JP2003000276A - ローソニア・イントラセルラリス・ワクチン - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ブタ増殖性腸疾患の診断，予防，治療法の開発
【解決手段】新規ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タ
ンパク質をコードする核酸配列に関する。更に、これら
の配列を含むＤＮＡ断片、組換えＤＮＡ分子および生組
換え運搬体に関する。また、そのような核酸配列、ＤＮ
Ａ断片、組換えＤＮＡ分子および生組換え運搬体を含む
宿主細胞に関する。更に、これらのヌクレオチド配列に
コードされるタンパク質に関する。また、ローソニア・
イントラセルラリス感染に対するワクチンおよびその製
造方法に関する。最後に、ローソニア・イントラセルラ
リスＤＮＡの検出、ローソニア・イントラセルラリス抗
原およびローソニア・イントラセルラリスに対する抗体
の検出のための診断試験に関する。
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タ
ンパク質をコードする核酸配列に関する。更に、これら
の配列を含むＤＮＡ断片、組換えＤＮＡ分子および生組
換え運搬体に関する。また、そのような核酸配列、ＤＮ
Ａ断片、組換えＤＮＡ分子および生組換え運搬体を含む
宿主細胞に関する。更に、これらのヌクレオチド配列に
コードされるタンパク質に関する。また、ローソニア・
イントラセルラリス感染に対するワクチンおよびその製
造方法に関する。最後に、ローソニア・イントラセルラ
リスＤＮＡの検出、ローソニア・イントラセルラリス抗
原およびローソニア・イントラセルラリスに対する抗体
の検出のための診断試験に関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規ローソニア・
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする核酸配
列、これらの配列を含むＤＮＡ断片、組換えＤＮＡ分子
および生組換え運搬体、そのような核酸配列、ＤＮＡ断
片、組換えＤＮＡ分子および生組換え運搬体を含む宿主
細胞、これらのヌクレオチド配列にコードされるタンパ
ク質、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎ
ｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対する
ワクチン、その製造方法、ならびにローソニア・イント
ラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒｉｓ）の検出のための診断手段に関する。
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする核酸配
列、これらの配列を含むＤＮＡ断片、組換えＤＮＡ分子
および生組換え運搬体、そのような核酸配列、ＤＮＡ断
片、組換えＤＮＡ分子および生組換え運搬体を含む宿主
細胞、これらのヌクレオチド配列にコードされるタンパ
ク質、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎ
ｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対する
ワクチン、その製造方法、ならびにローソニア・イント
ラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒｉｓ）の検出のための診断手段に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】ブタ
増殖性腸疾患（ＰＰＥまたはＰＥ）は、世界中の現代の
養豚業における重要な疾患となっている。該疾患は、成
長中の家畜群の１５％〜５０％を冒し、確認された問題
家畜群における個々の動物の３０％までを冒す。現在、
余分な飼料および施設時間経費における年間経済的損失
は、罹患ブタ１匹当たり５〜１０米ドルであると見積も
られている。ＰＰＥは、多種多様な臨床的徴候（死亡、
衰弱および貧血動物、漿液性、濃い又は真っ赤な下痢、
機能低下、食欲低下および運動に対する抵抗、成長遅延
ならびにＦＣＲの増加）の慢性および急性状態の一群で
ある。しかし、２つの一貫した特徴がある。第１に、剖
検時に認められるにすぎない病理学的変化として、小腸
および結腸粘膜の肥厚がある。第２に、罹患腸の小腸上
皮細胞内の細胞質内小湾曲細菌の存在が挙げられる。現
在、これらの細菌がＰＰＥの病原体であると確認されて
おり、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎ
ｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）と称されてい
る。
増殖性腸疾患（ＰＰＥまたはＰＥ）は、世界中の現代の
養豚業における重要な疾患となっている。該疾患は、成
長中の家畜群の１５％〜５０％を冒し、確認された問題
家畜群における個々の動物の３０％までを冒す。現在、
余分な飼料および施設時間経費における年間経済的損失
は、罹患ブタ１匹当たり５〜１０米ドルであると見積も
られている。ＰＰＥは、多種多様な臨床的徴候（死亡、
衰弱および貧血動物、漿液性、濃い又は真っ赤な下痢、
機能低下、食欲低下および運動に対する抵抗、成長遅延
ならびにＦＣＲの増加）の慢性および急性状態の一群で
ある。しかし、２つの一貫した特徴がある。第１に、剖
検時に認められるにすぎない病理学的変化として、小腸
および結腸粘膜の肥厚がある。第２に、罹患腸の小腸上
皮細胞内の細胞質内小湾曲細菌の存在が挙げられる。現
在、これらの細菌がＰＰＥの病原体であると確認されて
おり、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎ
ｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）と称されてい
る。
【０００３】何年にもわたり、ローソニア・イントラセ
ルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｓ）は実質的に全ての動物［サル、ウサギ、フェ
レット、ハムスター、キツネ、ウマ、ならびにダチョウ
およびエモー（ｅｍｏｅ）などの多様な他の動物を含
む］を冒すことが判明している。ローソニア・イントラ
セルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒｉｓ）は、真核生物の小腸上皮細胞内でのみ増殖
するグラム陰性有鞭毛細菌であり、無細胞培養は記載さ
れていない。ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）は、該
細胞内で維持され増殖するためには、分裂するクリプト
細胞に侵入しなければならない。該細菌は細胞膜に結合
し、侵入小胞を介して小腸上皮細胞に素早く侵入する。
ついでこれは急速（３時間以内）に分解し、該細菌は該
細胞質内で自由に繁殖し増殖する。該細菌が感染細胞の
成熟を妨げ、分裂を継続し、形成不全クリプト細胞を形
成するメカニズムは依然として不明である。
ルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｓ）は実質的に全ての動物［サル、ウサギ、フェ
レット、ハムスター、キツネ、ウマ、ならびにダチョウ
およびエモー（ｅｍｏｅ）などの多様な他の動物を含
む］を冒すことが判明している。ローソニア・イントラ
セルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒｉｓ）は、真核生物の小腸上皮細胞内でのみ増殖
するグラム陰性有鞭毛細菌であり、無細胞培養は記載さ
れていない。ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）は、該
細胞内で維持され増殖するためには、分裂するクリプト
細胞に侵入しなければならない。該細菌は細胞膜に結合
し、侵入小胞を介して小腸上皮細胞に素早く侵入する。
ついでこれは急速（３時間以内）に分解し、該細菌は該
細胞質内で自由に繁殖し増殖する。該細菌が感染細胞の
成熟を妨げ、分裂を継続し、形成不全クリプト細胞を形
成するメカニズムは依然として不明である。
【０００４】ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の感
染、該疾患の治療および予防に関する現在の知見は、ロ
ーソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉ
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）を無細胞培地内で培養
できないことにより妨げられている。ラット小腸上皮細
胞内でローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎ
ｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）を共培養する
ことに成功したという報告があるが、ローソニア・イン
トラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒｉｓ）に対するワクチンが必要とされている
ことが明らかであるにもかかわらず、これはそのような
ワクチンの開発につながっていない。
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の感
染、該疾患の治療および予防に関する現在の知見は、ロ
ーソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉ
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）を無細胞培地内で培養
できないことにより妨げられている。ラット小腸上皮細
胞内でローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎ
ｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）を共培養する
ことに成功したという報告があるが、ローソニア・イン
トラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒｉｓ）に対するワクチンが必要とされている
ことが明らかであるにもかかわらず、これはそのような
ワクチンの開発につながっていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】驚くべきことに、ローソ
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）が、ローソニア・イントラ
セルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒｉｓ）に対する防御免疫を単独で又は一緒になっ
て誘導しうる３つの新規外膜タンパク質（ＯＭＰ）を産
生することが、本発明において見出された。
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）が、ローソニア・イントラ
セルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒｉｓ）に対する防御免疫を単独で又は一緒になっ
て誘導しうる３つの新規外膜タンパク質（ＯＭＰ）を産
生することが、本発明において見出された。
【０００６】それらの３つの新規外膜タンパク質を、１
９／２１ｋＤ、３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質とす
る。該１９／２１ｋＤタンパク質は１９ｋＤ形および２
１ｋＤ形の２つの異なる形態で見出され、一方のタンパ
ク質は他方のタンパク質の修飾体であり、両者は同一の
アミノ酸配列を含む。
９／２１ｋＤ、３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質とす
る。該１９／２１ｋＤタンパク質は１９ｋＤ形および２
１ｋＤ形の２つの異なる形態で見出され、一方のタンパ
ク質は他方のタンパク質の修飾体であり、両者は同一の
アミノ酸配列を含む。
【０００７】該３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質のア
ミノ酸配列は、配列識別番号配列番号２および４で示さ
れる。これらの２つのタンパク質をコードする遺伝子の
配列を決定し、それらの核酸配列を配列識別番号配列番
号１および３に示す。該１９／２１ｋＤタンパク質は、
それぞれ７、１２および１２アミノ酸の３つの内部アミ
ノ酸配列により特徴づけられる。これらのアミノ酸配列
を配列番号５、６および７に示す。
ミノ酸配列は、配列識別番号配列番号２および４で示さ
れる。これらの２つのタンパク質をコードする遺伝子の
配列を決定し、それらの核酸配列を配列識別番号配列番
号１および３に示す。該１９／２１ｋＤタンパク質は、
それぞれ７、１２および１２アミノ酸の３つの内部アミ
ノ酸配列により特徴づけられる。これらのアミノ酸配列
を配列番号５、６および７に示す。
【０００８】多数の異なる核酸配列が１つの同一タンパ
ク質をコードしうることが、当技術分野においてよく知
られている。この現象は、一般には、アミノ酸をコード
する各トリプレットの２番目および特に３番目の塩基に
おける、ゆらぎとして知られている。この現象は、同一
タンパク質を尚もコードする２つの核酸配列に関する約
３０％の非相同性を引き起こす。したがって、約７０％
の配列相同性を有する２つの核酸配列は尚も１つの同一
タンパク質をコードしうる。
ク質をコードしうることが、当技術分野においてよく知
られている。この現象は、一般には、アミノ酸をコード
する各トリプレットの２番目および特に３番目の塩基に
おける、ゆらぎとして知られている。この現象は、同一
タンパク質を尚もコードする２つの核酸配列に関する約
３０％の非相同性を引き起こす。したがって、約７０％
の配列相同性を有する２つの核酸配列は尚も１つの同一
タンパク質をコードしうる。
【０００９】
【発明の実施の形態】したがって、１つの実施形態は、
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコード
する核酸配列およびそのタンパク質の免疫原性断片をコ
ードするその核酸配列の一部であって、配列番号１の核
酸配列に対して少なくとも７０％の相同性レベルを有す
る核酸配列またはその一部に関する。
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコード
する核酸配列およびそのタンパク質の免疫原性断片をコ
ードするその核酸配列の一部であって、配列番号１の核
酸配列に対して少なくとも７０％の相同性レベルを有す
る核酸配列またはその一部に関する。
【００１０】好ましくは、ローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）タンパク質をコードする核酸配列または該核酸配
列の一部は、配列番号１の核酸配列に対して少なくとも
８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の相
同性を有する。より一層好ましいのは、９８％または更
には１００％の相同性レベルである。
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）タンパク質をコードする核酸配列または該核酸配
列の一部は、配列番号１の核酸配列に対して少なくとも
８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の相
同性を有する。より一層好ましいのは、９８％または更
には１００％の相同性レベルである。
【００１１】また、この実施形態は、ローソニア・イン
トラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする核酸配列および
そのタンパク質の免疫原性断片をコードするその核酸配
列の一部であって、配列番号３の核酸配列に対して少な
くとも７０％の相同性レベルを有する核酸配列またはそ
の一部に関する。
トラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする核酸配列および
そのタンパク質の免疫原性断片をコードするその核酸配
列の一部であって、配列番号３の核酸配列に対して少な
くとも７０％の相同性レベルを有する核酸配列またはそ
の一部に関する。
【００１２】好ましくは、ローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）タンパク質をコードする核酸配列または該核酸配
列の一部は、配列番号３の核酸配列に対して少なくとも
８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の相
同性を有する。より一層好ましいのは、９８％または更
には１００％の相同性レベルである。
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）タンパク質をコードする核酸配列または該核酸配
列の一部は、配列番号３の核酸配列に対して少なくとも
８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の相
同性を有する。より一層好ましいのは、９８％または更
には１００％の相同性レベルである。
【００１３】ヌクレオチド相同性のレベルは、コンピュ
ータープログラム「ＢＬＡＳＴ２ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ」
を用いて、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ
／ｂｌａｓｔ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｂｌ２．ｈｔｍｌ．にお
いて見出されるサブプログラム「ＢＬＡＳＴＮ」を選択
することにより測定することができる。このプログラム
に関する参考文献としては、Ｔａｔｉａｎａ Ａ，Ｔａ
ｔｕｓｏｖａ，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ ＦＥ
ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１７４：２
４７−２５０（１９９９）が挙げられる。用いるパラメ
ーターは以下のデフォルトパラメーターである：マッチ
に関するリウォード（ｒｅｗａｒｄ）：＋１、ミスマッ
チに関するペナルティー：−２、オープン・ギャップ：
５、伸長ギャップ：２、ギャップｘ ドロップオフ（ｄ
ｒｏｐｏｆｆ）：５０。
ータープログラム「ＢＬＡＳＴ２ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ」
を用いて、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ
／ｂｌａｓｔ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｂｌ２．ｈｔｍｌ．にお
いて見出されるサブプログラム「ＢＬＡＳＴＮ」を選択
することにより測定することができる。このプログラム
に関する参考文献としては、Ｔａｔｉａｎａ Ａ，Ｔａ
ｔｕｓｏｖａ，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ ＦＥ
ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１７４：２
４７−２５０（１９９９）が挙げられる。用いるパラメ
ーターは以下のデフォルトパラメーターである：マッチ
に関するリウォード（ｒｅｗａｒｄ）：＋１、ミスマッ
チに関するペナルティー：−２、オープン・ギャップ：
５、伸長ギャップ：２、ギャップｘ ドロップオフ（ｄ
ｒｏｐｏｆｆ）：５０。
【００１４】また、本発明のこの実施形態の１つの形態
は、配列番号２に示すアミノ酸配列を含む新規ローソニ
ア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質またはそのポリペ
プチドの免疫原性断片をコードする核酸配列に関する。
は、配列番号２に示すアミノ酸配列を含む新規ローソニ
ア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質またはそのポリペ
プチドの免疫原性断片をコードする核酸配列に関する。
【００１５】その実施形態の好ましい形態においては、
その核酸配列は、配列番号１に記載の核酸配列に対して
少なくとも９０％、より好ましくは９５％、９８％また
は更には１００％の相同性を有する。
その核酸配列は、配列番号１に記載の核酸配列に対して
少なくとも９０％、より好ましくは９５％、９８％また
は更には１００％の相同性を有する。
【００１６】また、本発明のこの実施形態の１つの形態
は、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する新規ローソ
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該ポリペ
プチドの免疫原性断片をコードする核酸配列に関する。
は、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する新規ローソ
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該ポリペ
プチドの免疫原性断片をコードする核酸配列に関する。
【００１７】その実施形態の好ましい形態においては、
その核酸配列は、配列番号３に記載の核酸配列に対して
少なくとも９０、より好ましくは９５％、９８％または
更には１００％の相同性を有する。
その核酸配列は、配列番号３に記載の核酸配列に対して
少なくとも９０、より好ましくは９５％、９８％または
更には１００％の相同性を有する。
【００１８】本発明は、新規ローソニア・イントラセル
ラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｉｓ）３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質をコードす
る核酸配列を開示するものであるため、これらのタンパ
ク質を十分な量で得ることが今や初めて可能となった。
これは、例えば、該タンパク質をコードする遺伝子を発
現させるための発現系を用いて行うことができる。した
がって、より好ましい実施形態において、本発明は、本
発明の核酸配列を含むＤＮＡ断片に関する。そのような
ＤＮＡ断片は、例えば、本発明の核酸配列がクローニン
グされるプラスミドでありうる。そのようなＤＮＡ断片
は、例えば、後記のとおり、プライマーとして使用して
ＤＮＡ量を増加させるのに有用である。
ラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｉｓ）３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質をコードす
る核酸配列を開示するものであるため、これらのタンパ
ク質を十分な量で得ることが今や初めて可能となった。
これは、例えば、該タンパク質をコードする遺伝子を発
現させるための発現系を用いて行うことができる。した
がって、より好ましい実施形態において、本発明は、本
発明の核酸配列を含むＤＮＡ断片に関する。そのような
ＤＮＡ断片は、例えば、本発明の核酸配列がクローニン
グされるプラスミドでありうる。そのようなＤＮＡ断片
は、例えば、後記のとおり、プライマーとして使用して
ＤＮＡ量を増加させるのに有用である。
【００１９】該核酸配列の発現のための必須要件は、該
核酸配列に機能的に連結した適当なプロモーターであ
り、この場合、該核酸配列は該プロモーターの制御下に
ある。プロモーターの選択は、タンパク質発現のための
宿主細胞として使用する細胞内で遺伝子転写を指令しう
る任意の真核性、原核性またはウイルス性プロモーター
に及ぶことが、当業者に明らかである。
核酸配列に機能的に連結した適当なプロモーターであ
り、この場合、該核酸配列は該プロモーターの制御下に
ある。プロモーターの選択は、タンパク質発現のための
宿主細胞として使用する細胞内で遺伝子転写を指令しう
る任意の真核性、原核性またはウイルス性プロモーター
に及ぶことが、当業者に明らかである。
【００２０】したがって、この実施形態の更に好ましい
形態は、機能的に連結したプロモーターの制御下に配置
された本発明のＤＮＡ断片または核酸配列を含む組換え
ＤＮＡ分子に関する。これは、例えば、標準的な分子生
物学的技術（Ｍａｎｉａｔｉｓ／Ｓａｍｂｒｏｏｋ）
（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏ
ｎｉｎｇ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，
１９８９．ＩＳＢＮ ０−８７９６９−３０９−６）に
より得ることができる。機能的に連結したプロモーター
は、連結している核酸配列の転写を制御しうるプロモー
ターである。そのようなプロモーターは、ローソニア
（Ｌａｗｓｏｎｉａ）プロモーター、例えば、該１９／
２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤ遺伝子のインビボ発
現に関与するプロモーターでありうる。ただし、そのプ
ロモーターは、発現に使用する細胞内で機能的でなけれ
ばならない。それはまた、異種プロモーターでありう
る。該宿主細胞が細菌である場合、使用しうる有用な発
現制御配列には、Ｔｒｐプロモーターおよびオペレータ
ー（Ｇｏｅｄｄｅｌら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，８，４０５７，１９８０）；ｌａｃプロモーター
およびオペレーター（Ｃｈａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，２
７５，６１５，１９７８）；外膜タンパク質プロモータ
ー（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ．およびＩｎｏｕｇｅ，
Ｍ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１，７７１−７７５，１９８
２）；バクテリオファージラムダプロモーターおよびオ
ペレーター（Ｒｅｍａｕｔ，Ｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．，１１，４６７７−４６８８，１９８
３）；α−アミラーゼ（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）プロモ
ーターおよびオペレーター、選択された宿主細胞に適合
した終結配列および他の発現増強配列および発現制御配
列が含まれる。該宿主細胞が酵母である場合、有用な発
現制御配列には、例えば、α−交配因子が含まれる。昆
虫細胞の場合、バキュロウイルスのポリヘドロンまたは
ｐ１０プロモーターを使用することができる（Ｓｍｉｔ
ｈ，Ｇ．Ｅ．ら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３，２
１５６−６５，１９８３）。該宿主細胞が哺乳類由来の
場合、例示的な有用な発現制御配列には、ＳＶ−４０プ
ロモーター（Ｂｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｗ．ら，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，２２２，５２４−５２７，１９８３）またはメタロ
チオネインプロモーター（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ，Ｒ．
Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２９６，３９−４２，１９８２）
または熱ショックプロモーター（Ｖｏｅｌｌｍｙら，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２，
４９４９−５３，１９８５）が含まれる。
形態は、機能的に連結したプロモーターの制御下に配置
された本発明のＤＮＡ断片または核酸配列を含む組換え
ＤＮＡ分子に関する。これは、例えば、標準的な分子生
物学的技術（Ｍａｎｉａｔｉｓ／Ｓａｍｂｒｏｏｋ）
（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏ
ｎｉｎｇ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，
１９８９．ＩＳＢＮ ０−８７９６９−３０９−６）に
より得ることができる。機能的に連結したプロモーター
は、連結している核酸配列の転写を制御しうるプロモー
ターである。そのようなプロモーターは、ローソニア
（Ｌａｗｓｏｎｉａ）プロモーター、例えば、該１９／
２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤ遺伝子のインビボ発
現に関与するプロモーターでありうる。ただし、そのプ
ロモーターは、発現に使用する細胞内で機能的でなけれ
ばならない。それはまた、異種プロモーターでありう
る。該宿主細胞が細菌である場合、使用しうる有用な発
現制御配列には、Ｔｒｐプロモーターおよびオペレータ
ー（Ｇｏｅｄｄｅｌら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，８，４０５７，１９８０）；ｌａｃプロモーター
およびオペレーター（Ｃｈａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，２
７５，６１５，１９７８）；外膜タンパク質プロモータ
ー（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ．およびＩｎｏｕｇｅ，
Ｍ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１，７７１−７７５，１９８
２）；バクテリオファージラムダプロモーターおよびオ
ペレーター（Ｒｅｍａｕｔ，Ｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．，１１，４６７７−４６８８，１９８
３）；α−アミラーゼ（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）プロモ
ーターおよびオペレーター、選択された宿主細胞に適合
した終結配列および他の発現増強配列および発現制御配
列が含まれる。該宿主細胞が酵母である場合、有用な発
現制御配列には、例えば、α−交配因子が含まれる。昆
虫細胞の場合、バキュロウイルスのポリヘドロンまたは
ｐ１０プロモーターを使用することができる（Ｓｍｉｔ
ｈ，Ｇ．Ｅ．ら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３，２
１５６−６５，１９８３）。該宿主細胞が哺乳類由来の
場合、例示的な有用な発現制御配列には、ＳＶ−４０プ
ロモーター（Ｂｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｗ．ら，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，２２２，５２４−５２７，１９８３）またはメタロ
チオネインプロモーター（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ，Ｒ．
Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２９６，３９−４２，１９８２）
または熱ショックプロモーター（Ｖｏｅｌｌｍｙら，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２，
４９４９−５３，１９８５）が含まれる。
【００２１】細菌、酵母、真菌、昆虫および哺乳類細胞
発現系は、非常に頻繁に使用されている系である。その
ような系は当技術分野においてよく知られており、一般
には、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ，Ｉｎｃ．４０３０Ｆａｂｉａｎ Ｗａｙ，Ｐａ
ｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９４３０３−
４６０７，ＵＳＡから商業的に入手可能である。これら
の発現系の他には、寄生体に基づく発現系が非常に魅力
的な発現系である。そのような系は、例えば、公開番号
２ ７１４ ０７４を有するフランス国特許出願および
米国ＮＴＩＳ公開番号ＵＳ ０８／０４３１０９（Ｈｏ
ｆｆｍａｎ，Ｓ．およびＲｏｇｅｒｓ，Ｗ．：公開日１
９９３年１２月１日）に記載されている。
発現系は、非常に頻繁に使用されている系である。その
ような系は当技術分野においてよく知られており、一般
には、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ，Ｉｎｃ．４０３０Ｆａｂｉａｎ Ｗａｙ，Ｐａ
ｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９４３０３−
４６０７，ＵＳＡから商業的に入手可能である。これら
の発現系の他には、寄生体に基づく発現系が非常に魅力
的な発現系である。そのような系は、例えば、公開番号
２ ７１４ ０７４を有するフランス国特許出願および
米国ＮＴＩＳ公開番号ＵＳ ０８／０４３１０９（Ｈｏ
ｆｆｍａｎ，Ｓ．およびＲｏｇｅｒｓ，Ｗ．：公開日１
９９３年１２月１日）に記載されている。
【００２２】本発明のこの実施形態の更に一層好ましい
形態は、本発明の１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０
ｋＤタンパク質またはその免疫原性断片をコードする核
酸配列、本発明のＤＮＡ断片または本発明の組換えＤＮ
Ａ分子を含む生組換え運搬体（Ｌｉｖｅ Ｒｅｃｏｍｂ
ｉｎａｎｔ Ｃａｒｒｉｅｒ）（ＬＲＣ）に関する。そ
のような運搬体は、例えば、細菌またはウイルスであ
る。これらのＬＲＣは、追加的な遺伝情報（この場合に
は、本発明の１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤ
タンパク質またはその免疫原性断片をコードする核酸配
列）がクローニングされている微生物またはウイルスで
ある。そのようなＬＲＣに感染した動物は、該運搬体の
免疫原に対してだけではなく、該遺伝暗号（例えば、１
９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤ遺伝子）が該Ｌ
ＲＣ内に追加的にクローニングされたタンパク質の免疫
原性部分に対しても免疫原性応答を引き起こす。細菌Ｌ
ＲＣの一例として、当技術分野で公知の弱毒化サルモネ
ラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）株が好ましく使用されう
る。生組換え運搬寄生体は、とりわけ、Ｖｅｒｍｅｕｌ
ｅｎ，Ａ．Ｎ．（Ｉｎｔ．Ｊｏｕｒｎ．Ｐａｒａｓｉｔ
ｏｌ．２：１１２１−１１３０（１９９８））に記載さ
れている。また、ＬＲＣウイルスは、標的細胞内に該核
酸配列を輸送する手段として使用することができる。生
組換え運搬ウイルスはベクターウイルスとも称される。
ベクターとしてしばしば使用されるウイルスとしては、
ワクシニアウイルス（Ｐａｎｉｃａｌｉら；Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９：４９２７
（１９８２）、ヘルペスウイルス（Ｅ．Ｐ．Ａ．０４７
３２１０Ａ２）およびレトロウイルス（Ｖａｌｅｒｉ
ｏ，Ｄら；Ｂａｕｍ，Ｓ．Ｊ．，Ｄｉｃｋ，Ｋ．Ａ．，
Ｌｏｔｚｏｖａ，Ｅ．およびＰｌｕｚｎｉｋ，Ｄ．Ｈ．
（編），Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈａｅｍａｔｏｌ
ｏｇｙ ｔｏｄａｙ−１９８８．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖ
ｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：ｐｐ．９２−９９（１
９８９））が挙げられる。
形態は、本発明の１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０
ｋＤタンパク質またはその免疫原性断片をコードする核
酸配列、本発明のＤＮＡ断片または本発明の組換えＤＮ
Ａ分子を含む生組換え運搬体（Ｌｉｖｅ Ｒｅｃｏｍｂ
ｉｎａｎｔ Ｃａｒｒｉｅｒ）（ＬＲＣ）に関する。そ
のような運搬体は、例えば、細菌またはウイルスであ
る。これらのＬＲＣは、追加的な遺伝情報（この場合に
は、本発明の１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤ
タンパク質またはその免疫原性断片をコードする核酸配
列）がクローニングされている微生物またはウイルスで
ある。そのようなＬＲＣに感染した動物は、該運搬体の
免疫原に対してだけではなく、該遺伝暗号（例えば、１
９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤ遺伝子）が該Ｌ
ＲＣ内に追加的にクローニングされたタンパク質の免疫
原性部分に対しても免疫原性応答を引き起こす。細菌Ｌ
ＲＣの一例として、当技術分野で公知の弱毒化サルモネ
ラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）株が好ましく使用されう
る。生組換え運搬寄生体は、とりわけ、Ｖｅｒｍｅｕｌ
ｅｎ，Ａ．Ｎ．（Ｉｎｔ．Ｊｏｕｒｎ．Ｐａｒａｓｉｔ
ｏｌ．２：１１２１−１１３０（１９９８））に記載さ
れている。また、ＬＲＣウイルスは、標的細胞内に該核
酸配列を輸送する手段として使用することができる。生
組換え運搬ウイルスはベクターウイルスとも称される。
ベクターとしてしばしば使用されるウイルスとしては、
ワクシニアウイルス（Ｐａｎｉｃａｌｉら；Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９：４９２７
（１９８２）、ヘルペスウイルス（Ｅ．Ｐ．Ａ．０４７
３２１０Ａ２）およびレトロウイルス（Ｖａｌｅｒｉ
ｏ，Ｄら；Ｂａｕｍ，Ｓ．Ｊ．，Ｄｉｃｋ，Ｋ．Ａ．，
Ｌｏｔｚｏｖａ，Ｅ．およびＰｌｕｚｎｉｋ，Ｄ．Ｈ．
（編），Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈａｅｍａｔｏｌ
ｏｇｙ ｔｏｄａｙ−１９８８．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖ
ｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：ｐｐ．９２−９９（１
９８９））が挙げられる。
【００２３】該宿主動物において本発明の挿入核酸配列
の発現を誘導しうる選択された細菌、寄生虫またはウイ
ルスのゲノム内に組換え核酸配列を導入するためには、
当技術分野でよく知られているインビボ相同組換えの技
術を用いることができる。
の発現を誘導しうる選択された細菌、寄生虫またはウイ
ルスのゲノム内に組換え核酸配列を導入するためには、
当技術分野でよく知られているインビボ相同組換えの技
術を用いることができる。
【００２４】最後に、本発明のこの実施形態のもう１つ
の形態は、本発明のタンパク質をコードする核酸配列、
そのような核酸配列を含むＤＮＡ断片またはそのような
核酸配列を含む組換えＤＮＡ分子（該核酸配列は、機能
的に連結したプロモーターの制御下にある）を含む宿主
細胞に関する。この形態はまた、本発明の１９／２１ｋ
Ｄ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質またはその断片
をコードする核酸分子を含有する生組換え運搬体を含有
する宿主細胞に関する。宿主細胞は、細菌に基づくプラ
スミド（例えば、ｐＢＲ３２２）または細菌発現ベクタ
ー（例えば、ｐＧＥＸ）またはバクテリオファージと組
合された、細菌由来の細胞、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、バシラス・サチリス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびラクトバシ
ラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種でありうる。該
宿主細胞はまた、酵母特異的ベクター分子と組合された
真核生物由来の細胞（例えば、酵母細胞）、またはベク
ターまたは組換えバキュロウイルスと組合された高等真
核細胞、例えば昆虫細胞（Ｌｕｃｋｏｗら；Ｂｉｏ−ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７−５５（１９８８））、
例えばＴｉ−プラスミドに基づくベクターまたは植物ウ
イルスベクターと組合された植物細胞（Ｂａｒｔｏｎ，
Ｋ．Ａ．ら；Ｃｅｌｌ ３２：１０３３（１９８
３））、同様に適当なベクターまたは組換えウイルスと
組合された哺乳類細胞、例えばＨｅｌａ細胞、チャイニ
ーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはクランデルネ
コ（Ｃｒａｎｄｅｌｌ Ｆｅｌｉｎｅ）腎細胞でありう
る。
の形態は、本発明のタンパク質をコードする核酸配列、
そのような核酸配列を含むＤＮＡ断片またはそのような
核酸配列を含む組換えＤＮＡ分子（該核酸配列は、機能
的に連結したプロモーターの制御下にある）を含む宿主
細胞に関する。この形態はまた、本発明の１９／２１ｋ
Ｄ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質またはその断片
をコードする核酸分子を含有する生組換え運搬体を含有
する宿主細胞に関する。宿主細胞は、細菌に基づくプラ
スミド（例えば、ｐＢＲ３２２）または細菌発現ベクタ
ー（例えば、ｐＧＥＸ）またはバクテリオファージと組
合された、細菌由来の細胞、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、バシラス・サチリス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびラクトバシ
ラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種でありうる。該
宿主細胞はまた、酵母特異的ベクター分子と組合された
真核生物由来の細胞（例えば、酵母細胞）、またはベク
ターまたは組換えバキュロウイルスと組合された高等真
核細胞、例えば昆虫細胞（Ｌｕｃｋｏｗら；Ｂｉｏ−ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７−５５（１９８８））、
例えばＴｉ−プラスミドに基づくベクターまたは植物ウ
イルスベクターと組合された植物細胞（Ｂａｒｔｏｎ，
Ｋ．Ａ．ら；Ｃｅｌｌ ３２：１０３３（１９８
３））、同様に適当なベクターまたは組換えウイルスと
組合された哺乳類細胞、例えばＨｅｌａ細胞、チャイニ
ーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはクランデルネ
コ（Ｃｒａｎｄｅｌｌ Ｆｅｌｉｎｅ）腎細胞でありう
る。
【００２５】本発明のもう１つの実施形態は、本発明の
新規タンパク質、すなわち、該１９／２１ｋＤタンパク
質、該３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質、ならびにそ
れらの免疫原性断片に関する。
新規タンパク質、すなわち、該１９／２１ｋＤタンパク
質、該３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質、ならびにそ
れらの免疫原性断片に関する。
【００２６】免疫原性断片の概念は後記で定義する。
【００２７】この実施形態の１つの形態は、配列番号２
に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％相同な
アミノ酸配列を有するローソニア・イントラセルラリス
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）タンパク質、および該タンパク質の免疫原性断片に
関する。
に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％相同な
アミノ酸配列を有するローソニア・イントラセルラリス
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）タンパク質、および該タンパク質の免疫原性断片に
関する。
【００２８】好ましい形態においては、該実施形態は、
配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８
０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の相同
性の配列相同性を有するローソニア・イントラセルラリ
ス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）タンパク質、およびそのようなタンパク質の免疫原
性断片に関する。より一層好ましいのは、９８％または
更には１００％の相同性レベルである。
配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８
０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の相同
性の配列相同性を有するローソニア・イントラセルラリ
ス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）タンパク質、およびそのようなタンパク質の免疫原
性断片に関する。より一層好ましいのは、９８％または
更には１００％の相同性レベルである。
【００２９】この実施形態のもう１つの形態は、とりわ
け、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくと
も７０％相同なアミノ酸配列を有するローソニア・イン
トラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質、および該タンパク質の免
疫原性断片に関する。
け、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくと
も７０％相同なアミノ酸配列を有するローソニア・イン
トラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質、および該タンパク質の免
疫原性断片に関する。
【００３０】好ましい形態は、配列番号４に記載のアミ
ノ酸配列に対して少なくとも８０％、好ましくは９０
％、より好ましくは９５％の相同性の配列相同性を有す
るローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質、およ
びそのようなタンパク質の免疫原性断片に関する。より
一層好ましいのは、９８％または更には１００％の相同
性レベルである。
ノ酸配列に対して少なくとも８０％、好ましくは９０
％、より好ましくは９５％の相同性の配列相同性を有す
るローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質、およ
びそのようなタンパク質の免疫原性断片に関する。より
一層好ましいのは、９８％または更には１００％の相同
性レベルである。
【００３１】この実施形態の更にもう１つの形態は、
ａ）外膜調製物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、ｂ）そのゲ
ルから１９または２１ｋＤのバンドを切り出す工程を含
む製造方法により入手可能な、１９／２１ｋＤの分子量
を有するローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏ
ｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タンパ
ク質、およびそのタンパク質の免疫原性断片に関する。
ａ）外膜調製物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、ｂ）そのゲ
ルから１９または２１ｋＤのバンドを切り出す工程を含
む製造方法により入手可能な、１９／２１ｋＤの分子量
を有するローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏ
ｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タンパ
ク質、およびそのタンパク質の免疫原性断片に関する。
【００３２】実施例１において、これらの工程の実施方
法の一例を詳しく説明する。まず、感染ブタ回腸からロ
ーソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒｉｓ）を単離する工程、ついで、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｉｓ）外膜タンパク質調製物を得るための方法を説明
する。最後に、「外膜タンパク質の配列決定」の項で、
１９または２１ｋＤのバンドを該ゲルから単離するため
の方法を説明する。
法の一例を詳しく説明する。まず、感染ブタ回腸からロ
ーソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒｉｓ）を単離する工程、ついで、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｉｓ）外膜タンパク質調製物を得るための方法を説明
する。最後に、「外膜タンパク質の配列決定」の項で、
１９または２１ｋＤのバンドを該ゲルから単離するため
の方法を説明する。
【００３３】好ましい形態においては、このローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質またはそのタンパク
質の免疫原性断片は、配列番号５に記載のアミノ酸配列
に対して少なくとも７０％相同な内部アミノ酸配列、配
列番号６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０
％相同な内部アミノ酸配列、または配列番号７に記載の
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％相同な内部アミ
ノ酸配列を有する。
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質またはそのタンパク
質の免疫原性断片は、配列番号５に記載のアミノ酸配列
に対して少なくとも７０％相同な内部アミノ酸配列、配
列番号６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０
％相同な内部アミノ酸配列、または配列番号７に記載の
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％相同な内部アミ
ノ酸配列を有する。
【００３４】より好ましい形態においては、このローソ
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質またはそのタン
パク質の免疫原性断片は、配列番号５、６または７に記
載のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、好ましく
は９０％、より好ましくは９５％の相同性の配列相同性
を有する。より一層好ましいのは、９８％または更には
１００％の相同性レベルである。
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質またはそのタン
パク質の免疫原性断片は、配列番号５、６または７に記
載のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、好ましく
は９０％、より好ましくは９５％の相同性の配列相同性
を有する。より一層好ましいのは、９８％または更には
１００％の相同性レベルである。
【００３５】タンパク質相同性のレベルは、コンピュー
タープログラム「ＢＬＡＳＴ２ ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ」
を用いて、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ
／ｂｌａｓｔ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｂｌ２．ｈｔｍｌ．にお
いて見出されるサブプログラム「ＢＬＡＳＴＰ」を選択
することにより測定することができる。このプログラム
に関する参考文献としては、Ｔａｔｉａｎａ Ａ，Ｔａ
ｔｕｓｏｖａ，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ ＦＥ
ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１７４：２
４７−２５０（１９９９）が挙げられる。用いるマトリ
ックス：「ｂｌｏｓｕｍ６２」。用いるパラメーターは
以下のデフォルトパラメーターである：オープン・ギャ
ップ：１１、伸長ギャップ：１、ギャップｘ ドロップ
オフ（ｄｒｏｐｏｆｆ）：５０。
タープログラム「ＢＬＡＳＴ２ ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ」
を用いて、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ
／ｂｌａｓｔ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｂｌ２．ｈｔｍｌ．にお
いて見出されるサブプログラム「ＢＬＡＳＴＰ」を選択
することにより測定することができる。このプログラム
に関する参考文献としては、Ｔａｔｉａｎａ Ａ，Ｔａ
ｔｕｓｏｖａ，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ ＦＥ
ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１７４：２
４７−２５０（１９９９）が挙げられる。用いるマトリ
ックス：「ｂｌｏｓｕｍ６２」。用いるパラメーターは
以下のデフォルトパラメーターである：オープン・ギャ
ップ：１１、伸長ギャップ：１、ギャップｘ ドロップ
オフ（ｄｒｏｐｏｆｆ）：５０。
【００３６】本発明に含まれる特定のタンパク質の場
合、個々のローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓ
ｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）株間で自
然変異が存在しうると理解されるであろう。これらの変
異は、全体の配列中のアミノ酸の相違により又は該配列
中の欠失、置換、挿入、逆位もしくは付加により示され
うる。生物学的および免疫学的活性を実質的に改変しな
いアミノ酸の置換は、例えば、Ｎｅｕｒａｔｈら，“Ｔ
ｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９７９）に記載されてい
る。関連アミノ酸間のアミノ酸置換または進化中に頻繁
に生じた置換としては、とりわけ、Ｓｅｒ／Ａｌａ、Ｓ
ｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、ＩＩ
ｅ／Ｖａｌが挙げられる（Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｄ．，Ａ
ｔｌａｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．
Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．
Ｃ．，１９７８，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３を参照さ
れたい）。他のアミノ酸の置換には、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、
Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓ
ｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｔｈｒ／Ｐｈｅ、Ａｌ
ａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ｌｅｕ／ＩＩｅ、Ｌｅｕ
／ＶａｌおよびＡｌａ／Ｇｌｕが含まれる。この情報に
基づき、ＬｉｐｍａｎおよびＰｅａｒｓｏｎは、タンパ
ク質を迅速かつ高感度に比較し（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２
７，１４３５−１４４１，１９８５）相同タンパク質間
の機能的類似性を測定するための方法を開発した。本発
明の代表的な実施形態のそのようなアミノ酸置換ならび
に欠失および／または挿入を有する変異は、生じるタン
パク質がそれらの免疫反応性を保有している限り、本発
明の範囲内に含まれる。これは、種々の野外分離体から
単離された場合の本発明のローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）タンパク質が、同じ免疫学的特性を有する同じタ
ンパク質を表す一方で約７０％の相同性レベルを有しう
る理由を説明するものである。ローソニア・イントラセ
ルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｓ）感染に対して又は少なくとも該感染の臨床的
徴候に対して免疫応答を誘導しうるタンパク質を尚も与
える、本発明の或るタンパク質のアミノ酸配列内の変異
は、「該免疫原性に実質的に影響を及ぼさない」とみな
される。
合、個々のローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓ
ｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）株間で自
然変異が存在しうると理解されるであろう。これらの変
異は、全体の配列中のアミノ酸の相違により又は該配列
中の欠失、置換、挿入、逆位もしくは付加により示され
うる。生物学的および免疫学的活性を実質的に改変しな
いアミノ酸の置換は、例えば、Ｎｅｕｒａｔｈら，“Ｔ
ｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９７９）に記載されてい
る。関連アミノ酸間のアミノ酸置換または進化中に頻繁
に生じた置換としては、とりわけ、Ｓｅｒ／Ａｌａ、Ｓ
ｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、ＩＩ
ｅ／Ｖａｌが挙げられる（Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｄ．，Ａ
ｔｌａｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．
Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．
Ｃ．，１９７８，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３を参照さ
れたい）。他のアミノ酸の置換には、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、
Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓ
ｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｔｈｒ／Ｐｈｅ、Ａｌ
ａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ｌｅｕ／ＩＩｅ、Ｌｅｕ
／ＶａｌおよびＡｌａ／Ｇｌｕが含まれる。この情報に
基づき、ＬｉｐｍａｎおよびＰｅａｒｓｏｎは、タンパ
ク質を迅速かつ高感度に比較し（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２
７，１４３５−１４４１，１９８５）相同タンパク質間
の機能的類似性を測定するための方法を開発した。本発
明の代表的な実施形態のそのようなアミノ酸置換ならび
に欠失および／または挿入を有する変異は、生じるタン
パク質がそれらの免疫反応性を保有している限り、本発
明の範囲内に含まれる。これは、種々の野外分離体から
単離された場合の本発明のローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）タンパク質が、同じ免疫学的特性を有する同じタ
ンパク質を表す一方で約７０％の相同性レベルを有しう
る理由を説明するものである。ローソニア・イントラセ
ルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｓ）感染に対して又は少なくとも該感染の臨床的
徴候に対して免疫応答を誘導しうるタンパク質を尚も与
える、本発明の或るタンパク質のアミノ酸配列内の変異
は、「該免疫原性に実質的に影響を及ぼさない」とみな
される。
【００３７】しかし、タンパク質を、例えばワクチン接
種の目的に又は抗体を産生させるために使用する場合に
は、必ずしも該全タンパク質を使用する必要はない。ま
た、単独で又は担体（例えばＫＬＨ）と共役してそのタ
ンパク質に対する免疫応答を誘導しうる、そのタンパク
質の断片（いわゆる免疫原性断片）を使用することが可
能である。「免疫原性断片」は、宿主において免疫応答
を誘導する能力を尚も保有する（すなわち、Ｂ−または
Ｔ−細胞エピトープを含む）、完全長タンパク質の断片
であると理解される。現在、種々の技術を利用して、抗
原断片（決定基）をコードするＤＮＡ断片を容易に同定
することが可能である。Ｇｅｙｓｅｎら（特許出願ＷＯ
８４／０３５６４、特許出願ＷＯ８６／０６４８７、米
国特許第４，８３３，０９２号、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：３９９８−４００２（１９８
４）、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１０２，２５９−２７４
（１９８７））により記載されている方法（いわゆるＰ
ＥＰＳＣＡＮ法）は、エピトープ（免疫学的に重要な該
タンパク質の領域）検出のための、実施容易で、迅速で
十分に確立された方法である。該方法は、世界中で用い
られており、それ自体が当業者によく知られている。こ
の（実験的）方法は、Ｂ細胞エピトープの検出に特に適
している。また、いずれかのタンパク質をコードする遺
伝子の配列が与えられると、現在公知のエピトープに対
するそれらの配列上および／または構造上の一致に基づ
いて、免疫学的に重要なエピトープとして特定のポリペ
プチド断片を示すことが、コンピューターアルゴリズム
により可能である。これらの領域の決定は、Ｈｏｐｐお
よびＷｏｏｄｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．７８：３８２４８−３８２８（１９８１））による
親水性の基準とＣｈｏｕおよびＦａｓｍａｎ（Ａｄｖａ
ｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ４７：４５−
１４８（１９８７）および米国特許第４，５５４，１０
１号）による二次構造的観点との組合せに基づく。同様
に、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙの両親媒性の基準（Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２３５，１０５９−１０６２（１９８７）および
米国特許出願ＮＴＩＳ ０７／００５，８８５）の助け
によりコンピューターにより、該配列からＴ細胞エピト
ープを予想することが可能である。概要は、一般的原理
に関してはＳｈａｎ Ｌｕ，Ｔｉｂｔｅｃｈ ９：２３
８−２４２（１９９１）に、マラリアエピトープに関し
てはＧｏｏｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：１０５９−
１０６２（１９８７）に、概説としてはＬｕ，Ｖａｃｃ
ｉｎｅ １０：３−７（１９９２）に、ＨＩＶエピトー
プに関してはＢｅｒｚｏｗｓｋｙ，Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ
Ｊｏｕｒｎａｌ ５：２４１２−２４１８（１９９
１）に記載されている。
種の目的に又は抗体を産生させるために使用する場合に
は、必ずしも該全タンパク質を使用する必要はない。ま
た、単独で又は担体（例えばＫＬＨ）と共役してそのタ
ンパク質に対する免疫応答を誘導しうる、そのタンパク
質の断片（いわゆる免疫原性断片）を使用することが可
能である。「免疫原性断片」は、宿主において免疫応答
を誘導する能力を尚も保有する（すなわち、Ｂ−または
Ｔ−細胞エピトープを含む）、完全長タンパク質の断片
であると理解される。現在、種々の技術を利用して、抗
原断片（決定基）をコードするＤＮＡ断片を容易に同定
することが可能である。Ｇｅｙｓｅｎら（特許出願ＷＯ
８４／０３５６４、特許出願ＷＯ８６／０６４８７、米
国特許第４，８３３，０９２号、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：３９９８−４００２（１９８
４）、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１０２，２５９−２７４
（１９８７））により記載されている方法（いわゆるＰ
ＥＰＳＣＡＮ法）は、エピトープ（免疫学的に重要な該
タンパク質の領域）検出のための、実施容易で、迅速で
十分に確立された方法である。該方法は、世界中で用い
られており、それ自体が当業者によく知られている。こ
の（実験的）方法は、Ｂ細胞エピトープの検出に特に適
している。また、いずれかのタンパク質をコードする遺
伝子の配列が与えられると、現在公知のエピトープに対
するそれらの配列上および／または構造上の一致に基づ
いて、免疫学的に重要なエピトープとして特定のポリペ
プチド断片を示すことが、コンピューターアルゴリズム
により可能である。これらの領域の決定は、Ｈｏｐｐお
よびＷｏｏｄｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．７８：３８２４８−３８２８（１９８１））による
親水性の基準とＣｈｏｕおよびＦａｓｍａｎ（Ａｄｖａ
ｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ４７：４５−
１４８（１９８７）および米国特許第４，５５４，１０
１号）による二次構造的観点との組合せに基づく。同様
に、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙの両親媒性の基準（Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２３５，１０５９−１０６２（１９８７）および
米国特許出願ＮＴＩＳ ０７／００５，８８５）の助け
によりコンピューターにより、該配列からＴ細胞エピト
ープを予想することが可能である。概要は、一般的原理
に関してはＳｈａｎ Ｌｕ，Ｔｉｂｔｅｃｈ ９：２３
８−２４２（１９９１）に、マラリアエピトープに関し
てはＧｏｏｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：１０５９−
１０６２（１９８７）に、概説としてはＬｕ，Ｖａｃｃ
ｉｎｅ １０：３−７（１９９２）に、ＨＩＶエピトー
プに関してはＢｅｒｚｏｗｓｋｙ，Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ
Ｊｏｕｒｎａｌ ５：２４１２−２４１８（１９９
１）に記載されている。
【００３８】したがって、本発明のもう１つの実施形態
の１つの形態は、前記のとおりの本発明の１以上のタン
パク質またはその免疫原性断片と医薬上許容される担体
とを含む、ブタに対してローソニア・イントラセルラリ
ス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）感染を防御しうるワクチンに関する。
の１つの形態は、前記のとおりの本発明の１以上のタン
パク質またはその免疫原性断片と医薬上許容される担体
とを含む、ブタに対してローソニア・イントラセルラリ
ス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）感染を防御しうるワクチンに関する。
【００３９】本発明の更にもう１つの実施形態は、ワク
チンとして使用するための本発明のタンパク質に関す
る。
チンとして使用するための本発明のタンパク質に関す
る。
【００４０】更にもう１つの実施形態は、ローソニア・
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対するワクチンの製造のた
めの、本発明のタンパク質の使用に関する。
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対するワクチンの製造のた
めの、本発明のタンパク質の使用に関する。
【００４１】本発明のワクチンの製造方法の１つは、感
染腸壁から採取した粘膜擦り取りにより得た細菌から本
発明のタンパク質または免疫原性断片を生化学的に精製
することによるものである。しかし、これは、非常に時
間のかかるワクチン製造方法である。
染腸壁から採取した粘膜擦り取りにより得た細菌から本
発明のタンパク質または免疫原性断片を生化学的に精製
することによるものである。しかし、これは、非常に時
間のかかるワクチン製造方法である。
【００４２】したがって、本発明のタンパク質または免
疫原性断片をコードする遺伝子の発現産物をワクチン中
で使用することが、はるかに簡便である。該３７ｋＤお
よび５０ｋＤタンパク質をコードする遺伝子の核酸配列
は、本発明で示されている。該１９／２１ｋＤタンパク
質をコードする遺伝子は、Ｍａｎｉａｔｉｓ（Ｍａｎｉ
ａｔｉｓ／Ｓａｍｂｒｏｏｋ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ：ａ ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，１９８９．ＩＳＢＮ ０−８
７９６９−３０９−６）に記載の混合プローブハイブリ
ダイゼーションを用いて、容易に位置決定し単離するこ
とができる。配列番号５、６および７に示すアミノ酸配
列は、以下の配列を有する混合プローブの基礎を形成す
る。
疫原性断片をコードする遺伝子の発現産物をワクチン中
で使用することが、はるかに簡便である。該３７ｋＤお
よび５０ｋＤタンパク質をコードする遺伝子の核酸配列
は、本発明で示されている。該１９／２１ｋＤタンパク
質をコードする遺伝子は、Ｍａｎｉａｔｉｓ（Ｍａｎｉ
ａｔｉｓ／Ｓａｍｂｒｏｏｋ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ：ａ ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，１９８９．ＩＳＢＮ ０−８
７９６９−３０９−６）に記載の混合プローブハイブリ
ダイゼーションを用いて、容易に位置決定し単離するこ
とができる。配列番号５、６および７に示すアミノ酸配
列は、以下の配列を有する混合プローブの基礎を形成す
る。
【００４３】
【表１】
【００４４】これらの配列を使用して、該１９／２１ｋ
Ｄタンパク質をコードする遺伝子を位置決定し、該３７
ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質をコードする遺伝子を単
離したのと同様にして該遺伝子を単離することができ
る。
Ｄタンパク質をコードする遺伝子を位置決定し、該３７
ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質をコードする遺伝子を単
離したのと同様にして該遺伝子を単離することができ
る。
【００４５】これらの遺伝子の発現産物に基づくそのよ
うなワクチンは、本発明の１以上のタンパク質または本
発明のその免疫原性断片を後記の医薬上許容される担体
と混合することにより容易に製造することができる。
うなワクチンは、本発明の１以上のタンパク質または本
発明のその免疫原性断片を後記の医薬上許容される担体
と混合することにより容易に製造することができる。
【００４６】あるいは、本発明のワクチンは、本発明の
タンパク質または本発明のその免疫原性断片を発現しう
る前記の生組換え運搬体を含みうる。胃上皮に感染する
例えばサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）運搬体また
はウイルス運搬体に基づくそのようなワクチンは、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の自然感染態様により近
いという、サブユニットワクチンより優れた利点を有す
る。さらに、それらの自己増殖は１つの利点である。な
ぜなら、免疫化のために、少量の該組換え運搬体だけし
か必要でないからである。
タンパク質または本発明のその免疫原性断片を発現しう
る前記の生組換え運搬体を含みうる。胃上皮に感染する
例えばサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）運搬体また
はウイルス運搬体に基づくそのようなワクチンは、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の自然感染態様により近
いという、サブユニットワクチンより優れた利点を有す
る。さらに、それらの自己増殖は１つの利点である。な
ぜなら、免疫化のために、少量の該組換え運搬体だけし
か必要でないからである。
【００４７】前記のワクチンはすべて、能動ワクチン接
種に資する。すなわち、本発明の１以上のタンパク質ま
たはその免疫原性断片により、該宿主の免疫系が、これ
らのタンパク質に対する抗体を産生するように誘導され
るのである。あるいは、そのような抗体を、例えばウサ
ギにおいて産生させたり、あるいは後記の抗体産生細胞
系から得ることができる。ついでそのような抗体を宿主
動物に投与することができる。このワクチン接種方法、
すなわち、受動ワクチン接種は、動物が既に感染してお
り自然免疫応答を誘導する時間が無い場合に選択される
ワクチン接種である。それは、免疫低下性動物にワクチ
ン接種するのにも好ましい方法である。ローソニア・イ
ントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）に対する投与抗体は、これらの場
合、該細菌に直接結合しうる。これは、それがローソニ
ア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の増殖を直ちに減弱または停
止するという利点を有する。したがって、本発明のこの
実施形態の１つの形態は、本発明の３つのローソニア・
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質のいずれかに対する抗
体を含むワクチンに関する。
種に資する。すなわち、本発明の１以上のタンパク質ま
たはその免疫原性断片により、該宿主の免疫系が、これ
らのタンパク質に対する抗体を産生するように誘導され
るのである。あるいは、そのような抗体を、例えばウサ
ギにおいて産生させたり、あるいは後記の抗体産生細胞
系から得ることができる。ついでそのような抗体を宿主
動物に投与することができる。このワクチン接種方法、
すなわち、受動ワクチン接種は、動物が既に感染してお
り自然免疫応答を誘導する時間が無い場合に選択される
ワクチン接種である。それは、免疫低下性動物にワクチ
ン接種するのにも好ましい方法である。ローソニア・イ
ントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）に対する投与抗体は、これらの場
合、該細菌に直接結合しうる。これは、それがローソニ
ア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の増殖を直ちに減弱または停
止するという利点を有する。したがって、本発明のこの
実施形態の１つの形態は、本発明の３つのローソニア・
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質のいずれかに対する抗
体を含むワクチンに関する。
【００４８】ワクチンはまた、本発明のタンパク質また
はその免疫原性断片を含む前記の宿主細胞に基づきう
る。
はその免疫原性断片を含む前記の宿主細胞に基づきう
る。
【００４９】もう１つの効率的なワクチン接種方法は、
関連抗原をコードするＤＮＡでの直接ワクチン接種であ
る。タンパク質をコードするＤＮＡでの直接ワクチン接
種は、多数の異なるタンパク質に関して成功している
（例えば、Ｄｏｎｎｅｌｌｙら，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｓｔ ２：２０−２６（１９９３）に概説され
ているとおりである）。このワクチン接種方法は、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対するブタのワク
チン接種に非常に有効である。したがって、本発明のこ
の実施形態の更に他の形態は、本発明のタンパク質また
は本発明の免疫原性断片をコードする核酸配列を含むワ
クチン、およびそのような核酸配列を含むＤＮＡ断片を
含むワクチンに関する。この実施形態の更に他の形態
は、本発明の組換えＤＮＡ分子を含むワクチンに関す
る。ＤＮＡワクチンは、例えば無針注射器を使用する皮
内投与により容易に投与することができる。この投与方
法は、ワクチン接種される動物の細胞内に直接的に該Ｄ
ＮＡを運搬する。１〜１００μｇのマイクログラム範囲
のＤＮＡ量が非常に良好な結果を与える。
関連抗原をコードするＤＮＡでの直接ワクチン接種であ
る。タンパク質をコードするＤＮＡでの直接ワクチン接
種は、多数の異なるタンパク質に関して成功している
（例えば、Ｄｏｎｎｅｌｌｙら，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｓｔ ２：２０−２６（１９９３）に概説され
ているとおりである）。このワクチン接種方法は、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対するブタのワク
チン接種に非常に有効である。したがって、本発明のこ
の実施形態の更に他の形態は、本発明のタンパク質また
は本発明の免疫原性断片をコードする核酸配列を含むワ
クチン、およびそのような核酸配列を含むＤＮＡ断片を
含むワクチンに関する。この実施形態の更に他の形態
は、本発明の組換えＤＮＡ分子を含むワクチンに関す
る。ＤＮＡワクチンは、例えば無針注射器を使用する皮
内投与により容易に投与することができる。この投与方
法は、ワクチン接種される動物の細胞内に直接的に該Ｄ
ＮＡを運搬する。１〜１００μｇのマイクログラム範囲
のＤＮＡ量が非常に良好な結果を与える。
【００５０】もう１つの実施形態においては、本発明の
ワクチンは更に、他のブタ病原生物およびウイルスに由
来する１以上の抗原、またはそのような抗原をコードす
る遺伝情報を含む。そのような生物およびウイルスは、
好ましくは、仮性狂犬病ウイルス、ブタインフルエンザ
ウイルス、ブタパルボウイルス、伝染性胃腸炎ウイル
ス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）、エリシペロ・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐ
ｅｌｏ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ボルデテラ・
ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃ
ｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ）、ヘモ
フィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａ
ｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅ
ｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッ
カス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉ
ｓ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ
ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびア
クチノバシラス・プリゥロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ）よりなる群から選ばれる。
ワクチンは更に、他のブタ病原生物およびウイルスに由
来する１以上の抗原、またはそのような抗原をコードす
る遺伝情報を含む。そのような生物およびウイルスは、
好ましくは、仮性狂犬病ウイルス、ブタインフルエンザ
ウイルス、ブタパルボウイルス、伝染性胃腸炎ウイル
ス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）、エリシペロ・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐ
ｅｌｏ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ボルデテラ・
ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃ
ｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ）、ヘモ
フィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａ
ｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅ
ｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッ
カス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉ
ｓ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ
ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびア
クチノバシラス・プリゥロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ）よりなる群から選ばれる。
【００５１】本発明の全てのワクチンは医薬上許容され
る担体を含む。医薬上許容される担体は、例えば無菌水
または無菌生理食塩水でありうる。より複雑な形態にお
いては、該担体は、例えばバッファーでありうる。
る担体を含む。医薬上許容される担体は、例えば無菌水
または無菌生理食塩水でありうる。より複雑な形態にお
いては、該担体は、例えばバッファーでありうる。
【００５２】ワクチンの製造方法は、本発明のタンパク
質またはその免疫原性断片と医薬上許容される担体とを
混合することを含む。
質またはその免疫原性断片と医薬上許容される担体とを
混合することを含む。
【００５３】また、本発明のワクチンは、好ましい態様
においては、アジュバントを含有しうる。アジュバント
は、一般には、宿主の免疫応答を非特異的に増強する物
質を含む。多数の種々のアジュバントが当技術分野で公
知である。アジュバントの具体例としては、フロイント
完全および不完全アジュバント、ビタミンＥ、非イオン
ブロック重合体、ムラミルジペプチド、Ｑｕｉｌｌ Ａ
（登録商標）、鉱油、例えばＢａｙｏｌ（登録商標）ま
たはＭａｒｋｏｌ（登録商標）、植物油、およびＣａｒ
ｂｏｐｏｌ（登録商標）（ホモ重合体）またはＤｉｌｕ
ｖａｃ（登録商標）Ｆｏｒｔｅが挙げられる。該ワクチ
ンはまた、いわゆる「ビヒクル」を含みうる。ビヒクル
は、該ポリペプチドがそれに共有結合することなく付着
している化合物である。しばしば使用されるビヒクル化
合物としては、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸ア
ルミニウムまたは酸化アルミニウム、シリカ、カオリン
およびベントナイトが挙げられる。該抗原を部分的に包
埋するそのようなビヒクルの特別な形態は、いわゆるＩ
ＳＣＯＭ（ＥＰ １０９，９４２、ＥＰ １８０，５６
４、ＥＰ ２４２，３８０）である。また、該ワクチン
は、１以上の適当な界面活性化合物または乳化剤、例え
ばＳｐａｎまたはＴｗｅｅｎを含みうる。
においては、アジュバントを含有しうる。アジュバント
は、一般には、宿主の免疫応答を非特異的に増強する物
質を含む。多数の種々のアジュバントが当技術分野で公
知である。アジュバントの具体例としては、フロイント
完全および不完全アジュバント、ビタミンＥ、非イオン
ブロック重合体、ムラミルジペプチド、Ｑｕｉｌｌ Ａ
（登録商標）、鉱油、例えばＢａｙｏｌ（登録商標）ま
たはＭａｒｋｏｌ（登録商標）、植物油、およびＣａｒ
ｂｏｐｏｌ（登録商標）（ホモ重合体）またはＤｉｌｕ
ｖａｃ（登録商標）Ｆｏｒｔｅが挙げられる。該ワクチ
ンはまた、いわゆる「ビヒクル」を含みうる。ビヒクル
は、該ポリペプチドがそれに共有結合することなく付着
している化合物である。しばしば使用されるビヒクル化
合物としては、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸ア
ルミニウムまたは酸化アルミニウム、シリカ、カオリン
およびベントナイトが挙げられる。該抗原を部分的に包
埋するそのようなビヒクルの特別な形態は、いわゆるＩ
ＳＣＯＭ（ＥＰ １０９，９４２、ＥＰ １８０，５６
４、ＥＰ ２４２，３８０）である。また、該ワクチン
は、１以上の適当な界面活性化合物または乳化剤、例え
ばＳｐａｎまたはＴｗｅｅｎを含みうる。
【００５４】しばしば、例えば分解し易いポリペプチド
の分解を防ぎ、該ワクチンの貯蔵寿命を増加させ、ある
いは凍結乾燥効率を改善させるために、該ワクチンを安
定化剤と混合する。有用な安定化剤としては、とりわ
け、ＳＰＧＡ（Ｂｏｖａｒｎｉｋら；Ｊ．Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ ５９：５０９（１９５０））、炭水化
物、例えばソルビトール、マンニトール、トレハロー
ス、デンプン、ショ糖、デキストランまたはグルコー
ス、タンパク質、例えばアルブミンまたはカゼインまた
はそれらの分解産物、およびバッファー、例えばリン酸
アルカリ金属が挙げられる。また、該ワクチンを、生理
的に許容される希釈剤に懸濁させることができる。言う
までもなく、アジュバント化、ビヒクル化合物または希
釈剤の添加、ポリペプチドの乳化または安定化のための
他の方法も、本発明に含まれる。
の分解を防ぎ、該ワクチンの貯蔵寿命を増加させ、ある
いは凍結乾燥効率を改善させるために、該ワクチンを安
定化剤と混合する。有用な安定化剤としては、とりわ
け、ＳＰＧＡ（Ｂｏｖａｒｎｉｋら；Ｊ．Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ ５９：５０９（１９５０））、炭水化
物、例えばソルビトール、マンニトール、トレハロー
ス、デンプン、ショ糖、デキストランまたはグルコー
ス、タンパク質、例えばアルブミンまたはカゼインまた
はそれらの分解産物、およびバッファー、例えばリン酸
アルカリ金属が挙げられる。また、該ワクチンを、生理
的に許容される希釈剤に懸濁させることができる。言う
までもなく、アジュバント化、ビヒクル化合物または希
釈剤の添加、ポリペプチドの乳化または安定化のための
他の方法も、本発明に含まれる。
【００５５】本発明のワクチンは、１〜１００マイクロ
グラムの量で非常に適切に投与されうるが、原則とし
て、より少ない用量が用いられうる。１００マイクログ
ラムを超える用量は、免疫学的には非常に適している
が、商業的理由からはそれほど魅力的なものではない。
グラムの量で非常に適切に投与されうるが、原則とし
て、より少ない用量が用いられうる。１００マイクログ
ラムを超える用量は、免疫学的には非常に適している
が、商業的理由からはそれほど魅力的なものではない。
【００５６】生弱毒化組換え運搬体（例えば、前記のＬ
ＲＣ−ウイルスおよび細菌）に基づくワクチンは、該感
染中にそれ自体で増殖するため、それよりはるかに低い
用量で投与されうる。したがって、非常に適切な量は、
細菌およびウイルスに関してそれぞれ１０３および１０
９ ＣＦＵ／ＰＦＵの間の範囲となろう。
ＲＣ−ウイルスおよび細菌）に基づくワクチンは、該感
染中にそれ自体で増殖するため、それよりはるかに低い
用量で投与されうる。したがって、非常に適切な量は、
細菌およびウイルスに関してそれぞれ１０３および１０
９ ＣＦＵ／ＰＦＵの間の範囲となろう。
【００５７】多数の投与方法を適用することができる。
例えば、該ワクチンの筋肉内投与による全身投与が、適
当な投与方法である。この経路に従う場合には、全身投
与のための当技術分野で公知の標準的な方法が良く適し
ている。経口投与も、有効な投与方法である。なぜな
ら、該感染は消化管感染だからである。好ましい経口投
与方法は、非常に酸性な胃環境中でのみ分解する当技術
分野で公知で頻繁に使用されるカプセル内に該ワクチン
をパッケージングすることである。また、胃のｐＨを一
時的に増加させるために、該ワクチンを、当技術分野で
公知の化合物と混合することが可能であろう。
例えば、該ワクチンの筋肉内投与による全身投与が、適
当な投与方法である。この経路に従う場合には、全身投
与のための当技術分野で公知の標準的な方法が良く適し
ている。経口投与も、有効な投与方法である。なぜな
ら、該感染は消化管感染だからである。好ましい経口投
与方法は、非常に酸性な胃環境中でのみ分解する当技術
分野で公知で頻繁に使用されるカプセル内に該ワクチン
をパッケージングすることである。また、胃のｐＨを一
時的に増加させるために、該ワクチンを、当技術分野で
公知の化合物と混合することが可能であろう。
【００５８】例えば該ワクチンの筋肉内投与による全身
投与も適している。この経路に従う場合には、全身投与
のための当技術分野で公知の標準的な方法が良く適して
いる。
投与も適している。この経路に従う場合には、全身投与
のための当技術分野で公知の標準的な方法が良く適して
いる。
【００５９】疾患に対する防御の観点からは、ローソニ
ア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染の迅速かつ正確な診断が
重要である。したがって、本発明のもう１つの目的は、
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染の検出に適した
診断手段を提供することである。
ア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染の迅速かつ正確な診断が
重要である。したがって、本発明のもう１つの目的は、
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染の検出に適した
診断手段を提供することである。
【００６０】ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の検出
のための診断試験は、例えば、被検動物から単離した細
菌ＤＮＡと、該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋ
Ｄ遺伝子のコード配列に基づく特異的プローブまたはＰ
ＣＲプライマーとの反応に基づく。ローソニア・イント
ラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡが該動物において存在する場合に
は、これは、例えば、特異的ＰＣＲプライマーに特異的
に結合し、ついでＰＣＲ反応で増幅される。ついで該Ｐ
ＣＲ反応産物は、ＤＮＡゲル電気泳動において容易に検
出されうる。該ＤＮＡは、被検動物の消化管から採取し
たスワブ中に存在する微生物から最も容易に単離されう
る。ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡによる選
択的ＰＣＲ反応用のプライマーの長さを決定するための
方法は、標準的なＰＣＲテキストに記載されている。少
なくとも１２ヌクレオチドのヌクレオチド配列を有する
プライマーが頻繁に使用されるが、１５、より好ましく
は１８ヌクレオチドを超えるプライマーが、ある程度は
より選択的である。特に、少なくとも２０、好ましくは
少なくとも３０ヌクレオチドの長さを有するプライマー
が非常に一般的に適用されうる。ＰＣＲ技術は、Ｄｉｅ
ｆｆｅｎｂａｃｈ ＆ Ｄｒｅｋｓｌｅｒ；ＰＣＲ ｐ
ｒｉｍｅｒ，ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａ
ｌ．ＩＳＢＮ ０−８７９６９−４４７−５（１９９
５）に詳細に記載されている。したがって、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする核酸、
または少なくとも１２、好ましくは１５、より好ましく
は１８、より一層好ましくは２０、２２、２５、３０、
３５または４０ヌクレオチド（その順序で好ましくな
る）の長さを有するそれらの核酸の一部であって、配列
番号１または３に記載の核酸配列に対して少なくとも７
０％の相同性を有する該核酸配列またはそれらの一部
も、本発明の一部である。そのような核酸配列をＰＣＲ
反応におけるプライマーとして使用して、それらがコー
ドするＤＮＡの量を増加させることができる。これは、
例えば前記の組織におけるローソニア（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ）の検出のための診断手段として使用する特異的ヌク
レオチド配列の迅速な増幅を可能にする。
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の検出
のための診断試験は、例えば、被検動物から単離した細
菌ＤＮＡと、該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋ
Ｄ遺伝子のコード配列に基づく特異的プローブまたはＰ
ＣＲプライマーとの反応に基づく。ローソニア・イント
ラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡが該動物において存在する場合に
は、これは、例えば、特異的ＰＣＲプライマーに特異的
に結合し、ついでＰＣＲ反応で増幅される。ついで該Ｐ
ＣＲ反応産物は、ＤＮＡゲル電気泳動において容易に検
出されうる。該ＤＮＡは、被検動物の消化管から採取し
たスワブ中に存在する微生物から最も容易に単離されう
る。ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡによる選
択的ＰＣＲ反応用のプライマーの長さを決定するための
方法は、標準的なＰＣＲテキストに記載されている。少
なくとも１２ヌクレオチドのヌクレオチド配列を有する
プライマーが頻繁に使用されるが、１５、より好ましく
は１８ヌクレオチドを超えるプライマーが、ある程度は
より選択的である。特に、少なくとも２０、好ましくは
少なくとも３０ヌクレオチドの長さを有するプライマー
が非常に一般的に適用されうる。ＰＣＲ技術は、Ｄｉｅ
ｆｆｅｎｂａｃｈ ＆ Ｄｒｅｋｓｌｅｒ；ＰＣＲ ｐ
ｒｉｍｅｒ，ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａ
ｌ．ＩＳＢＮ ０−８７９６９−４４７−５（１９９
５）に詳細に記載されている。したがって、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする核酸、
または少なくとも１２、好ましくは１５、より好ましく
は１８、より一層好ましくは２０、２２、２５、３０、
３５または４０ヌクレオチド（その順序で好ましくな
る）の長さを有するそれらの核酸の一部であって、配列
番号１または３に記載の核酸配列に対して少なくとも７
０％の相同性を有する該核酸配列またはそれらの一部
も、本発明の一部である。そのような核酸配列をＰＣＲ
反応におけるプライマーとして使用して、それらがコー
ドするＤＮＡの量を増加させることができる。これは、
例えば前記の組織におけるローソニア（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ）の検出のための診断手段として使用する特異的ヌク
レオチド配列の迅速な増幅を可能にする。
【００６１】ＤＮＡに基づくもう１つの試験は、スワブ
から得た細菌物質の増殖、およびそれに続く古典的ＤＮ
Ａ精製、およびそれに続く、放射能標識または色標識さ
れた１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク
質特異的ＤＮＡ断片での古典的ハイブリダイゼーション
に基づくものである。ＰＣＲ反応およびハイブリダイゼ
ーション反応は共に、当技術分野でよく知られており、
とりわけ、Ｍａｎｉａｔｉｓ／Ｓａｍｂｒｏｏｋ（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉ
ｎｇ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，ＩＳ
ＢＮ ０−８７９６９−３０９−６）に記載されてい
る。
から得た細菌物質の増殖、およびそれに続く古典的ＤＮ
Ａ精製、およびそれに続く、放射能標識または色標識さ
れた１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク
質特異的ＤＮＡ断片での古典的ハイブリダイゼーション
に基づくものである。ＰＣＲ反応およびハイブリダイゼ
ーション反応は共に、当技術分野でよく知られており、
とりわけ、Ｍａｎｉａｔｉｓ／Ｓａｍｂｒｏｏｋ（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉ
ｎｇ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，ＩＳ
ＢＮ ０−８７９６９−３０９−６）に記載されてい
る。
【００６２】したがって、本発明の１つの実施形態は、
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡの検出のため
の診断試験に関する。そのような試験は、本発明の核酸
配列またはその断片（該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまた
は５０ｋＤタンパク質をコードするＤＮＡに特異的なも
の）を含む。そのＤＮＡに特異的な断片は、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡに対する相同性がより高
いため、他の細菌のＤＮＡよりローソニア・イントラセ
ルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｓ）ＤＮＡに対して、比較しうる条件下、より良
好に結合する断片（例えば、前記のとおりの少なくとも
１２ヌクレオチドのプライマー）であると理解される。
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡの検出のため
の診断試験に関する。そのような試験は、本発明の核酸
配列またはその断片（該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまた
は５０ｋＤタンパク質をコードするＤＮＡに特異的なも
の）を含む。そのＤＮＡに特異的な断片は、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ＤＮＡに対する相同性がより高
いため、他の細菌のＤＮＡよりローソニア・イントラセ
ルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｓ）ＤＮＡに対して、比較しうる条件下、より良
好に結合する断片（例えば、前記のとおりの少なくとも
１２ヌクレオチドのプライマー）であると理解される。
【００６３】血清中のローソニア・イントラセルラリス
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）抗体の検出のための診断試験は、例えば、本発明の
１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質ま
たはその抗原断片がＥＬＩＳＡプレートのウェルの壁に
コートされた単純な標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ試
験でありうる。そのような抗体の検出方法は、例えば、
１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質ま
たはその抗原断片を被検哺乳動物からの血清と共にイン
キュベートし、ついで例えば、関連哺乳動物抗体に対す
る標識抗体と共にインキュベートするものである。つい
で色反応が、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対す
る抗体の存在または不存在を示しうる。診断試験系のも
う１つの例は、例えば、本発明の１９／２１ｋＤ、３７
ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質またはその抗原断片を含
むウエスタンブロットを被検哺乳動物の血清と共にイン
キュベートし、ついで該ブロットを分析するものであ
る。
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）抗体の検出のための診断試験は、例えば、本発明の
１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質ま
たはその抗原断片がＥＬＩＳＡプレートのウェルの壁に
コートされた単純な標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ試
験でありうる。そのような抗体の検出方法は、例えば、
１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質ま
たはその抗原断片を被検哺乳動物からの血清と共にイン
キュベートし、ついで例えば、関連哺乳動物抗体に対す
る標識抗体と共にインキュベートするものである。つい
で色反応が、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対す
る抗体の存在または不存在を示しうる。診断試験系のも
う１つの例は、例えば、本発明の１９／２１ｋＤ、３７
ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質またはその抗原断片を含
むウエスタンブロットを被検哺乳動物の血清と共にイン
キュベートし、ついで該ブロットを分析するものであ
る。
【００６４】したがって、本発明のもう１つの実施形態
は、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対する抗体の
検出のための診断試験に関する。そのような試験は、本
発明のタンパク質またはその断片を含む。
は、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対する抗体の
検出のための診断試験に関する。そのような試験は、本
発明のタンパク質またはその断片を含む。
【００６５】また、本発明は、本発明の１９／２１ｋ
Ｄ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質またはその抗原
断片と共に血清をインキュベートすることを含む、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対する抗体の血清中で
の検出方法に関する。
Ｄ、３７ｋＤまたは５０ｋＤタンパク質またはその抗原
断片と共に血清をインキュベートすることを含む、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対する抗体の血清中で
の検出方法に関する。
【００６６】また、ローソニア・イントラセルラリス
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）抗原の特異的１９／２１ｋＤ、３７ｋＤおよび５０
ｋＤタンパク質の抗原物質の検出に基づく従ってローソ
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染の検出に適した診断試
験は、例えば、標準的なＥＬＩＳＡ試験でありうる。そ
のような試験の一例においては、ＥＬＩＳＡプレートの
ウェルの壁を、該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０
ｋＤタンパク質に対する抗体でコートする。被検物質と
共にインキュベートした後、標識された抗ローソニア・
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）抗体を該ウェルに加える。ついで
色反応が、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓ
ｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）由来の抗
原物質の存在を示す。したがって、本発明の更にもう１
つの実施形態は、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の
抗原物質の検出のための診断試験に関する。そのような
試験は、本発明のタンパク質またはその断片に対する抗
体を含む。
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）抗原の特異的１９／２１ｋＤ、３７ｋＤおよび５０
ｋＤタンパク質の抗原物質の検出に基づく従ってローソ
ニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染の検出に適した診断試
験は、例えば、標準的なＥＬＩＳＡ試験でありうる。そ
のような試験の一例においては、ＥＬＩＳＡプレートの
ウェルの壁を、該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤまたは５０
ｋＤタンパク質に対する抗体でコートする。被検物質と
共にインキュベートした後、標識された抗ローソニア・
イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｉｓ）抗体を該ウェルに加える。ついで
色反応が、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓ
ｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）由来の抗
原物質の存在を示す。したがって、本発明の更にもう１
つの実施形態は、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の
抗原物質の検出のための診断試験に関する。そのような
試験は、本発明のタンパク質またはその断片に対する抗
体を含む。
【００６７】前記で特徴づけられたとおりに表される本
発明のポリペプチドまたはその免疫原性断片は、ポリク
ローナル、単一特異性またはモノクローナルでありうる
抗体（またはその誘導体）の製造に使用することができ
る。ポリクローナル抗体が望ましい場合には、ポリクロ
ーナル血清を製造し加工するための技術が当技術分野で
公知である（例えば、ＭａｙｅｒおよびＷａｌｔｅｒ
編，Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌ
ｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｄｏ
ｎ， １９８７）。本発明のポリペプチド（またはその
変異体または断片）対して反応性であるモノクローナル
抗体は、同様に当技術分野で公知の技術により近交系マ
ウスを免疫することにより製造することができる（Ｋｏ
ｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５
６，４９５−４９７，１９７５）。
発明のポリペプチドまたはその免疫原性断片は、ポリク
ローナル、単一特異性またはモノクローナルでありうる
抗体（またはその誘導体）の製造に使用することができ
る。ポリクローナル抗体が望ましい場合には、ポリクロ
ーナル血清を製造し加工するための技術が当技術分野で
公知である（例えば、ＭａｙｅｒおよびＷａｌｔｅｒ
編，Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌ
ｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｄｏ
ｎ， １９８７）。本発明のポリペプチド（またはその
変異体または断片）対して反応性であるモノクローナル
抗体は、同様に当技術分野で公知の技術により近交系マ
ウスを免疫することにより製造することができる（Ｋｏ
ｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５
６，４９５−４９７，１９７５）。
【００６８】本発明の更にもう１つの実施形態は、本発
明の１９／２１ｋＤ、３７ｋＤもしくは５０ｋＤタンパ
ク質またはその抗原性断片に対する抗体と共に血清、体
液の組織をインキュベートすることを含む、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）からの抗原物質の検出方法に関
する。
明の１９／２１ｋＤ、３７ｋＤもしくは５０ｋＤタンパ
ク質またはその抗原性断片に対する抗体と共に血清、体
液の組織をインキュベートすることを含む、ローソニア
・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａ
ｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）からの抗原物質の検出方法に関
する。
【００６９】最後に、本発明の１つの実施形態は、ロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする
核酸、または少なくとも２０、好ましくは２５、３０、
３５または４０ヌクレオチド（その順序で好ましくな
る）の長さを有するそれらの核酸の一部であって、配列
番号１または３に記載の核酸配列に対して少なくとも７
０％の相同性を有する該核酸配列またはそれらの一部に
関する。そのような核酸配列をＰＣＲ反応におけるプラ
イマーとして使用して、それらがコードするＤＮＡの量
を増加させることができる。これは、例えば前記の組織
におけるローソニア（Ｌａｗｓｏｎｉａ）の検出のため
の診断手段として使用する特異的ヌクレオチド配列の迅
速な増幅を可能にする。
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質をコードする
核酸、または少なくとも２０、好ましくは２５、３０、
３５または４０ヌクレオチド（その順序で好ましくな
る）の長さを有するそれらの核酸の一部であって、配列
番号１または３に記載の核酸配列に対して少なくとも７
０％の相同性を有する該核酸配列またはそれらの一部に
関する。そのような核酸配列をＰＣＲ反応におけるプラ
イマーとして使用して、それらがコードするＤＮＡの量
を増加させることができる。これは、例えば前記の組織
におけるローソニア（Ｌａｗｓｏｎｉａ）の検出のため
の診断手段として使用する特異的ヌクレオチド配列の迅
速な増幅を可能にする。
【００７０】
【実施例】実施例１：
感染ブタ回腸からのローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の分離 組織病理学的に及び抗酸Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ染
色により確認されたローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染回腸を、
ＰＥで死亡したブタから集め、−８０℃で保存した。融
解後、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）細菌を、該感染腸壁から採取
した粘膜擦り取り物から分離した。Ｌａｗｓｏｎら（Ｖ
ｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１０：３０３−３２３（１
９８５））に記載のとおりに、細胞内細菌を遊離させる
ために、該回腸擦り取り物をオムニミキサーを用いてＰ
ＢＳ中で繰返しホモジナイズした。細胞残渣を除去する
ための低速遠心分離の後で得られた上清を５．０、３．
０、１．２および０．８μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ）で濾過した。ついで該濾液を８０００ｇで３０
分間遠心分離して、ローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）細菌の小さな
ペレットを得た。これらの細菌を、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配
を用いて更に精製した。精製された細菌の種類をＰＣＲ
により評価し（Ｊｏｎｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ．３１：２６１１−２６１５（１９９
３））、一方、存在しうる混入細菌または腸残渣を示す
ために、分離された細菌の純度（＞９５％）を位相差顕
微鏡検査により評価した。
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の分離 組織病理学的に及び抗酸Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ染
色により確認されたローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染回腸を、
ＰＥで死亡したブタから集め、−８０℃で保存した。融
解後、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）細菌を、該感染腸壁から採取
した粘膜擦り取り物から分離した。Ｌａｗｓｏｎら（Ｖ
ｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１０：３０３−３２３（１
９８５））に記載のとおりに、細胞内細菌を遊離させる
ために、該回腸擦り取り物をオムニミキサーを用いてＰ
ＢＳ中で繰返しホモジナイズした。細胞残渣を除去する
ための低速遠心分離の後で得られた上清を５．０、３．
０、１．２および０．８μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ）で濾過した。ついで該濾液を８０００ｇで３０
分間遠心分離して、ローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）細菌の小さな
ペレットを得た。これらの細菌を、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配
を用いて更に精製した。精製された細菌の種類をＰＣＲ
により評価し（Ｊｏｎｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ．３１：２６１１−２６１５（１９９
３））、一方、存在しうる混入細菌または腸残渣を示す
ために、分離された細菌の純度（＞９５％）を位相差顕
微鏡検査により評価した。
【００７１】ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉ
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タンパク質調製物 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）からの外膜タンパク質（ＯＭＰ）
を、Ｂａｒｅｎｋａｍｐら，Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．１４
８：１１２７（１９８３）に記載されているのと実質的
に同じ方法で精製した。簡単に説明すると、Ｐｅｒｃｏ
ｌｌ勾配精製細菌を超音波により破壊した。膜断片を分
画遠心により集め、Ｓａｒｋｏｓｙｌおよび不溶性Ｓａ
ｒｋｏｓｙｌ ＯＭＰを超遠心分離によりペレット化し
た。該ペレットを５０ｍＭ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ（ｐＨ
７．５）に再溶解した。該ＯＭＰを４〜１２％ ＢＩＳ
／ＴＲＩＳ ＮｕＰＡＧＥ ＳＤＳポリアクリルアミド
ゲル（ＮＯＶＥＸ）上で、該製造業者の説明に従い分離
した（図１；パネルＡ）。比較のために、該隣接レーン
に、全ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）細胞タンパク質をローディン
グした。該タンパク質を、ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢｒｉｌ
ｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ２５０を使用して染色した。
該外膜調製物においては、全細胞調製物と比較した場合
の、５０、３７および１９／２１ｋＤａにおけるタンパ
ク質バンドの明らかに認められる増強を観察することが
できた。このことは、これらのタンパク質がＯＭＰであ
ることを示している。
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タンパク質調製物 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）からの外膜タンパク質（ＯＭＰ）
を、Ｂａｒｅｎｋａｍｐら，Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．１４
８：１１２７（１９８３）に記載されているのと実質的
に同じ方法で精製した。簡単に説明すると、Ｐｅｒｃｏ
ｌｌ勾配精製細菌を超音波により破壊した。膜断片を分
画遠心により集め、Ｓａｒｋｏｓｙｌおよび不溶性Ｓａ
ｒｋｏｓｙｌ ＯＭＰを超遠心分離によりペレット化し
た。該ペレットを５０ｍＭ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ（ｐＨ
７．５）に再溶解した。該ＯＭＰを４〜１２％ ＢＩＳ
／ＴＲＩＳ ＮｕＰＡＧＥ ＳＤＳポリアクリルアミド
ゲル（ＮＯＶＥＸ）上で、該製造業者の説明に従い分離
した（図１；パネルＡ）。比較のために、該隣接レーン
に、全ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒ
ａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）細胞タンパク質をローディン
グした。該タンパク質を、ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢｒｉｌ
ｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ２５０を使用して染色した。
該外膜調製物においては、全細胞調製物と比較した場合
の、５０、３７および１９／２１ｋＤａにおけるタンパ
ク質バンドの明らかに認められる増強を観察することが
できた。このことは、これらのタンパク質がＯＭＰであ
ることを示している。
【００７２】精製された外膜タンパク質および全細胞に
対して産生させた及び実験的攻撃後に産生させた抗血清 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）の全細胞および精製ＯＭＰに対する
抗血清をウサギにおいて産生させた。ｎ−ＧＮＥ（水：
油＝４５：５５）中の全細胞（Ｒ２９１）またはＯＭＰ
（Ｒ２７９）の調製物を、ウサギに筋肉内注射した。免
疫前に耳静脈から血液サンプルを集めた。また、Ｐｅｒ
ｃｏｌｌ勾配精製細菌で実験的に経口攻撃しローソニア
・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｉｓ）感染に典型的な臨床的徴候および死後病変を現
したブタ（ＢＩＧ３０４Ｔ４）から、血清を得た。
対して産生させた及び実験的攻撃後に産生させた抗血清 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）の全細胞および精製ＯＭＰに対する
抗血清をウサギにおいて産生させた。ｎ−ＧＮＥ（水：
油＝４５：５５）中の全細胞（Ｒ２９１）またはＯＭＰ
（Ｒ２７９）の調製物を、ウサギに筋肉内注射した。免
疫前に耳静脈から血液サンプルを集めた。また、Ｐｅｒ
ｃｏｌｌ勾配精製細菌で実験的に経口攻撃しローソニア
・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｉｓ）感染に典型的な臨床的徴候および死後病変を現
したブタ（ＢＩＧ３０４Ｔ４）から、血清を得た。
【００７３】ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉ
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タンパク質の抗原
の特徴づけ ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）ＯＭＰの抗原性を調べるために、該
ＯＭＰ調製物を４〜１２％ ＢＩＳ／ＴＲＩＳＮｕＰＡ
ＧＥ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＮＯＶＥＸ）上にローディン
グした。分離後、該タンパク質を、基本的にはＴｏｗｂ
ｉｎら（Ｎａｔｌ．Ｐｒｏｃ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７
６：４３５０−４３５４（１９７９））に従い、０．０
２５ＭＴＲＩＳ／０．１９２Ｍ グリシン／２０％ メ
タノール中のＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ ＰＶＤＦ膜（Ｍ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ）にブロッティングした。膜を、０．
０５％ Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）を含有する０．０
４Ｍ ＰＢＳ中の１％脱脂粉乳でブロッキングし、つい
でウサギＲ２７９抗血清（図１；パネルＢ）およびウサ
ギＲ２９１抗血清（図１；パネルＣ）と共に１時間イン
キュベートし、ついでＰＢＳＴで２回洗浄した。ウサギ
血清を、１％ 脱脂乳／ＰＢＳＴ中、５００の希釈度で
使用した。１：２０００希釈したＨＲＰ共役ヤギ抗ウサ
ギ免疫グロブリンを適用して、該ウサギ抗体を検出し
た。血清活性産物を、Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｏｌ
ｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ，Ａｍｅｒｓｈａｍ）
により、該製造業者のプロトコールに従い検出した。両
方の抗血清（Ｒ２７９およびＲ２９１）は、前記のタン
パク質を認識した。主として、全細胞タンパク質をＯＭ
Ｐ調製物と比較して、５０および３７ｋＤａのシグナル
が再び増加し、このことはこれらの２つのタンパク質が
ＯＭＰであることを示している。
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タンパク質の抗原
の特徴づけ ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）ＯＭＰの抗原性を調べるために、該
ＯＭＰ調製物を４〜１２％ ＢＩＳ／ＴＲＩＳＮｕＰＡ
ＧＥ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＮＯＶＥＸ）上にローディン
グした。分離後、該タンパク質を、基本的にはＴｏｗｂ
ｉｎら（Ｎａｔｌ．Ｐｒｏｃ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７
６：４３５０−４３５４（１９７９））に従い、０．０
２５ＭＴＲＩＳ／０．１９２Ｍ グリシン／２０％ メ
タノール中のＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ ＰＶＤＦ膜（Ｍ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ）にブロッティングした。膜を、０．
０５％ Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）を含有する０．０
４Ｍ ＰＢＳ中の１％脱脂粉乳でブロッキングし、つい
でウサギＲ２７９抗血清（図１；パネルＢ）およびウサ
ギＲ２９１抗血清（図１；パネルＣ）と共に１時間イン
キュベートし、ついでＰＢＳＴで２回洗浄した。ウサギ
血清を、１％ 脱脂乳／ＰＢＳＴ中、５００の希釈度で
使用した。１：２０００希釈したＨＲＰ共役ヤギ抗ウサ
ギ免疫グロブリンを適用して、該ウサギ抗体を検出し
た。血清活性産物を、Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｏｌ
ｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ，Ａｍｅｒｓｈａｍ）
により、該製造業者のプロトコールに従い検出した。両
方の抗血清（Ｒ２７９およびＲ２９１）は、前記のタン
パク質を認識した。主として、全細胞タンパク質をＯＭ
Ｐ調製物と比較して、５０および３７ｋＤａのシグナル
が再び増加し、このことはこれらの２つのタンパク質が
ＯＭＰであることを示している。
【００７４】外膜タンパク質の配列決定
配列決定のために、ＢｉｏＲａｄＰｒｏｔｅａｎ ＩＩ
系を該マニュアルに従い使用して、該ＯＭＰ懸濁液を分
取１０％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にローディングし
た。４つのタンパク質バンド（１９／２１、３７および
５０ｋＤ）を該ゲルから切り出し、４℃でＥｕｒｏｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ（Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈ
ｅｒｌａｎｄｓ）に輸送した。該全タンパク質のトリプ
シン消化後に得られた単離されたペプチドの及びＮ末端
のタンパク質配列を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔ
ｅｍｓ １２０Ａ ＰＴＨ Ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ上で
の自動エドマン分解により決定した。得られたタンパク
質配列（表１）を、該コード遺伝子の増幅用のＰＣＲプ
ライマーの作製に使用した。該タンパク質配列から、該
１９ｋＤおよび２１ｋＤタンパク質は、基本的には、同
一タンパク質に相当すると結論づけた。サイズの相違
は、おそらく、翻訳後修飾によるものであろう。
系を該マニュアルに従い使用して、該ＯＭＰ懸濁液を分
取１０％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にローディングし
た。４つのタンパク質バンド（１９／２１、３７および
５０ｋＤ）を該ゲルから切り出し、４℃でＥｕｒｏｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ（Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈ
ｅｒｌａｎｄｓ）に輸送した。該全タンパク質のトリプ
シン消化後に得られた単離されたペプチドの及びＮ末端
のタンパク質配列を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔ
ｅｍｓ １２０Ａ ＰＴＨ Ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ上で
の自動エドマン分解により決定した。得られたタンパク
質配列（表１）を、該コード遺伝子の増幅用のＰＣＲプ
ライマーの作製に使用した。該タンパク質配列から、該
１９ｋＤおよび２１ｋＤタンパク質は、基本的には、同
一タンパク質に相当すると結論づけた。サイズの相違
は、おそらく、翻訳後修飾によるものであろう。
【００７５】外膜タンパク質遺伝子の増幅
ＯＭＰ遺伝子を増幅するために、ＱＩＡＧＥＮ Ｇｅｎ
ｏｍｉｃ Ｔｉｐ １００を該製造業者による記載のと
おりに使用して、ローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ゲノムＤＮＡ
をＰｅｒｃｏｌｌ勾配精製細菌から単離した。得られた
タンパク質配列に基づく縮重プライマーを使用して、こ
のＤＮＡをＰＣＲにおいて使用した。プライマー９１１
（ｇｇＩ ｇｔＩ ｔｇｇ ｇａＹ ｔｔＹ ａａ）お
よび９１２（ｔｃｃ ｃａＩ ｇｃＲｔａＲ ｔｃＹ
ｔｔ）を使用して、５０ｋＤタンパク質をコードするＤ
ＮＡを増幅した。プライマー９９０（ｔｃＲ ａａＩ
ｇｃＲ ａａＲ ｔｔＩａｃＩ ｃｃ）および１０２１
（ｇｃＩ ｇａＲ ｇｔＩ ａｃＩ ｇｃＩ ａｇ）を
使用し、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２と共にＥＸＰＡＮＤ
（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）を使用し
て、３７ｋＤタンパク質をコードするＤＮＡを増幅し
た。ついで該ＰＣＲ混合物からの１μｌを取り、同じプ
ライマーを使用するネスティドＰＣＲにおいて使用し
た。これは、該５０ｋＤおよび３７ｋＤタンパク質に関
してそれぞれ１２６０ｂｐおよび６５６ｂｐのバンドを
与えた。ＰＣＲ産物をアガロースゲルから切断し、ＱＩ
ＡＧＥＮスピンプレップキットを使用して精製し、ｐＣ
Ｒ−ＴＯＰＯ−ｂｌｕｎｔ ＩＩ（Ｎｏｖａｇｅｎ）内
にクローニングした。該クローニング混合物を大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ １０Ｆ内に形質転換した。Ｍ
１３フォワードおよびＭ１３リバースプライマーを使用
するコロニーＰＣＲにより、推定形質転換体をインサー
トに関してスクリーニングした。インサートを有するプ
ラスミドを含有する推定クローンから、ＱＩＡＧＥＮミ
ニプレップキットを使用してプラスミドＤＮＡを単離し
た。ついで、Ｍ１３フォワードおよびＭ１３リバースプ
ライマーを使用し、ＰＲＩＳＭ ＲｅａｄｙＲｅａｃｔ
ｉｏｎ ＤｙｅＤｅｏｘｙ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｓ
ｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ）を製造業者のプロトコールに従い使用
して、インサートを配列決定した。第１ＰＣＲにおいて
プライマー９２３（ｔａｔ ａｇｃ ｔｇｔ ｔｇａ
ｔｇｇ ｔｇｃ ｔｔ）を使用しネスティドＰＣＲにお
いて９３６（ｇｇｔ ｇａｔ ａａｔ ａｔｇ ｃｔｔ
ｔａｃ ｔ）およびポリ−Ｇプライマー（ａｔａ ｔｇ
ｇ ｇｇｇ ｇｇｇｇｇｇ ｇｇｇ ｇ）を使用するｃ
−テーリングＰＣＲを用いて、該５０ｋＤコード領域の
Ｃ末端部分を増幅した。これは、前記のとおりにクロー
ニングされ配列決定された８４０ｂｐのバンドを与え
た。
ｏｍｉｃ Ｔｉｐ １００を該製造業者による記載のと
おりに使用して、ローソニア・イントラセルラリス
（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）ゲノムＤＮＡ
をＰｅｒｃｏｌｌ勾配精製細菌から単離した。得られた
タンパク質配列に基づく縮重プライマーを使用して、こ
のＤＮＡをＰＣＲにおいて使用した。プライマー９１１
（ｇｇＩ ｇｔＩ ｔｇｇ ｇａＹ ｔｔＹ ａａ）お
よび９１２（ｔｃｃ ｃａＩ ｇｃＲｔａＲ ｔｃＹ
ｔｔ）を使用して、５０ｋＤタンパク質をコードするＤ
ＮＡを増幅した。プライマー９９０（ｔｃＲ ａａＩ
ｇｃＲ ａａＲ ｔｔＩａｃＩ ｃｃ）および１０２１
（ｇｃＩ ｇａＲ ｇｔＩ ａｃＩ ｇｃＩ ａｇ）を
使用し、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２と共にＥＸＰＡＮＤ
（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）を使用し
て、３７ｋＤタンパク質をコードするＤＮＡを増幅し
た。ついで該ＰＣＲ混合物からの１μｌを取り、同じプ
ライマーを使用するネスティドＰＣＲにおいて使用し
た。これは、該５０ｋＤおよび３７ｋＤタンパク質に関
してそれぞれ１２６０ｂｐおよび６５６ｂｐのバンドを
与えた。ＰＣＲ産物をアガロースゲルから切断し、ＱＩ
ＡＧＥＮスピンプレップキットを使用して精製し、ｐＣ
Ｒ−ＴＯＰＯ−ｂｌｕｎｔ ＩＩ（Ｎｏｖａｇｅｎ）内
にクローニングした。該クローニング混合物を大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ １０Ｆ内に形質転換した。Ｍ
１３フォワードおよびＭ１３リバースプライマーを使用
するコロニーＰＣＲにより、推定形質転換体をインサー
トに関してスクリーニングした。インサートを有するプ
ラスミドを含有する推定クローンから、ＱＩＡＧＥＮミ
ニプレップキットを使用してプラスミドＤＮＡを単離し
た。ついで、Ｍ１３フォワードおよびＭ１３リバースプ
ライマーを使用し、ＰＲＩＳＭ ＲｅａｄｙＲｅａｃｔ
ｉｏｎ ＤｙｅＤｅｏｘｙ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｓ
ｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ）を製造業者のプロトコールに従い使用
して、インサートを配列決定した。第１ＰＣＲにおいて
プライマー９２３（ｔａｔ ａｇｃ ｔｇｔ ｔｇａ
ｔｇｇ ｔｇｃ ｔｔ）を使用しネスティドＰＣＲにお
いて９３６（ｇｇｔ ｇａｔ ａａｔ ａｔｇ ｃｔｔ
ｔａｃ ｔ）およびポリ−Ｇプライマー（ａｔａ ｔｇ
ｇ ｇｇｇ ｇｇｇｇｇｇ ｇｇｇ ｇ）を使用するｃ
−テーリングＰＣＲを用いて、該５０ｋＤコード領域の
Ｃ末端部分を増幅した。これは、前記のとおりにクロー
ニングされ配列決定された８４０ｂｐのバンドを与え
た。
【００７６】ｐＥＴ２４ａにおける５０ｋＤタンパク質
コード化ＤＮＡのクローニング ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）染色体ＤＮＡを鋳型として使用し
て、該５０ｋＤタンパク質の成熟部分をコードするＤＮ
Ａを、プライマー９６７（ｇｇａ ａｔｔ ｃｃａ ｔ
ａｔ ｇｔａ ｔｔｇ ａｔｔ ｔｔａ ａｇｇ ｃａ
ａ ａ）および９６８（ｃｇｃ ｇｇａｔｃｃ ｇｃｇ
ａｔｃ ｃｔｔ ｇａｔ ａａｔ ｔｃａ ａｇｇ）
ならびにＥＸＰＡＮＤ系を使用して増幅した。該ＰＣＲ
産物を該ゲルから単離し、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで
切断し、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで切断されたｐＥＴ
２４ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）内に連結してプラスミドｐＰ
５−ａを得た。理論的には、ｐＰ５−ａに媒介される５
０ｋＤタンパク質の発現の誘導は、細胞質に局在する５
０ｋＤのタンパク質を与えるはずである。なぜなら、ク
ローニングされたＰ５のタンパク質配列分析は、いずれ
の種類の分泌シグナルの同定にもつながらなかったから
である。ＯＭＰは、発現後にその天然局在部位である外
膜に移行した場合にのみ、適切に折りたたんで抗原的に
活性となることが、十分に確認されている。該外膜への
該５０ｋＤタンパク質の移行を可能にするために、大腸
菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｐｈｏＥシグナル配列が該成熟５０
ｋＤタンパク質の前に融合されるようにプライマー９７
２（ｇｇａ ａｔｔ ｃｃａ ｔａｔ ｇａａ ａａｔ
ｇａａ ａａａ ｇａｇ ｃａｃ ｔｃｔ ｇｇｃ）お
よび９６９（ｃｃｇｃｔｃ ｇａｇ ｇａａ ｔｔｇ
ａｔａ ｃｔｔ ｃａｔ ａｔｔ ｔａａ）を使用する
重複伸長ＰＣＲを適用した。該構築物をｐＣＲ−ＴＯＰ
Ｏ−ｂｌｕｎｔ ＩＩ内にクローニングした。正しいク
ローンを配列決定により同定した後、ＮｄｅＩおよびＸ
ｈｏＩを使用して、該インサートをｐＣＲ−ＴＯＰＯ−
ｂｌｕｎｔ ＩＩプラスミドから切り出した。ついで該
ＤＮＡ断片を、ＮｄｅＩおよびＸｈｏＩで切断されたｐ
ＥＴ２４ａ内に連結して、プラスミドｐＰ５−ｆを得
た。そのクローニングが該５０ｋＤタンパク質のＣ末端
部分に６×Ｈｉｓタグの付加をもたらすように、プライ
マー９６９を設計した。
コード化ＤＮＡのクローニング ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）染色体ＤＮＡを鋳型として使用し
て、該５０ｋＤタンパク質の成熟部分をコードするＤＮ
Ａを、プライマー９６７（ｇｇａ ａｔｔ ｃｃａ ｔ
ａｔ ｇｔａ ｔｔｇ ａｔｔ ｔｔａ ａｇｇ ｃａ
ａ ａ）および９６８（ｃｇｃ ｇｇａｔｃｃ ｇｃｇ
ａｔｃ ｃｔｔ ｇａｔ ａａｔ ｔｃａ ａｇｇ）
ならびにＥＸＰＡＮＤ系を使用して増幅した。該ＰＣＲ
産物を該ゲルから単離し、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで
切断し、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで切断されたｐＥＴ
２４ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）内に連結してプラスミドｐＰ
５−ａを得た。理論的には、ｐＰ５−ａに媒介される５
０ｋＤタンパク質の発現の誘導は、細胞質に局在する５
０ｋＤのタンパク質を与えるはずである。なぜなら、ク
ローニングされたＰ５のタンパク質配列分析は、いずれ
の種類の分泌シグナルの同定にもつながらなかったから
である。ＯＭＰは、発現後にその天然局在部位である外
膜に移行した場合にのみ、適切に折りたたんで抗原的に
活性となることが、十分に確認されている。該外膜への
該５０ｋＤタンパク質の移行を可能にするために、大腸
菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｐｈｏＥシグナル配列が該成熟５０
ｋＤタンパク質の前に融合されるようにプライマー９７
２（ｇｇａ ａｔｔ ｃｃａ ｔａｔ ｇａａ ａａｔ
ｇａａ ａａａ ｇａｇ ｃａｃ ｔｃｔ ｇｇｃ）お
よび９６９（ｃｃｇｃｔｃ ｇａｇ ｇａａ ｔｔｇ
ａｔａ ｃｔｔ ｃａｔ ａｔｔ ｔａａ）を使用する
重複伸長ＰＣＲを適用した。該構築物をｐＣＲ−ＴＯＰ
Ｏ−ｂｌｕｎｔ ＩＩ内にクローニングした。正しいク
ローンを配列決定により同定した後、ＮｄｅＩおよびＸ
ｈｏＩを使用して、該インサートをｐＣＲ−ＴＯＰＯ−
ｂｌｕｎｔ ＩＩプラスミドから切り出した。ついで該
ＤＮＡ断片を、ＮｄｅＩおよびＸｈｏＩで切断されたｐ
ＥＴ２４ａ内に連結して、プラスミドｐＰ５−ｆを得
た。そのクローニングが該５０ｋＤタンパク質のＣ末端
部分に６×Ｈｉｓタグの付加をもたらすように、プライ
マー９６９を設計した。
【００７７】大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ
３）における該５０ｋＤタンパク質の過剰発現 プラスミドｐＰ５−ａおよびｐＰ５−ｆをＢＬ２１（Ｄ
Ｅ３）内に形質転換した。得られた株ＢＬ２１−Ｐ５−
ａおよびＢＬ２１−Ｐ５−ｆを、ｏ／ｎ培養後、３７℃
でロータリーシェーカー（１８０ｒｐｍ）に付した（新
鮮な５ｍｌのＬＢ中で希釈した）。３時間の培養後、Ｔ
７ ＲＮＡポリメラーゼを５０μＭ イソプロピルチオ
ガラクトシド（ＩＰＴＧ）で誘導し、培養を３時間継続
した。細胞を遠心分離により集め、サンプルを適当な対
照と共に、２つの４〜１２％ ＢＩＳ／ＴＲＩＳ Ｎｕ
ＰＡＧＥ ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（ＮＯＶＥ
Ｘ）上に該製造業者の記載に従いローディングした。該
第１ゲルをクーマシーブリリアントブルー２５０Ｒで染
色した（図２；パネルＡ）。該第２ゲルをウエスタンブ
ロット法に使用した。該ブロットをブタ血清（ＢＩＧ３
０４Ｔ４；図２；パネルＢ）でプローブした。誘導後、
株ＢＬ２１−Ｐ５−ａ（レーン２）およびＢＬ２１−Ｐ
５−ｆ（レーン３）においては、該陰性対照（レーン
５）において欠けている余分のタンパク質バンドが出現
した。株ＢＬ２１−Ｐ５−ｆにおいて産生されたタンパ
ク質は、天然５０ｋＤタンパク質（レーン４）と比較し
て若干高い分子量で移動したが、これは、おそらく、Ｃ
末端Ｈｉｓタグによるものであろう。
３）における該５０ｋＤタンパク質の過剰発現 プラスミドｐＰ５−ａおよびｐＰ５−ｆをＢＬ２１（Ｄ
Ｅ３）内に形質転換した。得られた株ＢＬ２１−Ｐ５−
ａおよびＢＬ２１−Ｐ５−ｆを、ｏ／ｎ培養後、３７℃
でロータリーシェーカー（１８０ｒｐｍ）に付した（新
鮮な５ｍｌのＬＢ中で希釈した）。３時間の培養後、Ｔ
７ ＲＮＡポリメラーゼを５０μＭ イソプロピルチオ
ガラクトシド（ＩＰＴＧ）で誘導し、培養を３時間継続
した。細胞を遠心分離により集め、サンプルを適当な対
照と共に、２つの４〜１２％ ＢＩＳ／ＴＲＩＳ Ｎｕ
ＰＡＧＥ ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（ＮＯＶＥ
Ｘ）上に該製造業者の記載に従いローディングした。該
第１ゲルをクーマシーブリリアントブルー２５０Ｒで染
色した（図２；パネルＡ）。該第２ゲルをウエスタンブ
ロット法に使用した。該ブロットをブタ血清（ＢＩＧ３
０４Ｔ４；図２；パネルＢ）でプローブした。誘導後、
株ＢＬ２１−Ｐ５−ａ（レーン２）およびＢＬ２１−Ｐ
５−ｆ（レーン３）においては、該陰性対照（レーン
５）において欠けている余分のタンパク質バンドが出現
した。株ＢＬ２１−Ｐ５−ｆにおいて産生されたタンパ
ク質は、天然５０ｋＤタンパク質（レーン４）と比較し
て若干高い分子量で移動したが、これは、おそらく、Ｃ
末端Ｈｉｓタグによるものであろう。
【００７８】
【表２】
【００７９】
【配列表】
【化１】
【図１】ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔ
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）全細胞およびローソニア・
イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）外膜調製物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動およ
びイムノブロット（ウサギ抗血清でプローブされたも
の）。レーン１，予め染色された精度マーカー（Ｂｉｏ
Ｒａｄ）；２，ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）全細胞抽出物；３，
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜調製物。パネル；Ａ：クーマシ
ーブリリアントブルーでのタンパク質の可視化；Ｂ：精
製された外膜タンパク質（Ｒ２７９）に対して産生させ
た血清でプローブしたブロット；Ｃ，全細胞（Ｒ２９
１）に対して産生させた血清でプローブしたブロット。
該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質
は、それぞれＰ１／Ｐ２、Ｐ４およびＰ５で示されてい
る。
ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）全細胞およびローソニア・
イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）外膜調製物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動およ
びイムノブロット（ウサギ抗血清でプローブされたも
の）。レーン１，予め染色された精度マーカー（Ｂｉｏ
Ｒａｄ）；２，ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）全細胞抽出物；３，
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜調製物。パネル；Ａ：クーマシ
ーブリリアントブルーでのタンパク質の可視化；Ｂ：精
製された外膜タンパク質（Ｒ２７９）に対して産生させ
た血清でプローブしたブロット；Ｃ，全細胞（Ｒ２９
１）に対して産生させた血清でプローブしたブロット。
該１９／２１ｋＤ、３７ｋＤおよび５０ｋＤタンパク質
は、それぞれＰ１／Ｐ２、Ｐ４およびＰ５で示されてい
る。
【図２】該５０ｋＤタンパク質の過剰発現。本文中に記
載されている種々のｐＥＴ２４ａ由来構築物を含有する
ＢＬ２１（ＤＥ３）内で、該タンパク質を過剰発現させ
た。全細胞抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ク
ーマシーブルーブリリアントブルー（パネルＡ）で染色
するか、またはＩｍｍｕｎｏｂｉｌｏｎ−Ｐ ＰＶＤＦ
膜上にブロットし実験的感染ブタから得た抗血清でプロ
ーブした（パネルＢ）。レーン１：４５ｋＤａの予め染
色された精度マーカー（ＢｉｏＲａｄ）バンド；レーン
２：ＢＬ２１−Ｐ５−ａ；レーン３：ＢＬ２１−Ｐ５−
ｆ；レーン４：精製されたローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タン
パク質（５０ｋＤタンパク質だけが認められる）。レー
ン５：未誘導のＢＬ２１−Ｐ５−ａ。
載されている種々のｐＥＴ２４ａ由来構築物を含有する
ＢＬ２１（ＤＥ３）内で、該タンパク質を過剰発現させ
た。全細胞抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ク
ーマシーブルーブリリアントブルー（パネルＡ）で染色
するか、またはＩｍｍｕｎｏｂｉｌｏｎ−Ｐ ＰＶＤＦ
膜上にブロットし実験的感染ブタから得た抗血清でプロ
ーブした（パネルＢ）。レーン１：４５ｋＤａの予め染
色された精度マーカー（ＢｉｏＲａｄ）バンド；レーン
２：ＢＬ２１−Ｐ５−ａ；レーン３：ＢＬ２１−Ｐ５−
ｆ；レーン４：精製されたローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）外膜タン
パク質（５０ｋＤタンパク質だけが認められる）。レー
ン５：未誘導のＢＬ２１−Ｐ５−ａ。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 39/112 Ａ６１Ｋ 39/12 ４Ｈ０４５
39/12 39/145
39/145 39/205
39/205 39/225
39/225 39/23
39/23 39/39
39/39 39/395 Ｄ
39/395 Ｒ
48/00
48/00 Ａ６１Ｐ 1/00 １７１
Ａ６１Ｐ 1/00 １７１ 1/12
1/12 3/00
3/00 7/06
7/06 31/04
31/04 １７１
１７１ Ｃ０７Ｋ 14/195
Ｃ０７Ｋ 14/195 Ｃ１２Ｎ 1/15
Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19
1/19 1/21
1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ
5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
Ｃ１２Ｑ 1/68 5/00 Ａ
(72)発明者 パウル・フエルメエイ
オランダ国、5845・ベー・カー・シント・
アントニス、レーペルストラート・３
Ｆターム(参考） 4B024 AA10 AA11 BA31 CA03 CA09
CA20 DA06 EA04 GA11 GA19
HA11 HA12 HA17
4B063 QA01 QQ43 QQ53 QR08 QR32
QR35 QR39 QR42 QR55 QR62
QS16 QS25 QS34 QS36 QX02
4B065 AA01Y AA26X AA58X AA72X
AA87X AB01 AC14 BA02
CA24 CA43 CA45 CA46
4C084 AA13 NA14 ZA55 ZA66 ZA72
ZB09 ZB11 ZB35 ZC21 ZC61
4C085 AA03 AA08 AA13 AA14 AA19
BA07 BA08 BA14 BA15 BA18
BA21 BA24 BA51 BA56 BA57
BA65 BA73 BA75 BB11 BB23
CC07 CC08 CC21 DD62 DD86
EE01 EE03 FF24
4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA11
DA86 EA05 EA20 EA50 FA74
GA01 GA15 GA30
Claims (27)
- 【請求項１】 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａ
ｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タン
パク質をコードする核酸配列または該タンパク質の免疫
原性断片をコードする該核酸配列の一部であって、該核
酸配列またはその該一部が配列番号１に記載の核酸配列
に対して少なくとも７０％の相同性を有することを特徴
とする核酸配列またはその一部。 - 【請求項２】 該配列が、配列番号１に記載の核酸配列
に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％、より好
ましくは９５％の相同性を有する、請求項１記載の核酸
配列またはその一部。 - 【請求項３】 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａ
ｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タン
パク質をコードする核酸配列または該タンパク質の免疫
原性断片をコードする該核酸配列の一部であって、該核
酸配列またはその該一部が配列番号３に記載の核酸配列
に対して少なくとも７０％の相同性を有することを特徴
とする核酸配列またはその一部。 - 【請求項４】 該配列が、配列番号３に記載の核酸配列
に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％、より好
ましくは９５％の相同性を有する、請求項１記載の核酸
配列またはその一部。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれか１項記載の核酸
配列を含んでなるＤＮＡ断片。 - 【請求項６】 機能的に連結したプロモーターの制御
下、請求項１〜４のいずれか１項記載の核酸配列または
請求項５記載のＤＮＡ断片を含んでなる組換えＤＮＡ分
子。 - 【請求項７】 請求項５記載のＤＮＡ断片または請求項
６記載の組換えＤＮＡ分子を含んでなる生組換え運搬
体。 - 【請求項８】 請求項１〜４のいずれか１項記載の核酸
配列、請求項５記載のＤＮＡ断片、請求項６記載の組換
えＤＮＡ分子または請求項７記載の生組換え運搬体を含
んでなる宿主細胞。 - 【請求項９】 配列番号２に記載のアミノ酸配列に対し
て少なくとも７０％相同なアミノ酸配列を含んでなるロ
ーソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉ
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該タ
ンパク質の免疫原性断片。 - 【請求項１０】 配列番号２に記載のアミノ酸配列に対
して少なくとも８０％、好ましくは９０％、より好まし
くは９５％の配列相同性を有する、請求項９記載のロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該タン
パク質の免疫原性断片。 - 【請求項１１】 配列番号４に記載のアミノ酸配列に対
して少なくとも７０％相同なアミノ酸配列を含んでなる
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該
タンパク質の免疫原性断片。 - 【請求項１２】 配列番号４に記載のアミノ酸配列に対
して少なくとも８０％、好ましくは９０％、より好まし
くは９５％の配列相同性を有する、請求項１１記載のロ
ーソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉ
ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該タ
ンパク質の免疫原性断片。 - 【請求項１３】 ａ）外膜調製物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに
付し、ｂ）そのゲルから１９または２１ｋＤのバンドを
切り出す工程を含む製造方法により入手可能な、１９／
２１ｋＤの分子量を有するローソニア・イントラセルラ
リス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
ｉｓ）外膜タンパク質または該タンパク質の免疫原性断
片。 - 【請求項１４】 該タンパク質が、配列番号５に記載の
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％相同なＮ末端ア
ミノ酸配列、配列番号６に記載のアミノ酸配列に対して
少なくとも７０％相同な内部アミノ酸配列または配列番
号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％相
同な内部アミノ酸配列を有する、請求項１３記載のロー
ソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎ
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパク質または該タン
パク質の免疫原性断片。 - 【請求項１５】 配列番号５、６または７に記載のアミ
ノ酸配列に対して少なくとも８０％、好ましくは９０
％、より好ましくは９５％の配列相同性を有する、請求
項１４記載のローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗ
ｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）タンパ
ク質または該タンパク質の免疫原性断片。 - 【請求項１６】 ワクチンにおける使用のための、請求
項９〜１５のいずれか１項記載のローソニア・イントラ
セルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒｉｓ）タンパク質。 - 【請求項１７】 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感
染に対するワクチンの製造のための、請求項９〜１５の
いずれか１項記載のローソニア・イントラセルラリス
（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｓ）タンパク質の使用。 - 【請求項１８】 請求項１〜４のいずれか１項記載の核
酸配列、請求項５記載のＤＮＡ断片、請求項６記載の組
換えＤＮＡ分子、請求項７記載の生組換え運搬体、請求
項８記載の宿主細胞または請求項９〜１５記載のタンパ
ク質と医薬上許容される担体とを含むことを特徴とす
る、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対するワ
クチンの使用。 - 【請求項１９】 アジュバントを含むことを特徴とす
る、請求項１８記載のワクチン。 - 【請求項２０】 ブタに病原性のウイルスもしくは微生
物に由来する追加的な抗原または該抗原をコードする遺
伝情報を含むことを特徴とする、請求項１８または１９
記載のワクチン。 - 【請求項２１】 前記のブタに病原性のウイルスもしく
は微生物が、仮性狂犬病ウイルス、ブタインフルエンザ
ウイルス、ブタパルボウイルス、伝染性胃腸炎ウイル
ス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）、エリシペロ・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐ
ｅｌｏ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ボルデテラ・
ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃ
ｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ）、ヘモ
フィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａ
ｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅ
ｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッ
カス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉ
ｓ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ
ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびア
クチノバシラス・プリゥロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ）よりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項
２０記載のワクチン。 - 【請求項２２】 請求項９〜１５のいずれか１項記載の
タンパク質に対する抗体を含んでなることを特徴とす
る、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉ
ａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）感染に対するワ
クチン。 - 【請求項２３】 請求項１〜４のいずれか１項記載の核
酸配列、請求項５記載のＤＮＡ断片、請求項６記載の組
換えＤＮＡ分子、請求項７記載の生組換え運搬体、請求
項８記載の宿主細胞または請求項９〜１５のいずれか１
項記載のタンパク質と医薬上許容される担体とを混合す
ることを含んでなる、請求項１８〜２１のいずれか１項
記載のワクチンの製造方法。 - 【請求項２４】 該抗体と医薬上許容される担体とを混
合することを含む、請求項２２記載のワクチンの製造方
法。 - 【請求項２５】 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）特
異的ＤＮＡの検出のための診断試験であって、該試験が
請求項１〜４のいずれか１項記載の核酸配列または少な
くとも１２、好ましくは１５、より好ましくは１８ヌク
レオチドの長さを有するその断片を含むことを特徴とす
る診断試験。 - 【請求項２６】 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に
対する抗体の検出のための診断試験であって、該試験が
請求項９〜１５のいずれか１項記載のタンパク質または
その断片を含むことを特徴とする診断試験。 - 【請求項２７】 ローソニア・イントラセルラリス（Ｌ
ａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の
抗原物質の検出のための診断試験であって、該試験が請
求項９〜１５のいずれか１項記載のタンパク質またはそ
の断片に対する抗体を含むことを特徴とする診断試験。
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|---|---|---|---|
| EP00204660 | 2000-12-20 | ||
| EP00204660.5 | 2000-12-20 |
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007527706A (ja) * | 2003-09-12 | 2007-10-04 | インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー | ローソニア・イントラセルラーリスサブユニットワクチン |
| JP2007537721A (ja) * | 2004-01-22 | 2007-12-27 | インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー | ローソニア・イントラセルラーリスのサブユニットワクチン |
| JP2008503737A (ja) * | 2004-06-24 | 2008-02-07 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | ローソニアイントラセルラリスの診断方法 |
| JP2008538502A (ja) * | 2005-04-18 | 2008-10-30 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ インコーポレイテッド | サブユニットワクチン中の構成成分として有用なローソニアタンパク並びにその製造方法及び使用方法 |
| JP2009050264A (ja) | 2002-05-29 | 2009-03-12 | Yamasa Shoyu Co Ltd | 新規なポリリン酸：ａｍｐリン酸転移酵素 |
| JP2011528563A (ja) * | 2008-07-22 | 2011-11-24 | インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー | 新規血清型のローソニア・イントラセルラリス細菌、その細菌に基づくワクチン、該新規ローソニア・イントラセルラリス血清型の特定に適した抗体および該抗体を製造するためのハイブリドーマ |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE501258T1 (de) * | 2000-12-20 | 2011-03-15 | Intervet Int Bv | Lawsonia intracellularis impfstoff |
| EP1609870A1 (en) * | 2004-06-24 | 2005-12-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Method of diagnosing lawsonia intracellularis |
| US20090232848A1 (en) * | 2004-11-24 | 2009-09-17 | Pfizer Inc. | Methods for cultivating lawsonia intracellularis |
| US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| US8398994B2 (en) | 2005-07-15 | 2013-03-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Lawsonia vaccine and methods of use thereof |
| US8470336B2 (en) | 2006-05-25 | 2013-06-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Vaccination of young animals against Lawsonia intracellularis infections |
| US20080241190A1 (en) * | 2006-11-13 | 2008-10-02 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Vaccination of horses against lawsonia intracellularis |
| EP2101815A4 (en) | 2006-12-11 | 2010-10-06 | Boehringer Ingelheim Vetmed | EFFICIENT PROCESS FOR THE TREATMENT OF PORCINE CIRCOVIRUS AND LAWSONIA INTRACELLULARIS INFECTIONS |
| EP2200643B1 (en) | 2007-09-17 | 2013-09-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | A live lawsonia intracellularis vaccine administered in combination with an antibiotic for use in the treatment of lawsonia intracellularis infections in pigs |
| TWI551295B (zh) | 2008-04-18 | 2016-10-01 | 英特威特國際股份有限公司 | 防備胞內勞森菌（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）用疫苗 |
| TWI449533B (zh) * | 2008-04-18 | 2014-08-21 | Intervet Int Bv | 防備胞內勞森菌（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）、豬肺炎黴漿菌（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及豬環狀病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏ ｖｉｒｕｓ）用疫苗 |
| KR101837768B1 (ko) | 2011-05-25 | 2018-03-12 | 건국대학교 산학협력단 | 돼지 증식성 회장염을 진단하기 위한 단백질 및 그 응용 |
| US20140017268A1 (en) * | 2012-06-05 | 2014-01-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Composition and Methods for Detecting or Preventing Lawsonia intracellularis Infections |
| US10751405B2 (en) | 2015-02-04 | 2020-08-25 | Intervet Inc. | Vaccine for use against subclinical Lawsonia infection in a pig |
| RU2709197C2 (ru) | 2015-02-04 | 2019-12-17 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина для применения против субклинической инфекции lawsonia у свиней |
| JP7088835B2 (ja) * | 2015-10-16 | 2022-06-21 | カンザス ステイト ユニバーシティ リサーチ ファウンデーション | ブタサーコウイルス３型免疫原性組成物、その製造方法、およびその使用方法 |
| CL2017002196A1 (es) | 2017-08-30 | 2017-11-17 | Univ De Concepción | Vacuna recombinante contra enteropatía proliferativa en animales. |
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Family Cites Families (15)
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| EP0473210B1 (en) | 1990-07-30 | 1994-04-13 | Akzo Nobel N.V. | Recombinant Marek's disease virus |
| WO1993004163A1 (en) | 1991-08-23 | 1993-03-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Strain of chlamydia |
| US5610059A (en) * | 1992-11-09 | 1997-03-11 | University Of Arizona | Etiological agent for porcine enteritis |
| FR2714074B1 (fr) | 1993-12-20 | 1996-03-01 | Pasteur Institut | Promoteurs des gènes GRA1, GRA2, GRA5 et GRA6 de toxoplasma gondii et vecteurs d'expression comprenant lesdits promoteurs. |
| US5885823A (en) * | 1995-06-05 | 1999-03-23 | Nobl Laboratories, Inc. | Lawsonia intracellularis cultivation, anti-Lawsonia intracellularis vaccines and diagnostic agents |
| US5714375A (en) * | 1995-06-05 | 1998-02-03 | Nobl Laboratories, Inc. | Ileal symbiont intracellularis propagation in suspended host cells |
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| BR0011294A (pt) | 1999-05-13 | 2002-02-26 | Pfizer Prod Inc | Gene derivado lawsonia e polipeptìdeos, peptìdeos e proteìnas flge relacionados e seus usos |
| MXPA01011570A (es) * | 1999-05-13 | 2003-08-20 | Australian Pork Ltd | Gen derivado de lawsonia y polipeptidos, peptidos y proteinas relacionadas con peptido h de membrana externa. |
| EP1177213A4 (en) | 1999-05-13 | 2002-08-28 | Pfizer Prod Inc | LAWSONIA DERIVATIVE GENE, POLYPEPTIDES, PEPTIDES AND HEMOLYSIN PROTEINS AND USES THEREOF |
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| EP1094070A3 (en) | 1999-10-22 | 2002-01-09 | Pfizer Products Inc. | Lawsonia intracellularis proteins, and related methods and materials |
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Cited By (7)
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|---|---|---|---|---|
| JP2009050264A (ja) | 2002-05-29 | 2009-03-12 | Yamasa Shoyu Co Ltd | 新規なポリリン酸：ａｍｐリン酸転移酵素 |
| JP2007527706A (ja) * | 2003-09-12 | 2007-10-04 | インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー | ローソニア・イントラセルラーリスサブユニットワクチン |
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| JP2008503737A (ja) * | 2004-06-24 | 2008-02-07 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | ローソニアイントラセルラリスの診断方法 |
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