JP2002544287A - ウイルス感染の長期持続性融合ペプチドインヒビター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 抗ウイルス活性および抗膜融合性活性を示すペプチドは、改変されてインビボでのより高い安定性および改善された半減期を生じる。選択された融合ペプチドインヒビターとしては、ＤＰ１７８およびＤＰ１０７ならびにそれらの関連ペプチドおよびアナログが挙げられる。これらの改変されたペプチドは、１つ以上の血液成分、好ましくは可動性血液成分と共有結合を形成し得る。本発明の様々な実施形態の生成物は、多くのウイルス（これらとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はしかウイルス（ＭｅＶ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる）の感染に対する予防剤および／またはそれらの処置として使用され得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、ウイルス活性のインヒビターである改変ペプチドおよび／または抗
膜融合性（ａｎｔｉｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）特性を示すポリペプチドに関する。特
に、本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒ
トパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はしかウイルス（ＭｅＶ）およびサ
ル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の改変ペプチドインヒビターに関し、この改変ペ
プチドインヒビターは、各有ウイルス感染の処置のための長期の作用を有する。
本発明はまた、改変ペプチドおよび内在性キャリアの結合体、特に改変ペプチド
および種々の流動性血液成分（特に、流動性の内在性タンパク質）の結合体に関
する。

【０００２】 （発明の背景） 正常な細胞において通常の生物学的プロセスの間の膜融合事象はまた、種々の
疾患状態に関与する（例えば、細胞への外被ウイルスの細胞への侵入が挙げられ
る）。阻害するかまたは、さもなければ膜融合関連事象を中断させるペプチドは
公知である。これらとしては、例えば、非感染細胞へのレトロウイルス伝染の阻
害が挙げられる。例えば、ヒト免疫不全ウイルス１型（「ＨＩＶ−１」）膜貫通
（「ＴＭ」）糖タンパク質 ｇｐ４１内の別々のドメイン由来の合成ペプチドＤ
Ｐ−１０７およびＤＰ−１７８は、ＨＩＶ−１感染およびＨＩＶ誘発細胞−細胞
融合の潜在的なインヒビターである。

【０００３】 Ｌａｍｂｅｒｔら「Ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ Ｒｅｇ
ｉｏｎｓ ｏｆ Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｆ）Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ ａｒｅ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｖｉｒａｌ Ｆ
ｕｓｉｏｎ」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｕ．Ｓ．Ａ．，
１９９６年３月５日，第９３巻（５），２１８６−２１９１頁は、ヒト免疫不全
ウイルス１型（「ＨＩＶ−１」）膜貫通（「ＴＭ」）タンパク質（ｇｐ４１）内
の別々のドメイン由来の合成ペプチドＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８（Ｔ−２
０）がＨＩＶ−１感染および融合の潜在的なインヒビターであることを開示する
。ＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８（Ｔ−２０）のペプチド二次構造に基づくコ
ンピューター検索ストラテジー（コンピューター抗ウイルス検索技術（Ｃ．Ａ．
Ｓ．Ｔ．））を使用して、Ｌａｍｂｅｒｔらは、他の膜融合性（ｆｕｓｏｇｅｎ
ｉｃ）ウイルスの糖タンパク質内のＨＩＶ−１ ｇｐ４１のＤＰ−１０７および
ＤＰ−１７８領域に対する保存された７回反復ドメインアナログを同定した。３
つの代表的なパラミクソウイルス（ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフル
エンザウイルス３型（ＨＰＩＶ−３）およびはしかウイルス（ＶＭ））由来の抗
ウイルスペプチドは、相同ウイルス媒介合胞体形成をブロックし、そして０．０
１５〜０．２５０μＭの範囲のＥＣ₅₀値を示した。さらに、これらのペプチドは
、本来のウイルスについて高度に選択的であった。

【０００４】 米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号および同第６，
０２０，４５９号（本明細書中でその全体が援用される）は、同様に、ＨＩＶ−
１単離体ＬＡＩ（ＨＩＶ−１_LAI）由来のｇｐ４１のアミノ酸６３８〜６７３に
対応する３６アミノ酸ペプチド（ＤＰ１７８）、およびＨＩＶ−１_LAI由来のｇ
ｐ４１のアミノ酸５５８〜５９５に対応する３８アミノ酸ペプチド（ＤＰ１０７
）の両方が、潜在的なＨＩＶ−１活性を示すことを開示する。

【０００５】 当該分野において開示される、抗ウイルスペプチドまたは抗膜融合性ペプチド
の多くは、潜在的な抗ウイルス活性および／または抗膜融合活性を示すが、これ
らのペプチドは、主に迅速な血清クリアランスならびにペプチダーゼ活性および
プロテアーゼ活性に起因して、インビボでの短い血漿半減期を被る。次いで、こ
のことは、一般に、ペプチドの有効な抗ウイルス活性を減少する。従って、存在
する抗ウイルスペプチドおよび／または抗膜融合性ペプチドの半減期を延長する
方法、ならびにこれらのペプチドのインビボでのより長い期間の作用を提供する
ための方法の必要性が存在する。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、これらの必要性および他の必要性を満たし、そして抗ウイルス活性
および／または抗膜融合活性を有する改変ペプチドに関する。これらの改変ペプ
チドは、インビボで増加した安定性を提供し、そしてペプチダーゼ分解またはプ
ロテアーゼ分解に対する感受性を減少する。従って、これらの改変ペプチドは、
例えば、より頻繁な、または連続性でさえあるペプチドの投与に対する必要性を
最小化する。例えば、本発明の様々な実施形態の生成物は、多くのウイルス（こ
れらとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）
、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はしかウイルス（ＭｅＶ）およ
びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる）の感染に対する予防剤および
／またはそれらの処置として使用され得る。ウイルストランスフェクション（例
えば、肝炎ウイルス、エプスタイン−バーウイルスおよび他の関連するウイルス
）に関与する他のペプチドの改変もまた、本発明の範囲内である。

【０００７】 本発明は、抗ウイルス活性および／または抗膜融合活性を示すペプチドの化学
反応改変に関し、その結果、改変ペプチドは血液成分上の利用可能な官能基と反
応して安定な共有結合を形成し得る。本発明の１つの実施形態では、改変ペプチ
ドは、血液成分上のアミノ基、水酸基またはチオール基と反応し安定な共有結合
を形成する反応基を含む。本発明の他の実施形態では、この反応基はマレイミド
であり得、これは、血液タンパク質（これには、流動性血液タンパク質（例えば
、アルブミン）が挙げられる）上のチオール基と反応性である。

【０００８】 特に、本発明は、ＤＰ１０７ペプチドおよびＤＰ１７８ペプチドならびにこれ
らのアナログの、このような化学反応改変に関し、これらとしては、ＤＰ１０７
ペプチドおよびＤＰ１７８ペプチドが誘導されるＨＩＶのｇｐ４１領域に対応す
る他の（非−ＨＩＶ）ウイルスならびに抗ウイルス活性または抗膜融合活性を示
す他の（非−ＨＩＶ）ウイルス由来のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられ
る。より具体的には、これらのペプチドは、とりわけ、ヒトＲＳウイルス（ＲＳ
Ｖ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はしかウイルス（ＭｅＶ）
およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）に対する抗ウイルス活性を示し得る。本
発明はまた、配列番号１〜配列番号８６のペプチドの、このような化学反応改変
に関する。

【０００９】 本発明はまた、改変された抗ウイルス活性を示すペプチドを含むウイルス感染
の予防および／または処置における使用のための組成物に関し、このペプチドは
、記載されるような反応基を有する。より具体的には、本発明は、ＡＩＤＳ、ヒ
トＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、はし
かウイルス（ＭｅＶ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の予防および／ま
たは処置における使用のためのこのような組成物に関する。

【００１０】 （表の簡単な説明） 本発明は、表を参照することにより、より良く理解される。ここで、 表１は、アミノ酸の１文字略語および３文字略語ならびに共通の保護基と併せ
て、一般に存在するアミノ酸を列挙する。

【００１１】 表２は、ＤＰ１７８のカルボキシ短縮を示す。

【００１２】 表３は、ＤＰ１７８のアミノ短縮を示す。

【００１３】 表４は、ＤＰ１０７のカルボキシ短縮を示す。

【００１４】 表５は、ＤＰ１０７のアミノ短縮を示す。

【００１５】 表６は、ＨＩＶ−２_NIHZＤＰ１７８アナログのカルボキシ短縮を示す。

【００１６】 表７は、ＨＩＶ−２_NIHZＤＰ１７８アナログのアミノ短縮を示す。

【００１７】 表８は、ＲＳＶ Ｆ２領域ＤＰ１０７アナログのカルボキシ短縮を示す。

【００１８】 表９は、ＲＳＶ Ｆ２領域ＤＰ１０７アナログのアミノ短縮を示す。

【００１９】 表１０は、ＲＳＶ Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのカルボキシ短縮を示す。

【００２０】 表１１は、ＲＳＶ Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのアミノ短縮を示す。

【００２１】 表１２は、ＨＰＶ３ Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのカルボキシ短縮を示す。

【００２２】 表１３は、ＨＰＶ３ Ｆ１領域ＤＰ１７８アナログのアミノ短縮を示す。

【００２３】 表１４は、ＨＰＶ３ Ｆ１領域ＤＰ１０７アナログのカルボキシ短縮を示す。

【００２４】 表１５は、ＨＰＶ３ Ｆ１領域ＤＰ１０７アナログのアミノ短縮を示す。

【００２５】 表１６は、代表的な抗ＲＳＶペプチドを示す。

【００２６】 表１７は、代表的な抗ＨＰＶ３ペプチドを示す。

【００２７】 表１８は、代表的な抗ＳＩＶペプチドを示す。

【００２８】 表１９は、代表的な抗ＭｅＶペプチドを示す。

【００２９】 （配列表の簡単な説明） 本発明は、配列表を参照することにより、より良く理解される。ここで、 配列番号１は、ＤＰ１７８のペプチド配列を示す。

【００３０】 配列番号２は、ＤＰ１０７のペプチド配列を示す。

【００３１】 配列番号３〜９は、特定のＤＰ１８７アナログのペプチド配列を示す。

【００３２】 配列番号１０〜３０は、ＤＰ１７８およびＤＰ１０７に対応するＲＳＶ Ｆ１
領域およびＲＳＶ Ｆ２領域のペプチド配列、ならびに代表的な（ｒｅｐｒｅｓ
ｅｎｔｔｉｖｅ）抗ＲＳＶペプチドを示す。

【００３３】 配列番号３１〜６２は、ＤＰ１７８およびＤＰ１０７に対応するＨＰＩＶ３
Ｆ１領域ペプチド配列、および代表的な抗ＨＰＩＶ３ペプチドを示す。

【００３４】 配列番号６３〜７３は、ＤＰ１７８に対応するＳＩＶのペプチド配列および代
表的な抗ＳＩＶペプチドを示す。そして、 配列番号７４〜７８は、ＤＰ１７８に対応するＭｅＶのペプチド配列および代
表的な抗ＭｅＶペプチドを示す。

【００３５】 （発明の詳細な説明） 本発明の完全な理解を確実にするために、以下の定義が提供される： （抗ウイルスペプチド）：本明細書中で使用される場合、抗ウイルスペプチド
は、例えば、細胞−細胞融合または遊離ウイルス感染を阻害することにより、細
胞のウイルス感染を阻害するペプチドをいう。感染の経路は、膜融合（外被ウイ
ルスの場合に生じる場合）またはウイルス構造および細胞構造に関与するいくつ
かの他の融合事象を含み得る。特定のウイルスによるウイルス感染を阻害するペ
プチドは、特定のウイルスに関して言及され得る（例えば、抗ＨＩＶペプチド、
抗ＲＳＶペプチドなど）。

【００３６】 （抗膜融合性ペプチド）：抗膜融合性ペプチドは、ペプチドの非存在下で生じ
る膜融合のレベルと比較して、２以上の要素間（例えば、ウイルス−細胞または
細胞−細胞）の膜融合事象のレベルを阻害するか減少する能力を示しているペプ
チドである。

【００３７】 （ＨＩＶおよび抗ＨＩＶペプチド）：ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）（これ
は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を担う）は、レトロウイルスのレンチウ
イルファミリーのメンバーである。ＨＩＶ、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２の２つ
の流行のタイプが存在し、各々の種々の株は、同定されている。ＨＩＶは、ＣＤ
−４＋細胞を標的化し、そしてウイルスの進入は、ＨＩＶタンパク質ｇｐ４１の
ＣＤ−４＋細胞表面レセプターとの結合に依存する。抗ＨＩＶペプチドは、ＨＩ
Ｖに対する抗ウイルス活性（これらには、遊離ウイルスによるＣＤ−４＋細胞感
染を阻害すること、ならびに／または感染ＣＤ−４＋細胞と非感染ＣＤ−４＋細
胞との間のＨＩＶ誘導合胞体形成を阻害することが挙げられる）を示すペプチド
をいう。

【００３８】 （ＳＩＶおよび抗ＳＩＶペプチド）：サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）は、感
受性のサルにおいて後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）様疾患を引き起こすレン
チウイルスである。抗ＳＩＶペプチドは、ＳＩＶに対する抗ウイルス活性（これ
らには、ＳＩＶウイルスによる細胞の感染を阻害すること、および感染細胞と非
環腺細胞との間の合胞体形成を阻害することが挙げられる）を示すペプチドであ
る。

【００３９】 （ＲＳＶおよび抗ＲＳＶペプチド）：ＲＳウイルス（ＲＳＶ）は、呼吸器病原
体であり、特に、このウイルスが細気管支炎（小通気道の炎症）および肺炎を引
き起こし得る場合、乳児および小児において危険である。ＲＳＶはネガティブセ
ンス（一本鎖ＲＮＡウイルス）でありかつウイルスのＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉ
ｄａｅファミリーのメンバーである。ＲＳＶの感染の経路は、典型的には気道（
すなわち、鼻、喉頭、気管および気管支ならびに細気管支）により粘膜を介する
。抗ＲＳＶペプチドは、ＲＳＶに対する抗ウイルス活性（これらには、フリーＲ
ＳＶウイルスによる粘膜細胞感染および感染細胞と非環腺細胞との間の合胞体形
成を阻害することが挙げられる）を示すペプチドである。

【００４０】 （ＨＰＶおよび抗ＨＰＶペプチド）：ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰ
ＩＶまたはＨＰＶ）（ＲＳＶと同様）は、気管疾患の別の主要原因であり、ＲＳ
Ｖと同様にネガティブセンス（ウイルスのＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅファ
ミリーのメンバーである一本鎖ＲＮＡウイルス）である。４種類の認識されたＨ
ＰＩＶの血清型（ＨＰＩＶ−１、ＨＰＩＶ２、ＨＰＩＶ３およびＨＰＩＶ４）が
存在する。ＨＰＩＶ−１は、子どもにおけるクループの主要原因であり、そして
ＨＰＩＶ−１およびＨＰＩＶ−２の両方は、上気道疾患および下気道疾患を引き
起こす。ＨＩＰＶ−３は、より頻繁に細気管支炎および肺炎に関与する。抗ＨＰ
Ｖペプチドは、ＨＰＶに対する抗ウイルス活性（これらには、フリーＨＰＶウイ
ルスによる感染および感染細胞と非環腺細胞との間の合胞体形成を阻害すること
が挙げられる）を示すペプチドである。

【００４１】 （Ｍｅｖおよび抗Ｍｅｖペプチド）：はしかウイルス（ＶＭまたはＭｅＶ）は
、外被ネガティブ（ウイルスのＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅファミリーに属
する一本鎖ＲＮＡウイルス）である。ＲＳＶおよびＨＰＶと同様に、ＭｅＶは、
呼吸器疾患を引き起こし、そしてまた、さらなる日和見感染を担う免疫抑制を生
じる。いくつかの場合、ＭｅＶは、脳の感染を確立し、重篤な神経性合併症の原
因となる。抗ＭｅＶペプチドは、Ｍｅｖに対する抗ウイルス活性（これらには、
フリーＭｅｖウイルスによる感染および感染細胞と非環腺細胞との間の合胞体形
成を阻害することが挙げられる）を示すペプチドである。

【００４２】 （ＤＰ−１７８およびＤＰ１７８アナログ）：他に明確にまたは文脈により指
示のない限り、ＤＰ−１７８は、以下のアミノ酸配列： ＹＴＳＬＩＨＳＬＩＥＥＳＱＮＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫＷＡＳＬＷＮＷＦ
（配列番号１） を有するＨＩＶ−１単離体ＬＡＩ（ＨＩＶ_LAI）のｇｐ４１糖タンパク質のアミ
ノ酸残基６３８―６７３に対応する３６アミノ酸ＤＰ−１７８ペプチド、ならび
に、それらの短縮、欠失および／または挿入を意味する。ＤＰ１７８の短縮は、
３〜３６アミノ酸の間のペプチドを含み得る。欠失は、ＤＰ１７８ペプチドペプ
チドからの１以上のアミノ酸残基の除去からなり、そしてこれは、ペプチド配列
の単一の隣接部分または複数の部分の除去を含み得る。挿入は、１つのアミノ酸
残基または残基の伸長を含み得、そしてＤＰ１７８ペプチドのカルボキシ末端も
しくはアミノ末端、またはペプチド内部の位置において作製され得る。

【００４３】 ＤＰ１７８ペプチドアナログは、そのアミノ酸配列がＤＰ１７８が由来するｇ
ｐ４１領域に対応するＨＩＶ−１_LAI以外のウイルスのペプチド領域、ならびに
それらの短縮、欠失または挿入のアミノ酸配列からなるペプチドである。このよ
うな他のウイルスとしては、他のＨＩＶ単離体（例えば、ＨＩＶ−２_NIHZ、ＲＳ
ウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、サル免疫不
全ウイルス（ＳＩＶ）およびはしかウイルス（ＭｅＶ））が挙げられるがこれら
に限定されない。ＤＰ１７８アナログはまた、ＡＬＬＭＯＴＩ５、１０７×１７
８×４およびＰＬＺＩＰ検索モチーフ（米国特許第６，０１３，２６３号、同第
６，０１７，５３６号および同第６，０２０，４５９号に記載されそして本明細
書中で援用される）により同定されるかまたは認識されるこれらのペプチド配列
をいう。これらのモチーフは、ＤＰ１７８に対する構造類似性および／またはア
ミノ酸モチーフ類似性を有する。ＤＰ１７８アナログはさらに、「ＤＰ１７８様
」（この用語は、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号
および同第６，０２０，４５９号において定義されるので）として記載されるペ
プチドをいう。

【００４４】 （ＤＰ１０７およびＤＰ１０７アナログ：）他に明白に示されないか、または
文脈によって示されない限り、ＤＰ１０７は、ＨＩＶ−１単離体ＬＡＩ（ＨＩＶ _LAI ）のｇｐ４１タンパク質のアミノ酸残基５５８〜５９５に対応する３８アミ
ノ酸ＤＰ１０７ペプチド、ならびにその短縮、欠失および／または挿入を意味し
、そして以下の配列を有する：

【００４５】

【化１】 。ＤＰ１０７ペプチドの短縮は、３〜３８アミノ酸の間のペプチドを含み得る。
欠失は、ＤＰ１０７ペプチドからの１以上のアミノ酸残基の除去からなり得、そ
してペプチド配列の１つの近接する部分または複数の部分の除去を含み得る。挿
入はまた、１つのアミノ酸残基または残基のストレッチを含み得、そしてＤＰ１
０７ペプチドのカルボキシ末端またはアミノ末端で、あるいはペプチドに対する
内部の位置で作製され得る。

【００４６】 ＤＰ１０７ペプチドアナログは、これらのアミノ酸配列がＨＩＶ−１_LA1、な
らびにそれらの短縮、欠失および／または挿入、以外のウイルスのペプチド領域
のアミノ酸配列に含まれるペプチドでり、このＨＩＶ−１_LA1は、ＤＰ１０７が
由来したｇｐ４１領域に対応する。このような他のウイルスとしては、他のＨＩ
Ｖ単離体（例えば、ＨＩＶ−２_NIHZ、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフ
ルエンザウイルス（ＨＰＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、およびはしか
ウイルス（ＭｅＶ））が挙げられるが、これらに限定されない。ＤＰ１０７アナ
ログはまた、ＡＬＬＭＯＴＩ５、１０７ｘ１７８ｘ４およびＰＬＺＩＰ検索モチ
ーフによって同定されたか、または認識された、これらのペプチド配列いい、こ
れらのモチーフは、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６
号および６，０２０，４５９号に記載され、そして本明細書中に援用され、ＤＰ
１０７に類似の構造モチーフおよび／またはアミノ酸モチーフを有する。ＤＰ１
０７アナログは、さらに、「ＤＰ１０７様」と記載されるペプチドをいい、この
用語は、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号および６
，０２０，４５９号に定義される。

【００４７】 （反応性基：）反応性基とは、共有結合を形成し得る実体である。このような
反応性基は、目的の治療用ペプチドに連結または結合される。反応性基は、一般
に、水性環境内で安定であり、そして通常、カルボキシ基、ホスホリル基、また
は従来のアシル基であり、エステルまたは混合無水物のいずれか、あるいはイミ
デートとして存在し、これによって、移動性の血液成分の標的部位の、アミノ基
、ヒドロキシまたはチオールのような官能基と共有結合を形成し得る。大部分に
おいて、これらのエステルは、フェノール性化合物を含むか、またはチオールエ
ステル、アルキルエステル、リン酸エステルなどである。反応性基としては、ス
クシンイミジル（ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ）基およびマレイミド基が挙げられる。

【００４８】 （官能基：）官能基とは、改変された治療用ペプチドの反応性基が反応して共
有結合を形成する、血液成分上の基であり、可動性タンパク質および固定タンパ
ク質を含む。官能基は、通常、エステル反応性基との結合のためのヒドロキシル
基、マレイミド、イミデートおよびチオールエステル基との結合のためのチオー
ル基；活性化カルボキシル基、ホスホリル基または反応性基上の他の任意のアシ
ル基との結合のためのアミノ基を含む。

【００４９】 （血液成分：）血液成分は、固定されていても可動であってもいずれでもよい
。固定された血液成分は、非可動性の血液成分であり、そして組織、膜レセプタ
ー、介在タンパク質、フィブリンタンパク質、コラーゲン、血小板、内皮細胞、
上皮細胞およびこれらが結合する膜および膜レセプター、身体の細胞（ｓｏｍａ
ｔｉｃ ｂｏｄｙ ｃｅｌｌ）、骨格細胞および平滑筋細胞、神経成分、骨細胞
および破骨細胞ならびに全ての身体組織（特に、循環系およびリンパ系に関連す
るもの）を含む。可動性血液成分とは、いかなる延長した期間にわたっても（一
般的には５分を超えず、より通常には１分）固定された位置を有さない、血液成
分である。これらの血液成分は、膜結合しておらず、そして延長した期間にわた
って血液中に存在し、そして少なくとも０．１μｇ／ｍｌの最小濃度で存在する
。可動性血液成分としては、血清アルブミン、トランスフェリン、フェリチン、
ならびにＩｇＭおよびＩｇＧのような免疫グロブリンが挙げられる。可動性血液
成分の半減期は、少なくとも約１２時間である。

【００５０】 （保護基：）保護基とは、ペプチド誘導体をそれ自体と反応しないよう保護す
るために利用される、化学部分である。種々の保護基が、米国特許第５，４９３
，００７号（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示される。この
ような保護基としては、アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍ
ｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（
Ｃｂｚ）などが挙げられる。特定の保護されたアミノ酸を、表１に示す。

【００５１】

【表１】 （連結基：）連結（スペーサー）基とは、反応性基を治療用ペプチドに連結ま
たは接続する、化学部分である。連結基は、１つ以上のアルキル基、アルコキシ
基、アルケニル基、アルキル基で置換されたアルキニル基またはアミノ基、シク
ロアルキル基、多環式基、アリール基、ポリアリール基、置換アリール基、複素
環式基、および置換複素環式基を含み得る。連結基はまた、ＡＥＡ（（２−アミ
ノ）エトキシ酢酸）または好ましい連結基であるＡＥＥＡ（［２−（２−アミノ
）エトキシ）］エトキシ酢酸）のような、ポリエトキシアミノ酸を含み得る。好
ましい連結基は、アミノエトキシエトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）である。

【００５２】 （感受性官能基）感受性官能基とは、治療用ペプチドに潜在的な反応部位を提
供する、原子の群である。存在する場合には、感受性官能基は、リンカー−反応
性基改変のための付着点として、選択され得る。感受性官能基としては、カルボ
キシル基、アミノ基、チオール基、およびヒドロキシル基が挙げられるが、これ
らに限定されない。

【００５３】 （改変されたペプチド） 改変されたペプチドは、抗ウイルスおよび／または
抗膜融合性ペプチドであり、反応性基の付着によって改変されている。反応性基
は、連結基を介してか、または必要に応じて連結基を使用せずにかのいずれかで
、治療用ペプチドに付着され得る。１つ以上のさらなるアミノ酸が治療用ペプチ
ドに付加されて、反応性基の付着を容易にし得ることもまた、考慮される。改変
されたペプチドは、血液成分との結合体化がインビボで起こるように、インビボ
で投与され得るか、またはこれらは、最初に血液成分とインビトロで結合体化さ
れ、そして得られるペプチダーゼに対して安定化されたペプチド（以下に定義さ
れるような）が、インビボで投与され得る。

【００５４】 （結合体化ペプチド） 結合体化ペプチドは、改変されたペプチドであり、改
変されたペプチドの反応性基と機能性の血液成分の官能基との間に形成された（
連結基を伴うか、または伴わないで）共有結合を介して血液成分に結合されてい
る。本出願にわたって使用される用語「結合体化ペプチド」は、特定の結合体化
ペプチド（例えば、「結合体化ＤＰ１７８」または「結合体化ＤＰ１０７」）を
いうように、より特化され得る。

【００５５】 これらの定義を考慮すると、本発明は、存在する抗ウイルスおよび抗膜融合性
ペプチドの特性を利用する。ペプチドによって阻害され得るウイルスとしては、
例えば、表Ｖ〜ＶＩＩおよびＩＸ〜ＸＩＶ中で、米国特許第６，０１３，２６３
号、同第６，０１７，５３６号および同第６，０２０，４５９号に列挙されるウ
イルスのすべての種が挙げられるが、これらに限定されない。これらのウイルス
としては、例えば、ヒトレトロウイルス（ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、およびヒト
Ｔリンパ球（ｌｙｍｐｏｃｙｔｅ）ウイルス（ＨＴＬＶ−ＩおよびＨＴＬＶ−Ｉ
Ｉ）を含む）、および非ヒトレトロウイルス（ウシ白血症ウイルス、ネコ肉腫ウ
イルス、ネコ白血症ウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、サル肉腫ウイ
ルス、サル白血病、およびヒツジ進行性肺炎ウイルスを含む）が挙げられる。非
レトロウイルスウイルスはまた、本発明のペプチドによって阻害され得、これら
のペプチドとしては、以下を含む：ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）、イヌジステン
パーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス（
ＨＰＩＶ）、インフルエンザウイルス、はしかウイルス（ＭｅＶ）、エプスタイ
ン−バーウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびサルマソン−ファイザーウイルス
。非エンベロープ化ウイルスはまた、本発明のペプチドによって阻害され得、そ
してそれらのウイルスとしては、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス）
、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、エコーウイル、コクサッキーウイルス
、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、パルボウイルス、アデノウ
イルス、およびレトロウイルスを含むが、これらに限定されない。

【００５６】 例として、本出願の背景の節で議論されたように、ＨＩＶ融合タンパク質の作
用のメカニズムが記載され、そしてペプチドの抗ウイルスおよび抗膜融合性特性
は十分に確立された。カルボキシ末端外部ドメイン配列に対応する合成ペプチド
（例えば、ＬＡＩ株の、ＨＩＶ−１クラスＢのアミノ酸残基６４３〜６７８、ま
たは類似の種からの残基６３８〜６７３、ならびに残基５５８〜５９５）は、低
濃度でウイルス媒介性の細胞−細胞融合を完全に阻害することが示された。融合
ペプチドは、ネイティブなウイルスｇｐ４１のロイシンジッパー領域と競合し、
従って、ウイルスの細胞内への融合／感染の干渉を生じる。

【００５７】 本発明の焦点は、ＤＡＣ（Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ）技
術を用いて、選択された抗ウイルスおよび／または抗膜融合性ペプチドを改変し
、ペプチドキャリアへのペプチドの選択的結合を通じて、このペプチドに改善さ
れたバイオアベイラビリティ、延長した半減期およびより優れた分布を与えるが
、ペプチドの抗ウイルス特性の改変を伴わないことである。本発明の選択された
キャリア（しかし、これに限定されない）は、マレイミド部分で改変された抗ウ
イルスおよび／または抗膜融合性ペプチドによるその遊離のチオールを通じてア
ルブミン結合体化される。

【００５８】 いくつかのペプチド配列が、ＨＩＶ−１融合／感染の予防に高度に強力である
として、文献に記載された。例として、ペプチドＤＰ１７８は、融合に関連する
ｇｐ４１のコンフォメーションに結合する。従って、本発明の１つの実施形態に
おいて、ＤＰ１７８およびＤＰ１７８様ペプチドは改変される。

【００５９】 同様に、本発明の他の実施形態は、ＨＩＶに対する使用のためのＤＰ１０７お
よびＤＰ１０７様ペプチド、ならびにＲＳＶ、ＨＰＶ、ＭｅＶおよびＳＩＶウイ
ルスにおいて見出されるＤＰ１０７およびＤＰ１７８に類似の（ａｎａｌａｇｏ
ｕｓ）ペプチドの改変を含む。

【００６０】 （１．ＤＰ１７８およびＤＰ１０７） （Ａ．ＤＰ１７８ペプチド） ＤＰ１７８ペプチドは、ＨＩＶ−１_LAI単離体からの膜貫通タンパク質ｇｐ４
１のアミノ酸残記載６３８〜６７３に対応し、そして３６アミノ酸配列（アミノ
末端からカルボキシ末端のリーディング）を有する。

【００６１】

【化２】 全長ＤＰ１７８の３６マーに加えて、本発明のペプチドは、３アミノ酸残基と
３６アミノ酸残基との間のペプチド（すなわち、トリペプチドから３６マーのポ
リペプチドのサイズに及ぶペプチド）を含むＤＰ１７８ペプチドの短縮を含む。
これらの短縮されたペプチドは、表２および３に示される。

【００６２】 さらに、ＤＰ１７８ペプチドのアミノ酸置換はまた、本発明の範囲内である。
ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２エンベロープ化タンパク質は、構造的に異なるが、
ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２のＤＰ１７８に対応する領域内に、著しいアミノ酸
保存が存在する。アミノ酸の保存は、周期性の性質の保存であり、構造および／
または機能のいくらかの保存を示唆する。従って、アミノ酸置換の１つの可能な
クラスは、本発明のＤＰ１７８ペプチドの構造を安定化すると推定さられるこれ
らのアミノ酸の変化を含む。本明細書中で開示されるＤＰ１７８およびＤＰ１７
８アナログ配列を利用して、当業者は容易にＤＰ１７８コンセンサス配列を 作製し、そして好ましいアミノ酸置換を表す保存されたアミノ酸残基を、これら
から確かめ得る。

【００６３】 アミノ酸置換は、保存された性質の置換または保存されていない性質の置換で
あり得る。保存されたアミノ酸置換は、類似の電荷、サイズ、および／または疎
水性特徴のアミノ酸での、ＤＰ１７８ペプチド配列の１以上のアミノ酸の置換（
例えば、グルタミン酸（Ｅ）のアスパラギン酸（Ｄ）へのアミノ酸置換）からな
る。保存されていない置換は、異なる電荷、サイズ、および／または疎水性特徴
を保有するアミノ酸での、ＤＰ１７８ペプチド配列の１以上のアミノ酸の置換（
例えば、グルタミン酸（Ｅ）のバリン（Ｖ）への置換）からなる。

【００６４】 ＤＰ１７８のアミノ酸の挿入は、１つのアミノ酸残基またはひとつづきの残基
からなる。挿入は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７８短縮ポリペプチドのカルボキシ
末端またはアミノ末端、ならびにペプチドに対する内部の位置で作製され得る。

【００６５】 このような挿入は、一般的に２〜１５アミノ酸長にわたる。目的のペプチドの
カルボキシ末端またはアミノ末端のいずれかで作製された挿入は、好ましい約２
〜約５０アミノ酸を有する、より広いサイズの範囲の挿入であり得ることが意図
される。このような挿入が、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ５また
はＰＬＺＩＰ検索モチーフによってなお認識され得るペプチドを生じる限り、１
以上のこのような挿入は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７８短縮に導入され得る。

【００６６】 好ましいアミノ末端挿入物またはカルボキシ末端挿入物は、約２〜約５０のア
ミノ酸残基の長さにわたるペプチドであり、実際のＤＰ１７８ ｇｐ４１アミノ
酸配列に対して、それぞれアミノまたはカルボキシのいずれかでｇｐ４１タンパ
ク質領域に対応する。従って、好ましいアミノ末端またはカルボキシ末端のアミ
ノ酸挿入物は、ｇｐ４１タンパク質のＤＰ１７８領域に対して、すぐ近くのアミ
ノまたはカルボキシで見出されるｇｐ４１アミノ酸配列を含む。

【００６７】 ＤＰ１７８またはＤＰ１７８短縮の欠失はまた、本発明の範囲内である。この
ような欠失は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７８様ペプチド配列からの１以上のアミ
ノ酸の除去からなり、生じるペプチド配列の下限の長さは、４〜６のアミノ酸で
ある。

【００６８】 このような欠失は、ペプチド配列の１つの連続する部分またはそれより大きな
１つの不連続の部分を含み得る。このような欠失が、上記の１０７ｘ１７８ｘ４
、ＡＬＬＭＯＴＩ５またはＰＬＺＩＰ検索モチーフによって、なお認識され得る
ペプチドを生じる限り、１以上のこのような欠失は、ＤＰ１７８またはＤＰ１７
８短縮に導入され得る。

【００６９】 （Ｂ．ＤＰ１０７ペプチド） ＤＰ１０７は、３８アミノ酸ペプチドであり、これは、強力な抗ウイルス活性
を示し、そし以下に示されるＨＩＶ−１_LA1単離体膜貫通（ＴＭ）ｇｐ４１糖タ
ンパク質の残基５５８〜５９５に対応する

【００７０】

【化３】 。

【００７１】 全長ＤＰ１０７の３８マーに加えて、ＤＰ１０７ペプチドは、３アミノ酸残基
と３８アミノ酸残基との間のペプチド（すなわち、トリペプチドから３８マーの
ポリペプチドのサイズに及ぶペプチド）を含むＤＰ１０７ペプチドの短縮を示す
。これらのペプチドは、表４および５に示される。

【００７２】 さらに、ＤＰ１７８ペプチドのアミノ酸置換はまた、本発明の範囲内である。
ＤＰ１７８については、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２のＤＰ１０７に対応する領
域内に著しいアミノ酸保存がまた存在し、再び周期性の性質の問題であり、構造
および／または機能の保存を示唆する。従って、アミノ酸置換の１つの可能なク
ラスは、本発明のＤＰ１０７ペプチドの構造を安定化すると推定されるこれらの
アミノ酸の変化を含む。本明細書中で開示されるＤＰ１０７およびＤＰ１０７ア
ナログ配列を利用して、当業者は、容易にＤＰ１０７コンセンサス配列を作製し
、そして好ましいアミノ酸置換を示す保存されたアミノ酸残基を、これらから確
かめ得る。

【００７３】 アミノ酸置換は、保存された性質の置換または保存されていない性質の置換で
あり得る。保存されたアミノ酸置換は、類似の電荷、サイズ、および／または疎
水性特徴のアミノ酸での、ＤＰ１０７ペプチド配列の１以上のアミノ酸の置換（
例えば、グルタミン酸（Ｅ）のアスパラギン酸（Ｄ）へのアミノ酸置換）からな
る。保存されていない置換は、異なる電荷、サイズ、および／または疎水性特徴
を保有するアミノ酸での、ＤＰ１７８ペプチド配列の１以上のアミノ酸の置換（
例えば、グルタミン酸（Ｅ）のバリン（Ｖ）への置換）からなる。

【００７４】 アミノ酸の挿入は、単一のアミノ酸残基またはひとつづきの残基からなる。挿
入は、ＤＰ１０７またはＤＰ１０７短縮ペプチドのカルボキシ末端またはアミノ
末端、ならびにペプチドに対する内部の位置で作製され得る。

【００７５】 このような挿入は、一般的に２〜１５アミノ酸長にわたる。目的のペプチドの
カルボキシ末端またはアミノ末端のいずれかで作製された挿入は、好ましい約２
〜約５０アミノ酸を有する、より広いサイズの範囲の挿入であり得ることが意図
される。このような挿入が、上記の１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬＬＭＯＴＩ５また
はＰＬＺＩＰ検索モチーフによってなお認識され得るペプチドを生じる限り、１
以上のこのような挿入は、ＤＰ１０７またはＤＰ１０７短縮に導入され得る。

【００７６】 好ましいアミノ末端挿入物またはカルボキシ末端挿入物は、約２〜約５０のア
ミノ酸残基の長さにわたるペプチドであり、実際のＤＰ１０７ ｇｐ４１アミノ
酸配列に対して、それぞれアミノまたはカルボキシのいずれかでｇｐ４１タンパ
ク質領域に対応する。従って、好ましいアミノ末端またはカルボキシ末端アミノ
酸挿入物は、ｇｐ４１タンパク質のＤＰ１０７領域に対する、すぐ近くのアミノ
またはカルボキシで見出されるｇｐ４１アミノ酸配列を含む。

【００７７】 ＤＰ１０７またはＤＰ１０７短縮の欠失はまた、本発明の範囲内である。この
ような欠失は、ＤＰ１０７またはＤＰ１０７様ペプチド配列からの１以上のアミ
ノ酸の除去からなり、生じるペプチド配列の下限の長さは、４〜６のアミノ酸で
ある。

【００７８】 このような欠失は、ペプチド配列の１つの連続する部分またはそれより大きな
１つの不連続の部分を含み得る。このような欠失が、上記の１０７ｘ１７８ｘ４
、ＡＬＬＭＯＴＩ５またはＰＬＺＩＰ検索モチーフによって、なお認識され得る
ペプチドを生じる限り、１以上のこのような欠失は、ＤＰ１０７またはＤＰ１０
７短縮に導入され得る。

【００７９】 ＤＰ１０７およびＤＰ１０７短縮は、米国特許第５，６５６，４８０号に、よ
り十分に記載され、これは、その全体が参考として本明細書中で援用される。

【００８０】 （２．ＤＰ１０７およびＤＰ１７８アナログ） 上記の本発明のＤＰ１７８、ＤＰ１７８短縮、ＤＰ１０７およびＤＰ１０７短
縮配列のアナログに対応するペプチドは、他のウイルス（例えば、非ＨＩＶ−１
エンベロープ化ウイルス、非エンベロープ化ウイルスおよび他の非ウイルス性生
物を含むが、これらに限定されない）において見出され得る。

【００８１】 このようなＤＰ１７８アナログおよびＤＰ１０７アナログは、例えば、エンベ
ロープ化されたウイルスの膜貫通（「ＴＭ」）タンパク質に存在するペプチド配
列に対応し得、そして非エンベロープ化生物および非ウイルス性生物に存在する
ペプチド配列に対応し得る。このようなペプチドは、抗膜融合性活性、抗ウイル
ス活性、最も具体的にはネイティブな配列が見出されるウイルスに特異的である
抗ウイルス活性を示し得るか、またはコイルドコイルペプチド構造に関連する細
胞間プロセスを調節する能力を示し得る。

【００８２】 （Ａ．ＤＰ１７８アナログ） ＤＰ１７８アナログは、そのアミノ酸配列が、例えば、ＤＰ１７８が誘導され
たｇｐ４１ペプチド領域に対応する他のウイルス（すなわち、ＨＩＶ−１以外）
のペプチド領域のアミノ酸配列からなるペプチドである。そのようなウイルスと
しては、他のＨＩＶ−１単離体およびＨＩＶ−２単離体が挙げられ得るが、これ
らに限定されない。

【００８３】 他のＨＩＶ単離体（すなわち、非ＨＩＶ−１ＬＡＩ）の対応するｇｐ４１ペプ
チド領域由来のＤＰ１７８アナログとしては、例えば、以下に示されるペプチド
配列が挙げられ得る。

【００８４】

【化４】 配列番号３、配列番号４および配列番号５のペプチドは、それぞれ、ＨＩＶ−
ｌ_SF2、ＨＩＶ−１_RFおよびＨＩＶ−１_MN由来である。他のＤＰ１７８アナログ
としては、ＨＩＶ−２から誘導されたアナログが挙げられ、これには、配列番号
６および配列番号７のペプチドが含まれる（これらはそれぞれ、ＨＩＶ−２_ROD
およびＨＩＶ−２_NIHZ由来である）。さらに別の有用なアナログとしては、配列
番号８および配列番号９のペプチドが挙げられ、これらは、抗ウイルス活性を示
すことが証明されている。

【００８５】 本発明において、ＤＰ１７８アナログは、そのアミノ酸配列がｇｐ４１タンパ
ク質のＤＰ１７８領域に対応するペプチドを示すことが好ましく、本明細書中に
開示されるペプチドがさらに、約２〜約５０アミノ酸残基の長さの範囲で、実際
のＤＰ１７８アミノ酸配列に対するアミノまたはカルボキシのいずれかのｇｐ４
１タンパク質領域に対応するアミノ酸配列を含み得ることがまた意図される。

【００８６】 表６および表７は、ＨＩＶ−２_NIHZＤＰ１７８アナログのいくつかの可能な短
縮を示し、これは、３と３６との間のアミノ酸残基のペプチド（すなわち、トリ
ペプチドから３６マーポリペプチドまでのサイズの範囲のペプチド）を含み得る
。これらの表におけるペプチド配列を、アミノ末端（左）からカルボキシ末端（
右）に列挙する。

【００８７】 （Ｂ．さらなるＤＰ１７８アナログおよびＤＰ１０７アナログ） ＤＰ１７８およびＤＰ１０７アナログは、例えば、上記の１０７ｘ１７８ｘ４
、ＡＬＬＭＯＴＩ５またはＰＬＺＩＰのコンピューター補助の検索戦略のうちの
１つ以上を使用することによって、認識されるかまたは同定される。この検索戦
略は、ＤＰ１０７および／またはＤＰ１７８の構造および／またはアミノ酸配列
特徴と類似した、構造および／またはアミノ酸配列特徴を有することが予想され
るさらなるペプチド領域を同定する。

【００８８】 検索戦略は、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号お
よび同第６，０２０，４５９号の第９節に示される例示に完全に記載される。こ
の検索戦略は、ある部分、ＤＰ１０７およびＤＰ１７８から推定される一次アミ
ノ酸モチーフに基づくが、単に、一次アミノ酸相同性配列に関する検索に基づく
ものではない。なぜなら、そのようなタンパク質配列相同性は存在するが、主要
なウイルス群の間ではないからである。例えば、一次アミノ酸配列相同性は、Ｈ
ＩＶ−１の異なる種のＴＭタンパク質内、またはサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ
）の異なる単離体のＴＭタンパク質内で高い。

【００８９】 米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号、および同第６
，０２０，４５９号に開示されるコンピューター検索戦略は、ＤＰ１０７または
ＤＰ１７８に類似するタンパク質の領域を首尾良く同定した。この検索戦略は、
市販の配列データベースパッケージ、好ましくはＰＣ／Ｇｅｎｅを用いて使用さ
れるように設計された。

【００９０】 米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号、および同第６
，０２０，４５９号において、一連の検索モチーフ（１０７ｘ１７８ｘ４、ＡＬ
ＬＭＯＴＩ５、およびＰＬＺＩＰモチーフ）は、好ましい１０７ｘ１７８ｘ４を
用いて厳密から幅広い範囲のストリンジェンシーに対して設計され、そして操作
された。配列は、米国特許第６，０１３，２６３号、同第６，０１７，５３６号
、および同第６，０２０，４５９号のそのような検索モチーフ（例えば、表Ｖ〜
ＸＩＶに列挙されるようなモチーフ）を介して同定され、そして、本出願に参考
として援用して含まれ、強力に抗膜融合性（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）（例えば、抗
ウイルス）活性を示し、抗膜融合性（例えば、抗ウイルス）化合物の同定におい
てさらに有用であり得る。

【００９１】 （３．他の抗ウイルスペプチド） （Ａ．抗ＲＳＶペプチド） 抗ＲＳＶペプチドは、ＲＳＶによるウイルス感染を阻害することがさらに同定
されたＲＳＶ中の対応するペプチド配列から単離された、ＤＰ１７８および／ま
たはＤＰ１０７アナログを含む。目的のそのようなペプチドは、表１６のペプチ
ドおよび配列番号１０〜配列番号３０のペプチドを含む。特に興味深いのは、以
下のペプチドである：

【００９２】

【化５】 。配列番号１０のペプチドは、ＲＳＶのＦ２領域から誘導され、そして、ＤＰ１
０７およびＤＰ１７８ペプチドに対応するような記載された検索モチーフ（すな
わち、「ＤＰ１０７／１７８様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号
、および同第６，０２０，４５９号で同定された。配列番号１４〜配列番号１６
のペプチドは各々、配列番号１０のペプチド内に含まれるアミノ酸配列を有し、
そして各々は、抗ＲＳＶ活性を示し、特に、５０μｇ／ｍｌ未満の濃度において
、ＲＳＶ感染Ｈｅｐ−２細胞と感染されていないＨｅｐ−２細胞との間の融合お
よび合胞体の形成を阻害することが示された。

【００９３】 配列番号１１のペプチドは、ＲＳＶのＦ１領域から誘導され、そして、ＤＰ１
０７に対応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１０７様」）
を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０，４５９号
で同定された。配列番号２９のペプチドは、配列番号１０のペプチド内に含まれ
るアミノ酸配列を含み、同様に、抗ＲＳＶ活性を示し、特に、５０μｇ／ｍｌ未
満の濃度において、ＲＳＶ感染Ｈｅｐ−２細胞と感染されていないＨｅｐ−２細
胞との間の融合および合胞体の形成を阻害することが示された。

【００９４】 （Ｂ．抗ＨＰＩＶペプチド） 抗ＨＰＩＶペプチドは、ＨＰＩＶ中の対応するペプチド配列から同定されたＤ
Ｐ１７８および／またはＤＰ１０７アナログを含み、そしてＨＰＩＶによるウイ
ルス感染を示すことがさらに同定された。目的のそのようなペプチドは、表１７
および配列番号３１〜配列番号６２のペプチドを含む。特に興味深いのは、以下
のペプチドである：

【００９５】

【化６】 。配列番号３１のペプチドは、ＨＰＩＶ−３のＦ１領域から誘導され、そして、
ＤＰ１０７に対応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１０７
様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０，４
５９号で同定された。配列番号５２〜配列番号５８のペプチドは各々、配列番号
３０のペプチド内に含まれるアミノ酸配列を有し、そして各々は、抗ＨＰＩＶ−
３活性を示し、特に、１μｇ／ｍｌ未満の濃度において、ＨＰＩＶ−３感染され
たＨｅｐ２細胞と感染されていないのＣＶ−１Ｗ細胞との間の融合および合胞体
の形成を阻害することが示された。

【００９６】 配列番号３２のペプチドはまた、ＨＰＩＶ−３のＦ１領域から誘導され、そし
て、ＤＰ１７８に対応するような記載された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１
７８様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３６号、および同第６，０２０
，４５９号で同定された。配列番号３５および配列番号３８〜配列番号４２のペ
プチドは各々、配列番号３２のペプチド内に含まれるアミノ酸配列を有し、そし
て各々はまた、抗ＨＰＩＶ−３活性を示し、特に、１μｇ／ｍｌ未満の濃度にお
いて、ＨＰＩＶ−３感染されたＨｅｐ２細胞と感染されていないＣＶ−１Ｗ細胞
のと間の融合および合胞体の形成を阻害することが示された。

【００９７】 （Ｃ．抗ＭｅＶペプチド） 抗ＭｅＶペプチドは、はしかウイルス（ＭｅＶ）によるウイルス感染を阻害す
ることがさらに同定されたはしかウイルス中の対応するペプチド配列から同定さ
れた、ＤＰ１７８および／またはＤＰ１０７アナログである。特定の目的のその
ようなペプチドは、表１９のペプチドおよび配列番号７４〜配列番号８６のペプ
チドを含む。特に興味深いのは、以下に列挙されるペプチドである：

【００９８】

【化７】 。はしかウイルス由来の配列は、ＤＰ１７８に対応するような記載された検索モ
チーフ（すなわち、「ＤＰ１７８様」）を用いて、米国特許第６，１０３，２３
６号、および同第６，０２０，４５９号で同定された。配列番号７７、配列番号
７９、配列番号８１および配列番号８３のペプチド各々は、そのように同定され
たアミノ酸配列を有し、そして各々は、抗ＭｅＶ活性を示し、特に、１μｇ／ｍ
ｌ未満の濃度において、ＭｅＶ感染されたＨｅｐ２と感染されていないＶｅｒｏ
細胞との間の融合および合胞体の形成を阻害することが示された。

【００９９】 （Ｄ．抗ＳＩＶペプチド） 抗ＳＩＶペプチドは、ＳＩＶによるウイルス感染を阻害することがさらに同定
されたＳＩＶ中の対応するペプチド配列から同定されたＤＰ１７８および／また
はＤＰ１０７アナログである。目的のそのようなペプチドは、表１８のペプチド
および配列番号６３〜配列番号７３までのペプチドを含む。特に興味深いのは、
以下のペプチドである：

【０１００】

【化８】 。ＳＶＩ膜貫通融合タンパク質由来の配列は、ＤＰ１７８に対応するような記載
された検索モチーフ（すなわち、「ＤＰ１７８様」）を用いて、米国特許第６，
１０３，２３６号、および同第６，０２０，４５９号で同定された。配列番号６
４〜配列番号７３のペプチドは各々、そのように同定されたアミノ酸配列を有し
、そして各々は、粗ペプチドとして強力な抗ＳＩＶ活性を表すことが示された。

【０１０１】 （４．抗ウイルスおよび抗膜融合性ペプチドの改変） 本発明は、抗ウイルスおよび／または抗膜融合性活性を示すペプチドを改変す
ることを意図し、ＤＰ−１０７およびＤＰ−１７８ならびにそれらのアナログの
そのような改変を含む。そのような改変されたペプチドは、共有結合を介して血
液成分上の利用可能な反応性官能基と反応し得る。本発明はまた、そのような改
変、血液成分を用いたそのような組合せ、およびそれらの使用のための方法に関
する。これらの方法は、非結合体化のペプチドを患者に投与することと比較して
、結合体化された抗ウイルスペプチド誘導体の有効な治療剤の寿命を延長する工
程を包含する。改変されたペプチドは、ＤＡＣ（薬物親和性複合体）として設計
される型のペプチドであり、これは、抗ウイルスペプチド分子および可動性の血
液タンパク質の反応性官能基と反応し得る化学反応基を伴なう連結基を含む。血
液成分またはタンパク質を用いた反応によって、改変されたペプチド、すなわち
ＤＡＣは、血液を介して適切な部位またはレセプターに送達され得る。

【０１０２】 タンパク質上の官能基と共有結合を形成するために、反応性基として広範な種
々の活性なカルボキシル基、特にエステルを使用し得、ここで、ヒドロキシル部
分は、ペプチドを改変するために必要とされるレベルで生理学的に受容可能であ
る。多くの異なるヒドロキシル基がこれらの反応性基に使用され得るが、最も簡
便なものは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（すなわち、ＮＨＳ）、Ｎ−ヒドロ
キシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）である。本発明の好ましい
実施形態において、タンパク質上の官能基は、チオール基であり、そして反応性
基は、γ−マレイミド−ブチラールアミド（ｇａｍｍａ-ｍａｌｅｉｍｉｄｅ-ｂ
ｕｔｙｒａｌａｍｉｄｅ）（ＧＭＢＡ）またはマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ
）のようなマレイミド含有基である。

【０１０３】 第一級アミンは、ＮＨＳエステルに対する重要な標的である。タンパク質のＮ
末端に存在するアクセス可能なα−アミン基が、ＮＨＳエステルと反応する。し
かし、タンパク質のα−アミノ基は、ＮＨＳカップリングに対して望ましくもな
ければ、利用可能でもあり得ない。５個のアミノ酸がその側鎖に窒素を有するが
、リジンのε−アミンのみが、有意にＮＨＳエステルと反応する。以下の模式図
に示されるように、ＮＨＳエステルの結合反応が、第一級アミンと反応してＮ−
ヒドロキシスクシンイミドを放出する場合、アミド結合が形成される。

【０１０４】

【化９】 本発明の好ましい実施形態において、このタンパク質の官能基はチオール基で
あり、化学反応性基は、ＭＰＡまたはＧＭＢＡ（γ−マレイミド−ブチラールア
ミド）のようなマレイミド含有基である。マレイミド基は、反応混合物のｐＨが
６．５と７．４の間で維持される場合、ペプチド上のスルフヒドリル基について
最も選択的である。ｐＨ７．０において、マレイミド基とスルフヒドリルとの反
応速度は、アミンとの反応より１０００倍速い。以下の模式図に示されるように
、マレイミド基とスルフヒドリルとの間の安定なチオエーテル結合が形成され、
これは、生理学的な条件下では切断され得ない。

【０１０５】

【化１０】 （Ａ．特異的標識化） 好ましくは、本発明の改変されたペプチドは、移動性血液タンパク質上のチオ
ール基と特異的に反応するように設計される。このような反応は、好ましくは、
血清アルブミンまたはＩｇＧのような移動性血液タンパク質上のチオール基への
マレイミド連結（例えば、ＧＭＢＳ、ＭＰＡまたは他のマレイミドから調製され
る）を用いて改変されるこのペプチドの共有結合によって確立される。

【０１０６】 特定の条件下において、マレイミドを用いた特異的な標識化は、ＮＨＳおよび
ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳのような基を用いる移動性タンパク質の非特異的な標識化に
対して、いくつかの利点を提供する。チオール基は、インビボにおいてアミノ基
よりもあまり豊富ではない。従って、本発明のマレイミド改変ペプチド（すなわ
ち、マレイミドペプチド）は、より少ないタンパク質に共有結合する。例えば、
アルブミン（最も豊富な血液タンパク質）中には、１つのチオール基のみが存在
する。従って、ペプチド−マレイミド−アルブミン結合体は、ペプチド対アルブ
ミンを約１：１のモル比で含む傾向がある。アルブミンに加えて、ＩｇＧ分子（
クラスＩＩ）もまた、遊離チオールを有する。ＩｇＧ分子および血清アルブミン
が、血液中、可溶タンパク質の大部分を構成するので、これらはまた、マレイミ
ド改変ペプチドに共有結合するのに利用可能な血液中の遊離チオール基の大部分
を構成する。

【０１０７】 さらに、遊離チオール含有血液タンパク質（ＩｇＧを含む）の間でさえ、アル
ブミン自体の独特の特徴に起因して、マレイミドを用いた特異的標識化は、ペプ
チド−マレイミド−アルブミン結合体の優先的な形成を導く。アルブミンの単一
の遊離チオール基は、種間において高度に保存され、アミノ酸残基３４（Ｃｙｓ ³⁴ ）に位置する。最近、アルブミンのＣｙｓ³⁴が、他の遊離チオール含有タンパ
ク質上の遊離チオールと比べて、増加した反応性を有することが示された。これ
は、アルブミンのＣｙｓ³⁴に対する非常に低いｐＫ値（５．５）に一部起因する
。これは、一般的にシステイン残基の典型的なｐＫ値（典型的には約８）よりも
ずっと低い。この低いｐＫに起因して、正常な生理学的条件下でアルブミンのＣ
ｙｓ³⁴は、主にイオン化された形態であり、これは、その反応性を劇的に増加さ
せる。Ｃｙｓ³⁴の低いｐＫ値に加えて、Ｃｙｓ³⁴の反応性を増強する別の因子は
その位置であり、この位置は、アルブミンのＶ領域の一つのループの表面に近接
した間隙中の位置である。この位置は、Ｃｙｓ³⁴を全ての種類のリガンドに対し
て極めて利用可能にし、そしてこの位置は、遊離ラジカルトラップおよび遊離チ
オールスカベンジャーとしてのＣｙｓ³⁴の生物学的役割において、重要な因子で
ある。これらの特徴は、Ｃｙｓ³⁴をマレイミド−ペプチドに非常に反応性にし、
反応速度の加速は、他の遊離チオール含有タンパク質とのマレイミド−ペプチド
の反応速度に比べて、１０００倍であり得る。

【０１０８】 ペプチド−マレイミド−アルブミン結合体の別の利点は、詳細にはＣｙｓ³⁴に
おいて、ペプチド対アルブミンを１:１で含むことに関連する再現性である。他
の技術（例えば、グルタルアルデヒド、ＤＣＣ、ＥＤＣおよび例えば、遊離アミ
ンの他の化学活性化）は、この選択性を欠いている。例えば、アルブミンは、５
２個のリジン残基を含み、このうちの２５〜３０個は、アルブミンの表面に位置
し、そして結合に対してアクセス可能である。これらのリジン残基の活性化、あ
るいはこれらのリジン残基を通して結合するペプチドの改変によって、結合体の
不均一な集団が生じる。ペプチド対アルブミンの１：１のモル比が使用される場
合でさえ、生成物は、複数の結合体産物からなり、そのいくつかは、アルブミン
当たり０、１、２以上のペプチドを含み、それぞれは、２５〜３０個の利用可能
なリジン部位の１つ以上のいずれかにランダムに結合されるペプチドを有する。
多数の可能な組み合わせが提供される場合、抽出成分および各々の結合体のバッ
チの性質の特徴付けが困難になり、バッチ間の再現性はほとんど不可能であり、
このような結合体の治療剤としての望ましさを減少する。さらに、アルブミンの
リジン残基を介する結合体化は、１アルブミン分子当たりより多くの治療剤を送
達するということに関する利点を少なくとも有するようであるが、研究によって
、治療剤対アルブミンの１：１の比が好ましいことが示された。Ｓｔｅｈｌｅら
による論文「Ｔｈｅ Ｌｏａｄｉｎｇ Ｒａｔｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ Ｔｕ
ｍｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｔｒｅ
ｘａｔｅ−Ａｌｂｕｍｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｔｓ」、Ａｎｔ
ｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，第８巻，６７７−６８５頁（１９８８）（その
全体において本明細書中で援用される）において、著者らは、グルタルアルデヒ
ドを介して結合される抗癌剤メトトレキサート対アルブミンの１：１の比が最も
有望な結果を与えたことを報告した。これらの結合体は腫瘍細胞によって優先的
に取り込まれたが、５：１〜２０：１のメトトレキサート分子を有する結合体は
、変化したＨＰＬＣプロフィールを有し、そしてインビボで肝臓によって迅速に
取り込まれた。これらの高い比において、アルブミンに対するコンフォメーショ
ンの変化は、治療キャリアとしてのその有効性を減少することが推論された。

【０１０９】 マレイミド−ペプチドのインビボでの制御された投与を通して、アルブミンお
よびＩｇＧのインビボでの特異的な標識化を制御し得る。典型的な投与において
、８０〜９０％の投与されたマレイミド−ペプチドが、アルブミンを標識し、５
％未満がＩｇＧを標識する。グルタチオンのような遊離チオールの微量標識がま
た、生じる。このような特異的な標識化は、インビボ用途に好ましい。なぜなら
、これは、投与された薬剤の見積もられた半減期の正確な計算を可能にするから
である。

【０１１０】 制御された特異的なインビボ標識化を提供することに加えて、マレイミド−ペ
プチドは、血清アルブミンおよびＩｇＧのエキソビボでの特異的標識化を提供し
得る。このようなエキソビボの標識化は、血清アルブミンおよび／またはＩｇＧ
を含む血液、血清または生理食塩水の溶液へのマレイミド−ペプチドの添加を包
含する。一旦、結合がマレイミド−ペプチドを用いてエキソビボで生じると、血
液、血清または生理食塩溶液は、インビボ処置のために患者の血液に再投与され
得る。

【０１１１】 ＮＨＳ−ペプチドと対照的に、マレイミド−ペプチドは、一般的に、水性溶液
の存在下および遊離アミンの存在下において、非常に安定である。マレイミド−
ペプチドが遊離チオールとのみ反応するので、保護基は、一般的にマレイミド−
ペプチドがそれ自体と反応することを防ぐ必要はない。さらに改変されたペプチ
ドの増加した安定性によって、インビボ用途に適切な高度に精製された産物を調
製するためのＨＰＬＣのようなさらなる精製工程の使用を可能になる。最後に、
増加した化学的安定性は、より長い有効期限を有する製品を提供する。

【０１１２】 （Ｂ．非特異的標識） 本発明の抗ウイルスペプチドはまた、血液成分の非特異的標識のために改変さ
れ得る。アミノ基への結合がまた使用され、特に非特異的標識のためのアミド結
合の形成を伴う。そのような結合を形成するために、化学反応基として広範な種
々の活性カルボキシル基、特にエステルを使用し得、ここでそのヒドロキシル部
分は、必要とされるレベルにおいて生理学的に受容可能である。多数の異なるヒ
ドロキシル基がこれらの結合剤において使用され得るが、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド（ＮＨＳ）およびＮ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ
−ＮＨＳ）が最も都合が良い。

【０１１３】 利用され得る他の結合剤は、米国特許第５，６１２，０３４号（これは、本明
細書中に参考として援用される）に記載される。

【０１１４】 改変されたペプチドの化学反応基がインビボで反応し得る種々の部位としては
、細胞、特に赤血球（成熟赤血球）および血小板、ならびにタンパク質（例えば
、免疫グロブリン（ＩｇＧおよびＩｇＭを含む）、血清アルブミン、フェリチン
、ステロイド結合タンパク質、トランスフェリン、サイロキシン結合蛋白、α−
２−マクログロブリンなど）が挙げられる。改変されたペプチドが反応するそれ
らのレセプター（これは、長命ではない）は、一般的に、およそ３日以内にヒト
宿主から除去される。上記に示されるタンパク質（細胞のタンパク質を含む）は
、血中濃度に基づいて、特に半減期に関しては、少なくとも３日間残存し、そし
て５日間以上残存し得る（一般的に、６０日間を超えず、より一般的には３０日
間を超えない）。

【０１１５】 ほとんどの部分について、反応は、血液中の移動性成分、詳細には血液タンパ
ク質および細胞、より詳細には血液タンパク質および成熟赤血球を伴う。「移動
性」とは、その成分が、任意の延長された期間（一般的には５分間を超えず、よ
り一般的には１分間である）一定の場所にいないことを意図するが、いくつかの
血液成分は、延長された期間、相対的に停止し得る。最初は、機能化されたタン
パク質および細胞の比較的不均一な集団が存在する。しかし、ほとんどの部分に
ついて、数日以内の集団は、血流中の機能化されたタンパク質の半減期に依存し
て、最初の集団とは実質的に異なってくる。従って、通常、およそ３日以内もし
くはそれ以後の期間内に、ＩｇＧは、血流において優勢な機能化されたタンパク
質となる。

【０１１６】 通常、投与後５日までに、ＩｇＧ、血清アルブミンおよび成熟赤血球は、血液
中の結合成分の少なくとも約６０モル％、通常は少なくとも約７５モル％となり
、ＩｇＧ、ＩｇＭ（実質的により少ない程度まで）および血清アルブミンは、非
細胞性結合成分の少なくとも約５０モル％、通常は少なくとも約７５モル％、よ
り一般には約８０モル％となる。

【０１１７】 血液成分に対する非特異的な改変されたペプチドの所望の結合体は、患者に直
接その改変されたペプチドを投与することによって、インビボにて調製され得る
。この患者は、ヒトまたは他の哺乳動物であり得る。その投与は、ボーラス形態
でなされるか、または流れを計器で調節して注入することなどによって、ゆっく
りと長期間で導入され得る。

【０１１８】 所望される場合、対象結合体はまた、血液と本発明の改変されたペプチドとを
組み合わせることによって、エキソビボで調製され得、血液成分上の反応性官能
基への改変されたペプチドの共有結合を可能にし、次いで、宿主にその結合体化
血液を戻すかまたは投与する。さらに、上記のことはまた、初めに、個々の血液
成分または限られた数の成分（例えば、赤血球、免疫グロブリン、血清アルブミ
ンなど）を精製し、そしてその成分または複数の成分をエキソビボにて化学的に
反応性の改変されたペプチドと組み合わせることによって達成され得る。次いで
、機能化された血液または血液成分は、治療的に有効な結合体をインビボで被験
体に提供するために宿主に戻され得る。その血液はまた、エキソビボで操作する
間の凝固を予防するために処理され得る。

【０１１９】 （５．改変された抗ウイルスペプチドおよび抗膜融合性ペプチドの合成） （Ａ．ペプチド合成） 本発明に従う抗ウイルスペプチドおよび／または抗膜融合性ペプチドは、当業
者に公知の固相ペプチド化学の標準的な方法によって、合成され得る。例えば、
ペプチドは、アプライドバイオシステムシンセサイザー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）を使用する、Ｓｔｅｗａｒｄおよび
Ｙｏｕｎｇ（Ｓｔｅｗａｒｄ，Ｊ． Ｍ．およびＹｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．，Ｓｏｌ
ｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版．，Ｐｉｅｒ
ｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，（１
９８４））により記載される手順に従がう固相化学技術によって合成され得る。
次いで、同様に、複数のペプチドフラグメントが共に結合して合成されて、より
大きなフラグメントを形成する。これらの合成ペプチドはまた、特定の位置にお
けるアミノ酸置換を伴って作製され得る。

【０１２０】 固相ペプチド合成について、多くの技術の概要が、Ｊ．Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｔお
よびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）
，１９６３およびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，第２巻 ４６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），１９７３において見出され得る。伝統的な溶液合成
については、Ｇ．ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｐｋｅ，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅｓ，第１巻、Ａｃａｃｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照の
こと。一般的にこれらの方法は、１つ以上のアミノ酸または適切に保護されたア
ミノ酸を連続的に付加してペプチド鎖に成長させることを含む。通常、第１のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかが、適切な保護基によって保
護される。次いで、その保護されたアミノ酸または誘導体化されたアミノ酸は、
不活性固体支持体に付着されるか、あるいは、アミド結合を形成するために適切
な条件下において、適切に保護されたコンプリメンタリー（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎ
ｔａｒｙ）（アミノもしくはカルボキシル）基を有する配列中に次のアミノ酸を
付加することによって溶液中で利用される。次いで、保護基をこの新たに付加さ
れたアミノ酸残基から除去し、そして次のアミノ酸（適切に保護された）が付加
される、など。

【０１２１】 全ての所望のアミノ酸が、適切な配列内に結合された後、任意の残りの保護基
（および任意の固体支持体）が連続的にか、または同時に除去されて、最終的な
ポリヌクレオチドができる。この一般的手順の単純な改変によって、１つよりも
多くのアミノ酸を一度に付加させて、鎖を成長させることが可能となる（例えば
、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドに（キラル中心をラセ
ミ化しない条件下で）結合させることによって脱保護の後、ペンタペプチドを形
成させることによる）。

【０１２２】 本発明の化合物を調製する特に好ましい方法は、固相ペプチド合成を含み、こ
こでアミノ酸α−Ｎ−末端は、酸感受性基または塩基感受性基によって保護され
る。そのような保護基は、ペプチド結合形成の条件に対して安定であるという特
性を有するべき一方で、成長するペプチド鎖の破壊またはその中に含まれる任意
のキラル中心のラセミ化を伴わずに容易に除去可能であるという特性も有すべき
である。適切な保護基は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ
）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂ
ｚ）、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル
、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベン
ジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブ
チルオキシカルボニルなどである。９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（
Ｆｍｏｃ）保護基は、本発明のペプチドの合成のために特に好ましい。他の好ま
しい側鎖保護基は、リジンおよびアルギニンのような側鎖アミノ基に関しては、
２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（ｐｍｃ）、ニト
ロ基、ｐ−トルエンスルホニル基、４−メトキシベンゼン−スルホニル基、Ｃｂ
ｚ基、Ｂｏｃ基、およびアダマンチルオキシカルボニル基；チロシンに関しては
、ベンジル基、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、２，６−ジクロロベン
ジル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）基、シクロヘキシル基、シク
ロペニル基およびアセチル（Ａｃ）基であり；セリンに関しては、ｔ−ブチル基
、ベンジル基およびテトラヒドロピラニル基であり；ヒスチジンに関しては、ト
リチル基、ベンジル基、Ｃｂｚ基、ｐ−トルエンスルホニル基および２，４−ジ
ニトロフェニル基であり；トリプトファンに関しては、ホルミル基であり；アス
パラギン酸およびグルタミン酸に関しては、ベンジル基およびｔ−ブチル基なら
びにシステインに関しては、トリフェニルメチル（トリチル）基である。

【０１２３】 固相ペプチド合成方法において、α−Ｃ−末端アミノ酸は、適切な固体支持体
または樹脂に付着される。上記合成のために有用な適切な固体支持体は、段階的
な縮合−脱保護反応の試薬および反応条件に対して不活性であり、ならびに使用
される媒体に不溶性である材料である。α−Ｃ−末端カルボキシペプチドの合成
のための好ましい固体支持体は、４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル−コポ
リ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）である。α−Ｃ−末端アミドペプチドの
ための好ましい固相支持体は、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏ
ｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドエチル樹脂である（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手可
能）。このα−Ｃ−末端アミノ酸は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）
、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ベンゾトリアゾール−１−
イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェ
ート（ＢＯＰ）またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンク
ロリド（ＢＯＰＣｌ）を伴うか、または伴わずに、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル
カルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ
）またはＯ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチ
ルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ）によって樹脂に結合さ
れ、結合は、ジクロロメタンまたはＤＭＦのような溶媒中で１０℃と５０℃との
間の温度にて約１時間〜２４時間の間媒介される。

【０１２４】 固体支持体が、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメ
チル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂である場合、Ｆｍｏｃ基は、上記の
α−Ｃ−末端アミノ酸とのカップリングの前に、第二級アミン、好ましくはピペ
リジンで切断される。脱保護された４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆ
ｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂へのカップリング
のための好ましい方法は、ＤＭＦ中Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ
，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢ
ＴＵ、１当量）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）
である。保護されたアミノ酸の連続的なカップリングは、当該分野において周知
の自動ポリペプチドシンセサイザーにおいて実行され得る。好ましい実施形態に
おいて、成長するペプチド鎖のα−Ｎ−末端アミノ酸は、Ｆｍｏｃで保護される
。成長するペプチドのα−Ｎ−末端側からのＦｍｏｃ保護基の除去は、第二級ア
ミン、好ましくはピペリジンを用いて処理することによって達成される。次いで
、各々の保護アミノ酸は、およそ３倍の過剰なモル濃度で導入され、そして好ま
しくは、カップリングはＤＭＦ中で実行される。カップリング剤は、通常、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウ
ム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量）および１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）である。

【０１２５】 固相合成の終点において、このポリペプチドは、連続的にか、または１回の操
作でのいずれかで、樹脂から取り出されて、そして脱保護される。ポリペプチド
の取り出しおよび脱保護は、チオアニソール、水、エタンジチオールおよびトリ
フルオロ酢酸を含む切断試薬（ｃｌｅａｖａｇｅ ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて、
樹脂結合ポリペプチドを処理することにより１回の操作で達成され得る。ポリペ
プチドのα−Ｃ−末端がアルキルアミドである場合、樹脂は、アルキルアミンを
用いるアミノ分解によって切断される。あるいは、ペプチドは、例えば、メタノ
ールを用いるエステル交換反応、続いてアミノ分解または直接的アミド基交換に
よって取り出され得る。保護ペプチドは、この時点で精製され得るか、または次
の工程に直接使用され得る。側鎖保護基の除去は、上記の切断カクテル（ｃｏｃ
ｋｔａｉｌ）を使用して達成される。完全に脱保護されたペプチドは、任意また
は全ての以下の型：弱塩基樹脂上のイオン交換（アセテート形態）；非誘導体化
ポリスチレン−ジビニルベンゼン上の疎水性吸着クロマトグラフィー（例えば、
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ）；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキ
シメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー；分配クロマトグラフィ
ー（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５、ＬＨ−２０）または向流分配；高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（特に、オクチル−もしくはオクタデシル
シリル−シリカ結合相充填剤上の逆相ＨＰＬＣ）を利用する一連のクロマトグラ
フィー工程により精製される。

【０１２６】 これらのＩＴＰの分子量は、Ｆａｓｔ Ａｔｏｍ Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（
ＦＡＢ）Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙを使用して決定される。

【０１２７】 （（１）Ｎ−末端保護基） 上記に議論されるように、用語「Ｎ−保護基」とは、アミノ酸もしくはペプチ
ドのα−Ｎ−末端を保護すること、さもなくばアミノ酸もしくはペプチドのアミ
ノ基を、合成手順の間の望ましくない反応物に対して保護することが意図される
それらの基をいう。一般的に、使用されるＮ−保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒ
ｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
」（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８１））（これ
は、本明細書中に参考として援用される）に開示される。さらに、保護基を、例
えば、酵素的加水分解によって容易にインビボで切断されるプロドラッグとして
使用して、生物学的に活性なペアレント（ｐａｒｅｎｔ）を放出し得る。α−Ｎ
−保護基は、低級アルカノイル基（例えば、ホルミル基、アセチル基（「Ａｃ」
）、プロピオニル基、ピバロイル基、ｔ−ブチルアセチル基など；２−クロロア
セチル基、２−ブロモアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチ
ル基、フタリル基、ｏ−ニトロフェノキシアセチル基、クロロブチリル基、ベン
ゾイル基、４−クロロベンゾイル基、４−ブロモベンゾイル基、４−ニトロベン
ゾイル基などを含む他のアシル基；例えば、ベンゼンスルホニル基、ｐ−トルエ
ンスルホニル基などのようなスルホニル基；例えば、ベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカル
ボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−ニトロベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、３，４−ジメトキシベ
ンジルオキシカルボニル基、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、４−エトキシベンジルオキシ
カルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル基、１−（ｐ−ビフェニル
イル）−１−メチルエトキシカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメト
キシベンジルオキシカルボニル基、ベンズヒドリルオキシカルボニル基、ｔ−ブ
チルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシオキシカルボニル
基、イソプロピルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、メトキシカルボ
ニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニ
ル基、フェノキシカルボニル基、４−ニトロフェノキシカルボニル基、フルオレ
ニル−９−メトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、アダマ
ンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、フェニルチオ
カルボニル基などのカルバメート形成基；例えば、ベンジル基、トリフェニルメ
チル基、ベンジルオキシメチル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基
（Ｆｍｏｃ）などのようなアリールアルキル基ならびに例えば、トリメチルシリ
ルなどのようなシリル基を含む。

【０１２８】 （（２）カルボキシ保護基） 上記で議論されるように、用語「カルボキシ保護基」とは、化合物の他の官能
基部位に関与する反応が実施されながらカルボン酸官能基をブロックもしくは保
護するために使用されるカルボン酸保護エステル基またはアミド基のことをいう
。カルボキシ保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ
ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」１５２〜１８６頁（１９８１）
（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示される。さらに、カルボ
キシ保護基は、プロドラッグとして使用され得、それによってカルボキシ保護基
は、例えば、酵素的加水分解によって容易にインビボで切断され、生物学的に活
性なペアレントを放出し得る。そのようなカルボキシ保護基は、当業者に周知で
あり、米国特許第３，８４０，５５６号および同第３，７１９，６６７号にて記
載されるように、ペニシリンおよびセファロスポリンの分野におけるカルボキシ
ル基の保護において広範囲に使用されている。これらの開示は、本明細書中に参
考として援用される。代表的なカルボキシ保護基は、Ｃ₁−Ｃ₈低級アルキル基（
例えば、メチル基、エチル基またはｔ−ブチル基など）；例えば、フェネチル基
またはベンジル基のようなアリールアルキル基ならびに例えば、アルコキシベン
ジル基またはニトロベンジル基などのようなそれらの置換誘導体；例えば、フェ
ニルエテニル基などのアリールアルケニル；アリールおよび例えば、５−インダ
ニル基などのようなその置換誘導体で；例えば、ジメチルアミノエチル基などの
ようなジアルキルアミノアルキル基；例えば、アセトキシメチル基、ブチリルオ
キシメチル基、バレリルオキシメチル基、イソブチリルオキシメチル基、イソバ
レリルオキシメチル基、１−（プロピオニルオキシ）−１−エチル基、１−（ピ
バロイルオキシ）−１−エチル基、１−メチル−１−（プロピオニルオキシ）−
１−エチル基、ピバロイルオキシメチル基、プロピオニルオキシメチル基などの
ようなアルカノイルオキシアルキル基；例えば、シクロプロピルカルボニルオキ
シメチル基、シクロブチルカルボニルオキシメチル基、シクロペンチルカルボニ
ルオキシメチル基、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル基などのようなシク
ロアルカノイルオキシアルキル基；例えば、ベンゾイルオキシメチル基、ベンゾ
イルオキシエチル基などのようなアロイルオキシアルキル基；例えば、ベンジル
カルボニルオキシメチル基、２−ベンジルカルボニルオキシエチル基などのよう
なアリールアルキルカルボニルオキシアルキル基；例えば、メトキシカルボニル
メチル基、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル基、１−メトキシカルボニル
−１−エチル基などのようなアルコキシカルボニルアルキル基またはシクロアル
キルオキシカルボニルアルキル基；例えば、メトキシカルボニルオキシメチル基
、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル基、１−エトキシカルボニルオキシ
−１−エチル基、１−シクロへキシルオキシカルボニルオキシ−１−エチル基な
どのようなアルコキシカルボニルオキシアルキル基またはシクロアルキルオキシ
カルボニルアルキル基；例えば、２−（フェノキシカルボニルオキシ）エチル基
、２−（５−インダニルオキシカルボニルオキシ）エチル基などのようなアリー
ルオキシカルボニルオキシアルキル基；例えば、２−（１−メトキシ−２−メチ
ルプロパン−２−オイルオキシ）エチル基などのようなアルコキシアルキルカル
ボニルオキシアルキル基；例えば、２−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）エ
チル基などのようなアリールアルキルオキシカルボニルオキシアルキル基；例え
ば、２−（３−フェニルプロペン−２−イルオキシカルボニルオキシ）エチル基
などのようなアリールアルケニルオキシカルボニルオキシアルキル基；例えば、
ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチル基などのようなアルコキシカルボニル
アミノアルキル基；例えば、メチルアミノカルボニルアミノメチル基などのよう
なアルキルアミノカルボニルアミノアルキル基；例えば、アセチルアミノメチル
基などのようなアルカノイルアミノアルキル基；例えば、４−メチルピペラジニ
ルカルボニルオキシメチル基などのような複素環式カルボニルオキシアルキル基
；例えば、ジメチルアミノカルボニルメチル基、ジエチルアミノカルボニルメチ
ル基などのようなジアルキルアミノカルボニルアルキル基；例えば、（５−ｔ−
ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル基などのような
（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アル
キル基；ならびに、例えば、（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレ
ン−４−イル）メチル基などのような（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジ
オキソレン−４−イル）アルキル基である。

【０１２９】 代表的なアミドカルボキシ保護基は、アミノカルボニル基および低級アルキル
アミノカルボニル基である。

【０１３０】 本発明の好ましいカルボキシ保護化合物には複数の化合物があり、ここでその
保護カルボキシ基は、低級アルキルエステル、シクロアルキルエステルもしくは
アリールアルキルエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピ
ルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、ｓｅｃ−ブチルエステル
、イソブチルエステル、アミルエステル、イソアミルエステル、オクチルエステ
ル、シクロヘキシルエステル、フェニルエチルエステルなど）またはアルカノイ
ルオキシアルキルエステル、シクロアルカノイルオキシアルキルエステル、アロ
イルオキシアルキルエステルもしくはアリールアルキルカルボニルオキシアルキ
ルエステルである。好ましいアミドカルボキシ保護基は、低級アルキルアミノカ
ルボニル基である。例えば、アスパラギン酸は、酸不安定基（例えば、ｔ−ブチ
ル基）によりα−Ｃ−末端にて保護され得、そして水素化不安定基（例えば、ベ
ンジル基）によりβ−Ｃ−末端にて保護され得、次いで、合成中に選択的に脱保
護され得る。

【０１３１】 （Ｂ．ペプチドの改変） 本発明の改変されたペプチドを生成する様式は、そのペプチドを含む種々の要
素の性質に依存して、広範に変動する。合成手順は、単純であるように、高収率
を提供するように、そして高度に精製された安定な生成物を可能とするように、
選択される。通常、化学反応基は、合成の最終段階として、例えば、カルボキシ
ル基を用いて作製され、エステル化されて活性エステルを形成する。本発明の改
変されたペプチドの生成のための特定の方法を、以下に記載する。

【０１３２】 詳細には、選択されたペプチドは、抗ウイルス活性について最初にアッセイさ
れ、次いでこのペプチドのＮ末端、Ｃ末端または内側のいずれかのみで、連結基
を用いて改変される。次いで、この改変されたペプチド連結基の抗ウイルス活性
がアッセイされる。抗ウイルス活性が劇的に減少（すなわち、１０分の１未満に
減少）されない場合、次いで改変されたペプチド連結基の安定性が、そのインビ
ボ寿命によって測定される。この安定性が所望のレベルまで向上しない場合、次
いでこのペプチドは、代替の部位で改変され、そして所望のレベルの抗ウイルス
および安定性が達成されるまでこの手順が繰り返される。

【０１３３】 より詳細には、リンカーおよび反応基での改変を受けさせるために選択された
各ペプチドを、以下の基準に従って改変する：末端のカルボン酸基が、ペプチド
において利用可能であり、そしてこの末端のカルボン酸基が抗ウイルス活性の保
持に重要ではなく、そして他の感受性官能基がペプチドに存在しない場合、この
カルボン酸を、リンカー反応基改変のための結合部位として選択する。末端のカ
ルボン酸基が抗ウイルス活性に関与している場合、またはカルボン酸が利用可能
ではない場合、抗ウイルス活性の保持に重要ではない任意の他の感受性反応基を
、リンカー反応要素改変のための結合部位として選択する。いくつかの感受性官
能基がペプチドにおいて利用可能である場合、リンカー／反応要素の付加および
保護されたすべての感受性官能基の脱保護後に、抗ウイルス活性の保持がなお得
られるような様式で、保護基の組み合わせが使用される。感受性官能基がペプチ
ドにおいて利用可能ではない、またはより単純な改変経路が所望される場合、合
成的な試みが、抗ウイルス活性の保持が維持されるような様式での本来のペプチ
ドの改変を可能にする。この場合、改変は、ペプチドの反対の末端において生じ
る。

【０１３４】 ＮＨＳ誘導体は、ペプチドにおいて、他の感受性官能基の不在下でカルボン酸
から合成され得る。特に、このようなペプチドは、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂およびＥＤＣ
中でＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応し、そしてこの生成物は、クロマトグ
ラフィーによって精製されるか、またはＮＨＳ誘導体を与えるに適切な溶媒系か
ら再結晶化される。

【０１３５】 あるいは、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基および／またはチオール基、ならびにカ
ルボン酸を含むペプチドから合成され得る。分子中に遊離のアミノ基またはチオ
ール基が存在する場合、ＮＨＳ誘導体の付加を実施する前に、これらの感受性官
能基を保護することが好ましい。例えば、分子が遊離アミノ基を含む場合、Ｆｍ
ｏｃまたは好ましくはｔＢｏｃ保護アミンへのアミンの転換が、上記化学を実施
する前に必要とされる。アミン官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）は、ＮＨ
Ｓ誘導体の調製後に脱保護されない。従って、この方法は、所望される抗ウイル
ス効果を誘導するために、アミン基が遊離状態であることが必要とされない化合
物のみに対して適用される。アミノ基が、分子の本来の特性を保持するために遊
離状態であることが必要とされる場合、以下に記載された別の型の化学が実施さ
れなければならない。

【０１３６】 さらに、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基またはチオール基を含み、そしてカルボン
酸を含まないペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸を含ま
ない場合、一連の二官能性リンカーを使用して、その分子を反応性ＮＨＳ誘導体
へと変換し得る。例えば、ＤＭＦ中に溶解され、そして遊離アミノ含有分子に付
加されたエチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）
およびトリエチルアミン（ＥＧＳの方が有利なように、１０：１の比率で）は、
モノＮＨＳ誘導体を生成する。チオール誘導体化分子からＮＨＳ誘導体を生成す
るためには、ＤＭＦ中のＮ−［−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエ
ステル（ＧＭＢＳ）およびトリエチルアミンが使用され得る。マレイミド基は、
遊離チオールと反応し、そしてＮＨＳ誘導体は、シリカでのクロマトグラフィー
によってか、またはＨＰＬＣによって反応混合物から精製される。

【０１３７】 ＮＨＳ誘導体はまた、複数の感受性官能基を含むペプチドから合成され得る。
各々の場合に、異なる様式で分析および解明がなされなければならない。しかし
、市販されている多量の保護基および二官能性リンカーのお陰により、本発明は
、ペプチドを改変するために、好ましくはわずか１つの化学的工程で（上記に記
載されるように）、または２工程（上記に記載され、感受性基の予めの保護を含
む）もしくは３工程（保護、活性化、および脱保護）で、任意のペプチドに適用
可能である。例外的な状況下でのみ、ペプチドを活性ＮＨＳまたはマレイミド誘
導体に転換するために、複数の（３工程を超える）合成工程が必要とされる。

【０１３８】 マレイミド誘導体はまた、遊離アミノ基および遊離カルボン酸を含むペプチド
から合成され得る。アミノ誘導体化分子からマレイミド誘導体を生成するために
は、ＤＭＦ中のＮ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル
（ＧＭＢＳ）およびトリエチルアミンが使用され得る。スクシンイミドエステル
基は遊離アミノと反応し、そしてマレイミド誘導体は、結晶化によってか、また
はシリカでのクロマトグラフィーによってか、またはＨＰＬＣによって、反応混
合物から精製される。

【０１３９】 最後に、マレイミド誘導体は、複数の他の感受性官能基を含み、そして遊離カ
ルボン酸を含まないペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸
を含まない場合、一連の二官能性架橋試薬を使用して、分子を反応性ＮＨＳ誘導
体に変換し得る。例えば、ＤＭＦ中でのＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性化を
使用して、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）を、遊離アミンにカップリングし
、遊離アミンとＭＰＡのカルボン酸基との反応を通してマレイミド誘導体を生成
し得る。

【０１４０】 多くの他の市販されるヘテロ二官能性架橋試薬が、必要とされる場合に代替的
に使用され得る。多数の二官能性化合物が、実体への架橋のために利用可能であ
る。例示的な試薬としては、以下が挙げられる：アジドベンゾイルヒドラジド、
Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミノ）ブチル］−３’−［２’−ピリジルジ
チオ）プロピオンアミド）、ビス−スルホスクシンイミジルスベレート（ｓｕｂ
ｅｒａｔｅ）、ジメチルアジピイミデート（ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）、ジスク
シンイミジル酒石酸塩、Ｎ−ｙ−マレイミドブチリルオキシスクシンイミドエス
テル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート、Ｎ−
スクシンイミジル［４−アジドフェニル］−１，３’−ジチオプロピオネート、
Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、グルタルア
ルデヒド、およびスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサ
ン−１−カルボキシレート。

【０１４１】 （６．改変された抗ウイルスペプチドの使用） 本発明の改変された抗ウイルスペプチドは、ウイルス感染を患っている患者の
処置において治療剤として使用され得、そして以下に記載される方法および当該
分野において公知の他の方法に従って患者に投与され得る。改変されたペプチド
の有効な治療的投薬量は、当業者に周知の手順を通して決定され得、そしてこの
ペプチドの潜在的な毒性に関する任意の懸念を考慮に入れる。

【０１４２】 改変されたペプチドはまた、以前に感染していない個体に予防的に投与され得
る。このことは、個体がウイルス伝染の高い危険がある感染した個体と接触した
場合に起こり得るように、個体がウイルスに曝される高い危険性に供されている
場合に有利であり得る。このことは、ウイルス（例えば、ＨＩＶウイルス）に対
する公知の治療法がある場合に特に有利であり得る。例として、改変された抗Ｈ
ＩＶペプチドの予防的な投与は、ヘルスケア労働者がＨＩＶ感染個体由来の血液
に曝された状況において、または個体をＨＩＶウイルスに潜在的に曝す高リスク
の活動にその個体が従事する他の状況において有利である。

【０１４３】 （７．改変された抗ウイルスペプチドおよび抗膜融合性ペプチドの投与） 一般的に、改変された治療ペプチドは、生理学的に受容可能な媒体（例えば、
脱イオン水、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、水性エタノール
または他のアルコール、血漿、蛋白様溶液、マンニトール、水性グルコース、ア
ルコール、植物油など）中で投与される。含まれ得る他の添加物としては、緩衝
液（この媒体は、約５〜１０の範囲のｐＨで一般的に緩衝化され、緩衝液は一般
に約５０〜２５０ｍＭの濃度の範囲である）、塩（塩の濃度は、一般に約５〜５
００ｍＭの範囲である）、生理的に受容可能な安定剤などが挙げられる。組成物
は、都合の良い保存および輸送のために凍結乾燥され得る。

【０１４４】 対象の改変されたペプチドは、大部分について、非経口的に（例えば、脈管内
に（ＩＶ）、動脈内に（ＩＡ）、筋肉内に（ＩＭ）、皮下に（ＳＣ）など）投与
される。投与は、適切な場合には、輸注により得る。いくつかの場合において（
ここで、官能基の反応は比較的緩慢である）、投与は、経口的、経鼻的、直腸的
、経皮的またはエーロゾルであり得、ここで結合体の性質は、脈管系への移動を
可能にする。通常、一回の注入が使用されるが、所望の場合、１回より多い注入
が用いられ得る。改変されたペプチドは、任意の都合のよい手段（注射器、トロ
カール、カテーテルなどを含む）により投与され得る。

【０１４５】 投与の特定の様式は、投与されるべき量、１回のボーラスであるかまたは継続
的な投与であるかなどに依存して変化する。好ましくは、投与は、脈管内であり
（この導入の部位は、本発明に対して重要なものではない）、好ましくは急速な
血流が存在する部位（例えば、静脈内、末梢静脈または中心静脈）である。他の
経路は、投与が、遅延性放出技術または保護マトリックスと結びつけられる使用
を見出し得る。この意図は、改変されたペプチドが血液中で効率的に分布される
ことであり、その結果、血液成分と反応し得る。結合体の濃度は、一般的に約１
ｐｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌで、広範に変化する。脈管内に投与される総量は、
一般に約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、より通常では、約１ｍｇ／ｍｌ
〜約５ｍｇ／ｍｌの範囲である。

【０１４６】 血液の永続成分（例えば、免疫グロブリン、血清アルブミン、赤血球および血
小板）を結合することにより、多数の利点が結果として生じる。ペプチドの活性
は、数日〜数週間延長される。１回の投与のみ、この期間に与えられる必要があ
る。活性化合物は、大きい分子に主に結合されることから（ここでは、他の生理
学的プロセスを妨げるように細胞内に取り込まれる可能性が低い）、より優れた
特異性が達成され得る。

【０１４７】 （８．改変されたペプチドの存在のモニタリング） 哺乳動物宿主の血液は、１回以上、改変されたペプチド化合物の存在について
モニターされ得る。宿主の血液の一部分またはサンプルを採取することにより、
ペプチドが治療的に活性であるのに十分な量で永続血液成分に結合されているか
否かを決定し得、そしてその後、血液中のペプチド成分のレベルを決定し得る。
所望される場合、ペプチドがどの血液成分に結合されるかもまた決定され得る。
これは、非特異的改変ペプチドを使用する場合に特に重要である。特定のマレイ
ミド改変ペプチドに関して、血清アルブミンおよびＩｇＧの半減期を算出するこ
とは、はるかに簡単である。

【０１４８】 （Ａ．免疫アッセイ） 本発明の別の局面は、抗ウイルスペプチドおよび／もしくはアナログ、または
それらの誘導体および結合体の、生物学的サンプル（例えば、血液）における濃
度を、これらのペプチド、ペプチドアナログ、またはそれらの誘導体および結合
体に対して特異的な抗体を用いて決定する方法、ならびにこのようなペプチド、
アナログおよび／またはこれらの誘導体もしくは結合体に強力に結合する、毒性
についての処置としてのこのような抗体の使用に関する。患者におけるインビボ
でのこのペプチドの増加した安定性および寿命は、処置の間の新しい問題（毒性
に関する増加した可能性を含む）を導き得るので、このことは有利である。

【０１４９】 特定のペプチド、そのペプチドアナログまたは誘導体に特異性を有する抗治療
薬剤抗体（モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれか）の使用は
、任意のこのような問題を仲裁する際に補助し得る。抗体は、特定のペプチド、
そのアナログもしくは誘導体を用いて、またはその因子の免疫原性フラグメント
、あるいはこの因子の抗原決定基に対応する合成された免疫原を用いて免疫され
た宿主から生成され得るか、またはそれらに由来し得る。好ましい抗体は、ペプ
チドまたはペプチドアナログもしくは誘導体のネイティブな形態、改変形態、お
よび結合体化形態に対して、高い特異性および親和性を有する。このような抗体
はまた、酵素、蛍光色素、または放射性標識を用いて標識され得る。

【０１５０】 改変されたペプチドに特異的な抗体は、ペプチド特異的抗体の誘導のために精
製されたペプチドを使用するすることにより、産生され得る。抗体の誘導により
、動物中への注射による免疫応答の刺激のみならず、合成抗体または他の特異的
結合分子の産生における類似の工程（例えば、組換え免疫グロブリンライブラリ
ーのスクリーニング）も意図される。モノクローナル抗体およびポリクローナル
抗体の両方が、当該分野で周知の手順により産生され得る。

【０１５１】 抗ペプチド抗体が、改変されたペプチド、そのアナログまたは誘導体の投与に
より誘導された毒性を処置するために使用され得、そしてエキソビボまたはイン
ビボで使用され得る。エキソビボの方法は、固体支持体に固定された抗治療薬剤
抗体を使用する、毒性に対する免疫透析処置を含む。インビボの方法は、抗体−
薬剤複合体のクリアランスを誘導するのに有効な量の抗治療薬剤抗体の投与を含
む。

【０１５２】 抗体は、無菌条件下で抗体と血液を接触させることにより、エキソビボで患者
の血液から、改変されたペプチド、そのアナログまたは誘導体、およびその結合
体を除去するために使用され得る。例えば、抗体は、カラムマトリックス上に固
着（ｆｉｘ）され得るかまたはさもなくば固定化（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅ）され
得、そして患者の血液が、その患者から取り出され得、そしてそのマトリックス
に通過され得る。改変されたペプチド、ペプチドアナログ、誘導体または結合体
が、抗体に結合しそして低濃度のペプチド、アナログ、誘導体または結合体を含
む血液が、次いで、患者の循環系に戻され得る。除去されるペプチド化合物の量
は、圧力および流速を調整することにより、制御され得る。

【０１５３】 患者の血液の血漿成分由来のペプチド、アナログ、誘導体および結合体の優先
的な除去は、例えば、半透膜の使用により、またはさもなくば、抗治療抗体を含
むマトリックスを血漿成分が通過する前に、当該分野で公知の方法により細胞成
分から血漿成分をまず分離することにより、もたらされ得る。あるいは、ペプチ
ド結合体化血球（赤血球細胞を含む）の優先的な除去は、患者の血液中の血球を
回収し、そして濃縮し、ならびに患者の血液の血清成分の排除に対してそれらの
細胞を、固着された抗治療抗体と接触させることによりもたらされ得る。

【０１５４】 抗治療抗体は、処置のために、ペプチド、アナログ、誘導体または結合体を受
容している患者に、インビボで非経口的に投与され得る。抗体は、ペプチド化合
物および結合体に結合する。一旦ペプチドに結合されると、活性は、完全にはブ
ロックされないとしても、妨げられ、それにより患者の血流中のペプチド化合物
の生物学的有効濃度を低減し、そして有害な副作用を最少にする。さらに、結合
された抗体−ペプチド複合体は、患者の血流からのペプチド化合物および結合体
のクリアランスを容易にする。

【０１５５】 十分に記載されてきた本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することによ
り、さらに認識および理解され得る。

【０１５６】 （実施例１） 改変されたＤＰ１７８の調製−−

【０１５７】

【化１１】 の合成 この実施例において、ＤＰ１７８（配列番号１）を、以下の合成スキームに従
って、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許
第６，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、
ＤＰ１７８は、ＨＩＶ−１の強力なインヒビターであり、そしてＨＩＶ−１に感
染した細胞と感染していない細胞との間の細胞誘導シンチウム形成および無細胞
ＨＩＶ−１ウイルスによる感染していない細胞の感染の両方を阻害する。

【０１５８】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１５９】

【化１２】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。この合成の終わりに。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の
選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ
：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液
で２時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃
（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍ
Ｌ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイ
ミドプロピオン酸の添加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に
、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイ
ソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／
５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでド
ライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ
（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂
Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））
で、１８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および
２５４ｎｍでＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用
する）を使用して、所望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の
純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る。

【０１６０】

【化１３】 （実施例２） 改変されたＤＰ１０７の調製−−

【０１６１】

【化１４】 の合成 この実施例において、ＤＰ１０７（配列番号２）を、以下の合成スキームに従
って、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許
第６，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、
ＤＰ１０７は、ＨＩＶに対する強力な抗ウイルス活性を示す。

【０１６２】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１６３】

【化１５】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。この合成の終わりに。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の
選択的脱保護を手動で実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ
：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液
で２時間処理することにより達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃
（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍ
Ｌ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイ
ミドプロピオン酸の添加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に
、この樹脂を３回Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイ
ソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／
５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでド
ライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ
（Ｒａｉｎｉｎ）分取バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂
Ｏ中０．０４５％ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））
で、１８０分間にわたって９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および
２５４ｎｍでＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用
する）を使用して、所望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の
純度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定）で得る。

【０１６４】

【化１６】 （実施例３） （改変された抗ＲＳＶペプチド（Ｃ末端）の調製） この実施例において、ペプチド

【０１６５】

【化１７】 （配列番号１６）を、以下の合成スキームに従って、リンカーおよびマレイミド
基を含むように合成および改変する。米国特許第６，０１３，２３６号および同
第６，０２０，４５９号に報告されるように、ネイティブ配列（配列番号 ）は
、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染し
ていないＨｅｐ−２細胞との間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１６６】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１６７】

【化１８】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１６８】

【化１９】 （実施例４） （改変された抗ＲＳＶペプチド（Ｔ−Ｎ末端）の調製） この実施例において、ペプチド

【０１６９】

【化２０】 （配列番号１７）（これは，配列番号１６のペプチドに対応するが、ここでメチ
オニン（Ｍ）残基は、システイン（Ｃ）残基で置換されている）を、以下の合成
スキームに従って、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変す
る。米国特許第６，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告さ
れるように、ネイティブ配列（配列番号１６）は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウ
イルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染していないＨｅｐ−２細胞との間
の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１７０】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１７１】

【化２１】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１７２】

【化２２】 （実施例５） （改変された抗ＲＳＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号１４を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号１４は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細
胞と感染していないＨｅｐ−２細胞との間の融合およびシンチウム形成の阻害を
含む）。

【０１７３】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１７４】

【化２３】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１７５】

【化２４】 （実施例６（Ｔ−１４３）） （改変された抗ＲＳＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号１５を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号１５は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細
胞と感染していないＨｅｐ−２細胞との間の融合およびシンチウム形成の阻害を
含む）。

【０１７６】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１７７】

【化２５】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１７８】

【化２６】 （実施例７） （改変された抗ＲＳＶペプチドの調製（Ｃ末端）） この実施例において、ペプチド配列番号１７（これは、メチオニン（Ｍ）がシ
ステイン（Ｃ）で置換された配列番号１６に対応する）を、以下の合成スキーム
に従って、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国
特許第６，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるよう
に、ネイティブ配列（配列番号１６）は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感
染を阻害する（ＲＳＶ感染細胞と感染していないＨｅｐ−２細胞との間の融合お
よびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１７９】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１８０】

【化２７】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１８１】

【化２８】 （実施例８） （改変された抗ＲＳＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号２９を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号２９は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）のウイルス感染を阻害する（ＲＳＶ感染細
胞と感染していないＨｅｐ−２細胞との間の融合およびシンチウム形成の阻害を
含む）。

【０１８２】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１８３】

【化２９】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１８４】

【化３０】 （実施例９（Ｔ−１７３）） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号５２を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号５２は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１８５】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１８６】

【化３１】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１８７】

【化３２】 （実施例１０） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号５８を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号５８は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１８８】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１８９】

【化３３】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１９０】

【化３４】 （実施例１１） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号３５を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号３５は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１９１】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１９２】

【化３５】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１９３】

【化３６】 （実施例１２） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号３８を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号３８は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１９４】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１９５】

【化３７】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１９６】

【化３８】 （実施例１３） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号３９を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号３９は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０１９７】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０１９８】

【化３９】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０１９９】

【化４０】 （実施例１４） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号４０を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号 は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染を
阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の間
の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０２００】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２０１】

【化４１】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２０２】

【化４２】 （実施例１５） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号４１を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号４１は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０２０３】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２０４】

【化４３】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２０５】

【化４４】 （実施例１６） （改変された抗ＨＰＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号４２を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号４２は、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ＨＰＩＶ３）のウイルス感染
を阻害する（ＨＰＩＶ３感染Ｈｅｐ−２細胞と感染していないＣＶ−１Ｗ細胞の
間の融合およびシンチウム形成の阻害を含む）。

【０２０６】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２０７】

【化４５】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２０８】

【化４６】 （実施例１７） （改変された抗ＭｅＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号７７を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７７は、はしかウイルス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染
細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含
む）。

【０２０９】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２１０】

【化４７】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２１１】

【化４８】 （実施例１８） （改変された抗ＭｅＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号７９を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７９は、はしかウイルス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染
細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含
む）。

【０２１２】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２１３】

【化４９】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２１４】

【化５０】 （実施例１９） （改変された抗ＭｅＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号８１を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７９は、はしかウイルス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染
細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含
む）。

【０２１５】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２１６】

【化５１】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２１７】

【化５２】 （実施例２０） （改変された抗ＭｅＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号８４を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号８４は、はしかウイルス（ＭｅＶ）のウイルス感染を阻害する（ＭｅＶ感染
細胞と感染していないＶｅｒｏ細胞の間の融合およびシンチウム形成の阻害を含
む）。

【０２１８】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２１９】

【化５３】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２２０】

【化５４】 （実施例２１） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号６４を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号６４は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２２１】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２２２】

【化５５】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２２３】

【化５６】 （実施例２２） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号６５を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号６５は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２２４】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２２５】

【化５７】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２２６】

【化５８】 （実施例２３） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号６６を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号６６は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２２７】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２２８】

【化５９】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２２９】

【化６０】 （実施例２４） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号６７を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号６７は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２３０】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２３１】

【化６１】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２３２】

【化６２】 （実施例２５） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号６８を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号６８は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２３３】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２３４】

【化６３】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２３５】

【化６４】 （実施例２６） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号６９を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号６９は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２３６】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２３７】

【化６５】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２３８】

【化６６】 （実施例２７） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号７０を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７０は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２３９】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２４０】

【化６７】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２４１】

【化６８】 （実施例２８） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号７１を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７１は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２４２】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２４３】

【化６９】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２４４】

【化７０】 （実施例２９） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号７２を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７２は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２４５】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２４６】

【化７１】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２４７】

【化７２】 （実施例３０） （改変された抗ＳＩＶペプチドの調製） この実施例において、ペプチド配列番号７３を、以下の合成スキームに従って
、リンカーおよびマレイミド基を含むように合成および改変する。米国特許第６
，０１３，２３６号および同第６，０２０，４５９号に報告されるように、配列
番号７３は、サル免疫不全ウイルスに対して粗製ペプチドとして強力な抗ウイル
ス活性を示す。

【０２４８】 １００μモルスケールでの改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを使用して行う。以下の保護された
アミノ酸を順番に樹脂に添加する：

【０２４９】

【化７３】 これらをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従っ
て、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を使用して
２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で
実行し、そしてこの樹脂を、５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間処理すること
により達成する（工程２）。次いでこの樹脂をＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄する。次いでこの合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添
加の間、再自動化する（工程３）。各カップリングの間に、この樹脂を３回Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄し、そしてイソプロパノールで３回
洗浄する。このペプチドを、８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールお
よび５％フェノールを使用して樹脂から切断し、次いでドライアイス冷却Ｅｔ₂
Ｏにより沈澱させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）分取
バイナリーＨＰＬＣ系（３０〜５５％Ｂの勾配溶出（Ｈ₂Ｏ中０．０４５％ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中０．０４５％ＴＦＡ（Ｂ））で、１８０分間にわた
って９．５ｍＬ／分でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍのカラムおよびλ２１４および２５４ｎｍでＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤＩＩ）を使用する）を使用して、所
望の改変されたペプチド（すなわちＤＡＣ）を＞９５％の純度（ＲＰ−ＨＰＬＣ
により決定）で得る。

【０２５０】

【化７４】 本発明の特定の実施形態が記載されそして例示されてきたが、当業者は、本発
明がこれらの実施形態のいずれかの特定のものに限定されることを意図されず、
添付の特許請求の範囲によりむしろ規定されるということを理解する。

【０２５１】

【表２】

【０２５２】

【表３】

【０２５３】

【表４】

【０２５４】

【表５】

【０２５５】

【表６】

【０２５６】

【表７】

【０２５７】

【表８】

【０２５８】

【表９】

【０２５９】

【表１０】

【０２６０】

【表１１】

【０２６１】

【表１２】

【０２６２】

【表１３】

【０２６３】

【表１４】

【０２６４】

【表１５】

【０２６５】

【表１６】

【０２６６】

【表１７】

【０２６７】

【表１８】

【０２６８】

【表１９】

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ダフレスン， ロバート エス． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02181， ウェレスリー， ピルグリム ロード 115 (72)発明者 ボウドジェラブ， ニサブ カナダ国 エイチ９エス ３エックス１ ケベック， ドーバル， アパートメント ２エイ， ボーク 420 (72)発明者 ロビタイル， マーティン カナダ国 エイチ２エックス ３ワイ８ ケベック， モントリオール， サード フロアー， スイート 3950， コンジュ ケム， インコーポレイテッド (72)発明者 ミルナー， ピーター ジー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94022， ロス アルトス ヒルズ， マニュエラ ロード 14690 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA06 AA07 BA01 BA08 BA19 BA23 BA32 CA59 DC50 NA14 ZB332 ZC552 4H045 AA10 AA30 BA19 BA20 BA50 CA05 EA29 FA33

Claims (34)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 改変された抗ウイルスペプチドであって、 抗ウイルス活性を示すペプチド、および 安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基と反応性のマレイミ
   ド基を含む、改変されたペプチド。
2. 【請求項２】 前記血液成分が血清アルブミンである、請求項１に記載の改
   変されたペプチド。
3. 【請求項３】 前記ペプチドがＤＰ１７８もしくはＤＰ１０７またはそれら
   のアナログである、請求項１に記載の改変されたペプチド。
4. 【請求項４】 前記ペプチドが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対して
   抗ウイルス活性を示す、請求項１に記載の改変されたペプチド。
5. 【請求項５】 前記ペプチドが、配列番号１〜配列番号９からなる群から選
   択される、請求項４に記載の改変されたペプチド。
6. 【請求項６】 前記ペプチドがＤＰ１７８またはＤＰ１０７である、請求項
   ４に記載の改変されたペプチド。
7. 【請求項７】 前記ペプチドが、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）に対する抗ウ
   イルス活性を示す、請求項１に記載の改変されたペプチド。
8. 【請求項８】 前記ペプチドが、配列番号１０〜配列番号３０からなる群か
   ら選択される、請求項７に記載の改変されたペプチド。
9. 【請求項９】 前記ペプチドが、配列番号１４〜配列番号１７および配列番
   号２９からなる群から選択される、請求項７に記載の改変されたペプチド。
10. 【請求項１０】 前記ペプチドが、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰ
    ＩＶ）に対する抗ウイルス活性を示す、請求項１に記載の改変されたペプチド。
11. 【請求項１１】 前記ペプチドが、配列番号３１〜配列番号６２からなる群
    から選択される、請求項１０に記載の改変されたペプチド。
12. 【請求項１２】 前記ペプチドが、配列番号３５、配列番号３８〜配列番号
    ４２、配列番号５２および配列番号５８からなる群から選択される、請求項１０
    に記載の改変されたペプチド。
13. 【請求項１３】 前記ペプチドが、はしかウイルス（ＭｅＶ）に対する抗ウ
    イルス活性を示す、請求項１に記載の改変されたペプチド。
14. 【請求項１４】 前記ペプチドが、配列番号７４〜配列番号８６からなる群
    から選択される、請求項１３に記載の改変されたペプチド。
15. 【請求項１５】 前記ペプチドが、配列番号７７、配列番号７９、配列番号
    ８１および配列番号８４からなる群から選択される、請求項１３に記載の改変さ
    れたペプチド。
16. 【請求項１６】 前記ペプチドが、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）に対す
    る抗ウイルス活性を示す、請求項１に記載の改変されたペプチド。
17. 【請求項１７】 前記ペプチドが配列番号６３〜配列番号７３からなる群か
    ら選択される、請求項１６に記載の改変されたペプチド。
18. 【請求項１８】 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の予防および／または
    処置における使用のための組成物であって、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に
    対する抗ウイルス活性を示し、安定な共有結合を形成するように血液成分上のチ
    オール基と反応性のマレイミド基で改変されたペプチドを含む、組成物。
19. 【請求項１９】 前記血液成分が血清アルブミンである、請求項１８に記載
    の組成物。
20. 【請求項２０】 前記ペプチドが、ＤＰ１７８もしくはＤＰ１０７またはそ
    れらのアナログである、請求項１９に記載の組成物。
21. 【請求項２１】 ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）感染の予防および／または処
    置において使用するための組成物であって、ＲＳＶに対する抗ウイルス活性を示
    し、安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基と反応性であるマ
    レイミド基で改変されたペプチドを含む、組成物。
22. 【請求項２２】 前記血液成分が血清アルブミンである、請求項２１に記載
    の組成物。
23. 【請求項２３】 前記ペプチドが、配列番号１４〜配列番号１７および配列
    番号２９からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
24. 【請求項２４】 ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）感染の予防
    および／または処置において使用するための組成物であって、ヒトパラインフル
    エンザウイルス（ＨＰＩＶ）に対する抗ウイルス活性を示し、安定な共有結合を
    形成するように血液成分上のチオール基と反応性であるマレイミド基で改変され
    たペプチドを含む、組成物。
25. 【請求項２５】 前記血液成分が血清アルブミンである、請求項２４に記載
    の組成物。
26. 【請求項２６】 前記ペプチドが配列番号３５、配列番号３８〜配列番号４
    ２、配列番号５２および配列番号５８からなる群から選択される、請求項２５に
    記載の組成物。
27. 【請求項２７】 はしかウイルス（ＭｅＶ）感染の予防および／または処置
    において使用するための組成物であって、はしかウイルス（ＭｅＶ）に対する抗
    ウイルス活性を示し、安定な共有結合を形成するように血液成分上のチオール基
    と反応性であるマレイミド基で改変されたペプチドを含む、組成物。
28. 【請求項２８】 前記血液成分が血清アルブミンである、請求項２７に記載
    の組成物。
29. 【請求項２９】 前記ペプチドが、配列番号７７、配列番号７９、配列番号
    ８１および配列番号８４からなる群から選択される、請求項２８に記載の組成物
    。
30. 【請求項３０】 前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合
    される、請求項１に記載の改変されたペプチド。
31. 【請求項３１】 前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合
    される、請求項１８に記載の組成物。
32. 【請求項３２】 前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合
    される、請求項２１に記載の組成物。
33. 【請求項３３】 前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合
    される、請求項２４に記載の組成物。
34. 【請求項３４】 前記マレイミド基が、連結基を介して前記ペプチドに結合
    される、請求項２７に記載の組成物。