JP2003199588A - 新規ユビキチン特異プロテアーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 新規ＵＳＰを見い出し、有用性ある新規ＵＳ
Ｐおよびこれに由来するポリペプチドまたはペプチド、
これらをコードするポリヌクレオチド、該ポリペプチド
またはペプチドに対する抗体、新規ＵＳＰの生理活性の
阻害剤、拮抗剤、賦活剤、これらを利用した医薬組成
物、並びに遺伝子工学手法による該ポリペプチドまたは
ペプチドの製造法、上記阻害剤、拮抗剤、賦活剤の同定
方法、新規ＵＳＰが関連する疾病の診断のための方法お
よびキットを提供する。 【解決手段】 特定ののアミノ酸配列からなるポリペプ
チド、当該ポリペプチドに由来するポリペプチドおよび
ペプチド、これらポリペプチドおよびペプチドをコード
するポリヌクレオチドまたはその相補鎖。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、脱ユビキチン化活性を
有する新規なプロテアーゼ（以下、ＵＳＰと略称するこ
ともある）およびそれをコードする遺伝子に関するもの
である。さらに詳しくは、新規ＵＳＰのアミノ酸配列の
全部または一部を有するポリペプチドまたはペプチド、
該ポリペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌク
レオチドまたはその相補鎖であるポリヌクレオチド、該
ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換え
ベクターを含む形質転換体、該ポリペプチドまたは該ペ
プチドに対する抗体、該ポリペプチドまたは該ポリヌク
レオチドと相互作用を有する化合物、該ポリペプチドの
拮抗剤、これらの１種以上を含む医薬組成物、該ポリペ
プチドまたは該ペプチドの製造方法、該ポリペプチドま
たは該ペプチドまたは該ポリヌクレオチドと相互作用を
有する化合物の同定方法、該ポリペプチドまたは該ペプ
チドまたは該ポリヌクレオチドの測定方法、並びに該同
定方法または該測定方法に使用する試薬キットに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ユビキチン（以下Ｕｂと略称することも
ある）は７６個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖であ
り、そのアミノ酸配列は酵母からヒトまで高度に保存さ
れている。Ｕｂの生体内での役割は様々であり、発癌
（非特許文献１〜４）、細胞周期（非特許文献５〜
７）、ウイルス感染（非特許文献８）、および神経変性
疾患（非特許文献９〜１１）等の多くの生体反応に関与
している。

【０００３】Ｕｂの最も重要な機能は、２６Ｓプロテア
ソームでの蛋白分解におけるシグナルとしての働きであ
る。ユビキチン活性化酵素（Ｅ１）、ユビキチン結合酵
素（Ｅ２）およびユビキチンリガーゼ（Ｅ３）といった
一連のユビキチン化酵素によって、Ｕｂは標的蛋白質に
イソペプチド結合し、ポリユビキチン鎖を形成する。そ
のポリユビキチン鎖が分解シグナルとしてプロテアソー
ムに認識されることにより、ユビキチン化された蛋白質
は分解される。

【０００４】一方、ユビキチン化された蛋白質からＵｂ
が解離する脱ユビキチン化反応を触媒する脱ユビキチン
化酵素（ＤＵＢ）の存在が報告されている。ＤＵＢは、
その構造から大きく２つのファミリーに分類されている
（非特許文献１２〜１４）。１つはユビキチンＣ末端ヒ
ドロラーゼ（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａ
ｌ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）（ＵＣＨ）と呼ばれるもの
で、分子量２０ｋＤａから３０ｋＤａのものが多く、異
種間で一次構造が保存されている。ＵＣＨは主にＵｂの
Ｃ末端に低分子が結合している場合にＵｂを解離する。
もう一つはユビキチン特異プロテアーゼ（Ｕｂｉｑｕｉ
ｔｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅａｓｅ）（ＵＳ
Ｐ、ＵＢＰ、あるいはＵＣＨ＿タイプＩＩ）と呼ばれる
もので、その分子量は４０ｋＤａから１５０ｋＤａと様
々であり、異種間でのアミノ酸配列の共通性が少ない。
ＵＳＰはその活性ドメインとしてシステイン（Ｃｙｓ）
ドメイン（Ｃｙｓ ｂｏｘ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）ド
メイン（Ｈｉｓ ｂｏｘ）およびアスパラギン酸（Ａｓ
ｐ）ドメインを持ち、Ｃｙｓドメイン内に存在するシス
テイン残基を活性部位とするシステインプロテアーゼで
ある。また、ＵＳＰのＮ末端側配列が基質認識に関与す
るという報告（非特許文献１５）がある。ＵＳＰはＵｂ
のＣ末端に高分子が結合している場合にＵｂを解離す
る。

【０００５】ＵＳＰの生体内での機能は大きく３つに分
けることができる。その１は、リボゾーム蛋白融合ユビ
キチンやペプチド結合型ポリユビキチン鎖といった前駆
体ＵｂからＵｂを生成する機能である。これにはＵＳＰ
の１つであるＵｂ−ＣＥＰ５２等が関与している。その
２は、イソペプチド結合をしたユビキチン化蛋白質から
Ｕｂを解離する機能であり、蛋白質のユビキチン化を抑
制することにより蛋白質の分解を抑制する。その３は、
プロテアソームにより分解された後のイソペプチド結合
型ポリユビキチン鎖を解体する機能であり、例えば、Ｕ
ＳＰ５として知られているイソペプチダーゼＴがこの機
能を有している（非特許文献１６）。

【０００６】ＵｂおよびＵＳＰ等から構成されるユビキ
チンシステムの機能の１つは、生体内で生じた異常蛋白
質の除去、および転写因子やシグナル伝達因子等の分解
による量的調節等であり（非特許文献１７）、ＵＳＰの
機能障害はこのシステムの異常をきたす。ＵＳＰの異常
と発癌や神経変性疾患との関連が示唆されている（非特
許文献１７〜１９）。例えば、アルツハイマー病やパー
キンソン病で観察される蛋白質凝集体の多くが抗ユビキ
チン抗体に反応することが報告されている（非特許文献
１７）。また、ＵＳＰは染色体構造の維持にも関与して
おり、ユビキチン化されたヒストンの脱ユビキチン化が
染色体凝集に重要であることが知られているし（非特許
文献２０）、ＵＳＰファミリーの１つであるＵＳＰ１６
がＨ２Ａを脱ユビキチン化することが報告されている
（非特許文献２１）。さらに、ユビキチン経路が筋萎縮
症と関連していることについても報告されている（非特
許文献２２）。

【０００７】

【非特許文献１】 「フェブス レターズ（ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔｅｒｓ）」，１９９７年，第４２０巻，ｐ．２
５−

【非特許文献２】 「オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎ
ｅ）」，１９９３年，第８巻，ｐ．２３０７−

【非特許文献３】 「オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎ
ｅ）」，１９９５年，第１０巻，ｐ．２１７９−

【非特許文献４】 「ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）」，
１９９３年，第３６６巻，ｐ．３１３−

【非特許文献５】 「アニュアル レビュー オブ バ
イオケミストリー（Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，１９９８年，第６７
巻，ｐ．４２５−

【非特許文献６】 「プロシーディング オブ ザ ナ
ショナル アカデミーオブ サイエンシズ オブ ザ
ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ（Ｐｒｏｃｅ
ｅｄｉｎｇｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃ
ａｄｅｍｙ Ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｏｆ Ｔｈｅ
Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃ
ａ）」，１９９６年，第９３巻，ｐ．３２７５−

【非特許文献７】 「ジャーナル オブ バイオロジカ
ル ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，１９９７年，第
２７２巻，ｐ．５１−

【非特許文献８】 「エンボ ジャーナル（ＥＭＢＯ
Ｊｏｕｒｎａｌ）」，１９９７年，第１６巻，ｐ．１５
１９−

【非特許文献９】 「トレンズ イン ニューロサイエ
ンシズ（ＴｒｅｎｄｓＩｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ）」，１９９８年，第２１巻，ｐ．５１６−

【非特許文献１０】 「ネイチャー（Ｎａｔｕｒ
ｅ）」，１９９８年，第３９５巻，ｐ．４５１−４５２

【非特許文献１１】 「ネイチャー ジェネティクス
（Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）」，１９９８年，
第２３巻，ｐ．４７−

【非特許文献１２】 「バイオケミカル アンド バイ
オフィジカル リサーチコミュニケーションズ（Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ
ｓ）」，１９９９年，第２６６巻，ｐ．６３３−

【非特許文献１３】 「ファセブ ジャーナル（ＦＡＳ
ＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ）」，１９９７年，第１１巻，
ｐ．１２４５−

【非特許文献１４】 「クリティカル レビューズ イ
ン バイオケミストリーアンド モレキュラー バイオ
ロジー（Ｃｒｉｔｉｃａｌ ＲｅｖｉｅｗｓＩｎ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，１９９８年，第３３巻，ｐ．３３
７−

【非特許文献１５】 「ジャーナル オブ バイオロジ
カル ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，２００１年，
第２７６巻，ｐ．２０３５７−２０３６３

【非特許文献１６】 「バイオケミストリー（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，１９９５年，第３４巻，ｐ．１
４５３５−

【非特許文献１７】 鈴木俊顕，志村秀樹，服部信孝，
「ユビキチンと神経変性疾患」，「実験医学」，２００
０年，第１８巻，ｐ．１４７８−１４８２

【非特許文献１８】 鈴木俊顕，「脱ユビキチン化酵素
の多彩な作用」，「実験医学」，２００１年，第１９
巻，ｐ．１９３−

【非特許文献１９】 阿南正，中尾光善，「ユビキチン
病の分子機構」，「蛋白質・核酸・酵素」，１９９９
年，第４４巻，ｐ．７７６−

【非特許文献２０】 「バイオエッセイズ（ＢｉｏＥｓ
ｓａｙｓ）」，１９９２年，第１４巻，ｐ．９−

【非特許文献２１】 「プロシーディング オブ ザ
ナショナル アカデミーオブ サイエンシズ オブ ザ
ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ（Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａ
ｃａｄｅｍｙＯｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｏｆ Ｔｈｅ
Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆＡｍｅｒｉｃ
ａ）」，１９９９年，第９６巻，ｐ．２８２８−

【非特許文献２２】 「カレント オピニオン イン
クリニカル ニュートリション アンド メタボリック
ケア（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ＩｎＣｌｉ
ｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｍｅｔａｂ
ｏｌｉｃ ｃａｒｅ）」，２００１年，第４巻，ｐ．１
８３−１９０

【非特許文献２３】「かずさＤＮＡ研究所ＤＮＡ配列解
析分析情報データベース，ヒュージ（ＨＵＧＥ）」，イ
ンターネット＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．
ｏｒ．ｊｐ／ｈｕｇｅ／ｇｆｐａｇｅ＞

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】生体内には多くのＵＳ
Ｐが存在しており、それぞれ異なる基質特異性や生理機
能を有していると考えられる。従って、ＵＳＰの異常に
起因する疾患、例えば発癌や神経変性疾患等の解明、並
びにそれらの防止、治療および診断を可能とする上で
は、数多くの新たなＵＳＰを発見し利用することが必要
である。

【０００９】本発明が解決しようとする課題の一つは、
新規なＵＳＰを見いだし、生体内における該ＵＳＰの制
御を可能にすることである。より具体的には、新規な特
性をもつＵＳＰを提供することであり、それに伴い有用
性がある新規ＵＳＰ由来のポリペプチドまたはペプチ
ド、これらをコードするポリヌクレオチド、および該ポ
リペプチドまたは該ペプチドに対する抗体を提供するこ
とである。さらに、新規ＵＳＰの発現および／またはそ
の生理活性の阻害剤、拮抗剤または促進剤等の同定を行
うことであり、同定された化合物を提供することであ
る。また、上記ポリペプチドまたは上記ペプチド、上記
ポリヌクレオチド、上記抗体、および上記化合物を利用
した医薬組成物、並びに上記ポリペプチドまたは上記ペ
プチドまたは上記ポリヌクレオチドの測定方法を提供す
ることである。さらにまた、上記ポリヌクレオチドを用
いた遺伝子工学手法による新規ＵＳＰ由来のポリペプチ
ドまたはペプチドの製造法を提供することである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決すべく本
発明者らは鋭意努力し、新規特性を有するＵＳＰ遺伝子
およびその蛋白質を得ることに成功した。より具体的に
は、かずさＤＮＡ研究所ヒト長鎖ｃＤＮＡ解析情報デー
タベースから、新規プロテアーゼ候補遺伝子としてｃＤ
ＮＡクローンを抽出し、大腸菌を用いた遺伝子発現系で
発現させて該遺伝子がコードする蛋白質を得た。さら
に、得られた蛋白質が脱ユビキチン化活性を示すこと、
またＮ末端側第１番目から第５２１番目の連続する５２
１個のアミノ酸残基を欠失した当該蛋白質は脱ユビキチ
ン化活性を示さないことを確認し、本発明を完成した。

【００１１】すなわち、本発明は、（１）下記の群より
選ばれるポリペプチド； 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチドを含有するポリペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチドと少なくとも約７０％のアミノ酸配列上の相
同性を有し、かつ脱ユビキチン化活性を有するポリペプ
チド、 および 前記からのいずれか１のポリペプチドにおいてア
ミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、置換、付
加、または挿入といった変異を有し、かつ脱ユビキチン
化活性を有するポリペプチド、（２）下記の群より選ば
れるポリペプチドであって、脱ユビキチン化活性を有す
るポリペプチド； 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチドを含有するポリペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチドと少なくとも約７０％のアミノ酸配列上の相
同性を有するポリペプチド、および 前記からのいずれか１のポリペプチドにおいてア
ミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、置換、付
加、または挿入といった変異を有するポリペプチド、
（３）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の少な
くとも約５個の連続するアミノ酸配列を有するペプチ
ド、（４）下記の群より選ばれるポリペプチド； （ａ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
ミノ酸残基からなるポリペプチド、 （ｂ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
ミノ酸残基からなるポリペプチドと少なくとも約７０％
のアミノ酸配列上の相同性を有し、かつ前記（１）また
は前記（２）のポリペプチドの脱ユビキチン化活性を阻
害するポリペプチド、および （ｃ）前記（ａ）または前記（ｂ）のポリペプチドにお
いて、アミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、
置換、付加、または挿入といった変異を有し、かつ前記
（１）または前記（２）のポリペプチドの脱ユビキチン
化活性を阻害するポリペプチド、（５）下記の群より選
ばれるポリペプチドであって、前記（１）または前記
（２）のポリペプチドの脱ユビキチン化活性を阻害する
ポリペプチド； （ａ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
ミノ酸残基からなるポリペプチド、 （ｂ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
ミノ酸残基からなるポリペプチドと少なくとも約７０％
のアミノ酸配列上の相同性を有するポリペプチド、およ
び （ｃ）前記（ａ）または前記（ｂ）のポリペプチドにお
いて、アミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、
置換、付加、または挿入といった変異を有するポリペプ
チド、（６）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列
からなるポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基
から第５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続
するアミノ酸残基からなるポリペプチドのアミノ酸配列
の少なくとも約５個の連続するアミノ酸配列を有し、か
つ前記（１）または前記（２）のポリペプチドの脱ユビ
キチン化活性を阻害するペプチド、（７）前記（１）若
しくは前記（２）のポリペプチド、または前記（３）の
ペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはその相補
鎖、（８）配列表の配列番号２に記載の塩基配列からな
るポリヌクレオチドまたはその相補鎖、（９）配列表の
配列番号２に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド
またはその相補鎖の少なくとも約１５個の連続する塩基
配列からなるポリヌクレオチド、（１０）前記（７）か
ら前記（９）のいずれかのポリヌクレオチドまたはその
相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイゼー
ションするポリヌクレオチド、（１１）前記（４）若し
くは前記（５）のポリペプチド、または前記（６）のペ
プチドをコードするポリヌクレオチドまたはその相補
鎖、（１２）配列表の配列番号４に記載の塩基配列から
なるポリヌクレオチドまたはその相補鎖、（１３）前記
（７）から前記（１２）のいずれかのポリヌクレオチド
を含有する組換えベクター、（１４）組換えベクターが
発現組換えベクターである前記（１３）の組換えベクタ
ー、（１５）前記（１３）または前記（１４）の組換え
ベクターを導入されてなる形質転換体、（１６）前記
（１）、前記（２）、前記（４）若しくは前記（５）の
ポリペプチド、または前記（３）若しくは前記（６）の
ペプチドの製造方法であって、前記（１４）の組換えベ
クターを導入されてなる形質転換体を培養する工程、ま
たは前記（１３）若しくは前記（１４）の組換えベクタ
ーを利用した無細胞蛋白質合成手段を含む方法、（１
７）前記（１）、前記（２）、前記（４）若しくは前記
（５）のポリペプチド、または前記（３）若しくは前記
（６）のペプチドを免疫学的に認識する抗体、（１８）
脱ユビキチン化活性を阻害する前記（１７）の抗体、
（１９）前記（１）若しくは前記（２）のポリペプチド
と相互作用してその生理活性を阻害する若しくは増強す
る化合物、および／または前記（７）若しくは前記
（８）のポリヌクレオチドと相互作用してその発現を阻
害する若しくは促進する化合物の同定方法であって、前
記（１）、前記（２）、前記（４）若しくは前記（５）
のポリペプチド、前記（３）若しくは前記（６）のペプ
チド、前記（７）から前記（１２）のいずれかのポリヌ
クレオチド、前記（１３）若しくは前記（１４）の組換
えベクター、前記（１５）の形質転換体、および前記
（１７）若しくは前記（１８）の抗体のうちの少なくと
もいずれか１つを用いることを特徴とする方法、（２
０）前記（１）若しくは前記（２）のポリペプチドと相
互作用してその生理活性を阻害する若しくは増強する化
合物、および／または前記（７）若しくは前記（８）の
ポリヌクレオチドと相互作用してその発現を阻害する若
しくは促進する化合物の同定方法であって、化合物と該
ポリペプチドまたは該ポリヌクレオチドとの相互作用を
可能にする条件下で、該ポリペプチドまたは該ポリヌク
レオチドと化合物とを接触させ、次いで、化合物と該ポ
リペプチドまたは該ポリヌクレオチドとの相互作用によ
り生じるシグナルの存在若しくは不存在または変化を検
出することにより、化合物が該ポリペプチドまたはポリ
ヌクレオチドと相互作用して、該ポリペプチドの生理活
性または該ポリヌクレオチドの発現を阻害または促進す
るかどうかを決定する方法、（２１）前記（１９）また
は前記（２０）の方法で同定された化合物、（２２）前
記（１）若しくは前記（２）のポリペプチドと相互作用
して脱ユビキチン化活性を阻害する若しくは増強する化
合物、または前記（７）若しくは前記（８）のポリヌク
レオチドと相互作用してその発現を阻害する若しくは促
進する化合物、（２３）前記（４）若しくは前記（５）
のポリペプチドおよび／または前記（６）のペプチドか
らなる、前記（１）若しくは前記（２）のポリペプチド
の拮抗剤、（２４）前記（１）、前記（２）、前記
（４）または前記（５）のポリペプチド、前記（３）ま
たは前記（６）のペプチド、前記（７）から前記（１
２）のいずれかのポリヌクレオチド、前記（１３）また
は前記（１４）の組換えベクター、前記（１５）の形質
転換体、前記（１７）または前記（１８）の抗体、前記
（２１）または前記（２２）の化合物、および前記（２
３）の拮抗剤のうちの少なくともいずれか１つを含有す
ることを特徴とする医薬組成物、（２５）前記（１）、
前記（２）、前記（４）または前記（５）のポリペプチ
ド、前記（３）または前記（６）のペプチド、前記
（７）から前記（１２）のいずれかのポリヌクレオチ
ド、前記（１３）または前記（１４）の組換えベクタ
ー、前記（１５）の形質転換体、前記（１７）または前
記（１８）の抗体、前記（２１）または前記（２２）の
化合物、および前記（２３）の拮抗剤のうちの少なくと
もいずれか１つを含有することを特徴とする神経変性疾
患の防止剤および／または治療剤、（２６）前記神経変
性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン
病である前記（２５）の神経変性疾患の防止剤および／
または治療剤、（２７）前記（１）、前記（２）、前記
（４）または前記（５）のポリペプチド、前記（３）ま
たは前記（６）のペプチド、前記（７）から前記（１
２）のいずれかのポリヌクレオチド、前記（１３）また
は前記（１４）の組換えベクター、前記（１５）の形質
転換体、前記（１７）または前記（１８）の抗体、前記
（２１）または前記（２２）の化合物、および前記（２
３）の拮抗剤のうちの少なくともいずれか１つを含有す
ることを特徴とする筋萎縮症の防止剤および／または治
療剤、（２８）前記（１）、前記（２）、前記（４）ま
たは前記（５）のポリペプチド、または前記（７）、前
記（８）、前記（１１）若しくは前記（１２）のポリヌ
クレオチドを定量的あるいは定性的に測定する方法、
（２９）前記（１）、前記（２）、前記（４）または前
記（５）のポリペプチド、前記（３）または前記（６）
のペプチド、前記（７）から前記（１２）のいずれかの
ポリヌクレオチド、前記（１３）または前記（１４）の
組換えベクター、前記（１５）の形質転換体、前記（１
７）または前記（１８）の抗体、および前記（２３）の
拮抗剤のうちの少なくともいずれか１つを含んでなる試
薬キット、からなる。

【００１２】

【発明の実施の形態】（新規ＵＳＰ）本発明において提
供するヒトＵＳＰは、ヒト脳由来長鎖ｃＤＮＡライブラ
リーから、プロテアーゼモチーフを有する遺伝子として
選出したｃＤＮＡクローンｂｆ０４２７４がコードする
蛋白質である。当該ＵＳＰは、上記遺伝子を組み込んだ
発現プラスミドを導入した大腸菌で発現させて得た。当
該ＵＳＰは既知ＵＳＰとそのアミノ酸配列において、相
同性の高いＣｙｓドメインおよびＨｉｓドメインを保有
することを除いて、殆ど相同性を有さない新規ＵＳＰで
ある。当該ＵＳＰ遺伝子は７７４４塩基からなり（配列
表の配列番号２）、そのオープンリーディングフレーム
（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）（ＯＲＦ）
全長は４６７１塩基、該遺伝子の遺伝子産物は１５５６
アミノ酸残基からなる（配列番号１）。以下、この遺伝
子を新規ＵＳＰ遺伝子、該遺伝子の遺伝子産物を新規Ｕ
ＳＰと呼ぶ。新規ＵＳＰ遺伝子のＣ末端側５６１８塩基
および新規ＵＳＰのＣ末端側９７７アミノ酸残基は、そ
れぞれＫＩＡＡ１０５７（ＧｅｎＢａｎｋアクセッショ
ン番号：ＡＢ０２８９８０）の遺伝子およびその遺伝子
産物と共通である。

【００１３】新規ＵＳＰ遺伝子は、遺伝子共発現系で人
工基質と共に発現させたとき、該人工基質に作用して脱
ユビキチン化活性を示した。一方、新規ＵＳＰのＮ末端
から５２１アミノ酸残基欠失させたもの（ＫＩＡＡ１０
５７−１）と人工基質とをインビトロまたは遺伝子共発
現系において反応させたときには、脱ユビキチン化活性
は観察されなかった。ＫＩＡＡ１０５７−１はＫＩＡＡ
１０５７を含むものである。ＫＩＡＡ１０５７は、その
塩基配列、コードするアミノ酸配列、およびＵＳＰの特
徴であるＣｙｓドメインおよびＨｉｓドメインを有する
ことが既に公開されていた（非特許文献２３）。しか
し、ＫＩＡＡ１０５７として公開されているアミノ酸配
列を含むＫＩＡＡ１０５７−１は脱ユビキチン化活性を
示さなかった。すなわち、本発明において新規ＵＳＰを
単離・同定することにより、初めて新規ＵＳＰが脱ユビ
キチン化活性を有することを確認でき、酵素活性を有す
る蛋白質を取得できた。さらに、新規ＵＳＰには基質選
択性があり、人工基質を用いた検討において、アルギニ
ンを介して蛋白質に結合したＵｂに選択的に作用するこ
とを明らかにした。既知ＵＳＰの中で、このようなＵｂ
に選択的に作用するものは知られていない。また、ＫＩ
ＡＡ１０５７ｃＤＮＡが脳、骨格筋、および心臓等で、
特に骨格筋で強く発現していることが公開されているこ
とから、新規ＵＳＰ遺伝子も脳および骨格筋等で同様に
発現していると考えられる。

【００１４】（ポリペプチドまたはペプチド）本発明に
係るポリペプチドは、新規ＵＳＰ遺伝子の遺伝子産物で
あり、該遺伝子を大腸菌等の細胞で発現させて得られた
ポリペプチドである。ここで、ポリペプチドとは、ペプ
チド結合または修飾されたペプチド結合により互いに結
合している２個またはそれ以上のアミノ酸を含む任意の
ペプチドのうち、蛋白質等の長鎖ペプチドを意味し、オ
リゴペプチドおよびオリゴマーとも称する短鎖ペプチド
を単にペプチドという。本明細書においてはアミノ酸を
３文字表記または１文字表記することもある。

【００１５】本発明に係るポリペプチドの１態様は、配
列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドである。別の１態様は、配列番号１に記載のアミ
ノ酸配列からなるポリペプチドを含有するポリペプチド
である。

【００１６】また別の１態様は、配列表の配列番号１に
記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドと、アミノ酸
配列上で約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より
好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以
上の相同性を有するポリペプチドである。より好ましく
は、配列表の配列番号１に記載のポリペプチドと同等の
活性、例えば脱ユビキチン化活性を有するポリペプチド
である。脱ユビキチン化活性は、例えば後述する実施例
に示したように、ヒトユビキチンのＣ末端にグルタチオ
ン＿Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）をアルギニン、
イソロイシン、メチオニン、またはプロリンを介して結
合させたものを基質として用い、該基質からユビキチン
を解離させ得るか否かを、ユビキチン解離後のＧＳＴを
抗ＧＳＴ抗体によるイムノブロッティング法等の公知の
方法で検出することにより測定できる。さらに好ましく
は、アルギニンを介してＵｂが結合した基質に選択的に
作用して脱ユビキチン化活性を示すポリペプチドであ
る。アミノ酸配列の相同性を決定する技術は、自体公知
であり、例えばアミノ酸配列を直接決定する方法、ｃＤ
ＮＡの塩基配列を決定後これにコードされるアミノ酸配
列を推定する方法等が利用できる。なお、ヒト以外の動
物種の相同遺伝子産物も当然本発明の範囲に包含され
る。

【００１７】さらに、このように特定されたポリペプチ
ドを基にして、脱ユビキチン化活性を指標にすることに
より、１個以上、例えば１個乃至１００個、好ましくは
１個乃至３０個、より好ましくは１個乃至２０個、さら
に好ましくは１個乃至１０個、特に好ましくは１個乃至
数個のアミノ酸の欠失、置換、付加、あるいは挿入とい
った変異を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドも
提供される。変異を有するペプチドまたはポリペプチド
は天然に存在するものであってよく、あるいは変異を導
入したものであってもよい。欠失、置換、付加、挿入等
の変異を導入する手段は自体公知であり、例えば、部位
特異的変異導入法、遺伝子相同組換え法、プライマー伸
長法、またはポリメラーゼ連鎖増幅法（ＰＣＲ）を単独
または適宜組み合わせて、例えばサムブルック等編，
「モレキュラークローニング アラボラトリーマニュア
ル」，第２版，コールド＿スプリング＿ハーバー＿ラボ
ラトリー＿プレス，１９８９年、村松正實編，「ラボマ
ニュアル遺伝子工学」，丸善株式会社，１９８８年、
エールリッヒ編，「ピーシーアール（ＰＣＲ）テクノロ
ジー」，「ＤＮＡ増幅の原理と応用」，ストックトンプ
レス，１９８９年等の成書に記載の方法に準じて、ある
いはそれらの方法を改変して実施することができ、例え
ばウルマー（Ｕｌｍｅｒ）の技術（「サイエンス（Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ）」，１９８３年，第２１９巻，ｐ．６６６
−）を利用することができる。

【００１８】上記のような変異の導入において、当該ポ
リペプチドの基本的な性質（物性、生理活性、または免
疫学的活性等）を変化させないという観点からは、例え
ば、同族アミノ酸（極性アミノ酸、非極性アミノ酸、疎
水性アミノ酸、親水性アミノ酸、陽性荷電アミノ酸、陰
性荷電アミノ酸、芳香族アミノ酸等）の間での相互置換
は容易に想定される。さらに、これらのペプチドは、そ
の構成アミノ基またはカルボキシル基等を修飾する等、
機能の著しい変更を伴わない程度に改変が可能である。

【００１９】このように、新規ＵＳＰが有する生理活性
と同等の活性、例えば同等の脱ユビキチン化活性を有す
るポリペプチドが、本発明において提供できる。それら
以外にも、活性の強度または基質特異性を変更したポリ
ペプチドが提供できる。

【００２０】さらに、配列表の配列番号１に記載のアミ
ノ酸配列からなるポリペプチドの部分配列を有するポリ
ペプチドまたはペプチドも本発明の範囲に包含される。
当該部分配列を有するポリペプチドまたはペプチドは、
その最小単位として５個以上のアミノ酸、好ましくは８
個以上のアミノ酸、より好ましくは１２個以上、さらに
好ましくは１５個以上の連続するアミノ酸からなるもの
である。例えば、新規ＵＳＰが有する生理活性の最小活
性単位（領域またはドメイン）からなるポリペプチドま
たはペプチドも本発明において提供される。上記部分配
列を有するポリペプチドまたはペプチドは、新規ＵＳＰ
または新規ＵＳＰと同等の生理活性、例えば脱ユビキチ
ン化活性を有する上記ポリペプチドの活性を調節する物
質として、あるいは当該生理活性を調節する物質の同定
等に使用する試薬として有用である。

【００２１】具体的には例えば、上記部分配列を有する
ポリペプチドまたはペプチドは、新規ＵＳＰまたは新規
ＵＳＰと同等の生理活性、例えば脱ユビキチン化活性を
有する上記ポリペプチドの拮抗物質として使用できる。
例えば、配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列から
なるポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から
第５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個のアミノ酸
残基からなるポリペプチド（配列表の配列番号３）は、
この部位を欠失させると配列表の配列番号１に記載のア
ミノ酸配列からなるポリペプチドの脱ユビキチン化活性
が消失すること、またユビキチン特異プロテアーゼ（Ｕ
ＢＰ）のＮ末端側配列が基質認識に関与するという報告
（非特許文献１５）があることから、新規ＵＳＰの基質
認識に関与していると考えられる。基質認識部位を有し
ているが酵素活性部位を持たないこのようなポリペプチ
ドは、それが由来した酵素の拮抗剤として用いることが
できる。従って、配列表の配列番号３に記載のアミノ酸
配列からなるポリペプチドは、新規ＵＳＰまたは新規Ｕ
ＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの拮抗
剤として、それらの生理活性、例えば脱ユビキチン化活
性の阻害に使用できる。

【００２２】新規ＵＳＰまたは新規ＵＳＰと同等の生理
活性を有する上記ポリペプチドの生理活性、例えば脱ユ
ビキチン化活性を阻害するポリペプチドは、配列表の配
列番号３に記載のポリペプチドに限定されず、これらポ
リペプチドの生理活性、例えば脱ユビキチン化活性を阻
害できるポリペプチドであればよく、例えば、配列表の
配列番号３に記載のポリペプチドとアミノ酸配列上で約
７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは
約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性
を有し、かつ配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる
ポリペプチドまたは該ポリペプチドと同等の生理活性を
有する上記ポリペプチドの生理活性、例えば脱ユビキチ
ン化活性を阻害できるポリペプチドが挙げられる。さら
に、例えば配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列か
らなるポリペプチドを基にして、脱ユビキチン化活性の
阻害能を指標にすることにより、１個以上、例えば１個
乃至１００個、好ましくは１個乃至３０個、より好まし
くは１個乃至２０個、さらに好ましくは１個乃至１０
個、特に好ましくは１個乃至数個のアミノ酸の欠失、置
換、付加、あるいは挿入といった変異を有するアミノ酸
配列からなるポリペプチドも提供できる。欠失、置換、
付加、あるいは挿入は上記同様の手段が使用できる。

【００２３】またさらに、新規ＵＳＰまたは新規ＵＳＰ
と同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの生理活
性、例えば脱ユビキチン化活性を阻害するポリペプチド
の部分ペプチドであって、当該生理活性、例えば脱ユビ
キチン化活性を阻害するペプチドも本発明の範囲に含ま
れる。

【００２４】新規ＵＳＰまたは新規ＵＳＰと同等の生理
活性を有する上記ポリペプチドの生理活性、例えば脱ユ
ビキチン化活性を阻害するポリペプチドまたはペプチド
は、脱ユビキチン化活性を測定する実験系において、脱
ユビキチン化活性の阻害を検討することにより得られ
る。該実験系としては、例えば後述する実施例に示した
ように、ヒトユビキチンのＣ末端にグルタチオン＿Ｓ−
トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）をアルギニン、イソロイ
シン、メチオニン、またはプロリンを介して結合させた
ものを基質として用い、該基質からユビキチンを解離さ
せ得るか否かを、ユビキチン解離後のＧＳＴを抗ＧＳＴ
抗体によるイムノブロッティング法等の公知の方法で検
出する実験系を使用できる。

【００２５】また、上記部分配列を有するポリペプチド
またはペプチドのうち免疫学的に認識され得るペプチド
は、例えばエピトープペプチドであれば、後述するよう
に新規ＵＳＰに特異的な抗体を作製するための抗原とし
て単独でまたはキャリア（例えば、キーホールリンペッ
トヘモシアニンまたは卵白アルブミン）と結合して使用
できる。

【００２６】本発明の範囲には、本発明に係るポリペプ
チドまたはペプチドに、別種の蛋白質または物質、例え
ばキャリア等を結合したものも包含される。例えば、本
発明に係るポリペプチド等の検出または精製を容易にす
るために、あるいは別の機能を付加するために、そのＮ
末端側やＣ末端側に別種の蛋白質またはペプチド、例え
ばグルタチオン＿Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、
ルシフェラーゼ、ＧＦＰ、β−ガラクトシダーゼ、Ｉｇ
Ｇ等の免疫グロブリンＦｃ断片、Ｈｉｓ−ｔａｇ、Ｍｙ
ｃ−ｔａｇ、またはＦｌａｇ−ｔａｇ等が、直接的にま
たはリンカーペプチド等を介して間接的に遺伝子工学的
手法等を用いて付加されたものであってもよい。

【００２７】（ポリヌクレオチド）本発明は、上記ポリ
ペプチドまたは上記ペプチドをコードするポリヌクレオ
チドおよびその相補鎖を提供する。例えば、本発明に係
るポリヌクレオチドは、配列表の配列番号１に記載のア
ミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドまたはその相補鎖である。好ましくは、配列表
の配列番号２に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチ
ドまたはその相補鎖である。さらに本発明に係る配列表
の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドまたはその相補鎖、好ましくは配列表の配列番号４に
記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドまたはその相
補鎖も本発明の範囲に含まれる。

【００２８】さらに本発明は、上記ポリヌクレオチドま
たはその相補鎖、好ましくは配列表の配列番号２に記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドまたはその相補鎖
の対応する領域にストリンジェントな条件下でハイブリ
ダイズするポリヌクレオチドを提供する。ハイブリダイ
ゼーションの条件は、例えばサムブルック等編，「モレ
キュラークローニング ア ラボラトリーマニュア
ル」，第２版，コールド＿スプリング＿ハーバー＿ラボ
ラトリー＿プレス，１９８９年等に従うことができる。
これらのポリヌクレオチドは目的のポリヌクレオチド、
好ましくは配列表の配列番号２に記載の塩基配列からな
るポリヌクレオチドまたはその相補鎖にハイブリダイゼ
ーションするものであれば必ずしも相補的配列でなくと
も良い。

【００２９】また本発明に係るポリヌクレオチドは、上
記ポリヌクレオチドの指定された塩基配列領域に対応す
る連続する１０個以上のヌクレオチド、好ましくは１５
個以上、より好ましくは２０個以上の配列からなるポリ
ヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチドまたはそれら
の相補鎖を包含する。

【００３０】これらのポリヌクレオチドまたはオリゴヌ
クレオチドは、本発明に係るポリペプチド等の製造に有
用な遺伝子情報を提供するものであり、あるいは核酸に
関する試薬または標準品としても利用できる。例えば、
新規ＵＳＰをコードする核酸、例えばその遺伝子または
ｍＲＮＡの検出のためのプローブまたはプライマーとし
て、あるいは遺伝子発現を調節するためのアンチセンス
オリゴヌクレオチド等として利用できる。その意味で、
本発明に係るポリヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチ
ドは翻訳領域のみでなく、非翻訳領域に対応するものも
包含する。ここで、新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと同等の
生理活性を有する上記ポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドの選別は、例えば公知の蛋白質発現系を利用
して発現蛋白質の確認を行い、その生理活性、例えば脱
ユビキチン化活性を指標にして行うことができる。公知
の蛋白質発現系としては、例えば、胚芽または家兎網状
赤血球等由来のリボソーム系の技術を利用した無細胞蛋
白質発現系（「ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ），１９５７
年，第１７９巻，ｐ．１６０−１６１）を例示できる。

【００３１】（組換えベクター）上記ポリヌクレオチド
を適当なベクターＤＮＡに組み込むことにより、組換え
ベクターが得られる。用いるベクターＤＮＡは、宿主の
種類および使用目的により適宜選択される。ベクターＤ
ＮＡは、天然に存在するものを抽出したもののほか、増
殖に必要な部分以外のＤＮＡの部分が一部欠落している
ものでもよい。例えば、染色体、エピソームおよびウイ
ルス由来のベクター、例えば細菌プラスミド由来、バク
テリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソ
ーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント
由来、例えばバキュロウイルス、パポバウイルス、ＳＶ
４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイ
ルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウ
イルス由来のベクター、並びにそれらを組み合わせたベ
クター、例えばプラスミドおよびバクテリオファージの
遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミドお
よびファージミド等が挙げられる。また、目的により発
現ベクターやクローニングベクター等を用いることがで
きる。

【００３２】組換えベクターは、目的の遺伝子配列と複
製そして制御に関する情報を担持した遺伝子配列、例え
ばプロモーター、リボソーム結合部位、ターミネータ
ー、シグナル配列、エンハンサー等、とを構成要素と
し、これらを自体公知の方法により組み合わせて作製さ
れる。前記ベクターＤＮＡに本発明に係るポリヌクレオ
チドを組み込む方法は、自体公知の方法を適用できる。
例えば、適当な制限酵素を選択、処理してＤＮＡを特定
部位で切断し、次いで同様に処理したベクターとして用
いるＤＮＡと混合し、リガーゼによって再結合する方法
が用いられる。あるいは、目的のポリヌクレオチドに適
当なリンカーをライゲーションし、これを目的に適した
ベクターのマルチクローニングサイトへ挿入することに
よっても、所望の組換えベクターが得られる。

【００３３】（形質転換体）上記ポリヌクレオチドが組
み込まれたベクターＤＮＡを、自体公知の宿主に自体公
知の方法で導入することにより形質転換体が得られる。
宿主としては、大腸菌、酵母、枯草菌、昆虫細胞、また
は動物細胞等が例示できる。遺伝子の導入を行う場合、
より好ましい系としては遺伝子の安定性を考慮するなら
ば染色体内へのインテグレート法が挙げられるが、簡便
には核外遺伝子を利用した自律複製系を使用できる。ベ
クターＤＮＡの宿主細胞への導入は、例えば、サムブル
ック等編，「モレキュラークローニング ア ラボラト
リーマニュアル」，第２版，コールド＿スプリング＿ハ
ーバー＿ラボラトリー＿プレス，１９８９年等に記載さ
れている標準的な方法により行うことができる。具体的
には、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン媒介トランスフェクション、マイクロ
インジェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクシ
ョン、エレクトロポレーション、形質導入、スクレープ
負荷（ｓｃｒａｐｅ ｌｏａｄｉｎｇ）、バリスティッ
ク導入（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ）、および感染等が挙げられる。

【００３４】また、形質転換体に導入するベクターＤＮ
Ａとして発現ベクターを使用すれば、本発明に係るポリ
ペプチドまたはペプチドを提供可能である。上記ポリヌ
クレオチドが組み込まれた発現ベクターＤＮＡを導入し
た形質転換体は、各宿主の培養条件に最適な条件を選択
して培養される。培養は、形質転換体により発現される
本発明に係るポリペプチドまたはペプチドの作用、例え
ば少なくとも脱ユビキチン化活性等、あるいは宿主中で
産生されたまたは宿主外に産生された該ポリペプチドま
たは該ペプチドの量を指標にして行ってもよいが、培地
中の形質転換体量を指標にして継代培養またはバッチ培
養を行ってもよい。

【００３５】（ポリペプチドまたはペプチドの製造）本
発明に係るポリペプチドまたはペプチドは、上記ベクタ
ーまたは形質転換体を利用して上記のように遺伝子工学
的技術で製造可能である。また、通常のペプチド化学に
おいて知られる方法でも製造できる。例えば、「ペプチ
ド合成」，丸善株式会社，１９７５年や「ペプチド シ
ンテシス（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」，
インターサイエンス（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ），ニ
ューヨーク（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），１９９６年に記載の
方法が例示できるが、無論既知の方法が広く利用可能で
ある。

【００３６】本発明に係るポリペプチドまたはペプチド
の精製および回収は、その生理活性、例えば少なくとも
脱ユビキチン化活性を指標にして、分子篩、イオンカラ
ムクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィ
ー等を組み合わせるか、溶解度差に基づく硫安、アルコ
ール等の分画手段によって精製回収できる。好ましく
は、回収しようとするポリペプチドまたはペプチドのア
ミノ酸配列の情報に基づき、これらに特異的なポリクロ
ーナル抗体またはモノクロ−ナル抗体を作製し、該抗体
を用いて特異的に吸着回収する方法を使用する。

【００３７】（抗体）抗体は、上記ポリペプチドまたは
上記ペプチドを抗原として用いて作製する。抗原は、上
記ポリペプチドまたは上記ペプチド、あるいはそれらの
断片でもよく、少なくとも８個、好ましくは少なくとも
１０個、より好ましくは少なくとも１２個、さらに好ま
しくは１５個以上のアミノ酸で構成される。新規ＵＳＰ
に特異的な抗体を作製するためには、ＵＳＰファミリー
間の保存領域以外の新規ＵＳＰに固有なアミノ酸配列か
らなる領域を用いることが好ましい。抗原として用いる
ポリペプチドまたはペプチドのアミノ酸配列は、必ずし
もポリペプチドまたはペプチド、例えば配列表の配列番
号１若しくは配列番号３に記載のアミノ酸配列または該
配列中の連続するアミノ酸配列からなる部分配列と相同
である必要はなく、蛋白質の立体構造上の外部への露出
部位が好ましく、露出部位のアミノ酸配列が一次構造上
で不連続であっても、該露出部位について連続的なアミ
ノ酸配列であればよい。抗体は、免疫学的に新規ＵＳＰ
またはその由来物からなるペプチドまたはポリペプチド
を、結合または認識する限り特に限定されない。この結
合または認識の有無は、公知の抗原抗体結合反応によっ
て決定される。

【００３８】抗体を産生するためには、自体公知の抗体
作製法を利用できる。例えば、本発明に係るポリペプチ
ドまたはペプチドを、アジュバントの存在下または非存
在下に、単独でまたは担体に結合して動物に投与し、体
液性応答および／または細胞性応答等の免疫誘導を行う
ことにより得られる。担体は、それ自体が宿主に対して
有害な作用を及ぼさずかつ抗原性を増強せしめるもので
あれば特に限定されず、例えばセルロース、重合アミノ
酸、アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン
（ＫＬＨ）等が例示される。アジュバントとしては、フ
ロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）、フロイント不完
全アジュバント（ＦＩＡ）、Ｒｉｂｉ（ＭＰＬ）、Ｒｉ
ｂｉ（ＴＤＭ）、Ｒｉｂｉ（ＭＰＬ＋ＴＤＭ）、百日咳
ワクチン（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ
ｖａｃｃｉｎｅ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、
アルミニウムアジュバント（ＡＬＵＭ）、およびこれら
の組み合わせが例示される。免疫される動物は、マウ
ス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウマ等が好適に用いられ
る。

【００３９】ポリクローナル抗体は、上記免疫手段を施
された動物の血清から自体公知の抗体回収法によって取
得される。好ましい手段として免疫アフィニティクロマ
トグラフィー法により得られる。

【００４０】モノクロ−ナル抗体を生産するためには、
上記の免疫手段が施された動物から抗体産生細胞（例え
ば、脾臓またはリンパ節由来のリンパ球）を回収し、自
体公知の永久増殖性細胞（例えば、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ
８株等のミエローマ株）への形質転換手段を導入するこ
とによって行われる。例えば、抗体産生細胞と永久増殖
性細胞とを自体公知の方法で融合させてハイブリドーマ
を作製してこれをクローン化し、上記ポリペプチドまた
は上記ペプチドを特異的に認識する抗体を産生するハイ
ブリドーマを選別し、該ハイブリドーマの培養液から抗
体を回収する。

【００４１】かくして得られた上記ポリペプチドまたは
上記ペプチドを認識して結合するポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体は、上記ポリペプチドまたは上
記ペプチドの、精製用抗体、試薬、または標識マーカー
等として利用できる。例えば、上記ポリペプチドまたは
上記ペプチドを認識して結合するポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体のうち、直接本発明に係る新規
ＵＳＰに結合してその脱ユビキチン化活性を阻害する抗
体は、ＵＳＰの異常に起因する各種疾患の解明、防止お
よび／または治療に有用である。

【００４２】（スクリーニング）本発明に係るポリペプ
チドまたはペプチド、本発明に係るポリヌクレオチドま
たはその相補鎖、該ポリヌクレオチドまたはその相補鎖
を組み込んだベクター、該ベクターを導入してなる形質
転換体、これらを用いる蛋白質発現系、並びに該ポリペ
プチドまたは該ペプチドを免疫学的に認識する抗体は、
単独または複数を組み合わせることによって、新規ＵＳ
Ｐまたは該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペ
プチドの活性阻害剤または活性増強剤の同定に有効な方
法を提供する。また、これらは、新規ＵＳＰまたは該Ｕ
ＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドの発現阻害剤または発現促進剤
の同定に有効な方法を提供する。該方法は、自体公知の
医薬品スクリーニングシステムを利用して構築可能であ
る。本発明の同定方法によれば、例えば、新規ＵＳＰま
たは該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチ
ドの立体構造に基づくドラッグデザインによる拮抗剤の
選別、蛋白質合成系を利用した遺伝子レベルでの発現調
整剤の選別、抗体を利用した抗体認識物質の選別等が可
能である。

【００４３】例えば、本発明に係るポリペプチドまたは
ペプチドを用いて、被検化合物とこれらポリペプチドま
たはペプチドとの間の相互作用を可能にする条件を選択
し、該条件下でこれらポリペプチドまたはペプチドと該
化合物とを接触させて、その相互作用により生じるシグ
ナルの存在若しくは不存在または変化を検出することに
より、新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと同等の生理活性を有
する上記ポリペプチドの生理活性、例えば脱ユビキチン
化活性を増強する化合物または阻害する化合物を同定可
能である。

【００４４】また、新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと同等の
生理活性を有する上記ポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドと被検化合物との間の相互作用を可能にする
条件を選択し、該条件下で該ポリヌクレオチドと該化合
物とを接触させて、その相互作用により生じるシグナル
の存在若しくは不存在または変化を検出することによ
り、該ポリヌクレオチドに結合する化合物を同定可能で
ある

【００４５】さらにまた、本発明に係る形質転換体を用
いて、被検化合物または上記同定された化合物とを適当
な条件下で接触させ、本発明に係る新規ＵＳＰまたは該
ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの発
現の有無または変化を検出することにより、これらポリ
ペプチドの発現を阻害する化合物または促進する化合物
を同定可能である。これらポリペプチドの発現の有無ま
たは変化の検出は、簡便には、発現されるポリペプチド
の生理活性、例えば脱ユビキチン化活性を指標にして実
施できる。脱ユビキチン化活性の測定は、例えば人工基
質Ｕｂ−Ｒ−ＧＳＴの分解により生じるＧＳＴの測定に
より可能である。このような同定方法においては、これ
らポリペプチドの生理活性、例えば脱ユビキチン化活性
を阻害する化合物または増強する化合物も同定できる。
あるいは、新規ＵＳＰの発現の有無または変化を検出す
るために、検出のためのシグナルまたはマーカーを使用
する自体公知の系を導入し、このシグナルまたはマーカ
ーの存在若しくは不存在または変化を検出してもよい。
ここでシグナルとは、そのもの自体がその物理的または
化学的性質により直接検出され得るものを指し、マーカ
ーとはそのものの物理的または生物学的性質を指標とし
て間接的に検出され得るものを指す。シグナルとしては
ルシフェラーゼやグリーン蛍光蛋白質（ＧＦＰ）等、マ
ーカーとしては、レポーター遺伝子、例えばクロラムフ
ェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝
子等、または検出用のタグ、例えば６×Ｈｉｓタグ等、
公知のものが利用できる。これらのシグナルまたはマー
カーを組み込んだベクターを作製し、該ベクターを宿主
細胞に導入して形質転換体を作製すればよい。これらの
シグナルまたはマーカーの検出方法は、当業者には周知
のものである。

【００４６】具体的には、例えば、後述する実施例に準
じて、新規ＵＳＰと基質とを例えば大腸菌で共遺伝子発
現させて該ＵＳＰの脱ユビキチン化活性を測定する実験
系において、ここに被検化合物を加えることにより、該
ＵＳＰの発現または生理活性を阻害する、促進する、ま
たは増強する化合物を同定できる。この実験系は、同定
方法の１つを説明するものであり、本発明に係る化合物
の同定方法はこれに限定されない。

【００４７】（化合物）上記方法により同定された化合
物は、新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと同等の生理活性を有
する上記ポリペプチドの活性、例えば脱ユビキチン化活
性の阻害剤、拮抗剤、または増強剤の候補化合物として
利用可能である。また、遺伝子レベルでの新規ＵＳＰま
たは該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチ
ドの発現に関する阻害剤または促進剤の候補化合物とし
ても利用可能である。これらの候補化合物は、新規ＵＳ
Ｐまたは該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペ
プチドの発現や生理活性、例えば脱ユビキチン化活性の
増加、減少または欠失等に起因する各種病的症状の防止
効果および／または治療効果を期待できる。後述するよ
うに、ＵＳＰと神経変性疾患や筋萎縮症との関連が報告
されていることから（非特許文献２２）、これらの疾患
の防止剤および／または治療剤として使用できる。

【００４８】（医薬組成物）かくして選別された候補化
合物は、生物学的有用性と毒性のバランスを考慮してさ
らに選別することにより、医薬組成物として調製可能で
ある。また本発明に係る新規ＵＳＰおよびその由来物か
らなるポリペプチドまたはペプチド、本発明に係るポリ
ヌクレオチドまたはその相補鎖、該ポリヌクレオチドま
たはその相補鎖を含むベクター、並びに新規ＵＳＰおよ
びその由来物からなるポリペプチドまたはペプチドを免
疫学的に認識する抗体は、それ自体を新規ＵＳＰまたは
該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの
発現や生理活性、例えば脱ユビキチン化活性の増加、減
少または欠失等に起因する各種病的症状の防止および／
または治療に使用できる。すなわち本発明は、これらを
単独または複数組み合わせて使用することにより、これ
らのうち少なくとも１つを含有する医薬組成物を提供す
る。なお、製剤化に当たっては、自体公知のポリペプチ
ド、ペプチド、蛋白質、ポリヌクレオチド、抗体等各対
象に応じた製剤化手段を導入すればよい。

【００４９】本発明に係る新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと
同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの発現および
／またはその生理活性の減少や欠失等に起因する異常な
症状の治療には、１つの方法として当該ＵＳＰ自体また
は当該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチ
ドの生理活性を増強する化合物（増強剤）および／また
は当該ＵＳＰをコードする遺伝子の発現を促進する治療
上有効量の化合物（促進剤）を医薬上許容される担体と
ともに投与し、そのことにより異常な症状を改善するこ
とを特徴とする方法が挙げられる。あるいは、遺伝子治
療を用いて、対象中の細胞内で新規ＵＳＰまたは該ＵＳ
Ｐと同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの活性を
生成なさしめてもよい。上記ポリヌクレオチドを利用し
た遺伝子治療は、公知の方法が利用できるが、例えば、
上記のごとく本発明に係るポリヌクレオチドを組み入れ
た複製欠損レトロウイルスベクターを作製して遺伝子治
療に利用すればよい。また、例えば、蛋白質をコードし
ているＤＮＡまたはＲＮＡを用いて、例えばレトロウイ
ルスプラスミドベクターを用いることによりエクスビボ
（ｅｘ ｖｉｖｏ）において対象由来の細胞を処理し、
次いで、細胞を対象に導入することもできる。

【００５０】本発明に係る新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと
同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの発現および
／またはその生理活性が過剰な場合、有効量の上記阻害
剤化合物を医薬上許容される担体とともに対象に投与し
て新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと同等の生理活性を有する
上記ポリペプチドの生理活性を阻害し、そのことにより
異常な症状を改善することもできる。例えば新規ＵＳＰ
の部分ポリペプチドまたはペプチドであって新規ＵＳＰ
の生理活性、例えば脱ユビキチン化活性を阻害するもの
を、新規ＵＳＰの拮抗剤として使用できる。具体的に
は、例えば配列表の配列番号３に記載のポリペプチドを
医薬上許容される担体とともに対象に投与することによ
り、新規ＵＳＰの生理活性を阻害できる。あるいは、新
規ＵＳＰの部分ポリペプチドまたはペプチドであって新
規ＵＳＰの生理活性、例えば脱ユビキチン化活性を阻害
するもの、例えば配列番号３に記載のポリペプチドを、
該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを用いて
遺伝子治療により、上記のように対象中の細胞内で生成
なさしめてもよい。これにより新規ＵＳＰまたは新規Ｕ
ＳＰと同等の生理活性を有する上記ポリペプチドの発現
および／またはその生理活性の過剰に起因する疾患を防
止および／または治療できる。該拮抗剤は、上記医薬組
成物の一成分として使用することもできる。

【００５１】さらに、発現ブロック法を用いて内在性の
新規ＵＳＰまたは該ＵＳＰと同等の生理活性を有する上
記ポリペプチドをコードしている遺伝子の発現を阻害し
てもよい。細胞内で生成させた、あるいは別個に投与さ
れた当該遺伝子のアンチセンス配列を使用して当該遺伝
子の発現を阻害できる。これらのオリゴヌクレオチド
は、上記本発明に係るポリヌクレオチドを基にして設計
し合成できる。当該オリゴヌクレオチドはそれ自体投与
することができ、あるいは関連オリゴマーをインビボで
発現させることもできる。

【００５２】投与形態は、全身投与であっても局所投与
であってもよい。全身投与の好ましい一態様は、注射、
例えば静脈注射が挙げられる。皮下、筋肉内または腹腔
内のような他の注射経路を用いることもできる。投与の
別の態様は、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方
されるならば、経口投与も可能である。さらに、胆汁酸
塩、フシジン酸、または他の界面活性剤のような浸透剤
を用いる経粘膜または経皮投与を用いることもできる。
局所的な投与のときは、膏薬、パスタ、ゲル等の形態を
利用できる。

【００５３】必要な用量範囲は、新規ＵＳＰおよびその
由来物からなるポリペプチドまたはペプチド、これらを
コードするポリヌクレオチドまたはその相補鎖、該ポリ
ヌクレオチドまたはその相補鎖を含むベクター、新規Ｕ
ＳＰおよびその由来物からなるポリペプチドまたはペプ
チドを免疫学的に認識する抗体、上記化合物、上記拮抗
剤、および上記医薬組成物の有効性、投与経路、処方の
性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断によ
る。具体的には、適当な用量は、例えば対象の体重１ｋ
ｇあたり０．１乃至１００μｇの範囲である。しかしな
がら、当該分野においてよく知られた最適化のための一
般的な常套的実験を用いてこれらの用量の変更を行うこ
とができる。

【００５４】製剤化にあたっては、例えばペプチド、蛋
白質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、抗体、
化合物等各対象の物性に応じた公知の製剤化手段を導入
すればよい。具体的には、例えば散剤、丸剤、錠剤、カ
プセル製剤、水溶液製剤、エタノール溶液製剤、リポソ
ーム製剤、脂肪乳剤、シクロデキストリン等の包接体等
の製剤化方法が利用できる。

【００５５】散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤は、ラ
クトース、グルコース、シュークロース、マンニトール
等の賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、マグ
ネシウムステアレート、タルク等の滑沢剤、ポリビニル
アルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン
等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリ
ン等の可塑剤等を用いて製造できる。錠剤やカプセルを
製造するには、固体の製薬担体が用いられる。

【００５６】懸濁剤は、水、シュークロース、ソルビト
ール、フラクトース等の糖類、ＰＥＧ等のグリコール
類、油類を使用して製造できる。

【００５７】注射用の溶液は、塩溶液、グルコース溶
液、または塩水とグルコース溶液の混合物からなる担体
を用いて調製可能である。

【００５８】リポソーム化は、例えばリン脂質を有機溶
媒（クロロホルム等）に溶解した溶液に、当該物質を溶
媒（エタノール等）に溶解した溶液を加えた後、溶媒を
留去し、これにリン酸緩衝液を加え、振とう、超音波処
理および遠心処理した後、上清をろ過処理して回収する
ことにより行い得る。

【００５９】脂肪乳剤化は、例えば当該物質、油成分
（大豆油、ゴマ油、オリーブ油等の植物油、ＭＣＴ
等）、乳化剤（リン脂質等）等を混合、加熱して溶液と
した後に、必要量の水を加え、乳化機（ホモジナイザ
ー、例えば高圧噴射型や超音波型等）を用いて、乳化・
均質化処理して行い得る。また、これを凍結乾燥化する
ことも可能である。なお、脂肪乳剤化するとき、乳化助
剤を添加してもよく、乳化助剤としては、例えばグリセ
リンや糖類（例えばブドウ糖、ソルビトール、果糖等）
が例示される。

【００６０】シクロデキストリン包接化は、例えば当該
物質を溶媒（エタノール等）に溶解した溶液に、シクロ
デキストリンを水等に加温溶解した溶液を加えた後、冷
却して析出した沈殿をろ過し、滅菌乾燥することにより
行い得る。この際、使用されるシクロデキストリンは、
当該物質の大きさに応じて、空隙直径の異なるシクロデ
キストリン（α、β、γ型）を適宜選択すればよい。

【００６１】ＵＳＰの発現や生理活性の増加、減少、ま
たは欠失等の機能障害は、ＵＳＰが係るユビキチンシス
テムの異常をきたし、ひいては病的症状を引き起こす。
例えば、ＵＳＰの異常と発癌や神経変性疾患との関連が
示唆されている（非特許文献１７〜１９）。ＵＳＰは染
色体構造の維持にも関与しており、ユビキチン化された
ヒストンの脱ユビキチン化が染色体凝集に重要であるこ
とが知られている （非特許文献２０）し、ＵＳＰファ
ミリーの１つであるＵＳＰ１６がＨ２Ａを脱ユビキチン
化することが報告されている（非特許文献２１）。ま
た、アルツハイマー病やパーキンソン病で観察される蛋
白質凝集体の多くが抗ユビキチン抗体に反応することか
らも（非特許文献１７）、神経変性疾患とＵＳＰの機能
異常の関係が示唆される。また、ユビキチン経路が筋萎
縮症と関連していることについても報告されている（非
特許文献２２）。上記本発明に係るＵＳＰは、脳および
骨格筋、殊に骨格筋での発現が比較的高く、当該ＵＳＰ
が神経変性疾患や筋萎縮症と関連している可能性が高
い。従って、本発明は、ＵＳＰの関与する生体機能の解
明、例えば発癌プロセスの解明、神経変性疾患、例えば
アルツハイマー病やパーキンソン病等の解明、および筋
萎縮症の解明、並びにそれらの防止剤および／または治
療剤の開発、およびそれらの診断手段として用いる測定
法の開発を可能とするものであり、非常に有用である。

【００６２】（診断のための測定方法および試薬）本発
明に係る新規ＵＳＰおよびその由来物からなるポリペプ
チドまたはペプチド、本発明に係るポリヌクレオチドお
よびその相補鎖、並びに当該ＵＳＰおよびその由来物か
らなるポリペプチドまたはペプチドを免疫学的に認識す
る抗体は、診断マーカーや試薬等として、本発明に係る
新規ＵＳＰおよびその由来物であるポリペプチド、また
はこれらをコードするポリヌクレオチドを定量的にまた
は定性的に測定する方法に使用できる。また本発明は、
これらのうちの１種またはそれ以上を充填した、１個ま
たはそれ以上の容器を含んでなる試薬キットも提供す
る。当該試薬キットは、上記同定方法および上記測定方
法に使用できる。製剤化にあたっては、自体公知のポリ
ペプチドまたはペプチド、蛋白質、ポリヌクレオチド、
または抗体等それぞれに応じた製剤化手段を導入すれば
よい。上記測定方法によれば、新規ＵＳＰの発現や活性
の増加、減少または欠失等が関連する各種病的症状診断
が可能になる。

【００６３】本発明に係る新規ＵＳＰおよびその由来物
からなるペプチドまたはポリペプチドの発現または生理
活性の異常に起因する疾患の診断手段は、例えば当該Ｕ
ＳＰをコードしている核酸との相互作用や反応性を利用
して、相応する核酸の存在量を決定すること、および／
または当該ＵＳＰについて個体中の生体内分布を決定す
ること、および／または当該ＵＳＰの存在、個体由来の
試料中の存在量を決定することによって行われる。詳し
くは、新規ＵＳＰを診断マーカーとして検定するのであ
る。試料中の当該ＵＳＰの検出またはその存在量の決定
に用いることができる測定法は当業者に周知である。こ
のような測定法には、ラジオイムノアッセイ、競争結合
アッセイ、ウェスタンブロット分析、およびＥＬＩＳＡ
アッセイ等がある。また、本発明に係る新規ＵＳＰをコ
ードするポリヌクレオチドの検出法および定量法として
は、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴＰＣＲ、ＲＮアーゼ保
護、ノーザンブロッティング、およびその他のハイブリ
ダイゼーション法を用いてＲＮＡレベルで測定すること
ができる。

【００６４】測定される試料として、個体由来の細胞、
例えば血液、尿、唾液、髄液、組織生検または剖検材料
等を挙げることができる。また、測定される核酸は、上
記各試料から自体公知の核酸調製法により得られる。核
酸は、ゲノムＤＮＡを検出に直接使用してもよく、ある
いは分析前にＰＣＲまたはその他の増幅法を用いること
により酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡ
を同様に用いてもよい。正常遺伝子型との比較におい
て、増幅生成物のサイズ変化により欠失および挿入を検
出することができる。増幅ＤＮＡを標識した上記ＵＳＰ
をコードするＤＮＡにハイブリダイゼーションさせるこ
とにより点突然変異を同定することができる。

【００６５】上記測定により本発明に係るＵＳＰおよび
該ＵＳＰをコードするＤＮＡの変異、減少、または増加
を検出することにより、当該ＵＳＰの異常に起因する疾
患、例えば、癌あるいは神経変性疾患等、例えばアルツ
ハイマー病やパーキンソン病等の診断が可能になる。

【００６６】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、本発明は下記の実施例に限定されない。

【実施例１】（新規ＵＳＰ遺伝子の単離・同定）本発明
に係るＵＳＰ遺伝子は、かずさＤＮＡ研究所のヒト長鎖
ｃＤＮＡ解析情報データベースから、バイオインフォー
マティクス（ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）により、
新規プロテアーゼ候補遺伝子として抽出した。本遺伝子
の３´末端領域の塩基配列はｃＤＮＡクローンＫＩＡＡ
１０５７（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＡＢ０
２８９８０）と共通の配列であった。ｃＤＮＡクローン
ＫＩＡＡ１０５７は、９７７個のアミノ酸をコードする
領域を含む５６１８ｂｐを含有するクローンであり、Ｕ
ＳＰに特徴的なモチーフであるＣｙｓドメイン（Ｃｙｓ
−ｂｏｘ）（Ｇ−［ＬＩＶＭＦＹ］−ｘ（１，３）−
［ＡＧＣ］−［ＮＡＳＭ］−ｘ−Ｃ−［ＦＹＷ］−［Ｌ
ＩＶＭＦＣ］−［ＮＳＴ］−［ＳＡＣＶ］−ｘ−［ＬＩ
ＶＭＳ］−Ｑ）とＨｉｓドメイン（Ｈｉｓ−ｂｏｘ）
（Ｙ−ｘ−Ｌ−ｘ−［ＳＡＧ］−［ＬＩＶＭＦＴ］−ｘ
（２）−Ｈ−ｘ−Ｇ−ｘ（４，５）−Ｇ−Ｈ−Ｙ）およ
びアスパラギン酸（Ａｓｐ）ドメインを有する。本発明
に係る遺伝子は、Ｃｙｓドメイン内において既知の当該
ドメイン配列と一致していないアミノ酸残基が１つ存在
する。

【００６７】ｃＤＮＡクローンＫＩＡＡ１０５７はその
ＯＲＦ内の５′末端領域が欠失してクローニングされて
いると推定されたため、ＫＩＡＡ１０５７の塩基配列を
基に、さらに上記データベースを検索した。その結果、
ＫＩＡＡ１０５７の塩基配列を含むｃＤＮＡクローンｂ
ｆ０４２７４を見い出した。

【００６８】ｂｆ０４２７４は７７４４ｂｐからなるｃ
ＤＮＡである。その塩基配列の第３８９位〜第３９１位
に存在する最初のＡＴＧは、その直前にコザックのコン
センサス配列を持つことから、翻訳開始コドンと予測さ
れた。すなわち、ｂｆ０４２７４は、１５５６個のアミ
ノ酸残基からなるポリペプチドをコードする翻訳領域
（ＣＤＳ）をその塩基配列の第３８９位〜第５０５９位
に含む。ｂｆ０４２７４の塩基配列を配列表の配列番号
２に、ｂｆ０４２７４がコードするアミノ酸配列を配列
番号１に記載した。ＫＩＡＡ１０５７はｂｆ０４２７４
の塩基配列のうち第２１２４位から第７７４１位までの
塩基配列に相当し、ＫＩＡＡ１０５７の推定アミノ酸配
列は、ｂｆ０４２７４がコードするアミノ酸配列の第５
８０番目から第１５５６番目のアミノ酸配列に相当す
る。Ｃｙｓ−ｂｏｘおよびＨｉｓ−ｂｏｘは、ｂｆ０４
２７４がコードするアミノ酸配列の第６２６番目〜第６
４１番目および第８９０番目〜第９０７番目のアミノ酸
配列に存在する。

【００６９】

【実施例２】（新規ＵＳＰの発現）実施例１で単離・同
定した新規ＵＳＰをコードするｃＤＮＡクローンｂｆ０
４２７４発現プラスミドをゲイトウェイ^ＴＭ＿クローニ
ング＿テクノロジー（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ社）を用いて作製した。まず、ｂｆ０４２７４クロ
ーン（ｐＢＣ ＳＫ^＋のＨｉｎｄＩＩＩ−ＳａｃＩ部位
に挿入）を鋳型として、アドバンテージ−ＨＦ２＿ＰＣ
Ｒキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）あるいはＥｘｐａｎｄ
＿ｈｉｇｈ−ｆｉｄｅｌｉｔｙ＿ＰＣＲ＿ｓｙｓｔｅｍ
（Ｒｏｃｈｅ社）を用いて推定ＣＤＳ領域（配列番号２
に記載の塩基配列の第３８９位〜第５０５９位）を２段
階ＰＣＲで増幅した後、ＢＰクロナーゼエンザイム（Ｂ
Ｐ ｃｌｏｎａｓｅ ｅｎｚｙｍｅ）を用いた組換え反
応によりエントリーベクター（ｐＤＯＮＲ２０１）に挿
入し、ｐＤＯＮＲ−ｂｆ０４２７４を作製した。なお、
プライマーは、１段階目のＰＣＲ用にｂｆ０４２７４−
ＡｔｔＢ（配列番号５）とＰｒＤＯＮＲ１０５７（−）
（配列番号６）とを、２段階目のＰＣＲ用にＡｔｔＢ１
アダプター プライマー（配列番号７）と上記Ｐｒ−
ＤＯＮＲ１０５７（−）とを使用した。次に、ｐＤＯＮ
Ｒ−ｂｆ０４２７４とＮ−末端Ｈｉｓ−タグ付加蛋白質
（Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ ｐｒ
ｏｔｅｉｎ）発現用ベクターであるｐＤＥＳＴ１７とを
用いて、ＬＲクロナーゼエンザイムによる組換え反応に
よりＨｉｓ−タグ付加ｂｆ０４２７４発現プラスミド
（ｐＨｉｓ−０４２７４）を作製した。発現プラスミド
は、ＮａＣｌにより発現誘導が可能なＥ．ｃｏｌｉ Ｂ
Ｌ２１−ＳＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
社）に導入した。ＣＤＳの塩基配列が正しく挿入されて
いることは、シーケンスを行なって確認した。シーケン
ス反応はビッグダイ＿ターミネーター＿サイクル＿シー
ケンシング＿ＦＳ＿レディ＿リアクション＿キット（Ｂ
ｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｉｎｇ ＦＳ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａｃｔｉｏ
ｎ Ｋｉｔ（ＰＥ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、
泳動および解析はＡＢＩ ＰＲＩＳＭ３１０を用いて実
施した。

【００７０】上記作製した発現プラスミドを用いて大腸
菌でｂｆ０４２７４の発現誘導を行った。ＬＢＯＮ／Ａ
ｍｐ培地（５０ｍｇ／ｍｌのアンピシリンを含み、Ｎａ
Ｃｌを含まないＬＢ培地）に１／１０量の大腸菌前培養
液を接種し、３７℃にてＯＤ _６００が約１．０前後にな
るまで培養後、ＮａＣｌを終濃度０．３Ｍになるように
添加した。さらに約４〜５時間培養後、菌体を回収し
た。菌体をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に懸濁した
後に超音波処理し、遠心処理により上清を回収して抽出
液とした。該抽出液を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分
離後、抗Ｈｉｓ−タグ抗体（Ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ^ＴＭ抗
体、ＱＩＡＧＥＮ社）を用いてイムノブロッティングを
行った。その結果、推定アミノ酸配列から予測される分
子量と同じ分子量の蛋白質（１８６．８ｋＤａ）を検出
した。発現蛋白質はその多くが不溶性画分に認められ、
可溶性画分への分布は少量であった。なお、検出にはＥ
ＣＬウエスタンブロッティング検出キット（ｗｅｓｔｅ
ｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉ
ｔ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏ
ｔｅｃｈ社）を使用した。

【００７１】

【実施例３】（ｂｆ０４２７４の脱ユビキチン化活性）
ｂｆ０４２７４がコードする蛋白質について、基質との
共発現系で、その脱ユビキチン化活性を検討した。この
実験系は、酵素発現用プラスミドが有するｐＢＲ３２２
系のｏｒｉとコンパティビリティを示すｐ１５Ａのｏｒ
ｉを有する基質発現用プラスミドを使用することによ
り、酵素と基質を同一菌体内で共発現させるものである
（「アーチーブス オブ バイオケミストリー アンド
バイオフィジックス（Ａｒｃｈｉｅｖｅｓ Ｏｆ Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＡｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃ
ｓ）」，２０００年，第３７９巻，ｐ．１９８−）。

【００７２】まず、共発現用の各種基質発現プラスミド
を構築した。基質は、ヒトユビキチンのＣ末端にグルタ
チオン＿Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を結合させ
た人工基質Ｕｂ−ＧＳＴを用いた。ｐＴＶ１１８Ｎ／Ｕ
ｂ−ＧＳＴを鋳型としてＵｂ−ＧＳＴコード領域をＰＣ
Ｒにより増幅させた後、ゲートウェイ^ＴＭ＿クローニン
グ＿テクノロジーを用いて大腸菌発現用ベクター、ｐＤ
ＥＳＴ１４に挿入し、ｐＤＥＳＴ１４Ｕｂ−ＧＳＴを作
製した。次に、ｐＤＥＳＴ１４Ｕｂ−ＧＳＴからＴ７プ
ロモーターおよびＵｂ−ＧＳＴコード領域を含む領域を
ＳｐｈＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ処理により切り出し、ｐ
１５Ａ由来のｏｒｉを持つｐＡＣＹＣ１８４（ニッポン
ジーン社）のＳｐｈＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ間に組み込み、
ｐＡＣＵｂ−Ｍ−ＧＳＴを作製した。これを共発現用Ｕ
ｂ−Ｍ−ＧＳＴ発現プラスミドとした。次に、ｐＡＣＵ
ｂ−Ｍ−ＧＳＴをＳａｌＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで処理
し、Ｔ７プロモーターおよびＵｂ−ＧＳＴコード領域を
含む領域をｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ ＳＫ（−）
（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）のＳａｌＩ−ＨｉｎｄＩＩ
Ｉ間に組み込み、ｐＢＳＵｂＧＳＴを作製した。さら
に、ｐＢＳＵｂＧＳＴを鋳型として、クイックチェンジ
サイト−ディレクティド＿ミュータジェネシス＿キッ
ト（ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅ
ｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ）（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ社）を用いてＧＳＴのＮ末端のアミノ酸に対応
するコドンをＡＴＧ（メチオニン：Ｍ）から、ＣＣＧ
（プロリン：Ｐ）、ＡＴＣ（イソロイシン：Ｉ）、また
はＣＧＴ（アルギニン：Ｒ）に変換したｐＢＳＵｂ−Ｐ
−ＧＳＴ、ｐＢＳＵｂ−Ｉ−ＧＳＴ、またはｐＢＳＵｂ
−Ｒ−ＧＳＴを作製した。コドンの変換は、シーケンシ
ングにより確認した。以下、Ｕｂ−Ｍ−ＧＳＴ、Ｕｂ−
Ｒ−ＧＳＴ、Ｕｂ−Ｐ−ＧＳＴ、およびＵｂ−Ｉ−ＧＳ
Ｔを総称するときは、Ｕｂ−Ｘ−ＧＳＴという。次に、
各ｐＢＳＵｂ−Ｘ−ＧＳＴをＨｉｎｄＩＩＩおよびＳｐ
ｈＩで処理し、Ｔ７プロモーターおよびＵｂ−Ｘ−ＧＳ
Ｔコード領域を含む領域をｐＡＣＹＣ１８４のＨｉｎｄ
ＩＩＩ−ＳｐｈＩ間に組み込み、各共発現用Ｕｂ−Ｘ−
ＧＳＴ発現プラスミド、ｐＡＣＵｂ−Ｘ−ＧＳＴを作製
した。作製した４種類のｐＡＣＵｂ−Ｘ−ＧＳＴはＥ．
ｃｏｌｉＢＬ２１−ＳＩに導入し、塩化カルシウム法に
よりコンピテントセル化した。

【００７３】各ｐＡＣＵｂ−Ｘ−ＧＳＴをそれぞれ保持
するＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１−ＳＩコンピテントセル
に、実施例２で作製したプラスミドｐＨｉｓ−０４２７
４を遺伝子導入した。このとき、一部のコンピテントセ
ルには、ｐＨｉｓ−０４２７４の代わりに、陽性コント
ロールとして既知ユビキチン特異プロテアーゼ１５（以
下、ＵＳＰ１５と略称する）ｃＤＮＡ（ＫＩＡＡ０５２
９クローン）を鋳型として実施例２に記載の方法で作製
したＨｉｓ−タグ付加ＵＳＰ１５発現プラスミド（ｐＨ
ｉｓ−ＵＳＰ１５）、または陰性コントロールとしてＨ
ｉｓ−タグ付加ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）発現プラスミ
ド（ｐＨｉｓ−Ｌｕｃ）をそれぞれ遺伝子導入した。該
遺伝子導入されたコンピテントセルを、５０ｍｇ／ｍｌ
アンピシリンおよび３４ｍｇ／ｍｌクロラムフェニコー
ルを含むＬＢＯＮ（ＮａＣｌを含まないＬＢ培地）プレ
ート上にて培養し、各種共発現株を選択して得た。な
お、ｐＨｉｓ−ＵＳＰ１５の作製において、ＫＩＡＡ０
５２９はＵＳＰ１５のＮ末端３アミノ酸残基（ＭＡＥ）
が欠失していたため、ベイカーらの方法に従い（「ゲノ
ミクス（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）」，１９９９年，第５９
巻，ｐ．２６４−）、この３アミノ酸残基に対応するコ
ドンをプライマー内に設計し、完全なＣＤＳとした。ま
た、ｐＨｉｓ−Ｌｕｃは、ｐＧＬ３−Ｌｕｃベクター
（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を鋳型として、実施例２と同様に
ゲートウェイ^ＴＭ＿クローニング＿テクノロジーを用い
て作製した。

【００７４】上記各種共発現株を５０ｍｇ／ｍｌアンピ
シリンおよび３４ｍｇ／ｍｌクロラムフェニコールを含
むＬＢＯＮ培地中でＯＤ_６００が約０．５〜１．２にな
るまで３７℃にて培養後、ＮａＣｌを終濃度０．３Ｍに
なるように添加した。さらに約４または５時間培養後、
菌体を回収した。該菌体を培養液の１／１０量の５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．６／５ｍＭ エチレン
ジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）／１ｍＭ ジチオスレイト
ール（ＤＴＴ）に懸濁後、超音波処理により破壊し、遠
心処理により上清を回収して大腸菌抽出液を調製した。
該抽出液を１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、１次
抗体として抗ＧＳＴ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）、２次抗体としてホー
スラディシュ＿パーオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗ヤギ
抗体（Ａｌｐｈａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ社）を用いてイムノブロッティングを
行い、Ｕｂ−Ｘ−ＧＳＴおよび遊離したＧＳＴを検出し
た。なお、検出はＥＣＬウエスタンブロッティング検出
キットを使用した。

【００７５】その結果、図１に示すように、プラスミド
ｐＨｉｓ−０４２７４とＵｂ−Ｒ−ＧＳＴとを共発現さ
せた大腸菌から調製した抽出液では、Ｕｂ−Ｒ−ＧＳＴ
以外に、Ｕｂ−Ｒ−ＧＳＴからＵｂが加水分解されて生
じたＧＳＴが検出された。しかし、Ｕｂ−Ｍ−ＧＳＴ、
Ｕｂ−Ｐ−ＧＳＴ、またはＵｂ−Ｉ−ＧＳＴとの共発現
系では、ＧＳＴが検出されなかった。一方、陽性コント
ロールであるＵＳＰ１５を、ｂｆ０４２７４の代わりに
基質と共発現させたときには上記４種類の基質のいずれ
に対しても脱ユビキチン化活性が認められたが、陰性コ
ントロールであるルシフェラーゼでは認められなかっ
た。

【００７６】このようにプラスミドｐＨｉｓ−０４２７
４により発現された蛋白質は、Ｕｂがアルギニン（Ｒ）
残基を介して蛋白質に結合している人工基質に対して基
質選択性を示した。既知ＵＳＰについて同様に基質選択
性を検討したが、Ｕｂ−Ｒ−ＧＳＴに対する基質選択性
を示すものは、本発明に係る新規ＵＳＰのみであった。
Ｕｂ−ＧＳＴは、Ｕｂが蛋白質（ＧＳＴ）とペプチド結
合していることから、前駆体Ｕｂモデルと考えられる。
ｂｆ−０４２７４がコードする蛋白質は、Ｕｂ−ＧＳＴ
を基質としてＵｂを解離するため、生体内において前駆
体ＵｂからのＵｂ生成に関与している可能性がある。

【００７７】

【実施例４】（ｂｆ−０４２７４がコードする蛋白質の
酵素活性部位の特定）ＵＳＰはシステインプロテアーゼ
の１つであり、Ｃｙｓ−ｂｏｘ内に存在するシステイン
残基が活性部位であると考えられている。そこで、ｂｆ
０４２７４がコードする蛋白質の推定活性残基である第
６３４番目のシステイン（Ｃ）をセリン（Ｓ）に置換し
た変異体（ｂｆ０４２７４^{Ｃ６３４Ｓ}）を作製した。ま
ず、第６３４番目のシステインをクイックチェンジ＿サ
イト−ディレクティド＿ミュータジェネシス＿キットを
用いてセリンに置換した。使用したプライマーは、第６
３４番目のシステインのコドンであるＴＧＴがセリンの
コドンであるＴＣＴに置換するように設計した（配列番
号８）。変異の導入をシーケンシングにて確認し、Ｈｉ
ｓ−タグ付加ｂｆ０４２７４^{Ｃ６３４Ｓ}発現プラスミ
ド、ｐＨｉｓ−０４２７４Ｍｕｔを得た。シーケンス反
応はＣｙ５＿サーモシーケナーゼ＿ダイ＿サーミネータ
ー＿キット（ＴｈｅｒｍｏＳｅｑｕｅｎａｓｅ Ｄｙｅ
Ｔｈｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｋｉｔ）を用い、泳動およ
び解析はロング＿リード＿タワー（Ｌｏｎｇ Ｒｅａｄ
Ｔｏｗｅｒ）（いずれもＡｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いて実施した。

【００７８】ｐＨｉｓ−０４２７４Ｍｕｔ、実施例２ま
たは実施例３で作製したｐＨｉｓ−０４２７４、ｐＨｉ
ｓ−ＵＳＰ１５、あるいはｐＨｉｓ−Ｌｕｃをそれぞ
れ、実施例３と同様にｐＡＣＵｂ−Ｒ−ＧＳＴと共に大
腸菌で共発現させた。その結果、図２に示すように、ｂ
ｆ０４２７４を発現させたときに認められたＵｂ−Ｒ−
ＧＳＴに対する脱ユビキチン化活性が、ｂｆ０４２７４
^{Ｃ６３４Ｓ}においては消失していることが判明した。す
なわち、ｂｆ０４２７４がコードする蛋白質は、第６３
４番目のシステイン残基を活性部位とするシステインプ
ロテアーゼであることが確認された。

【００７９】

【実施例５】（ＫＩＡＡ１０５７−１がコードする遺伝
子産物の脱ユビキチン化活性の検討）ｂｆ０４２７４の
Ｎ末端側を５２１アミノ酸残基（配列番号３）欠失させ
たポリペプチドをコードするＫＩＡＡ１０５７−１を含
むプラスミドを実施例２と同様の方法で作製し、実施例
３と同様の方法で基質と共に大腸菌で共発現させてその
脱ユビキチン化活性を検討した。その結果、ＫＩＡＡ１
０５７−１は、ＵＳＰファミリーの特徴であるＣｙｓ−
ＢｏｘおよびＨｉｓ−Ｂｏｘを保有しているが、４種類
の人工基質それぞれとの共発現系において、脱ユビキチ
ン化活性を示さなかった（図３）。以上の結果から、ｂ
ｆ０４２７４がコードする蛋白質のＮ末端側には、文献
（非特許文献１５）に記載されたＵＳＰと同様に、基質
の認識に関与する部位が存在すると考えられる。

【００８０】

【発明の効果】かずさＤＮＡ研究所のヒト長鎖ｃＤＮＡ
解析情報データベースから、バイオインフォーマティク
ス（ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）により、新規プロ
テアーゼ候補遺伝子としてｂｆ０４２７４を抽出し、本
遺伝子の遺伝子産物がユビキチン化蛋白質を脱ユビキチ
ン化するユビキチン特異プロテアーゼ（ＵＳＰ）の１つ
であることを見い出した。さらに、本発明に係るＵＳＰ
は、Ｎ末端から５２１アミノ酸残基を欠失させると脱ユ
ビキチン化活性が消失することを見い出した。本発明
は、ＵＳＰの関与する生体機能の解明、例えば、発癌プ
ロセスの解明、筋萎縮症、および神経変性疾患、例えば
アルツハイマー病やパーキンソン病等の解明、並びにそ
れらの防止、治療、および診断を可能にするものであ
り、非常に有用である。

【００８１】

【配列表フリーテキスト】

配列番号５：プライマーとして用いるために設計された
オリゴヌクレオチド。 配列番号６：プライマーとして用いるために設計された
オリゴヌクレオチド。 配列番号７：プライマーとして用いるために設計された
オリゴヌクレオチド。 配列番号８：プライマーとして用いるために設計された
オリゴヌクレオチド。

【００８２】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> DAIICHI PHARMACEUTICAL CO., LTD. KAZUSA DNA RESEARCH INSTITUTE <120> A Novel ubiquitin specific protease <130> NP02-1095 <140> <141> <150> JP P2001-301800 <151> 2001-09-28 <160> 8 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1556 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Glu Gln Glu Lys Ser Leu Pro Gly Val Val Met Ala Leu Val Cys 1 5 10 15 Asn Val Phe Asp Met Leu Tyr Gln Leu Ala Asn Leu Glu Glu Pro Arg 20 25 30 Ile Thr Leu Arg Val Arg Lys Leu Leu Leu Leu Ile Pro Thr Asp Pro 35 40 45 Ala Ile Gln Glu Ala Leu Asp Gln Leu Asp Ser Leu Gly Arg Lys Lys 50 55 60 Thr Leu Leu Ser Glu Ser Ser Ser Gln Ser Ser Lys Ser Pro Ser Leu 65 70 75 80 Ser Ser Lys Gln Gln His Gln Pro Ser Ala Ser Ser Ile Leu Glu Ser 85 90 95 Leu Phe Arg Ser Phe Ala Pro Gly Met Ser Thr Phe Arg Val Leu Tyr 100 105 110 Asn Leu Glu Val Leu Ser Ser Lys Leu Met Pro Thr Ala Asp Asp Asp 115 120 125 Met Ala Arg Ser Cys Ala Lys Ser Phe Cys Glu Asn Phe Leu Lys Ala 130 135 140 Gly Gly Leu Ser Leu Val Val Asn Val Met Gln Arg Asp Ser Ile Pro 145 150 155 160 Ser Glu Val Asp Tyr Glu Thr Arg Gln Gly Val Tyr Ser Ile Cys Leu 165 170 175 Gln Leu Ala Arg Phe Leu Leu Val Gly Gln Thr Met Pro Thr Leu Leu 180 185 190 Asp Glu Asp Leu Thr Lys Asp Gly Ile Glu Ala Leu Ser Ser Arg Pro 195 200 205 Phe Arg Asn Val Ser Arg Gln Thr Ser Arg Gln Met Ser Leu Cys Gly 210 215 220 Thr Pro Glu Lys Ser Ser Tyr Arg Gln Leu Ser Val Ser Asp Arg Ser 225 230 235 240 Ser Ile Arg Val Glu Glu Ile Ile Pro Ala Ala Arg Val Ala Ile Gln 245 250 255 Thr Met Glu Val Ser Asp Phe Thr Ser Thr Val Ala Cys Phe Met Arg 260 265 270 Leu Ser Trp Ala Ala Ala Ala Gly Arg Leu Asp Leu Val Gly Ser Ser 275 280 285 Gln Pro Ile Lys Glu Ser Asn Ser Leu Cys Pro Ala Gly Ile Arg Asn 290 295 300 Arg Leu Ser Ser Ser Gly Ser Asn Cys Ser Ser Gly Ser Glu Gly Glu 305 310 315 320 Pro Val Ala Leu His Ala Gly Ile Cys Val Arg Gln Gln Ser Val Ser 325 330 335 Thr Lys Asp Ser Leu Ile Ala Gly Glu Ala Leu Ser Leu Leu Val Thr 340 345 350 Cys Leu Gln Leu Arg Ser Gln Gln Leu Ala Ser Phe Tyr Asn Leu Pro 355 360 365 Cys Val Ala Asp Phe Ile Ile Asp Ile Leu Leu Gly Ser Pro Ser Ala 370 375 380 Glu Ile Arg Arg Val Ala Cys Asp Gln Leu Tyr Thr Leu Ser Gln Thr 385 390 395 400 Asp Thr Ser Ala His Pro Asp Val Gln Lys Pro Asn Gln Phe Leu Leu 405 410 415 Gly Val Ile Leu Thr Ala Gln Leu Pro Leu Trp Ser Pro Thr Ser Ile 420 425 430 Met Arg Gly Val Asn Gln Arg Leu Leu Ser Gln Cys Met Glu Tyr Phe 435 440 445 Asp Leu Arg Cys Gln Leu Leu Asp Asp Leu Thr Thr Ser Glu Met Glu 450 455 460 Gln Leu Arg Ile Ser Pro Ala Thr Met Leu Glu Asp Glu Ile Thr Trp 465 470 475 480 Leu Asp Asn Phe Glu Pro Asn Arg Thr Ala Glu Cys Glu Thr Ser Glu 485 490 495 Ala Asp Asn Ile Leu Leu Ala Gly His Leu Arg Leu Ile Lys Thr Leu 500 505 510 Leu Ser Leu Cys Gly Ala Glu Lys Glu Met Leu Gly Ser Ser Leu Ile 515 520 525 Lys Pro Leu Leu Asp Asp Phe Leu Phe Arg Ala Ser Arg Ile Ile Leu 530 535 540 Asn Ser His Ser Pro Ala Gly Ser Ala Ala Ile Ser Gln Gln Asp Phe 545 550 555 560 His Pro Lys Cys Ser Thr Ala Asn Ser Arg Leu Ala Ala Tyr Glu Val 565 570 575 Leu Val Met Leu Ala Asp Ser Ser Pro Ser Asn Leu Gln Ile Ile Ile 580 585 590 Lys Glu Leu Leu Ser Met His His Gln Pro Asp Pro Ala Leu Thr Lys 595 600 605 Glu Phe Asp Tyr Leu Pro Pro Val Asp Ser Arg Ser Ser Ser Gly Phe 610 615 620 Val Gly Leu Arg Asn Gly Gly Ala Thr Cys Tyr Met Asn Ala Val Phe 625 630 635 640 Gln Gln Leu Tyr Met Gln Pro Gly Leu Pro Glu Ser Leu Leu Ser Val 645 650 655 Asp Asp Asp Thr Asp Asn Pro Asp Asp Ser Val Phe Tyr Gln Val Gln 660 665 670 Ser Leu Phe Gly His Leu Met Glu Ser Lys Leu Gln Tyr Tyr Val Pro 675 680 685 Glu Asn Phe Trp Lys Ile Phe Lys Met Trp Asn Lys Glu Leu Tyr Val 690 695 700 Arg Glu Gln Gln Asp Ala Tyr Glu Phe Phe Thr Ser Leu Ile Asp Gln 705 710 715 720 Met Asp Glu Tyr Leu Lys Lys Met Gly Arg Asp Gln Ile Phe Lys Asn 725 730 735 Thr Phe Gln Gly Ile Tyr Ser Asp Gln Lys Ile Cys Lys Asp Cys Pro 740 745 750 His Arg Tyr Glu Arg Glu Glu Ala Phe Met Ala Leu Asn Leu Gly Val 755 760 765 Thr Ser Cys Gln Ser Leu Glu Ile Ser Leu Asp Gln Phe Val Arg Gly 770 775 780 Glu Val Leu Glu Gly Ser Asn Ala Tyr Tyr Cys Glu Lys Cys Lys Glu 785 790 795 800 Lys Arg Ile Thr Val Lys Arg Thr Cys Ile Lys Ser Leu Pro Ser Val 805 810 815 Leu Val Ile His Leu Met Arg Phe Gly Phe Asp Trp Glu Ser Gly Arg 820 825 830 Ser Ile Lys Tyr Asp Glu Gln Ile Arg Phe Pro Trp Met Leu Asn Met 835 840 845 Glu Pro Tyr Thr Val Ser Gly Met Ala Arg Gln Asp Ser Ser Ser Glu 850 855 860 Val Gly Glu Asn Gly Arg Ser Val Asp Gln Gly Gly Gly Gly Ser Pro 865 870 875 880 Arg Lys Lys Val Ala Leu Thr Glu Asn Tyr Glu Leu Val Gly Val Ile 885 890 895 Val His Ser Gly Gln Ala His Ala Gly His Tyr Tyr Ser Phe Ile Lys 900 905 910 Asp Arg Arg Gly Cys Gly Lys Gly Lys Trp Tyr Lys Phe Asn Asp Thr 915 920 925 Val Ile Glu Glu Phe Asp Leu Asn Asp Glu Thr Leu Glu Tyr Glu Cys 930 935 940 Phe Gly Gly Glu Tyr Arg Pro Lys Val Tyr Asp Gln Thr Asn Pro Tyr 945 950 955 960 Thr Asp Val Arg Arg Arg Tyr Trp Asn Ala Tyr Met Leu Phe Tyr Gln 965 970 975 Arg Val Ser Asp Gln Asn Ser Pro Val Leu Pro Lys Lys Ser Arg Val 980 985 990 Ser Val Val Arg Gln Glu Ala Glu Asp Leu Ser Leu Ser Ala Pro Ser 995 1000 1005 Ser Pro Glu Ile Ser Pro Gln Ser Ser Pro Arg Pro His Arg Pro Asn 1010 1015 1020 Asn Asp Arg Leu Ser Ile Leu Thr Lys Leu Val Lys Lys Gly Glu Lys 1025 1030 1035 1040 Lys Gly Leu Phe Val Glu Lys Met Pro Ala Arg Ile Tyr Gln Met Val 1045 1050 1055 Arg Asp Glu Asn Leu Lys Phe Met Lys Asn Arg Asp Val Tyr Ser Ser 1060 1065 1070 Asp Tyr Phe Ser Phe Val Leu Ser Leu Ala Ser Leu Asn Ala Thr Lys 1075 1080 1085 Leu Lys His Pro Tyr Tyr Pro Cys Met Ala Lys Val Ser Leu Gln Leu 1090 1095 1100 Ala Ile Gln Phe Leu Phe Gln Thr Tyr Leu Arg Thr Lys Lys Lys Leu 1105 1110 1115 1120 Arg Val Asp Thr Glu Glu Trp Ile Ala Thr Ile Glu Ala Leu Leu Ser 1125 1130 1135 Lys Ser Phe Asp Ala Cys Gln Trp Leu Val Glu Tyr Phe Ile Ser Ser 1140 1145 1150 Glu Gly Arg Glu Leu Ile Lys Ile Phe Leu Leu Glu Cys Asn Val Arg 1155 1160 1165 Glu Val Arg Val Ala Val Ala Thr Ile Leu Glu Lys Thr Leu Asp Ser 1170 1175 1180 Ala Leu Phe Tyr Gln Asp Lys Leu Lys Ser Leu His Gln Leu Leu Glu 1185 1190 1195 1200 Val Leu Leu Ala Leu Leu Asp Lys Asp Val Pro Glu Asn Cys Lys Asn 1205 1210 1215 Cys Ala Gln Tyr Phe Phe Leu Phe Asn Thr Phe Val Gln Lys Gln Gly 1220 1225 1230 Ile Arg Ala Gly Asp Leu Leu Leu Arg His Ser Ala Leu Arg His Met 1235 1240 1245 Ile Ser Phe Leu Leu Gly Ala Ser Arg Gln Asn Asn Gln Ile Arg Arg 1250 1255 1260 Trp Ser Ser Ala Gln Ala Arg Glu Phe Gly Asn Leu His Asn Thr Val 1265 1270 1275 1280 Ala Leu Leu Val Leu His Ser Asp Val Ser Ser Gln Arg Asn Val Ala 1285 1290 1295 Pro Gly Ile Phe Lys Gln Arg Pro Pro Ile Ser Ile Ala Pro Ser Ser 1300 1305 1310 Pro Leu Leu Pro Leu His Glu Glu Val Glu Ala Leu Leu Phe Met Ser 1315 1320 1325 Glu Gly Lys Pro Tyr Leu Leu Glu Val Met Phe Ala Leu Arg Glu Leu 1330 1335 1340 Thr Gly Ser Leu Leu Ala Leu Ile Glu Met Val Val Tyr Cys Cys Phe 1345 1350 1355 1360 Cys Asn Glu His Phe Ser Phe Thr Met Leu His Phe Ile Lys Asn Gln 1365 1370 1375 Leu Glu Thr Ala Pro Pro His Glu Leu Lys Asn Thr Phe Gln Leu Leu 1380 1385 1390 His Glu Ile Leu Val Ile Glu Asp Pro Ile Gln Ala Glu Arg Val Lys 1395 1400 1405 Phe Val Phe Glu Thr Glu Asn Gly Leu Leu Ala Leu Met His His Ser 1410 1415 1420 Asn His Val Asp Ser Ser Arg Cys Tyr Gln Cys Val Lys Phe Leu Val 1425 1430 1435 1440 Thr Leu Ala Gln Lys Cys Pro Ala Ala Lys Glu Tyr Phe Lys Glu Asn 1445 1450 1455 Ser His His Trp Ser Trp Ala Val Gln Trp Leu Gln Lys Lys Met Ser 1460 1465 1470 Glu His Tyr Trp Thr Pro Gln Ser Asn Val Ser Asn Glu Thr Ser Thr 1475 1480 1485 Gly Lys Thr Phe Gln Arg Thr Ile Ser Ala Gln Asp Thr Leu Ala Tyr 1490 1495 1500 Ala Thr Ala Leu Leu Asn Glu Lys Glu Gln Ser Gly Ser Ser Asn Gly 1505 1510 1515 1520 Ser Glu Ser Ser Pro Ala Asn Glu Asn Gly Asp Arg His Leu Gln Gln 1525 1530 1535 Gly Ser Glu Ser Pro Met Met Ile Gly Glu Leu Arg Ser Asp Leu Asp 1540 1545 1550 Asp Val Asp Pro 1555 <210> 2 <211> 7744 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (389)..(5059) <400> 2 gatcactata gaggattttt actctgttcc acgaactatt ctacctcatg gtgcctcatt 60 tcatggacat cttttaaccc ttaatgttac ctatgagtct accaaagata ccttcactgt 120 cgaggctcac agtaatgaaa ccatagggag tgtccggtgg aaaatagcca agcagttgtg 180 ctctcctgtg gataatatac agatatttac aaatgatagc ctgctgacag tgaataaaga 240 tcaaaagcta ctccaccaac tgggcttttc tgatgaacaa atccttacag tgaagacttc 300 tggcagtggg accccatctg ggagttcagc agattcttca accagctcca gcagcagcag 360 cagtggggtt tttagttctt catatgcc atg gag cag gag aaa tcc ctc cct 412 Met Glu Gln Glu Lys Ser Leu Pro 1 5 ggt gta gtg atg gct ctc gta tgt aac gta ttt gac atg ctt tat cag 460 Gly Val Val Met Ala Leu Val Cys Asn Val Phe Asp Met Leu Tyr Gln 10 15 20 ctc gcc aat ctg gaa gag cca agg ata act cta cga gta cgg aag ctt 508 Leu Ala Asn Leu Glu Glu Pro Arg Ile Thr Leu Arg Val Arg Lys Leu 25 30 35 40 ctg ctc ttg ata ccc act gat cca gcc att cag gaa gcc ctt gat caa 556 Leu Leu Leu Ile Pro Thr Asp Pro Ala Ile Gln Glu Ala Leu Asp Gln 45 50 55 ctt gat tct tta gga aga aag aaa aca ttg ctg tct gaa tca agt tct 604 Leu Asp Ser Leu Gly Arg Lys Lys Thr Leu Leu Ser Glu Ser Ser Ser 60 65 70 cag tcc tca aaa tct cca tcc ctg tca tca aag caa cag cac cag cca 652 Gln Ser Ser Lys Ser Pro Ser Leu Ser Ser Lys Gln Gln His Gln Pro 75 80 85 agt gcc agt tca att tta gaa agt ctg ttt cga tct ttt gcc ccg gga 700 Ser Ala Ser Ser Ile Leu Glu Ser Leu Phe Arg Ser Phe Ala Pro Gly 90 95 100 atg tct acc ttc aga gtg ctc tac aac tta gaa gtt cta agc tcc aaa 748 Met Ser Thr Phe Arg Val Leu Tyr Asn Leu Glu Val Leu Ser Ser Lys 105 110 115 120 ctc atg cca aca gct gat gat gac atg gcc aga agc tgt gcc aaa tcc 796 Leu Met Pro Thr Ala Asp Asp Asp Met Ala Arg Ser Cys Ala Lys Ser 125 130 135 ttc tgt gaa aac ttc ctc aaa gct ggc ggt ttg agt ttg gtt gta aat 844 Phe Cys Glu Asn Phe Leu Lys Ala Gly Gly Leu Ser Leu Val Val Asn 140 145 150 gtc atg cag aga gac tcc atc cca tca gaa gta gac tat gaa aca agg 892 Val Met Gln Arg Asp Ser Ile Pro Ser Glu Val Asp Tyr Glu Thr Arg 155 160 165 cag ggt gtt tat tcc atc tgt cta cag ctt gca aga ttt tta ctt gtc 940 Gln Gly Val Tyr Ser Ile Cys Leu Gln Leu Ala Arg Phe Leu Leu Val 170 175 180 gga caa aca atg ccc acg tta tta gat gaa gac ctc acc aaa gat ggt 988 Gly Gln Thr Met Pro Thr Leu Leu Asp Glu Asp Leu Thr Lys Asp Gly 185 190 195 200 ata gaa gca ctt tct tcc cgc cca ttc cga aat gtc agc cgg cag aca 1036 Ile Glu Ala Leu Ser Ser Arg Pro Phe Arg Asn Val Ser Arg Gln Thr 205 210 215 agc aga cag atg tcc tta tgt ggt acc cca gaa aag tca tcc tac cga 1084 Ser Arg Gln Met Ser Leu Cys Gly Thr Pro Glu Lys Ser Ser Tyr Arg 220 225 230 cag ttg tcc gtg tct gat agg tct tct att agg gtt gag gaa atc atc 1132 Gln Leu Ser Val Ser Asp Arg Ser Ser Ile Arg Val Glu Glu Ile Ile 235 240 245 cct gct gct cga gtt gca ata caa aca atg gaa gta agt gat ttc act 1180 Pro Ala Ala Arg Val Ala Ile Gln Thr Met Glu Val Ser Asp Phe Thr 250 255 260 tct act gtg gct tgc ttc atg aga ttg tca tgg gct gcg gct gca gga 1228 Ser Thr Val Ala Cys Phe Met Arg Leu Ser Trp Ala Ala Ala Ala Gly 265 270 275 280 cgg ctt gat ctt gtt ggg agt agc cag cca att aaa gaa agt aat tcc 1276 Arg Leu Asp Leu Val Gly Ser Ser Gln Pro Ile Lys Glu Ser Asn Ser 285 290 295 ctg tgt cct gct gga att cga aac aga ctc agc agt tca gga agc aat 1324 Leu Cys Pro Ala Gly Ile Arg Asn Arg Leu Ser Ser Ser Gly Ser Asn 300 305 310 tgc agc tct gga agt gaa gga gaa cca gta gcc ctg cat gcg gga atc 1372 Cys Ser Ser Gly Ser Glu Gly Glu Pro Val Ala Leu His Ala Gly Ile 315 320 325 tgt gtt cga caa cag tct gta tcc acc aaa gac tcg ctg att gcg gga 1420 Cys Val Arg Gln Gln Ser Val Ser Thr Lys Asp Ser Leu Ile Ala Gly 330 335 340 gag gct ttg tct ctt ctt gtt acg tgc cta cag ctt cgg agc cag caa 1468 Glu Ala Leu Ser Leu Leu Val Thr Cys Leu Gln Leu Arg Ser Gln Gln 345 350 355 360 ctg gca tct ttc tat aac ttg ccc tgt gtt gct gat ttc atc att gat 1516 Leu Ala Ser Phe Tyr Asn Leu Pro Cys Val Ala Asp Phe Ile Ile Asp 365 370 375 att ctg ctc gga tca cca agt gct gag att cgc cgg gtt gcc tgt gat 1564 Ile Leu Leu Gly Ser Pro Ser Ala Glu Ile Arg Arg Val Ala Cys Asp 380 385 390 cag ctg tac act ctt agt cag aca gac aca tca gcg cat cca gat gtg 1612 Gln Leu Tyr Thr Leu Ser Gln Thr Asp Thr Ser Ala His Pro Asp Val 395 400 405 cag aag cca aat cag ttt ctt cta ggc gta atc ctc acg gct cag ctg 1660 Gln Lys Pro Asn Gln Phe Leu Leu Gly Val Ile Leu Thr Ala Gln Leu 410 415 420 cct ctc tgg tct cca act agt att atg aga gga gtc aat cag aga ctg 1708 Pro Leu Trp Ser Pro Thr Ser Ile Met Arg Gly Val Asn Gln Arg Leu 425 430 435 440 tta tct cag tgt atg gag tat ttt gat ttg aga tgc cag tta tta gat 1756 Leu Ser Gln Cys Met Glu Tyr Phe Asp Leu Arg Cys Gln Leu Leu Asp 445 450 455 gat ctg aca act tca gaa atg gag cag tta agg atc agc cca gct acg 1804 Asp Leu Thr Thr Ser Glu Met Glu Gln Leu Arg Ile Ser Pro Ala Thr 460 465 470 atg ctt gaa gat gag att act tgg ctg gat aac ttt gaa cct aat cgt 1852 Met Leu Glu Asp Glu Ile Thr Trp Leu Asp Asn Phe Glu Pro Asn Arg 475 480 485 aca gct gaa tgt gag acc agt gaa gcg gac aac atc tta ctg gca ggg 1900 Thr Ala Glu Cys Glu Thr Ser Glu Ala Asp Asn Ile Leu Leu Ala Gly 490 495 500 cac tta cgc ctc atc aag acc ctt ctt tca ctc tgt ggg gca gaa aag 1948 His Leu Arg Leu Ile Lys Thr Leu Leu Ser Leu Cys Gly Ala Glu Lys 505 510 515 520 gaa atg ctt ggt tca tca ctc att aaa cca ttg tta gat gac ttc ctt 1996 Glu Met Leu Gly Ser Ser Leu Ile Lys Pro Leu Leu Asp Asp Phe Leu 525 530 535 ttc cga gct tct aga att att tta aat agt cat tct cca gct ggc agt 2044 Phe Arg Ala Ser Arg Ile Ile Leu Asn Ser His Ser Pro Ala Gly Ser 540 545 550 gcc gcc atc agt caa cag gac ttt cat cca aag tgt agt aca gcg aat 2092 Ala Ala Ile Ser Gln Gln Asp Phe His Pro Lys Cys Ser Thr Ala Asn 555 560 565 agc cga ttg gca gcc tat gaa gtc ctt gtg atg ttg gct gat agt tca 2140 Ser Arg Leu Ala Ala Tyr Glu Val Leu Val Met Leu Ala Asp Ser Ser 570 575 580 cct tca aat ctt caa att att ata aaa gaa ctg ctt tct atg cat cac 2188 Pro Ser Asn Leu Gln Ile Ile Ile Lys Glu Leu Leu Ser Met His His 585 590 595 600 cag cct gac cct gct ctt acc aag gag ttt gat tac ctt ccc cca gtg 2236 Gln Pro Asp Pro Ala Leu Thr Lys Glu Phe Asp Tyr Leu Pro Pro Val 605 610 615 gat agc agg tcc agt tca ggg ttt gtg ggg ctg aga aat ggt ggt gca 2284 Asp Ser Arg Ser Ser Ser Gly Phe Val Gly Leu Arg Asn Gly Gly Ala 620 625 630 act tgt tat atg aat gca gtc ttc cag cag ctg tat atg caa cct ggg 2332 Thr Cys Tyr Met Asn Ala Val Phe Gln Gln Leu Tyr Met Gln Pro Gly 635 640 645 ctc cct gag tca tta ctt tca gtg gat gat gac aca gac aat cca gat 2380 Leu Pro Glu Ser Leu Leu Ser Val Asp Asp Asp Thr Asp Asn Pro Asp 650 655 660 gat agc gtg ttt tac caa gtg cag tct ctc ttt gga cat tta atg gaa 2428 Asp Ser Val Phe Tyr Gln Val Gln Ser Leu Phe Gly His Leu Met Glu 665 670 675 680 agc aag ctg cag tac tat gta cct gag aat ttt tgg aag att ttc aag 2476 Ser Lys Leu Gln Tyr Tyr Val Pro Glu Asn Phe Trp Lys Ile Phe Lys 685 690 695 atg tgg aat aaa gaa ctt tat gtg aga gaa cag cag gat gca tat gaa 2524 Met Trp Asn Lys Glu Leu Tyr Val Arg Glu Gln Gln Asp Ala Tyr Glu 700 705 710 ttc ttt act agt ctc att gat cag atg gat gaa tac ctc aag aaa atg 2572 Phe Phe Thr Ser Leu Ile Asp Gln Met Asp Glu Tyr Leu Lys Lys Met 715 720 725 ggg aga gac caa att ttt aag aat aca ttt cag ggc atc tac tct gat 2620 Gly Arg Asp Gln Ile Phe Lys Asn Thr Phe Gln Gly Ile Tyr Ser Asp 730 735 740 cag aag atc tgt aaa gac tgt cct cac aga tat gag cgt gaa gaa gct 2668 Gln Lys Ile Cys Lys Asp Cys Pro His Arg Tyr Glu Arg Glu Glu Ala 745 750 755 760 ttc atg gct ctc aat cta gga gtg act tct tgt cag agt ttg gaa att 2716 Phe Met Ala Leu Asn Leu Gly Val Thr Ser Cys Gln Ser Leu Glu Ile 765 770 775 tct ttg gac caa ttt gtt aga gga gaa gtt cta gaa gga agt aat gcg 2764 Ser Leu Asp Gln Phe Val Arg Gly Glu Val Leu Glu Gly Ser Asn Ala 780 785 790 tac tac tgt gaa aag tgt aaa gaa aag aga ata aca gtg aaa agg acc 2812 Tyr Tyr Cys Glu Lys Cys Lys Glu Lys Arg Ile Thr Val Lys Arg Thr 795 800 805 tgt att aaa tct tta cct agc gtc ttg gta att cac cta atg aga ttt 2860 Cys Ile Lys Ser Leu Pro Ser Val Leu Val Ile His Leu Met Arg Phe 810 815 820 ggg ttt gac tgg gaa agc gga cgc tcc att aaa tat gat gaa caa ata 2908 Gly Phe Asp Trp Glu Ser Gly Arg Ser Ile Lys Tyr Asp Glu Gln Ile 825 830 835 840 agg ttt ccc tgg atg cta aac atg gag cct tac aca gtt tca gga atg 2956 Arg Phe Pro Trp Met Leu Asn Met Glu Pro Tyr Thr Val Ser Gly Met 845 850 855 gct cgc caa gat tct tct tct gaa gtt ggg gaa aat ggg cga agt gtg 3004 Ala Arg Gln Asp Ser Ser Ser Glu Val Gly Glu Asn Gly Arg Ser Val 860 865 870 gat cag ggc ggt gga gga tcc cca cga aaa aag gtt gcc ctc aca gaa 3052 Asp Gln Gly Gly Gly Gly Ser Pro Arg Lys Lys Val Ala Leu Thr Glu 875 880 885 aac tat gaa ctt gtc ggt gtc atc gta cac agt ggg cag gca cac gca 3100 Asn Tyr Glu Leu Val Gly Val Ile Val His Ser Gly Gln Ala His Ala 890 895 900 ggc cac tac tat tcc ttc att aag gac agg cga ggg tgt gga aaa gga 3148 Gly His Tyr Tyr Ser Phe Ile Lys Asp Arg Arg Gly Cys Gly Lys Gly 905 910 915 920 aag tgg tat aaa ttt aat gac aca gtt ata gaa gaa ttt gac cta aat 3196 Lys Trp Tyr Lys Phe Asn Asp Thr Val Ile Glu Glu Phe Asp Leu Asn 925 930 935 gac gag acc ctg gag tat gaa tgc ttt gga gga gaa tat aga cca aaa 3244 Asp Glu Thr Leu Glu Tyr Glu Cys Phe Gly Gly Glu Tyr Arg Pro Lys 940 945 950 gtt tat gat caa aca aac cca tac act gat gtg cgc cga aga tac tgg 3292 Val Tyr Asp Gln Thr Asn Pro Tyr Thr Asp Val Arg Arg Arg Tyr Trp 955 960 965 aat gcc tat atg ctt ttc tac caa agg gtg tct gat cag aac tcc cca 3340 Asn Ala Tyr Met Leu Phe Tyr Gln Arg Val Ser Asp Gln Asn Ser Pro 970 975 980 gta tta cca aag aaa agt cga gtc agc gtt gta cgg cag gaa gct gag 3388 Val Leu Pro Lys Lys Ser Arg Val Ser Val Val Arg Gln Glu Ala Glu 985 990 995 1000 gat ctc tct ctg tca gct cca tct tca cca gaa att tca cct cag tca 3436 Asp Leu Ser Leu Ser Ala Pro Ser Ser Pro Glu Ile Ser Pro Gln Ser 1005 1010 1015 tcc cct cgg ccc cat agg ccg aac aat gac cgg ctg tct att ctt acc 3484 Ser Pro Arg Pro His Arg Pro Asn Asn Asp Arg Leu Ser Ile Leu Thr 1020 1025 1030 aag ctg gtt aaa aaa ggc gag aag aaa gga ctg ttt gtg gag aaa atg 3532 Lys Leu Val Lys Lys Gly Glu Lys Lys Gly Leu Phe Val Glu Lys Met 1035 1040 1045 cct gct cga ata tac cag atg gtg aga gat gag aac ctc aag ttt atg 3580 Pro Ala Arg Ile Tyr Gln Met Val Arg Asp Glu Asn Leu Lys Phe Met 1050 1055 1060 aag aat aga gat gta tac agt agt gat tat ttc agt ttt gtt ttg tct 3628 Lys Asn Arg Asp Val Tyr Ser Ser Asp Tyr Phe Ser Phe Val Leu Ser 1065 1070 1075 1080 tta gct tca ttg aat gct act aaa tta aag cat cca tat tat cct tgc 3676 Leu Ala Ser Leu Asn Ala Thr Lys Leu Lys His Pro Tyr Tyr Pro Cys 1085 1090 1095 atg gca aag gtg agc tta cag ctt gct att caa ttc ctt ttt caa act 3724 Met Ala Lys Val Ser Leu Gln Leu Ala Ile Gln Phe Leu Phe Gln Thr 1100 1105 1110 tat cta cgg aca aag aag aaa ctc agg gtt gat act gaa gaa tgg att 3772 Tyr Leu Arg Thr Lys Lys Lys Leu Arg Val Asp Thr Glu Glu Trp Ile 1115 1120 1125 gct acc att gaa gca ttg ctt tca aaa agt ttt gat gct tgt cag tgg 3820 Ala Thr Ile Glu Ala Leu Leu Ser Lys Ser Phe Asp Ala Cys Gln Trp 1130 1135 1140 tta gtt gaa tat ttt att agt tct gaa gga cga gaa ttg ata aag att 3868 Leu Val Glu Tyr Phe Ile Ser Ser Glu Gly Arg Glu Leu Ile Lys Ile 1145 1150 1155 1160 ttc tta ctg gag tgc aat gtg aga gaa gta cga gtt gct gtg gcc acc 3916 Phe Leu Leu Glu Cys Asn Val Arg Glu Val Arg Val Ala Val Ala Thr 1165 1170 1175 att ctg gag aaa acc cta gac agt gcc ttg ttt tat cag gat aag tta 3964 Ile Leu Glu Lys Thr Leu Asp Ser Ala Leu Phe Tyr Gln Asp Lys Leu 1180 1185 1190 aaa agc ctt cat cag tta ctg gag gta cta ctt gct ctg ttg gac aaa 4012 Lys Ser Leu His Gln Leu Leu Glu Val Leu Leu Ala Leu Leu Asp Lys 1195 1200 1205 gac gtc cca gaa aat tgt aaa aac tgt gct cag tac ttt ttc ctg ttc 4060 Asp Val Pro Glu Asn Cys Lys Asn Cys Ala Gln Tyr Phe Phe Leu Phe 1210 1215 1220 aac act ttt gta caa aag caa gga att agg gct gga gat ctt ctt ctg 4108 Asn Thr Phe Val Gln Lys Gln Gly Ile Arg Ala Gly Asp Leu Leu Leu 1225 1230 1235 1240 agg cat tca gct ctg cgg cac atg atc agc ttc ctc cta ggg gcc agt 4156 Arg His Ser Ala Leu Arg His Met Ile Ser Phe Leu Leu Gly Ala Ser 1245 1250 1255 cgg caa aac aat cag ata cgt cga tgg agt tca gca caa gca cga gaa 4204 Arg Gln Asn Asn Gln Ile Arg Arg Trp Ser Ser Ala Gln Ala Arg Glu 1260 1265 1270 ttt ggg aat ctt cac aat aca gtg gcg tta ctt gtt ttg cat tca gat 4252 Phe Gly Asn Leu His Asn Thr Val Ala Leu Leu Val Leu His Ser Asp 1275 1280 1285 gtc tca tcc caa agg aat gtt gct cct ggc ata ttt aag caa cga cca 4300 Val Ser Ser Gln Arg Asn Val Ala Pro Gly Ile Phe Lys Gln Arg Pro 1290 1295 1300 ccc att agc att gct ccc tca agc cct ctg ttg ccc ctc cat gag gag 4348 Pro Ile Ser Ile Ala Pro Ser Ser Pro Leu Leu Pro Leu His Glu Glu 1305 1310 1315 1320 gta gaa gcc ttg ttg ttc atg tct gaa ggg aaa cct tac ctg tta gag 4396 Val Glu Ala Leu Leu Phe Met Ser Glu Gly Lys Pro Tyr Leu Leu Glu 1325 1330 1335 gta atg ttt gct ttg cgg gag ctg aca ggc tcg ctc ttg gca ctc att 4444 Val Met Phe Ala Leu Arg Glu Leu Thr Gly Ser Leu Leu Ala Leu Ile 1340 1345 1350 gag atg gta gtg tac tgc tgt ttc tgt aat gag cat ttt tcc ttc aca 4492 Glu Met Val Val Tyr Cys Cys Phe Cys Asn Glu His Phe Ser Phe Thr 1355 1360 1365 atg ctg cat ttc att aag aac caa cta gaa acg gct cca cct cat gag 4540 Met Leu His Phe Ile Lys Asn Gln Leu Glu Thr Ala Pro Pro His Glu 1370 1375 1380 tta aag aat acg ttc caa cta ctt cat gaa ata ttg gtt att gaa gat 4588 Leu Lys Asn Thr Phe Gln Leu Leu His Glu Ile Leu Val Ile Glu Asp 1385 1390 1395 1400 cct ata caa gca gag cga gtc aaa ttt gtg ttt gag aca gaa aat gga 4636 Pro Ile Gln Ala Glu Arg Val Lys Phe Val Phe Glu Thr Glu Asn Gly 1405 1410 1415 tta cta gct ttg atg cac cac agt aat cat gtg gac agt agt cgc tgc 4684 Leu Leu Ala Leu Met His His Ser Asn His Val Asp Ser Ser Arg Cys 1420 1425 1430 tac cag tgt gtc aaa ttt ctt gtc act ctt gct caa aag tgt cct gca 4732 Tyr Gln Cys Val Lys Phe Leu Val Thr Leu Ala Gln Lys Cys Pro Ala 1435 1440 1445 gct aag gag tac ttc aag gag aat tcc cac cac tgg agc tgg gct gtg 4780 Ala Lys Glu Tyr Phe Lys Glu Asn Ser His His Trp Ser Trp Ala Val 1450 1455 1460 cag tgg cta cag aag aag atg tca gaa cat tac tgg aca cca cag agt 4828 Gln Trp Leu Gln Lys Lys Met Ser Glu His Tyr Trp Thr Pro Gln Ser 1465 1470 1475 1480 aat gtc tct aat gaa aca tca act gga aaa acc ttt cag cga acc att 4876 Asn Val Ser Asn Glu Thr Ser Thr Gly Lys Thr Phe Gln Arg Thr Ile 1485 1490 1495 tca gct cag gac acg tta gcg tat gcc aca gct ttg ttg aat gaa aaa 4924 Ser Ala Gln Asp Thr Leu Ala Tyr Ala Thr Ala Leu Leu Asn Glu Lys 1500 1505 1510 gag caa tca gga agc agt aat ggg tcg gag agt agt cct gcc aat gag 4972 Glu Gln Ser Gly Ser Ser Asn Gly Ser Glu Ser Ser Pro Ala Asn Glu 1515 1520 1525 aac gga gac agg cat cta cag cag ggt tca gaa tct ccc atg atg att 5020 Asn Gly Asp Arg His Leu Gln Gln Gly Ser Glu Ser Pro Met Met Ile 1530 1535 1540 ggt gag ttg aga agt gac ctt gat gat gtt gat ccc tag aggaacatgc 5069 Gly Glu Leu Arg Ser Asp Leu Asp Asp Val Asp Pro 1545 1550 1555 ccagcctgag aggagtcaag acacaatact ggatgctcag caccttcttg gaatcagaat 5129 ctcgaaccct ttggaagagc ctggagattg gactgggaaa gctgctgtga cttgggcgga 5189 tcgtgtattt ctcaaggaaa gcatttttaa gccactagaa ggtttgggag ctgtttggca 5249 gtgggagaac tccggcatgt ggatcagctg tcccgggagc gtggtctata tgtggattca 5309 catttctgtg gagattttcg gaaatagagc cagtggcaga cttttttgtt acacgaacat 5369 acaagagtga gcataaagct gttgctttct ctacgatgct acaaaagaaa ttcctttggt 5429 ttttatattt taagaaaaag caagctgctt ttagatatgt gggggcaaat ttttaatctt 5489 gcagtaatat taaacaggaa tatccaattt aaaatgatgt aaagatgtaa taaaattcct 5549 tttcattgta aaatagtaat taagtcaatt tacacagacc tttgtattta atatgtctcc 5609 ctatttgtat agaatttcag atgggtctag atgagaaccc tatgcataag cttggatctt 5669 gatgaaaggt taccaggatc aggatcaaaa attgggaaat actaagctct tgaagatatt 5729 tttctgatat aattagattg aaaagagcaa ttttgaaaat gctgtgttct ccagaagtac 5789 agggtgcatt atttgacatc aattacttaa agaagttatg agttgttccc caaacagatt 5849 ttaaaaacag caaaataaaa gcactttaag atataatttt actgagttta acttcacaga 5909 attatctttt taatgcttgg agacatattg aataaactgt agtcttaaat catgtgatct 5969 gcaatcgttt gcttttgctt aaaacataat tactgaaacc cttggtattg gttgtatatg 6029 aagttaacta tttgagttgg tacacactgc ttgtgagttt catagttatt gtaatgcaga 6089 gaaggaattt gagaatttgt ttctcctcaa catgactaat taacactgaa aagtcagtca 6149 aggtttaaga tttattttcc cagaaataaa tataaagcaa ttgaataacc atccatttag 6209 tcgtatttcc aaagtatagc accattcact catttatacc agctcccttt tatggtgtgg 6269 gggagaggtt tacacccaca tatttcatat atattttgta cattttgtat tttgaattgc 6329 tcacattttc ggccctgttt tgcctttagt tacaggtcct gccttatttt catctcacca 6389 tgcacagaac tagggagcct taggaagtgc caggttttca ctgtcagatt tgccaagtca 6449 cagaggcgca gccagccctg aagtgcctgt ctggctgctg tggcattgtg tgggcatgtg 6509 gccaggcaga tggcatctca ttactgtgct ctcgccatgg cccagtcttt tcattctctg 6569 gcagtgaggg tttctgtgct gtcagacttc attgttattc tgtgacttgc tggaggttgg 6629 cagtggcctt tgtcaaacac actgagaaga tggaagggcc agcacttaag agcagaactg 6689 tacccttaga gaaacggaca gaggcgagtg gcaaacttca gacggttcca atggtcttgc 6749 agtttgaaat gtgatgttct accattggtt ttgagtacgt gaatacttcc tgtcctactg 6809 tttcccctac cctattctca ccttctctcc gcccacatcc tcaccaagag attgtgtggg 6869 acatgacctt gaaatgctgg cgatgatcca cactgggata tcatcgctgg cgactgcact 6929 ctcaggagcc caaaatcagg agtgaaattg ccacttctag tccccttatt tcctatggaa 6989 acaacgcctt ccgcacccct agcacctgcc gtcctcactg taaaggttca tcaggatcgt 7049 ccaccgtgta tattatacgc ttcagatcat gttgcttata ttgttgctgc aatgaccatc 7109 gttttcactt tgctggtaac cacttgattg ctgacagcta cagtcaatga acctgctgat 7169 gacttttttt aatgtagtac aacagtgaca gttatgacag gcttaccttg gaagagttgt 7229 catttttact gccaattttt tggatgaaga tgtttttata aacctttcaa aatggtctgc 7289 aaacagagca ggaattgcac aattaactca ataatgctgt gtgttctcaa gaagctccct 7349 tagtgaggcc gatcttaaga tggccgattc tgcccgttga aggcatcctg ggaaagaaaa 7409 caagcatccc agcgggcatc tcaccacgac ttctcctgga gtcctcacac ggtcactgac 7469 aactacagtc agttttagga actagagtgc cgtatcatca gacttaccct gtcctgcccc 7529 accttccctg ctaacatcga ggtgtgtgca gttaccttct gagcttggaa caagcagact 7589 ggaattttcc tctgctacct cttgtgtata aaatcttgtt tataaaattt caaaaggaag 7649 tagatacact agggaagaac cttaattcta aatttggttc atgtgtggca aagttcttag 7709 cttctaagag tataaaataa atttttcaaa aacag 7744 <210> 3 <211> 521 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Glu Gln Glu Lys Ser Leu Pro Gly Val Val Met Ala Leu Val Cys 1 5 10 15 Asn Val Phe Asp Met Leu Tyr Gln Leu Ala Asn Leu Glu Glu 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240 Ser Ile Arg Val Glu Glu Ile Ile Pro Ala Ala Arg Val Ala Ile Gln 245 250 255 Thr Met Glu Val Ser Asp Phe Thr Ser Thr Val Ala Cys Phe Met Arg 260 265 270 Leu Ser Trp Ala Ala Ala Ala Gly Arg Leu Asp Leu Val Gly Ser Ser 275 280 285 Gln Pro Ile Lys Glu Ser Asn Ser Leu Cys Pro Ala Gly Ile Arg Asn 290 295 300 Arg Leu Ser Ser Ser Gly Ser Asn Cys Ser Ser Gly Ser Glu Gly Glu 305 310 315 320 Pro Val Ala Leu His Ala Gly Ile Cys Val Arg Gln Gln Ser Val Ser 325 330 335 Thr Lys Asp Ser Leu Ile Ala Gly Glu Ala Leu Ser Leu Leu Val Thr 340 345 350 Cys Leu Gln Leu Arg Ser Gln Gln Leu Ala Ser Phe Tyr Asn Leu Pro 355 360 365 Cys Val Ala Asp Phe Ile Ile Asp Ile Leu Leu Gly Ser Pro Ser Ala 370 375 380 Glu Ile Arg Arg Val Ala Cys Asp Gln Leu Tyr Thr Leu Ser Gln Thr 385 390 395 400 Asp Thr Ser Ala His Pro Asp Val Gln Lys Pro Asn Gln Phe Leu Leu 405 410 415 Gly Val Ile Leu Thr Ala Gln Leu Pro Leu Trp Ser Pro Thr Ser Ile 420 425 430 Met Arg Gly Val Asn Gln Arg Leu Leu Ser Gln Cys Met Glu Tyr Phe 435 440 445 Asp Leu Arg Cys Gln Leu Leu Asp Asp Leu Thr Thr Ser Glu Met Glu 450 455 460 Gln Leu Arg Ile Ser Pro Ala Thr Met Leu Glu Asp Glu Ile Thr Trp 465 470 475 480 Leu Asp Asn Phe Glu Pro Asn Arg Thr Ala Glu Cys Glu Thr Ser Glu 485 490 495 Ala Asp Asn Ile Leu Leu Ala Gly His Leu Arg Leu Ile Lys Thr Leu 500 505 510 Leu Ser Leu Cys Gly Ala Glu Lys Glu 515 520 <210> 4 <211> 1563 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1563) <400> 4 atg gag cag gag aaa tcc ctc cct ggt gta gtg atg gct ctc gta tgt 48 Met Glu Gln Glu Lys Ser Leu Pro Gly Val Val Met Ala Leu Val Cys 1 5 10 15 aac gta ttt gac atg ctt tat cag ctc gcc aat ctg gaa gag cca agg 96 Asn Val Phe Asp Met Leu Tyr Gln Leu Ala Asn Leu Glu Glu Pro Arg 20 25 30 ata act cta cga gta cgg aag ctt ctg ctc ttg ata ccc act gat cca 144 Ile Thr Leu Arg Val Arg Lys Leu Leu Leu Leu Ile Pro Thr Asp Pro 35 40 45 gcc att cag gaa gcc ctt gat caa ctt gat tct tta gga aga aag aaa 192 Ala Ile Gln Glu Ala Leu Asp Gln Leu Asp Ser Leu Gly Arg Lys Lys 50 55 60 aca ttg ctg tct gaa tca agt tct cag tcc tca aaa tct cca tcc ctg 240 Thr Leu Leu Ser Glu Ser Ser Ser Gln Ser Ser Lys Ser Pro Ser Leu 65 70 75 80 tca tca aag caa cag cac cag cca agt gcc agt tca att tta gaa agt 288 Ser Ser Lys Gln Gln His Gln Pro Ser Ala Ser Ser Ile Leu Glu Ser 85 90 95 ctg ttt cga tct ttt gcc ccg gga atg tct acc ttc aga gtg ctc tac 336 Leu Phe Arg Ser Phe Ala Pro Gly Met Ser Thr Phe Arg Val Leu Tyr 100 105 110 aac tta gaa gtt cta agc tcc aaa ctc atg cca aca gct gat gat gac 384 Asn Leu Glu Val Leu Ser Ser Lys Leu Met Pro Thr Ala Asp Asp Asp 115 120 125 atg gcc aga agc tgt gcc aaa tcc ttc tgt gaa aac ttc ctc aaa gct 432 Met Ala Arg Ser Cys Ala Lys Ser Phe Cys Glu Asn Phe Leu Lys Ala 130 135 140 ggc ggt ttg agt ttg gtt gta aat gtc atg cag aga gac tcc atc cca 480 Gly Gly Leu Ser Leu Val Val Asn Val Met Gln Arg Asp Ser Ile Pro 145 150 155 160 tca gaa gta gac tat gaa aca agg cag ggt gtt tat tcc atc tgt cta 528 Ser Glu Val Asp Tyr Glu Thr Arg Gln Gly Val Tyr Ser Ile Cys Leu 165 170 175 cag ctt gca aga ttt tta ctt gtc gga caa aca atg ccc acg tta tta 576 Gln Leu Ala Arg Phe Leu Leu Val Gly Gln Thr Met Pro Thr Leu Leu 180 185 190 gat gaa gac ctc acc aaa gat ggt ata gaa gca ctt tct tcc cgc cca 624 Asp Glu Asp Leu Thr Lys Asp Gly Ile Glu Ala Leu Ser Ser Arg Pro 195 200 205 ttc cga aat gtc agc cgg cag aca agc aga cag atg tcc tta tgt ggt 672 Phe Arg Asn Val Ser Arg Gln Thr Ser Arg Gln Met Ser Leu Cys Gly 210 215 220 acc cca gaa aag tca tcc tac cga cag ttg tcc gtg tct gat agg tct 720 Thr Pro Glu Lys Ser Ser Tyr Arg Gln Leu Ser Val Ser Asp Arg Ser 225 230 235 240 tct att agg gtt gag gaa atc atc cct gct gct cga gtt gca ata caa 768 Ser Ile Arg Val Glu Glu Ile Ile Pro Ala Ala Arg Val Ala Ile Gln 245 250 255 aca atg gaa gta agt gat ttc act tct act gtg gct tgc ttc atg aga 816 Thr Met Glu Val Ser Asp Phe Thr Ser Thr Val Ala Cys Phe Met Arg 260 265 270 ttg tca tgg gct gcg gct gca gga cgg ctt gat ctt gtt ggg agt agc 864 Leu Ser Trp Ala Ala Ala Ala Gly Arg Leu Asp Leu Val Gly Ser Ser 275 280 285 cag cca att aaa gaa agt aat tcc ctg tgt cct gct gga att cga aac 912 Gln Pro Ile Lys Glu Ser Asn Ser Leu Cys Pro Ala Gly Ile Arg Asn 290 295 300 aga ctc agc agt tca gga agc aat tgc agc tct gga agt gaa gga gaa 960 Arg Leu Ser Ser Ser Gly Ser Asn Cys Ser Ser Gly Ser Glu Gly Glu 305 310 315 320 cca gta gcc ctg cat gcg gga atc tgt gtt cga caa cag tct gta tcc 1008 Pro Val Ala Leu His Ala Gly Ile Cys Val Arg Gln Gln Ser Val Ser 325 330 335 acc aaa gac tcg ctg att gcg gga gag gct ttg tct ctt ctt gtt acg 1056 Thr Lys Asp Ser Leu Ile Ala Gly Glu Ala Leu Ser Leu Leu Val Thr 340 345 350 tgc cta cag ctt cgg agc cag caa ctg gca tct ttc tat aac ttg ccc 1104 Cys Leu Gln Leu Arg Ser Gln Gln Leu Ala Ser Phe Tyr Asn Leu Pro 355 360 365 tgt gtt gct gat ttc atc att gat att ctg ctc gga tca cca agt gct 1152 Cys Val Ala Asp Phe Ile Ile Asp Ile Leu Leu Gly Ser Pro Ser Ala 370 375 380 gag att cgc cgg gtt gcc tgt gat cag ctg tac act ctt agt cag aca 1200 Glu Ile Arg Arg Val Ala Cys Asp Gln Leu Tyr Thr Leu Ser Gln Thr 385 390 395 400 gac aca tca gcg cat cca gat gtg cag aag cca aat cag ttt ctt cta 1248 Asp Thr Ser Ala His Pro Asp Val Gln Lys Pro Asn Gln Phe Leu Leu 405 410 415 ggc gta atc ctc acg gct cag ctg cct ctc tgg tct cca act agt att 1296 Gly Val Ile Leu Thr Ala Gln Leu Pro Leu Trp Ser Pro Thr Ser Ile 420 425 430 atg aga gga gtc aat cag aga ctg tta tct cag tgt atg gag tat ttt 1344 Met Arg Gly Val Asn Gln Arg Leu Leu Ser Gln Cys Met Glu Tyr Phe 435 440 445 gat ttg aga tgc cag tta tta gat gat ctg aca act tca gaa atg gag 1392 Asp Leu Arg Cys Gln Leu Leu Asp Asp Leu Thr Thr Ser Glu Met Glu 450 455 460 cag tta agg atc agc cca gct acg atg ctt gaa gat gag att act tgg 1440 Gln Leu Arg Ile Ser Pro Ala Thr Met Leu Glu Asp Glu Ile Thr Trp 465 470 475 480 ctg gat aac ttt gaa cct aat cgt aca gct gaa tgt gag acc agt gaa 1488 Leu Asp Asn Phe Glu Pro Asn Arg Thr Ala Glu Cys Glu Thr Ser Glu 485 490 495 gcg gac aac atc tta ctg gca ggg cac tta cgc ctc atc aag acc ctt 1536 Ala Asp Asn Ile Leu Leu Ala Gly His Leu Arg Leu Ile Lys Thr Leu 500 505 510 ctt tca ctc tgt ggg gca gaa aag gaa 1563 Leu Ser Leu Cys Gly Ala Glu Lys Glu 515 520 <210> 5 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed oligonucleotide for using as a primer <400> 5 aaaaagcagg ctatgccatg gagcaggaga aa 32 <210> 6 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed oligonucleotide for using as a primer <400> 6 ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt ctagggatca acatcatcaa gg 52 <210> 7 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed oligonucleotide for using as a primer <400> 7 gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggc 27 <210> 8 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed oligonucleotide for using as a primer <400> 8 ggtggtgcaa cttcttatat gaatgcagtc tttcag 36

【図面の簡単な説明】

【図１】 ｂｆ０４２７４の脱ユビキチン化活性が、ｂ
ｆ０４２７４と人工基質（Ｕｂ−Ｒ−ＧＳＴ、Ｕｂ−Ｍ
−ＧＳＴ、Ｕｂ−Ｉ−ＧＳＴ、またはＵｂ−Ｐ−ＧＳ
Ｔ）とを共に大腸菌で発現させた共発現系で認められた
ことを示す図である。図中、ＵＳＰ１５およびルシフェ
ラーゼは、それぞれ脱ユビキチン化活性の陽性コントロ
ールおよび陰性コントロールである。レーン左側の数値
は分子量を示す。

【図２】 ｂｆ０４２７４の推定酵素活性部位である、
Ｎ末端から第６３４番目のシステイン（Ｃ）残基をセリ
ン（Ｓ）残基に置換すると（ｂｆ０４２７
４ ^{Ｃ６３４Ｓ}）、その脱ユビキチン化活性が消失したこ
とを示す図である。図中、ＵＳＰ１５およびルシフェラ
ーゼは、それぞれ脱ユビキチン化活性の陽性コントロー
ルおよび陰性コントロールである。レーン左側の数値は
分子量を示す。

【図３】 ｂｆ０４２７４のＮ末端から５２１アミノ酸
残基を欠失させたＫＩＡＡ１０５７−１の脱ユビキチン
化活性が、ＫＩＡＡ１０５７−１と人工基質（Ｕｂ−Ｒ
−ＧＳＴ、Ｕｂ−Ｍ−ＧＳＴ、Ｕｂ−Ｉ−ＧＳＴ、また
はＵｂ−Ｐ−ＧＳＴ）とを共に大腸菌で発現させた共発
現系で認められたことを示す図である。図中、ＵＳＰ１
５およびルシフェラーゼは、それぞれ脱ユビキチン化活
性の陽性コントロールおよび陰性コントロールである。
レーン左側の数値は分子量を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/00 Ａ６１Ｐ 25/28 ４Ｂ０６５ 25/16 Ｃ０７Ｋ 14/81 ４Ｃ０８４ 25/28 16/40 ４Ｃ０８５ Ｃ０７Ｋ 14/81 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｈ０４５ 16/40 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 9/50 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/37 9/50 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/37 33/50 Ｚ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 5/00 Ａ 33/50 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 長瀬 隆弘 千葉県木更津市矢那1532番３号 財団法人 かずさディー・エヌ・エー研究所内 (72)発明者 大石 道夫 千葉県木更津市矢那1532番３号 財団法人 かずさディー・エヌ・エー研究所内 (72)発明者 横田 博 東京都江戸川区北葛西１丁目16番13号 第 一製薬株式会社東京研究開発センター内 (72)発明者 下村 知栄子 東京都江戸川区北葛西１丁目16番13号 第 一製薬株式会社東京研究開発センター内 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA40 BB03 BB20 CA25 CB01 CB03 CB07 CB13 CB21 DA12 DA13 DA20 DA36 DA77 FB01 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA14 BA19 BA61 CA04 DA01 DA02 DA05 DA06 DA11 EA04 GA01 GA11 HA08 HA11 HA19 4B050 CC01 CC03 DD11 EE10 LL01 LL03 4B063 QA18 QQ02 QQ08 QQ13 QQ36 QQ44 QQ53 QR16 QR32 QR42 QR48 QR55 QR62 QR72 QR78 QS28 QS32 QS33 QS34 4B064 AG23 AG26 CA02 CA05 CA10 CA11 CA19 CA20 DA01 DA13 4B065 AA01X AA26X AA57X AA87X AA93Y AB01 AB02 BA02 BA08 CA24 CA33 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 AA13 AA17 BA20 BA22 BA35 MA52 MA55 MA66 NA14 ZA011 ZA021 ZA161 ZC781 4C085 AA13 AA14 BB11 CC04 CC05 DD22 DD23 DD33 GG01 GG08 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA09 CA40 DA75 DA89 EA20 EA50 FA74

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の群より選ばれるポリペプチド； 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
   リペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
   リペプチドを含有するポリペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
   リペプチドと少なくとも約７０％のアミノ酸配列上の相
   同性を有し、かつ脱ユビキチン化活性を有するポリペプ
   チド、および 前記からのいずれか１のポリペプチドにおいてア
   ミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、置換、付
   加、または挿入といった変異を有し、かつ脱ユビキチン
   化活性を有するポリペプチド。
2. 【請求項２】 下記の群より選ばれるポリペプチドであ
   って、脱ユビキチン化活性を有するポリペプチド； 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
   リペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
   リペプチドを含有するポリペプチド、 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポ
   リペプチドと少なくとも約７０％のアミノ酸配列上の相
   同性を有するポリペプチド、および 前記からのいずれか１のポリペプチドにおいてア
   ミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、置換、付
   加、または挿入といった変異を有するポリペプチド。
3. 【請求項３】 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
   列の少なくとも約５個の連続するアミノ酸配列を有する
   ペプチド。
4. 【請求項４】 下記の群より選ばれるポリペプチド； （ａ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
   るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
   ５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
   ミノ酸残基からなるポリペプチド、 （ｂ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
   るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
   ５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
   ミノ酸残基からなるポリペプチドと少なくとも約７０％
   のアミノ酸配列上の相同性を有し、かつ請求項１または
   請求項２に記載のポリペプチドの脱ユビキチン化活性を
   阻害するポリペプチド、および （ｃ）前記（ａ）または前記（ｂ）のポリペプチドにお
   いて、アミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、
   置換、付加、または挿入といった変異を有し、かつ請求
   項１または請求項２に記載のポリペプチドの脱ユビキチ
   ン化活性を阻害するポリペプチド。
5. 【請求項５】 下記の群より選ばれるポリペプチドであ
   って、請求項１または請求項２に記載のポリペプチドの
   脱ユビキチン化活性を阻害するポリペプチド； （ａ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
   るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
   ５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
   ミノ酸残基からなるポリペプチド、 （ｂ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
   るポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残基から第
   ５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連続するア
   ミノ酸残基からなるポリペプチドと少なくとも約７０％
   のアミノ酸配列上の相同性を有するポリペプチド、およ
   び （ｃ）前記（ａ）または前記（ｂ）のポリペプチドにお
   いて、アミノ酸配列中１個乃至数個のアミノ酸の欠失、
   置換、付加、または挿入といった変異を有するポリペプ
   チド。
6. 【請求項６】 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
   列からなるポリペプチドのＮ末端第１番目のアミノ酸残
   基から第５２１番目のアミノ酸残基までの５２１個の連
   続するアミノ酸残基からなるポリペプチドのアミノ酸配
   列の少なくとも約５個の連続するアミノ酸配列を有し、
   かつ請求項１または請求項２に記載のポリペプチドの脱
   ユビキチン化活性を阻害するペプチド。
7. 【請求項７】 請求項１若しくは請求項２に記載のポリ
   ペプチド、または請求項３に記載のペプチドをコードす
   るポリヌクレオチドまたはその相補鎖。
8. 【請求項８】 配列表の配列番号２に記載の塩基配列か
   らなるポリヌクレオチドまたはその相補鎖。
9. 【請求項９】 配列表の配列番号２に記載の塩基配列か
   らなるポリヌクレオチドまたはその相補鎖の少なくとも
   約１５個の連続する塩基配列からなるポリヌクレオチ
   ド。
10. 【請求項１０】 請求項７から請求項９のいずれか１項
    に記載のポリヌクレオチドまたはその相補鎖とストリン
    ジェントな条件下でハイブリダイゼーションするポリヌ
    クレオチド。
11. 【請求項１１】 請求項４若しくは請求項５に記載のポ
    リペプチド、または請求項６に記載のペプチドをコード
    するポリヌクレオチドまたはその相補鎖。
12. 【請求項１２】 配列表の配列番号４に記載の塩基配列
    からなるポリヌクレオチドまたはその相補鎖。
13. 【請求項１３】 請求項７から請求項１２のいずれか１
    項に記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクタ
    ー。
14. 【請求項１４】 組換えベクターが発現組換えベクター
    である請求項１３に記載の組換えベクター。
15. 【請求項１５】 請求項１３または請求項１４に記載の
    組換えベクターを導入されてなる形質転換体。
16. 【請求項１６】 請求項１、請求項２、請求項４若しく
    は請求項５に記載のポリペプチド、または請求項３若し
    くは請求項６に記載のペプチドの製造方法であって、請
    求項１４に記載の組換えベクターを導入されてなる形質
    転換体を培養する工程、または請求項１３若しくは請求
    項１４に記載の組換えベクターを利用した無細胞蛋白質
    合成手段を含む方法。
17. 【請求項１７】 請求項１、請求項２、請求項４若しく
    は請求項５に記載のポリペプチド、または請求項３若し
    くは請求項６に記載のペプチドを免疫学的に認識する抗
    体。
18. 【請求項１８】 脱ユビキチン化活性を阻害する請求項
    １７に記載の抗体。
19. 【請求項１９】 請求項１若しくは請求項２に記載のポ
    リペプチドと相互作用してその生理活性を阻害する若し
    くは増強する化合物、および／または請求項７若しくは
    請求項８に記載のポリヌクレオチドと相互作用してその
    発現を阻害する若しくは促進する化合物の同定方法であ
    って、請求項１、請求項２、請求項４若しくは請求項５
    に記載のポリペプチド、請求項３若しくは請求項６に記
    載のペプチド、請求項７から請求項１２のいずれか１項
    に記載のポリヌクレオチド、請求項１３若しくは請求項
    １４に記載の組換えベクター、請求項１５に記載の形質
    転換体、および請求項１７若しくは請求項１８に記載の
    抗体のうちの少なくともいずれか１つを用いることを特
    徴とする方法。
20. 【請求項２０】 請求項１若しくは請求項２に記載のポ
    リペプチドと相互作用してその生理活性を阻害する若し
    くは増強する化合物、および／または請求項７若しくは
    請求項８に記載のポリヌクレオチドと相互作用してその
    発現を阻害する若しくは促進する化合物の同定方法であ
    って、化合物と該ポリペプチドまたは該ポリヌクレオチ
    ドとの相互作用を可能にする条件下で、該ポリペプチド
    または該ポリヌクレオチドと化合物とを接触させ、次い
    で、化合物と該ポリペプチドまたは該ポリヌクレオチド
    との相互作用により生じるシグナルの存在若しくは不存
    在または変化を検出することにより、化合物が該ポリペ
    プチドまたはポリヌクレオチドと相互作用して、該ポリ
    ペプチドの生理活性または該ポリヌクレオチドの発現を
    阻害または促進するかどうかを決定する方法。
21. 【請求項２１】 請求項１９または請求項２０に記載の
    方法で同定された化合物。
22. 【請求項２２】 請求項１若しくは請求項２に記載のポ
    リペプチドと相互作用して脱ユビキチン化活性を阻害す
    る若しくは増強する化合物、または請求項７若しくは請
    求項８に記載のポリヌクレオチドと相互作用してその発
    現を阻害する若しくは促進する化合物。
23. 【請求項２３】 請求項４若しくは請求項５に記載のポ
    リペプチドおよび／または請求項６に記載のペプチドか
    らなる、請求項１若しくは請求項２に記載のポリペプチ
    ドの拮抗剤。
24. 【請求項２４】 請求項１、請求項２、請求項４または
    請求項５に記載のポリペプチド、請求項３または請求項
    ６に記載のペプチド、請求項７から請求項１２のいずれ
    か１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１３または請
    求項１４に記載の組換えベクター、請求項１５に記載の
    形質転換体、請求項１７または請求項１８に記載の抗
    体、請求項２１または請求項２２に記載の化合物、およ
    び請求項２３に記載の拮抗剤のうちの少なくともいずれ
    か１つを含有することを特徴とする医薬組成物。
25. 【請求項２５】 請求項１、請求項２、請求項４または
    請求項５に記載のポリペプチド、請求項３または請求項
    ６に記載のペプチド、請求項７から請求項１２のいずれ
    か１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１３または請
    求項１４に記載の組換えベクター、請求項１５に記載の
    形質転換体、請求項１７または請求項１８に記載の抗
    体、請求項２１または請求項２２に記載の化合物、およ
    び請求項２３に記載の拮抗剤のうちの少なくともいずれ
    か１つを含有することを特徴とする神経変性疾患の防止
    剤および／または治療剤。
26. 【請求項２６】 前記神経変性疾患がアルツハイマー病
    および／またはパーキンソン病である請求項２５に記載
    の神経変性疾患の防止剤および／または治療剤。
27. 【請求項２７】 請求項１、請求項２、請求項４または
    請求項５に記載のポリペプチド、請求項３または請求項
    ６に記載のペプチド、請求項７から請求項１２のいずれ
    か１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１３または請
    求項１４に記載の組換えベクター、請求項１５に記載の
    形質転換体、請求項１７または請求項１８に記載の抗
    体、請求項２１または請求項２２に記載の化合物、およ
    び請求項２３に記載の拮抗剤のうちの少なくともいずれ
    か１つを含有することを特徴とする筋萎縮症の防止剤お
    よび／または治療剤。
28. 【請求項２８】 請求項１、請求項２、請求項４若しく
    は請求項５に記載のポリペプチド、または請求項７、請
    求項８、請求項１１若しくは請求項１２に記載のポリヌ
    クレオチドを定量的あるいは定性的に測定する方法。
29. 【請求項２９】 請求項１、請求項２、請求項４または
    請求項５に記載のポリペプチド、請求項３または請求項
    ６に記載のペプチド、請求項７から請求項１２のいずれ
    か１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１３または請
    求項１４に記載の組換えベクター、請求項１５に記載の
    形質転換体、請求項１７または請求項１８に記載の抗
    体、および請求項２３に記載の拮抗剤のうちの少なくと
    もいずれか１つを含んでなる試薬キット。