JP2003154352A - 微生物による汚染土壌修復方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 汚染物質を分解する微生物が土壌修復に必要
な濃度で土壌中に存在できて、しかも栄養物の供給によ
って土壌修復能が低下することのない土壌修復方法を提
供すること。 【解決手段】 土壌汚染物質の分解能を有する微生物を
担体に担持させて汚染された土壌中に存在させ、該微生
物の栄養物を徐放可能の状態で該土壌に投与することを
特徴とする汚染土壌修復方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は土壌修復方法に関するも
ので、とくに土壌汚染物質分解能を有する微生物を利用
した土壌修復方法、すなわちバイオレメディエーション
に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、各種の難分解性有害化学物質が土
壌、河川、海、空気中等において検出されており、これ
らの物質による汚染の進行が問題となっている。なかで
も重金属や有機塩素系化合物による土壌汚染は深刻な問
題となってきており、汚染の拡大を防止していくととも
に、汚染された環境を再生していく技術の確立が強く望
まれている。例えば、重金属化合物を扱う化学工場、ガ
ス製造プラント、製油所、石油精製所、燃料基地、パル
プ工場などの廃棄物処理サイトや跡地などにおいて土壌
汚染が問題となっており、これらの汚染土壌のを浄化す
るための土壌修復法の改良、開発に対するニーズが高
い。

【０００３】また、土壌汚染は土地の再利用を妨げるば
かりでなく、汚染物質が地下水に流れ込んで拡散するこ
とによる汚染地域の拡大を引き起こす危険性が大きいの
で、汚染された土壌の修復技術が早急に確立されること
が強く要望されている。

【０００４】汚染された土壌から汚染物質を取り除くこ
とにより土壌を元の状態に復帰させる土壌修復法として
は種々の方法が知られ、また試みられている。例えば、
土壌中より汚染物質を吸引する真空抽出法等の物理化学
的な方法がある。しかしながら、物理化学的方法には、
高いコスト、低い操作性、低濃度で存在する汚染物質の
処理の困難性など、数多くの問題がある。

【０００５】そのため、土壌修復法のなかでも、微生物
を利用した土壌浄化による修復、いわゆるバイオレメデ
ィエーションに対する期待が高まっている。微生物を利
用する土壌修復方法としては、対象とされる土壌中にも
ともと自然に存在する微生物の機能を高めて汚染物質を
分解して無害化するという生態系の自浄能力を強化する
方法や、更にこの技術を一歩進めて外部から汚染物質の
分解能を有する菌（以後、汚染物質分解菌又は単に分解
菌と呼ぶこともある）を積極的に汚染土壌に導入し、汚
染土壌の修復を促進する方法等が試みられている。

【０００６】土壌汚染を引き起こしている難分解性化合
物、例えば、芳香族炭化水素や有機塩素系化合物を分解
する微生物は数多く知られている。しかしながら、現実
の汚染土壌にこれらの菌を単にそのまま散布した場合、
散布時の菌の初期濃度に対して土壌中での菌濃度は時間
の経過とともに減少し、汚染現場の修復効率は低下して
しまう。効率低下を防ぐには、微生物散布をたびたび繰
り返す必要があって手間とコストがかかる。従って、土
壌中において投与分解菌の増殖能を維持させ、その菌濃
度を高く保持することが実際的である。

【０００７】したがって、土壌修復を目的としたバイオ
リアクターに、微生物を高濃度に保持するためのさまざ
まな微生物の保持担体を適用することが従来から提案さ
れている。そのような保持担体には、例えば、多孔質ガ
ラス、セラミックス、金属酸化物、活性炭、ゼオライ
ト、アンスラサイト等の粒子状担体、寒天、ポリビニル
アルコール、アルギン酸、ポリアクリルアミド、カラギ
ーナン等のゲル状担体等が知られている。

【０００８】例えば、特表平４−５０３５２８号には、
クロロフェノール類分解性の微生物を多孔質担体に固定
して汚染土壌に添加する方法が開示されている。この多
孔質担体は、微生物に好ましい生育環境を形成し、微生
物を捕食生物の攻撃から保護することができる。

【０００９】しかしながら、土壌は一般に貧栄養である
ので、土壌中に投与した土壌修復用微生物の栄養物とな
るような物質（以後、栄養物と呼ぶ）を更に土壌に補給
する必要が生じる場合が多い。ところが、そのような場
合、土壌中での物質移動はきわめて緩慢であるため、土
壌修復用微生物の栄養物を土壌表面より与えても、栄養
物濃度の不均一や変動が多く、なかなか効果を発揮せ
ず、このため微生物を単にそのまま土壌に散布した場合
はもちろんのこと、前述した有機、無機、粒子状、ゲル
状、または多孔性等いずれの担体に固定化して散布して
も、投与微生物のすべてに充分な栄養物の供給が困難
（過剰投与しないかぎり）で、投与微生物の増殖能の活
性化、高菌濃度の維持は土壌中では未だ不十分であっ
た。

【００１０】したがって、栄養物を微生物が十分に利用
できる形で供給される態様として、特開平６-２１２１
５５号公報では、多孔質の微生物 担持用担体を用い、
その細孔中に栄養物を充填しておく方法が開示されてお
り、また特開平７-９７５７３号公報では、微生物 担持
用担体を形成可能で、かつ栄養物を含んだ液状組成物を
土壌に注入して、栄養物を含んだ微生物担体を形成させ
て土壌浄化の均一な進行を期する方法が開示されてい
る。さらに、特開平０８−１１８１号公報には、酵母エ
キスなどの栄養源を微生物とともに高分子ゲル担体に混
入させる方法が開示され，特開表２００１−５０１６４
５号公報には、微生物と微生物の栄養剤とを吸水性ポリ
マーに包括する方法が開示されている。しかしながら、
これら先行技術は、汚染土壌修復に関して改善のあとは
認められるが、その効果は十分ではない。その理由は、
以下のように考えられる。栄養物の供給形態をたとえ上
記のように改良しても、栄養物を供給している限り、微
生物は、投与された栄養物に依存して、土壌中の汚染物
質を栄養源として土壌改質を進める効率は低下してしま
う。さらに土壌中にもともと存在していた微生物が供給
された栄養物を消費するので、栄養物の消耗と濃度変動
が著しい。さらには、もともと存在していた微生物が土
壌修復能を有する微生物の生育を抑制してしまうことも
ある。すなわち、栄養物の供給は、土壌修復能を有する
微生物の活動維持の上で必要ではあるが、土壌改質効果
を低下させるというジレンマに遭遇する。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記した背
景からなされたものであり、その目的は、微生物を用い
る土壌修復において土壌修復能を有する微生物が、土壌
修復機能を維持しながら土壌中で生育できる土壌修復方
法を提供することにある。具体的には、該微生物が土壌
修復に必要な濃度で土壌中に存在できて、しかも栄養物
の供給によって土壌修復能が低下することのない土壌修
復方法を提供することにある。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記した本
発明の目的は、第一に土壌修復能を有する微生物が土壌
中に長時間持続して生育するためには、該微生物は担体
に 担持された状態にあることが必要であり、第二に、
活動維持の必要上栄養物を投与するが、その投与レベル
は該微生物の生存・活動維持に足りるが、土壌修復機能
を低下させない投与レベルであることを満たすことによ
って達成できることを見出し、その具体化を以下の本発
明によって実現させることができた。すなわち、本発明
は以下の通りである。

【００１３】（１）土壌汚染物質の分解能を有する微生
物を担体に担持させて汚染された土壌中に存在させ、該
微生物の栄養物を徐放可能の状態で該土壌に投与するこ
とを特徴とする汚染土壌修復方法。 （２）上記（１）における担体が生分解性であることを
特徴とする汚染土壌修復方法。 （３）上記（１）又は（２）において、栄養物を徐放可
能の状態で該土壌に投与することが栄養物を担持物質に
包括して投与することによってなされることを特徴とす
る汚染土壌修復方法。 （４）上記（３）における栄養物の担持物質が生分解性
であることを特徴とする汚染土壌修復方法。 （５）土壌汚染物質の分解能を有する微生物がＥＤＴＡ
分解能、フェノール類分解能及び界面活性剤分解能の少
なくとも一つを有する微生物であることを特徴とする上
記（１）〜（４）のいずれか１項に記載の汚染土壌修復
方法。 （６）土壌汚染物質の分解能を有する微生物を担持させ
た担体と、該微生物の栄養物を徐放可能状態で含む栄養
物徐放剤とからなることを特徴とする土壌修復用微生物
製剤。

【００１４】すなわち、本発明の要諦は、土壌修復能を
有する微生物を担体に担持させることと、栄養物の供給
を徐放によって、微生物の活動維持と土壌修復効率低下
抑止とが両立する低レベル，低変動の状態で持続させる
ことにある。担体を用いることによって汚染土壌中の微
生物濃度を高めることができ、栄養物の供給を徐放方式
で行なうことによって微生物濃度が高濃度でも、栄養不
足とはならず、しかも汚染物質分解機能を維持できる供
給速度の範囲に制御することが可能となった。さらに、
微生物担持用の担体が生分解性であると、修復された土
壌は一層環境負荷の少ないものとなる。また、栄養物の
徐放の方式としては、包括法が特に効果があり、作業の
面からも実際的である。栄養物の包括に用いる担持物質
も生分解性であることによって、上記と同様、修復され
た土壌は一層環境負荷の少ないものとなる。

【００１５】本発明の土壌修復法は、ＥＤＴＡなどの難
分解性のアミノポリカルボン酸型の金属キレート化剤や
それらが重金属と錯結合した重金属キレートなどに対し
て生分解能を有するいわゆるＥＤＴＡ分解能を有する微
生物を用いて、上記重金属キレートやキレート化剤で汚
染された土壌を修復する際に特に顕著な効果を発揮す
る。これらのキレート及びキレート化剤は、難分解性で
あるが故に、一般的な土壌修復法では分解されにくく、
本発明の方法、即ち担体によって微生物濃度を高めて、
かつ徐放によって微生物の栄養供給を制限した本発明の
土壌修復方法が効果を発揮する。また、本発明の土壌修
復法は、土壌細菌が生育しにくいフェノール類化合物で
汚染された土壌や、難分解性の界面活性剤で汚染された
土壌に対してフェーノール類分解性菌や界面活性剤分解
性菌 担持体を栄養物徐放剤と共に適用して土壌修復効
果を上げることができる。本発明の方法を汚染土壌に適
用する具体的な実施態様としては、微生物を担持させた
担体と、微生物の栄養物を徐放可能状態で含む栄養物徐
放剤から構成された土壌修復用微生物製剤の形態を採用
する方法が微生物管理し易く土壌修復操作も省力的であ
って実際的である。とくに徐放可能とする手段として包
括法を用いた栄養物徐放剤が実際的である。ここでいう
包括法は、JIS K3600で定義されている 通常の意味で用
いており、菌体などの生体触媒を高分子ゲルの中に取り
込んだり、膜などにマイクロカプセル化して閉じ込める
生体固定化方法で、その詳細は適当な成書、例えば日本
化学会編,化学便覧、応用化学編II、１１９７頁に記さ
れている。以下、本発明をさらに具体的に詳述する。

【００１６】

【発明の実施の形態】[土壌汚染物質分解能を有する微
生物]本発明の担体に保持させる土壌汚染物質分解能を
有する微生物は、汚染物質に対して生分解能を有する限
り、特に限定されないが、芳香族炭化水素系化合物（例
えば、フェノール類）有機溶剤（例えば、トルエン、ト
リクロロエチレンなど）、有機塩素化合物（例えばダイ
オキシン、ＰＣＢなど）等を分解するPseudomonas属に
属する細菌の他に、上記を含む各種有害物質の分解能を
有することが知られているMethylosinus、Methylomona
s、Methylobacterium、Hethylocystis、Alcaligenes、M
ycobacterium、Nitrosomonas、Xanthomonas、Spirillu
m、Vibrio、Bacterium、Achromobacter、Acinetobacte
r、Flavobacterium、Chromobacterium、Desulfovibri
o、Desulfotomaculum、Micrococcus、Sarcina、Bacillu
s、Streptomyces、Nocardia、Corynebacterium、Pseudo
bacterium、Arthrobacter、Brevibacterium、Saccharom
yces、Lactobacillusの各属に属する微生物等を用いる
ことがきる。

【００１７】また、ＥＤＴＡなどの金属キレート化剤や
それらが重金属と錯結合した重金属キレートなども重金
属による土壌汚染誘引物質であるが、これらを分解する
能力を有する微生物には、バチルス属に属する細菌とし
て、バチルス エディタビダス(Bacillus editabidus)
、バチルス サブチリス(Bacillus subtilis) 、バチル
スメガテリウム(Bacillus megaterium) 、バチルス ス
ファエリカス(Bacillus sphaericus) などがあげられ
る。これらは、例えば、Bacillus edtabidus-1（微工研
菌寄 第１３４４９号）、Bacillus subtilis NRIC 0068
、B. megaterium NRIC 1009 、B. sphaericus NRIC 10
13 などとして容易に入手することができる。

【００１８】別のＥＤＴＡ分解能を有する微生物として
は、特開昭５８−４３７８２号に記載のシュードモナス
属やアルカリゲネス属、Applid and Environmental Mic
robiology vol.56,p.3346-3353(1990)に記載のアグロバ
クテリウム属の菌種、Applidand Environmental Microb
iology vol.58,No.2,Feb.1992,p.671-676に記載のGram-
negative isolateが挙げられる。これらのうち、例え
ば、シュードモナス・エディタビダス（Pseudomonas ed
itabidus） は、Pseudomonas editabidus−１（微工研
菌寄第１３６３４号）として入手できる。

【００１９】さらに別のＥＤＴＡ分解能を有する微生物
としては、海洋性菌類であるバチルス・エディタビダス
（Bacillus editabidus）及びメソフィロバクター・エ
ディタビダス（Mesophilobacter editabidus） が挙げ
られる。この有機アミノカルボン酸類分解菌バチルス・
エディタビダス（Bacilluseditabidus）は、Bacillus e
ditabidus −Ｍ１（微工研菌寄第１４８６８号）及びBa
cillus editabidus −Ｍ２（微工研菌寄第１４８６９
号）の属する種である。又、有機アミノカルボン酸類分
解菌メソフィロバクター・エディタビダス（Mesophilob
acter editabidus）は、Mesophilobacter editabidus−
Ｍ３（微工研菌寄第１４８７０号）の属する種である。

【００２０】また、フェノール類やクレゾール類化合物
を分解する微生物としては、例えばＵＳＰ4352886号及
び4556638号に記載のシュウドモナスプチダcb-173(atcc
31800)を挙げることができる。これらの微生物の適用対
象となる汚染土壌は、例えば、フェノール樹脂工場排
水、クレゾール樹脂工場廃水、ビスフェノールＡなどか
ら得られるポリフェノール類の工場排水や、それらのフ
ェノール系樹脂を扱う製版工程やフォトレジスト形成工
程から排出されるフェノール類含有排水に汚染された土
壌である。界面活性剤分解性菌としては例えばＵＳＰ４
２７４９５４号に記載のシュウドモナスフルオレッセン
ス3p(atcc31483)を挙げることができる。これらの微生
物の適用対象となる汚染土壌は、例えば、アニオン系、
ノニオン系あるいはカチオン系の界面活性剤含有排水、
とりわけいわゆるハードな界面活性剤と呼ばれる生分解
性に乏しい界面活性剤含有排水、なかでもスルホン酸基
含有界面活性剤含有排水で汚染された土壌である。

【００２１】なお、投与微生物としては、既に単離され
ているもののほか、土壌等から目的に応じて新たにスク
リーニングしたものも利用でき、複数の株の混合系でも
よい。なお、スクリーニングにより分離したものの場合
それが未同定のものでも良い。

【００２２】[微生物担持用担体及び担持方法]次ぎに、
微生物担持用担体及び担持方法について説明する。微生
物担持用担体としては、微生物を 担持して汚染土壌に
投与できる材料であれば、いずれの公知材料をも使用で
きるが、有用微生物の効果的な担持という点から、担体
表面に微生物が強く吸着するもの、微生物を微小孔隙中
へ侵入させることにより保持力を高めることができるよ
うな多孔性のもの、ミクロ粒子が凝集して実質的に吸着
あるいは吸蔵表面を増大させたものが望ましい。具体的
には、セルロース、デキストラン、アガロースのような
多糖類；コラーゲン、ゼラチン、アルブミンなどの不活
化蛋白質；イオン交換樹脂、ポリビニルクロライドのよ
うな合成高分子化合物；セラミックスや多孔性ガラスな
どの無機物；寒天、アルギン酸、カラギーナンなどの天
然炭水化物；さらにはセルロースアセテート、ポリアク
リルアミド、ポリビニルアルコール、エポキシ樹脂、光
硬化性樹脂、ポリエステル、ポリスチレン、ポリウレタ
ンなど包括担体に用いられている高分子化合物などがあ
げられる。

【００２３】また、リグニン、デンプン、キチン、キト
サン、濾紙、木片等からなるものも利用できる。これら
の材料からなる担体は、微生物の保持が比較的穏やかで
増殖した微生物の脱離も容易であり、安価であり、場合
によっては投与微生物自体の栄養源、とくに徐放形態の
栄養源ともなりうるので好ましい。

【００２４】本発明においては、土壌汚染物質分解能を
有する微生物を担体に担持、すなわち固定化した状態に
して、土壌中に分散する。微生物固定化方法としては、
担体から生分解菌が流出しないように固定される方法な
らばその種類、形式を問わない。具体的な固定化法とし
ては、例えば、微生物が付着して生物膜を形成するよう
な担体を用いる付着生物膜法、担体と培地を混合して微
生物を培養する担持培養法、減圧下で孔隙内に微生物を
封入する方法、微生物をゲル内部に閉じ込めた包括固定
化法などを用いることができる。中でも、付着生物膜法
及び包括固定化法が好ましく，とりわけ包括固定化法が
優れている。

【００２５】付着微生物膜法の特徴は、微生物を高濃度
化することができ、処理効率を向上させることができ
る。また、通常は系外に洗い出されてしまうような増殖
速度が遅い菌を系内に留めることができる。また、微生
物が安定して棲息できる状態に保てることも特徴として
あげられる。

【００２６】包括固定化法の特徴は、菌体を高濃度に保
持できるため、処理効率を向上させることができ、増殖
の遅い菌を固定化できる。また、ｐＨ、温度等の条件変
化に対する耐性が広く、高負荷状態にも耐えることがで
きる。包括固定化法としては、アクリルアミド法、寒天
−アクリルアミド法、ＰＶＡ−ホウ酸法、ＰＶＡ−冷凍
法、光硬化性樹脂法、アクリル系合成高分子樹脂法、ポ
リアクリル酸ソーダ法、アルギン酸ナトリウム法、Ｋ−
カラギーナン法等、微生物を閉じ込めることができ、土
壌の中で微生物の活性を維持しつつ、物理的強度が大き
く長時間の使用に耐え得るものならば種類を問わない。

【００２７】包括固定化法の代表例としてアクリルアミ
ド法の場合の微生物固定化ゲルの調製法について説明す
る。固定化ゲルは、架橋剤（例えば、Ｎ，Ｎ'−メチレ
ンビスアクリルアミド）を含有したアクリルアミドモノ
マー溶液と細菌（ＭＬＳＳ ２０，０００ｐｐｍ程度の
濃縮菌体）とを懸濁し、重合促進剤（例えば、Ｎ，Ｎ，
Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルエチレンジアミン）、重合開始
剤（例えば、過硫酸カリウム）を添加し、３mm径の塩化
ビニル製チューブ等の成型形に入れ、２０℃で重合し、
重合終了後、成型形から押し出し、一定の長さに切断し
て得られる。固定化ゲルの表面の細孔は、細菌より小さ
いため、包括固定化した細菌はリークしにくく、内部で
増殖し、自己分解する。土壌中の汚染成分のみが細孔よ
りゲル内部に入り込み、内部の細菌により処理される。

【００２８】これらの固定化法のより具体的な方法につ
いては「微生物固定化法による排水処理」須藤隆一編著
（産業用水調査会）、稲森悠平の「生物膜法による排水
処理の高度・効率化の動向」，水質汚濁研究，vol.13,N
o.9,1990,p.563-574、稲森悠平らの「高度水処理技術開
発の動向・課題・展望」，用水と廃水，vol.34,No.10,1
992,P.829-835 などに記載されている。

【００２９】更に、担体自体を生分解性の材料から形成
することは、残留担体による２次汚染や投与微生物によ
る土壌生態系への影響が問題となる場合に、かかる問題
を回避できるという点から好ましい。このような生分解
性の担体としては、土壌の投与微生物による修復処理後
に徐々に分解されて消失するものが好ましい。このよう
な担体を用いれば、担体の消失によって土壌中に放出さ
れた投与微生物は、土壌中の優勢な土着微生物との競
争、原生動物の捕食、あるいは生育にとって苛酷な環境
下に置かれることによって駆逐されてその数が徐々に減
少し、やがて消滅し、その結果土壌中の生態系をもとの
状態に戻すことができる。

【００３０】土壌修復処理後に担体及び導入した微生物
が土壌中に残存することが問題となる場合には、担体を
バクテリアセルロース、セルロース・キトサン複合体の
フィルムや発泡体、微生物ポリエステル、ポリ乳酸、ポ
リラクトン、ポリグリオキシル酸、ポリリンゴ酸、デン
プン添加プラスチック、ポリカプロラクトン、（ヒドロ
キシ酪酸）−（ヒドロキシ吉草酸）共重合体、ポリアミ
ノ酸、多糖類ポリマー等の生分解性の高分子材料で少な
くとも一部を構成することで、保持させた微生物によっ
て、あるいは土壌中の微生物によって担体の全体または
基本形態が分解されるので、同時に導入した微生物も徐
々に死滅していき、このような問題を解消することが可
能となる。なお、この場合、担体の分解が土壌処理とほ
ぼ同時かそれより遅くなるように担体構成材料等を選択
する。好ましい生分解性担体としては、セルロース系担
体、例えばビスコパール（レンゴー（株）製）及びキチ
ンキト酸を用いた担体、例えばキトパール（富士紡績
（株）製）を挙げることができる。

【００３１】好ましい担体の形状としては、ほぼ球状、
ほぼ立方体状、ほぼ直方体状、円筒状あるいはチューブ
状であり、なかでも製造し易いほぼ球状、あるいは比面
積を大きくできるほぼ直方体状であることが好ましい。
担体の製造方法としては、既知の任意の方法を用いるこ
とができる。例えば微生物と担体物質(又はその前駆体)
の混合溶液を不溶解性液体中に滴下して液体中で液滴を
固化させて微生物 担持担体粒子の分散物を作る方法、
微生物と担体物質(又はその前駆体)の混合溶液を低温
化、ゲル化剤や固化剤の添加などの方法で固化させた
後、固化体を適当なサイズに裁断して微生物を 担持し
た直方体粒子を得る方法、微生物と担体物質(又はその
前駆体)の混合溶液を押し出しノズルから不溶解性液体
中に注入して液体中で固化させて微生物 担持担体の糸
状の固化物を得てこれを適当に裁断して円筒状粒子を作
る方法、またこのときの押し出し成形のダイを環状とし
て円環状（チューブ状）の微生物 担持担体粒子を得る
方法を挙げることができる。

【００３２】担体粒子の大きさは、外径０．１〜７０ｍ
ｍ、好ましくは０．５〜４０ｍｍ、より好ましくは１．
０〜１０ｍｍであり、粒子サイズが大きければ比面積が
少なくなって非効率となり、小さいとすぐに分解・消滅
して 担持体の意味をなさなくなる。したがって、適用
対象に応じて好ましいサイズが選択される。

【００３３】担体の含水率は、１〜９９質量％、好まし
くは５〜９０質量％、より好ましくは１０〜８５質量％
である。含水率が低すぎると微生物の生存に支障があ
り、高すぎると担体の物理的強度が低下して取り扱いの
際に支障をきたす。

【００３４】土壌修復の際の温度は、微生物の活動に適
した温度であることが必要で、３〜５０℃、好ましくは
１０〜４５℃、より好ましくは１８〜４０℃である。こ
の温度に維持するためには、状況に応じて温水を撒布又
は注入するなどの加温を行なってもよい。また、寒冷地
などでは、熱伝導体を土壌中に挿入して熱源からの伝熱
あるいは直接の通電によって加温することもできる。熱
伝導体としては、金属、セラミックスなど熱を伝えるこ
とができる物質であれば材質は問わない。

【００３５】土壌修復における土壌のｐＨは、通常２〜
１０であり、好ましくは３〜９、より好ましくは４〜
８．５であって、微生物の至適ｐＨであれば最も好まし
い。ｐHの測定方法は、土壌分析における通常のｐH測定
方法を用いるのがよく、基本的には土壌試料に２．５倍
の十分に脱気した純水を加えて十分攪拌したのち、水浸
液ｐHを測定する方法が採られる。

【００３６】微生物を担持した担体を土壌に投与する方
法は、散布処理、土壌との混合処理、等常法によって行
うことができる。また、土壌の比較的深部の投与には、
掘削孔を

【００３７】生分解性担体を用いた場合の担体自体の分
解速度は、その材質や性状等を選択することで制御可能
であり、例えば、材質を考慮して、孔隙の孔径、孔隙の
形態、担体の形状及び大きさ等を適宜選択する。本発明
においては、栄養物の供給が徐放形式で行なわれること
が必要なので、生分解性の担体の分解速度は、徐放条件
が保たれる範囲の遅い速度であることが必要である。な
お、これらの要件の選択に際して、分解速度に影響を及
ぼす因子として考慮すべきものとしては、担体を分解す
る微生物（土壌中の土着微生物または投与微生物）の種
類、量及び分解活性、あるいは処理土壌の体積等を挙げ
ることができ、どのくらいの期間で汚染物質が分解する
か、どのくらいの期間で担体が分解するかをあらかじめ
フィールド実験で確認し、その上で担体を設計すると良
い。

【００３８】[栄養物及びその徐放形態]次ぎに、栄養物
及びその徐放形態について説明する。栄養物としては、
炭素、窒素、リンを含むものが好ましく、微生物の生育
に適した培養液などが挙げられる。培養液としては、例
えば、肉汁、酵母エキス、麦芽エキス、バクトペプト
ン、グルコース、無機塩類、ミネラルなどが適当な割合
で混合したものが良く用いられているが、微生物の種類
に応じて適当な配合比のものを選べば良い。また、本発
明に用いる栄養物としては、上記の培養液以外にも有
機、無機栄養物を適当に含むものであれば、どのような
ものでも利用可能である。例えば、自然界より採取し
た、あるいは培養を加えた任意の微生物を乾燥、粉砕
し、粉砕微粉体を栄養物として用いてもよい。さらに、
分解菌を活性化する共存微生物を用いることもできる。
この共存微生物は、それ自身が分解菌の栄養源となった
り、その微生物が分泌する物質が分解菌を活性化する成
分を含んでいる.。好ましい微生物としては、いわゆる
ＥＭ菌として市販されている微生物混合体や光合成細菌
が挙げられる。とりわけ、Rhodepseudomonas ｃapsulat
aやThiobacilluse definitricansをはじめとする光合成
細菌が好ましい。

【００３９】本発明においては、栄養物が徐放形態で供
給されることが特徴であり、徐放化方法としては、栄養
物が担持物質から放出される濃度が、該微生物の生存・
活動維持に足りるが、土壌修復機能を低下させない低濃
度で濃度変動の少ない投与レベルに維持される方法であ
る限り、いかなる方法でもよい。具体的な徐放形態とし
ては、例えば、栄養物を徐放条件を満たすように粒子分
散した担持物質表面に吸着させる方法、より効果的には
栄養物を徐放条件を満たすように 担持物質表面に化学
吸着させる方法，栄養物を徐放性を満たす条件で担持物
質と混合造粒する方法、栄養物を徐放性を満たす条件で
担持物質に吸蔵させる方法、栄養物を徐放性を満たす条
件で担持物質、例えばゲル内部に閉じ込めた包括法など
を用いることができる。この中でも、包括法が特に優れ
ている。本明細書における「包括法」は、文部科学省
編、「学術用語辞典」及び日本化学会編「標準化学用語
辞典」に記載の「包括法」の定義に沿って用いられてい
る。

【００４０】包括法の特徴は、栄養物担持物質が栄養物
を高濃度に内包できて、その放出濃度を十分に低濃度に
制御できるので、微生物が汚染物質分解能を維持し、し
かも微生物自体の生活条件が確保され、且つその放出が
長時間にわたって安定に持続できるので、生物管理も容
易であることにある。包括法は、微生物を反応系内に固
定化するのに効果的な前記の微生物の包括固定化法と原
理的には同じで、実施形態も実質的に準拠している方法
である。栄養物を内包させる包括法の担持用材料として
は、アクリルアミド法、寒天−アクリルアミド法、ＰＶ
Ａ−ホウ酸法、ＰＶＡ−冷凍法、光硬化性樹脂法、アク
リル系合成高分子樹脂法、ポリアクリル酸ソーダ法、ア
ルギン酸ナトリウム法、Ｋ−カラギーナン法等、栄養物
を内包することができ、処理槽（リアクター）の中で微
生物の活性を維持できる程度に栄養物を放出し、効果的
且つ長時間にわたって安定に放出を持続するものならば
種類を問わない。

【００４１】包括法の代表例としてアクリルアミド法の
場合の栄養物ゲルの調製法について説明する。栄養物内
包ゲルは、架橋剤（例えば、Ｎ，Ｎ'−メチレンビスア
クリルアミド）を含有したアクリルアミドモノマー溶液
と栄養物（例えば ２０，０００ｐｐｍ程度）とを懸濁
し、重合促進剤（例えば、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメ
チルエチレンジアミン）、重合開始剤（例えば、過硫酸
カリウム）を添加し、３mm径の塩化ビニル製チューブ等
の成型形に入れ、２０℃で重合し、重合終了後、成型形
から押し出し、一定の長さに切断して得られる。栄養物
の放出を調節するには、ゲル化体の粒子サイズとゲル中
の内包濃度の調節などによって行なわれる。

【００４２】これらの包括法は、より具体的には、前記
した「微生物固定化法による排水処理」須藤隆一編著
（産業用水調査会）、稲森悠平の「生物膜法による排水
処理の高度・効率化の動向」，水質汚濁研究，vol.13,N
o.9,1990,p.563-574、稲森悠平らの「高度水処理技術開
発の動向・課題・展望」，用水と廃水，vol.34,No.10,1
992,P.829-835 などの微生物の包括固定化法に準拠して
行なうことができる。

【００４３】また、包括法とは別の徐放形態の栄養物担
持方法として、カラギーナン、アルギン酸などの、ゲル
状包括担体に栄養物を含有させて徐放効果を発揮させる
こともでき、その方法としては、１）栄養物を含む溶液
とゲル化材料（カラギーナン、アルギン酸など）を含む
溶液と混合した後、２）ゲル化とともに担体形状を制御
して担体を得る工程を含む方法などがある。

【００４４】さらに別の徐放形態の栄養物担持方法とし
ては、生分解速度が遅い天然高分子を栄養物質兼担持物
質として用いることもできる。例えば、リグノセルロー
ス系やキチン系の天然高分子を、適当な徐放速度が得ら
れるように１０μｍ〜３mm程度に粉砕して投与してもよ
い。

【００４５】栄養物を内包した担持物質を土壌に投与す
る方法は、散布処理、土壌との混合処理、土壌の比較的
深部の投与には、掘削孔を設けてそこから投与・分散さ
せる方法など前記した微生物担体の投与と同じ方法が利
用できる。また、徐放条件が満たされるなら、微生物担
体と混合して投与してもよい。

【００４６】微生物を担持した担体と徐放状態で栄養物
を供給する別の実際的な形態としては、微生物担持担体
と徐放可能状態の微生物用の栄養物とを含む複合型の製
剤を汚染土壌に投与する方法が挙げられる。微生物製剤
は、目的とする微生物をバイオリアクター中で培養して
通常担体に担持させた形で製剤として供給される。本発
明においては、そのような微生物製剤にさらに上記した
徐放可能状態の栄養物を加えた構成とした複合型の微生
物製剤であって、本発明の対象としている難分解性汚染
物質で汚染された汚染土壌の修復には微生物管理の安定
化、作業の簡単化において優れている。微生物担持担体
としては、上記した担体のほかに土壌浄化用微生物製剤
BiotrackDOLや SurfCleanなど,界面活性剤で汚染された
土壌にはDC1738CW、また、メチルフェノール類を含むフ
ェノール類やクレゾール類化合物を分解する能力を有す
る製剤としてDC1002CG及びDC1738CWなどの製剤（いずれ
もサイブロンケミカルズ日本(株)）を用いることができ
る。微生物担持担体と組み合わせる徐放状態の栄養物供
給体としては、上記した各手段で徐放化した栄養物のい
ずれをも対象とする汚染土壌に応じて適用できる。

【００４７】

【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、これらは本発明の範囲をなんら限定するもの
ではない。なお、実施例中の「菌体」は、本明細書中に述
べた「微生物」に分類される「菌体」であって、実質的に
同義に解してよい。

【００４８】実施例１ 特開平6-261771号公報記載のEDTA分解菌バチルス・エデ
ィタビダス（Bacilluseditabidus-1、微工研菌寄 第13
449号）の１白金耳を、ポリペプトン(極東製薬工業)
０．５％、酵母エキス（和光純薬工業（株）製）０．１
％及びNH4Fe(III)EDTA（和光純薬工業（株）製）０．０
１％（いずれも質量％）を含む1/30Mリン酸緩衝液（ｐH
５．８）の基本培地２００ｍｌで３７℃にて１日静置培
養し、本菌体を高濃度に含有する培養物を得た。この培
養物を遠心分離により、本菌株の湿菌体と培養上清に分
離した。日本薬局方で純度規定された精製水による洗浄
と遠心分離による湿菌体の回収を３回繰り返し、培養上
清を十分に除去した洗浄湿菌体を得た。これを８０ｍｌ
の精製水に再分散し、さらに再分散液に微生物保持担体
として修飾ビスコパールAZ4200-cc（レンゴー（株）
製）１０ｇを加え、1時間振盪攪拌した後、ろ過、洗浄
により未担持の菌体を除去した。ここで得た菌体担持体
をＡとする。

【００４９】一方で、上記操作にて精製水の代わりに上
記培地を用いた以外は上記と同じ操作で調製した菌体担
持体を得た。得られた菌体担持体を菌体担持体Ｂとす
る。この菌体担持体Bには栄養源である培地成分が含有
されている。

【００５０】また、菌体担持体Ａの調製操作において、
担体を加える直前の段階の洗浄湿菌体を洗浄湿菌体Cと
した。

【００５１】上記基本培地１５０ｍｌに寒天を３％濃度
となるように加え、加熱溶解後、冷却した寒天ゲルを凍
結乾燥後、ボールミルで質量平均粒子径１０μｍまで粉
砕し、栄養物徐放剤Dを得た。ここで調製したＡ〜Ｄ
は、下記汚染土壌１試料（２００ｇ）への投与分量に相
当するものである。

【００５２】富士写真フイルム（株）足柄工場内の緑地
帯から採取した土壌を室温で１週間放置乾燥後、２Kgを
写真処理用（４ツ切りサイズ）バットに均一に広げ、NH
4Fe(III)・EDTA（和光純薬工業（株）製）１％溶液１０
０ｍｌを噴霧後、良く混合した。この調製汚染土壌を室
温にて１週間放置乾燥した。上記のＥＤＴＡで汚染され
た土壌各２００ｇに、表１に示すように上記で調製した
各菌体と栄養源を接種（土壌に分散する際１５０ｍｌの
精製水または基本培地液を使用し良く混合した）し、２
５℃のもとで、５０日間に渡ってEDTAの分解状況を観測
した。容器はコニカルビーカーを用い、質量測定により
求めた蒸発水分量に相当する精製水を５日おきに添加調
整した。

【００５３】観測は、各試料から土壌を５ｇずつ採取
し、５０ｍｌの精製水に懸濁後、超音波洗浄器にて良く
分散・洗浄したのち、孔径０．４５μｍのミクロフィル
ターでろ過した液についてイオンクロマトグラフィーに
より溶存するEDTA量を定量する方法で行った。試験結果
を図１に示す。

【００５４】

【表１】

【００５５】図１が示すように、基本培地で培養した比
較例の試料３，６及び９は、いずれも５０日の試験時間
後でも高い残留ＥＤＴＡ濃度を示しており、また、栄養
源を投与しなかった比較例の試料１，４及び７はさらに
若干高い残留ＥＤＴＡ濃度を示しており、いずれもＥＤ
ＴＡの生分解はほとんど起こらないか、起こっても生分
解率が５０％に満たない不完全なものであった。一方，
菌体を担体に担持させ，その上で栄養物を徐放剤Ｄの形
で投与した本発明例の試料２及び５は、いずれも試験期
間内にＥＤＴＡ残留濃度が実質的に検出されなくなるま
で分解された。この２例は、菌体が栄養供給を制限され
た条件のもとで、ＥＤＴＡ分解効果を持続して生存して
いることを示したいる。また、栄養物を徐放剤Ｄの形で
投与しても、菌体を担体に担持させない試料８は、試験
期間中のＥＤＴＡ残留濃度の低下は少なった。以上の試
験の結果、生分解性微生物が担持されており、しかも栄
養源が徐放状態で与えられる本発明の態様が、土壌中の
ＥＤＴＡを効果的に生分解できることが示された。な
お、参考までに付言するなら、本実施例に用いた担体ビ
スコパール１ＡＺ４２００−ｃｃは、生分解性であっ
て、試験後の汚泥から徐々に分解消滅する性質のもので
ある。

【００５６】実施例２ 実施例１において使用したEDTA分解菌バチルス・エディ
タビダス（Bacilluseditabidus-1、微工研菌寄 第1344
9号）を特開平６−３３５３８６号公報に記載のEDTA分
解菌シュードモナス・エディタビダス（Pseudomonas ed
itabidus -1、微工研菌寄 第13634号）に変更した以外
は、実施例１と同じ試験を行なった。生分解菌の種類を
変更した以外は実施例１の９試料と同じ操作で得られた
実施例２の９水準の各試料からえられた試験結果は、Ｅ
ＤＴＡ残存濃度値の差はあっても、９試料間の相対的な
差は対応する実施例１の９試料間の差異と同じであり、
その意味で、実質的には実施例１の各試料間の差異と同
じであった。

【００５７】実施例３ 実施例１において使用したEDTA分解菌バチルス・エディ
タビダス（Bacillus editabidus-1、微工研菌寄 第134
49号）を特開平８−２８９７７８号公報に記載のEDTA分
解菌バチルス・エディタビダス（Bacillus editabidus-
Ｍ1、微工研菌寄 第1４８６８号）に変更した以外は、
実施例１と同じ試験を行なった。生分解菌の種類を変更
した以外は実施例１の９試料と同じ操作で得られた実施
例3の９水準の各試料からえられた試験結果は、ＥＤＴ
Ａ残存濃度値の差はあっても、９試料間の相対的な差は
対応する実施例１の９試料間の差異と同じであり、その
意味で、実質的には実施例１の各試料間の差異と同じで
あった。

【００５８】実施例４ 実施例１において使用した微生物保持担体、修飾ビスコ
パールAZ4200-ccをキチンキト酸を基体としたキトパー
ル（富士紡績（株）製）に変更した以外は、実施例１と
同じ試験を行なった。微生物保持担体の種類を変更した
以外は実施例１の９試料と同じ操作で得られた実施例４
の９水準の各試料から得られた試験結果は、ＥＤＴＡ残
存濃度値の差はあっても、９試料間の相対的な差は対応
する実施例１の９試料間の差異と同じであり、その意味
で、実質的には実施例１の各試料間の差異と同じであっ
た。

【００５９】実施例５ 実施例１において、菌体担持体Ａの調製に際して用いた
修飾ビスコパールＡＺ４２００−ccを等量のセルロース
微粉末担体（旭化成社製マイクロキャリア）に変更した
以外は、菌体担持体Ａの調製と同じ操作によりセルロー
ス粉末担持の菌体担持体を作製した。これを菌体担持体
Ｅとする。一方、１リットル精製水に、酵母エキス（和
光純薬工業（株）製）０．１質量％、Ｎａ₂ＨＰＯ₄
６．２ｇ、ＫＨ₂ＰＯ₄ ３．０ｇ、ＮａＣｌ ０．５ｇ、
ＮＨ₄Ｃｌ １．０ｇを溶解させたｐＨ７．０の水溶液５
００ｍｌに上記セルロース微粉末３．０ｇを加えた後、
蒸発濃縮と凍結乾燥によって粉末化し、質量平均粒子系
１０μｍに粉砕して栄養物徐放剤Ｆを得た。この徐放剤
は無機栄養物を徐放するほか、セルロース粉末分解物と
セルロースに吸蔵された酵母エキスも徐放される。実施
例１の試料２の菌体担持体Ａを菌体担持体Ｅに変更し、
徐放剤Dを徐放剤Fに変更した以外は、試料２と同じ操作
でＥＤＴＡ除去操作を行った。５０日間の試験ののち、
汚染土壌からＥＤＴＡは検出されなかった。

【００６０】なお、比較試験として上記の栄養物徐放剤
Ｆの作製において、酵母エキス（和光純薬工業（株）
製）の量を０．１質量％、から０．５％に増量した栄養
物 担持剤を作製し、これを栄養物 担持剤Ｇとした。栄
養物徐放剤Ｆの代わりに栄養物担持剤Ｇを使用した以外
は、上記実施例と同じ操作で５０日間の試験を行なった
ところ、ＥＤＴＡの残留率は３０日時点で６６％、５０
日において３５％であった。 栄養物の供給が多いとＥ
ＤＴＡが分解されにくく、栄養物が消費されてきた試験
期間の後半において、ＥＤＴＡ分解速度が高くなってい
ることを示した。

【００６１】実施例６ Ｎｏｖｏｚｙｍｅ社から市販されているフェノール分解
菌製剤Ｂｉ−Ｃｈｅｍ１００２ＣＧをＰ１培地（組成：
酵母エキス０．０５％、フェノール０．０５％、リン酸
二水素ナトリウム０．６２％、リン酸二水素カリウム
０．３％、塩化ナトリウム０．０５％、塩化アンモニウ
ム０．１％、ｐＨ７．０）３００ｍｌを用い３４℃で２
日間振盪培養し、フェノール分解菌体を高濃度に含有す
る培養物を得た。これを遠心分離により、本菌株の湿菌
体と培養上清に分離した。精製水による洗浄と遠心分離
による湿菌体の回収を３回繰り返し、培養上清を十分に
除去した洗浄湿菌体Ａを得た。

【００６２】３７℃の精製水１６０ｍｌにκカラギーナ
ンを４％濃度となるように溶解し、その溶解液に上記Ａ
の１／２量を加え、均一になるようによく攪拌、分散し
た。１リットルのビーカーに２％ＫＣｌ溶液を２０℃に
保ち、そこに上記κカラギーナン溶液を滴下した。κカ
ラギーナンは３７℃では液状であるが、２０℃ではゲル
化するので、この操作により、フェノール分解菌を包括
固定したビーズが得られる。このビーズをＰ１培地中に
入れ、１日培養して、ビーズの表層部位に菌体が密集増
殖した活性の高いビーズを得た。更にビーズを精製水で
よく洗浄し、余剰の培地成分、および固定化されていな
い菌体を除去したビーズＢを得た。菌体が生育するのに
必要な成分の包括化は、フェノールを除外したＰ１培地
１５０ｍｌを３７℃に加熱し、κカラギーナンを４％濃
度となるように添加溶解し、この溶液を２０℃の２％Ｋ
Ｃｌ溶液に滴下する方法で行った。この方法で上記の菌
体を包括したビーズと同様の形状のビーズＣが得られ
た。

【００６３】富士写真フイルム（株）足柄工場内の緑地
帯から採取した土壌を室温で１週間放置乾燥後、１．５
Ｋｇを写真処理用（４ツ切りサイズ）パットに均一に広
げ、２％フェノール水溶液１００ｍｌを噴霧し良く混合
した。この調製汚染土壌を室温にて１週間放置乾燥し
た。上記汚染土壌各２００ｇに表２のように菌体、栄養
源を接種（土壌に分散する際１００〜１５０ｍｌの精製
水を使用し、良く混合した）し、２５℃、３０日間に渡
ってフェノールの分解状況を観測した。容器はコニカル
ビーカーを用い、質量測定により蒸発水分量に相当する
精製水を５日おきに添加調整した。生分解進行の観測
は、各試料から土壌を５ｇずつ採取し、５０ｍｌの精製
水に懸濁後、超音波洗浄器にて良く分散、洗浄したもの
を孔径０．４５μｍのミクロフィルターでろ過した液に
ついて液体クロマトグラフィーによりフェノール量を定
量することによって行った。

【００６４】なお、表２において菌体の欄のａは上記Ａ
の１／２０量、ｂは上記Ｂの１／１０量であり、栄養源
の接種の欄におけるＣは５０ｇを使用した。

【００６５】

【表２】

【００６６】試験結果は、フェノール残存率（％）を生
分解効果の尺度として表３に示す。

【００６７】

【表３】

【００６８】実施例７ 実施例１に述べた菌体担持体Ａと栄養物徐放剤Ｄとを質
量比１：１で混合して水不透過性の容器に充填して菌体
担持担体と栄養物徐放剤の複合微生物製剤を調製した。
一方，比較用として実施例１の菌体担持担体Ｂを用い
た。この菌体担持体Bには栄養源である培地成分が含有
されている。

【００６９】富士写真フイルム（株）足柄工場内の緑地
帯から採取した土壌を室温で１週間放置乾燥後、２Kgを
写真処理用（４ツ切りサイズ）バットに均一に広げ、NH
4Fe(III)・EDTA（和光純薬工業（株）製）１％溶液１０
０ｍｌを噴霧後、良く混合した。この調製汚染土壌を室
温にて１週間放置乾燥した。上記のＥＤＴＡで汚染され
た土壌各２００ｇに、上記複合微生物製剤及び菌体担持
担体Ｂとをそれぞれ接種（土壌に分散する際１５０ｍｌ
の精製水を使用し良く混合した）し、２５℃のもとで、
実施例１と同じ試料の採取，分析方法で５０日間に渡っ
てEDTAの分解状況を観測した。

【００７０】本発明例の微生物担体と徐放化した栄養物
源とを含んだ微生物製剤は、汚染土壌中のＥＤＴＡを試
験期間内にＥＤＴＡ残留濃度が実質的に検出されなくな
るまで分解した。また、その分解速度は実施例１の試料
２と実質的にほぼ同等であった。一方、比較例に用いた
菌体Ｂでは、５０日間の試験時間後でも高い残留ＥＤＴ
Ａ濃度を示しており、実施例１の試料４の結果を再現し
ていた。すなわち、栄養物徐放機構を組み込んだ微生物
製剤は、微生物担体と徐放化した栄養物源とを汚染土壌
に別個に投与した場合と同等の持続性のある土壌修復能
力を有していることが示された。また、比較例（菌体担
持体Ｂ）の結果から、栄養物が含まれていても徐放機構
を有する形でなければ、汚染物質の分解除去能力を有し
ないことも示された。

【００７１】

【発明の効果】土壌汚染物質の分解能を有する微生物を
担体に担持させて汚染された土壌中に存在させ、かつ微
生物の栄養物を徐放状態で投与する本発明の汚染土壌修
復方法は、栄養物の過剰供給によって土壌修復能が低下
することもなく、逆に栄養不足によって微生物が減少す
ることもなく、効果的に汚染途上を修復することが出来
る。また、本発明の上記の効果は、微生物担持担体と微
生物の栄養物を徐放状態で含む栄養源とを併せ有する微
生物製剤の形態においても発揮させることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１の９試料の試験結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B033 NA01 NA12 NB02 NB54 NB62 NC06 ND04 ND11 4B065 AA16X AA43X AA44X AC20 BB04 BB06 BC31 BD05 BD38 CA56 4D004 AA41 AB03 AB05 AB06 AB07 CA18 CC08

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 土壌汚染物質の分解能を有する微生物を
   担体に担持させて汚染された土壌中に存在させ、該微生
   物の栄養物を徐放可能の状態で該土壌に投与することを
   特徴とする汚染土壌修復方法。
2. 【請求項２】 担体が生分解性であることを特徴とする
   請求項１に記載の汚染土壌修復方法。
3. 【請求項３】 栄養物を担持物質に包括することによっ
   て徐放可能の状態としたことを特徴とする請求項１又は
   ２に記載の汚染土壌修復方法。
4. 【請求項４】 栄養物の担持物質が生分解性であること
   を特徴とする請求項３に記載の汚染土壌修復方法。
5. 【請求項５】 土壌汚染物質の分解能を有する微生物が
   ＥＤＴＡ分解能、フェノール類分解能及び界面活性剤分
   解能の少なくとも一つを有する微生物であることを特徴
   とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の汚染土壌修
   復方法。
6. 【請求項６】 土壌汚染物質の分解能を有する微生物を
   担持させた担体と、該微生物の栄養物を徐放可能状態で
   含む栄養物徐放剤とからなることを特徴とする土壌修復
   用微生物製剤。