微生物であればよいが、具体例としてバークホ
ルデリアＮ１６−１、バークホルデリア・セパシアＮ１
５−１、バークホルデリア・セパシアＮ１５−２を挙げ
ることができる。これらの菌株は河川水、土壌など自然
界から分離される新規な菌株であり、その単離方法及び
分類学的特性は実施例に具体的に記載する。これらの菌
株は、 Burkholderia Ｎ１６−１， Burkholderia cepa
cia Ｎ１５−１， Burkholderia cepacia Ｎ１５−２と
して各々工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−５５０４、ＦＥＲＭ ＢＰ−５５０２及びＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５５０３として平成８年４月１２日に寄託
された。
【００１５】本発明の微生物は、常用の炭素源及び窒素
源の存在下、必要によりさらに無機塩やビタミン類等の
微量要素を含有する培地中で培養することができる。炭
素源としては、本発明の微生物が好んで資化する炭化水
素であればいずれでも使用できる。培地中の炭素源の濃
度は、炭素源の種類により異なるが、好ましくはたとえ
ば０．１〜０．５ｇ／Ｌである。窒素源としては、有機
窒素源、たとえば酵母エキス、ペプトン、肉エキス等を
使用することができ、無機窒素源としては、アンモニウ
ム塩、硝酸塩等を使用することができる。
源の存在下、必要によりさらに無機塩やビタミン類等の
微量要素を含有する培地中で培養することができる。炭
素源としては、本発明の微生物が好んで資化する炭化水
素であればいずれでも使用できる。培地中の炭素源の濃
度は、炭素源の種類により異なるが、好ましくはたとえ
ば０．１〜０．５ｇ／Ｌである。窒素源としては、有機
窒素源、たとえば酵母エキス、ペプトン、肉エキス等を
使用することができ、無機窒素源としては、アンモニウ
ム塩、硝酸塩等を使用することができる。
【００１６】窒素源の濃度はその種類により異なるが、
好ましくは０．１〜１．４ｇ／Ｌである。無機塩類とし
てはカリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウム
イオン、鉄（II）イオン、マンガンイオン、コバルトイ
オン、ニッケルイオン等の金属イオンと、塩酸イオン、
硫酸イオン、リン酸イオン等の陰イオンとから成る塩類
が好ましい。培養は好ましくは好気的に行われ、振とう
培養あるいは大規模の培養においては、通気・攪拌培養
が好ましい。培養温度は２０〜３７℃、特に３０℃付近
が好ましい。
好ましくは０．１〜１．４ｇ／Ｌである。無機塩類とし
てはカリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウム
イオン、鉄（II）イオン、マンガンイオン、コバルトイ
オン、ニッケルイオン等の金属イオンと、塩酸イオン、
硫酸イオン、リン酸イオン等の陰イオンとから成る塩類
が好ましい。培養は好ましくは好気的に行われ、振とう
培養あるいは大規模の培養においては、通気・攪拌培養
が好ましい。培養温度は２０〜３７℃、特に３０℃付近
が好ましい。
【００１７】本発明はまた、前記の微生物をハロゲン化
炭化水素を含有する水又は土壌に添加することを特徴と
する、水又は土壌の浄化処理方法に関する。この方法に
おいては、処理すべき水又は土壌に、前記のように培養
した本発明の微生物菌体を添加すれば良い。この菌体は
培養液の形で加えてもよく、培養液から分離して菌体と
して加えても良い。さらに微生物を別の担体に吸着させ
て添加することも可能である。菌体の添加量は、微生物
のハロゲン化水素分解能、処理すべき水又は土壌中のハ
ロゲン化炭化水素の量等により異なるが、１０5 〜１０
9 細胞／ｇである。処理に必要な時間は、使用する微生
物のハロゲン化炭化水素分解能、処理すべき水又は土壌
中のハロゲン化炭化水素量、菌体の添加量により異なる
が１〜１０日間程度である。
炭化水素を含有する水又は土壌に添加することを特徴と
する、水又は土壌の浄化処理方法に関する。この方法に
おいては、処理すべき水又は土壌に、前記のように培養
した本発明の微生物菌体を添加すれば良い。この菌体は
培養液の形で加えてもよく、培養液から分離して菌体と
して加えても良い。さらに微生物を別の担体に吸着させ
て添加することも可能である。菌体の添加量は、微生物
のハロゲン化水素分解能、処理すべき水又は土壌中のハ
ロゲン化炭化水素の量等により異なるが、１０5 〜１０
9 細胞／ｇである。処理に必要な時間は、使用する微生
物のハロゲン化炭化水素分解能、処理すべき水又は土壌
中のハロゲン化炭化水素量、菌体の添加量により異なる
が１〜１０日間程度である。
【００１８】また、本発明に係る水又は土壌の浄化方法
は、請求項１〜７に記載の微生物をハロゲン化炭化水素
に汚染された水又は土壌に接種、混合してこれら水又は
土壌に含まれたハロゲン化炭化水素を分解処理する水又
は土壌の浄化方法に係り、前記水又は土壌に前記微生物
を接種、混合するに際して、少なくとも１種以上の微生
物活性化剤を添加混合することを特徴としている。この
場合、微生物活性化剤は微生物の有するハロゲン化炭化
水素分解能を活性化する役割を持ち、インデューサーと
呼ばれる。インデューサーとしては前記微生物が資化、
分解することのできる化合物、好ましくはベンゼン、ト
ルエン、フェノール、クレゾール、３−ヒドロキシ−ベ
ンジルアルコール等が使用できる。また、Ｎ１６−１に
ついてはこれらに加えて、シクロペンタノール、ヘキサ
ン酸、トランス−３−ヘキセン酸、スベリン酸等を使用
できる。
は、請求項１〜７に記載の微生物をハロゲン化炭化水素
に汚染された水又は土壌に接種、混合してこれら水又は
土壌に含まれたハロゲン化炭化水素を分解処理する水又
は土壌の浄化方法に係り、前記水又は土壌に前記微生物
を接種、混合するに際して、少なくとも１種以上の微生
物活性化剤を添加混合することを特徴としている。この
場合、微生物活性化剤は微生物の有するハロゲン化炭化
水素分解能を活性化する役割を持ち、インデューサーと
呼ばれる。インデューサーとしては前記微生物が資化、
分解することのできる化合物、好ましくはベンゼン、ト
ルエン、フェノール、クレゾール、３−ヒドロキシ−ベ
ンジルアルコール等が使用できる。また、Ｎ１６−１に
ついてはこれらに加えて、シクロペンタノール、ヘキサ
ン酸、トランス−３−ヘキセン酸、スベリン酸等を使用
できる。
【００１９】本発明の方法により分解し得るハロゲン化
炭化水素としては、特に塩素化炭化水素、例えば、ＴＣ
Ｅ，ＤＣＥ、モノクロロエチレン等が挙げられる。本発
明の方法は、前に記述した固相処理法やスラリー処理法
にも適用することができるが、必ずしも土壌の掘削を必
要とするこれらの方法を用いる必要はなく、本発明の微
生物を土壌又は水に添加、接種するだけでそれらの浄化
を行うことができる。
炭化水素としては、特に塩素化炭化水素、例えば、ＴＣ
Ｅ，ＤＣＥ、モノクロロエチレン等が挙げられる。本発
明の方法は、前に記述した固相処理法やスラリー処理法
にも適用することができるが、必ずしも土壌の掘削を必
要とするこれらの方法を用いる必要はなく、本発明の微
生物を土壌又は水に添加、接種するだけでそれらの浄化
を行うことができる。
【００２０】
【実施例】次に、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。実施例１．微生物の単離及び同定 本発明に係る微生物は、化学工場敷地内の土壌より以下
の方法でスクリーニングし、単離した。採取した土壌
０．１ｇを、２５ml容積のねじ口試験管に入れた５mlの
ＮＭＳ培地もしくはＭ９培地に接種した。さらに５００
ppm のフェノールとビタミンカクテルを添加し、キャッ
プをして３０℃にて所定期間振盪培養した。微生物の増
殖による濁りが観察された培養液については、同培地に
植え継ぎ培養を継続した。１０回目の培養終了後、培養
液を適宜希釈して同培地に１．５％の寒天を加えた平板
培地に塗沫し、出現した微生物コロニーを単離し、この
操作を繰り返すことにより微生物を単離した。
説明する。実施例１．微生物の単離及び同定 本発明に係る微生物は、化学工場敷地内の土壌より以下
の方法でスクリーニングし、単離した。採取した土壌
０．１ｇを、２５ml容積のねじ口試験管に入れた５mlの
ＮＭＳ培地もしくはＭ９培地に接種した。さらに５００
ppm のフェノールとビタミンカクテルを添加し、キャッ
プをして３０℃にて所定期間振盪培養した。微生物の増
殖による濁りが観察された培養液については、同培地に
植え継ぎ培養を継続した。１０回目の培養終了後、培養
液を適宜希釈して同培地に１．５％の寒天を加えた平板
培地に塗沫し、出現した微生物コロニーを単離し、この
操作を繰り返すことにより微生物を単離した。
【００２１】
【表１】
【００２２】単離した菌株を同液体培地で２日間培養し
た後、フェノール、０．０２％酵母エキス及び１ミリモ
ルグルコースを添加したＮＭＳ培地４mlが入った３０ml
のバイアル瓶に１／１００量を植菌し、ＴＣＥ １０pp
m を加えた。素早くテフロンコートセプタムキャップと
アルミキャップで密封し、３０℃で５日間振盪培養した
後、バイアル瓶中の気相をガスクロマトグラフィーで分
析した。こうして選抜したＴＣＥ分解能力の高い３種の
菌株について形態学的及び生理学的な性質を調べた。そ
の結果を次の表２に示す。
た後、フェノール、０．０２％酵母エキス及び１ミリモ
ルグルコースを添加したＮＭＳ培地４mlが入った３０ml
のバイアル瓶に１／１００量を植菌し、ＴＣＥ １０pp
m を加えた。素早くテフロンコートセプタムキャップと
アルミキャップで密封し、３０℃で５日間振盪培養した
後、バイアル瓶中の気相をガスクロマトグラフィーで分
析した。こうして選抜したＴＣＥ分解能力の高い３種の
菌株について形態学的及び生理学的な性質を調べた。そ
の結果を次の表２に示す。
【００２３】
【表２】
【００２４】以上の結果から、文献 (N.R.Krieg and J.
G.Holt, "Bergey's Manual of Systematic Bacteriolog
y" Vol.1 (1984) Williams & Wilkins, J.G.Holt, N.R.
Krieg, P.H.A.Sneath, J.T.Staley and S.T.Williams,
"Bergy's Manual of Determination Bacteriology" Ni
nth Edition (1994) Williams & Wilkins, N.Zhao, C.Q
u, E.Wang and W.Chen Int.J.Syst.Bacteriol., 45, 60
0 (1995), E.Yabuuti,Y.Kosako, H.Oyaizu, I.Yano, H.
Hotta, Y.Hashimoto, T.Ezaki and M.ArakawaMicrobio
l.Immunol., 36, 1251 (1992))を参考に同定を行った結
果、１株はバークホルデリア属（Burkholderia sp.) 、
他の２株はバークホルデリア・セパシア（Burkholderia
cepacia）と同定し、各々Ｎ１６−１，Ｎ１５−１，Ｎ
１５−２株と命名した。
G.Holt, "Bergey's Manual of Systematic Bacteriolog
y" Vol.1 (1984) Williams & Wilkins, J.G.Holt, N.R.
Krieg, P.H.A.Sneath, J.T.Staley and S.T.Williams,
"Bergy's Manual of Determination Bacteriology" Ni
nth Edition (1994) Williams & Wilkins, N.Zhao, C.Q
u, E.Wang and W.Chen Int.J.Syst.Bacteriol., 45, 60
0 (1995), E.Yabuuti,Y.Kosako, H.Oyaizu, I.Yano, H.
Hotta, Y.Hashimoto, T.Ezaki and M.ArakawaMicrobio
l.Immunol., 36, 1251 (1992))を参考に同定を行った結
果、１株はバークホルデリア属（Burkholderia sp.) 、
他の２株はバークホルデリア・セパシア（Burkholderia
cepacia）と同定し、各々Ｎ１６−１，Ｎ１５−１，Ｎ
１５−２株と命名した。
【００２５】バークホルデリア・セパシアに属するＴＣ
Ｅ分解菌株としては、前述のようにＧ４（特開平４−５
０２２７７）及びＫＫ０１（特開平６−２９６７１１）
が知られている。Ｎ１５−１及びＮ１５−２は表４のよ
うにいずれも運動性を持つことから、運動性がないＧ４
とは明らかに異なる。またＧ４及びＫＫ０１はトルエン
がインデューサーとなるが、Ｎ１５−１，Ｎ１５−２は
ならないことからも両者は異なることが明らかである。
一方、Ｎ１６−１については菌体内のＤＮＡのＧＣ含量
が６２モル％であり、ＴＣＥ分解菌として知られるバー
クホルデリア属（１９９２年以前はシュードモナス属に
分類されていた。）のプチダ、メンドシナ、セパシアの
いずれにも該当しないことから、新規微生物と認定し
た。
Ｅ分解菌株としては、前述のようにＧ４（特開平４−５
０２２７７）及びＫＫ０１（特開平６−２９６７１１）
が知られている。Ｎ１５−１及びＮ１５−２は表４のよ
うにいずれも運動性を持つことから、運動性がないＧ４
とは明らかに異なる。またＧ４及びＫＫ０１はトルエン
がインデューサーとなるが、Ｎ１５−１，Ｎ１５−２は
ならないことからも両者は異なることが明らかである。
一方、Ｎ１６−１については菌体内のＤＮＡのＧＣ含量
が６２モル％であり、ＴＣＥ分解菌として知られるバー
クホルデリア属（１９９２年以前はシュードモナス属に
分類されていた。）のプチダ、メンドシナ、セパシアの
いずれにも該当しないことから、新規微生物と認定し
た。
【００２６】実施例２．液体培地中でのＴＣＥの分解
Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、ＮＭＳ
培地に５００ppm のフェノール及びビタミンカクテルを
加えた液体培地中で各々１日培養し、遠心分離操作によ
り菌体を集菌後、４mlのフェノールをのぞいた同培地に
懸濁した。これを３０mlのバイアル瓶に移し、ＴＣＥ
１００ppm を加え、すばやくテフロンコートシリコンセ
プタムとアルミキャップ密封した（菌体密度１０8 個／
ml）。このバイアル瓶を３０℃にて静置培養し、定期的
に気相をガスクロマトグラフィー分析した。この結果を
図１に示す。培養液中のＴＣＥはいずれの菌においても
５日間で７０％以上が分解された。
培地に５００ppm のフェノール及びビタミンカクテルを
加えた液体培地中で各々１日培養し、遠心分離操作によ
り菌体を集菌後、４mlのフェノールをのぞいた同培地に
懸濁した。これを３０mlのバイアル瓶に移し、ＴＣＥ
１００ppm を加え、すばやくテフロンコートシリコンセ
プタムとアルミキャップ密封した（菌体密度１０8 個／
ml）。このバイアル瓶を３０℃にて静置培養し、定期的
に気相をガスクロマトグラフィー分析した。この結果を
図１に示す。培養液中のＴＣＥはいずれの菌においても
５日間で７０％以上が分解された。
【００２７】実施例３．液体培地中でのＴＣＥの分解
Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、ＮＭＳ
培地に０．２％酵母エキス及び５ミリモルのグルコース
を添加した液体培地中で各々１日培養した。バイアル瓶
中にＮＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フ
ェノール及び１ミリモルのグルコースを添加した液４ml
に入れ、この中に上記培養液を各々４０μｌずつ植菌し
た（菌体数にして約１０6 個／ml）。ここにＴＣＥ １
００ppmを加え、すばやくテフロンコートシリコンセプ
タムとアルミキャップ密封した。このバイアル瓶を３０
℃にて振盪培養し、定期的に気相をガスクロマトグラフ
ィー分析した。この結果を図２に示す。
培地に０．２％酵母エキス及び５ミリモルのグルコース
を添加した液体培地中で各々１日培養した。バイアル瓶
中にＮＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フ
ェノール及び１ミリモルのグルコースを添加した液４ml
に入れ、この中に上記培養液を各々４０μｌずつ植菌し
た（菌体数にして約１０6 個／ml）。ここにＴＣＥ １
００ppmを加え、すばやくテフロンコートシリコンセプ
タムとアルミキャップ密封した。このバイアル瓶を３０
℃にて振盪培養し、定期的に気相をガスクロマトグラフ
ィー分析した。この結果を図２に示す。
【００２８】培養液中のＴＣＥはいずれの菌においても
１０日間で６０％以上が分解された。この分解能を公知
のＴＣＥ分解菌と比較すると、３０ppm を超えるＴＣＥ
についての報告は２例のみ知られている。うちシュード
モナス・セパシアＫＫ０１（特開平６−２９６７１１）
は３０ppm ＴＣＥを２日間で１５ppm 程度（５０％）ま
で分解する能力を持ち、アルカリジェネスエウトロフス
ＫＳ０１は１０8 個／mlの菌体密度において、５０ppm
のＴＣＥを４日間でガスクロマトグラフの検出限界以下
に分解できると報告されている。これらに比べて、Ｎ１
５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株は１００ppm と
いう高濃度のＴＣＥを分解できること及び菌体当たりの
分解能が高いことから、実際に使用する際により幅広い
汚染濃度に対応できると共に、必要とする菌体量を大幅
に減量できるため、コストを低減できる等の利点があ
る。
１０日間で６０％以上が分解された。この分解能を公知
のＴＣＥ分解菌と比較すると、３０ppm を超えるＴＣＥ
についての報告は２例のみ知られている。うちシュード
モナス・セパシアＫＫ０１（特開平６−２９６７１１）
は３０ppm ＴＣＥを２日間で１５ppm 程度（５０％）ま
で分解する能力を持ち、アルカリジェネスエウトロフス
ＫＳ０１は１０8 個／mlの菌体密度において、５０ppm
のＴＣＥを４日間でガスクロマトグラフの検出限界以下
に分解できると報告されている。これらに比べて、Ｎ１
５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株は１００ppm と
いう高濃度のＴＣＥを分解できること及び菌体当たりの
分解能が高いことから、実際に使用する際により幅広い
汚染濃度に対応できると共に、必要とする菌体量を大幅
に減量できるため、コストを低減できる等の利点があ
る。
【００２９】実施例４．液体培地中でのＤＣＥの分解
Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、各々Ｎ
ＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フェノー
ル及び１ミリモルのグルコースを添加した培養液５ml中
に植菌し、３０℃２日間培養後その１／１００量を、３
０ppm のｃｉｓ−１，２−ＤＣＥを添加した同培養液４
mlを入れたバイアル瓶中に加え、３０℃にて５日間培養
した。結果を図３に示す。いずれの菌においても９９％
以上の分解が認められた。
ＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フェノー
ル及び１ミリモルのグルコースを添加した培養液５ml中
に植菌し、３０℃２日間培養後その１／１００量を、３
０ppm のｃｉｓ−１，２−ＤＣＥを添加した同培養液４
mlを入れたバイアル瓶中に加え、３０℃にて５日間培養
した。結果を図３に示す。いずれの菌においても９９％
以上の分解が認められた。
【００３０】実施例５．分解時における温度の影響
Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、各々Ｎ
ＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フェノー
ル及び１ミリモルのグルコースを添加した培養液５ml中
に植菌し、３０℃２日間培養後、その１／１００量を３
０ppm のＴＣＥを添加した同培養液４mlを入れたバイア
ル瓶中に加え、１６〜３０℃にて８日間培養した。Ｎ１
６−１及びＮ１５−１の場合は、いずれの温度において
もＴＣＥは検出限界以下にまで分解された。一方、Ｎ１
５−２は１６℃においては約３０％のＴＣＥが残存した
が、２０℃以上では検出限界以下となった。よって、こ
れらの菌は土壌中温度（１５〜２０℃）においてもＴＣ
Ｅを分解できることが示された。
ＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フェノー
ル及び１ミリモルのグルコースを添加した培養液５ml中
に植菌し、３０℃２日間培養後、その１／１００量を３
０ppm のＴＣＥを添加した同培養液４mlを入れたバイア
ル瓶中に加え、１６〜３０℃にて８日間培養した。Ｎ１
６−１及びＮ１５−１の場合は、いずれの温度において
もＴＣＥは検出限界以下にまで分解された。一方、Ｎ１
５−２は１６℃においては約３０％のＴＣＥが残存した
が、２０℃以上では検出限界以下となった。よって、こ
れらの菌は土壌中温度（１５〜２０℃）においてもＴＣ
Ｅを分解できることが示された。
【００３１】実施例６．分解時におけるpHの影響
Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、各々Ｍ
９培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フェノール
及び１ミリモルのグルコースを添加した培養液（pH７．
０）５ml中に植菌し、３０℃２日間培養後その１／１０
０量を、フェノールの代わりに３０ppm のＴＣＥを添加
し、pHを５〜１０に調整した培養液４mlを入れたバイア
ル瓶中に加え、３０℃にて５日間培養した。Ｎ１５−
１，Ｎ１５−２はいずれのpHにおいても、３０ppm ＴＣ
Ｅを検出限界以下まで分解した。また、Ｎ１６−１はpH
が７．４以上で増殖阻害がおきるが、pH５〜７の範囲で
はＴＣＥを検出限界以下まで分解した。
９培地と０．０２％酵母エキス、５００ppm フェノール
及び１ミリモルのグルコースを添加した培養液（pH７．
０）５ml中に植菌し、３０℃２日間培養後その１／１０
０量を、フェノールの代わりに３０ppm のＴＣＥを添加
し、pHを５〜１０に調整した培養液４mlを入れたバイア
ル瓶中に加え、３０℃にて５日間培養した。Ｎ１５−
１，Ｎ１５−２はいずれのpHにおいても、３０ppm ＴＣ
Ｅを検出限界以下まで分解した。また、Ｎ１６−１はpH
が７．４以上で増殖阻害がおきるが、pH５〜７の範囲で
はＴＣＥを検出限界以下まで分解した。
【００３２】実施例７．土壌中ＴＣＥの分解試験
容積３０mlのバイアル瓶に黒ボク土（愛知県内にて採取
し、風乾処理したもの）１０ｇを入れ、ＴＣＥを２０pp
m となるように添加した。Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及び
Ｎ１６−１菌株を、各々ＮＭＳ培地と０．０２％酵母エ
キス、５００ppm フェノール及び１ミリモルのグルコー
スを添加した培養液２０ml中に植菌し、３０℃３日間振
盪培養した液を遠心分離により集菌後、フェノールを含
まないＮＭＳ培地に再懸濁して、前記のバイアル瓶中に
接種菌体量が１０8 〜１０9 個／ｇ、培地添加後の含水
率が２５％になるように加え、テフロンコートパッキン
を挟みこんだネジ式のキャップをしてから攪拌した後、
３０℃て７日間培養した。
し、風乾処理したもの）１０ｇを入れ、ＴＣＥを２０pp
m となるように添加した。Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及び
Ｎ１６−１菌株を、各々ＮＭＳ培地と０．０２％酵母エ
キス、５００ppm フェノール及び１ミリモルのグルコー
スを添加した培養液２０ml中に植菌し、３０℃３日間振
盪培養した液を遠心分離により集菌後、フェノールを含
まないＮＭＳ培地に再懸濁して、前記のバイアル瓶中に
接種菌体量が１０8 〜１０9 個／ｇ、培地添加後の含水
率が２５％になるように加え、テフロンコートパッキン
を挟みこんだネジ式のキャップをしてから攪拌した後、
３０℃て７日間培養した。
【００３３】１０ｇの土壌を共栓付き三角フラスコに秤
りとり、活性炭を通過させた空気でばっ気した９０mlの
イオン交換水、５mlのリン酸、１０mlのｎ−ヘキサンを
加え密栓した。超音波洗浄器中で２０分間超音波処理を
してから、振とう機で５分間振とうした。ついで、水相
及びｎ−ヘキサン相を共栓付き比色管に移した。比色管
を密封して超音波処理した後、分離したｎ−ヘキサンを
ガスクロマトグラフィー分析した。結果を図４に示す。
りとり、活性炭を通過させた空気でばっ気した９０mlの
イオン交換水、５mlのリン酸、１０mlのｎ−ヘキサンを
加え密栓した。超音波洗浄器中で２０分間超音波処理を
してから、振とう機で５分間振とうした。ついで、水相
及びｎ−ヘキサン相を共栓付き比色管に移した。比色管
を密封して超音波処理した後、分離したｎ−ヘキサンを
ガスクロマトグラフィー分析した。結果を図４に示す。
【００３４】初期濃度１０ppm のＴＣＥは７日間で３０
〜５０％が分解された。従って、本発明の微生物は自然
環境下でもその分解能が発揮された。よって、汚染され
た土壌に本微生物と水を接触させることにより、浄化す
ることが可能となる。またこの手法により、活性化剤で
あるフェノール等の化合物を直接土壌に加える事無く、
土壌浄化が可能になる。
〜５０％が分解された。従って、本発明の微生物は自然
環境下でもその分解能が発揮された。よって、汚染され
た土壌に本微生物と水を接触させることにより、浄化す
ることが可能となる。またこの手法により、活性化剤で
あるフェノール等の化合物を直接土壌に加える事無く、
土壌浄化が可能になる。
【００３５】実施例８．土壌中ＴＣＥの分解試験
容積３０mlのバイアル瓶に黒ボク土（愛知県内にて採取
し、風乾処理したもの）１０ｇを入れ、ＴＣＥを２０pp
m となるように添加した。Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及び
Ｎ１６−１菌株を、各々ＮＭＳ培地と０．０２％酵母エ
キス、５００ppm フェノール及び１ミリモルのグルコー
スを添加した培養液２０ml中に植菌し、３０℃１日間振
盪培養した。
し、風乾処理したもの）１０ｇを入れ、ＴＣＥを２０pp
m となるように添加した。Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及び
Ｎ１６−１菌株を、各々ＮＭＳ培地と０．０２％酵母エ
キス、５００ppm フェノール及び１ミリモルのグルコー
スを添加した培養液２０ml中に植菌し、３０℃１日間振
盪培養した。
【００３６】この液を０．２mlとり、前記のバイアル瓶
中に接種菌体量が１０6 個／ｇ、培地添加後の含水率が
４０％及びフェノール濃度が５００ppm になるように加
え、テフロンコートパッキンを挟みこんだネジ式のキャ
ップをしてから攪拌した後、３０℃で３週間培養した。
図５にその結果を示す。ＴＣＥは４０〜５０％が分解さ
れており、これにより本微生物が１０6 ／ｇという低濃
度においても自然環境下で土壌中のＴＣＥ分解し得るこ
とが示された。
中に接種菌体量が１０6 個／ｇ、培地添加後の含水率が
４０％及びフェノール濃度が５００ppm になるように加
え、テフロンコートパッキンを挟みこんだネジ式のキャ
ップをしてから攪拌した後、３０℃で３週間培養した。
図５にその結果を示す。ＴＣＥは４０〜５０％が分解さ
れており、これにより本微生物が１０6 ／ｇという低濃
度においても自然環境下で土壌中のＴＣＥ分解し得るこ
とが示された。
【００３７】実施例９．活性化剤による分解活性の誘導
Ｎ１５−１，Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、ＮＭＳ
培地に０．２％酵母エキス及び５ミリモルのグルコース
を添加した液体培地５ml中で各々３０℃２日間培養し
た。バイアル瓶中にＮＭＳ培地と０．０２％酵母エキ
ス、１ミリモルのグルコース及び活性化剤として表４に
示す化合物をいずれも１００ppm 添加した液４mlを入
れ、この中に上記培養液を各々４０μｌずつ植菌した
（菌体数にして約１０6 個／ml）。ここでＴＣＥ ３０
ppm を加え、すばやくテフロンコートシリコンセプタム
とアルミキャップで密封した。このバイアル瓶を３０℃
にて５日間振とう培養し、気相をガスクロマトグラフィ
ー分析した。この結果を表５に示す。数値はいずれも無
菌添加時のＴＣＥ濃度を１００％としたときの、菌添加
時の残存ＴＣＥ濃度を％で表示する。結果を次の表３に
示す。
培地に０．２％酵母エキス及び５ミリモルのグルコース
を添加した液体培地５ml中で各々３０℃２日間培養し
た。バイアル瓶中にＮＭＳ培地と０．０２％酵母エキ
ス、１ミリモルのグルコース及び活性化剤として表４に
示す化合物をいずれも１００ppm 添加した液４mlを入
れ、この中に上記培養液を各々４０μｌずつ植菌した
（菌体数にして約１０6 個／ml）。ここでＴＣＥ ３０
ppm を加え、すばやくテフロンコートシリコンセプタム
とアルミキャップで密封した。このバイアル瓶を３０℃
にて５日間振とう培養し、気相をガスクロマトグラフィ
ー分析した。この結果を表５に示す。数値はいずれも無
菌添加時のＴＣＥ濃度を１００％としたときの、菌添加
時の残存ＴＣＥ濃度を％で表示する。結果を次の表３に
示す。
【００３８】
【表３】
【００３９】Ｎ１５−１及びＮ１５−２は、従来活性化
能誘導剤として知られていたフェノール、トルエン、ベ
ンゼン等の芳香族化合物以外にも、非芳香族化合物であ
るシクロヘキサノールによって活性化された。また、コ
ハク酸も活性化能を示した。さらに、Ｎ１６−１におい
ては、シクロペンタノール、アントラニル酸、ｐ−ヒド
ロキシ安息香酸、スベリン酸、トランス−３−ヘキセン
酸、ヘキサン酸等の直鎖カルボン酸によっても活性化さ
れた。なお、従来技術におけるバークホルデリア・セパ
シアの株ＫＫ０１及びＧ４と、本発明の株Ｎ１５−１，
Ｎ１５−２及びＮ１６−１との性質の比較を次の表４に
示す。
能誘導剤として知られていたフェノール、トルエン、ベ
ンゼン等の芳香族化合物以外にも、非芳香族化合物であ
るシクロヘキサノールによって活性化された。また、コ
ハク酸も活性化能を示した。さらに、Ｎ１６−１におい
ては、シクロペンタノール、アントラニル酸、ｐ−ヒド
ロキシ安息香酸、スベリン酸、トランス−３−ヘキセン
酸、ヘキサン酸等の直鎖カルボン酸によっても活性化さ
れた。なお、従来技術におけるバークホルデリア・セパ
シアの株ＫＫ０１及びＧ４と、本発明の株Ｎ１５−１，
Ｎ１５−２及びＮ１６−１との性質の比較を次の表４に
示す。
【００４０】
【表４】
【００４１】実施例１０．液体培地中でのＴＣＥの分解
Ｎ１５−１、Ｎ１５−２及びＮ１６−１菌株を、ＮＭＳ
培地に０．２％酵母エキス及び５ミリモルのグルコース
を添加した液体培地中で各々１日培養した。バイアル瓶
中にＮＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、１００ppm フ
ェノール及び１ミリモルのグルコースを添加した液４ml
に入れ、この中に上記培養液を各々４０μｌずつ植菌し
た（菌体数にして約１０6 個／ml）。ここにＴＣＥ ３
０ppm を加え、すばやくテフロンコートシリコンセプタ
ムとアルミキャップ密封した。このバイアル瓶を３０℃
にて振盪培養し、定期的に気相をガスクロマトグラフィ
ー分析した。この結果、ＴＣＥは１８時間後に１００％
分解された。
培地に０．２％酵母エキス及び５ミリモルのグルコース
を添加した液体培地中で各々１日培養した。バイアル瓶
中にＮＭＳ培地と０．０２％酵母エキス、１００ppm フ
ェノール及び１ミリモルのグルコースを添加した液４ml
に入れ、この中に上記培養液を各々４０μｌずつ植菌し
た（菌体数にして約１０6 個／ml）。ここにＴＣＥ ３
０ppm を加え、すばやくテフロンコートシリコンセプタ
ムとアルミキャップ密封した。このバイアル瓶を３０℃
にて振盪培養し、定期的に気相をガスクロマトグラフィ
ー分析した。この結果、ＴＣＥは１８時間後に１００％
分解された。
【００４２】
【発明の効果】本発明に係る微生物によれば、好ましく
は少なくとも１種類の活性化剤ならびに糖などの栄養素
の存在下において、水又は土壌に含まれる高濃度のＴＣ
Ｅ，ＤＣＥのごときハロゲン化炭化水素を分解すること
ができる。本発明に係る水又は土壌の浄化方法によれ
ば、多大なエネルギーを必要とせず、また２次汚染の発
生が抑えられる等のバイオ技術の利点が得られる他、自
然環境下でハロゲン化炭化水素に汚染された水又は土壌
を工業的規模で効率よく浄化することができる。
は少なくとも１種類の活性化剤ならびに糖などの栄養素
の存在下において、水又は土壌に含まれる高濃度のＴＣ
Ｅ，ＤＣＥのごときハロゲン化炭化水素を分解すること
ができる。本発明に係る水又は土壌の浄化方法によれ
ば、多大なエネルギーを必要とせず、また２次汚染の発
生が抑えられる等のバイオ技術の利点が得られる他、自
然環境下でハロゲン化炭化水素に汚染された水又は土壌
を工業的規模で効率よく浄化することができる。
【図１】図１は、実施例２でのＴＣＥの残存率の経時的
変化を示す図である。
変化を示す図である。
【図２】図２は、実施例３でのＴＣＥの残存率の経時的
変化を示す図である。
変化を示す図である。
【図３】図３は、実施例４でのｃｉｓ−１，２−ＤＣＥ
の残存率の経時的変化を示す図である。
の残存率の経時的変化を示す図である。
【図４】図４は、実施例６でのＴＣＥの残存率を示す図
である。
である。
【図５】図５は、実施例７でのＴＣＥの残存率を示す図
である。
である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ０２Ｆ 3/34 Ｃ１２Ｎ 1/20
//(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01
Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｂ０９Ｂ 3/00 Ｅ
(72)発明者 浅見 修
愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41
番地の１ 株式会社豊田中央研究所内
(72)発明者 山田 幸生
愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41
番地の１ 株式会社豊田中央研究所内
(72)発明者 沼田 耕一
愛知県名古屋市緑区ほら貝１−98 オリ
エンタルビル202
(72)発明者 織田 泰
愛知県名古屋市昭和区戸田町１−14
(56)参考文献 特開 平６−296711（ＪＰ，Ａ)
特表 平４−502277（ＪＰ，Ａ)
国際公開92／019738（ＷＯ，Ａ１)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12N 1/20
A62D 3/00
B09C 1/10
C02F 3/34
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (12)
- 【請求項１】 ハロゲン化炭化水素を分解する能力を有
し、30ppmのトリクロロエチレンを18時間で100％、又は
100ppmのトリクロロエチレンを２日間で50％以上分解す
る能力を有する微生物であって、 (1) バークホルデリア（Burkholderia）属 N16-1株（FE
RM BP-5504）、又は(2) バークホルデリア・セパシア
（Burkholderia cepacia）種、 に属する微生物。 - 【請求項２】 前記ハロゲン化水素がトリクロロエチレ
ンである請求項１に記載の微生物。 - 【請求項３】 バークホルデリア・セパシア N15-1（FE
RMBP-5502）である、請求項１又は２に記載の微生物。 - 【請求項４】 バークホルデリア・セパシア N15-2（FE
RMBP-5503）である、請求項１又は２に記載の微生物。 - 【請求項５】 ハロゲン化炭化水素を含有する水又は土
壌に、ハロゲン化炭化水素を分解する能力を有し、30pp
mのトリクロロエチレンを18時間で100％、又は100ppmの
トリクロロエチレンを２日間で50％以上分解する能力を
有するバークホルデリア（Burkholderia）属微生物を添
加することを特徴とする、ハロゲン化炭化水素を含有す
る水又は土壌の浄化方法。 - 【請求項６】 前記微生物が、バークホルデリア（Burk
holderia）属 N16-1株（FERM BP-5504）である、請求項
５に記載の方法。 - 【請求項７】 前記微生物が、バークホルデリア・セパ
シア（Burkholderiacepacia）種に属する、請求項５に
記載の方法。 - 【請求項８】 前記微生物が、バークホルデリア・セパ
シア N15-1（FERMBP-5502）である、請求項５又は７に
記載の方法。 - 【請求項９】 前記微生物が、バークホルデリア・セパ
シア N15-2（FERMBP-5503）である、請求項５又は７に
記載の方法。 - 【請求項１０】 前記ハロゲン化炭化水素が、トリクロ
ロエチレン、ジクロロエチレンまたはモノクロロエチレ
ンである、請求項５〜９のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記微生物の添加と共に水又は土壌に
微生物活性化剤を添加することを特徴とする請求項５〜
１０のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記微生物活性化剤が、ベンゼン、ト
ルエン、フェノール、クレゾール、3-ヒドロキシ−ベン
ジルアルコール、シクロペンタノール、ヘキサン酸、ト
ランス-3-ヘキサン酸又はスベリン酸である、請求項１
１に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10481697A JP3436654B2 (ja) | 1996-04-22 | 1997-04-22 | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10046696 | 1996-04-22 | ||
| JP8-100466 | 1996-04-22 | ||
| JP10481697A JP3436654B2 (ja) | 1996-04-22 | 1997-04-22 | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1052259A JPH1052259A (ja) | 1998-02-24 |
| JP3436654B2 true JP3436654B2 (ja) | 2003-08-11 |
Family
ID=26441485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10481697A Expired - Fee Related JP3436654B2 (ja) | 1996-04-22 | 1997-04-22 | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3436654B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1060668A4 (en) * | 1998-03-06 | 2004-12-15 | Toyota Motor Co Ltd | METHOD FOR CONTROLLING TARGET MICROORGANISMS |
-
1997
- 1997-04-22 JP JP10481697A patent/JP3436654B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH1052259A (ja) | 1998-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Riffaldi et al. | Soil biological activities in monitoring the bioremediation of diesel oil-contaminated soil | |
| US5814514A (en) | Biodegradation of the gasoline oxygenates | |
| JP3450518B2 (ja) | 新規微生物ｊ１、これを用いた芳香族化合物及び／又は有機塩素化合物の生物分解処理方法及び環境修復方法 | |
| KR100285035B1 (ko) | 할로겐화 탄화수소 분해균 및 이의 용도 | |
| EP0789752A1 (en) | Method for obtaining microorganisms which degrade organic compound(s) | |
| JP3083077B2 (ja) | 有機化合物の生分解方法及び環境修復方法 | |
| US6524842B1 (en) | Biodegradation of gasoline oxygenates | |
| US6537797B1 (en) | Compositions and methods useful in bioremediation of polychlorinated biphenyls | |
| JP3436654B2 (ja) | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 | |
| US6303366B1 (en) | Biodegradation of the gasoline oxygenates | |
| EP0873397B1 (en) | Novel microorganism and method for environmental purification using the same | |
| JP3435426B2 (ja) | ハロゲン化炭化水素分解菌及びその使用 | |
| JP2001179234A (ja) | 環境浄化方法およびそれに用いる微生物群を得る方法 | |
| Wang et al. | Biomediation of Quinoline-contaminated Soil Using Bioaugmentation in Slurry-phase Reactor | |
| JP3414618B2 (ja) | エチレングリコール含有水の処理方法及び微生物 | |
| Trejo et al. | Bioremediation of contaminated soils | |
| JPH0910794A (ja) | 環境中に放出された汚染物質の生物分解浄化方法 | |
| JP3437304B2 (ja) | 新規微生物ｔｌ１及びそれを用いた芳香族化合物及び／又は揮発性有機塩素化合物の生物分解処理方法 | |
| US6218172B1 (en) | Microbiological method for eliminating halogenated ethenes | |
| Bécaert et al. | Development of a microbial consortium from a contaminated soil that degrades pentachlorophenol and wood-preserving oil | |
| JP3382393B2 (ja) | トリクロロエチレンの生物分解浄化法 | |
| JP2003204781A (ja) | 有機塩素化合物分解性微生物及び同微生物を用いる有機塩素化合物の分解方法 | |
| Armon et al. | Aerobic biodegradation of benzene, toluene and ethylbenzene in liquid medium by a bacterial consortium, isolated from non-history clay soil, and their interrelation effect | |
| JP2004089981A (ja) | 揮発性有機化合物分解促進剤 | |
| JP2000069959A (ja) | 揮発性有機塩素化合物及び芳香族化合物の生物分解方法及び環境修復方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |