CN116710146A - 抗体分子-药物偶联物及其用途 - Google Patents

抗体分子-药物偶联物及其用途 Download PDF

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Abstract

公开了特异性结合脂多糖(LPS)的抗体分子‑药物偶联物(ADC)。该抗体分子‑药物偶联物可用于治疗、预防和/或诊断细菌感染和相关病症。

Description

抗体分子-药物偶联物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年4月3日提交的美国临时申请号63/004,946的权益。上述申请的内容通过引用的方式全文纳入本文。
序列表
本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表并通过引用其全部内容纳入本文。在2021年4月2日创建的所述ASCII拷贝命名为P2029-7029WO_SL.txt，大小为123,053字节。
背景技术
多种细菌可造成感染，导致轻微至严重的疾病。细菌感染通常通过抗生素治疗。然而，抗生素耐药性细菌菌株的出现使感染的治疗变得复杂。与易于用抗生素治疗的感染相比，抗生素耐药性感染通常导致更大的残疾和死亡。据疾病控制和预防中心(CDC)称，美国每年至少有200万人患上严重的细菌感染，这些细菌对一种或多种用于治疗这些感染的抗生素有耐药性。每年至少有23000人直接死于这些抗生素耐药性感染。这些估计基于保守的假设，并且可能是最低估计。更多患者可能死于其他因细菌感染而变得复杂的病症。当一线和二线抗生素治疗方案受到耐药性限制或无法获得时，医疗提供者被迫使用可能对患者毒性更高，并且通常更昂贵且效果更差的抗生素。在许多情况下，抗生素耐药性感染需要长时间或更昂贵的治疗，延长住院时间，并且需要额外的医生就诊和医疗护理。
抗生素的使用是导致全世界抗生素耐药性的最重要因素之一。抗生素是人类医学中最常用的处方药。然而，根据CDC的说法，高达50％的用于人处方的抗生素是不需要的，或者没有达到规定的最佳效果。抗生素也常用于食用动物中以预防，控制和治疗疾病，并促进产生食物的动物的生长。细菌的耐药性菌株可在人与人之间传播，或从环境中的非人源传播，包括食物。
需要开发用于治疗，预防和诊断细菌感染的新方法。
发明概述
本公开内容至少部分地提供与细菌，例如革兰氏阴性细菌，例如革兰氏阴性细菌外膜上的脂多糖(LPS)结合，并且包含本文公开的功能和结构性质的抗体分子或抗体分子-药物偶联物(ADC)。在一个实施方式中，ADC包含与抗LPS抗体分子位点特异性偶合(couple)(例如偶联(conjugate))的抗微生物肽。在一个实施方式中，ADC包含各自与抗LPS抗体分子位点特异性偶合(例如偶联)的多种抗微生物肽。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合LPS的核心区。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)LPS的单糖组分(例如，庚糖)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合核心LPS的磷酸化(例如，超磷酸化或双磷酸化)HepI残基(例如，在铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)中)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC不结合庚糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC不结合单磷酸化庚糖类似物(例如，2-P-Hep和/或4-P-Hep)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合4-P磷酸基团比2-P磷酸基团更强。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合二磷酸化的2，4-P-Hep单糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含在氨基酸残基中的一个或多个突变，该氨基酸残基接触铜绿假单胞菌LPS的单糖组分(例如，庚糖)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含在VH残基A33或E99处的一个或多个(例如，1或2个)保守取代。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含在VL残基H32处的保守取代。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含VH残基D54和/或D56的突变。
在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合，抑制和/或降低不同属，种和/或亚种的一种或多种细菌(例如革兰氏阴性细菌)的活力。在一个实施方式中，抗体分子选自表1或3。在一个实施方式中，ADC包含选自表1或3的抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含表1或3中所述的一个或多个重链可变区和/或一个或多个轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含表1或3中所述的一个或多个重链CDR和/或一个或多个轻链CDR。在一个实施方式中，ADC包含抗微生物肽，例如，本文所述的抗微生物肽，例如，在表4中。虽然不希望受理论束缚，据信，在一个实施方式中，抗体分子与抗微生物肽的偶联可以改善抗体分子和/或抗微生物肽的一种或多种性质，例如，改善抗微生物肽抑制或降低不同属，种和/或亚种的一种或多种细菌，例如一种或多种革兰氏阴性细菌的活力的能力。还提供了编码抗体分子，ADC或抗微生物肽的核酸分子，表达载体，宿主细胞，组合物(例如药物组合物)，试剂盒/药盒和制备抗体分子，ADC或抗微生物肽的方法。本文公开的抗体分子，ADC和抗微生物肽可以(单独或与其他药剂或治疗方式组合的形式)用于治疗，预防和/或诊断例如由革兰氏阴性细菌(例如，假单胞菌，例如铜绿假单胞菌)引起的或与之相关的细菌感染或相关病症。
因此，在一个方面中，本公开提供了包含抗体分子和共价偶联的肽(例如，抗微生物肽)的抗体分子-药物偶联物(ADC)，其中抗体分子包含重链可变区(VH)，其中所述VH包含三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，并且其中所述VH包含：
(a)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3，或(b)包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；和
其中所述抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中所述VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，并且其中所述VL包含：
(a)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3，或(b)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。在一个实施方式中，肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：257的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。在一个实施方式中，ADC具有约2的肽：抗体比。在一个实施方式中，肽包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：156的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。在一个实施方式中，ADC具有约4的肽∶抗体比。在一个实施方式中，肽包含D-氨基酸或由其组成。
在一个实施方式中，VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID`NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。在一个实施方式中，VH包含：HCDR1，包含SEQ IDNO：108的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ IDNO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。在一个实施方式中，肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：257的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。在一个实施方式中，ADC具有约2的肽：抗体比。在一个实施方式中，肽包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：156的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。在一个实施方式中，ADC具有约4的肽：抗体比。在一个实施方式中，肽包含D-氨基酸或由其组成。
在一些实施方式中，VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：117的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。
在一个实施方式中，VH包含氨基酸序列SEQ ID NO：117。
在一个实施方式中，VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：135的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。
在一个实施方式中，VL包含氨基酸序列SEQ ID NO：135。
在一个实施方式中，肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：257的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。在一个实施方式中，ADC具有约2的肽：抗体比。在一个实施方式中，肽包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：156的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。在一个实施方式中，ADC具有约4的肽：抗体比。在一个实施方式中，肽包含D-氨基酸或由其组成。
在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含HCDR2序列子Xaa-Xaa-Gly-Gly-(Ser/Thr/Gly)。
在一个实施方式中，抗体分子能够结合假单胞菌。在一个实施方式中，抗体分子能够结合铜绿假单胞菌。在一个实施方式中，抗体分子能够结合假单胞菌上的脂多糖(LPS)。在一个实施方式中，抗体分子能够结合假单胞菌上的LPS的内核(例如，内核聚糖部分)。在一个实施方式中，抗体分子不结合，或基本不结合大肠杆菌LPS，例如，由Western印迹所确定。在一个实施方式中，抗体分子不结合，或基本不结合庚糖或单磷酸化的庚糖类似物(例如，2-P-Hep或4-P-Hep)，例如，通过生物层干涉分析所确定。
在一个实施方式中，抗体分子结合二磷酸化的2，4-P-Hep单糖，例如，通过生物层干涉分析所确定。在一个实施方式中，抗体分子结合二磷酸化的甘露糖(2，4-P-Man)，例如，其结合相比二磷酸化的2，4-P-Hep单糖有所降低，例如，通过生物层干涉分析所确定。在一个实施方式中，抗体分子结合二磷酸化的庚糖，例如，二磷酸化的2，4，-P-Hep单糖，例如，由1H-饱和转移差(STD)NMR谱所确定。在一个实施方式中，抗体分子仅结合二磷酸化的庚糖，例如，二磷酸化的2，4，-P-Hep单糖，例如，由1H-饱和转移差(STD)NMR谱所确定。在一个实施方式中，抗体分子结合一个或多个本文所述的铜绿假单胞菌菌株，例如，对碳青霉烯类、抗假单胞菌第三代头孢菌素类或氟喹诺酮类有耐药性的一种或多种菌株，例如，具有约20至约150pM(例如，约50至约120pM)的表观亲合力，例如，通过全细菌细胞ELISA所确定。在一个实施方式中，抗体分子杀伤一个或多个本文所述的铜绿假单胞菌菌株，例如，一个或多个对碳青霉烯类有耐药性的菌株。在一个实施方式中，抗体分子杀伤对头孢菌素和/或氟喹诺酮有耐药性的铜绿假单胞菌菌株，例如，在1至10μg/mL(例如，1-2μg/mL，2-5μg/mL，或5-10μg/mL)或5-50nM(例如，5-10nM，10-20nM，20-30nM，30-40nM，40-45nM，或45-50nM)的浓度下。
在一个实施方式中，抗体分子不结合革兰氏阴性菌(例如，致病革兰氏阴性菌)。在一个实施方式中，抗体分子不结合，或基本不结合以下的一个或多个：大肠杆菌、肺炎克雷铂菌、鼠伤寒沙门氏菌、革兰氏阳性菌或哺乳动物细胞，例如，由全细胞ELISA所确定。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合超过100种铜绿假单胞菌菌株。在一个实施方式中，抗体分子结合除铜绿假单胞菌以外的假单胞菌物种，例如，荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)或施氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri)中的一个或多个，例如，如全细胞ELISA、流式细胞术和/或电子显微镜所确定。
在一个实施方式中，抗体分子是单克隆抗体分子，人源化抗体分子、分离的抗体分子、或合成抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子包含两个VH和两个VL。在一个实施方式中，抗体分子还包含IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的重链恒定区。
在一个实施方式中，抗体分子包含来自κ或λ链的轻链恒定区。在一个实施方式中，ADC(例如，本文所述)或抗体分子(例如，本文所述)包含Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
在一个实施方式中，肽包含氨基酸序列SEQ ID NO：257。在一个实施方式中，肽包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个D-氨基酸，或肽中氨基酸残基的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％是D-氨基酸。在一个实施方式中，肽中的所有氨基酸残基都是D-氨基酸。在一个实施方式中，肽与VH，例如VH的C-端，例如间接(例如，通过恒定区，接头或两者)偶联。在一个实施方式中，肽通过酶促连接，例如，使用分选酶A(SrtA)，例如，通过分选酶识别序列(例如，LPETGGG(SEQ ID NO：244))与抗体分子偶联。
在一个实施方式中，肽包含分选酶供体系列，例如，N-末端GGG。在一个实施方式中，肽连接至抗体分子的轻链的C-末端，N-末端或C-末端和N-末端。在一个实施方式中，肽连接至抗体分子的重链的C-末端，N-末端或C一末端和N-末端。在一个实施方式中，肽连接至抗体分子的重链和轻链的C-末端，N-末端或C-末端和N-末端。在一个实施方式中，ADC在抗体分子和肽之间包含接头，例如，(Gly-Ser)n接头序列，其中n＝2至20(SEQ ID NO：262)。在一个实施方式中，ADC具有约2至约8，例如，约2至约4的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定。在一个实施方式中，ADC具有约2的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定。
在一个实施方式中，ADC在约2μg/mL至约50μg/mL，例如，约3.1μg/mL至约25μg/mL的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。在一个实施方式中，ADC在约0.01μg/mL至约2μg/mL(例如，约0.1μg/mL至约2μg/mL，约0.1μg/mL至约1.5μg/mL，约0.01μg/mL至约1.5μg/mL，约0.5μg/mL至约1.5μg/mL)的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。在一个实施方式中，ADC在约1μg/mL(例如，约0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5μg/mL)的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。在一个实施方式中，ADC诱导对约5-50％的铜绿假单胞菌细胞的杀伤(例如，约5-40％、5-30％、5-20％、10-40％、15-40％、10-30％、15-25％的铜绿假单胞菌细胞)。在一个实施方式中，ADC诱导对约20％的铜绿假单胞菌细胞的杀伤(例如，约10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或30％的铜绿假单胞菌细胞)。在一个实施方式中，ADC诱导在约1μg/mL下诱导约20％的杀伤。在一些实施方式中，所述ADC具有与参比ADC(例如VSX-1)相比时与其相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。在一个实施方式中，对于铜绿假单胞菌，ADC具有约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的平均裂解浓度(MLC)。在一些实施方式中，所述ADC具有与参比ADC(例如VSX-1)相比时与其相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的MLC。在一个实施方式中，对于铜绿假单胞菌，ADC具有约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的CC50(观察到哺乳动物细胞50％细胞毒性的浓度)。在一个实施方式中，对于铜绿假单胞菌，ADC具有比参比ADC，例如，VSX-1高，例如高至少0.5、1、2、3、4或5倍的CC50。在一个实施方式中，ADC抑制LPS-介导的Toll-样受体4(TLR4)活化，例如，根据HEK-蓝报告子测试，例如，如实施例4所述。在一个实施方式中，与参比ADC，例如VSX-1相比，ADC具有改善的生物分布，例如，通过药代动力学测量，全体成像，体内成像，器官分布评估(例如，ADC不基本上或主要分布到肝脏)，ELISA和/或血样质谱。
在一个方面，本公开提供了包含抗体分子的ADC，该抗体分子包含两个VH和两个VL，其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；并且其中VH包含：包含SEQID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；并且其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。
在一个方面，本公开提供了包含抗体分子的ADC，该抗体分子包含两个VH和两个VL，其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；并且其中VH包含：包含SEQID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；并且其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。在一个实施方式中，VH包含氨基酸序列SEQ ID NO：117，且VL包含氨基酸序列SEQ IDNO：135。在一个实施方式中，肽通过(Gly-Ser)n接头与VH的C-末端偶联。
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本文所述的ADC和药学上可接受的运载体。
在一个方面，本公开提供了本文所述的ADC或药物组合物，用于治疗或预防对象中与例如假单胞菌相关的细菌感染的方法。在一个实施方式中，细菌感染与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)相关。在一个实施方式中，细菌感染在对象的肺部。在一个实施方式中，ADC或药物组合物降低肺部的细菌负荷。在一个实施方式中，以1-10mg/kg的剂量给予ADC。在一个实施方式中，ADC或组合物通过静脉内，皮下或鼻内或通过吸入给予。在一个实施方式中，在与细菌感染相关的症状发作之前或之后给予ADC或组合物。在一个实施方式中，对象具有以下一种或多种：肺炎、尿路感染(UTI)、败血症、脑膜炎、腹泻、软组织感染、皮肤感染、菌血症、呼吸系统感染、心内膜炎、腹腔内感染、脓毒性关节炎、骨髓炎、中枢神经系统感染、眼部感染、胆囊炎、胆管炎、脑膜炎、伤寒、食物中毒、肠胃炎、肠热病、志贺氏菌病、血流感染、腹腔内败血症、脑脓肿、脑膜炎、败血症、关节感染、骨骼感染、肠胃感染或伤口感染。在一个实施方式中，细菌感染是医院感染或医院获得性感染。在一个实施方式中，对象是人或动物。在一个实施方式中，对象是免疫功能低下的患者或健康专业人员。在一个实施方式中，对象患有，或有患有以下的风险：HIV感染或AIDS，癌症，实体器官移植，干细胞移植，镰状细胞病或无脾，先天性免疫缺陷，慢性炎性病症，耳蜗植入，营养不良或脑脊液渗漏。在一个实施方式中，对象为18岁或更小，15岁或更小，12岁或更小，9岁或更小，或6岁或更小，或者为至少60岁，至少65岁，至少70岁，至少75岁，或至少80岁。在一个实施方式中，方法还包括向所述对象给予第二抗微生物剂或疗法。
在一个实施方式中，第二抗微生物剂或疗法包括抗生素或噬菌体疗法。在一个实施方式中，抗生素是多粘菌素(例如，粘菌素)或β-内酰胺(例如，碳青霉烯，例如，美罗培南)。在一个实施方式中，抗生素选自氨基糖苷、安莎霉素、碳头孢烯、碳青霉烯、头孢菌素、糖肽、林可酰胺、脂肽、大环内酯、单菌霉素、硝基呋喃、噁唑烷酮、青霉素、青霉素组合、多肽、喹诺酮或氟喹诺酮、磺胺、四环素或抗分枝杆菌药物。
在一个实施方式中，其中抗生素选自阿米卡星，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素，巴龙霉素，链霉素，壮观霉素，格尔德霉素，除莠霉素或利福昔明，劳拉卡头孢菌素，厄他培南，多利培南，亚胺培南/西司他丁，美罗培南，头孢羟氨苄，头孢唑啉，头孢噻吩(cefaltin)，头孢噻吩(cefalothin)，头孢氨苄，头孢克洛，头孢羟唑，头孢西丁，头孢丙烯，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢哌酮，头孢噻肟，头孢泊肟，头孢他啶，头孢布坦，头孢唑肟，头孢曲松，头孢吡肟，头孢洛林，头孢托罗，替考拉宁，万古霉素，特拉万星，达巴万星，奥利万星，克林霉素，林可霉素，达托霉素，阿奇霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，罗红霉素，竹桃霉素，泰利霉素，螺旋霉素，氨曲南，呋喃唑酮，呋喃妥因，利奈唑胺，泼斯唑来，雷得唑来，托拉唑来，阿莫西林，氨苄青霉素，阿洛西林，羧苄青霉素，氯唑西林，双氯西林，氟氯西林，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，青霉素g，青霉素v，哌拉西林，青霉素g，替莫西林或替卡西林，阿莫西林/克拉维酸，氨苄青霉素/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦，替卡西林/克拉维酸盐，杆菌肽，粘菌素，多粘菌素b，环丙沙星，依诺沙星，加替沙星，吉米沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，莫西沙星，萘啶酸，诺氟沙星，氧氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，司帕沙星，替马沙星，磺胺米隆，磺胺醋酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺异噁唑，甲氧苄啶-磺胺甲基异噁唑(复方磺胺甲噁唑)，偶氮磺胺，地美环素，强力霉素，米诺环素，土霉素，四环素，氯法齐明，氨苯砜，卷曲霉素，环丝氨酸，乙胺丁醇，乙硫氨酰胺，异烟肼，吡嗪酰胺，利福平，利福布汀，利福喷汀，链霉素，阿司匹林，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，甲硝唑，莫匹罗星，安替霉素，奎奴普丁/达福普汀，甲砜霉素，替加环素，替硝唑，或甲氧苄啶。在一个实施方式中，抗生素选自左氧氟沙星，环丙沙星，庆大霉素，头孢曲松，氧氟沙星，阿米卡星，妥布霉素，氨曲南或亚胺培南/西司他丁。在一个实施方式中，第二抗微生物剂或疗法在给予ADC之前给予，与给予ADC同时给予，或在给予ADC之后给予。
在一个方面，本公开提供了抑制或降低细菌感染的方法，该方法包括使细胞接触有效抑制或降低细菌感染的量的本文所述的ADC，或本文所述的药物组合物。在一个实施方式中，ADC或药物组合物在体外，离体或体内与细胞接触。
在一个方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含：本文所述的ADC或本文所述的药物组合物；和使用ADC或药物组合物的说明书。
在一个方面，本公开内容的特征在于容器，其包含本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个方面，本公开提供了核酸分子，其编码：
(a)本文所述的ADC的抗体分子的VH，VL或两者；
(b)本文所述的ADC的抗微生物肽；
(c)(a)和(b)两者；或
(d)本文所述的ADC。
在一个实施方式中，载体包含本文所述的核酸分子。在一个实施方式中，细胞包含本文所述的核酸分子或载体。在一个实施方式中，产生ADC的方法，该方法包括在允许产生ADC的条件下培养细胞，从而产生ADC。在一个实施方式中，产生ADC的方法，该方法包括将结合LPS的抗体分子与包含抗微生物肽的肽，和任选地分选酶供体序列接触，所述接触在分选酶存在下，在允许分选酶介导的反应发生的条件下进行，从而产生ADC。在一个实施方式中，抗体分子包含分选酶受体序列，其包含分选酶识别序列，接头序列或两者。在一个方面，一种治疗或预防细菌感染的方法，包括以有效治疗或预防细菌感染的量向有需要的对象给予本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。在一个实施方式中，本文所述的ADC在制备用于治疗或预防细菌感染的药物中的用途。
因此，在一个方面，本公开提供了抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
HIPS化学，
其中J1是共价偶合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0到40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
在一个实施方式中，当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序是异源修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于重链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链恒定区中除重链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于轻链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链恒定区中除轻链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。
在一个实施方式中，ADC包含多个修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含三个或更多个(例如，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含四个或更多个(例如，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，ADC包含四个修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含两条或更多条重链，每条重链包含修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含两条或更多条轻链，每条轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含两条重链和两条轻链，每条重链包含两个修饰的硫酸酯酶基序(例如，一个在CH1中且一个在CH3中，一个在CH1中且一个在CH2中，或一个在CH2且一个在CH3)。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序作为包含由柔性接头分开的修饰的硫酸酯酶基序的多联体形式提供。
在一个实施方式中，Z3是精氨酸(R)。在一个实施方式中，X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。在一个实施方式中，X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：L(FGly’)TPSR(SEQ ID NO：168)。
另一方面，本发明的特征在于一种醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)，其包含具有以下氨基酸序列的硫酸酯酶基序：
X1Z1X2Z2X3Z3
其中
Z1是半胱氨酸，丝氨酸或2-甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当异源硫酸酯酶基序位于醛标记的多肽的N-末端时，X1存在；并且
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
在一个实施方式中，当处于折叠状态时，抗体分子能够在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序是异源硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序是未修饰的硫酸酯酶基序。在另一个实施方式中，硫酸酯酶基序是修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链恒定区中除重链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链恒定区的末端(例如，C末端)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于轻链恒定区中除轻链恒定区的末端(例如，C末端)之外的区域中。
在一个实施方式中，抗体分子包含多个硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含三个或更多个(例如，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含四个或更多个(例如，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含四个修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。在一个实施方式中，抗体分子包含两条或更多条重链，每条重链包含硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含两条或更多条轻链，每条轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。在一个实施方式中，抗体分子包含两条重链和两条轻链，每条重链包含两个修饰的硫酸酯酶基序(例如，一个在CH1中且一个在CH3中，一个在CH1中且一个在CH2中，或一个在CH2且一个在CH3)。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序作为包含被柔性接头分开的修饰的硫酸酯酶基序的多联体形式提供。
在一个实施方式中，Z3是精氨酸(R)。在一个实施方式中，X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。在一个实施方式中，X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：LCTPSR(SEQ ID NO：169)。
一方面，本公开内容提供了产生ADC的方法，其包括使醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子)与抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)在允许抗体分子的醛与抗微生物肽的反应性基团之间发生反应的条件下接触，从而产生ADC。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子包含2-甲酰基-甘氨酸残基(例如，Z1处的FGly’)。在一个实施方式中，抗微生物肽包含氨氧基或酰肼反应性基团。
在一个实施方式中，该方法包括在反应混合物中联合醛标记的抗体分子和抗微生物肽。
在一个实施方式中，使抗微生物肽与抗体分子接触，或在反应混合物中提供，其量足以提供抗微生物肽与抗体分子的所需比率。在一个实施方式中，抗微生物肽与抗体分子的比率为约1∶1，2∶1，3∶1，4∶1，5∶1，6∶1，7∶1，8∶1或更大。在一个实施方式中，抗微生物肽与抗体分子的比率为约4∶1。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接偶合。在另一个实施方式中，醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过与肟和酰肼偶联，然后还原而偶合。
在一个实施方式中，该方法还包括例如从反应混合物中分离(例如纯化)ADC。在一个实施方式中，醛标记的抗体分子在醛标记的抗体分子与抗微生物肽接触之前(例如，在反应混合物中的抗微生物肽与醛标记的抗体分子联合之前)是折叠的。
在一方面，本发明提供一种通过本文所述的方法产生的ADC。
在一个方面，本公开提供了一种组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含ADC和药学上可接受的运载体，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
在一个方面，本公开提供了包含ADC的反应混合物，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的硫酸酯酶基序(例如，修饰的硫酸酯酶基序)。
在一个方面，本公开内容的特征在于一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括向有需要的对象给予有效治疗或预防细菌感染或相关病症的量的ADC或包含ADC的药物组合物，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，并且其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
在一个实施方式中，细菌感染与革兰氏阴性细菌相关。在一个实施方式中，细菌感染是假单胞菌感染。在一个实施方式中，细菌感染与铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)相关。
一方面，本发明的特征在于一种核酸，其包含编码本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子的核苷酸序列。
一方面，本发明提供抗体分子或ADC结合本文所述的表位。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包含修饰的硫酸酯酶基序(例如，本文所述的修饰的硫酸酯酶基序)。
在一个方面，本公开内容提供了包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗微生物肽通过以下方式与抗体分子偶合：(a)赖氨酸偶联(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应性基团)；(b)链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)；(c)非天然氨基酸(例如，被醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)；或(d)可生物降解的聚合物(例如赖氨酸或巯基)。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗体分子直接偶联抗微生物肽上的活化氨基酸。在一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为巯基反应性基团，并且具有巯基反应性基团的抗体分子与巯基化的抗微生物肽连接。在一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(b)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(c)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接(Kolb等，Angew Chem Int Ed Engl.2001；40(11)：2004-2021；Evans Australian Journal of Chemistry.2007；60(6)：384-395)。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过(d)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，将抗微生物肽连接到可生物降解的聚合物上，并将聚合物连接到抗体分子上。
在一个实施方式中，ADC在组合物(例如，药物组合物)中提供。
在一个实施方式中，ADC或药物组合物用于治疗或预防对象中的细菌感染(例如，与革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)相关的感染)或相关病症。
因此，在某些方面，本公开内容提供抗体分子-药物偶联物(ADC)，例如，包含本文所述的抗体分子和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，具有以下属性中的一种或多种(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27种或全部)：
a)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力与不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，来自肠杆菌的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌或柠檬酸杆菌，例如泛耐药性肠杆菌科)，来自假单胞菌的一种或多种细菌，来自不动杆菌的一种或多种细菌，或其任何组合)结合，
b)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力结合脂多糖(LPS)，
c)抑制不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种本文所述的革兰氏阴性细菌)，例如，(如经本文所述的方法)通过测量ADC的最小抑制浓度(MIC)测定，
d)与单独的抗微生物肽相比，以较低MIC，例如，低至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，200，500，1000倍的MIC(例如，以摩尔计，通过本文所述的方法测量)抑制不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种的本文所述的革兰氏阴性细菌)，
e)降低不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，例如，(如经本文所述的方法)通过测量最小杀细菌浓度(MBC)测定，
f)与单独的抗微生物肽相比，以较低MBC，例如，低至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，200，500，1000倍的MBC(例如，以摩尔计，通过本文所述的方法测量)降低不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种的本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，
g)显示调理吞噬活性(OPA)，例如，通过OPA测定法测定，例如，如本文所述，
h)特异性结合LPS上的表位，例如，与表1或3中描述的抗体分子，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6识别的表位相同或相似的表位，
i)显示与表1或3中描述的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
j)显示与包含表1或3中描述的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
k)显示与包含表1或3中所述的重链可变区和/或轻链可变区，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的重链可变区和/或轻链可变区的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
1)显示与包含表1或3中所述的重链可变区和/或轻链可变区，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的重链可变区和/或轻链可变区的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
m)显示与包含表1或3中所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链CDR，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(两个或三个)轻链CDR的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
n)显示与包含表1或3中所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链CDR，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(两个或三个)轻链CDR的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
o)显示与包含表1或3中所示氨基酸序列的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
p)显示与包含表1或3中所示氨基酸序列的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
q)抑制，例如，竞争性抑制第二抗体分子与革兰氏阴性细菌，LPS或两者的结合，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
r)抑制，例如，竞争性抑制包含第二抗体分子的第二ADC与革兰氏阴性细菌，LPS或两者的结合，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
s)与第二抗体分子结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
t)与包含第二抗体分子的第二ADC结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNvl，3E7，3G1，2C7或3D6，
u)与第二抗体分子竞争结合革兰氏阴性细菌，LPS或两者，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
v)与包含第二ADC的第二ADC竞争结合革兰氏阴性细菌，LPS或两者，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
w)具有选自表1或3中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种生物学性质，
x)具有包含选自表1或3中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的ADC的一种或多种生物学性质，
y)具有包含选自表1或3中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的ADC的一种或多种药代动力学性质，
z)与来自第二属，种或亚种的革兰氏阴性菌(例如，大肠杆菌，克雷伯氏菌种或两者)的活力降低相比，以高选择性降低来自第一属，种或亚种(例如，假单胞菌)的革兰氏阴性细菌的活力，例如，以至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的杀灭％，例如，通过物本文所述的混合微生物杀灭试验确定，
aa)以高亲和力，例如，以EC50为约200pM或更低，例如，低于约150pM或更低，约120pM或更低，约100pM或更低，约80pM或更低，约60pM或更低，或约40pM或更低，例如约40pM至约120pM，约50pM至约110pM，约60pM至100pM，约40pM至80pM，或80pM至120pM的亲合力结合一种或多种铜绿假单胞菌菌株，或
bb)体内抑制不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，一种或多种本文所述的革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌)，例如，细菌负荷减少至少2，5，10，20，50，100，200，500，1000或更多倍，例如，如使用动物模型，例如本文所述的鼠急性肺炎模型所确定。
因此，在某些方面，本公开内容提供抗体分子，例如本文所述的抗体分子，其具有以下性质中的一种或多种(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15种或全部)：
a)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力与不同属，种和/或亚种的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种)革兰氏阴性细菌(例如，来自肠杆菌的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌或柠檬酸杆菌，例如泛耐药性肠杆菌科)，来自假单胞菌的一种或多种细菌，来自不动杆菌的一种或多种细菌，或其任何组合)结合，
b)以例如，解离常数(KD)小于约100nM，通常约10nM，更通常约10-0.01nM，约5-0.01nM，约3-0.05nM，约1-0.1nM，或更强，例如，小于约80，70，60，50，40，30，20，10，8，6，4，3，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05或0.01nM的高亲和力结合脂多糖(LPS)，
c)显示调理吞噬活性(OPA)，例如，如本文所述通过OPA测定法测定，
d)特异性结合LPS上的表位，例如，与表1或3中描述的抗体分子识别的表位相同或相似的表位，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
e)显示与表1或3中描述的抗体分子(例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6)相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
f)显示与包含表1或3中描述的抗体分子(例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6)的ADC相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
g)显示与包含表1或3中所述的重链可变区和/或轻链可变区，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的重链可变区和/或轻链可变区的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
h)显示与包含表1或3中所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链CDR，例如，mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一个或多个(例如，两个或三个)重链CDR和/或一个或多个(两个或三个)轻链CDR的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
i)显示与包含表1或3中所示氨基酸序列的抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者，
j)抑制，例如，竞争性抑制第二抗体分子与革兰氏阴性细菌，LPS或两者的结合，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
k)与第二抗体分子结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
1)与第二抗体分子竞争结合革兰氏阴性细菌，LPS或两者，其中第二抗体分子是选自表1或3的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，
m)具有选自表1或3中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种生物学性质，
n)具有选自表1或3中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种生物学性质，
o)具有选自表1或3中的抗体分子，例如mAb001(例如，人源化mAb001)，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6的一种或多种药代动力学性质，或
p)以高亲和力，例如，以EC50为约200pM或更低，例如，低于约150pM或更低，约120pM或更低，约100pM或更低，约80pM或更低，约60pM或更低，或约40pM或更低，例如约40pM至约120pM，约50pM至约110pM，约60pM至100pM，约40pM至80pM，或80pM至120pM的亲合力结合一种或多种铜绿假单胞菌菌株。
在一个方面，本公开内容的特征在于抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含a)结合脂多糖(LPS)的抗体分子和b)抗微生物肽。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS的核心戊糖区。在一个实施方式中，核心戊糖区包含一个或多个(例如，两个)Kdo残基和一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合一个或多个(例如，两个)Kdo残基，或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基，或其任何组合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：109，145或146中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包括三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，
其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDRl，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且
其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109，145或146中的任一个)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：106)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包括三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，
其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且
其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，和
轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111，139，141，142或143中的任一个)；或LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110，138，140或144中的任一个)；LCDR2，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：111，139，141，142或143中的任一个)；和LCDR3，其包含抗体mAb001或人源化mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体mAb001或人源化mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103或115-118中的任一个)，并且轻链可变区包含抗体mAb001或人源化mAb001的VL氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104或119-137中的任一个)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含或由两个重链可变区和两个轻链可变区组成。在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子还包含重链恒定区，轻链恒定区或两者。在一个实施方式中，ADC或抗体分子是IgG抗体分子，例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子不是IgM抗体分子。在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含来自κ或λ轻链的轻链恒定区。
在一个实施方式中，抗体分子是单克隆抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子是人源化抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子是分离的抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子是合成抗体分子。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合不同属，种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如革兰氏阴性细菌)。
在一个实施方式中，所述一种或多种革兰氏阴性细菌选自肠杆菌科的物种(例如，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，志贺氏菌属，埃希氏菌属，沙门氏菌属，耶尔森氏菌属或柠檬酸杆菌属，例如泛抗性肠杆菌科的物种)，假单胞菌属的物种，不动杆菌属的物种，或其任何组合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合以下一种或多种：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniaesubsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphiB)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合耐药性铜绿假单胞菌菌株(例如，对本文所述的一种或多种抗生素具有耐药性)。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合突变的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)菌株。在一个实施方式中，铜绿假单胞菌菌株在wapQ基因中具有突变。在一个实施方式中，铜绿假单胞菌菌株在galU基因中具有突变。
在一个实施方式中，一种或多种细菌是一种或多种抗生素耐药性细菌，例如一种或多种多重耐药性革兰氏阴性细菌。
在一个实施方式中，一种或多种抗生素耐药性细菌选自假单胞菌(例如铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如肺炎克雷伯氏菌或大肠杆菌)或不动杆菌(例如鲍氏不动杆菌)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合以下一种或多种：屎肠球菌(Enterococcus faecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子与一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或更多)铜绿假单胞菌菌株结合。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合至少23种铜绿假单胞菌菌株。在另一个实施方式中，ADC或抗体分子与一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或更多)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子以高亲和力，例如，小于约10nM的KD结合LPS，例如，通过ELISA方法测量。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS的Koff慢于1×10-4、5×10-5、或1×10- 5s-1。在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS的Kon快于1×104、5×104、1×105或5×105M-1s-1。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子具有调理吞噬活性，例如通过OPA测定法测定，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子(例如，VSX-1)杀伤细菌在热灭活补体的存在下，例如，约10μg/ml(例如，5，5.5，6，6.5，7，7.5，8，8.5，9，9.5，10，10.5，11，11.5，12，12.5，13，13.5，14，14.5，或15μg/ml)，导致约1log降低(例如，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0，1.1，1.2，1.3，1.4，或1.5log降低)。在一个实施方式中，ADC或抗体分子杀伤细菌导致超过约3log(例如，2，2.5，3，3.5，4log)的伴随非热灭活补体的杀伤活性，在多形核中性粒细胞存在下。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子没有可检测的溶血活性。在一个实施方式中，ADC或抗体分子有最小的溶血活性。在一个实施方式中，抗体分子(例如，VSX-1)对于哺乳动物细胞(例如，293T细胞)没有可检测的细胞毒性活性。在一个实施方式中，抗体分子(例如，VSX-1)对于哺乳动物细胞(例如，293T细胞)有可忽略不计的细胞毒性活性。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子(例如，VSX-1)显示出与抗生素，例如抗假单胞菌抗生素的协同活性。在一个实施方式中，ADC或抗体分子和抗生素的组合的活性大于ADC或抗体分子，或单独抗生素的活性。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子结合LPS中包含一个或多个(例如，两个)Kdo残基和/或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基的表位。
在一个实施方式中，a)与脂多糖(LPS)结合的抗体分子与b)抗微生物肽偶合(例如，融合)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，重链可变区在抗微生物肽的N末端。在另一个实施方式中，重链可变区在抗微生物肽的C末端。在一个实施方式中，VH与抗微生物肽融合以形成融合多肽，例如由开放阅读框编码。
在一个实施方式中，重链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中重链可变区的C末端通过恒定区，接头或两者偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，轻链可变区在抗微生物肽的N末端。在另一个实施方式中，重链可变区在抗微生物肽的C末端。在一个实施方式中，VL与抗微生物肽融合以形成融合多肽，例如由开放阅读框编码。
在一个实施方式中，轻链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中轻链可变区的C末端通过恒定区，接头或两者偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子包含分选酶受体序列，其包含分选酶识别序列。例如，分选酶识别序列可以具有LPXTG的氨基酸序列(例如，对于金黄色葡萄球菌分选酶A)(SEQ ID NO：160)或LPXTA(例如，对于酿脓链球菌分选酶A)(SEQ ID NO：161)，其中X可以是任何氨基酸残基。在一个实施方式中，分选酶识别序列是LPETG(SEQ ID NO：162)。分选酶受体序列可以包含除分选酶识别序列之外的其他序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列还包含接头序列，例如甘氨酸-丝氨酸肽接头序列的串联重复序列(例如，(GS)15(SEQ IDNO：157))。在一个实施方式中，抗体分子的重链包含分选酶受体序列，例如在C末端。在一个实施方式中，抗体分子的轻链包含分选酶受体序列，例如在C末端。
在一个实施方式中，抗体分子的重链包含第一分选酶受体序列，抗体分子的轻链包含第二分选酶受体序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第一分选酶识别序列，包含(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列。在另一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第二分选酶受体序列，包含P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC包含接头序列，分选酶识别序列或两者，如图37中所述。在一个实施方式中，ADC包含两条重链和两条轻链。在一个实施方式中，ADC的每条重链包含接头序列，分选酶识别序列或两者，如图37中所述。在一个实施方式中，ADC的每条轻链包含接头序列，分选酶识别序列或两者，如图37中所述。
在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个)抗微生物肽。在一个实施方式中，ADC包含四个抗微生物肽。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是相同或基本相同的。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是不同的。例如，多个抗微生物肽可以与抗体分子(例如，重链(或其部分)，轻链(或其部分)或两者)偶合(例如，融合)。
在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，三个或四个)相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与重链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含两个或更多个(例如，三个或四个)相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与轻链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含两个相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与重链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含两个相同或基本相同的抗微生物肽，各自例如间接地，例如通过恒定区，接头或两者与轻链可变区偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，ADC包含至少四个相同或基本相同的抗微生物肽。在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含两个重链可变区和两个轻链可变区，并且重链和轻链可变区中的每一个与至少一个抗微生物肽例如间接地，例如，通过恒定区，接头或两者偶合(例如，融合)。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过酶促偶联(例如，分选酶反应)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗微生物肽通过化学偶联与抗体分子偶合。
在一个实施方式中，ADC比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地抑制，例如，抑制革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的生长，毒力或感染性，例如，具有比单独的抗微生物肽的MIC低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的最小抑制浓度(MIC)。
在一个实施方式中，ADC比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地降低(例如，杀灭)革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，例如，具有比单独的抗微生物肽的MIC低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的最小杀细菌浓度(MBC)。
在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬活性(例如，当与嗜中性粒细胞的Fc受体(FcR)结合时被吞噬)，例如，如通过OPA测定所确定的，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，ADC不抑制，例如，不抑制革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的生长，毒力或感染性，例如具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小抑制浓度(MIC)低，例如低至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MIC。
在一个实施方式中，ADC不降低(例如，杀灭)革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的活力，例如具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小杀细菌浓度(MBC)低，例如低至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MBC。在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
在一个实施方式中，ADC不改变或不显著改变微生物组(例如，微生物组保留)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由α-螺旋抗微生物肽组成，例如，包含转角的肽，其中残基i和i+4在同一平面上。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与本文所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-258中的任一个相差不超过1，2，3，4或5个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由本文所述的氨基酸序列组成，例如SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-258中的任一个。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含1，2，3，4，5，6，7，8，9，10个或更多个D-氨基酸。在另一个实施方式中，抗微生物肽的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是D-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含第一半胱氨酸残基和第二半胱氨酸残基，并且其中第一半胱氨酸残基与第二半胱氨酸残基交联。
在一个实施方式中，抗微生物肽是广谱抗微生物肽，例如，具有针对以下的2种，3种或全部的抗微生物活性：肠杆菌的至少一个种(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如泛耐药性肠杆菌的一个或多个种)，假单胞菌的至少一个种，或不动杆菌的至少一个种。
在一个实施方式中，抗微生物肽是广谱抗微生物肽，例如，具有针对以下的2种，3种，4种，5种，6种或全部的抗微生物活性：一种克雷伯氏菌的至少一个种，肠杆菌的至少一个种，志贺氏菌的至少一个种，埃希氏菌的至少一个种，沙门氏菌的至少一个种，耶尔森氏菌的至少一个种，或柠檬酸杆菌的至少一个种。
在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 25922)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)(例如，铜绿假单胞菌ATCC27853)或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小抑制浓度(MIC)。
在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 25922)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)(铜绿假单胞菌ATCC27853)或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小杀细菌浓度(MBC)。
在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4∶1(例如，大于8∶1，16∶1，24∶1或32：1)的部分溶解浓度(PLC)与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，PLC是导致50％红细胞裂解的浓度(例如，最小浓度)。
在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4∶1(例如，大于8∶1，16∶1，24∶1或32∶1)的部分裂解浓度(MLC)与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，MLC是导致100％红细胞裂解的浓度(例如，最小浓度)。
在一个方面，本公开特征之一在于一种组合物，例如药物组合物，其包含本文所述的ADC和药学上可接受的运载体。
在一个方面，本公开内容的特征在于一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括以有效治疗或预防本文所述的细菌感染或相关疾病的量向有需要的对象给予本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个实施方式中，细菌感染是革兰氏阴性细菌感染。在一个实施方式中，所述病症由革兰氏阴性细菌感染引起或与其相关。
在一个实施方式中，ADC以0.1-100mg/kg，例如0.1-50mg/kg或1-10mg/kg，例如1-5或5-10mg/kg的剂量给予。在一个实施方式中，ADC通过静脉内，皮下或鼻内或通过吸入给予。
在一个实施方式中，在与细菌感染或相关病症相关的症状发作之前给予ADC。在一个实施方式中，在与细菌感染或相关病症相关的症状发作时或之后给予ADC。
在一个实施方式中，对象患有以下的一种或多种：肺炎(例如，社区获得性肺炎，呼吸机相关细菌性肺炎(VABP)和医院获得性细菌性肺炎(HABP))，尿路感染(UTI)，败血症，脑膜炎，腹泻(如旅行者腹泻)，软组织感染，皮肤感染，菌血症，呼吸系统感染(如下呼吸道感染)，心内膜炎，腹腔感染，化脓性关节炎，骨髓炎，中枢神经系统感染，眼科感染，胆囊炎，胆管炎，脑膜炎(如新生儿脑膜炎)，伤寒，食物中毒，肠胃炎，肠热，志贺菌病，血流感染，腹腔内败血症，脑脓肿，脑膜炎，败血症(如，新生儿败血症)，关节感染，骨感染，胃肠道感染或伤口感染。在一个实施方式中，对象具有弱化的免疫系统。在一个实施方式中，对象患有囊性纤维化。在一个实施方式中，对象遭受灼伤。
在一个实施方式中，细菌感染是医院感染或医院获得性感染。在一个实施方式中，与细菌感染有关的病症与医院感染或医院获得性感染有关。
在一个实施方式中，对象是人或动物。在一个实施方式中，对象是免疫受损的患者，例如，具有HIV感染或AIDS，癌症，实体器官移植，干细胞移植，镰状细胞病或无脾，先天性免疫缺陷，慢性炎性病症，耳蜗植入，营养不良或脑脊液渗漏的对象。在一个实施方式中，对象是健康专业人员。
在一个实施方式中，对象为18岁或更小，例如15岁或更小，12岁或更小，9岁或更小，6岁或更小，或3岁或更小。在一个实施方式中，对象为至少60岁，例如，至少65岁，至少70岁，至少75岁，或至少80岁。
在一个实施方式中，该方法还包括向对象给予第二抗微生物剂或疗法，例如抗生素或噬菌体疗法。
在一个实施方式中，抗生素选自氨基糖苷(例如阿米卡星，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素，巴龙霉素，链霉素或壮观霉素)，安莎霉素(例如，格尔德霉素，除莠霉素或利福昔明)，碳头孢烯(例如劳拉卡头孢菌素)，碳青霉烯(例如厄他培南，多利培南，亚胺培南/西司他丁，或美罗培南)，头孢菌素(头孢羟氨苄，头孢唑啉，头孢噻吩，头孢噻吩，头孢氨苄，头孢克洛，头孢羟唑，头孢西丁，头孢丙烯，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢哌酮(例如，与舒巴坦联合使用)，头孢噻肟，头孢泊肟，头孢他啶，头孢布坦，头孢唑肟，头孢曲松，头孢吡肟，头孢洛林，或头孢托罗)，糖肽(例如，替考拉宁，万古霉素，特拉万星，达巴万星，或奥利万星)，林可酰胺(如克林霉素或林可霉素)，脂肽(如达托霉素)，大环内酯类(如阿奇霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，罗红霉素，竹桃霉素，泰利霉素或螺旋霉素)，单菌霉素(如氨曲南)，硝基呋喃(如呋喃唑酮或呋喃妥因)，噁唑烷酮(如利奈唑胺，泼斯唑来，雷得唑来，托拉唑来)，青霉素(如阿莫西林，氨苄青霉素，阿洛西林，羧苄青霉素，氯唑西林，双氯西林，氟氯西林，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，青霉素g，青霉素v，哌拉西林，青霉素g，替莫西林或替卡西林)，青霉素组合(如阿莫西林/克拉维酸，氨苄青霉素/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦，或替卡西林/克拉维酸盐)，多肽(例如杆菌肽，粘菌素或多粘菌素b)，喹诺酮/氟喹诺酮(例如环丙沙星，依诺沙星，加替沙星，吉米沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，莫西沙星，萘啶酸，诺氟沙星，氧氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，司帕沙星或替马沙星)，磺胺类(如磺胺米隆，磺胺醋酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺异噁唑，甲氧苄啶-磺胺甲基异噁唑(复方磺胺甲噁唑)，或偶氮磺胺)，四环素(如地美环素，强力霉素，米诺环素，土霉素或四环素)，抗分枝杆菌的药物(如氯法齐明，氨苯砜，卷曲霉素，环丝氨酸，乙胺丁醇，乙硫氨酰胺，异烟肼，吡嗪酰胺，利福平，利福布汀，利福喷汀或链霉素)，或其他(如阿司匹林，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，甲硝唑，莫匹罗星，安替霉素，奎奴普丁/达福普汀，甲砜霉素，替加环素，替硝唑，或甲氧苄啶)。
在一个实施方式中，抗生素选自左氧氟沙星，环丙沙星，庆大霉素，头孢曲松，氧氟沙星，阿米卡星，妥布霉素，氨曲南或亚胺培南/西司他丁。在另一个实施方式中，抗生素是粘菌素或美罗培南。
在一个实施方式中，第二抗微生物剂或疗法在给予ADC之前给予，与给予ADC同时给予，或在给予ADC之后给予。
当组合给予时，ADC，其他药剂(例如，第二或第三药剂)或全部可以以比单独使用，例如，作为单一疗法的每种药剂的量或剂量更高，更低或相同的量或剂量给予。在一个实施方式中，ADC，其他药剂(例如，第二或第三药剂)或全部的给予量或剂量比单独使用的每种药剂，例如作为单一疗法的量或剂量低(例如，至少20％，至少30％，至少40％，或至少50％)。在另一个实施方式中，导致期望效果(例如，抑制细菌生长或治疗细菌感染)的ADC，其他药剂(例如，第二或第三药剂)或全部的量或剂量较低(例如，低至少20％，至少30％，至少40％，或至少50％)。
在一个实施方式中，ADC和第二抗微生物剂或疗法的给予产生协同效应，例如，抑制(例如杀灭)本文所述的细菌，例如铜绿假单胞菌。例如，当ADC以其最小抑制浓度(MIC)的约50％使用时，第二抗微生物剂的MIC降低至少2，4，8，12，16，20，24，28，32，36，40，50，60，70，80，90或100倍。
在一个方面，本公开内容的特征在于抑制或减少细菌感染(例如，革兰氏阴性细菌感染)的方法，包括使细胞(例如，在样品中)或有此需要的对象接触有效抑制或减少细菌感染的量的本文所述的ADC，或本文所述的药物组合物。
在一个实施方式中，ADC在体外，离体或体内与细胞或对象接触。
一方面，本发明的特征在于本文所述的ADC，用于治疗或预防本文所述的细菌感染(例如，革兰氏阴性细菌感染)或相关病症。
另一方面，本发明的特征在于本文所述的ADC在制备用于治疗或预防本文所述的细菌感染(例如，革兰氏阴性细菌感染)或相关病症的药物中的用途。
在一个方面，本公开内容的特征在于试剂盒/药盒，其包含本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个实施方式中，试剂盒/药盒还包含使用ADC或药物组合物的说明书。
在一个方面，本公开内容的特征在于容器，其包含本文所述的ADC或本文所述的药物组合物。
在一个方面，本公开内容的特征在于编码本文所述的ADC，例如如本文所述，与抗微生物肽偶合(例如，融合)的本文所述的抗体分子的VH，VL或两者，或重链，轻链或两者的核酸分子(例如，分离的核酸分子)。
在一个实施方式中，核酸分子包含表2中所述的核苷酸序列，例如SEQ ID NO：81-93或113-114中的任一个。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种载体，其包含本文所述的核酸分子。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种细胞(例如分离的细胞)，其包含本文所述的核酸分子或本文所述的载体。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种产生本文所述的ADC的方法，所述方法包括在允许产生ADC的条件下培养本文所述的细胞，从而产生本文所述的ADC。
在另一个方面，本公开内容的特征在于一种产生本文所述的ADC的方法，该方法包括使抗体分子(例如，本文所述的抗体分子)与肽(例如，包含本文所述的抗微生物肽，和任选地，分选酶供体序列的肽)，在分选酶存在下，在允许分选酶介导的反应发生的条件下接触，从而产生ADC。
在一个实施方式中，抗体分子包含分选酶受体序列，例如本文所述的分选酶受体序列。在一个实施方式中，抗体分子的重链包含分选酶受体序列，例如在C末端。在一个实施方式中，抗体分子的轻链包含分选酶受体序列，例如在C末端。在一个实施方式中，分选酶受体序列还包含接头序列，例如甘氨酸-丝氨酸肽接头序列的串联重复序列。
在一个实施方式中，抗体分子的重链包含第一分选酶受体序列，抗体分子的轻链包含第二分选酶受体序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第一分选酶识别序列，包含(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列。在另一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第二分选酶受体序列，包含P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列。
在一个实施方式中，肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与本文所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-258中的任一个相差不超过1，2，3，4或5个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由本文所述的氨基酸序列组成，例如SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-258中的任一个。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，使1.5mg/mL抗体分子与20mol当量的分选酶供体肽/分选酶受体序列和1mol当量的分选酶/75mol当量分选酶受体序列接触。在一个实施方式中，接触在150mM NaCl，50mM Tris(pH 7.5)和10mM CaCl2存在下进行。在一个实施方式中，接触在18℃至37℃，例如25℃下进行，例如，进行2至48小时，例如18至24小时，例如20小时。在一个实施方式中，分选酶是分选酶A戊突变体(pentamutant)。
在一个实施方式中，进一步包括检测分选酶介导的反应，例如通过Q-TOF质谱法。在一个实施方式中，进一步包括纯化ADC，例如通过凝胶电泳进行。
在一个方面，本发明的特征在于反应混合物，其包含：
(i)分选酶，例如，本文所述的分选酶，和
(ii)本文所述的抗体分子，本文所述的抗微生物肽或两者。
一方面，本发明的特征在于本文所述的抗体分子。
在一个方面，本公开内容的特征在于编码本文所述抗体分子，例如VH，VL或两者；本文描述的抗体分子或重链，轻链或两者的核酸分子(例如，分离的核酸分子)。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种载体，其包含编码本文所述抗体分子的核酸分子。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种细胞(例如分离的细胞)，其包含编码本文所述的抗体分子的核酸分子或本文所述的载体。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种产生本文所述的抗体分子的方法，所述方法包括在允许产生抗体分子的条件下培养本文所述的细胞，从而产生本文所述的抗体分子。
一方面，本发明的特征在于本文所述的抗微生物肽(例如，分离的或合成的抗微生物肽)。
一方面，本发明的特征在于编码本文所述抗微生物肽的核酸分子(例如，分离的核酸分子)。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种载体，其包含编码本文所述抗微生物肽的核酸分子。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种细胞(例如分离的细胞)，其包含编码本文所述的抗微生物肽的核酸分子或本文所述的载体。
在一个方面中，本公开特征之一在于一种产生本文所述的抗微生物肽的方法，所述方法包括在允许产生抗微生物肽的条件下培养本文所述的细胞，从而产生本文所述的抗微生物肽。
在一个方面，本公开内容的特征在于一种抗体分子，其与本文所述的抗体分子结合相同的表位或基本上相同的表位。
在一个方面，本发明的特征在于ADC，其包含：a)抗体分子，其与本文所述的抗体分子结合相同表位或基本上相同表位；和b)抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽。
一方面，本发明的特征在于与本文所述抗体分子竞争结合的抗体分子。
在一个方面，本发明的特征在于ADC，其包含：a)抗体分子，其与本文所述的抗体分子竞争结合；和b)抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽。
列举的实施方式
1.一种抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗体分子和共价偶联的肽，
其中所述抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中VH包含：
(a)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3，或
(b)包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；和
其中所述抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中所述VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，并且其中所述VL包含：
(a)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3，或
(b)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3；和
其中肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：257的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。
2.如实施方式1所述的ADC，其中VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和其中VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
3.如实施方式1所述的ADC，其中VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和其中VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
4.如实施方式1-3中任一项所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：117的氨基酸序列有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性。
5.如实施方式1-4中任一项所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列。
6.如实施方式1-5中任一项所述的ADC，其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：135的氨基酸序列有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性。
7.如实施方式1-6中任一项所述的ADC，其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列。
8.如实施方式1-7中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌。
9.如实施方式1-8中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合铜绿假单胞菌。
10.如实施方式1-9中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌的脂多糖(LPS)。
11.如实施方式1-10中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌上的LPS上的内核聚糖部分。
12.如实施方式1-11中任一项所述的ADC，其中抗体分子不结合，或基本不结合大肠杆菌LPS，例如，由Western印迹所确定。
13.如实施方式1-12中任一项所述的ADC，其中抗体分子不结合，或基本不结合庚糖或单磷酸化的庚糖类似物(例如，2-P-Hep或4-P-Hep)，例如，通过生物层干涉分析所确定。
14.如实施方式1-13中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合二磷酸化的2，4-P-Hep单糖，例如，通过生物层干涉分析所确定。
15.如实施方式1-14中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合二磷酸化的甘露糖(2，4-P-Man)，例如，其结合相比二磷酸化的2，4-P-Hep单糖有所降低，例如，通过生物层干涉分析所确定。
16.如实施方式1-15中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合一个或多个本文所述的铜绿假单胞菌菌株，例如，对碳青霉烯类、抗假单胞菌第三代头孢菌素类或氟喹诺酮类有耐药性的一种或多种菌株，例如，具有约20至约150pM(例如，约50至约120pM)的表观亲合力，例如，通过全细菌细胞ELISA所确定。
17.如实施方式1-16中任一项所述的ADC，其中抗体分子不结合，或基本不结合以下的一种或多种：大肠杆菌、肺炎克雷铂菌、鼠伤寒沙门氏菌、革兰氏阳性生物体或哺乳动物细胞，例如，由全细胞ELISA所确定。
18.如实施方式1-17中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合除铜绿假单胞菌以外的假单胞菌物种，例如，荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)或施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)中的一个或多个，例如，如全细菌细胞ELISA所确定。
19.如实施方式1-18中任一项所述的ADC，其中抗体分子是单克隆抗体分子，人源化抗体分子、分离的抗体分子、或合成抗体分子。
20.如实施方式1-19中任一项所述的ADC，其中抗体分子包含两个VH和两个VL。
21.如实施方式1-20中任一项所述的ADC，其中抗体分子还包含IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的重链恒定区。
22.如实施方式1-21中任一项所述的ADC，其中抗体分子还包含κ或λ链的轻链恒定区。
23.如实施方式1-22中任一项所述的方法，其中抗体分子包含Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
24.如实施方式1-23中任一项所述的ADC，其中肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列。
25.如实施方式1-24中任一项所述的ADC，其中肽包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个D-氨基酸，或肽中氨基酸残基的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％是D-氨基酸。
26.如实施方式1-25中任一项所述的ADC，其中肽中的全部氨基酸残基是D-氨基酸。
27.如实施方式1-26中任一项所述的ADC，其中肽与VH，例如VH的C-端，例如间接(例如，通过恒定区，接头或两者)偶联。
28.如实施方式1-27中任一项所述的ADC，其中肽通过酶促连接，例如，使用分选酶A(SrtA)，例如，通过分选酶识别序列(例如，LPETGGG)与抗体分子偶联。
29.如实施方式1-28中任一项所述的ADC，其中肽包含分选酶供体系列，例如，N-末端GGG。
30.如实施方式1-29中任一项所述的ADC，其中所述ADC在抗体分子和肽之间包含接头，例如，(Gly-Ser)n接头序列，其中n＝2至20。
31.如实施方式1-30中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有约2至约8，例如，约2至约4的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定。
32.如实施方式1-31中任一项所述的ADC，其中ADC具有约2的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定。
33.如实施方式1-32中任一项所述的ADC，其中所述ADC在约2μg/mL至约50μg/mL，例如，约3.1μg/mL至约25μg/mL的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。
34.如实施方式1-33中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有与参比ADC(例如VSX-1)相比时与其相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。
35.如实施方式1-34中任一项所述的ADC，其中对于铜绿假单胞菌，ADC具有约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的平均裂解浓度(MLC)。
36.如实施方式1-35中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有与参比ADC(例如VSX-1)相比时与其相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的MLC。
37.如实施方式1-36中任一项所述的ADC，其中对于铜绿假单胞菌，ADC具有约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的CC50(观察到哺乳动物细胞50％细胞毒性的浓度)。
38.如实施方式1-37中任一项所述的ADC，其中对于铜绿假单胞菌，ADC具有比参比ADC，例如，VSX-1高，例如高至少0.5、1、2、3、4或5倍的CC50。
39.如实施方式1-38中任一项所述的ADC，其中与参比ADC，例如VSX-1相比，ADC具有改善的生物分布，例如，通过药代动力学测量，全体成像，体内成像，器官分布评估(例如，ADC不基本上或主要分布到肝脏)，ELISA和/或血样质谱。
40.一种ADC，其包含抗体分子，其包含两个VH和两个VL，
其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；和
其中VH包含：包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；和
其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。
41.一种ADC，其包含抗体分子，其包含两个VH和两个VL，
其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；和
其中VH包含：包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；和
其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。
42.如实施方式40或41所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列；并且其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列。
43.如实施方式40-42中任一项所述的ADC，其中肽通过(Gly-Ser)n接头与VH的C-末端偶联。
44.一种药物组合物，包括如实施方式1-40中任一项所述的ADC；和药学上可接受的运载体。
45.如实施方式1-43中任一项所述的ADC，或如实施方式44所述的药物组合物，用于治疗或预防对象中与假单胞菌相关的细菌感染的方法。
46.如实施方式45所述使用的ADC或组合物，其中细菌感染与铜绿假单胞菌相关。
47.如实施方式45或46所述使用的ADC或组合物，其中ADC以1-10mg/kg的剂量给予。
48.如实施方式45-47中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述ADC静脉内、皮下、鼻内或通过吸入给予。
49.如实施方式45-48中任一项所述使用的ADC或组合物，其中在与细菌感染相关的症状发作之前或之后给予ADC。
50.如实施方式45-49中任一项所述使用的ADC或组合物，其中对象具有以下一种或多种：肺炎、尿路感染(UTI)、败血症、脑膜炎、腹泻、软组织感染、皮肤感染、菌血症、呼吸系统感染、心内膜炎、腹腔内感染、脓毒性关节炎、骨髓炎、中枢神经系统感染、眼部感染、胆囊炎、胆管炎、脑膜炎、伤寒、食物中毒、肠胃炎、肠热病、志贺氏菌病、血流感染、腹腔内败血症、脑脓肿、脑膜炎、败血症、关节感染、骨骼感染、肠胃感染或伤口感染。
51.如实施方式45-50中任一项所述使用的ADC或组合物，其中细菌感染是医院感染或医院获得性感染。
52.如实施方式45-51中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象是人或动物。
53.如实施方式45-52中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象是免疫功能低下的患者或健康专业人员。
54.如实施方式45-53中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象患有，或有患有以下的风险：HIV感染或AIDS，癌症，实体器官移植，干细胞移植，镰状细胞病或无脾，先天性免疫缺陷，慢性炎性病症，耳蜗植入，营养不良或脑脊液渗漏。
55.如实施方式45-54中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象为18岁或更小，15岁或更小，12岁或更小，9岁或更小，或6岁或更小，或者为至少60岁，至少65岁，至少70岁，至少75岁，或至少80岁。
56.如实施方式45-55中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述方法还包括向所述对象给予第二抗微生物剂或疗法。
57.如实施方式56所述使用的ADC或组合物，其中所述第二抗微生物剂或疗法包括抗生素或噬菌体疗法。
58.如实施方式57所述使用的ADC或组合物，其中抗生素是多粘菌素(例如，粘菌素)或β-内酰胺(例如，碳青霉烯，例如，美罗培南)。
59.如实施方式57所述使用的ADC或组合物，其中抗生素选自氨基糖苷、安莎霉素、碳头孢烯、碳青霉烯、头孢菌素、糖肽、林可酰胺、脂肽、大环内酯、单菌霉素、硝基呋喃、噁唑烷酮、青霉素、青霉素组合、多肽、喹诺酮或氟喹诺酮、磺胺、四环素或抗分枝杆菌药物。
60.如实施方式58或59所述使用的ADC或组合物，其中抗生素选自阿米卡星，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素，巴龙霉素，链霉素，壮观霉素，格尔德霉素，除莠霉素或利福昔明，劳拉卡头孢菌素，厄他培南，多利培南，亚胺培南/西司他丁，美罗培南，头孢羟氨苄，头孢唑啉，头孢噻吩，头孢噻吩，头孢氨苄，头孢克洛，头孢羟唑，头孢西丁，头孢丙烯，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢哌酮，头孢噻肟，头孢泊肟，头孢他啶，头孢布坦，头孢唑肟，头孢曲松，头孢吡肟，头孢洛林，头孢托罗，替考拉宁，万古霉素，特拉万星，达巴万星，奥利万星，克林霉素，林可霉素，达托霉素，阿奇霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，罗红霉素，竹桃霉素，泰利霉素，螺旋霉素，氨曲南，呋喃唑酮，呋喃妥因，利奈唑胺，泼斯唑来，雷得唑来，托拉唑来，阿莫西林，氨苄青霉素，阿洛西林，羧苄青霉素，氯唑西林，双氯西林，氟氯西林，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，青霉素g，青霉素v，哌拉西林，青霉素g，替莫西林或替卡西林，阿莫西林/克拉维酸，氨苄青霉素/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦，替卡西林/克拉维酸盐，杆菌肽，粘菌素，多粘菌素b，环丙沙星，依诺沙星，加替沙星，吉米沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，莫西沙星，萘啶酸，诺氟沙星，氧氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，司帕沙星，替马沙星，磺胺米隆，磺胺醋酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺异噁唑，甲氧苄啶-磺胺甲基异噁唑(复方磺胺甲噁唑)，偶氮磺胺，地美环素，强力霉素，米诺环素，土霉素，四环素，氯法齐明，氨苯砜，卷曲霉素，环丝氨酸，乙胺丁醇，乙硫氨酰胺，异烟肼，吡嗪酰胺，利福平，利福布汀，利福喷汀，链霉素，阿司匹林，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，甲硝唑，莫匹罗星，安替霉素，奎奴普丁/达福普汀，甲砜霉素，替加环素，替硝唑，或甲氧苄啶。
61.如实施方式58-60中任一项所述使用的ADC或组合物，其中抗生素选自左氧氟沙星，环丙沙星，庆大霉素，头孢曲松，氧氟沙星，阿米卡星，妥布霉素，氨曲南或亚胺培南/西司他丁。
62.如实施方式56-61中任一项所述使用的ADC或组合物，其中第二抗微生物剂或疗法在给予ADC之前给予，与给予ADC同时给予，或在给予ADC之后给予。
63.一种抑制或降低细菌感染的方法，所述方法包括用有效抑制或降低细菌感染的量的如实施方式1-43中任一项所述的ADC，或如实施方式44所述的药物组合物接触细胞。
64.如实施方式62所述的方法，其中ADC或药物组合物在体外，离体或体内与细胞接触。
65.一种试剂盒，其包括：如实施方式1-43中任一项所述的ADC或如实施方式44所述的药物组合物；和使用ADC或药物组合物的说明书。
66.一种容器，其包含如实施方式1-43中任一项所述的ADC或如实施方式44所述的药物组合物。
67.一种核酸分子，其编码：
(a)如实施方式1-43中任一项所述的ADC的抗体分子的VH，VL或两者；
(b)如实施方式1-43中任一项所述的ADC的抗微生物肽；
(c)(a)和(b)两者；或
(d)如实施方式1-43中任一项所述的ADC。
68.一种载体，其包含如实施方式67所述的核酸分子。
69.一种细胞，其包含如权利要求67所述的核酸分子或如权利要求68所述的载体。
70.一种产生ADC的方法，所述方法包括在允许产生ADC的条件下培养如实施方式69所述的细胞，从而产生ADC。
71.一种产生ADC的方法，所述方法包括将结合LPS的抗体分子与包含抗微生物肽的肽，和任选地分选酶供体序列接触，所述接触在分选酶存在下，在允许分选酶介导的反应发生的条件下进行，从而产生ADC。
72.如实施方式71所述的方法，其中抗体分子包含分选酶受体序列，其包含分选酶识别序列，接头序列或两者。
73.一种治疗或预防细菌感染的方法，其包括以有效治疗或预防细菌感染的量向有需要的对象给予如实施方式1-43中任一项所述的ADC或如实施方式44所述的药物组合物。
74.如实施方式1-43中任一项所述的ADC在制备用于治疗或预防细菌感染的药物中的用途。
本公开包涵任何一个或多个前述方面和/或实施方式的所有组合，以及与详细描述和实施例中所提供的任何一个或多个实施方式的组合。
通过说明书和附图以及权利要求书不难了解本文组合物和方法的其它特征、目的和优点。
在此提供附图和表格。
附图简要说明
专利或申请文件含有至少一幅彩色绘图。在专利局请求并支付必要的费用后，将提供带彩色附图的本专利或专利申请出版物副本。
图1A显示了示例性VSX抗体的VH、VL、框架、互补决定区(CDR)氨基酸序列(例如，如表3所示)。图1A按出现的顺序分别公开了SEQ ID NO 264-265，266和266。
图1B通过Western印迹显示了VSX抗体与分离的LPS的结合。A，上图：来自大肠杆菌(泳道1)和铜绿假单胞菌(泳道2-4)的分离的LPS的银染SDS-Page分析，泳道5-参见蓝色；和来自Sigma的Pae LPS(泳道6)。下图：VSX与LPS的结合的Western印迹分析检测到没有与大肠杆菌的结合，但确实检测到与Pae LPS的结合(泳道2-4，6)；泳道5-魔术标记。
图2显示了与合成单糖的VSX结合的生物层干涉分析。
图3A显示了VSX抗体与多个铜绿假单胞菌菌株的全细胞ELISA结合(如所示)。VSX抗体显示与多个铜绿假单胞菌菌株的强结合，和与牛血清白蛋白BSA的最小结合。
图3B显示了VSX抗体与铜绿假单胞菌菌株ATCC 27853的强结合和与大肠杆菌(深蓝)，肺炎克雷伯菌(绿色)，鼠伤寒沙门氏菌(浅蓝)，哺乳动物细胞或BSA(红色)的弱结合。
图3C显示了使用全细胞ELISA在来自各种感染地点的临床分离株的超过100种铜绿假单胞菌中VSX结合的半定量分析。结合相对于Pae ATCC27853。
图4A显示了以100：1摩尔比的2，4-P-Hep和VSX Fab，0.15M NaCl的STD NMR谱图(A，顶部)。VSX结合显示为仅结合二磷酸化的庚糖(2，4-P-Hep)。
图4B显示了2，4-P-Hep的1H NMR谱图(A，底部)，(B)2，4-P-Hep滴定的31P NMR，在VSX Fab存在下。
图5A显示了2，4-Hep-VSX复合物的两个对接取向的6和34ns的分子动态(MD)模拟简要说明。左和右取向朝向单糖，甲基-羟基基团在C6位置，并且其4-磷酸基团朝向VSX受体结合位点。
图5B显示了在两种不同取向下与VSX的结合状态中Hep残基的均方根波动(RMSF)。
图6A显示了单糖VSX-接触和非接触残基的突变和它们对VSX与2，4-P-Hep结合的影响。
图6B显示了VSX(深色)或对照抗体(浅色)对LPS的结合。
图6C显示了VSX结合抑制LPS-介导的(Toll-样受体4)TLR4激活。菱形＝VSX；正方形＝阴性对照抗体。
图6D显示了TLR4受体-MD-2-LPS复合物的结构模型。
图7A显示了鉴定抗微生物肽(AMP)的工作流。
图7B显示了使用铜绿假单胞菌ATCC 27853的时间杀伤试验中的快速P297杀菌活性。
图7C显示了使用代表模型细菌膜的DOPE/DOPG脂质体的钙黄绿素泄漏测量。P297的作用机制可能涉及膜破坏。
图7D显示了在增加疏水性的缓冲液中P297的圆二色性谱。结果显示增加的α-螺旋特征与疏水性。
图8显示了在人血清存在下，(D)-P297比(L)-P297更稳定。左图：在t＝0(顶部)和60分钟后在10％人血清(NHS)中P297的代表性总离子色谱图。通过对(L)-或(D)-P297的萃取离子流进行积分来定量剩余的完整肽。右图：在10％人血清(NHS)存在下P297变体降解的60分钟时程。数值标准化至起始时间＝0分钟样品，其已经在血清中孵育。Y-轴是在t1完整的测量量比t0的完整肽的比率。
图9A显示了使用分选酶连接的抗体-AMP偶联物的合成。图9A公开了“_(GS)15LPETGGSG”为SEQ ID NO：267和“_(GS)15LPETGGG-AMP”为SEQ ID NO：268。
图9B显示了VSX转化为DAR2和4的分析。起始物质的重链和分选酶连接的D-P297产物对分选酶受体在重链和轻链上(两个顶图)，和对分选酶受体在仅重链上(两个底图)的Q-tof分析。假设对起始物质和产物的无偏检测，88.7％的“DAR4”材料的重链连接至D-P297。
图9C显示了起始材料向所需的D-P297 ADC产物的稳健转化的考马斯凝胶分析。泳道1和2分别是D-P297与重链和轻链连接的起始物质和产物。泳道3和4分别是D-P297仅与重链连接的起始物质和产物(抗体起始物质中的轻链是缺少分选酶受体识别序列的野生型)。基于该分析，估计在重链和轻链具有分选酶受体的物质的药物-抗体比率(DAR)为3.6，并且对于仅在重链上有受体的物质为1.8。
图9D显示了VSX(红线)和VSX偶联物(蓝线)的尺寸排阻色谱。
图10显示了VSX偶联物对两种铜绿假单胞菌菌株(Pae 27853和Pae39324)中每种的VSX偶联物的体外杀伤活性。
图11显示了P297单独(左图)，VSX单独(中图)，和VSX-1(右图)对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌的混合微生物杀伤。
图12显示了VSX-1的体外杀菌活性、溶血活性、细胞毒性和调理素活性。
图13A-13C显示了铜绿假单胞菌肺感染的体内模型中偶联物的评估。(A)中性粒细胞缺乏的动物共给予VSX-1和细菌(ATCC 27853)。在8小时，测量肺部的CFU负荷。(B)在感染后1小时用VSX-1治疗中性粒细胞缺乏的动物。在8小时，测量肺部的CFU负荷。(C)铜绿假单胞菌PA14(2x106/动物)的急性肺部感染模型，C57/B16，10动物/组，鼻内接种，感染4小时后腹膜内给药。
图14A显示了VSX-297生物分布的体内成像。
图14B显示了注射后1、24和72小时的VSX-297(实心灰色条)和297的DAR2构建体(HC和LC链构建体，分别是带阴影和带斑点的条)的血清水平分析。
图15显示了给予VSX-2或VSX-1的小鼠中的血液水平。对于该实验，小鼠注射VSX-1或VSX-2并且在注射后1、24或72小时抽取血样。通过质谱或ELISA评估偶联物水平。
图16显示了铜绿假单胞菌PA14(2x106/动物)的VSX-2急性肺部感染模型，C57/B16，25动物/组，鼻内接种，感染4小时后腹膜内给药。
图17A-17C显示了铜绿假单胞菌细胞对VSX(A)，抗藻酸盐抗体(B)和同种型对照抗体(C)的电子显微镜图。
图18A-18C庚糖衍生物的质子和HSQC谱图。(A)庚糖衍生物，(B)4-P-庚糖衍生物，和(C)2，4-P-庚糖衍生物，的质子(橙色)和HSQC谱图(蓝色)，带信号赋值。
图19显示了合成庚糖衍生物和VSX Fab的1H STD NMR谱图。
图20显示了2，4-P-庚糖衍生物的1H-31P HMBC NMR谱图。显示了质子和磷信号之间的长程相关。
具体实施方式
本文公开了抗体分子-药物偶联物(ADC)，如抗体分子-肽偶联物，其靶向假单胞菌，例如，假单胞菌上的脂多糖(LPS)。
本文公开的内容至少部分包括开发和表征一种新策略以治疗细菌感染，甚至是由MDR或泛抗性菌株导致的那些，结合单克隆抗体的独特特异性(后文称为VSX)和抗微生物肽(AMP)的直接作用抗菌活性。该方法结合了强抗微生物活性与抗体的靶向能力。为了例示该方法，我们聚焦于铜绿假单胞菌。
不希望受到理论限制，据信在一个实施方式中，本文所述的VSX构建体通过抗体的Fc结构域起到直接杀菌活性和效应功能的作用。这种构建体显示体外和体内的强且具有选择性的活性，证明特异性杀伤活性，对哺乳动物细胞几乎没有至没有非特异性细胞毒性。另外，VSX构建体在外膜表面采用直接作用效应，这不需要ADC的内化，从而规避对必须穿过革兰氏阴性病原体的双膜的试剂的需求。本文的公开内容证明VSX构建体向控制例如铜绿假单胞菌感染，促进抗生素管理和赦免微生物提供了治疗可选择性。
本文公开的内容至少部分基于对靶向铜绿假单胞菌表面上的保守聚糖结构的抗体的表征。抗体被工程改造成ADC形式以具有直接杀菌活性。值得注意的是，与其中活性需要荷载物的内化和释放的已经针对肿瘤学指征或甚至针对革兰氏阳性生物体构建的ADC不同，公开了仅在外膜表面作用的ADC的构建。
不希望受理论束缚，认为在一个实施方式中，在细菌外膜表面上的LPS核聚糖的拷贝数和位置使其在膜破坏性ADC方法中使用时理想的。虽然建立了在外膜表面上LPS的高密度，在所有铜绿假单胞菌菌株中共同的核心表位的保守性不太被接受。通过对VSX抗体的工程改造和VSX和LPS内核的合成庚糖模拟物之间的进一步结合研究，本文所述的研究证明铜绿假单胞菌的核聚糖可及，并且抗体可结合单一的二磷酸化庚糖单体。
不希望受到理论限制，据信在一个实施方式中，除了其在铜绿假单胞菌菌株间的高度保守性以外，与核心LPS聚糖相关的功能活性使其成为抗体靶标的有吸引力的特征。铜绿假单胞菌LPS的外核区域可以发挥用于生物体结合和进入宿主细胞的细菌配体的作用，如在角膜炎感染阶段期间的角膜细胞。外核的末端D-Glc部分可以在LPS与小鼠角膜表皮细胞的结合中是关键的。此外，在囊性纤维化中，囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)作为铜绿假单胞菌与宿主上皮表面结合的受体的作用受到核心聚糖-CFTR相互作用的介导。因此，LPS介导宿主上皮细胞对铜绿假单胞菌的摄取，在发病机制中起到重要作用，并且是重要的毒力因子。
具有次优形式的LPS-介导的抗体，例如，IgM，其具有低亲和性，并且靶向疏水性脂质A结构域，导致显著的非特异性交叉反应性和完整细菌可及性的问题，可能无法证明临床益处。VSX靶向亲水性内核聚糖，并且证明没有可检测的非特异性结合。另外，VSX构建体具有直接杀菌活性，并且证明内毒素中和性质。
不希望受到理论限制，据信在一个实施方式中，通过将两个优化的组分，广谱抗体和优化的抗微生物肽组合在一起，本文公开的所得ADC具有优于亲本组分的治疗性质。本文公开内容证明工程改造的VSX抗体靶向铜绿假单胞菌表面上的保守聚糖表位，并且抗微生物肽(例如，D369)在连接到抗体时有功能性并且安全。所得ADC对多种铜绿假单胞菌显示出明显的体外活性，并且在侵袭性肺部感染模型中已经证明体内功效。本文的数据和方法提供了开发抗微生物剂来对抗革兰氏阴性细菌的所需ADC策略，例如，以改善在小分子和生物药中现有和持续的努力。
在一个实施方式中，本文所述的ADC能够以高亲和力和特异性结合细菌，例如，革兰氏阴性菌，例如，革兰氏阴性菌(例如，假单胞菌，例如，铜绿假单胞菌)的外膜上的脂多糖。在一个实施方式中，本文所述的ADC能够结合革兰氏阴性菌(例如，假单胞菌，例如，铜绿假单胞菌)的外膜。本文公开的ADC可包括抗体分子和抗微生物肽(AMP)。有利地，与单独的抗微生物肽相比，本文描述的几种ADC具有改善的抑制或降低不同属，种和/或亚种的一种或多种细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的活力的能力。还提供了编码抗体分子，ADC和抗微生物肽的核酸分子，表达载体，宿主细胞，组合物(例如药物组合物)，试剂盒/药盒，和制备抗体分子，ADC和抗微生物肽的方法。本文公开的抗体分子，ADC，抗微生物肽和药物组合物可以(单独或与其他药剂或治疗方式组合)用于治疗，预防和/或诊断例如由革兰氏阴性细菌引起的或与之相关的细菌感染或相关疾病和病症。
在一个实施方式中，本文描述的ADC可以具有一种或多种以下性质：(i)能够治疗或预防有未满足的医疗需求的患者中的细菌性疾病；(ii)能够处理引起细菌疾病的细菌属和种；通过新作用机制起作用；(iii)具有减少或中和耐药性机制的增加的抑制剂；或(iv)具有减少或中和耐药性机制的分子结构的改变。
在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬活性(例如，通过抗体分子)，杀细菌活性(例如，通过荷载物，例如抗微生物肽)或两者。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，在ADC中使用抗微生物肽可以实现以下一个或多个目标：具有低耐药性，协同效力和较低自发耐药性概率的新靶标，改善定向治疗或快速杀细菌活性。在一个实施方式中，ADC靶向核心LPS区域，例如，以降低由潜在的靶位点改变引起的耐药性的可能性。在另一个实施方式中，肽装订用于增加活性和/或稳定性，例如，以减少或防止潜在的抗生素失活。
定义
本文使用冠词“一个”和“一种”表示一个/种或一个/种以上的(即至少一个/种)该冠词语法上的宾语。
除非上下文明确作出不同指示，本文所用术语“或/或者”是指“和/或”，并可与其互换使用。
“约”和“近似”应通常表示在考虑测量的性质或精度的情况下测得量的可接受的误差度。示例性误差程度在给定值范围或值的20％内，通常在10％内，更通常在5％内。
本文所述的组合物和方法包括具有指定序列的多肽和核酸，或具有与指定序列基本相同或与其相似(例如与指定序列至少85％、90％、95％或更高相同性)的序列的多肽和核酸。
在描述氨基酸序列的情况下，用于本文的术语“基本相同”是指第一氨基酸含有足够或最少数量的如下氨基酸残基：i)与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基相同，或ii)第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基的保守取代，从而第一和第二氨基酸序列可具有共有的结构域和/或共同的功能活性。例如，包含与参比序列(例如本文所提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的共有结构域的氨基酸序列。
在描述核苷酸序列的情况下，本文所用术语“基本相同”是指第一核酸序列包含足够或最少数量的与第二核酸序列中的比对核苷酸相同的核苷酸，从而第一和第二核苷酸序列编码具有相同功能活性的多肽、或编码相同结构多肽结构域或相同功能性多肽活性。例如，包含与参比序列(例如本文所提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的核苷酸序列。
术语“功能性变体”是指与天然序列具有基本相同氨基酸序列或由基本相同的核苷酸序列编码、且能够具有天然序列一种或多种活性的多肽。
在一个实施方式中，“同源性”与“相同性”可互换使用。
序列间的同源性或序列相同性(这些术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
为了确定两条氨基酸序列或两条核酸序列的百分比相同性，可以为了最佳比较目的而对序列进行比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列的之一或两条中引入缺口以达到最佳对齐，并且出于比较目的可以不考虑非同源序列)。在一个典型的实施方式中，用于比较目的比对的参比序列长度为该参比序列长度的至少30％，例如至少40％、50％、60％，例如至少70％、80％、90％、100％。然后比较对应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中某位置上占据的氨基酸残基或核苷酸与第二序列中相应位置上的相同时，则这些分子在该位置是相同的。
考虑到用于两个序列的最佳比对而需要引入的缺口数和每个缺口的长度，两条序列之间的百分比相同性与序列共有相同位置的数目相关。
序列的比较和两个序列之间百分比同一性的确定可以使用数学算法来完成。在一个实施方式中，两条氨基酸序列之间的百分比相同性可以使用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48)：444-453(1970))算法确定，该算法已经结合到GCG软件包中的GAP程序中，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，缺口权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。在一个实施方式中，两条核苷酸序列之间的相同性百分比使用GCG软件包中的GAP程序，采用NWSgapdna.CMP矩阵和缺口权重40、50、60、70或80，长度权重1、2、3、4、5或6进行计算。一组合适的参数(以及除非另有说明而应采用的参数组)为Blossum 62评分矩阵，其缺口罚分为12，缺口延伸罚分为4，译码缺口罚分为5。
两条氨基酸或核苷酸序列之间的相同性百分比也可以使用E.Meyers和W.Miller(CABIOS，4：11-17(1989))的算法确定，该算法已被并入ALIGN程序(版本2.0)，使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分为12，缺口罚分为4。
本文公开的核酸和蛋白质序列还可以用作“查询序列”来对公共数据库进行搜索，以例如鉴定其他家族组成部分或相关序列。这类搜索可使用Altschul等，1990，J.Mol.Biol.，215：403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版本)来运行。可以使用NBLAST程序进行BLAST核苷酸搜索，评分＝100，字长＝12，以获得与本文所述核酸同源的核苷酸序列。可利用XBLAST程序进行BLAST蛋白质搜索，评分＝50，字长＝3，以获得与本文所述蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得出于比较目的的缺口比对结果，可如Altschul等，1997，Nucleic Acids Res.，25：3389-3402所述利用缺口BLAST。利用BLAST和缺口BLAST程序时，可使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。
如本文所用，术语“在低严格、中等严格、高严格或极高严格条件下杂交”是指杂交和洗涤的条件。进行杂交反应的指导可见于Current Protocols in Molecular Biology(《新编分子生物学实验指南》，约翰威利父子出版公司(John Wiley&Sons)，纽约州(1989)，6.3.1-6.3.6)，纳入本文作为参考。该参考文献中描述了水性和非水性方法，可采用这两种方法中的任一种。本文涉及的特定杂交条件如下：1)低严格杂交条件，在约45℃的6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中，然后在0.2X SSC、0.1％SDS中至少50℃下进行两次洗涤(洗涤温度可提高至55℃适用于低严格条件)；2)中等严格杂交条件，在约45℃左右的6X-SSC中，然后在0.2X SSC、0.1％SDS(60℃)中进行一次或多次洗涤；3)高严格杂交条件，在约45℃左右的6X-SSC中，然后在0.2X SSC、0.1％SDS(65℃)中进行一次或多次洗涤，和优选4)极高严格杂交条件是0.5M磷酸钠，7％SDS，65℃，然后在0.2X SSC、1％SDS(65℃)中进行一次或多次洗涤。极高严格条件4)是合适的条件，且为应采用的条件(除非另有说明)。
应理解，本文所述分子可具有其它保守或非必需的氨基酸取代，其不对分子功能产生实质性影响。
术语“氨基酸”涵盖了包含氨基官能团和酸官能团且能够被包含于天然存在氨基酸形成的聚合物的所有分子，不论其为天然或合成分子。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物及同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；以及前述中任意的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-和L-镜像异构体和模拟肽。
“保守性氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被具有相似侧链的另一个氨基酸残基替代的情况。本领域已定义具有带相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括：具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(若为单链)在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性或支化聚合物，可以包含经修饰的氨基酸，并且可间插有非氨基酸。该术语也包括修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，如与标记组分偶联。多肽可从天然来源分离，可采用重组技术由原核或真核宿主产生，或者可为合成方法的产品。
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”在本文中可互换使用。它们指任何长度的核苷酸聚合形式，不论是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或它们的类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果是单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插有非核苷酸组分。多核苷酸聚合后可被进一步修饰，如通过与标记性组分偶联。核酸可为重组多核苷酸、或基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，即非天然存在或以非天然排列方式与另一多核苷酸相联。
本文所用术语“分离的”指，某一物质是从其原生或天然环境(例如，若其是天然产生的，则从天然环境)脱离。例如，活体动物中存在的天然多核苷酸或多肽不是分离的，但与天然系统中的某些或所有共存物质分离的该多核苷酸或多肽则是分离的。此类多核苷酸可为载体的部分和/或此类多核苷酸或多肽可为组合物的部分，但其仍为分离的，这是因为该载体或组合物不是该多核苷酸或多肽天然存在环境的一部分。
如本文所用，术语“治疗”例如本文所述的“治疗”细菌感染或相关病症是指实施方式之一中，与未被给予抗体分子，ADC或抗微生物肽相比，被给予该抗体分子，ADC或抗微生物肽的患有细菌感染或相关病症(例如本文所述的病症)和/或经受细菌感染或相关病症(例如本文所述的病症)症状的对象(例如人)其症状严重度较轻和/或恢复更快。在一个实施方式中，当治疗感染或相关病症时，检测对象中细菌的测定将在有效治疗感染或病症后检测到更少的细菌。例如，使用抗体分子或ADC(例如本文所述的抗体分子或ADC)的诊断测定将在给予抗体分子，ADC或抗微生物肽以有效治疗感染或疾病后在对象的生物样品中检测到较少或没有细菌。其他测定，例如PCR(例如，qPCR)也可用于监测患者的治疗，以检测对象中细菌感染或病症的治疗后存在，例如减少的存在(或不存在)。治疗可为例如部分或完全减轻、改善、缓解、抑制或降低特定感染，疾病，病症和/或紊乱(例如，细菌感染)的严重性和/或减少发病率，以及可任选地延迟特定感染，疾病，病症和/或紊乱(例如，细菌感染)的一种或多种后果或症状、特征和/或病因的显现或发作。在一个实施方式中，治疗针对没有显示出相关感染，疾病、病症和/或紊乱的迹象的对象和/或仅显示该感染，疾病、病症和/或紊乱的早期迹象的对象。在一个实施方式中，治疗针对表现出相关感染，疾病，病症和/或病症的一种或多种确定体征的对象。在一个实施方式中，治疗针对被诊断患有细菌感染或相关病症的对象。
如本文所用，术语“预防”，例如细菌感染，意指如果对象(例如，人)在暴露于引起感染的细菌之前(例如，1天，2天，1周，2周，3周或1个月或更多)接受抗体分子，ADC或抗微生物肽，则对象不太可能患上细菌感染。
如本文所用，术语“最小抑制浓度”或“MIC”是指抗微生物剂，例如抗体分子，ADC或抗微生物肽，例如，在孵育(例如，过夜孵育)之后抑制细菌的生长(例如，可见生长)的最低浓度。确定最小抑制浓度或MIC的方法描述于例如Andrews，J.Antimicrob.Chemother.2001；48增刊1：5-16(勘误于J.Antimicrob.Chemother.2002；49(6)：1049)。例如，MIC可以通过使用以下程序来确定：抗生素储备溶液的制备，抗生素稀释范围的制备，琼脂稀释板的制备，接种物的制备，接种，孵育以及阅读和解释结果。MIC也可以通过琼脂稀释或肉汤微量稀释来确定，通常遵循参考机构，例如临床和实验室标准协会(CLSI)，英国抗菌化疗协会(BSAC)或欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST)的指导。在一个实施方式中，MIC是抑制细菌生长至少60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％或95％的抗微生物剂(例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽)的最低浓度。在一个实施方式中，MIC是抑制细菌生长至少80％的抗微生物剂(例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽)的最低浓度。用于确定MIC的示例性方法也描述于实施例5中。
如本文所用，术语“最小杀细菌浓度”或“MBC”是指杀灭特定细菌所需的抗微生物剂(例如抗体分子，ADC或抗微生物肽)的最低浓度。在一个实施方式中，通过传代培养至不含测试剂的琼脂平板，可以从肉汤稀释最小抑制浓度(MIC)测试中确定最小杀细菌浓度或MBC。在一个实施方式中，通过确定降低初始细菌接种物活力≥99.9％的最低抗微生物剂浓度来鉴定MBC。在一个实施方式中，如果MBC不超过MIC的四倍，则抗微生物剂通常被认为是杀细菌的(French，J Antimicrob Chemother.2006；58(6)：1107-1117)。
下文中进一步详细描述了本文所述组合物和方法的各个方面。在整个说明书中提供了其他定义。
脂多糖
本文公开了抗体分子和抗体分子-药物偶联物(ADC)，其可结合脂多糖(LPS)，例如在革兰氏阴性细菌的外膜上的。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合LPS的核心戊糖区。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，核心LPS区域至少部分地被靶向，因为其具有以下一种或多种性质：高密度，在物种内保守，可及或粘附必需(Raetz和WhitfieldAnnu.Rev.Biochem.2002；71：635-700；de Kievit和Lam J Bacteriol.1994；176(23)：7129-39；Schmengler等，Eur J Cell Biol.2010；89(1)：25-33；Pier等，Am JRespir CritCare Med.1996；154(4Pt 2)：S175-82)。
LPS，也称为脂质聚糖或内毒素，是大分子，其包括脂质和由通过共价键连接的内核，外核，和O-抗原组成的多糖。例如，在革兰氏阴性细菌的外膜中发现LPS，其可在动物中引发强烈的免疫应答。LPS有助于细菌的结构完整性，并保护膜免受某些化学侵袭。它还增加细胞膜的负电荷并有助于稳定整个膜结构。LPS可在动物中诱导强烈的免疫应答。它还涉及细菌生态学的非致病性方面，包括表面粘附，噬菌体敏感性以及与诸如变形虫的捕食者的相互作用。LPS是omptin活性正确构象所必需的；然而，光滑的LPS会在空间上阻碍omptin。由于LPS是革兰氏阴性细菌外膜的主要成分，LPS的突变或去除可导致革兰氏阴性细菌的死亡。
LPS包括三部分：O抗原(或O多糖)，核心寡糖，和脂质A。
O抗原，也称为O多糖或O侧链，是包含在细菌的LPS内的重复聚糖聚合物。O抗原与核心寡糖连接，并且包含LPS分子的最外部结构域。O链的组成因菌株而异。例如，由不同的大肠杆菌菌株产生超过160种不同的O抗原结构(Raetz和WhitfieldAnnu.Rev.Biochem.2002；71：635-700)。O链的存在与否决定了LPS是粗糙还是平滑。全长O-链将使LPS平滑，而O-链的缺失或减少将使LPS粗糙(Rittig等，J.Leukoc.Biol.2003；74(6)：1045-55)。具有粗糙LPS的细菌通常具有对疏水性抗生素穿透性更强的细胞膜，因为粗糙的LPS更疏水(Tsujimoto等，J.Infect.Chemother.1999，5(4)：196-200)。O抗原暴露于细菌细胞的非常外的表面上可以通过宿主抗体进行识别被靶向。
核心寡糖或核心结构域含有直接附连于脂质A的寡糖成分，且通常含有糖类，如庚糖(Hep)和3-脱氧-D-甘露糖醛酸(也称为Kdo或3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸(keto-deoxyoctulosonate))(Hershberger和Binkley，J.Biol.Chem.1968；243(7)：1578-1584)。典型的核心戊糖或核心戊糖区域包括例如两个Kdo残基和一个，两个或三个Hep残基。来自示例性细菌的核心戊糖的组成和结构显示在PCT公开号WO 2018/136626的图1中(通过引用其全文纳入本文)。许多细菌的LPS核心还含有非碳水化合物组分，例如磷酸盐，氨基酸和乙醇胺取代基。
LPS核心可包括内核和外核。
内核的“碱基”是1-3个Kdo残基。最后的Kdo通常用磷酸酯或乙醇胺基团修饰。从Kdo残基，附连2-3个通常被磷酸化的庚糖残基(例如L-甘油-D-甘露庚酮糖)。这些Kdo和庚糖残基形成“内核”。Kdo和脂质A(α2→6)之间的酮苷键特别易受酸裂解。LPS的脂质和多糖部分可通过弱酸处理分离。仅包含脂质A和内核(或更少)的LPS分子被称为“深-粗糙的LPS”。
外核由己糖残基制成，其附连于内核中的最后一个庚糖残基。通常在外核中发现的己糖包括例如D-葡萄糖，D-甘露糖或D-半乳糖。通常至少有三个己糖结合β1→3，O抗原与第三个己糖连接。通常发现其他己糖与外部核心附连，从主要低聚物分支。包含脂质A和完整核心寡糖(内部和外部)的LPS被称为“粗糙LPS”。
在某些情况下，脂质A是用多种脂肪酸修饰的磷酸化葡糖胺二糖。这些疏水性脂肪酸链将LPS锚定在细菌膜中，其余的LPS从细胞表面突出。在一个实施方式中，抗体分子或ADC在细胞表面附近结合。脂质A结构域导致革兰氏阴性细菌的大部分毒性。当细菌细胞被免疫系统裂解时，含有脂质A的膜片段释放到循环中，引起发热，腹泻和可能致命的内毒素休克(也称为败血症性休克)。
在一个实施方式中，靶向铜绿假单胞菌的核心聚糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌的内核聚糖。例如，表位可以包括HepI，并且在较小程度上包括周围的接触。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合平滑LPS，粗糙LPS或两者。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合光滑LPS。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合来自铜绿假单胞菌的光滑LPS。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合光滑LPS(例如，来自铜绿假单胞菌)，但不结合大肠杆菌LPS。在一个实施方式中，抗体分子或ADC不与O-多糖结合或基本上不结合O-多糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合超磷酸化的庚糖。在一个实施方式中，抗体分子或ADC不与铜绿假单胞菌以外的革兰氏阴性细菌结合或基本上不结合铜绿假单胞菌以外的革兰氏阴性细菌。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合合成的磷酸化的庚糖单元。例如，本文描述的抗体分子或ADC(例如，mAb001)可以结合PCT公开号WO2018/136626的图29中所示的表位(通过引用其全文纳入本文)。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，铜绿假单胞菌的核心聚糖在菌株间是保守的，在体内可及，和/或具有有限的变异/耐药性元件。
在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合磷酸化的LPS，例如LPS的磷酸化核心戊糖区域。在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌的核心LPS区域中的一个或多个(例如，两个或三个)磷酸基团。在一个实施方式中，磷酸基团被抗体分子或ADC中的精氨酸残基结合。在一个实施方式中，磷酸基团被抗体分子或ADC中的精氨酸残基抑制或中和。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌的核心LPS区域中的至少三个磷酸基团(例如，Hep2，4，6-PO4)，其中每个被抗体分子或ADC中的精氨酸残基(例如，VL残基R100，或VH残基R101或R103)结合，抑制或中和。例如，抗体分子的H3和L3腔可以容纳单糖。PCT公开号WO2018/136626的图30描绘了示例性抗体分子(mAb001)中磷酸化聚糖(Hep2，4，6-PO4)和三个精氨酸残基(VL残基R100，或VH残基R101和R103)之间的相互作用(通过引用全文纳入本文)。在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC包含VL残基R100和/或VH残基R101和/或R103的一个或多个(例如，1、2或3)保守取代。在一个实施方式中，保守取代中的一个或多个包括对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VL残基R100的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VH残基R101的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VH残基R103的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC靶向的磷酸对于细菌(例如铜绿假单胞菌)存活是必需的。在一个实施方式中，抗体分子或ADC结合铜绿假单胞菌LPS的内核(例如，HepI)的一个或多个(例如，2或3个)磷酸。在某些革兰氏阴性细菌(例如铜绿假单胞菌)中，外膜生物合成通常需要适当的HepI磷酸化。由于缺乏HepI的适当磷酸化而受损的外膜可导致非病毒性细菌。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含存在于多个测序的铜绿假单胞菌菌株中的三种激酶的操纵子参与HepI磷酸化。在假单胞菌特有的该操纵子中，waaP和wapP激酶基因是铜绿假单胞菌菌株的必需基因，并且通常是生存所必需的(Delucia等，MBio.2011；2(4).pii：e00142-11)。相同的操纵子还含有编码额外激酶的基因(例如，wapQ和至少一种另外的推定激酶)，其对铜绿假单胞菌物种具有特异性并编码非必需激酶。本文所述的抗体分子或ADC与铜绿假单胞菌之间的结合通常不受操纵子的这些非必需激酶基因的缺失的影响。因此，本文所述的抗体分子和ADC具有铜绿假单胞菌菌株的广泛覆盖，对假单胞菌感染的患者具有高度特异性，并且在治疗或预防与耐药性或突变铜绿假单胞菌菌株相关的感染方面是有效的。
抗体分子
本文公开了结合细菌(例如革兰氏阴性细菌)和/或脂多糖(LPS)的抗体分子。本文公开的抗体分子-药物偶联物(ADC)可包括本文公开的抗体分子。
如本文所用术语“抗体分子”是指包含至少一种免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括例如全长、成熟抗体以及抗体的抗原结合片段。例如，抗体分子可包含重(H)链可变区序列(本文中缩写为VH)和轻(L)链可变区序列(本文中缩写为VL)。在另一个实例中，抗体分子包两条重(H)链可变结构域序列和两条轻(L)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(如scFv)、单可变结构域抗体、双抗体(Dab)(二价且双特异性)以及嵌合(如人源化)抗体，且可通过修饰完整抗体或采用重组DNA技术从头合成的那些产生。这些功能性抗体片段保留了选择性结合其相应抗原或受体的能力。抗体和抗体片段可来自任何抗体类型(包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE)，并来自任何抗体亚型(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子可以是单克隆或多克隆的。抗体分子还可为人、人源化、CDR移植或体外产生的抗体。抗体分子可具有选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体分子还可具有选自κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白(Ig)″与本文中的术语“抗体”可互换使用。
抗原结合片段的例子包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CHl结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含在铰链区通过二硫桥联接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(v)双抗体(diabody，dAb)片段，其由VH结构域组成；(vi)骆驼或骆驼源化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)，参见例如Bird等，(1988)Science 242：423-426；以及Huston等，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)；(viii)单域抗体。这些抗体片段可通过任何合适的方法(包括本领域普通技术人员所知的多种常规技术)获得，并且筛选与完整抗体具有相同应用的片段。
术语“抗体”包括完整分子及其功能性片段。可改变(例如突变)抗体恒定区以修饰该抗体的性能，例如增加或提高或减少或降低如下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。
抗体分子可为单链抗体。可对单链抗体(scFV)进行工程改造(参见例如Colcher，D.等，(1999)Ann N Y Acad Sci 880：263-80；以及Reiter，Y.(1996)Clin Cancer Res 2：245-52)。单链抗体可二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白上不同表位具有特异性的多价抗体。
本文所述的抗体分子还可为单域抗体。单域抗体可包括其互补决定区为单域多肽一部分的抗体。实例包括但不限于：重链抗体、天然缺失轻链的抗体、衍生自常规4链抗体的单域抗体、工程改造的抗体和非衍生自抗体的单结构域骨架。单域抗体可为本领域中任何单域抗体或任何未来的单域抗体。单域抗体可衍生自任何物种，包括但不限于：小鼠、人、骆驼、大羊驼、鱼、鲨鱼、羊、兔和牛。根据有些方面，单域抗体是已知为缺失轻链的重链抗体的天然存在单域抗体。此类单域抗体公开于例如国际公开号WO94/04678。清楚起见，衍生自天然缺失轻链的重链抗体的该可变结构域在本文中称为VHH或纳米抗体以区别于四链免疫球蛋白的常规VH。该VHH分子可衍生自骆驼科(Camelidae)物种中生长的抗体，例如衍生自骆驼、大羊驼、单峰驼、羊驼和驮马。除了骆驼科，其他物种也可产生天然缺失轻链的重链抗体；本文也包括了这些VHH。
VH和VL区可进一步细分为超变区，称为“互补决定区(CDR)”，其间间插更保守的被称为“框架区(FR或FW)”的区。本文所用术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和性的氨基酸序列。本文所用术语“框架”，“FW”和“FR”可以互换使用。
已采用多种方法精确来划定框架区和CDR的范围(参见Kabat，E.A.，等，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest(《热门免疫学蛋白质序列》，第5版，美国公共卫生署，国立卫生研究院，公开号91-3242；Chothia，C.等，(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；以及采用牛津分子AbM抗体造模软件(Oxford Molecular’s AbMantibody modeling software)所用的AbM定义。总体上参见例如“Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains”(《抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析》)。于：《抗体工程实验室手册》(Antibody Engineering Lab Manual)(Duebel，S.和Kontermann，R.编，Springer-Verlag出版社，海德堡)。在一个实施方式中，使用以下定义：重链可变结构域CDR1的AbM定义以及对其他CDR的Kabat定义。在一个实施方式中，将Kabat定义用于所有CDR。此外，用Kabat或AbM CDR描述的实施方式也可采用Chothia超变环来实施。各VH和VL通常包含三个CDR和四个FR，从氨基端到羧基端按照以下顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指能形成免疫球蛋白可变结构域结构的氨基酸序列。例如，该序列可包括天然存在可变结构域氨基酸序列的全部或部分。例如，该序列可包含或不包含一个、两个或更多给N-或C-末端氨基酸，或可包含与蛋白质结构形成相容的其他改变。
术语“抗原结合区”是指包含形成与抗原，例如脂多糖(LPS)或其表位结合界面的决定簇的抗体分子部分。就蛋白质(或蛋白质模拟物)而言，抗原结合区通常包含形成抗原，例如LPS结合界面的一个或多个环(例如至少4个氨基酸或氨基酸模拟物的环)。通常，抗体分子的抗原结合区包含至少一个或两个CDR和/或超变环，或更通常为至少三个、四个、五个或六个CDR和/或超变环。
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文中可互换使用，指抗体分子干扰抗LPS抗体分子(例如，本文提供的抗LPS抗体分子)与靶标(例如，革兰氏阴性细菌上的LPS)的结合的能力。对结合的干扰可以是直接的或间接的(例如通过抗体分子或目标的变构调控)。抗体分子干扰其他抗体分子与目标结合的程度且由此其是否能被称为竞争，可采用竞争性结合测试(例如FACS测试、ELISA、SPR测试、或OCTET测试(ForteBio)BIACORE测试)确定。在一个实施方式中，竞争性结合测试是定量竞争性测试。在一个实施方式中，在竞争性结合测试(例如本文所述的竞争性测试)中，第一抗LPS抗体分子与目标的结合有如下减少时，认为该第一抗LPS抗体分子与第二抗LPS抗体分子竞争性结合所述目标：减少10％或更多，例如20％或更多，30％或更多，40％或更多，50％或更多，55％或更多，60％或更多，65％或更多，70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，95％或更多，98％或更多，99％或更多。
本文所用术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指具有单一分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体组合物针对特定表位显示单一的结合特异性和亲和性。单克隆抗体的制备可采用杂交瘤技术或不采用杂交瘤技术的方法(例如重组法)。
“有效/效果上的人(effectively human)”蛋白是不引发中和性抗体应答(例如人抗鼠抗体(HAMA)应答)的蛋白质。HAMA在许多情况下(例如若抗体分子在例如治疗慢性或复发性疾病症状时被反复施用的情况下)会造成问题。HAMA应答可造成反复给予抗体因血清抗体清除率提高(参见例如Saleh等，Cancer Immunol.Immunother.32：180-190(1990))以及潜在的过敏反应(参见例如LoBuglio等，Hybridoma，5：5117-5123(1986))而可能失去效果。
抗体分子可为多克隆或单克隆抗体。在一个实施方式中，可重组产生抗体，例如通过任何合适的噬菌体展示或重组方法来产生。
各种用于生成抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如下所述，例如，Ladner等，美国专利号5,223,409；Kang等，国际公开号WO 92/18619；Dower等，国际公开号WO 91/17271；Winter等，国际公开号WO 92/20791；Markland等，国际公开号WO 92/15679；Breitling等，国际公开号WO 93/01288；McCafferty等，国际公开号WO 92/01047；Garrard等，国际公开号WO 92/09690；Ladner等，国际公开号WO 90/02809；Fuchs等，(1991)Bio/Technology 9：13701372；Hay等，(1992)Hum Antibod Hybridomas 3：81-85；Huse等，(1989)Science246：1275-1281；Griffths等，(1993)同上；Hawkins等，(1992)J Mol Biol226：889；Clackson等，(1991)Nature 352：624；Gram等，(1992)PNAS 89：3576-3580；Garrad等，(1991)Bio/Technology 9：13731377；Hoogenboom等，(1991)Nuc Acid Res 19：4133-4137；和Barbas等，(1991)PNAS 88：7978-7982，其内容在此全部引入以供参考)。
在一个实施方式中，抗体分子是完全人抗体(例如由小鼠产生的抗体，该小鼠在已通过基因工程化改造以产生源自人免疫球蛋白序列的抗体)、或非人抗体，例如啮齿类(小鼠或大鼠)、羊、灵长类(例如猴)、骆驼抗体。在一个实施方式中，非人抗体是啮齿类抗体(小鼠或大鼠抗体)。制备啮齿类抗体的方法是本领域已知的。
人单克隆抗体可采用携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠而不是小鼠体系产生。来自用感兴趣抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞被用于产生分泌人mAb的杂交瘤，这些人mAb对来自人蛋白质的表位具有结合特异性(参见例如，Wood等，国际申请号WO 91/00906，Kucherlapati等，PCT公开号WO 91/10741；Lonberg等，国际申请号WO 92/03918；Kay等，国际申请号92/03917；Lonberg等，1994Nature 368：856-859；Green，L.L.等，1994Nature Genet.7：13-21；Morrison，S.L.等，1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855；Bruggeman等，1993Year Immunol 7：33-40；Tuaillon等，1993PNAS 90：3720-3724；Bruggeman等，1991EurJImmunol 21∶1323-1326)。
抗体可为其中的可变区或其部分(例如CDR)在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生的抗体。嵌合、CDR移植以及人源化抗体均包含在本发明中。本发明包括在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生并随后(例如在可变框架或恒定区中)进行修饰以降低人体内抗原性的抗体。
可采用任何合适的重组DNA技术产生嵌合抗体。本领域已知几种(参见Robinson等，国际专利公开号PCT/US86/02269；Akira，等，欧洲专利申请184,187；Taniguchi，M.，欧洲专利申请171,496；Morrison等，欧洲专利申请173,494；Neuberger等，国际申请WO 86/01533；Cabilly等，美国专利号4,816,567；Cabilly等，欧洲专利申请125,023；Better等，(1988Science 240∶1041-1043)；Liu等，(1987)PNAS 84：3439-3443；Liu等，1987，J.Immunol.139：3521-3526；Sun等，(1987)PNAS 84：214-218；Nishimura等，1987，Canc.Res.47：999-1005；Wood等，(1985)Nature 314：446-449；和Shaw等，1988，J.NatlCancerInst.80：1553-1559)。
人源化或CDR移植抗体中(免疫球蛋白重链或轻链的)至少一个或两个但通常为全部三个受者CDR被供者CDR替代。抗体可用至少部分非人CDR进行替换，或仅一些CDR可用非人CDR替换。仅需要替换人源化抗体结合脂多糖所需的CDR数。在一个实施方式中，供者可为啮齿类抗体，例如大鼠或小鼠抗体，而受者可为人框架或人共有框架。通常，提供CDR的免疫球蛋白被称“供者”，而提供框架区的免疫球蛋白被称作“受者”。在一个实施方式中，供者免疫球蛋白是非人的(例如，啮齿类)。受者框架通常为天然存在(例如人)的框架或共有框架，或与其约85％或更高例如90％、95％、99％或更高相同性的序列。
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最高频存在氨基酸(或核苷酸)组成的序列(参见例如，Winnaker，从基因到克隆(From Genes to Clones)，Verlagsgesellschaft出版公司，德国威因海姆(Weinheim，Germany)，1987)。在某一蛋白家族中，共有序列中的各位置上是该家族中该位置处出现频率最高的氨基酸。如果两种氨基酸出现频率相同，可将其中任一种包含于共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
可采用任何合适的方法将抗体人源化，本领域中已知许多此类方法(参见例如，Morrison，S.L.，1985，Science 229：1202-1207，Oi等，1986，BioTechniques4：214，以及Queen等，US 5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762，其全部内容作为参考纳入本文)。
可采用CDR移植或CDR取代来产生人源化或CDR移植抗体，可替换免疫球蛋白链中的一个、两个或全部CDR。参见例如美国专利号5,225,539；Jones等，1986Nature 321：552-525；Verhoeyan等，1988Science 239：1534；Beidler等，1988J.Immunol.141：4053-4060；Winter US 5,225,539，其全部内容作为参考纳入本文。Winter描述了可用于制备人源化抗体的CDR移植方法(英国专利申请GB 2188638A，提交于1987年3月26日；Winter US 5,225,539)，其全部内容作为参考纳入本文。
还提供了其中特定氨基酸被取代、缺失或插入的人源化抗体。从供者中选择氨基酸的标准描述于例如US 5,585,089，例如US 5,585,089的第12-16栏，其内容通过参考纳入本文。使抗体人源化的其他技术描述于Padlan等EP519596A1(公开于1992年12月23日)。
在一个实施方式中，抗体分子所具有的重链恒定区选自例如：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；具体而言，选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区(例如人重链恒定区)。在另一个实施方式中，抗体分子所具有的轻链恒定区选自例如κ或λ轻链恒定区(例如人轻链恒定区)。可改变(例如突变)恒定区以修饰该抗体分子的性能(例如以增加或减少如下一项或多项：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方式中，抗体分子具有效应功能且能够固定补体。在另一个实施方式中，抗体分子不募集效应细胞或固定补体。在一个实施方式中，抗体分子结合Fc受体的能力降低或不具备该能力。例如，抗体可以是不支持与Fc受体结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如其具有经诱变的Fc受体结合区或缺失Fc受体结合区。在一个实施方式中，抗体分子包含Fc区，其被改变以增加ADCC活性。在一个实施方式中，ADCC活性增加10倍或更多，例如25倍或更多倍，50倍或更多倍，100倍或更多倍，200倍或更多倍，400倍或更多，600倍或更多，800倍或更多，或1000倍或更多，例如，在100倍和1000倍之间或在250倍和750倍之间。在一个实施方式中，抗体分子包含Fc区，其被改变以调节与Fcγ受体的接合或调理吞噬活性。在一个实施方式中，抗体分子包含Fc区，其被改变以调节与FcRn受体的接合。
在一个实施方式中，抗体分子的恒定区被改变。改变抗体恒定区的方法是本领域中已知的。具有改变的功能(例如对效应体配体(如细胞上的FcR)或补体的C1组分的亲和力改变)的抗体分子可通过将该抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基替换为不同的残基来产生(参见例如EP388,151A1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，其全部内容通过引用纳入本文)。还包括了使抗体结构稳定的氨基酸突变，例如人IgG4中的S228P(EU命名法，Kabat命名法中的S241P)。可描述相似类型的改变，其若应用于鼠或其他物种免疫球蛋白将减弱或消除这些功能。
在一个实施方式中，将抗体分子工程化以与Fc受体最佳接合，例如FcγRIIa，FcγRII，C1q或其组合，例如用于增强的调理吞噬活性(OPA)，补体依赖性细胞毒性(CDC)或两者。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，可以通过抗体的Fc区与活化受体FcγRIIa和抑制性受体FcγRIIb的接合来介导OPA。在一个实施方式中，可以例如使用Fc与FcγRIIa和FcγRIIb的解析晶体结构鉴定相对于FcγRIIb选择性增强与FcγRIIa的接合的Fc上的突变。可以在OPA测定中评估具有一个或多个Fc接合增强突变的抗体分子或ADC。在另一个实施方式中，可以鉴定用于增加与C1q复合物的结合的Fc突变，例如，以促进细菌上的补体沉积和CDC介导的细菌杀灭。可以在CDC测定中评估具有一个或多个C1q亲和力增强突变的抗体分子或ADC。
在一个实施方式中，抗体分子中的氨基酸仅为标准氨基酸。在一个实施方式中，抗体分子包含天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物及同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；和/或前述中任意的所有立体异构体。抗体分子可包含肽模拟物和氨基酸的D-或L-光学异构体。
本文所述抗体分子的多肽可为线性或分支型，其可包含经修饰的氨基酸，且可间插有非氨基酸。还可修饰抗体分子；例如，通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，如与标记组分偶联来修饰。多肽可从天然来源分离，可采用重组技术由原核或真核宿主产生，或者可为合成方法的产品。
本文所述的抗体分子可以非偶联形式单独使用，或可与某些物质结合，所述物质为例如毒素或部分(例如治疗药物(例如抗生素)；发出辐射的化合物；植物、真菌或细菌源性分子；或生物蛋白(例如蛋白毒素)或颗粒(例如重组病毒颗粒，例如通过病毒包被蛋白))。例如，抗LPS抗体可与放射性同位素(如α-、β-或γ-放射物或β-和γ-放射物)偶合。
抗体分子可衍生化为或联接其他功能性分子(例如另一肽或蛋白质)。如本文所用，“衍生化”抗体分子是已被修饰的抗体分子。衍生化的方法包括但不限于：添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体(如生物素)。因此，抗体分子包括本文所述抗体的衍生化和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可与一个或多个其他分子实体功能性联接(通过化学偶联、遗传融合、非共价关联或其他)，所述其他分子实体为例如另一抗体(例如双特异性抗体或双抗体)、检测剂、毒素、药剂和/或能介导该抗体或抗体部分与其他分子(如链霉亲和素核心区或多聚组氨酸标签)关联的蛋白质或肽。
某些类型的衍生化抗体分子可通过交联两个或更多个抗体(相同类型或不同类型，例如用以产生双特异性抗体)来产生。合适的交联剂包括具有通过合适间隔子分隔的两个不同反应基团的异双官能性交联剂(例如间-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双官能性(例如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)交联剂。此类交联剂可获自皮尔斯化学品公司(Pierce Chemical Company)(伊利诺斯州罗克福德)。
可用于衍生化(或标记)抗LPS抗体分子的有用的可检测剂包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、荧光发射金属原子(例如铕(Eu)和其他镧系原子)以及放射性材料(如下文所述)。示例性荧光检测剂包括荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、5-二甲基胺-1-萘磺酸氯、藻红蛋白等。还可用可检测酶衍生化抗体，所述酶可为例如碱性磷酸酶、辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等。用可检测酶衍生抗体时，可采用加入该酶用来产生可检测反应产物的其他试剂来检测该抗体。例如，当存在检测剂辣根过氧化酶时，加入过氧化氢和二氨基联苯胺产生可检测的颜色反应产物。也可用辅基(例如链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素)来衍生抗体分子。例如，可用生物素衍生抗体，并通过亲和素或链霉亲和素结合的间接测定来检测该抗体。合适荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的例子包括萤光素酶、荧光素和水母发光蛋白。
可例如诊断性和/或试验性地应用标记的抗体分子，包括(i)用于通过标准技术(如亲和层析或免疫沉淀)分离预定抗原；(ii)用于检测(例如细胞裂解物或细胞上清液中的)预定抗原以评估蛋白质的表达模式和丰度；(iii)用于监测组织中蛋白水平作为临床试验的一部分来例如用于测定给定治疗方案的效力。
抗体分子可与其他分子实体偶联，所述分子实体通常为标记物或治疗剂(例如抗微生物剂(例如抗细菌剂或杀细菌剂)、免疫调节剂、免疫刺激剂、细胞毒剂或细胞抑制剂)或部分。可将放射性同位素用于检测或治疗应用中。可与抗体分子偶联的放射性同位素包括但不限于α-、β-或γ-放射体，或者β-和γ-放射体。此类放射性同位素包括但不限于：碘(131I或125I)、钇(90Y)、镥(177Lu)、锕(225Ac)、镨、砹(211At)、铼(186Re)、铋(212Bi或213Bi)、铟(111In)、锝(99mTc)、磷(32P)、铑(188Rh)、硫(35S)、碳(14C)、氚(3H)、铬(51Cr)、氯(36Cl)、钴(57Co或58Co)、铁(59Fe)、硒(75Se)或镓(67Ga)。可用作治疗剂的放射性同位素包括：钇(90Y)、镥(177Lu)、锕(225Ac)、镨、砹(211At)、铼(186Re)、铋(212Bi或213Bi)和铑(188Rh)。可用作标记物例如用于诊断的放射性同位素包括：碘(131I或125I)、铟(111In)、锝(99mTc)、磷(32P)、碳(14C)和氚(3H)，或以上所列治疗用同位素中的一种或多种。
本公开提供了放射性标记的抗体分子及其标记方法。在一个实施方式中，公开了标记抗体分子的方法。该方法包括使抗体分子接触螯合剂从而产生偶联抗体。该偶联抗体被放射性同位素(例如111铟、90钇和177镥)放射性标记从而产生标记的抗体分子。
如上所述，抗体分子可以与治疗剂偶联。已经提到了治疗活性的放射性同位素。其他治疗剂的示例包括抗微生物剂(例如抗细菌剂)，例如抗微生物肽。在一个实施方式中，抗微生物肽可以与抗体分子，例如抗体分子的重链或轻链偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，抗微生物肽偶合(例如，融合)至重链或轻链的N-末端或其功能片段。在一个实施方式中，抗微生物肽偶合(例如，融合)至重链或轻链的C-末端或其功能片段。在一个实施方式中，抗微生物肽偶合(例如，融合)至恒定区或其部分。在一个实施方式中，重链或轻链或其部分和抗微生物肽形成融合多肽，例如由开放阅读框(ORF)编码。一种或多种抗微生物肽可以与抗体分子偶合(例如，融合)。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是相同或基本相同的。在另一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是不同的。在一个实施方式中，所有抗微生物肽是相同或基本相同的。
在一些方面中，本公开提供了制备本文所公开抗体分子的方法。该方法包括：提供抗原，例如细菌(例如革兰氏阴性细菌)或LPS；获得特异性结合抗原的抗体分子；评估抗体分子在调节抗原和/或表达该抗原的生物体(例如细菌(例如革兰氏阴性细菌))的活性方面的功效。该方法还可进一步包括给予对象(例如人)该抗体分子，包括其衍生物(例如人源化抗体分子)。
本公开提供了编码上述抗体分子的分离的核酸分子、及其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于RNA、基因组DNA和cDNA。
抗体分子的示例性序列描述于下表1-3中。
表1.示例性抗体分子的重链可变区(VH)，轻链可变区(VL)，重链CDR(HCDR)和轻链CDR(LCDR)的氨基酸序列。显示了根据Chothia系统和Kabat系统定义的重链和轻链CDR。
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表2.示例性抗体分子的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的核苷酸序列。
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表3.示例性人源化抗体分子的重链可变区(VH)，轻链可变区(VL)，重链CDR(HCDR)和轻链CDR(LCDR)的氨基酸序列。显示了根据Chothia系统和Kabat系统定义的重链和轻链CDR。
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在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，抗体分子包含表1或3中描述的抗体分子的VH区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，抗体分子包含表1或3中描述的抗体分子的VL区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNvl，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，抗体分子包含表1或3中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个或三个)CDR和/或VL区的一个或多个(例如两个或三个)CDR。
在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述的一个，两个或三个HCDR。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述的一个，两个或三个LCDR。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述的一个或多个(例如，两个或三个)HCDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)LCDR。
在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VL区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架和/或VL区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含表1或3中所述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区和轻链可变区。
在一个实施方式中，抗体分子包含具有表1或3中所述氨基酸序列的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含具有表1或3中所述氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含具有表1或3中所述氨基酸序列的重链可变区和具有表1或3中所述氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC包含VL残基R100和/或VH残基R101和/或R103的一个或多个(例如，1、2或3)保守取代。在一个实施方式中，保守取代中的一个或多个包括对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VL残基R100的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VH残基R101的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VH残基R103的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。
在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区和由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。
在一个实施方式中，抗体分子还包含重链恒定区。在一个实施方式中，抗体分子还包含轻链恒定区。在一个实施方式中，抗体分子还包含重链恒定区和轻链恒定区。在一个实施方式中，抗体分子包含本文表1或3中所述抗体分子的重链恒定区、轻链恒定区、以及重链和轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含重链恒定区，轻链恒定区和可变区，其包含表1或3中所述的抗体分子的一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR。
在一个实施方式中，抗体分子结合LPS的核心戊糖区。在一个实施方式中，核心戊糖区包含一个或多个(例如，两个)Kdo残基和一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基。在一个实施方式中，抗体分子结合一个或多个(例如，两个)Kdo残基，或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基，或其任何组合。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：109)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：108)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：109)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：109)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：106)；或HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；或LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体mAb001的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：105)；HCDR2，其包含抗体mAb001的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：106)；和HCDR3，其包含抗体mAb001的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：107)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体mAb001的LCDRl的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：110)；LCDR2，其包含抗体mAb001的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：111)；和LCDR3，其包含抗体mAb001的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：112)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQID NO：103)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQID NO：104)。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：103)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含抗体mAb001的VH的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：103)，并且轻链可变区包含抗体mAb001的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：104)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：113)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：114)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：18)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：18)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：17)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：18)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDRl的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：15)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDRl的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：15)；或HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；或LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体A001-25的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：14)；HCDR2，其包含抗体A001-25的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：15)；和HCDR3，其包含抗体A001-25的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：16)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体A001-25的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：49)；LCDR2，其包含抗体A001-25的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：50)；和LCDR3，其包含抗体A001-25的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：51)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：1)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQID NO：1)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：1)相差不超过8，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQID NO：8)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：1)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：8)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含抗体A001-25的VH的氨基酸序列(例如，SEQID NO：1)，并且轻链可变区包含抗体A001-25的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：8)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：81)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：88)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：23)；和HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：23)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：22)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：23)；和HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：20)；和HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：20)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWN01的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWN01的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：20)；或HCDR3，其包含抗体hWN01的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列，并且轻链可变区包含LCDR1，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，9，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含抗体hWN01的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：2)，并且轻链可变区包含抗体hWN01的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：82)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：89)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：28)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNvl的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：27)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：28)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNvl的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDRl的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNvl的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：25)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体hWN01的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWN01的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWN01的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：25)；或HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；或LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：54)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体hWNv1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：19)；HCDR2，其包含抗体hWNv1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：25)；和HCDR3，其包含抗体hWNv1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：21)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体hWNv1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52)；LCDR2，其包含抗体hWNv1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：53)；和LCDR3，其包含抗体hWNv1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：54)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：9)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含hWNv1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)，并且其中轻链可变区包含hWNv1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：9)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：83)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：89)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：57)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：32)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：33)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：57)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；或HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：31)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：56)；或LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3E7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29)；HCDR2，其包含抗体3E7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：30)；和HCDR3，其包含抗体3E7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：31)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3E7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：55)；LCDR2，其包含抗体3E7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：56)；和LCDR3，其包含抗体3E7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：57)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含3E7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4)，并且其中轻链可变区包含3E7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：10)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：84)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：90)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：60)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：37)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：38)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：60)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；或HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：59)；或LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3G1的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：34)；HCDR2，其包含抗体3G1的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：35)；和HCDR3，其包含抗体3G1的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：36)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3G1的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：58)；LCDR2，其包含抗体3G1的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：59)；和LCDR3，其包含抗体3G1的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：60)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：3)相差不超过1，2，5，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：5)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与3G1的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：5)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含3Gl的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：5)，并且其中轻链可变区包含3G1的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：11)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：85)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：91)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：43)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：63)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：42)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：43)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：63)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；或HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：41)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：62)；或LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体2C7的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：39)；HCDR2，其包含抗体2C7的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40)；和HCDR3，其包含抗体2C7的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：41)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体2C7的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：61)；LCDR2，其包含抗体2C7的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：62)；和LCDR3，其包含抗体2C7的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含2C7的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：6)，并且其中轻链可变区包含2C7的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：12)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：86)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：92)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：66)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：47)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：48)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：66)。
在一个实施方式中，轻链可变区包含：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；或HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：46)，并且轻链可变区包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQID NO：65)；或LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，重链可变区包含：HCDR1，其包含抗体3D6的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：44)；HCDR2，其包含抗体3D6的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：45)；和HCDR3，其包含抗体3D6的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：46)，并且轻链可变区包含以下：LCDR1，其包含抗体3D6的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：64)；LCDR2，其包含抗体3D6的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：65)；和LCDR3，其包含抗体3D6的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：66)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含与3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，重链可变区包含3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含与3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链可变区包含3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中重链可变区包含与3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包含与3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，重链可变区包含3D6的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7)，并且其中轻链可变区包含3D6的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：13)。
在一个实施方式中，重链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：87)。在一个实施方式中，轻链可变区包含由表2的核苷酸序列编码的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：93)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中VH包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与表3中所述VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与表3中所述VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与表3中所述VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，VH包含以下一个，两个或全部：HCDR1，其包含表3中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表3中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；或HCDR3，其包含表3中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)。
在一个实施方式中，VH包含：HCDR1，其包含表3中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表3中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；和HCDR3，其包含表3中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中VL包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与表3中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与表3中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与表3中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，VL包含以下一个，两个或全部：LCDR1，其包含表3中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表3中所述的VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；或LCDR3，其包含表3中所述的VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，VL包含：LCDR1，其包含表3中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表3中所述的VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；和LCDR3，其包含表3中所述的VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，
其中VH包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含与表3中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；HCDR2，其包含与表3中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或HCDR3，其包含与表3中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；并且
其中VL包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含与表3中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；LCDR2，其包含与表3中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列；或LCDR3，其包含与表3中所述VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2或3个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，99或100％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，VH包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含表3中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表3中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；或HCDR3，其包含表3中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；VL包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含表3中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表3中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；或LCDR3，其包含表3中所述VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，VH包含：HCDR1，其包含表3中所述的VH的HCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；HCDR2，其包含表3中所述的VH的HCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；和HCDR3，其包含表3中所述的VH的HCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)；并且VL包含：LCDR1，其包含表3中所述的VL的LCDR1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；LCDR2，其包含表3中所述VL的LCDR2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)；和LCDR3，其包含表3中所述VL的LCDR3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子还包含一个或多个人或人衍生的重链或轻链可变区框架。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含与表8中所述VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，3，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，VH包含表3中所述的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中VL包含与表8中所述VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，3，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，VL包含表3中所述的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含与表8中所述的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列，并且其中VL包含与表3中所述的VL的氨基酸序列(例如，SEQID NO：119-137中任一个)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，3，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，VH包含表3中所述的VH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：115-118中任一个)，并且VL包含表3中所述的VL的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：119-137中任一个)。
在一个实施方式中，HCCDR1，HCCDR2和HCCDR3来自表3中所述的相同VH。在一个实施方式中，LCCDR1，LCCDR2和LCCDR3来自表3中所述的相同VL。
表3中公开的任何VH氨基酸序列(或其HCDR1，HCDR2和HCDR3的氨基酸序列)(或与其相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的序列)可与表8中公开的任何VL氨基酸序列(或其LCDR1，LCDR2和LCDR3的氨基酸序列)(或与其相差不超过1，2，3，4，5，6，7，3，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸残基，或与其具有至少85，90，95，96，97，98，99或100％同源性的序列)组合，例如，以形成人源化抗体分子。示例性组合包括：
SEQ ID NO：103和104；SEQ ID NO：103和119；SEQ ID NO：103和120；SEQ ID NO：103和121；SEQ ID NO：103和122；SEQ ID NO：103和123；SEQ ID NO：103和124；SEQ ID NO：103和125；SEQ ID NO：103和126；SEQ ID NO：103和127；SEQ ID NO：103和128；SEQ ID NO：103和129；SEQ ID NO：103和130；SEQ ID NO：103和131；SEQ ID NO：103和132；SEQ ID NO：103和133；SEQ ID NO：103和134；SEQ ID NO：103和135；SEQ ID NO：103和136；SEQ ID NO：103和137；SEQ ID NO：115和104；SEQ ID NO：115和119；SEQ ID NO：115和120；SEQ ID NO：115和121；SEQ ID NO：115和122；SEQ ID NO：115和123；SEQ ID NO：115和124；SEQ ID NO：115和125；SEQ ID NO：115和126；SEQ ID NO：115和127；SEQ ID NO：115和128；SEQ ID NO：115和129；SEQ ID NO：115和130；SEQ ID NO：115和131；SEQ ID NO：115和132；SEQ ID NO：115和133；SEQ ID NO：115和134；SEQ ID NO：115和135；SEQ ID NO：115和136；SEQ ID NO：115和137；SEQ ID NO：116和104；SEQ ID NO：116和119；SEQ ID NO：116和120；SEQ ID NO：116和121；SEQ ID NO：116和122；SEQ ID NO：116和123；SEQ ID NO：116和124；SEQ ID NO：116和125；SEQ ID NO：116和126；SEQ ID NO：116和127；SEQ ID NO：116和128；SEQ ID NO：116和129；SEQ ID NO：116和130；SEQ ID NO：116和131；SEQ ID NO：116和132；SEQ ID NO：116和133；SEQ ID NO：116和134；SEQ ID NO：116和135；SEQ ID NO：116和136；SEQ ID NO：116和137；SEQ ID NO：117和104；SEQ ID NO：117和119；SEQ ID NO：117和120；SEQ ID NO：117和121；SEQ ID NO：117和122；SEQ ID NO：117和123；SEQ ID NO：117和124；SEQ ID NO：117和125；SEQ ID NO：117和126；SEQ ID NO：117和127；SEQ ID NO：117和128；SEQ ID NO：117和129；SEQ ID NO：117和130；SEQ ID NO：117和131；SEQ ID NO：117和132；SEQ ID NO：117和133；SEQ ID NO：117和134；SEQ ID NO：117和135；SEQ ID NO：117和136；SEQ ID NO：117和137；SEQ ID NO：118和104；SEQ ID NO：118和119；SEQ ID NO：118和120；SEQ ID NO：118和121；SEQ ID NO：118和122；SEQ ID NO：118和123；SEQ ID NO：118和124；SEQ ID NO：118和125；SEQ ID NO：118和126；SEQ ID NO：118和127；SEQ ID NO：118和128；SEQ ID NO：118和129；SEQ ID NO：118和130；SEQ ID NO：118和131；SEQ ID NO：118和132；SEQ ID NO：118和133；SEQ ID NO：118和134；SEQ ID NO：118和135；SEQ ID NO：118和136；或SEQ IDNO：118和137。在一个实施方式中，ADC抗体分子包含VH和VL，VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列，或与其具有至少80％(例如，至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％)序列相同性的序列，并且VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列，或与其具有至少80％(例如，至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％)序列相同性的序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，其中重链可变区包含以下的一个，两个，或全部：HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含YISSDGDSX1YYPD X2 X3KG(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列，其中X1是I或T；X2是N或S；X3是I或V；或HCDR3，其包含SEQID NO：107的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，其中轻链可变区包含以下的一个，两个，或全部：LCDR1，其包含RASESX1FGHGISPX2H(SEQ ID NO：166)的氨基酸序列，其中X1是V或I；X2是M或L；LCDR2，其包含RASX1X2KX3(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列，其中X1是N或S；X2是L或R；X3是F，T或S；或LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含VH和VL，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2，和LCDR3)，
其中VH包含以下的一个，两个或全部：HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含YISSDGDSX1YYPD X2 X3KG(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列，其中X1是I或T；X2是N或S；X3是I或V；或HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列，和
其中VL包含以下的一个，两个或全部：LCDR1，其包含RASESX1FGHGISPX2H(SEQ IDNO：166)的氨基酸序列，其中X1是V或I；X2是M或L；LCDR2，其包含RASX1X2KX3(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列，其中X1是N或S；X2是L或R；X3是F，T或S；或LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方式中，ADC或抗体分子包含VH和VL，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2，和LCDR3)，
其中VH包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含YISSDGDSX1YYPD X2 X3KG(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列，其中X1是I或T；X2是N或S；X3是I或V；和HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列，和
其中VL包含：LCDR1，其包含RASESX1FGHGISPX2H(SEQ ID NO：166)的氨基酸序列，其中X1是V或I；X2是M或L；LCDR2，其包含RASX1X2KX3(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列，其中X1是N或S；X2是L或R；X3是F，T或S；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗体分子包含或由两个重链可变区和两个轻链可变区组成。
在一个实施方式中，抗体分子还包含重链恒定区，轻链恒定区或两者。
在一个实施方式中，抗体分子是IgG抗体分子，例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4抗体分子。在一个实施方式中，抗体分子不是IgM抗体分子。
在一个实施方式中，抗体分子包含来自κ或λ轻链的轻链恒定区。
在一个实施方式中，抗体分子能够结合两种或更多种革兰氏阴性菌株。能够结合两种或更多种革兰氏阴性细菌菌株的抗体分子具有几种有利特性。例如，一种疗法可用于治疗，预防或诊断多种细菌感染。另外，医生无需确定哪种细菌菌株感染患者以确定适当的治疗。
因此，在一个实施方式中，抗体分子结合例如不同属，种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如一种或多种革兰氏阴性细菌)。
在一个实施方式中，所述一种或多种革兰氏阴性细菌选自肠杆菌科的物种(例如，克雷伯氏菌属，肠杆菌属，志贺氏菌属，埃希氏菌属，沙门氏菌属，耶尔森氏菌属或柠檬酸杆菌属，例如泛抗性肠杆菌科的物种)，假单胞菌属的物种，不动杆菌属的物种，或其任何组合。
在一个实施方式中，抗体分子结合以下一种或多种：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，抗体分子结合假单胞菌，例如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)。
在一个实施方式中，一种或多种细菌是一种或多种抗生素耐药性细菌，例如一种或多种多重耐药性革兰氏阴性细菌。
在一个实施方式中，一种或多种抗生素耐药性细菌选自假单胞菌(例如铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如肺炎克雷伯氏菌或大肠杆菌)或不动杆菌(例如鲍氏不动杆菌)。
在一个实施方式中，抗体分子结合以下一种或多种：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，抗体分子与一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或更多)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，抗体分子与一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或更多)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
在一个实施方式中，抗体分子以高亲和力，例如，KD小于约10nM结合LPS，例如，通过ELISA方法测量。
在一个实施方式中，抗体分子结合LPS的Koff慢于1×10-4、5×10-5、或1×10-5s-1。在一个实施方式中，抗体分子结合LPS的Kon快于1×104、5×104、1×105或5×105M-1s-1。
在一个实施方式中，抗体分子具有调理吞噬活性，例如通过OPA测定法测定，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，抗体分子结合包含LPS中的一个或多个(例如，两个)Kdo残基和/或一个或多个(例如，两个或三个)Hep残基的表位。
在一个实施方式中，a)与脂多糖(LPS)结合的抗体分子偶合(例如，融合)至b)抗微生物肽，例如本文所述的抗微生物肽，例如，以形成抗体分子-药物偶联物(ADC)。
在一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区(VH)，其中重链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)，例如，其中重链可变区在抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，重链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中重链可变区的C末端通过恒定区偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中轻链可变区与抗微生物肽偶合(例如，融合)，例如，其中轻链可变区在抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，轻链可变区间接偶合(例如，融合)至抗微生物肽，例如，其中轻链可变区的C末端通过恒定区偶合(例如，融合)至抗微生物肽的N末端。
在一个实施方式中，抗体分子与两个或更多个(例如，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个，例如四个)抗微生物肽偶合(例如，融合)，例如通过酶促偶联或化学结合。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是相同的。在一个实施方式中，至少两个抗微生物肽是不同的。
在一个实施方式中，抗体分子与两个相同的抗微生物肽偶合(例如，融合)，每个抗微生物肽，例如间接地，例如通过恒定区偶合(例如，融合)至重链可变区。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地抑制(例如，抑制革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的生长，毒力或感染性，例如，具有比单独的抗微生物肽的最小抑制浓度(MIC)低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的MIC。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽比单独的抗微生物肽或抗体分子更有效地降低(例如，抑制革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)的活力，例如杀灭，例如，具有比单独的抗微生物肽的最小杀细菌浓度(MBC)低例如，至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50，60，70，80，90，或100倍的MBC。
在一个实施方式中，抗体分子具有调理吞噬活性(例如，当与嗜中性粒细胞的Fc受体(FcR)结合时被吞噬)，例如，如通过OPA测定所确定的，例如，如本文所述。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽不抑制，例如，不抑制革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的生长，毒力或感染性，例如，具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小抑制浓度(MIC)低，例如，至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MIC。
在一个实施方式中，与抗体分子偶合(例如，融合)的抗微生物肽不降低革兰氏阳性细菌(例如，本文所述的革兰氏阳性细菌)的活力，例如，不杀灭，例如，具有比对革兰氏阳性细菌(例如，革兰氏阳性细菌)的最小杀细菌浓度(MBC)低，例如，至少2，5，10，20，50，100，200，500或1000倍的对革兰氏阴性细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的MBC。
在一个实施方式中，革兰氏阳性细菌是金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)。
在一个实施方式中，抗体分子结合革兰氏阴性细菌或LPS上的线性或构象表位。
在一个实施方式中，抗体分子结合低MW LPS和高MW LPS，例如，如Western分析所确定的。在一个实施方式中，抗体分子结合铜绿假单胞菌核心LPS的高度磷酸化的庚糖区域。在一个实施方式中，抗体分子结合核心LPS的磷酸化(例如，超磷酸化，例如，双磷酸化)Hep I残基。在一个实施方式中，抗体分子结合核心LPS中的区域(例如，在铜绿假单胞菌中)，其对于外膜形成是必需的(如例如DeLucia等，MBio.2011；2(4).pii：e00142-11中所述，其内容通过引用并入本文)。
在一个实施方式中，抗体分子以高亲和力结合双磷酸化的庚糖，例如，表观KD等于或小于约20nM，例如，通过本文所述的方法测定。在一个实施方式中，与非磷酸化的庚糖相比，抗体分子优先结合磷酸化的(例如，超磷酸化的)庚糖。在一个实施方式中，与具有单磷酸化的庚糖相比，抗体分子优先结合超磷酸化(例如，双磷酸化)的庚糖。在一个实施方式中，与双磷酸化的甘露糖，具有单磷酸化的甘露糖或非磷酸化的甘露糖相比，抗体分子优先结合超磷酸化(例如，双磷酸化)的庚糖。
在一个实施方式中，具有本文所述结合特性的抗体分子包含硫酸酯酶基序(例如，修饰的硫酸酯酶基序)，例如，如本文所述。
抗微生物肽
如本文所用，术语“抗微生物肽”是指具有抗微生物活性(例如抗菌活性)的肽。尽管不希望受理论束缚，但据信，在一个实施方式中，抗微生物肽可具有可变长度，序列和结构，具有针对许多微生物(例如细菌)的广谱活性，并且任选地具有低水平的诱导耐药性。在一个实施方式中，抗微生物肽是抗细菌肽。
抗微生物肽是多种多样的分子，基于它们的氨基酸组成和结构被分成亚组。通常，这些肽包括由精氨酸，赖氨酸或在酸性环境中组氨酸和大部分(例如，超过50％)疏水残基提供的两个或更多个带正电荷的残基。这些分子的二级结构包括，例如，i)α-螺旋，ii)由于存在2个或更多个二硫键而出现的β链，iii)由于存在单个二硫键和/或肽链的环化而出现的β-发夹或环，和iv)延长。这些肽中的一些可以在游离溶液中非结构化，并且在分配到生物膜中时折叠成它们的最终构型。抗微生物肽可含有沿一侧排列的亲水性氨基酸残基和沿螺旋分子的相对侧排列的疏水性氨基酸残基。抗微生物肽的这种两亲性允许它们分配到膜脂质双层中。尽管不希望受理论束缚，但据信在一个实施方式中，与膜结合的能力是抗微生物肽的典型特征，尽管可能不需要膜透化。
抗微生物肽的类型包括，例如，阴离子肽(例如，富含谷氨酸和天冬氨酸)，线性阳离子α-螺旋肽(例如，缺乏半胱氨酸)，阳离子肽(例如，富含脯氨酸，精氨酸，苯丙氨酸，甘氨酸或色氨酸)，以及含有半胱氨酸并形成二硫键(例如，含有1-3个二硫键)的阴离子和阳离子肽。
抗微生物肽杀灭微生物的作用方式是多种多样的，并且对于不同的细菌种类可能不同。细胞质膜是常见的靶标，但肽也可能干扰DNA和蛋白质合成，蛋白质折叠和细胞壁合成。肽和靶生物体之间的初始接触可以是静电的，因为大多数细菌表面是阴离子的或疏水的。它们的氨基酸组成，两亲性，阳离子电荷和大小允许它们附着并插入膜双层中以通过“木桶板”，“地毯”或“环形孔”机制形成孔。”或者，它们可以渗透到细胞中以结合对细胞生存至关重要的细胞内分子。细胞内结合模型包括抑制细胞壁合成，改变细胞质膜，激活自溶素，抑制DNA，RNA和蛋白质合成，以及抑制某些酶。这些肽可以是杀细菌的和/或抑细菌的。通常，通过测量最小抑制浓度(MIC)来确定这些肽的抗微生物(例如，抗细菌)活性。
已经证明抗微生物肽杀灭革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，病毒，真菌和转化的或癌细胞(Reddy等，(2004)International Journal ofAntimicrobial Agents 24(6)：536-547)。抗微生物肽也可具有免疫调节活性。例如，免疫调节活性可能参与感染的清除，例如，改变宿主基因表达，充当趋化因子和/或诱导趋化因子产生，抑制脂多糖诱导的促炎细胞因子产生，促进伤口愈合或调节树突状细胞和适应性免疫应答细胞的反应的能力。
可以使用几种方法来确定抗微生物肽活性的机制。这些方法包括例如固态NMR光谱，显微镜，原子发射光谱，荧光染料，离子通道形成，圆二色性和取向圆二色性，双偏振干涉测量，或中子和X射线衍射。
在一个实施方式中，抗微生物肽低于10kDa，例如低于8kDa，6kDa，4kDa，2kDa或1kDa。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由约6至约100个氨基酸，例如，约6至约75个氨基酸，约6至约50个氨基酸，约6至约25个氨基酸，约25至约100个氨基酸，约50至约100个氨基酸，或约75至约100个氨基酸组成。在一个实施方式中，抗细菌肽包含或由约12至约50个氨基酸组成。在一个实施方式中，抗细菌肽包含或由约15至约45个氨基酸组成。在一个实施方式中，抗微生物肽基本上是阳离子的。在一个实施方式中，抗微生物肽基本上是两亲性的。在一个实施方式中，抗微生物肽基本上是阳离子和两亲性的。在一个实施方式中，抗微生物肽对革兰氏阴性细菌是细胞抑制的。在一个实施方式中，抗微生物肽对革兰氏阴性细菌有细胞毒性。在一个实施方式中，抗微生物肽对革兰氏阳性细菌具有细胞抑制性和细胞毒性。在一个实施方式中，抗微生物肽是广谱抗微生物肽，例如对两种或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的细菌具有细胞抑制和/或细胞毒性。在一个实施方式中，抗微生物肽是分泌型多肽。
已经从多种动物：微生物，无脊椎动物，植物，两栖动物，鸟类，鱼类和哺乳动物中分离和描述了抗微生物肽(Wang等，Nucleic Acids Res.2009；37(数据库发行)：D933-7)。例如，抗微生物多肽描述于抗微生物肽数据库(Wang等，Nucleic Acids Res.2009；37(数据库期)：D933-7)，CAMP：抗微生物肽集(Thomas等，Nucleic Acids Res.2010；38(数据库期)：D774-80)，US 5221732，US 5447914，US 5519115，US 5607914，US 5714577，US 5734015，US5798336，US 5821224，US 5849490，US 5856127，US 5905187，US 5994308，US 5998374，US6107460，US 6191254，US 6211148，US 6300489，US 6329504，US 6399370，US 6476189，US6478825，US 6492328，US 6514701，US 6573361，US 6573361，US 6576755，US 6605698，US6624140，US 6638531，US 6642203，US 6653280，US 6696238，US 6727066，US 6730659，US6743598，US 6743769，US 6747007，US 6790833，US 6794490，US 6818407，US 6835536，US6835713，US 6838435，US 6872705，US 6875907，US 6884776，US 6887847，US 6906035，US6911524，US 6936432，US 7001924，US 7071293，US 7078380，US 7091185，US 7094759，US7166769，US 7244710，US 7314858，和US 7582301，其内容通过引用并入。
本文所述的抗微生物肽可以抑制或降低一种或多种细菌物种，例如，不同属，种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的活力。在一个实施方式中，抗微生物肽能够抑制和/或降低2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种革兰氏阴性细菌菌株的活力。例如，抗体分子可以抑制和/或降低来自肠杆菌科的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如，泛抗性肠杆菌科)的活力，来自假单胞菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，来自不动杆菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，或其任何组合。在一个实施方式中，抗微生物肽能够抑制或降低以下的活力：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiellapneumoniae subsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(SalmonellaparatyphiB)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphiA)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，抗微生物肽能够抑制或降低以下的活力：屎肠球菌(Enterococcus faecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。本文所述的抗微生物肽可具有以下属性中的一种或多种(例如，两种，三种或全部)：强细菌抑制活性，强杀细菌活性，低红细胞(RBC)溶血活性或低细胞毒性(例如，脱靶毒性)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小抑制浓度(MIC)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小杀细菌浓度(MBC)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有等于或大于1(例如，大于4∶1，8∶1，16∶1，24∶1或32∶1)的PLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，PLC是裂解50％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4∶1(例如，大于8∶1，16∶1，24∶1或32∶1)的MLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，MLC是裂解100％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。
在一个实施方式中，抗微生物肽是α-螺旋肽。在一个实施方式中，抗微生物肽具有两个或更多个交联的氨基酸残基。例如，抗微生物肽中的两个半胱氨酸残基可以是交联的，例如化学交联的。尽管不希望受理论束缚，但据信在一个实施方式中，交联抗微生物肽中的两个或更多个氨基酸残基可增强α-螺旋构象，增强血清稳定性和/或增加抗微生物效力。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽，例如，在血清中，比不具有两个或更多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽稳定至少2，3，4，5，6，7，8，9或10倍。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽比不具有两个或更多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽的MIC低至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，98％或99％。
在一个实施方式中，抗微生物肽与抗体分子，例如，本文所述的抗体分子偶合(例如，融合)，例如，以形成抗体分子-药物偶联物(ADC)。
以下标准可用于选择候选抗微生物肽：广谱(例如，针对多种细菌病原体的活性)，α-螺旋二级结构(例如，易于以功能形式表达)，通过膜破坏的作用机制(例如，杀细菌和/或与小分子的协同作用)，体内稳定性(例如，在人血清中稳定)，并且适应N-末端修饰(例如，以C-末端抗体偶联物起作用)。
本文所述的抗微生物肽可含有本身不具有抗微生物活性的序列。在一个实施方式中，抗微生物肽包含接头序列。在一个实施方式中，抗微生物肽包含分选酶供体序列。
在一个实施方式中，单独的抗微生物肽不结合LPS，例如LPS的核心区。
在一个实施方式中，抗体分子的重链包含第一分选酶受体序列，抗体分子的轻链包含第二分选酶受体序列。在一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第一分选酶识别序列，包含(GS)6LPETGGG(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列。在另一个实施方式中，分选酶受体序列，例如第二分选酶受体序列，包含P(G4S)2LPETGGSG(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与本文所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-258中的任一个相差不超过1，2，3，4或5个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由本文所述的氨基酸序列组成，例如SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-258中的任一个，或其一部分，例如其功能片段(例如，省略了N末端G残基中的一个或多个(例如，两个，三个，四个或更多个))。例如，可以省略SEQ ID NO：101，147，152-154，156或163-164中任一个的前三个N-末端G残基。在一个实施方式中，一个或多个(例如，两个，三个，四个或更多个)N-末端G残基的存在不会降低或显著降低抗微生物肽的活性。
在一个实施方式中，肽包含以下氨基酸序列：RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)，GGGRGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：80)，GGGGRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：101)或GRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：102)。
在一个实施方式中，抗微生物肽是装订的抗微生物肽。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，例如在血清中，装订可以增加稳定性，降低非特异性结合，或者两者。例如，在Alexander等，J.Am.Chem.Soc.，2013，135(16)，5946-5949和实施例7中描述了示例性装订方法。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含表4所述的氨基酸序列或由其组成。在另一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与表4所述的氨基酸序列或其部分，例如，其功能性片段相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-258的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：257的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：258的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：101的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：147的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：152的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：153的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：154的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：156的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，包含抗微生物肽的ADC能够降低铜绿假单胞菌效价至少约3log(例如，约1.5、2、2.5、3、3.5或4log)，例如，以MIC的约4(例如，约2、3、4、5、6、7)倍或更大的肽水平。在一个实施方式中，包含抗微生物肽的ADC破坏细菌，例如，铜绿假单胞菌的膜。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：163的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：164的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：156和246-258中任一个的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：246的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：247的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：248的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：249的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：250的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：251的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：252的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：253的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：254的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：255的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：256的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是D-氨基酸。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，抗微生物肽中一个或多个(例如，全部)D-氨基酸的存在可以增加抗微生物肽或ADC例如在血清(例如，人血清)中的稳定性，例如，与含有一个或多个(例如，全部)L-氨基酸的其他方面相同的抗微生物肽相比。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是L-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个D-氨基酸和一个或多个L-氨基酸。例如，表4中所述的抗微生物肽中的任何氨基酸残基可以是D-氨基酸或L-氨基酸。
表4.示例性抗微生物肽的氨基酸序列
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MAL：马来酰亚胺；EG3：三(乙二醇)
在一个实施方式中，ADC包含肽，该肽包含以下氨基酸序列：RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)，GGGRGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：80)，GGGGRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：101)或GRFKRFRKKFKKLFKKLSPVIPLLHLG(SEQ ID NO：102)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由选自以下的氨基酸序列组成：RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG(SEQ ID NO：68)，GIGKFLKKAKKFGKAFVKILKK(SEQ ID NO：69)，KKLLKWLKKLL(SEQ ID NO：72)，RLGNFFRKAKKKIGRGLKKIGQKIKDFLGNLVPRTES(SEQ IDNO：74)，GIGKHVGKALKGLKGLLKGLGES(SEQ ID NO：94)，GRRKRKWLRRIGKGVKIIGGAALDHL(SEQID NO：95)，GGLRSLGRKILRAWKKYGPQATPATRQ(SEQ ID NO：96)，IKWKKLLRAAKRIL(SEQ ID NO：97)，IGKKWKRIVKRIKKFLRKL(SEQ ID NO：98)，ILGKIWKIKKLF(SEQ ID NO：99)或RLGDILQKAREKIEGGLKKLVQKIKDFFGKFAPRTES(SEQ ID NO：100)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由选自本文(例如，表4中)所述的肽序列的氨基酸序列组成。在一个实施方式中，抗微生物肽是本文所述的抗微生物肽的类似物，例如，以增强抗菌肽的一种或多种生物物理学特性。在一个实施方式中，抗微生物肽是肽297(P297)的类似物，例如(D)-P297。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)包含带电残基(例如精氨酸或赖氨酸)突变为不带电荷的残基(例如丙氨酸或苏氨酸)。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)包含R至A，R至T突变，R至S突变或其组合。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)包含K至A，K至T突变，K至S突变或其组合。在一个实施方式中，抗微生物肽在C-或N-末端或在靠近C-或N-末端的位置(例如，距离C-或N-末端不超过1，2，3，4，5或6个氨基酸)包含阴离子肽。在一个实施方式中，阴离子肽的长度为约2至15，3至14，4至13，5至12，6至11，7至10，8至9，2至13，2至11，2至9，2至7，2至5，12至15，9至15，6至15，3至15，4至9，5至8或6至7个氨基酸残基。在一个实施方式中，抗微生物肽包含AAA序列，例如N-末端并且与阴离子肽序列相邻。在一个实施方式中，抗微生物肽，例如，(D)P-297具有与P297大致相同的活性(例如，杀伤铜绿假单胞菌)。在一个实施方式中，抗微生物肽，例如，(D)P-297，在血清中比P297更稳定。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)降低铜绿假单胞菌效价超过约3log(例如，2、2.5、3、3.5或4log)，例如，在MIC的4倍或更大肽水平下。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)具有比MIC大超过10倍的裂解水平。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)在体外试验中有高治疗指数。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)显示的对哺乳动物细胞(例如，293T)的细胞毒性比MIC大约200倍。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P297类似物)的L-氨基酸被D-氨基酸取代(例如，(D)-P297)。在一个实施方式中，其中L-氨基酸被D-氨基酸取代的抗微生物肽，例如，(D)一P297，已经相对于(L)-P297降低了蛋白酶灵敏度和/或增加了血清稳定性。在一个实施方式中，其中L-氨基酸被D-氨基酸取代的抗微生物肽，例如，(D)-P297，与P297具有大致相同，或基本上相同的活性(例如，杀伤铜绿假单胞菌)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由选自表4中所述的肽序列的氨基酸序列组成。在一个实施方式中，抗微生物肽包含肽297(P297)或肽369(P369)的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQID NO：156的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：257的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含D-氨基酸或由其组成，例如，如本文所述。在一个实施方式中，抗微生物肽(例如，P369或P297)与抗体分子(例如，VSX)偶联。在一个实施方式中，ADC(例如，VSX-1或VSX-2)具有杀菌活性。在一个实施方式中，ADC(例如，VSX-1或VSX-2)显示出相对于参比ADC降低的细胞毒性。在一个实施方式中，ADC(例如，VSX-1或VSX-2)相对于参比ADC具有改善的生物分布。在一个实施方式中，ADC(例如，VSX-1或VSX-2)相对于参比抗体增加鼠铜绿假单胞菌肺部感染模型的存活率，如实施例11所述。
抗体分子-药物偶联物
如本文所用，术语“抗体分子-药物偶联物”或ADC是指与非抗体部分，例如治疗剂或标记物，例如抗微生物肽偶合的抗体分子。抗体分子可以直接或间接地，例如通过接头与非抗体部分偶联。
在一个实施方式中，抗体分子通过共价键与非抗体部分偶联。在一个实施方式中，抗体分子通过肽键与非抗体部分偶联。在一个实施方式中，抗体分子与非抗体部分的偶合由分选酶介导。在一个实施方式中，抗体分子和非抗体部分的偶合形成融合蛋白。在一个实施方式中，抗体分子和非抗体部分形成融合蛋白。在一个实施方式中，融合蛋白包含抗体分子(例如，重链，轻链或两者)与非抗体部分之间的接头。在一个实施方式中，抗体分子通过非肽键与非抗体部分偶联。在一个实施方式中，抗体分子不通过非肽键与非抗体部分偶联。在一个实施方式中，非抗体部分也称为“荷载物(payload)”。
在一个实施方式中，非抗体部分与抗体分子的主链偶联。在另一个实施方式中，非抗体部分与抗体分子的侧链偶联。在一个实施方式中，非抗体部分是肽(例如抗微生物肽)，并且抗体分子与肽的主链(例如抗微生物肽)偶合。在一个实施方式中，非抗体部分是肽(例如抗微生物肽)，并且抗体分子与肽的侧链(例如抗微生物肽)偶合。
在一个实施方式中，两个或更多个(例如，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个)非抗体部分(例如，抗微生物肽)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，四个非抗体部分(例如，抗微生物肽)与抗体分子偶合。例如，非抗体部分可以是相同的，或者至少一些非抗体部分彼此不同。在一个实施方式中，非抗体部分(例如，抗微生物肽)以二价形式与抗体分子偶合。在另一个实施方式中，非抗体部分(例如，抗微生物肽)以四价形式与抗体分子偶合。
在一个实施方式中，ADC包含结合细菌的抗体分子(例如革兰氏阴性细菌)。在一个实施方式中，ADC包含与LPS结合的抗体分子，例如在革兰氏阴性细菌的外膜上。在一个实施方式中，ADC包含本文所述的抗体分子。
在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，ADC包含表1或3中描述的抗体分子的VH区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，ADC包含表1或3中描述的抗体分子的VL区的一个，两个或三个CDR(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)。在一个实施方式中，采用Kabat或Chothia的CDR定义，ADC包含表1或3中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个或三个)CDR和/或VL区的一个或多个(例如两个或三个)CDR。
在一个实施方式中，ADC包含表1或3中所述的一个，两个或三个VH CDR。在一个实施方式中，ADC包含表1或3中所述的一个，两个或三个VL CDR。在一个实施方式中，ADC包含表1或3中所述的一个或多个(例如，两个或三个)VH CDR和/或一个或多个(例如，两个或三个)VL CDR。
在一个实施方式中，ADC包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，ADC包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VL区的一个，两个，三个或四个框架。在一个实施方式中，ADC包含表1或3中所述抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的VH区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架和/或VL区的一个或多个(例如两个，三个或四个)框架。
在一个实施方式中，ADC包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区。在一个实施方式中，ADC包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的轻链可变区。在一个实施方式中，ADC包含表1或3中描述的抗体分子(例如，mAb001，A001-25，hWN01，hWNv1，3E7，3G1，2C7或3D6，或任何人源化mAb001)的重链可变区和轻链可变区。
在一个实施方式中，ADC包含具有表1或3中所述氨基酸序列的重链可变区。在一个实施方式中，ADC包含具有表1或3中所述氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方式中，ADC包含具有表2中所述氨基酸序列的重链可变区和具有表1或3中所述氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方式中，本文所述的抗体分子或ADC包含VL残基R100和/或VH残基R101和/或R103的一个或多个(例如，1、2或3)保守取代。在一个实施方式中，保守取代中的一个或多个包括对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VL残基R100的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VH残基R101的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。在一个实施方式中，抗体分子或ADC包括对VH残基R103的保守取代(例如，对除精氨酸以外的带正电的氨基酸(例如，赖氨酸或组氨酸)的突变)。
在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。在一个实施方式中，抗体分子包含由表2中所述的核苷酸序列编码的重链可变区和由表2中所述的核苷酸序列编码的轻链可变区。
在一个实施方式中，ADC包含重链恒定区。在一个实施方式中，ADC包含轻链恒定区。在一个实施方式中，ADC包含重链恒定区和轻链恒定区。在一个实施方式中，ADC包含本文表1或3中所述抗体分子的重链恒定区、轻链恒定区、以及重链和轻链可变区。在一个实施方式中，ADC包含重链恒定区，轻链恒定区和可变区，其包含表1或3中所述的抗体分子的一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR。
在一个实施方式中，ADC能够结合两种或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的革兰氏阴性细菌。能够结合两种或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的革兰氏阴性细菌的抗体分子或ADC具有几种有利特性。例如，一种疗法可用于治疗，预防或诊断多种细菌感染。另外，医生无需确定哪种细菌属、种、亚种和/或菌株感染患者以确定适当的治疗。因此，在一个实施方式中，ADC能够独立地以高亲和力结合不同属，种，亚种和/或菌株的2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种革兰氏阴性细菌。例如，抗体分子可以高亲和力独立地结合来自肠杆菌科的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如，泛抗性肠杆菌科)，来自假单胞菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，来自不动杆菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，或其任何组合。在一个实施方式中，ADC能够结合：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniaesubsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，ADC能够结合以下一种或多种：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，ADC能够与一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或更多)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，ADC能够与一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或更多)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
在一个实施方式中，ADC结合LPS上的线性或构象表位。在另一个实施方式中，ADC结合LPS上的核心戊糖区域。在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬活性，例如，通过本文所述的调理吞噬试验测定。在一个实施方式中，ADC具有调理吞噬杀伤活性，例如，在约20μg/mL的ADC下，例如在吞噬细胞存在下。
在一个实施方式中，ADC包含抗微生物肽，例如，本文所述的抗微生物肽，例如，其具有表4中所述的氨基酸序列。在另一个实施方式中，抗微生物肽包含氨基酸序列或由氨基酸序列组成，该氨基酸序列与与表4中所述的氨基酸序列或其部分，例如其功能片段(例如，省略了一个或多个(例如，两个，三个，四个或更多个)N-末端G残基)相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％，或100％同源性。在一个实施方式中，抗微生物肽包含或由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-258中任一个氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，ADC包含一个或多个(例如，两个，三个，四个，五个，六个，七个，八个或更多个)抗微生物肽，每个抗微生物肽与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-258中任一个氨基酸序列相差不超过1个，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个或10个氨基酸残基，或与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性的氨基酸序列。在一个实施方式中，ADC包含或由4个或更多个抗微生物肽，各抗微生物肽包含氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164，或246-258中任一个氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与其具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。在一个实施方式中，ADC包含或由四个或更多个抗微生物肽，各抗微生物肽包含SEQ ID NO：67-80，94-102，147-156，158-159，163-164或246-258中的任一个所述的氨基酸序列组成。在一个实施方式中，抗微生物肽包含羧酰胺基团(例如，C-末端羧酰胺官能团)。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是D-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是D-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40或更多个)L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的氨基酸残基的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％是L-氨基酸。在一个实施方式中，抗微生物肽中的所有氨基酸残基都是L-氨基酸。
在一个实施方式中，抗微生物肽包含一个或多个D-氨基酸和一个或多个L-氨基酸。
在一个实施方式中，ADC能够抑制和/或降低不同属，种，亚种和/或菌株的2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多种细菌(例如，革兰氏阴性细菌)的活力。例如，抗体分子可以抑制和/或降低来自肠杆菌科的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌(例如，克雷伯氏菌，肠杆菌，志贺氏菌，埃希氏菌，沙门氏菌，耶尔森氏菌或柠檬酸杆菌，例如，泛抗性肠杆菌科)的活力，来自假单胞菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，来自不动杆菌的不同物种，亚种和/或菌株的一种或多种细菌，或其任何组合。在一个实施方式中，ADC能够抑制或降低以下的活力：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiellapneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiellapneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigelladysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonellacholeraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphiB)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphiA)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuissubsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuissubsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuissubsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobactersedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersinia frederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，ADC能够抑制或降低以下一种或多种的活力：屎肠球菌(Enterococcus faecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
在一个实施方式中，ADC能够与一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10种或更多)铜绿假单胞菌菌株结合。在另一个实施方式中，ADC能够与一种或多种(例如，2，3，4，5，6种或更多)多重耐药性铜绿假单胞菌菌株结合。
尽管不希望受理论束缚，适于本文所述的ADC的抗微生物肽可至少部分基于以下属性中的一种或多种(例如，两种，三种或全部)选择：强细菌抑制活性，强杀细菌活性，低红细胞(RBC)溶血活性或低细胞毒性(例如，脱靶毒性)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小抑制浓度(MIC)。在一个实施方式中，抗微生物肽对于本文所述的细菌菌株，例如大肠杆菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC27853或两者具有小于100μg/ml，例如小于90，80，70，60，50，40，30，20，10或5μg/ml的最小杀细菌浓度(MBC)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有等于或大于1(例如，大于4∶1，8∶1，16∶1，24∶1或32∶1)的PLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，PLC是裂解50％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。在一个实施方式中，抗微生物肽具有低溶血活性，例如对于革兰氏阴性细菌(例如，本文所述的革兰氏阴性细菌)具有大于4∶1(例如，大于8∶1，16∶1，24∶1或32∶1)的MLC与MIC比率，例如，分别通过红细胞溶血测定和MIC测定确定。在一个实施方式中，MLC是裂解100％红细胞所需要或要求的浓度(例如，最小浓度)。
在一个实施方式中，抗微生物肽是α-螺旋肽。在一个实施方式中，抗微生物肽具有两个或更多个交联的氨基酸残基。例如，抗微生物肽中的两个半胱氨酸残基可以是交联的，例如化学交联的。尽管不希望受理论束缚，但据信在一个实施方式中，交联抗微生物肽中的两个或更多个氨基酸残基可增强α-螺旋构象，增强血清稳定性和/或增加抗微生物效力。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽，例如，在血清中，比不具有两个或更多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽稳定至少2，3，4，5，6，7，8，9或10倍。在一个实施方式中，具有两个或更多个交联的氨基酸残基的抗微生物肽比不具有两个或更多个交联的氨基酸残基的其他相同的抗微生物肽的MIC低至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，98％或99％。
在一个实施方式中，ADC通过酶促合成产生。例如，可以通过表达抗体分子(例如标记的抗体分子)，肽的化学合成(例如抗微生物肽)和肽与抗体分子的酶促连接来产生ADC。在一个实施方式中，实现90％或更高，例如92％或更高，95％或更高，97％或更高，或99％或更高的反应效率。在另一实施方式中，该方法还包括纯化ADC。在一个实施方式中，纯化后产率为60％或更高(例如，70％或更高，75％或更高，80％或更高，90％或更高，或95％或更高)。
在一个实施方式中，ADC结合至细菌表面。在另一个实施方式中，ADC结合至分泌的囊泡。在另一个实施方式中，ADC结合至细菌表面和分泌的囊泡。在一个实施方式中，通过电子显微镜检测结合。在一个实施方式中，与结合来自第二属，种或亚种的细菌相比，ADC具有增强的与第一属，种或亚种的细菌的结合。在一个实施方式中，与结合除铜绿假单胞菌以外的细菌(例如，大肠杆菌或克雷伯氏菌属)相比，ADC具有增强的与铜绿假单胞菌的结合。
在一个实施方式中，ADC包含：a)结合脂多糖(LPS)的抗体分子；和b)抗微生物肽，
其中抗体分子包含VH和VL，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)，并且VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，并且其中ADC或抗体分子包含：
(a)HCDR1，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：109，145或146中任一个的氨基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：110，138，140或144中任一个的氨基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：111，139，141，142或143中任一个的氨基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列，或
(b)HCDR1，其包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：110，138，140或144中任一个的氨基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：111，139，141，142或143中任一个的氨基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列；和
其中抗微生物肽包含或由以下组成：
(i)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：101的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(ii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：147的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(iii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：152的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(iv)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：153的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(v)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：154的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(vi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：156的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(vii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：163的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(viii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：164的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(ix)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：246的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(x)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：247的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：248的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：249的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xiii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：250的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xiv)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：251的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xv)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：252的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xvi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：253的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xvii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：254的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xviii)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：255的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xix)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：256的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；
(xx)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：257的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性；或
(xxi)氨基酸序列，其与SEQ ID NO：258的氨基酸序列相差不超过1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个氨基酸残基，或者与之具有至少80％，85％，90％，95％，97％或100％的同源性。
在一个实施方式中，ADC包括(a)和(i)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(ii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(iii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(iv)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(v)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(vi)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(vii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(viii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(ix)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(x)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xi)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xiii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xiv)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xv)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xvi)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xvii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xix)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xx)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xxi)。
在一个实施方式中，ADC包括(b)和(i)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(ii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(iii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(iv)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(v)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(vi)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(vii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(viii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(ix)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(x)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xi)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xiii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xiv)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xv)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xvi)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xvii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xix)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xx)。在一个实施方式中，ADC包括(a)和(xviii)。在一个实施方式中，ADC包括(b)和(xxi)。
位点特异性偶联
本文描述的ADC可以通过位点特异性偶联方法制备。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，位点特异性偶联可提供优于用于制备ADC的常规偶联化学的某些优点。例如，位点特异性偶联，包括例如位点特异性荷载物设置，允许控制药物-抗体比率和偶联位点，这可以影响ADC的性质，例如ADC的药代动力学(PK)，配置或功效。此外，用于位点特异性偶联的接头组合物也可以影响ADC的性质。
用于制备ADC的位点特异性偶联方法可以产生同质产物，例如具有受控的药物负载，简化的分析和改善的治疗指数。通常，这些方法在抗体骨架上的限定位置引入反应性氨基酸，并使用这些氨基酸的独特化学或酶促反应性来偶联荷载物(如例如Junutula等，NatBiotechnol.2008；26(8)：925-32；Strop等，Chem Biol.2013；20(2)：161-7；Axup等，ProcNatl Acad Sci U SA.2012；109(40)：16101-6；Kung Sutherland等，Blood.2013；122(8)：1455-63中所述)。
示例性的位点特异性偶联方法也描述于例如Drake等，Bioconjug Chem.2014；25(7)：1331-41，美国专利号9,238,878和国际公开号WO 2010/096394，其全部内容通过引用纳入本文。例如，蛋白质位点选择性修饰的化学酶法可以使用天然存在的甲酰甘氨酸生成酶(FGE)将甲酰甘氨酸(fGly)残基引入蛋白质骨架中。可设计接头以选择性地与fGly的醛侧链反应以与蛋白质形成稳定的C-C键。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的方法可以产生位点特异性偶联的ADC，例如，具有受控的化学计量和清洁分析，其允许设计具有期望功效和降低的毒性的ADC。
如本文所述，在一个实施方式中，位点特异性ADC产生基于将非天然氨基酸甲酰甘氨酸(fGly)掺入抗体序列中。例如，为了掺入fGly，可以使用标准分子生物学克隆技术将短的共有序列(例如，CXPXR，其中X通常是丝氨酸，苏氨酸，丙氨酸或甘氨酸)插入抗体重链或轻链的所需位置，例如保守区域(Rabuka等，Nat Protoc.2012；7(6)：1052-67)。共有序列可以插入抗体分子的多个位置，例如，在重链中(例如，在CH1，CH2或CH3中，或在C-末端)，在轻链中(例如，在恒定区或在C-末端)，或两者。可以将多个共有序列(例如，2，3，4，5，6，7，8或更多个相同，相似或不同的共有序列)插入抗体分子中。
标记的抗体分子可以在共表达甲酰甘氨酸生成酶(FGE)的细胞中重组产生。FGE可以将标签内的半胱氨酸共翻译转化成fGly残基，产生与醛标签一起表达的抗体分子(Carison等，J Biol Chem.2008；283(29)：20117-25)。标签中的醛官能团可以用作生物正交偶联的化学柄(Sletten等，Angew Chem Iht Ed Engl.2009；48(38)：6974-98)。在一个实施方式中，使用肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接将荷载物连接至fGly，在药物荷载物(例如，抗微生物肽)和抗体分子之间形成稳定的共价C-C键(Agarwal等，BioconjugChem.2013；24(6)：846-51)。该C-C键通常对ADC遇到的生理学相关挑战是稳定的，例如在循环和FcRn再循环期间(例如，蛋白酶，低pH或还原剂)。PCT公开号WO 2018/136626的图26中描述了示例性偶联方法和相关化学(通过引用全文纳入本文)。
本文的公开内容提供了包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。本公开还提供了醛标记的抗体分子，其可以与抗微生物肽共价和位点特异性偶合以提供含药物的支架。本文所述的ADC可用于根据本文所述的方法治疗或预防细菌感染(例如，与革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌相关的感染)或相关病症。本文还描述了产生本文所述的ADC或醛标记的抗体分子的方法。
醛标签
通常，醛标签可以基于衍生自硫酸酯酶基序的任何氨基酸序列，其能够被甲酰甘氨酸生成酶(FGE)转化为含有甲酰甘氨酸(FGly)。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，FGE的作用以序列特异性方式指导，例如，FGE作用于硫酸酯酶基序，并且该硫酸酯酶基序可位于抗体分子的任何区域内。在一个实施方式中，FGE介导的硫酸酯酶基序的转化是位点特异性的，例如，FGE作用于硫酸酯酶基序的氨基酸序列处。在另一个实施方式中，FGE作用于硫酸酯酶基序的能力是序列背景独立的，例如，FGE转化硫酸酯酶基序的半胱氨酸/丝氨酸的能力独立于其中在抗体分子中呈现硫酸酯酶基序的序列背景。
醛标签的最小硫酸酯酶基序长度通常不超过6个氨基酸残基，通常长度为约5或6个氨基酸残基。醛标签可以包含5或6个残基的最小硫酸酯酶基序，或者可以更长并且包含最小的硫酸酯酶基序，其可以通过一个或多个另外的氨基酸残基侧接在基序的N-和/或C-末端侧。可以使用例如5或6个氨基酸残基的醛标签，以及超过5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20或更多个氨基酸残基的更长氨基酸序列。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，希望通过最小化插入，缺失，取代(替代)或添加(例如，添加到N-或C-末端)的氨基酸残基的数量来最小化抗体分子的天然氨基酸序列的修饰程度。在一个实施方式中，醛标签需要对抗体分子的氨基酸序列的少于16，15，14，13，12，11，10，9，8或7个氨基酸残基进行修饰(插入，添加，缺失，取代/替代)。
在一个实施方式中，可用于如本文所述的醛标签的硫酸酯酶基序具有下式：
X1Z1X2Z2X3Z3 (I)
其中：
Z1是半胱氨酸或丝氨酸(也可以用(C/S)表示)；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基(也可以用(P/A)表示)；
Z3是碱性氨基酸，并且可以是精氨酸(R)，赖氨酸(K)或组氨酸(H)，通常是赖氨酸)，或脂肪族氨基酸(丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，异亮氨酸(I)或脯氨酸(P)，通常为A，G，L，V或I；
X1存在或不存在，并且当存在时，可以是任何氨基酸，但通常是脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，不同于芳族氨基酸或带电荷的氨基酸)，通常为L，M，V，S或T，更通常为L，M，S或V，条件是当硫酸酯酶基序位于抗体链的N末端时，X1存在；和
X2和X3可独立地为任何氨基酸，但通常为脂肪族氨基酸，极性不带电荷的氨基酸或含硫氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V，G或C，更通常是S，T，A，V或G。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序具有下式：
X1Z1X2Z2X3R (Ia).
通常，在FGE对硫酸酯酶基序起作用后，Z1被氧化以产生2-甲酰甘氨酸(FGly)残基。在FGE介导的转化和与抗微生物肽的反应性伴侣反应之后，上式中Z1处的FGly位置与抗微生物肽共价结合。在一个实施方式中，反应性伴侣是α-亲核试剂，例如氨氧基或酰肼基，并且供给抗体分子与抗微生物肽的连接，例如通过肟或腙键。在一个实施方式中，抗体分子和抗微生物肽不通过酰胺键连接，如可以在基于重组融合蛋白技术的其他药物偶联物中发现的。
在一个实施方式中，醛标签存在于抗体链的N末端以外的位置，并且上式的X1由抗体分子的天然氨基酸序列的氨基酸残基提供。在一个实施方式中，当存在于抗体分子链的N-末端以外的位置时，硫酸酯酶基序具有下式：
(C/S)X1(P/A)X2Z3 (II)
其中X1和X2可独立地为任何氨基酸，但通常为脂肪族氨基酸，极性不带电荷的氨基酸或含硫氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V或C，更通常是S，T，A或V。式II中的Z3如上定义。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序具有下式：
(C/S)X1(P/A)X2R (IIa)
硫酸酯酶基序可以在序列的N-和C-末端的一个或两个处含有额外的残基，例如，使得醛标签包括硫酸酯酶基序和“辅助基序”。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序在C-末端(例如，在上式中的精氨酸残基后)包含任选的辅助基序AALLTGR(SEQ ID NO：170)，SQLLTGR(SEQ ID NO：171)，AAFMTGR(SEQ ID NO：172)，AAFLTGR(SEQ ID NO：173)，SAFLTGR(SEQ IDNO：174)，ASILTGK(SEQ ID NO：175)，VSFLTGR(SEQ ID NO：176)，ASLLTGL(SEQ ID NO：177)，ASILITG(SEQ ID NO：178)，VSFLTGR(SEQ ID NO：176)，SAIMTGR(SEQ ID NO：179)，SAIVTGR(SEQ ID NO：180)，TNLWRG(SEQ ID NO：181)，TNLWRGQ(SEQ ID NO：182)，TNLCAAS(SEQ IDNO：183)，VSLWTGK(SEQ ID NO：184)，SMLLTG(SEQ ID NO：185)，SMLLTGN(SEQ ID NO：186)，SMLLTGT(SEQ ID NO：187)，ASFMAGQ(SEQ ID NO：188)或ASLLTGL(SEQ ID NO：177)(参见，例如，Dierks等，(1999)EMBO J 18(8)：2084-2091)，或GSLFTGR(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的1，2，3，4，5，6或所有7个连续残基。在一个实施方式中，醛标签不含有氨基酸序列CGPSR(M/A)S(SEQ ID NO：190)或CGPSR(M/A)(SEQ ID NO：191)，其可以作为膦酸单酯水解酶中的天然氨基酸序列存在。
通常选择醛标签的硫酸酯酶基序以能够通过选择的FGE进行转化。在一个实施方式中，FGE存在于其中表达醛标记的抗体分子的宿主细胞中。在另一个实施方式中，FGE在无细胞方法中与醛标记的抗体分子接触。
通常，易受真核FGE转化的硫酸酯酶基序含有半胱氨酸和脯氨酸(例如，分别在上述式I中的Z1和Z2处的半胱氨酸和脯氨酸(例如，X1CX2PX3R)；上述式II中的CX1PX2R)并且被“SUMF1型”FGE修饰(如例如Cosma等，Cell 2003，113，(4)，445-56；Dierks等，Cell 2003，113，(4)，435-44中所述)。易受原核FGE转化的硫酸酯酶基序在硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸或丝氨酸，以及脯氨酸(例如，上述式I中Z1处的半胱氨酸或丝氨酸，以及Z2处的脯氨酸(例如，上述式II中的X1(C/S)X2PX3R)；(C/S)X1PX2R)分别通过“SUMF1型”FGE或“AtsB型”FGE进行修饰(例如，如Szameit等，JBiol Chem 1999，274，(22)，15375-81中所述)。易受原核FGE转化的其他硫酸酯酶基序在硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸或丝氨酸，以及脯氨酸或丙氨酸(例如，Z1处的半胱氨酸或丝氨酸，以及Z2处的脯氨酸或丙氨酸，例如，SX1AX2R；X1CX2PX3Z3；X1SX2PX2Z3；X1CX2AX3Z3；X1SX2AX3Z3；CX1PX2Z3；SX1PX2Z3；CX1AX2Z3；SX1AX2Z3(在上述式I)；CX1PX2Z3(在上述式II)；X1CX2PX3R；X1SX2PX2R；X1CX2AX3R；X1SX2AX3R(在上述式Ia)；CX1PX2R；SX1PX2R；CX1AX2R；SX1AX2R(在上述式IIa)，并且易于修饰，通过例如可以通过厚壁菌门(例如，产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens))的FGE进行修饰，如Berteau等，J.Biol.Chem.2006；281：22464-22470所述)。
在一个实施方式中，FGE是真核FGE(例如，哺乳动物FGE，例如人FGE)，并且硫酸酯酶基序具有下式：
X1CX2PX3Z3 (III)
其中：
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，但通常是脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，不同于芳族氨基酸或带电荷的氨基酸)，通常为L，M，S或V，条件是当硫酸酯酶基序位于抗体链的N末端时，X1存在；
X2和X3独立地是任何氨基酸，但通常是脂族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V，G或C，更通常为S，T，A，V或G；和
Z3是碱性氨基酸(可以不是精氨酸(R)，并且可以是赖氨酸(K)或组氨酸(H)，通常是赖氨酸)，或脂肪族氨基酸(丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，异亮氨酸(I)或脯氨酸(P)，通常为A，G，L，V或I，其中式IIIa中的Z3为精氨酸(R)。
在一个实施方式中，硫酸酯酶基序具有下式
X1CX2PX3R (IIIa).
例如，示例性硫酸酯酶基序包括但不限于LCTPSR(SEQ ID NO：169)，MCTPSR(SEQID NO：192)，VCTPSR(SEQ ID NO：193)，LCSPSR(SEQ ID NO：194)，LCAPSR(SEQ ID NO：195)，LCVPSR(SEQ ID NO：196)，LCGPSR(SEQ ID NO：197)，ICTPAR(SEQ ID NO：198)，LCTPSK(SEQID NO：199)，MCTPSK(SEQ ID NO：200)，VCTPSK(SEQ ID NO：201)，LCSPSK(SEQ ID NO：202)，LCAPSK(SEQ ID NO：203)，LCVPSK(SEQ ID NO：204)，LCGPSK(SEQ ID NO：205)，LCTPSA(SEQID NO：206)，ICTPAA(SEQ ID NO：207)，MCTPSA(SEQ ID NO：208)，VCTPSA(SEQ ID NO：209)，LCSPSA(SEQ ID NO：210)，LCAPSA(SEQ ID NO：211)，LCVPSA(SEQ ID NO：212)和LCGPSA(SEQID NO：213)。
如下文更详细描述的，转化的醛标记的抗体分子与感兴趣的部分的反应性伴侣反应，以提供感兴趣的部分与转化的醛标记的抗体分子的FGly残基之间的偶联，以及产生修饰的多肽(例如，本文所述的ADC)。具有修饰的醛标签的修饰的抗体分子通常通过包含具有下式的修饰的硫酸酯酶来描述：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3 (I′)
其中：
FGly’是具有共价连接的部分(例如，本文所述的抗微生物肽)的甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基(也可以用(P/A)表示)；
式I′中的Z3是碱性氨基酸，并且可以是精氨酸(R)(如式Ia′中)，赖氨酸(K)或组氨酸(H)，通常是赖氨酸)，或脂肪族氨基酸(丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，异亮氨酸(I)或脯氨酸(P)，通常为A，G，L，V或I；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，但通常是脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，不同于芳族氨基酸或带电荷的氨基酸)，通常为L，M，V，S或T，更通常为L，M或V，条件是当硫酸酯酶基序位于抗体链的N末端时，X1存在；和
其中X2和X3可独立地为任何氨基酸，但通常为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸(例如，除芳族氨基酸或带电荷的氨基酸外)，通常为S，T，A，V，G或C，更通常是S，T，A，V或G。
在一个实施方式中，修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3R (Ia′)
示例性的转化的硫酸酯酶基序包括但不限于L(FGly)TPSR(SEQ ID NO：214)，M(FGly)TPSR(SEQ ID NO：215)，V(FGly)TPSR(SEQ ID NO：216)，L(FGly)SPSR(SEQ ID NO：217)，L(FGly)APSR(SEQ ID NO：218)，L(FGly)VPSR(SEQ ID NO：219)，L(FGly)GPSR(SEQ IDNO：220)，I(FGly)TPAR(SEQ ID NO：221)，L(FGly)TPSK(SEQ ID NO：222)，M(FGly)TPSK(SEQID NO：223)，V(FGly)TPSK(SEQ ID NO：224)，L(FGly)SPSK(SEQ ID NO：225)，L(FGly)APSK(SEQ ID NO：226)，L(FGly)VPSK(SEQ ID NO：227)，L(FGly)GPSK(SEQ ID NO：228)，L(FGly)TPSA(SEQ ID NO：229)，M(FGly)TPSA(SEQ ID NO：230)，V(FGly)TPSA(SEQ ID NO：231)，L(FGly)SPSA(SEQ ID NO：232)，L(FGly)APSA(SEQ ID NO：233)，L(FGly)VPSA(SEQ ID NO：234)，和L(FGly)GPSA(SEQ ID NO：235)。
通过与FGly残基的醛反应共价偶合至抗微生物肽的示例性抗体分子可包括具有上述氨基酸序列但具有修饰的FGly(以上由FGly′表示)代替未修饰的FGly的那些抗体分子。
修饰抗体分子以含有醛标签
可以通过插入(例如，在天然氨基酸序列内提供5或6个氨基酸残基插入)和/或通过添加(例如，在抗体链的N-或C-末端)可以在抗体分子(例如，抗体重链或轻链或其片段)中提供醛标签。还可以通过用醛标签的连续氨基酸序列完全或部分取代抗体分子的天然氨基酸残基来提供醛标签。例如，通过用醛标签的相应氨基酸残基取代天然氨基酸序列的1，2，3，4，5或6个氨基酸残基，可以在抗体分子中提供5或6个氨基酸残基的异源醛标签。
可以使用重组分子遗传技术来修饰抗体分子以包括一个或多个醛标签，例如，以产生编码所需醛标记的多肽的核酸。或者，可以使用非重组技术添加醛标签，例如，使用天然化学连接或假天然化学连接，例如，将醛标签添加到多肽的C末端(例如在美国专利号6,184,344，6,307,018，6,451,543和6,570,040；和Rush等，(2006年1月5日)OrgLett.8(1)：131-4中所述)。
醛标签可以位于抗体分子内的任何合适位置。在一个实施方式中，醛标签的位点对于通过FGE转化并随后在FGly处修饰而言是可及的，或可(例如，通过使多肽变性)使其可及。抗体分子可包括多个醛标签，例如2，3，4，5，6，7，8或更多个醛标签。在一个实施方式中，所述多个醛标签中的至少两个(例如所有)醛标签是相同的。在另一个实施方式中，所述多个醛标签中的至少一个醛标签与所述多个醛标签中的另一个醛标签不同。
含多个醛标签的抗体分子
多个醛标签可以位于醛标记的抗体分子中，例如，以将标签分布在抗体分子的表面上。
在一个实施方式中，醛标签在抗体分子中通过抗体分子天然的氨基酸残基间隔开。在另一个实施方式中，醛标签通过接头间隔开，其中接头具有与抗体分子异源的氨基酸序列。
在一个实施方式中，醛标签在醛标记的抗体分子中以2，3，4或更多个醛标签的多联构建体提供，其中表达构建体因此编码修饰的抗体分子的连续序列中2，3，4或更多个硫酸酯酶基序，其中硫酸酯酶基序通过接头间隔开。例如，可以选择接头以在醛标签之间提供柔性，从而允许共价结合的抗微生物肽的旋转，例如，以增强ADC表面上生物活性抗微生物肽的呈递。此类接头也可用于醛标签不以多联体形式提供的情况，例如，其中醛标签位于抗体链的C-或N-末端。醛标签，包括以多联体形式提供的那些标签，可以位于抗体链的C末端处或附近，抗体链的N末端处或附近，和/或抗体分子的一个或多个溶剂可及的环处。
可以例如根据所用的醛标签，多联体中醛标签的数量，所需的柔性程度或其组合来选择接头。接头的长度可以变化，例如，约2-50，3-25，4-23，5-20，6-18，7-16，8-14或9-12个氨基酸。示例性柔性接头包括但不限于甘氨酸聚合物(G)n，甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n，(GSGGS)n(SEQ ID NO：236)和(GGGS)n(SEQ ID NO：237)，其中n是至少1的整数)，甘氨酸-丙氨酸聚合物，丙氨酸-丝氨酸聚合物和其他柔性接头，例如振荡器钾通道的系链。甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物是令人感兴趣的，因为这两种氨基酸都是相对非结构化的，因此可以用作组分之间的中性系链。甘氨酸聚合物是特别令人感兴趣的，因为甘氨酸比甚至丙氨酸获得显著更多的空间，并且更长侧链带来限制少得多的tan残基(参见Scheraga，Rev.Computational Chem.11173-142(1992))。示例性的柔性接头包括但不限于GGSGG(SEQ ID NO：238)，GSGSG(SEQ ID NO：239)，GSGGG(SEQ ID NO：240)，GGGSG(SEQ IDNO：241)或GSSSG(SEQ ID NO：242)。其他接头可以由非氨基酸键组成。聚乙二醇(PEG)重复(例如，EG2，EG3，EG4或EG6)是特别令人感兴趣的，因为PEG重复与生物分子几乎没有非特异性结合。
含有接头的多联体醛标签构建体可以通过以下通式描述：T1-Ln-T2，其中T1和T2是如本文所述的相同或不同的醛标签(例如，式I，Ia，I′，Ia′，II，IIa，III和IIIa)，L是连接肽，并且n是1或更大的整数，例如2，3，4，5，6，7，8或更大。含有接头的多联体醛标签的示例性氨基酸序列是LCTPSRGGGGLCTPSR(SEQ ID NO：243)，其中半胱氨酸(C)通过FGE的作用被修饰成FGly，并且可以与含有反应性伴侣的抗微生物肽反应以提供如本文所述的共价结合的抗微生物肽。
醛标签可以定位在抗体分子中以在折叠时考虑其结构(例如，在无细胞环境中，通常是无细胞生理环境中)，例如，在折叠的抗体分子中的溶剂可及位点处提供醛标签。因此，溶剂可及的醛标签可以在折叠的、未转化的醛标记的抗体分子中可及，以可接近FGE以将丝氨酸或半胱氨酸转化为FGly和/或转化为反应性伴侣试剂用于偶联抗微生物肽。当醛标签位于溶剂可及位点时，可以在不需要使蛋白质变性的情况下进行无细胞FGE介导的转化和通过与反应性伴侣反应的部分修饰。溶剂可及位点还可包括当在宿主细胞中表达时在细胞外或细胞内细胞表面暴露的多肽区域。
因此，可以在独立地选自例如溶剂可及的N-末端，溶剂可及的N-末端区域，溶剂可及的C-末端，溶剂可及的C-末端区域和/或环结构的位点处提供一个或多个醛标签。在一个实施方式中，醛标签位于抗体链的C末端以外的位点。在一个实施方式中，两个或更多个醛标签位于重链中，例如，在CH1，CH2或CH3中的一个，两个或全部中。在一个实施方式中，抗体分子的轻链不含醛标签。
在一个实施方式中，醛标签位点位于亲本抗体分子(例如，天然存在的位点)中翻译后修饰的位点。例如，醛标签可以在天然抗体分子中的糖基化(例如N-糖基化，O-糖基化)，磷酸化，硫酸化，泛素化，酰化，甲基化，异戊烯化，羟基化或羧化的位点处引入。在一个实施方式中，翻译后修饰的位点被工程改造(例如，通过重组技术)并且不在抗体分子中天然存在。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子包含醛标记的Fc片段。具有单个和多个醛标签的示例性醛标记的小鼠IgG1 Fc片段，包括含有醛标签多联体的示例性醛标记的Fc片段，其具有通过接头间隔开的两个醛标签，描述于美国专利号9,238,878中。
甲酰甘氨酸生成酶(FGE)
甲酰甘氨酸生成酶(FGE)是将硫酸酯酶基序中的半胱氨酸或丝氨酸氧化成FGly的酶。如本文所用，FGE包括将在硫酸酯酶基序中的半胱氨酸(C)转化为FGly的酶，以及将硫酸酯酶基序(也称为Ats-B样)中的丝氨酸(S)转化为FGly的酶。
可以根据醛标签中存在的硫酸酯酶基序选择用于促进多肽醛标签的硫酸酯酶基序中半胱氨酸或丝氨酸向FGly转化的FGE。FGE对于其中表达醛标记的多肽的宿主细胞可以是天然的，或者可以对宿主细胞进行遗传修饰以表达合适的FGE。真核生物硫酸酯酶通常在其硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸并且被“SUMF1型”FGE修饰(Cosma等，Cell 2003，113，(4)，445-56；Dierks等，Cell 2003，113，(4)，435-44)。原核生物硫酸酯酶通常在其硫酸酯酶基序中含有半胱氨酸或丝氨酸，并分别通过“SUMF1型”FGE或“AtsB型”FGE进行修饰(Szameit等，J Biol Chem 1999，274，(22)，15375-81)。已经在结核分枝杆菌(例如，GenBank登录号NP-215226(gi：15607852)和国际公开号WO 2008/036350)中，在后口动物中，包括脊椎动物和棘皮动物(例如，Pepe等，Cell 2003；113，445-456，Dierks等，(2003)Cell 113，435-444；Cosma等，Hum.Mutat.2004；23，576-581)描述了FGE。编码多个FGE的核酸是本领域已知的并且容易获得(例如，Preusser等，J.Biol.Chem.2005；280(15)：14900-10；Fang等，JBiol.Chem.2004；79(15)：14570-8；Landgrebe等，Gene.2003；316：47-56；Dierks等，FEBSLett.1998；423(1)：61-5；Dierks等，Cell.2003；113(4)：435-44；Cosma等，Cell 2003；113(4)：445-56；Baenziger Cell 2003；113(4)：421-2(综述)；Dierks等，Cell.2005；121(4)：541-52；Roeser等，Proc NatlAcadSci USA 2006；103(1)：81-6；Sardiello等，HumMol.Genet.2005；14(21)：3203-17；GenBank登录号NM182760；国际公开号WO 2004/072275和WO 2008/036350)。在一个实施方式中，硫酸酯酶基序与人FGE(例如，SUMF 1型FGE，如Cosma等，Cell 2003；113，445-56；Dierks等，Cell 2003；113，435-44中所述)相容。在一个实施方式中，醛标记的抗体分子在表达FGE的人细胞中或在宿主细胞中表达，所述宿主细胞通常是哺乳动物细胞，经遗传修饰以表达人FGE。当使用无细胞方法转化含硫酸酯酶基序的抗体分子时，可以使用分离的FGE。
转化和修饰醛标签的方法
存在于醛标记的抗体分子中的醛标签的转化可以通过基于细胞的方法或无细胞方法完成。
在一个实施方式中，醛标记的抗体分子的醛标签的转化可以通过在含有合适的FGE的细胞中表达醛标记的蛋白质来实现。例如，醛标签的半胱氨酸或丝氨酸的转化可以在宿主细胞中翻译期间或之后发生。宿主细胞的FGE对于宿主细胞可以是内源的，或者宿主细胞可以是针对与宿主细胞异源的合适的FGE重组的。FGE表达可以由FGE基因内源的表达系统提供(例如，表达由存在于宿主细胞的天然FGE基因中的启动子和其他控制元件提供)，或者可以由来自重组表达系统的表达系统提供，其中FGE编码序列与异源启动子可操作地连接以提供组成型或诱导型表达。适于用于实现反应性伴侣部分与醛标记的抗体分子的偶联的条件类似于Mahal等，Science 1997；276(5315)：1125-8中描述的那些。
在另一个实施方式中，醛标记的抗体分子的醛标签的无细胞转化可以通过在适于将醛标签的硫酸酯酶基序的半胱氨酸或丝氨酸转化为FGly的合适条件下使醛标记的抗体分子与FGE接触来实现。例如，编码醛标记的多肽的核酸可以在合适的FGE存在下在体外转录/翻译系统中表达，以提供转化的醛标记的抗体分子的产生。
或者，可以在缺乏合适的FGE的宿主细胞中重组产生或通过合成产生后分离分离的未转化的醛标记的抗体分子。然后将分离的醛标记的抗体分子与合适的FGE在一定条件下接触以提供醛标签转化。醛标记的抗体分子可以通过本领域已知的方法展开(例如，使用加热，调节pH，离液剂(例如尿素)，有机溶剂(例如，烃：辛烷，苯或氯仿)和用合适的FGE接触的变性蛋白质。然后醛标记的抗体分子在合适的条件下重折叠。
类似地，醛标记的抗体分子的转化醛标签的修饰可以通过基于细胞或无细胞的方法完成。例如，转化的醛标记的抗体分子可以从生产来源(例如，重组宿主细胞生产，合成生产)中分离，并在适于提供反应性伴侣的部分与醛标签的FGly偶联的条件下与含反应性伴侣的抗微生物肽接触。
修饰肽以含有供与2-甲醛甘氨酸反应的反应性伴侣的方法
可以修饰待与醛标记的抗体分子偶联的抗微生物肽，以掺入反应性伴侣用于与醛标记的抗体分子的FGly残基的醛反应。
由于醛标记的抗体修饰方法与常规化学方法相容，因此可以使用多种市售试剂中的任何一种来完成偶联。例如，许多感兴趣的部分的氨氧基，酰肼，肼或氨基硫脲衍生物是合适的反应性伴侣，并且易于获得或可以使用标准化学方法产生。
在一个实施方式中，反应性部分(例如，氨氧基或酰肼)可位于N-末端区域，N-末端，C-末端区域，C-末端或肽内部的位置。例如，肽可以由Boc保护的前体合成。肽的氨基可以与包含羧酸基团和氧基-N-Boc基团的化合物(例如3-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基)丙酸)反应。包含羧酸基团和氧基-N保护基团的化合物的其他变化可包括不同数目的亚烷基接头中的碳和亚烷基接头上的取代基。肽的氨基与包含羧酸基团和氧基-N保护基团的化合物之间的反应通过标准肽偶联化学发生。可以使用的肽偶联试剂的实例包括但不限于DCC(二环己基碳二亚胺)，DIC(二异丙基碳二亚胺)，二对甲苯酰基碳二亚胺，BDP(1-苯并三唑二乙基磷酸-1-环己基-3-(2-吗啉基乙基)碳二亚胺)，EDC(1-(3-二甲基氨基丙基-3-乙基-碳二亚胺盐酸盐)，氰尿酰氟，氰尿酰氯，TFFH(四甲基氟代脲六氟磷酸盐)，DPPA(二苯基磷酰肼)，BOP(苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐)，HBTU(O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐)，TBTU(O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐)，TSTU(O-(N-琥珀酰亚胺基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐)，HATU(N-[(二甲基氨基)-1-H-1，2，3-三唑并[4，5，6]-吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物)，BOP-C1(双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯)，PyBOP((1-H-1，2，3-苯并三唑-1-基氧基)-三(吡咯烷基)鏻四氟磷酸盐)，BrOP(溴代三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐)，DEPBT(3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮)，PyBrOP(溴代三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐)。
可以对包含N-保护基团的肽进行脱保护以暴露氨基-氧基官能团。例如，根据环酰胺基团的标准脱保护条件，发生N-氧基琥珀酰亚胺基团的脱保护。脱保护条件可以在Greene和Wuts，《有机化学中的保护性基团》(Protective Groups in OrganicChemistry)，第三版，1999，约翰威利父子公司(John Wiley&Sons)，纽约州和Harrison等中找到。某些脱保护条件包括肼试剂，氨基试剂或硼氢化钠。例如，Boc保护基团的脱保护可以用TFA进行。用于脱保护的其他试剂包括但不限于肼，甲基肼，苯肼，硼氢化钠和甲胺。产物和中间体可通过常规方法纯化，例如HPLC纯化。
在一个实施方式中，偶联反应在低于7的pH下进行，pH为约5.5，约6或约6.5。当用活细胞中存在的醛标记的抗体分子进行偶联时，选择条件以在生理学上相容。例如，可以暂时滴加pH足够的时间以允许反应发生，但是在具有醛标签的细胞(例如，约30分钟至1小时)耐受的时间内。在细胞表面上进行醛标记的抗体分子修饰的生理条件可以类似于在带有细胞表面叠氮化物的细胞的修饰中用于酮-叠氮化物反应的那些(例如，美国专利号6,570,040)。
示例性位点特异性ADC
在一个实施方式中，ADC用一种或多种共价偶合的抗微生物肽进行位点特异性修饰。含反应性伴侣的抗微生物肽与蛋白质的醛标签的反应的位点特异性允许产生具有多个化学偶联位点的蛋白质，因此提供用于产生ADC的支架，所述ADC具有所需的肽荷载物/蛋白质比率。在一个实施方式中，醛标签在醛标记的蛋白质中的相对位置可以被设计为在最终ADC的表面上提供共价结合的抗微生物肽的所需呈递，从而允许控制所展示的肽荷载物的空间取向。
在一个实施方式中，用于将抗微生物肽连接至抗体分子的醛标签的化学修饰的位点特异性质可用于提供包含基本上同源的群体ADC的组合物。此类ADC可以提供对药物递送的化学计量的控制。这种同质群体包括群体中的60％或更多，例如70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，95％或更多的ADC具有相同的抗微生物肽荷载物与抗体分子比率的那些群体。
在一个实施方式中，本公开的ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和一种或多种共价结合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含下式的修饰的硫酸酯酶基序：
X1(FGly′)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
/>
HIPS化学，
其中J1是共价结合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0到40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸，和
其中当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价结合的药物。可以如上所述进一步定义X1，X2，Z2，X3和Z3。
在一个实施方式中，ADC通过HIPS化学连接形成(例如，如PCT公开号WO 2018/136626中所述，其通过引用全文纳入本文)。
在一个实施方式中，可以设计醛标记的蛋白质以提供多个化学偶联位点，例如，提供用于产生ADC的支架，所述ADC具有所需的药物荷载物/蛋白质比率。本公开的ADC通常包含至少2个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)具有共价结合的抗微生物肽的修饰的硫酸酯酶基序。本公开的ADC可以在ADC中提供4个或更多个，5个或更多个，或6个或更多个共价结合的抗微生物肽。因此，本公开的ADC包括肽荷载物与抗体分子比率为至少2∶1，至少3∶1，至少4∶1，至少5∶1，至少6∶1，至少7∶1，或至少8∶1的那些。
醛标签在醛标记的抗体分子中的相对位置可以设计为在最终ADC的表面上提供所需的共价偶合的抗微生物肽的呈递。该特征允许控制所展示的药物荷载物在最终ADC表面上的空间取向。含有多个醛标签的ADC，其可包括由如本文所述的柔性接头间隔开的多联体醛标签，可提供例如更大的药物荷载物：抗体分子比率和增强的药物向存在ADC的生理环境中的呈递。在一个实施方式中，ADC可以描述为修饰的抗体分子，其用与抗体分子共价偶合抗微生物肽“装饰”，例如通过肟或腙键与抗体分子的主链连接。
例如，醛标签可以位于ADC中抗体链的N-末端，抗体链的C-末端和抗体分子的溶剂可及的环处。如上所述，醛标签可任选地与接头，例如柔性接头连接。多个醛标签可以定位于抗体分子或抗体链的特定区域(例如，在溶剂可及的环，N-末端区域(包括N-末端)，C-末端区域(包括C-末端)中的一个或多个中提供)，或可以分布在折叠的修饰的抗体分子的溶剂可及的表面区域上。在一个实施方式中，至少一个醛标签位于重链恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个，两个或全部)，轻链恒定区或两者。
在一个实施方式中，醛标签间隔开，使得最终ADC具有共价偶合的抗微生物肽，其间隔距离足以避免共价偶合的抗微生物肽之间的相互作用，例如，使得肽不相互接触或以其他方式干扰他们各自的生物活性。
制备ADC的方法
本公开内容提供了含有FGly的醛标记的抗体分子与含有反应性伴侣的抗微生物肽的偶联以提供具有所需肽荷载物与抗体分子比率的ADC的方法。
在一个实施方式中，本文所述的方法涉及在适于促进醛标记的抗体分子的FGly的醛与肽的反应性伴侣之间反应的条件下，在反应混合物中将含FGly的醛标记的抗体分子与含反应性伴侣的抗微生物肽(例如，含氨氧基或酰肼的肽)组合，从而产生具有与抗体分子的主链共价偶合的肽的ADC的反应产物，例如，通过肟键，酰肼键或其他醛特异性化学物质，例如还原胺化或维蒂希反应。
在产生醛标记的抗体分子后，使用本领域可用的多种技术中的任一种(例如，色谱法，例如HPLC，FPLC或免疫亲和纯化)分离。在一个实施方式中，抗体分子含有免疫标签(例如，His标签，FLAG标签)，通常位于N-或C-末端以促进在与药物偶联之前的分离和纯化。用于与抗微生物肽的偶联反应的含有FGly的醛标记的抗体分子可以以变性形式提供，或者可以在反应混合物中联合之前折叠。通常，含有FGly的醛标记的抗体分子以折叠形式在偶联反应混合物中提供。当从表达醛标记的抗体分子和相容的FGE的细胞获得时，含有FGly的醛标记的抗体分子可以折叠形式从细胞中分离，或者在分泌时从培养上清液中分离。需要时，蛋白质折叠的方法在本领域中是可获得的，并且可以容易地应用于本文所述的方法。
在一个实施方式中，分离具有FGly残基的醛标记的蛋白质。在一个实施方式中，纯化具有FGly残基的醛标记的蛋白质。在一个实施方式中，醛标记的蛋白质在反应混合物(例如，在缓冲溶液中)中与含有反应性伴侣的抗微生物肽组合。缓冲溶液可以处于生理或接近生理的pH，例如约5至7的pH，通常约6.5的pH。在一个实施方式中，含有反应性伴侣的抗微生物肽在反应混合物中以相对于含FGly的醛标记的蛋白质的醛部分过量提供，通常至少2，3，4，5，6，7，8，9，10倍或更多倍过量，例如，以促使反应完成。在向反应混合物中加入含反应性伴侣的抗微生物肽后，在合适的时间和温度条件下搅拌混合物(例如在室温下搅拌约2小时)。将得到的ADC与反应混合物分离，并可使用标准技术(例如色谱法，例如HPLC或FPLC)进一步纯化。
替代的ADC连接方法
本文所述的ADC可以通过许多不同的方法产生。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过赖氨酸偶联与抗体分子偶合(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应基团)。在一个实施方式中，抗体分子直接偶联抗微生物肽上的活化氨基酸。在另一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为硫醇反应性基团，并且具有硫醇反应性基团的抗体分子与硫醇化的抗微生物肽连接。在另一个实施方式中，抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，抗微生物肽通过链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)与抗体分子偶合。在一个实施方式中，抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子被连接至巯基反应性抗微生物肽。
在一个实施方式中，使用非天然氨基酸(例如，用醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)将抗微生物肽偶合至抗体分子。在一个实施方式中，使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接(Kolb等，Angew Chem Int Ed Engl.2001；40(11)：2004-2021；Evans AustralianJournal of Chemistry.2007；60(6)：384-395)。
在一个实施方式中，使用可生物降解的聚合物(例如，赖氨酸或巯基)将抗微生物肽偶合至抗体分子。在一个实施方式中，将抗微生物肽连接到可生物降解的聚合物上，并将聚合物连接到抗体分子上。
本文还提供了通过本文所述的方法制备的ADC。
评价候选物
本文所述的ADC可以使用许多体外测定来评估，包括例如1)杀细菌活性，2)调理吞噬活性，和3)膜破裂。
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，作用的双重机制，直接杀灭和调理吞噬活性(OPA)可以允许本文所述的ADC在正常或中性粒细胞减少患者中起作用。调理抗体通常通过与细菌表面结合，募集补体和吞噬细胞(例如嗜中性粒细胞)，然后吞噬细菌起作用。免疫受损的患者感染的风险最高，并且通常具有非常低水平的吞噬细胞。提供直接杀细菌作用机制的抗菌方法可以克服基于抗体的疗法的一些局限性，这些疗法集中于调理吞噬作用或补体介导的杀灭作为作用机制。还据信，在一个实施方式中，通过引入直接的，快速作用的杀细菌功能，本文所述的ADC可以克服几种耐药性机制。
杀细菌测定：ADC的直接杀灭活性可以针对两个充分描述的铜绿假单胞菌实验室菌株(PA14和PA01)和不少于三个铜绿假单胞菌临床菌株(包括MDR和泛耐药性菌株)进行测量。这些测定在不存在补体或效应细胞的情况下进行。该测定中的活性可以提供对ADC的固有杀灭活性的深入理解。
调理吞噬作用测定：可以针对与杀细菌活性相同的铜绿假单胞菌菌株测量ADC的杀灭活性，但这次存在补体和新鲜纯化的多形核白细胞。该试验中的活性可以提供关于ADC通过调理吞噬作用募集中性粒细胞和诱导细菌杀灭的能力的信息。
膜破裂：可以针对在杀细菌和调理吞噬作用测定中使用的相同铜绿假单胞菌菌株进行染料释放/摄取测定。测量ADC破坏细菌外膜的能力。该测定中的活性可以提供对ADC的分子作用机制的深入理解。
评价候选物：调理吞噬作用试验(OPA)
本文所述的抗体分子和抗体分子-药物偶联物(ADC)的候选物可例如通过调理吞噬作用试验(opsonophagocytosis assay)在体外评价它们的调理吞噬活性。
抗体介导的补体依赖性调理作用的试验描述于，例如，Hemachandra等，InfectImmun.2001；69(4)：2223-2229。简而言之，可以通过流式细胞术测量抗体分子或ADC候选物调理细菌以供人多形核白细胞(PMN)摄取的能力。细菌经生长，热杀灭，和FITC标记。可以通过将标记的细菌与抗体分子或抗体分子-药物偶联物一起孵育来进行调理吞噬，其中有或没有来自无丙种球蛋白症患者的1％人血清作为补体来源。在含有6％葡聚糖和0.2％葡萄糖的PBS中洗涤细菌，然后将其重悬于含有0.1％明胶的汉克斯平衡盐溶液中。可以通过健康成人志愿者的静脉穿刺从外周人血液中分离PMN。将PMN重新悬浮以达到107个细胞/ml的浓度，并用每毫升细胞10μl 10-6稀释的N-甲酰基-Met-Leu-Phe(FMLP；加利福尼亚州圣卡洛斯的半岛实验室有限公司(Peninsula Laboratories，San Carlos，CA))活化30分钟。将PMN添加到每个调理的细菌调理细菌样品中，在37℃孵育，通过差速离心与游离细菌分离，并重悬于PBS中。PMN的单色流式细胞术分析可以使用FACScan和CellQuest软件(加利福尼亚州芒廷维尤的BD公司(Becton Dickinson，Mountain View，CA))进行，并且吞噬作用以每个样品的10,000PMN的平均荧光的相对单位表示。为了证明观察到的调理吞噬作用与细菌杀灭相关，可以使用另一种试验，其中将25,000CFU的活细菌与无丙种球蛋白症人血清，各种浓度的抗体分子或抗体分子-药物偶联物和106个如上所述获得的新鲜人PMN在RPMI培养基中混合(400ml终体积)。在37℃孵育90分钟的开始和结束时获取样品，之后稀释细菌，然后铺板用于细菌计数。
在一个实施方式中，可以针对与杀细菌活性相同的铜绿假单胞菌菌株测量ADC的杀灭活性，但这次存在补体和新鲜纯化的多形核白细胞。该试验中的活性可以提供关于ADC通过调理吞噬作用募集中性粒细胞和诱导细菌杀灭的能力的信息。
实施例1中还描述了示例性的调理吞噬作用试验。
评价候选物：最小抑制浓度确定
本文所述的抗微生物肽和抗体分子-药物偶联物(ADC)的候选物可例如通过确定最小抑制浓度(MIC)在体外评价其微生物抑制活性。
在一个实施方式中，MIC在人血清(例如，50％人血清)存在下确定，并且有时在本文中称为hsMIC。在一个实施方式中，在磷酸盐缓冲盐水(PBS)存在下确定MIC。在一个实施方式中，MIC或hsMIC基于每个ADC为基础确定。在一个实施方式中，MIC或hsMIC以每荷载物或抗微生物肽为基础确定。在一个实施方式中，hsMIC与MIC的比率等于或小于2，例如，等于或小于1.5或1。
确定MIC的方法也描述于例如临床和实验室标准研究所，2012，《对有氧生长的细菌进行稀释抗菌药敏试验的方法；批准的标准》(Methods for dilution antimicrobialsusceptibility tests for bacteria that grow aerobically；approved standard)，第9版，M07-A8，第29卷，第2期，临床和实验室标准研究所，宾夕法尼亚州韦恩(Wayne，PA)。例如，可以根据CLSI指南，在96孔微量滴定板中使用2倍连续化合物稀释确定MIC。简言之，将化合物在母板上在水中稀释，然后将2μl冲压至测定板，每个待测试菌株一个板。将细菌菌株在37℃下在琼脂平板上过夜继代培养。过夜平板用于在0.85％盐水中制备0.5McFarland培养物。将这些浓缩的培养物在生长培养基中以1：200稀释至约5×105个细胞/ml。所有测定板每孔接受100μ1稀释的培养物。将所有板置于37℃过夜。18小时后，使用镜面板读数器读取板并反射白炽灯光。在一个实施方式中，MIC可以定义为抑制生长至少80％的化合物的最低浓度。当通过眼睛阅读时，MIC及其以上的孔应该看起来没有生长。
用于确定MIC的示例性方法也描述于实施例2中。
评价候选物；体外细胞因子释放和Fc功能研究
可以在体外可溶性细胞因子释放测定中评估ADC刺激细胞因子释放的能力。例如，来自健康志愿者的人全血可以在37℃下与三种浓度的抗体分子和合适的对照一起孵育24小时。完成孵育后，可以分析样品中的一组细胞因子。相对于其他商业抗体，细胞因子释放曲线的没有影响可用作该研究的通过标准。
可以表征结合和介导效应功能的抗体分子的特征，例如抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性，以确认候选ADC具有基于其对Fcγ受体和C1q的经典同种型结合特征的预期Fc效应功能。
动物模型
可以例如使用各种动物模型在体内评估本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)和抗微生物肽。例如，动物模型可用于测试本文所述的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物在减少或抑制细菌感染中的功效。动物模型也可用于例如调查副作用，原位测量抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的浓度，证明在受控条件下细菌感染和细菌之间的相关性。
可用于评估本文所述的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的示例性动物模型包括但不限于基础抗微生物筛选模型(例如，如Zak和O′Reilly，Antimicrob.AgentsChemother.1991；35(8)：1527-1531中所述)；初级啮齿动物感染模型(例如，如Marra和Girard，Curr.Protoc.Pharmacol.2006；第13章：单元13A.4中所述)；离体模型(例如，如Zak和O′Reilly，Antimicrob.Agents Chemother.1991；35(8)：1527-1531中所述)；单参数或判别模型(例如，如Zak和O′Reilly，Antimicrob.Agents Chemother.1991；35(8)：1527-1531中所述)；伤口愈合的小鼠模型(例如，如Samy等，Methods Mol.Biol.2011；716：245-265中所述)；用于评估细菌迁移和定植的兔模型(例如，如Allan等，J.Biomed.Biotechnol.2012；2012：921617中所述)。抗微生物药物的药代动力学-药效学建模描述于例如Nielsen和Friberg，Pharmacol.Rev.2013；65(3)：1053-1090。
可用于评估本文所述抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的示例性动物类型包括但不限于：小鼠、大鼠、兔、豚鼠以及猴。各种免疫抑制方法可用于增强接种用细菌的毒力。这些方法包括例如靶向骨髓(例如，通过辐射)，靶向中性粒细胞(例如，使用细胞抑制剂)，靶向巨噬细胞(例如，使用粘蛋白或面包酵母)，靶向补体(例如，使用眼镜蛇毒因子)，靶向促吞噬素(例如，通过脾切除术)，靶向免疫球蛋白(例如，使用抗Ig)，靶向T淋巴细胞(例如，通过胸腺切除术)，或靶向白细胞介素(例如，使用抗体或化学化合物)。可能影响体内试验中的抗细菌活性的其他考虑因素包括，例如接种物大小，毒力，体内生长或生成时间，治疗时间，给药方法，药代动力学/药效学，和体内耐药性的发展。
药物组合物和试剂盒/药盒
在一些方面，本公开提供了组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括与药学上可接受的运载体一起配制的如本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽。
如本文所用，“药学上可接受的运载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等等。优选地，运载体可适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、直肠、脊柱，透皮或表皮给予(例如，通过注射或输注)。在一个实施方式中，药物组合物中少于约5％(例如少于约4％、3％、2％或1％)的抗体分子，ADC或抗微生物肽以聚集物形式存在。在另一些实施方式中，药物组合物中至少约95％(例如至少约96％、97％、98％、98.5％、99％、99.5％、99.8％或更多)的抗体分子，ADC或抗微生物肽以单体形式存在。在一个实施方式中，聚集物或单体水平通过色谱法(例如高效尺寸排阻色谱(HP-SEC))测定。
本文所述组合物可为各种形式。这些包括例如，液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如可注射和可输注溶液)、分散体或悬浮体、脂质体以及栓剂。合适的形式取决于目标给药模式以及治疗应用。通常合适的组合物为可注射或可输注溶液形式。合适的给药模式之一是胃肠道外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在一个实施方式中，抗体分子，ADC或抗微生物肽通过静脉内输注或注射给予。在一个实施方式中，抗体，ADC或抗微生物肽通过肌内或皮下注射给予。
本文所用术语“胃肠道外给药”和“经胃肠道外给予”表示除肠道和局部给药外的给药形式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下(subcapsular)、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注给药。
在制备和储存条件下，治疗性组合物通常应无菌和稳定。可将组合物配制成溶液、微乳剂、分散体、脂质体或适合高抗体浓度的其他有序结构。可根据需要将在合适溶剂中的所需量活性化合物(即抗体或抗体部分)与上述组分中的一种或组合掺混，然后进行过滤灭菌，从而制备无菌注射液。通常，分散系可通过将活性活化物加入含有碱性分散介质和上述其它所需成分的无菌载剂中来制备。在制备无菌注射液的无菌粉剂时，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，由之前无菌过滤的溶液得到活性组分和任何其它所需组分的粉末。可维持溶液的合适流动性，例如通过使用诸如卵磷脂的涂层、在分散剂情况下通过保持所需粒度以及通过使用表面活性剂。通过在组合物中包含延迟吸收的物质，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
抗体分子ADC或抗微生物肽可以通过多种方法给予。本领域中已知数种，并且对于许多治疗性、预防性或诊断性应用，适当的给药途径/模式是静脉内注射或输注。例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽通过静脉内输注给药的速度可小于10毫克/分钟；优选小于或等于5毫克/分钟来达到约1～100毫克/平方米的剂量，优选约5～50毫克/平方米，约7～25毫克/平方米，更优选约10毫克/平方米。本领域技术人员会明白，给药途径和/或方式根据所需结果而有所不同。在一个实施方式中，活性化合物可与运载体一起制备，该运载体将保护该化合物不被迅速释放，如控释制剂，包括植入体、透皮贴片和微包封递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。许多制备这类制剂的方法已获得专利，或为本领域技术人员所公知。参见例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems(《缓控释药物递送系统》)，J.R.Robinson编，Marcel Dekker公司，纽约，1978。
在一个实施方式中，可口服给予(例如与惰性稀释剂或可吸收食用运载体一起)抗体分子，ADC或抗微生物肽。抗体分子，ADC或抗微生物肽(以及按需的其他组分)也可容纳在硬或软壳明胶胶囊里、压缩成片剂、或直接掺混入对象的膳食中。对于口服治疗性给药，可将抗体分子，ADC或抗微生物肽与赋形剂混合，并以可摄取的片剂、口颊含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮剂、糖浆、薄片等形式使用。为了通过非胃肠道外给药途径的其他形式来给予抗体分子，ADC或抗微生物肽，可能需要用材料包覆化合物或将某种材料与该化合物共同给药，以防止该化合物失活。还可采用医疗装置来给予治疗性、预防性或诊断性组合物，本领域中已知数种此类装置。
给药方案经调整能提供所需反应(例如治疗、预防或诊断反应)。例如，可以给予单次次推注，一段时间内多个分剂量，或者根据治疗情况的紧急性成比例地降低或增加剂量。尤其有利的是配制成单位剂型的胃肠道外组合物以便于给药和剂量均一性。本文所用单位剂型是指适合作为待治疗对象的单位剂量的物理上离散的单元，各单元包含经测算产生所需治疗效果的预定量的活性化合物与所需药物运载体。本发明中剂量单位形式的规格取决于或直接依赖于(a)抗体分子，ADC或抗微生物肽的独特特性和待实现的具体治疗、预防或诊断效果，以及(b)此抗体分子，ADC或抗微生物肽配制相关领域关于应对个体敏感性的固有限制。
在一个实施方式中，将ADC作为单剂量给予于对象。本文所述的示例性ADC的体外研究证明，即使在不存在血清或效应细胞的情况下，对于铜绿假单胞菌，包括MDR菌株，在约10微克/mL或更低下具有快速杀细菌活性。此外，使用示例性ADC的体内研究证明了中性粒细胞减少的铜绿假单胞菌肺部感染模型中细菌计数的显著减少。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文描述的ADC的特异性和半衰期(例如，大约数天)可以允许ADC的单剂量给予，例如，病原体特异性抗菌药，针对铜绿假单胞菌，包括MDR/XDR菌株，同时促进抗菌药物管理，保留肠道微生物组，并限制耐药性的发展。
抗体分子，ADC或抗微生物肽的治疗、预防或诊断有效量的示例性非限制性范围为约0.1-100mg/kg，例如，0.1-50mg/kg或0.1-20mg/kg，例如，约1-10，1-5，5-10或1-3mg/kg，例如，约1，2，3，4，5，6，7，8，9或10mg/kg。例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽通过静脉内输注给药，速度可小于10毫克/分钟，例如小于或等于5毫克/分钟来达到约1～100毫克/平方米的剂量，例如约5～50毫克/平方米，约7～25毫克/平方米，约10毫克/平方米。需要注意的是，剂量值可能会根据待缓解病症的种类和严重程度而不同。需要理解，对于每个具体对象，应当随着时间根据个体需求以及给予组合物或监管组合物给予的人的专业判断来调节具体剂量方案，本文所列的剂量范围仅仅是示例性的，并不意在对所要求权利的组合物的范围或实施方式构成限制。
本文的药物组合物可包含“治疗有效量”、“预防有效量”或“诊断有效量”的抗体分子，ADC或抗微生物肽。
“治疗有效量”指的是以必要的剂量和持续时间段实现所需治疗结果的有效的量。抗体分子，ADC或抗微生物肽的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重等因素以及抗体或抗体部分在个体中引起所需反应的能力而不同。治疗有效量也是抗体分子，ADC或抗微生物肽的治疗有益效果胜过毒性或有害效果的量。相对于未治疗对象，“治疗有效剂量”通常使可测参数被抑制至少约20％，例如至少约40％，至少约60％或至少约80％。可测量的参数可以是例如细菌负荷，发热，头痛，肌肉或关节疼痛，皮疹，出血，血小板水平降低和血压降低。可以在预测减少，抑制或预防细菌感染的功效的动物模型系统中评估抗体分子，ADC或抗微生物肽抑制可测量参数的能力。或者，组合物的这种性质可以通过检测抗体分子，ADC或抗微生物肽抑制或降低细菌活力的能力来评估，例如通过本文所述的体外测定。
“预防有效量”指的是以必要的剂量和持续时间段实现所需预防结果的有效的量。通常，由于在疾病的早期阶段或之前在对象中使用预防剂量，预防有效量会比治疗有效量低。
“诊断有效量”指按照一定剂量和必要时程能够实现所需诊断效果的量。通常，诊断有效量是可体外、离体或体内诊断细菌感染或相关病症的量。
本公开内容还包括试剂盒/药盒，其包含本文所述的抗体分子，ADC或抗微生物肽。试剂盒/药盒可包括一种或多种其他要件，包括：使用说明；其他试剂，例如标记物、治疗剂、可用于将抗体分子、ADC或抗微生物肽螯合或偶联于标记物或治疗剂的试剂、辐射防护组合物；用于制备用于给药的抗体分子、ADC或抗微生物肽的装置或其他材料；药学上可接受的运载体；以及用于向对象给药的装置或其他材料。
核酸
本公开的特征还在于包含编码抗体分子(例如，抗体分子的重链和轻链可变区和CDR)的核苷酸序列的核酸，抗体分子-药物偶联物(例如，抗体分子-药物偶联物的重链和轻链可变区和CDR)，或抗微生物肽，如本文所述。
例如，本公开内容的特征在于分别编码选自本文公开的一种或多种抗体分子的抗体分子(例如表1或3的抗体分子)或抗体分子的一部分(例如表1或3的可变区)的重链和轻链可变区的第一和第二核酸。核酸可包含编码本文表中任何一个氨基酸序列的核苷酸序列，或与其基本相同的序列(例如，序列与本文表中所示序列至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，或与其相差不超过3，6，15，30或45个核苷酸)。
在一个实施方式中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述重链可变区具有本文表中列出的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。在一个实施方式中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述重链可变区具有本文表中列出的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。在一个实施方式中，核酸可包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR的核苷酸序列，所述重链可变区具有本文表中列出的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。
在一个实施方式中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述核酸具有表2中所示的核苷酸序列，与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。在一个实施方式中，核酸可包含编码来自轻链可变区的至少一个，两个或三个CDR的核苷酸序列，所述核酸具有表2中所示的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。在一个实施方式中，核酸可包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个，两个，三个，四个，五个或六个CDR的核苷酸序列，所述核酸具有表2中所示的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。
在一个实施方式中，核酸包含表2中所示的核苷酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。在一个实施方式中，核酸包含表2中所示的核苷酸序列的一部分或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。该部分可编码例如可变区(例如VH或VL)；一个、两个或三个或更多个CDR；或一个、两个、三个、四个或更多个框架区。
在一个实施方式中，核酸包含编码表4中所示的核苷酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含编码表4中所示的核苷酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)的核苷酸序列的一部分。
本文所述的核酸包括脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果是单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插有非核苷酸组分。多核苷酸聚合后可被进一步修饰，如通过与标记性组分偶联。核酸可为重组多核苷酸、或基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，即非天然存在或以非天然排列方式与另一多核苷酸相联。
在某些方面中，本申请的特征包括包含本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可存在于同一宿主细胞或非同一宿主细胞中的单个载体中或独立的多个载体中，详见下文。
载体
本文进一步提供了包含编码本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽的核苷酸序列的载体。在一个实施方式中，载体包含编码本文所述抗体分子的核苷酸。在一个实施方式中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
可采用许多种载体系统。例如，一类载体利用DNA元件，这些元件衍生自动物病毒例如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、痘苗病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯氏肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一类载体利用衍生自RNA病毒的RNA元件，所述RNA病毒为例如塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒和黄病毒。
此外，通过引入能够选择已转染宿主细胞的一种或多种标志物，可选择已将DNA稳定整合入其染色体中的细胞。该标志物可向营养缺陷型宿主提供例如营养缺陷型、杀生物剂(如抗生素)抗性或对重金属如铜等的抗性。选择性标志物基因可直接连接于待表达的DNA序列，或者通过共同转化引入同一细胞内。mRNA的优化合成也可能需要其它元件。这些元件可以包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
一旦制得用于表达的含构建体的表达载体或DNA序列，可将表达载体转染或导入合适的宿主细胞。可用各种技术实现之，例如原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情形下，可在培养基中使细胞生长，并筛选适当的活性。
培养所得转染细胞以及回收所产生的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的方法和条件是本领域技术人员已知的，且可基于本文的描述，根据所用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞进行改变或优化。
细胞
本公开还提供了宿主细胞，其包含编码如本文所述的抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物的核酸。例如，宿主细胞可以包含表2的核酸，与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严谨条件下杂交的序列)，或所述核酸之一的一部分。另外，宿主细胞可包含编码表1，3或8中所述的氨基酸序列的核酸，与其基本上同源的序列(例如，与其至少约80％，85％，90％，95％，99％或更多相同的序列)，或所述序列之一的一部分。
在一个实施方式中，宿主细胞经基因工程改造以包含编码抗体分子，ADC或抗微生物肽的核酸。
在一个实施方式中，宿主细胞是通过使用表达盒进行基因工程改造的。术语“表达盒”是指能够影响与此类序列相容的宿主中基因表达的核苷酸序列。此类表达盒可包括启动子、含或不含内含子的开放阅读框、以及终止信号。还可以采用实现表达所必需或有帮助的其他因子，例如诱导型启动子。
本公开还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。
细胞可为但不限于：真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于：Vero细胞、HeLa细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于：Sf9细胞。
抗体分子，抗体分子-药物偶联物，和抗微生物肽的用途
本文公开的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽，以及本文公开的药物组合物，具有体外，离体和体内治疗，预防和/或诊断应用。
在一个实施方式中，抗体分子，ADC或抗微生物肽抑制或降低细菌(例如革兰氏阴性细菌)的活力。例如，这些分子可以给予于培养，体外或离体的细胞，或给予于对象，例如人对象，例如体内，以抑制或降低细菌，例如革兰氏阴性细菌的活力。因此，在一个方面，本公开内容提供了治疗或预防对象中细菌感染的方法，包括向对象给予本文所述的抗体分子，ADC或抗微生物肽，从而治疗或预防细菌感染。例如，这些抗体分子可以给予于培养的细胞，例如，体外或离体，或在对象体内的细胞，例如体内，以治疗，预防和/或诊断细菌感染，或抑制或减少细菌感染。
本文所用术语“对象”旨在包括人和非人动物。在一个实施方式中，对象是人对象，例如感染细菌，例如致病细菌，例如革兰氏阴性细菌，或有被细菌，例如致病细菌，例如，革兰氏阴性细菌感染的风险的人类患者。术语“非人动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物。在一个实施方式中，对象是人。本文所述的方法和组合物适用于治疗感染细菌，例如引起疾病的细菌，例如革兰氏阴性细菌的人类患者。感染细菌，例如引起疾病的细菌，例如革兰氏阴性细菌的患者包括已经暴露于细菌但是(至少暂时)无症状的患者，患有细菌感染的患者，或患有与细菌感染相关的病症的患者。
治疗或预防细菌感染的方法
革兰氏阴性细菌在细菌的外膜上展示脂多糖(LPS)。尽管不希望受理论束缚，但在一个实施方式中，本文所述的抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)或抗微生物肽可以至少部分地通过结合至LPS来抑制或降低革兰氏阴性细菌的活力。
本文所述的抗体分子，ADC和抗微生物肽可用于治疗或预防细菌感染，以及与细菌感染相关的病症，病症或症状。
在一个实施方式中，细菌感染由以下细菌中的一种或多种引起：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)(例如，肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniaesubsp.ozaenae)，肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)或肺炎克雷伯氏菌鼻巩膜炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.rhinoscleromatis))，生癌肠杆菌(Enterobacter cancerogenous)，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)，霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，痢疾志贺氏菌(Shigelladysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)，索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)，大肠杆菌(Escherichia coli)(例如，大肠杆菌ATCC 11775，大肠杆菌ATCC 25922，大肠杆菌ATCC 35401，或大肠杆菌ATCC 43895)，弗格森埃希氏菌(Escherichiafergusonii)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)，猪霍乱沙门氏菌印度亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)，维尔肖氏沙门氏菌(Salmonella virchow)，乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)，甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)，猪霍乱沙门氏菌双相亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)，猪霍乱沙门氏菌豪顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)，塞氏柠檬酸杆菌(Citrobacter sedlakii)，布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)，魏氏柠檬酸杆菌(Citrobacter werkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)，杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)，弗氏耶尔森氏菌(Yersiniafrederiksenii)，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)，假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)，或其任意组合。
在一个实施方式中，细菌感染由以下一种或多种引起：屎肠球菌(Enterococcus向ecium)(例如，耐万古霉素(VRE)屎肠球菌)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(例如，耐甲氧西林(MRSA)金黄色葡萄球菌)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)(例如，多重耐药性(MDR)不动杆菌)，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)(例如，多药耐药性(MDR)铜绿假单胞菌，例如耐碳青霉烯铜绿假单胞菌)，肠杆菌(例如，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)或肠杆菌，例如，耐碳青霉烯肠杆菌(CRE))，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoaeae)(例如，耐药性淋病奈瑟氏球菌)，沙门氏菌(例如，耐药性沙门氏菌)，志贺氏菌(例如，耐药性志贺氏菌)，产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的细菌，或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(例如，耐药性结核分枝杆菌)。
可与细菌感染相关的示例性病症或病症包括但不限于肺炎(例如，社区获得性肺炎和医院获得性细菌性肺炎)，尿路感染(UTI)，败血症，脑膜炎，腹泻(如旅行者腹泻)，软组织感染，皮肤感染，菌血症，呼吸系统感染(如下呼吸道感染)，心内膜炎，腹腔感染，化脓性关节炎，骨髓炎，中枢神经系统感染，眼科感染，胆囊炎，胆管炎，脑膜炎(如新生儿脑膜炎)，伤寒，食物中毒，肠胃炎，肠热，志贺菌病，血流感染，腹腔内败血症，脑脓肿，脑膜炎，败血症(如，新生儿败血症)，关节感染，骨感染，胃肠道感染或伤口感染。
本文所述的某些抗体分子，ADC和抗微生物肽能够治疗至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，20，25，30，35，40，50，100，200或更多种不同属，种，亚种和/或菌株的细菌(例如，革兰氏阴性细菌)。因此，在一个实施方式中，当未进行测试以确定细菌的属，种，亚种和/或菌株，例如感染或致病细菌的类型可能是未知的时，将抗体分子，ADC或抗微生物肽给予于感染细菌感染或具有感染细菌感染风险的患者。
抗体分子，ADC或抗微生物肽通常以在患者系统中保持治疗有效水平的抗体分子，ADC或抗微生物肽的频度给药直至患者康复。例如，抗体分子，ADC或抗微生物肽的给药频度可实现足以使至少约1、2、5、10、20、30或40种抗体分子，ADC或抗微生物肽结合各自细菌的血清浓度。在一个实施方式中，抗体分子，ADC或抗微生物肽每1，2，3，4，5，6或7天给予。
给予各种抗体分子，ADC或抗微生物肽的方法是本领域中已知的，并且如下所述。所用抗体分子，ADC或抗微生物肽的合适剂量将取决于对象的年龄和体重以及所用的具体药物。
抗体分子或抗微生物肽可以单独使用或与第二种试剂偶联，例如抗菌剂，毒素或蛋白质，例如第二种抗细菌(例如抗LPS)抗体分子或抗微生物肽。该方法包括：给予需要该治疗的对象单独的抗体分子或抗微生物肽，或者与第二试剂偶联的抗体分子或抗微生物肽。抗体分子可用于递送多种治疗剂，例如毒素或抗病毒剂，或其混合物。
联合疗法
抗体分子，抗体分子-药物偶联物(ADC)和抗微生物肽可以与其他疗法组合使用。例如，组合疗法可包括与一种或多种另外的治疗剂共同配制和/或共同给予的抗体分子，ADC或抗微生物肽，例如抗细菌剂(包括抗生素或其他抗细菌抗体)，疫苗或增强免疫反应的药剂。在其他实施方式中，抗体分子，抗细菌肽或抗体分子-药物偶联物与其他治疗性治疗方式组合给予，例如静脉内补液，退热剂(例如对乙酰氨基酚)或输血。此类联合治疗可有利地利用较低剂量的所给治疗剂，由此避免了与各种单独治疗相关的可能毒性或并发症。
如本文所用，“联合”给予是指在对象罹患细菌感染或病症之前或期间，将两种(或更多种)不同处理/治疗递送给该对象。在一个实施方式中，预防性递送两种或更多种治疗，例如在对象被感染或诊断出细菌(例如革兰氏阴性细菌)之前。在另一个实施方式中，在对象被感染或诊断出细菌(例如革兰氏阴性细菌)后递送两种或更多种治疗。在一个实施方式中，在第二处理开始递送时，第一处理的递送仍在持续，由此存在重叠。有时称此为“同时”或“共同递送”。在其他实施方式中，在第一处理的递送终止后，再开始递送其他处理。在这两种情况之任一的实施方式中，处理因联合给予而更有效。例如，与若只给予第二处理而不给予第一处理所能观察到的相比，第二处理更有效(例如采用更少的第二处理观察到同样的效果，或者第二处理更大程度地减轻或减少症状)，或者第一处理亦然。在一个实施方式中，与递送一种处理而不递送另一种所能观察到的相比，递送更大程度地减轻或减少或降低细菌感染或病症相关的其他参数。两种处理的效果可部分加合、完全加合或大于加合。递送可使递送第一处理的效果在递送第二处理时仍可被检测到。
在一些实施方式中，另外的抗微生物剂是抗生素。例如，抗生素可以是β-内酰胺抗生素(例如，青霉素，头孢菌素，单环内酰胺或碳青霉烯)，单环内酰胺，碳青霉烯，大环内酯，林可酰胺，链阳性菌素，氨基糖苷类，喹诺酮，磺酰胺，四环素，糖肽，脂肽，噁唑烷酮，利福霉素，多肽或哌拉霉素。示例性抗生素包括但不限于阿米卡星，阿莫西林，氨苄青霉素，阿奇霉素，氨曲南，巴卡西林，杆菌肽，巴洛沙星，贝西沙星，卷曲霉素，羧苄青霉素，头孢乙腈(cephacetrile)，头孢氯嗪，头孢克洛，头孢羟氨苄(cefadroxyl)，头孢氨苄(cephalexin)，头孢来星(cephaloglycin)，头孢洛宁(cephalonium)，头孢洛仑，头孢噻啶(cephaloradine)，头孢噻吩(cephalothin)，头孢孟多，头孢帕罗，头孢匹林(cephapirin)，头孢噻嗪，头孢唑灵，头孢唑酮，头孢唑啉(cephazolin)，头孢卡奈，头孢卡品，头孢克定，头孢达肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢屈洛，头孢吡酮，头孢吡肟，头孢他美，头孢三唑，头孢维曲，头孢克肟，头孢瑞南，头孢马替林，头孢甲肟，头孢氯铵，头孢美唑，头孢地嗪，头孢尼西，头孢哌酮，头孢瑟利，头孢噻肟，头孢替坦，头孢维星，头孢噁唑，头孢西丁，头孢唑兰，头孢咪唑，头孢匹罗，头孢泊肟，头孢丙烯(cefproxil)，头孢喹肟，头孢拉定(cephradine)，头孢罗替，头孢沙定，头孢舒米，头孢拉定啉，头孢洛林(teflaro)，头孢他啶，头孢特仑，头孢替唑，头孢布烯，头孢噻呋，头孢噻林，头孢噻氧，头孢唑肟，头孢吡普，头孢三嗪，头孢呋汀，头孢呋辛，头孢唑喃，氯霉素，环丙沙星，克拉霉素，克林沙星，克林霉素，氯唑西林，环丝氨酸，达托霉素(cubicin)，去甲环素，双氯西林，地红霉素，多利培南，强力霉素，依诺沙星，厄他培南，红霉素，氟氯西林，氟甲喹，加替沙星，吉米沙星，吉米沙星(factive)，庆大霉素，格帕沙星，亚胺培南，亚胺培南/西司他丁，卡那霉素，左氧氟沙星，林可霉素，利奈唑胺，洛美沙星，大环素，美罗培南，甲硝唑，美洛西林，米诺环素，莫西沙星，纳西沙星，萘夫西林，萘啶酸，新霉素，奈替米星，呋喃妥因，诺氟沙星，氧氟沙星，苯唑西林，恶喹酸，土霉素，巴龙霉素，帕珠沙星，培氟沙星，青霉素g，青霉素v，吡哌酸，哌拉西林，吡咯酸，匹夫氨苄青霉素，匹美西林，多粘菌素b，吡斯美星，普卢利沙星，奎奴普汀/达福普，利福布汀，利福平，利福喷汀，罗沙星，罗红霉素，罗氟沙星，西他沙星，司帕沙星，链霉素，磺胺甲基异噻唑，替硝唑，妥布霉素，托沙星，甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲恶唑，曲伐沙星，万古霉素，维霉素或博莱霉素。
在一个实施方式中，另外的抗细菌剂是疫苗。疫苗可以是例如活的，减毒的或灭活的细菌，例如炭疽疫苗(例如，)，DTaP疫苗(例如，/>或/>)，DT疫苗，b型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗(例如，/>或/>)，脑膜炎球菌疫苗(例如，/>或)，肺炎球菌疫苗(例如，/>23或/>13)，破伤风/白喉疫苗(例如，/>或/>)，破伤风/白喉/百日咳疫苗(例如，或/>)，伤寒疫苗(例如，/>或/>)，DTaP/脊髓灰质炎疫苗(例如，/>)，DTaP/乙型肝炎/脊髓灰质炎疫苗(如/>)，DTaP/脊髓灰质炎/B型流感嗜血杆菌疫苗(如/>)，b型流感嗜血杆菌/乙型肝炎疫苗(如/>)和b型流感嗜血杆菌/脑膜炎球菌疫苗(例如，/>)。
在一个实施方式中，另外的抗病毒剂是第二抗体分子，ADC或抗微生物肽，例如不同于第一抗体分子，ADC或抗微生物肽的抗体分子，ADC或抗微生物肽。可以组合使用的示例性抗体分子包括但不限于表1或3中列出的抗体分子的任何组合。
在一个实施方式中，另外的抗细菌剂是抗微生物(例如，抗细菌)肽。示例性抗微生物肽包括但不限于醋酸哌替啶(MSI 78)，奥米加南(MX-226/MBI-226或CLS001)，艾塞加南(IB-367)，hLF1-11，XOMA629，PAC-113，CZEN-002，IMX942，OP-145，生长素，PMX-30063，十肽(delmitide)(RDP58)，菌丝霉素和HB1345。
在一个实施方式中，另外的抗菌剂是耐药性修饰剂。示例性的耐药性修饰剂包括但不限于外排抑制剂(例如，Phe-Arg-β-萘酰胺)和β-内酰胺酶抑制剂(例如克拉维酸或舒巴坦)。
诊断方法
在一些方面，本公开提供了用于在体外(例如，在生物样品，例如血液样品中)或体内(例如，在对象体内成像)检测细菌存在的诊断方法。该方法包括：(i)使样品与本文所述的抗体分子或抗体分子-药物偶联物(ADC)接触，或向对象给予抗体分子或ADC；(任选地)(ii)使参照样品，例如对照样品(例如对照生物样品，例如血浆或血液)或对照对象与本文所述的抗体分子或ADC接触；和(iii)检测抗体分子或ADC与样品或对象或对照样品或对象之间复合物的形成，其中相对于对照样品或对象，样品或对象中复合物形成的变化，例如统计学上显著的变化指示样品中存在细菌。抗体分子或ADC可以用可检测物质直接或间接标记，以便于检测结合或未结合的抗体。合适的可检测物质包括如上所述并在下面更详细地描述的各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、和放射性材料。
术语“样品”在涉及用于检测细菌的样品时包括但不限于：细胞，细胞裂解物，细胞的蛋白质或膜提取物，体液(如血液)或组织样品。
抗体分子或ADC与细菌或脂多糖之间的复合物形成可以通过测量或可视化与细菌或脂多糖结合的抗体分子或抗体分子-药物偶联物或未结合的抗体分子或ADC来检测。任何合适的检测方法均可使用，常规检测方法包括酶联免疫测试(ELISA)，荧光激活细胞分选(FACS)测定，放射免疫测试(RIA)或组织免疫组化法。作为标记抗体分子或ADC的替代，样品中细菌或脂多糖的存在还可通过采用以可检测物质标记的标准物质和未标记的抗体分子或ADC的竞争性免疫测试法来测定。在该测试中，合并生物样品、有标记标准物质和抗体分子或ADC，并测定与无标记结合分子结合的有标记标准物质的量。样品中细菌或脂多糖的量与结合于抗体分子或ADC的有标记标准物质的量成反比。
在下面的编号段落中提供了其他方面和实施方式。
1.一种抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗体分子和共价偶联的肽，
其中所述抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中VH包含：
(a)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3，或
(b)包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3，和
其中所述抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中所述VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，并且其中所述VL包含：
(a)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3，或
(a)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3；和
其中肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：257的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。
2.如段落1所述的ADC，其中VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和其中VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
3.如段落1所述的ADC，其中VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和其中VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。
4.如段落1-3中任一项所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：117的氨基酸序列有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性。
5.如段落1-4中任一项所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列。
6.如段落1-5中任一项所述的ADC，其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：135的氨基酸序列有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性。
7.如段落1-6中任一项所述的ADC，其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列。
8.如段落1-7中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌。
9.如段落1-8中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合铜绿假单胞菌。
10.如段落1-9中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌的脂多糖(LPS)。
11.如段落1-10中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌上的LPS上的内核聚糖部分。
12.如段落1-11中任一项所述的ADC，其中抗体分子不结合，或基本不结合大肠杆菌LPS，例如，由Western印迹所确定。
13.如段落1-12中任一项所述的ADC，其中抗体分子不结合，或基本不结合庚糖或单磷酸化的庚糖类似物(例如，2-P-Hep或4-P-Hep)，例如，通过生物层干涉分析所确定。
14.如段落1-13中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合二磷酸化的2，4-P-Hep单糖，例如，通过生物层干涉分析所确定。
15.如段落1-14中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合二磷酸化的甘露糖(2，4-P-Man)，例如，其结合相比二磷酸化的2，4-P-Hep单糖有所降低，例如，通过生物层干涉分析所确定。
16.如段落1-15中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合一个或多个本文所述的铜绿假单胞菌菌株，例如，对碳青霉烯类、抗假单胞菌第三代头孢菌素类或氟喹诺酮类有抗性的一种或多种菌株，例如，具有约20至约150pM(例如，约50至约120pM)的表观亲合力，例如，通过全细菌细胞ELISA所确定。
17.如段落1-16中任一项所述的ADC，其中抗体分子不结合，或基本不结合以下的一个或多个：大肠杆菌、肺炎克雷铂菌、鼠伤寒沙门氏菌、革兰氏阳性生物体或哺乳动物细胞，例如，由全细胞ELISA所确定。
18.如段落1-17中任一项所述的ADC，其中抗体分子结合除铜绿假单胞菌以外的假单胞菌物种，例如，荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)或施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)中的一个或多个，例如，如全细菌细胞ELISA所确定。
19.如段落1-18中任一项所述的ADC，其中抗体分子是单克隆抗体分子，人源化抗体分子、分离的抗体分子、或合成抗体分子。
20.如段落1-19中任一项所述的ADC，其中抗体分子包含两个VH和两个VL。
21.如段落1-20中任一项所述的ADC，其中抗体分子还包含IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的重链恒定区。
22.如段落1-21中任一项所述的ADC，其中抗体分子还包含κ或λ链的轻链恒定区。
23.如段落1-22中任一项所述的方法，其中抗体分子包含Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
24.如段落1-23中任一项所述的ADC，其中肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列。
25.如段落1-24中任一项所述的ADC，其中肽包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个D-氨基酸，或肽中氨基酸残基的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％是D-氨基酸。
26.如段落1-25中任一项所述的ADC，其中肽中的全部氨基酸残基是D-氨基酸。
27.如段落1-26中任一项所述的ADC，其中肽与VH，例如VH的C-端，例如间接(例如，通过恒定区，接头或两者)偶联。
28.如段落1-27中任一项所述的ADC，其中肽通过酶促连接，例如，使用分选酶A(SrtA)，例如，通过分选酶识别序列(例如，LPETGGG(SEQ ID NO：244))与抗体分子偶联。
29.如段落1-28中任一项所述的ADC，其中肽包含分选酶供体系列，例如，N-末端GGG。
30.如段落1-29中任一项所述的ADC，其中所述ADC在抗体分子和肽之间包含接头，例如，(Gly-Ser)n接头序列，其中n＝2至20(SEQ ID NO：262)。
31.如段落1-30中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有约2至约8，例如，约2至约4的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定。
32.如段落1-31中任一项所述的ADC，其中ADC具有约2的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定。
33.如段落1-32中任一项所述的ADC，其中所述ADC在约2μg/mL至约50μg/mL，例如，约3.1μg/mL至约25μg/mL的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。
34.如段落1-33中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有与参比ADC(例如VSX-1)相比时与其相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性。
35.如段落1-34中任一项所述的ADC，其中对于铜绿假单胞菌，ADC具有约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的平均裂解浓度(MLC)。
36.如段落1-35中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有与参比ADC(例如VSX-1)相比时与其相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的MLC。
37.如段落1-36中任一项所述的ADC，其中对于铜绿假单胞菌，ADC具有约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的CC50(观察到哺乳动物细胞50％细胞毒性的浓度)。
38.如段落1-37中任一项所述的ADC，其中对于铜绿假单胞菌，ADC具有比参比ADC，例如，VSX-1高，例如高至少0.5、1、2、3、4或5倍的CC50。
39.如段落1-38中任一项所述的ADC，其中ADC具有比参比ADC，例如，VSX-1改善的生物分布，例如，如通过药物动力学测量，全体成像，体内成像，ELISA，和/或血样质谱所测定。
40.一种ADC，其包含抗体分子，其包含两个VH和两个VL，
其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；和
其中VH包含：包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；和
其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。
41.一种ADC，其包含抗体分子，其包含两个VH和两个VL，
其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；和
其中VH包含：包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3；和
其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3。
42.如段落40或41所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列；并且其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列。
43.如段落40-42中任一项所述的ADC，其中肽通过(Gly-Ser)n接头与VH的C-末端偶联。
44.如段落1-43中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子包含修饰的硫酸酯酶基序。
45.如段落44所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序具有下式：
X1(FGly’)X2Z2X3Z3
其中FGly’具有下式：
HIPS化学
其中J1是共价偶合的抗微生物肽；
各L1是二价部分，其独立地选自亚烷基，取代的亚烷基，亚烯基，取代的亚烯基，亚炔基，亚炔基，亚芳基，取代的亚芳基，亚环烷基，取代的亚环烷基，亚杂芳基，取代的亚杂芳基，亚杂环基，取代的亚杂环基，酰基，酰氨基，酰氧基，亚氨酯基，硫酯，磺酰基，磺酰胺，磺酰基酯，-O-，-S-，-NH-和取代的胺；
n是选自0到40的数字；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当硫酸酯酶基序位于多肽的N-末端时，X1存在；
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
46.如段落44或45所述的ADC，其中当处于折叠状态时，抗体分子在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
47.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序是异源修饰的硫酸酯酶基序。
48.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
49.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。
50.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。
51.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)，例如，位于重链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
52.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。
53.如前述段落中任一项所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区，例如，位于轻链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
54.如前述段落中任一项所述的ADC，其中ADC包含多个修饰的硫酸酯酶基序，例如两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。
55.如段落54所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。
56.如段落54或55所述的ADC，其中修饰的硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。
57.如段落54-56中任一项所述的ADC，其包含两个或更多个重链，每个重链包含修饰的硫酸酯酶基序。
58.如段落54-57中任一项所述的ADC，其包含两个或更多个轻链，每个轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。
59.如前述段落中任一项所述的ADC，其中Z3是精氨酸(R)。
60.如前述段落中任一项所述的ADC，其中X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。
61.如前述段落中任一项所述的ADC，其中X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。
62.一种药物组合物，包括如段落1-58中任一项所述的ADC；和药学上可接受的运载体。
63.如段落1-61中任一项所述的ADC，或如段落62所述的药物组合物，用于治疗或预防对象中与假单胞菌相关的细菌感染的方法。
64.如段落63所述使用的ADC或组合物，其中细菌感染与铜绿假单胞菌相关。
65.如段落63或64所述使用的ADC或组合物，其中ADC以1-10mg/kg的剂量给予。
66.如段落63-65中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述ADC静脉内、皮下、鼻内或通过吸入给予。
67.如段落63-66中任一项所述使用的ADC或组合物，其中在与细菌感染相关的症状发作之前或之后给予ADC。
68.如段落63-67中任一项所述使用的ADC或组合物，其中对象具有以下一种或多种：肺炎、尿路感染(UTI)、败血症、脑膜炎、腹泻、软组织感染、皮肤感染、菌血症、呼吸系统感染、心内膜炎、腹腔内感染、脓毒性关节炎、骨髓炎、中枢神经系统感染、眼部感染、胆囊炎、胆管炎、脑膜炎、伤寒、食物中毒、肠胃炎、肠热病、志贺氏菌病、血流感染、腹腔内败血症、脑脓肿、脑膜炎、败血症、关节感染、骨骼感染、肠胃感染或伤口感染。
69.如段落63-68中任一项所述使用的ADC或组合物，其中细菌感染是医院感染或医院获得性感染。
70.如段落63-69中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象是人或动物。
71.如段落63-70中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象是免疫功能低下的患者或健康专业人员。
72.如段落63-71中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象患有，或有患有以下的风险：HIV感染或AIDS，癌症，实体器官移植，干细胞移植，镰状细胞病或无脾，先天性免疫缺陷，慢性炎性病症，耳蜗植入，营养不良或脑脊液渗漏。
73.如段落63-72中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述对象为18岁或更小，15岁或更小，12岁或更小，9岁或更小，或6岁或更小，或者为至少60岁，至少65岁，至少70岁，至少75岁，或至少80岁。
74.如段落63-73中任一项所述使用的ADC或组合物，其中所述方法还包括向所述对象给予第二抗微生物剂或疗法。
75.如段落74所述使用的ADC或组合物，其中所述第二抗微生物剂或疗法包括抗生素或噬菌体疗法。
76.如段落75所述使用的ADC或组合物，抗生素是多粘菌素(例如，粘菌素)或β-内酰胺(例如，碳青霉烯，例如，美罗培南)。
77.如段落76所述使用的ADC或组合物，其中抗生素选自氨基糖苷、安莎霉素、碳头孢烯、碳青霉烯、头孢菌素、糖肽、林可酰胺、脂肽、大环内酯、单菌霉素、硝基呋喃、噁唑烷酮、青霉素、青霉素组合、多肽、喹诺酮或氟喹诺酮、磺胺、四环素或抗分枝杆菌药物。
78.如段落76或77所述使用的ADC或组合物，其中抗生素选自阿米卡星，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素，巴龙霉素，链霉素，壮观霉素，格尔德霉素，除莠霉素或利福昔明，劳拉卡头孢菌素，厄他培南，多利培南，亚胺培南/西司他丁，美罗培南，头孢羟氨苄，头孢唑啉，头孢噻吩，头孢噻吩，头孢氨苄，头孢克洛，头孢羟唑，头孢西丁，头孢丙烯，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢托罗，头孢哌酮，头孢噻肟，头孢泊肟，头孢他啶，头孢布坦，头孢唑肟，头孢曲松，头孢吡肟，头孢洛林，头孢托罗，替考拉宁，万古霉素，特拉万星，达巴万星，奥利万星，克林霉素，林可霉素，达托霉素，阿奇霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，罗红霉素，竹桃霉素，泰利霉素，螺旋霉素，氨曲南，呋喃唑酮，呋喃妥因，利奈唑胺，泼斯唑来，雷得唑来，托拉唑来，阿莫西林，氨苄青霉素，阿洛西林，羧苄青霉素，氯唑西林，双氯西林，氟氯西林，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，青霉素g，青霉素v，哌拉西林，青霉素g，替莫西林或替卡西林，阿莫西林/克拉维酸，氨苄青霉素/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦，替卡西林/克拉维酸盐，杆菌肽，粘菌素，多粘菌素b，环丙沙星，依诺沙星，加替沙星，吉米沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，莫西沙星，萘啶酸，诺氟沙星，氧氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，司帕沙星，替马沙星，磺胺米隆，磺胺醋酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺异噁唑，甲氧苄啶-磺胺甲基异噁唑(复方磺胺甲噁唑)，偶氮磺胺，地美环素，强力霉素，米诺环素，土霉素，四环素，氯法齐明，氨苯砜，卷曲霉素，环丝氨酸，乙胺丁醇，乙硫氨酰胺，异烟肼，吡嗪酰胺，利福平，利福布汀，利福喷汀，链霉素，阿司匹林，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，甲硝唑，莫匹罗星，安替霉素，奎奴普丁/达福普汀，甲砜霉素，替加环素，替硝唑，或甲氧苄啶。
79.如段落76-78中任一项所述使用的ADC或组合物，其中抗生素选自左氧氟沙星，环丙沙星，庆大霉素，头孢曲松，氧氟沙星，阿米卡星，妥布霉素，氨曲南或亚胺培南/西司他丁。
80.如段落74-79中任一项所述使用的ADC或组合物，其中第二抗微生物剂或疗法在给予ADC之前给予，与给予ADC同时给予，或在给予ADC之后给予。
81.一种抑制或降低细菌感染的方法，所述方法包括用有效抑制或降低细菌感染的量的如段落1-61中任一项所述的ADC，或如段落62所述的药物组合物接触细胞。
82.如段落81所述的方法，其中ADC或药物组合物在体外，离体或体内与细胞接触。
83.一种试剂盒，其包括：如段落1-61中任一项所述的ADC或如段落62所述的药物组合物；和使用ADC或药物组合物的说明书。
84.一种容器，其包含如段落1-61中任一项所述的ADC或如段落62所述的药物组合物。
85.一种核酸分子，其编码：
(a)如段落1-61中任一项所述的ADC的抗体分子的VH，VL或两者；
(b)如段落1-61中任一项所述的ADC的抗微生物肽；
(c)(a)和(b)两者；或
(d)如段落1-61中任一项所述的ADC。
86.一种包含段落85所述核酸分子的载体。
87.一种细胞，其包含如段落64所述的核酸分子或如段落86所述的载体。
88.一种产生ADC的方法，所述方法包括在允许产生ADC的条件下培养如段落66所述的细胞，从而产生ADC。
89.一种产生ADC的方法，所述方法包括将结合LPS的抗体分子与包含抗微生物肽的肽，和任选地分选酶供体序列接触，所述接触在分选酶存在下，在允许分选酶介导的反应发生的条件下进行，从而产生ADC。
90.如段落89所述的方法，其中抗体分子包含分选酶受体序列，其包含分选酶识别序列，接头序列或两者。
91.一种治疗或预防细菌感染的方法，其包括以有效治疗或预防细菌感染的量向有需要的对象给予如段落1-61中任一项所述的ADC或如段落62所述的药物组合物。
92.如段落1-61中任一项所述的ADC在制备用于治疗或预防细菌感染的药物中的用途。
93.一种醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)，其包含具有以下氨基酸序列的硫酸酯酶基序：
X1Z1X2Z2X3Z3
其中：
Z1是半胱氨酸，丝氨酸或2-甲酰甘氨酸残基；
Z2是脯氨酸或丙氨酸残基；
X1存在或不存在，并且当存在时，是任何氨基酸，条件是当异源硫酸酯酶基序位于醛标记的多肽的N-末端时，X1存在；并且
X2和X3各自独立地为任何氨基酸；并且
Z3是碱性氨基酸。
94.如段落93所述的抗体分子，当处于折叠状态时，所述抗体分子能够在溶剂可及的表面上呈现共价偶合的抗微生物肽。
95.如段落93或94所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序是异源硫酸酯酶基序，和/或未修饰的硫酸酯酶基序或修饰的硫酸酯酶基序。
96.如段落93-95中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序包含或由12个或更少(例如，11个或更少，10个或更少，9个或更少，8个或更少，7个或更少，或6个或更少)氨基酸残基组成。
97.如段落93-96中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于ADC中抗体分子链的N-末端，抗体分子链的C-末端或抗体分子的溶剂可及的环处。
98.如段落93-97中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)中。
99.如段落93-98中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3)，例如，位于重链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
100.如段落93-99中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的轻链(或其片段)中。
101.如段落93-100中任一项所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于轻链的恒定区，例如，位于轻链的恒定区的末端(例如，C-末端)。
102.如段落93-101中任一项所述的抗体分子，其中ADC包含多个硫酸酯酶基序，例如两个或更多个(例如，3，4，5，6，7，8或更多个)修饰的硫酸酯酶基序。
103.如段落102所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于抗体分子的重链(或其片段)，轻链(或其片段)或两者中。
104.如段落102或103所述的抗体分子，其中所述硫酸酯酶基序位于重链的恒定区(例如，CH1，CH2或CH3中的一个或多个)，轻链的恒定区或两者。
105.如段落102-104中任一项所述的抗体分子，其包含两个或更多个重链，每个重链包含硫酸酯酶基序。
106.如段落102-105中任一项所述的抗体分子，其包含两个或更多个轻链，每个轻链包含修饰的硫酸酯酶基序。
107.如段落93-106中任一项所述的抗体分子，其中Z3是精氨酸(R)。
108.如段落93-106中任一项所述的抗体分子，其中X1(存在时)、X2和X3各自独立地为脂肪族氨基酸，含硫氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。
109.如段落93-108中任一项所述的抗体分子，其中X1(存在时)是L，M，V，S或T。在一个实施方式中，X2和X3各自独立地为S，T，A，V，G或C。
110.一种产生ADC的方法，其包括使醛标记的抗LPS抗体分子(例如，本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子)与抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)在允许抗体分子的醛与抗微生物肽的反应性基团之间发生反应的条件下接触，从而产生ADC。
111.如段落110所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子包含2-甲酰基-甘氨酸残基(例如，Z1处的FGly’)。
112.如段落110或111所述的方法，所述抗微生物肽包含氨氧基或酰肼反应性基团。
113.如段落110-112中任一项所述的方法，其包括在反应混合物中联合醛标记的抗体分子和抗微生物肽。
114.如段落110-113中任一项所述的方法，其中抗微生物肽与抗体分子接触，或以反应混合物形式提供，其量足以提供所需比率的抗微生物肽与抗体分子，例如约1∶1，2∶1，3∶1，4∶1，5∶1，6∶1，7∶1，8∶1或更大的比率。
115.如段落110-114中任一项所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肼基-异-Pictet-Spengler(HIPS)连接偶合。
116.如段落110-114中任一项所述的方法，其中所述醛标记的抗体分子和抗微生物肽通过肟和酰肼偶联，然后还原来偶合。
117.如段落110-116中任一项所述的方法，还包括例如从反应混合物中分离(例如纯化)ADC。
118.如段落110-117中任一项所述的方法，其中醛标记的抗体分子在醛标记的抗体分子与抗微生物肽接触之前(例如，在反应混合物中的抗微生物肽与醛标记的抗体分子联合之前)是折叠的。
119.一种组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含ADC和药学上可接受的运载体，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
120.一种反应混合物，所述反应混合物包含ADC和药学上可接受的运载体，所述ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，其中抗体分子包含本文所述的硫酸酯酶基序(例如修饰的硫酸酯酶基序)。
121.一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括向有需要的对象给予有效治疗或预防细菌感染或相关病症的量的ADC或包含ADC的药物组合物，其中ADC包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)，并且其中抗体分子包含本文所述的修饰的硫酸酯酶基序。
122.如段落121所述的方法，其中细菌感染与革兰氏阴性细菌相关。
123.如段落121或122所述的方法，其中细菌感染是假单胞菌感染。
124.如段落121-123中任一项所述的方法，其中细菌感染与铜绿假单胞菌有关。
125.一种核酸，其包含编码本文所述的醛标记的抗LPS抗体分子的核苷酸序列。
126.一种抗LPS抗体分子或ADC结合本文所述的表位，其中抗体分子或ADC包含修饰的硫酸酯酶基序(例如，本文所述的修饰的硫酸酯酶基序)。
127.如段落126所述的抗体分子或ADC，其结合铜绿假单胞菌的核心LPS中的超磷酸化HepI残基。
128.一种包含抗LPS抗体分子(例如，本文所述的抗LPS抗体分子)和共价偶合的抗微生物肽(例如，本文所述的抗微生物肽)的ADC，其中所述抗微生物肽通过以下方式与抗体分子偶合
(a)赖氨酸偶联(例如，使用表面暴露的赖氨酸作为抗体反应基团)；
(b)链间二硫键(例如，使用连接HC-HC或HC-LC的二硫键)；
(c)非天然氨基酸(例如，被醛，叠氮化物或炔烃取代的氨基酸)；或
(d)可生物降解的聚合物(例如赖氨酸或巯基)。
129.如段落128所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子与抗微生物肽上的活化氨基酸直接偶联。
130.如段落128所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子上的赖氨酸被转化为巯基反应性基团，并且具有巯基反应性基团的抗体分子与巯基化抗微生物肽连接。
131.如段落128所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(a)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子上的赖氨酸被转化为游离巯基，并且具有游离巯基的抗体分子与巯基反应性抗微生物肽连接。
132.如段落128所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(b)与抗体分子偶合，并且其中抗体分子的链间二硫键被还原，并且具有还原的链间二硫键的抗体分子与巯基反应性抗微生物肽连接。
133.如段落128所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(c)与抗体分子偶合，并且其中使用点击化学将抗体分子与抗微生物肽连接。
134.如段落128所述的ADC，其中所述抗微生物肽通过(d)与抗体分子偶合，并且其中抗微生物肽与可生物降解的聚合物连接，并且聚合物与抗体分子连接。
135.一种包含段落128-134中任一项所述的ADC的组合物(例如，药物组合物)。
136.一种治疗或预防细菌感染或相关病症的方法，其包括以有效治疗或预防细菌感染或相关疾病的量向有需要的对象给予段落128-134中任一项所述的ADC或段落135所述的药物组合物。
实施例
本文所述的研究将抗体-药物偶联物(ADC)鉴定为可产生有效抗微生物剂的重要治疗策略。为此，实施例聚焦于致病性革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌。工程改造了一种示例性单克隆抗体，VSX，其结合对铜绿假单胞菌活力必要的脂多糖(LPS)上的内核聚糖部分。基于其特异性结合概况，同源建模和NMR分析，将在内核LPS中发现的2，4-磷酸-庚糖鉴定为其核心表位。通过在VSX的VH和/或VL-链的C-末端融合抗微生物肽来设计ADC。在治疗性给药时，该ADC迅速杀伤铜绿假单胞菌菌株，证明对哺乳动物细胞的低毒性水平，并保护小鼠免于铜绿假单胞菌肺部感染。此外，发现ADC与抗假单胞菌类别的抗生素有协同作用。这种方法可以是针对特定致病微生物并且从而是微生物群饶让性的广泛有用的策略。
实施例1：VSX的工程改造
LPS代表了构建抗-药物偶联物(ADC)的理想靶标。首先，抗原以高拷贝数(＞107个拷贝/细胞)(9)存在，其比由肿瘤导向型ADC所靶向的一贯抗原高10-100倍。第二，分析可及的遗传信息表明LPS的几个部分可能在铜绿假单胞菌菌株之间是高度保守的，尤其是在内核内。WaaP(4-O磷酸化)和WapP(2-O磷酸化)基因产物都是铜绿假单胞菌的体外和体内生长所必需的基因(Skurnik D等，2013.PLoS Pathog 9：e1003582)并且存在于所有测序的菌株中(Winsor GL等，2016.Nucleic Acids Res 44：D646-53)。因此，由靶向这些蛋白质的基因产物的抗体施加的选择压力对于出现的逃逸突变体将具有降低的概率，因为迄今为止这些突变体被报道是没活性的(Delucia AM等，2011.MBio 2)。另外，这些基因是假单胞菌的独特操纵子：glnE-ilvE-waaF-waaC-waaG-waaP-PA5008-PA5007-PA5006的部分(Winsor GL等，2016.Nucleic Acids Res 44：D646-53)；表明特异性的抗体应该仅靶向假单胞菌，而不是其他革兰氏阴性菌。
为了在实验上测试该原理，分离了证明对来自铜绿假单胞菌的分离的LPS有强结合的小鼠抗体。该抗体的协同工程改造-人源化，药物样性质的改善，亲和力增加-导致鉴定出单克隆抗体VSX。该抗体与人种系>85％相同，不含糖基化位点(除了恒定区以外)，或未配对的半胱氨酸，并且在CHO中表达良好。通过Western印迹评估的抗体结合确认VSX结合分离的铜绿假单胞菌LPS。具体地，检测到与从铜绿假单胞菌提取的光滑LPS的结合，其中没有检测到与大肠杆菌LPS的结合(图1B)。为了进一步表征抗体的表位，合成了模拟内核结合表位(如下所示)的关键Hep I和Hep II残基的单磷酸化和二磷酸化的庚糖单糖(合成方案和表征示于实施例10)并用于结合研究和通过生物层干涉和微量热法来评估(图2)。VSX不结合庚糖或单磷酸化的庚糖类似物(2-P-Hep和4-P-Hep)；并且仅结合二磷酸化的2，4-P-Hep单糖。值得注意的是，这种结合不完全由亲合力驱动，因为Fab结构域也以类似亲和力结合。由于非特异性相互作用，与2，4-P-Hep的结合不是主要的，因为观察到与在C6位缺少甲基-羟基的二磷酸化甘露糖(2，4-P-Man)相似但减少的结合。
实施例2：VSX结合铜绿假单胞菌表面抗原LPS
解决了内核LPS区域在完整生物体的细胞表面处是否可及和该可及性是否可能具有血清型特异性的问题。在全细菌细胞ELISA中，我们发现表位可及并且VSX结合23种不同的铜绿假单胞菌菌株，包括对碳青霉烯类、抗假单胞菌第三代头孢菌素类或氟喹诺酮类有耐药性的菌株(图3A)。在菌株间观察到通过ELISA测定的50-120pM的表观亲合力。该抗体不结合其他常见的人致病革兰氏阴性菌，包括大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和鼠伤寒沙门氏菌的多个菌株(图3B)，或革兰氏阳性生物体或哺乳动物细胞。以半定量方式拓展该分析，发现可以在来自不同感染地点的临床分离株的超过100中铜绿假单胞菌菌株中检测到抗体结合。此外，其他假单胞菌物种，包括荧光假单胞菌，恶臭假单胞菌和施氏假单胞菌的结合分析也证明了结合(图3C)。为了进一步确认这些发现，电子显微镜图像显示与靶向海藻糖的抗体相反，VSX在细胞表面附近接合(图17A-17C)。综合来看，这些结果表明VSX结合铜绿假单胞菌的外膜上存在的LPS的内核。为了确认这些发现并进一步研究VSX与LPS的内核的相互作用，进行了其他结构研究以描述VSX识别LPS的亲水性内核部分的方式。
实施例3：聚糖-Fab相互作用的结构分析
合成单糖的质子和碳信号由同源(COSY和TOCSY，未显示)和异核NMR谱(图18A-18C)赋值。通过1H-STD、31P-NMR谱、分子建模和MD模拟研究了VSX Fab与合成单糖相互作用的结构。1H-STD NMR谱显示，与之前的研究一致，只有二磷酸化的庚糖(2，4-P-Hep)与VSXFab结构域结合(图4A，图19)。在测量条件下，观察到从Fab结构域到2，4-P-Hep的H1、H4和H7a原子的能量转移，表明它们可能在空间上接近Fab分子，与图5A左、右报告的两个选择的对接位姿(pose)在定性上一致。由于1H-NMR不能说明磷酸基的作用，因此使用31P-NMR进行了单糖滴定实验(图4B)。在滴定实验之前，通过1H-31P HMBC NMR对2，4-P-Hep谱中的两个31P信号进行赋值，如图20所示。在进一步的滴定研究中，与2-P磷酸共振相比，4-P磷酸共振显示出更宽的线宽和更显著的化学位移变化，表明4-P磷酸与Fab结构域的结合比2-P磷酸基团更强。
铜绿假单胞菌核心寡糖有10个糖残基，其中2个是阴离子Kdo糖(Kdo I和Kdo II)，2个是磷酸化庚糖(Hep I和Hep II)。它们一起形成连接脂质A和外核寡糖的内核寡糖。由于两种Kdo糖存在于大多数革兰氏阴性LPS分子内，并且由于VSX的展示特异性，这种二糖不太可能是VSX的核心表位。在大多数铜绿假单胞菌LPS分子中，Hep II糖在第2位被单磷酸化，并表现出菌株特异性修饰，而Hep I糖在第2位和第4位被二磷酸化，修饰水平较低。先前的研究表明，Hep I糖的第4位磷酸化不仅对LPS的完全合成至关重要，而且对细菌的活力也至关重要(Delucia AM等，2011.MBio 2)。考虑到这些限制因素，高度保守的Hep I糖部分很可能位于VSX的核心表位内。尽管在大肠杆菌LPS中也存在Hep I糖部分，但它仅在第2位被单磷酸化，且不被识别，进一步表明第4位的磷酸基团对VSX结合的重要性。值得注意的是，建模和STD研究表明，结合是由两个磷酸基团的同时作用驱动的，因此2-O磷酸基团的相对贡献可能是显著的。
2，4-P-庚糖(一种类似于Hep I的单糖)与Fv结构域的分子对接发现了两种密切相关的结合位姿，其中单糖在C6位置与其4-磷酸基团或甲基-羟基基团结合(图5A)，其与口袋底部的R100残基相互作用。这两种位姿的不同是糖的60°旋转，它们都允许在结合的2，4-P-Hep单糖的还原性端和非还原性端存在一个延伸的糖部分。Autodock 4.2评分函数分别给出-3.8和-6.0Kcal mol-1作为两种位姿的结合能估计值。为了进一步研究，我们应用了MD模拟来细化两种对接位姿的几何图形，得到2，4-Hep-Vsx分子识别事件的动态描述，在早期和后期都完成了快照(即在6和34ns时，图5A)。与VSX结合状态下Hep残基的均方根波动(RMSF)(图5B)和Autodock评分函数表明，除了R103和R101识别2-P和4-P外，当糖C6-C7的脂肪族尾被VSX结合袋的树篱(hedge)之一识别(由Trp47、Tyr50和Tyr59组成)时，结合能略大。这一结果表明，分散力也可能有助于2，4-P-Hep-Vsx分子识别事件，表明这种结合位姿对应于更强的结合相互作用，这也支持了在MD模拟后期配体和受体接触位点之间更短的距离。
为了证实上述分析，我们检测了抗原结合袋的三个CDR精氨酸残基(VH：R101，R103和VL：R100)，以确认它们是结合的核心。任何这些精氨酸残基突变为Gln都可以预测消除侧链正电荷，并去除抗原界面区域的很大一部分。与此模型一致的是，没有一个Arg至Gln突变体显示出与单磷酸化庚糖(2P-Hep或4P-Hep)有任何可测量的结合，这表明这些Arg残基对结合的重要性(图6A)。此外，单糖接触残基(VH：A33，E99，VL：H32)的突变导致结合失效，而HCDR2中的非接触残基(VH：D54和D56)的突变没有显示出结合的显著丢失。任何这些CDR精氨酸残基突变到Gln消除抗原结合表明静电相互作用的重要性。通常观察到的HCDR2序列子Xaa-Xaa-Gly-Gly-(Ser/Thr/Gly)与碳水化合物、DNA和蛋白质上的负电荷基团结合有关(13)。在VSX中，该序列子存在酸性氨基酸序列Ser-Ser-Asp-Gly-Asp(SEQ ID NO：263)；这些Asp残基突变为Gln并不影响2，4-Hep结合。
实施例4：VSX的活性
在补体单独存在的情况下，VSX在体外显示出一定的直接杀菌活性(1μg/mL时约20％的杀菌活性)。当在体系中加入吞噬细胞时，检测到调理吞噬杀伤活性，但在20μg/mL时不完全。因此，进一步探讨了VSX可能介导的其他保护机制。具体地说，据报道，在宿主免疫系统的过度刺激下，LPS的脱落可能导致病理生理表现——由toll样受体(TLR)的激活启动，这反过来又可能导致感染性休克(Singer M等，2016.JAMA 315：801-10)。鉴于这一病理生理机制，抗LPS单抗可通过限制LPS脱落、促进其血清清除、抑制LPS介导的TLR结合和伴随的免疫系统激活，在中和LPS中发挥重要作用。与这一通路以及VSX的结合位点一致，VSX相对于对照抗体显示出与LPS的强结合(图6B)。此外，一种HEK-蓝报告试验通过自由LPS测量TLR4受体的激活，表明VSX抑制LPS介导的TLR4激活(图6C)。
实施例5：AMP的选择
具有直接杀伤活性而不需要补体或吞噬细胞的VSX通过添加杀菌性荷载物来寻找，这也可以显著提高可能实现任何抗菌抗体的细菌杀伤总体水平。为此，选择抗微生物肽(AMP)是因为它们的快速杀伤活性和已证实的作用机制的有效性，非常接近我们目前抗生素的最后一道防线-多粘菌素(Velkov T等，2016.Future Med Chem 8：1017-25)。根据二级结构，抗微生物肽至少有四种不同的类别：β-片、α-螺旋、延伸和环(Bahar AA，RenD.2013.Pharmaceuticals(Basel)6：1543-75)。由于我们关注的是抗体共价添加的AMP活性，因此环类被取消了，因为需要二硫化物来稳定二级结构，以及需要低聚的多肽来引发细胞杀伤活性。考虑到这些限制，作用于细胞表面的两亲性α-螺旋多肽显然代表了ADC形成的理想肽类。此外，有报道表明约106AMP/细胞的结合会诱导细胞杀伤；即使药物抗体比(DAR)为1∶1，与10％的LPS结合也足以诱导杀伤，较高的DAR所需的量较低。
为了确定ADC的最佳AMP荷载物，我们完成了一个稳健的结构-活性试验，以确定α-螺旋AMP：(1)在细胞表面活跃，因此不需要内化；(2)对铜绿假单胞菌具有杀菌作用；和(3)具有较低的溶血和细胞毒活性。最初，利用生物信息学驱动的工作流程(挖掘AMP公共数据库(YADAMP)→按性质聚类AMP→评估活性和毒性)选择AMP进行实验表征，以确定具有高治疗指数的有力荷载物(图7A)。选择其中最有效的可能是一个复杂的过程，因为数据库中每个AMP的特征缺乏一致性。为了便于鉴别用于ADC的AMP，一种筛选策略实现了基于其基本理化性质的聚类多肽，然后从每个聚类中表征代表性成员。在这里，我们使用了YADAMP，一个包含超过2500个具有报告的抗菌活性的肽序列的AMP数据库。使用K-means算法进行聚类，该算法使用已报道的与抗微生物活性相关的计算属性(肽长度、预测螺旋度、预测亲水性、选定氨基酸的百分比[Lys，Arg，Trp，Cys，His]，以及pH7、pH5和pH9的电荷)。最初选取100个多肽，通过一系列体外实验进行实验表征，包括针对多种细菌菌株的MIC测试、溶血评估和细胞毒性。一旦具有有利特征的有效肽被识别出来，相应簇的剩余成员就被选择进行实验表征。使用这种方法，需要筛选的肽的数量显著减少了约10倍。在整个过程中，实验筛选了约400个肽。
初步筛选发现了几种α-螺旋AMP，对铜绿假单胞菌具有1-8μg/mL的最低抑制浓度(MIC)，其中一些对其他革兰氏阴性菌也具有广泛的活性。然而，这些初始AMP中的一些也表现出对人类红细胞的溶解活性。这一趋势的一个值得注意的例外是AMP的导管素家族的α-螺旋亚类。导管素是一类结构多样的AMP，具有强大的抗菌活性，是先天免疫的多功能效应分子。具体地，这类中的一个成员，导管素-BF表现出对多种铜绿假单胞菌菌株的有效MIC值，低溶血活性，且不能杀死哺乳动物细胞(图6A)。对其中一个成员P297的时间过程实验表明，当肽水平为MIC的4倍或更高时，该肽能够迅速降低铜绿假单胞菌滴度>3log，证实该肽是杀菌的，而不仅仅是抑菌的(图7B)。机制研究证实，该肽家族可能通过膜破坏起作用(图7C)。此外，用两种不同的方法进行耐药评估，并将其与多粘菌素B(粘菌素)的频率进行比较，表明P297的突变频率相似或更低，在10-8到10-10之间。圆二色分析表明，P297在水溶液中不具有明显的二级结构；在约198nm处对应于随机圈的π-π*跃迁的最小值。相比之下，在40％2，2，2-三氟乙醇(一种非极性溶剂，已被用于促进具有固有α-螺旋形成特性的肽中的原生α-螺旋结构)存在时，在196nm处有强信号，表明α-螺旋形成(图7D)。综上所述，P297是一种α-螺旋型的杀菌肽，能够快速杀灭铜绿假单胞菌，并具有较高的耐药屏障。
此外，P297在体外实验中表现出相对较高的治疗指数。我们采用的一个关键指标是红细胞溶血，此前已被证明可用于潜在毒性的敏感测定(Oddo A，HansenPR.2017.Methods Mol Biol 1548：427-435)。在本次评估中，采用了平均溶血浓度(MLC)，即诱导100％溶血的肽的浓度，以及首次观察到红细胞溶血的最小浓度(定义为部分溶血浓度，PLC)。
表5.代表性肽变体的体外活性和毒性。MIC，最小抑菌浓度，括号内数字为摩尔当量；Pae，假单胞菌；Eco，大肠杆菌；Sau，金黄色葡萄球菌；MLC，平均裂解浓度；PLC，部分裂解浓度；hsMIC，人血清中MIC；CC50是观察到哺乳动物细胞50％细胞毒性的浓度；ND，未确定；NA，人血清中无活性。
如上表5所示，在两种测定方法中，P297的裂解水平比MIC大超过10倍。此外，P297对哺乳动物代表性细胞293T的细胞毒性比MIC大约200倍。因此，考虑到P297的活性和对细菌的相对选择性，我们选择P297进行进一步的肽设计。
对P297的进一步分析表明，尽管它在体外具有很高的活性和特异性，但在人或小鼠血清中，P297的活性随着时间的推移大幅下降。在血清中对P297的LC-MS分析表明，该肽可能吸附于血清成分(推测为蛋白质)，也被血清蛋白酶切割-其半衰期约为20分钟(图8)。因此，对P297的性质进行了修饰，使其更适应体内长时间的暴露，特别是考虑到抗体水平可以维持数天。作为第一次修饰，将P297的L-氨基酸替换为D-氨基酸(D297)，这种替换可以降低蛋白酶敏感性，增加血清稳定性。D297的圆二色分析证实，在2，2，2-三氟乙醇存在的情况下，D297呈左螺旋结构。D297的体外分析表明，与P297相比，它对铜绿假单胞菌具有相当的效力，另外的好处是D-版本在血清中稳定(图18B)。与P297一样，D297具有较低的溶血和细胞毒活性。因此，通过转换到D-肽序列，我们能够保持杀菌活性，增强血清稳定性，并保持AMP缺少溶血和细胞毒性。
实施例6：VSX偶联物的构建
为了生产和测试VSX和D297的多种抗体-药物偶联(ADC)构建体，我们转向使用分选酶A(SrtA)的酶连接策略(图9A)。SrtA方法涉及表达带SrtA-可连接标签的抗体，然后将它们与化学合成的AMP酶促偶联(Mao H等，2004.J Am Chem Soc 126：2670-1)。构建体是重链(HC)、轻链(LC)或双链(dual)的C端变体。采用质谱、SDS-PAGE凝胶和SEC-HPLC分析ADC。耦合是高效的，每个位点的常规转化率为＞90％，如LC-MS测定。例如，含有HC或LC连接的偶联物的药物抗体比(DAR)为约2(质谱测定为≥1.8)或约4(质谱测定为≥3.6)(对于双重偶联物而言)(图9B-9C)。D297在所有情况下都与30个氨基酸的-GS15-接头(SEQ ID NO：157)连接，以保持末端HC/LC残基与分选酶信号序列之间的灵活性。重要的是，SEC分析显示了没有聚集迹象的同质产物(图9D)，这是ADC领域普遍关注的问题。
实施例7：VSX-297的体外活性
使用VSX抗体，一系列ADC构建体在体外对铜绿假单胞菌的直接杀菌活性进行了评估(图10)。从这些初始构建体，我们得出的相对活性顺序为双重＞HC＞LC。最有效的ADC，VSX-1包含4个DAR，其中荷载物D-297连接到每个HC和LC的C端。VSX-1对铜绿假单胞菌(包括实验室菌株和耐碳青霉烯类和抗假单胞菌第三代头孢菌素或氟喹诺酮的菌株)具有很强的杀菌活性(1-10μg/ml或5-50nM)。此外，在包含铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌的混合微生物试验中，构建体对铜绿假单胞菌具有选择性(图11)。与D297的结果一致，构建体对293T细胞的溶血活性最小并且细胞毒活性可忽略。ADC的杀伤性能也在调理噬细胞试验中进行了评估，以确认抗体的完整性。ADC在10μg/ml时具有很高的活性，在热灭活补体存在时，细菌减少量为1log，在多形核中性粒细胞存在时，在非热灭活补体存在时杀伤活性为＞3log(图12)。当人们考虑到AMP插入膜后，可能促进抗体与补体和/或吞噬免疫细胞之间的密切接触时，VSX-1比VSX亲本抗体更有活性就不足为奇了。总之，亲本肽和抗体的许多特性也转化为ADC。最后，考虑到VSX-1作用于铜绿假单胞菌的外膜，我们推断它可能与现有的抗生素协同作用，这些抗生素必须穿过双膜才能靶向细胞内靶点。事实上，研究发现VSX-1或肽构建体似乎增加了经典抗假单胞菌抗生素(如碳青霉烯类或多粘菌素)的效力，这可能是通过增加外膜通透性实现的。
实施例8：VSX-1的体内活性
为了研究VSX-1在体内的活性，肺部感染模型被关注的原因有几个。首先，肺是铜绿脓杆菌感染的常见部位，导致社区/医院获得性肺炎，这与有问题的结果有关，死亡率高，在一些研究中高达30-60％(Zavascki AP等，2006.Crit Care 10：R114.)。因此，它为病原体特异性ADC的临床应用提供了一个可能的领域。其次，考虑到肺与血流的分隔，这也代表了证明系统性给药抗微生物药物有效性的一个高门槛。最后，鉴于这些研究中AMP等价物的次优剂量(即＜20％的有效剂量，基于质量)和局部定植，疗效可能需要ADC的转运，由VSX抗体介导。
与体外数据一致，VSX-1在多个铜绿假单胞菌感染动物模型中显示出体内功效。最初采用鼠嗜中性粒细胞缺乏性铜绿假单胞菌(ATCC 27853)肺部感染模型。感染动物鼻内用VSX-297构建体进行治疗，在共给药(图13A)或给药治疗(图13B)时，肺内细菌载量有统计学显著降低。值得注意的是，抗体单独组没有显示细菌减少，支持选择具有直接杀菌活性的ADC作为首选机制，特别是在免疫缺陷的情形中。在这些初始数据的基础上，用充分描述的铜绿假单胞菌PA14菌株在鼠免疫活性肺感染模型中评估VSX-1。在感染3小时后，用单次腹腔内剂量(15mg/kg)的VSX-297对感染动物进行治疗，结果在100小时的存活具有统计学意义(图13C)。本实验使用的免疫活性模型具有侵袭性，50-100％的对照动物在感染后24小时内死于感染。为了确认单抗组分的贡献，我们用非铜绿假单胞菌靶向抗体(阿克托舒单抗)制备了假偶联物。阿克托舒单抗-D297偶联物在具有免疫能力的肺部感染模型中没有显示生存效益，验证了铜绿假单胞菌表面靶向抗体的选择。总之，VSX-1偶联物所观察到的保护作用非常令人鼓舞，值得进一步探索这种ADC作为铜绿假单胞菌肺部感染的潜在治疗方法。
实施例9：VSX偶联物的优化
进一步体内评估了第一代VSX-1构建体。尽管在铜绿假单胞菌感染模型中具有完全保护作用，但VSX-1构建体被进一步改造以相对于亲本抗体改善生物分布(图14A)。为了优化VSX偶联物作为潜在治疗药物的生物分布特性，研究人员进行了一系列重点研究：荷载物电荷、荷载物疏水性和DAR。从P297序列出发，筛选了一组电荷变体和疏水性全局降低的变体。出乎意料的是，P369(GGGKLLRKLKKSVKKRAKELLKKPRVIGVSIPL(SEQ ID NO：257))，包含5个苯丙氨酸到亮氨酸的取代，成为一种更有效的肽，当偶联到VSX抗体时，保持杀菌活性，显示几乎没有细胞毒性(图14B)。与此同时，一系列DAR2构建体在体内相对于亲本抗体的生物分布进行了评估，并证明了改善的生物分布(图15)。事实上，VSX-2，包含DAR为2，其中荷载物D369连接到每个HC的C端，在铜绿假单胞菌肺部感染模型中显示出相对于对照抗体的保护作用(图16)。
实施例10：材料和方法
材料。VSX抗体最初是从小鼠杂交瘤中分离出来的，经过人源化和工程处理，以获得稳定性和高表达。抗体的序列和属性列于图1A中。采用固相法合成L-297和D-297多肽；采用高效液相色谱法和高分辨质谱法验证纯度和类别(Calc.Mass 3807.29，Obs.Mass3807.37-3807.38)。菌株来自ATCC，用Evotec进行表征。简单地说，这些从人类痰液中分离出来的菌株已经用各种药物类别进行了测试，包括青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、喹诺酮类和氨基糖苷类。下表6描述了每种菌株的特定抗生素耐药表型。
表6.使用的示例性抗生素和相应铜绿假单胞菌菌株
R＝耐药；S＝疑似；I＝中间；NT＝未测试
用于表位分析的聚糖的合成在通用合成方法一节中列举。
通用合成方法。所有的试剂，溶剂(ACS级或无水)都是从西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)、阿法埃莎(Alfa-Aeser)和科登(Corden)制药公司购买的，没有进一步的纯化或干燥。TLC板购自默克密理博公司(Merck Millipore)。Sephadex G-10采购自GE医疗生命科学公司(GE Healthcare Life Sciences)。Sulfo-NHS-LC-LC-生物素(货号：21338)购自赛默飞世尔科学公司。萃取和闪析所用溶剂均为ACS级。采用简化Schlenk操作：真空-氮气气囊技术进行无空气反应。闪柱层析在配备Redisep Gold或常规硅胶柱的Teledyne ISCOCombiFlash系统上进行。1H-NMR和13C-NMR光谱是在麻省理工学院(MIT)化学仪器设备系(DCIF)的300、400或500MHzFT-NMR光谱仪上获得的，特别感谢国家科学基金会慷慨的财政支持；如果没有他们的持续支持，DCIF将无法为麻省理工学院和周围的科学界提供维持这一最先进设施所需的支持水平。质谱分析采用Agilent 1100单四极色谱-质谱仪进行电喷雾电离。
VSX的表达。在Expi293FTM细胞(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德(Invitrogen，Carlsbad，CA))中进行抗体的重组表达，该细胞在维持在37℃的Expi293表达培养基(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德)中培养，在含8％CO2的潮湿培养箱中。Expi293FTM细胞(＞95％活力)转染ExpiFectamineTM 293与等量的汉HC和LC的质粒。24小时后，转染细胞补充ExpiFectamineTM 293转染增强子1和ExpiFectamineTM 293转染增强子2。感染7天后，细胞在4℃下以4000rpm旋转15分钟，并通过0.45μm过滤系统(Nalgene公司，纽约州罗切斯特)进行过滤，从而获得细胞。在AKTA Purifier FPLC系统(马萨诸塞州马尔堡的GE医疗生命科学公司)上使用MabSelect SuRe树脂(马萨诸塞州马尔堡的GE医疗生命科学公司)从上清纯化抗体。抗体用100mM甘氨酸-盐酸缓冲液(pH 2.5)洗脱，加入10％1M Tris-碱和1M NaCl(pH8.5)中和pH。然后将纯化的样品缓冲交换到1×PBS(pH 7.4)中，并使用30KDa MWCO自旋过滤器(马萨诸塞州比尔里卡的EMD密理博公司)进行超滤/透滤(UF/DF)浓缩。纯化的抗体用NanoDrop分光光度计定量。
一维和二维NMR。在298K下，四种合成聚糖(Man-2P，4P，Hep-2P，4P，Hep-4P，Hep)在500和/或600MHz条件下，在配备5mm TCI冷冻探针的Bruker Avance 500/600光谱仪上测量1H一维和二维NMR谱。用冷冻干燥法将0.25mg的各聚糖与D2O(99.9％)交换以除去残余水分，然后溶于0.5ml pH为7.2的10mM磷酸盐缓冲液中，其含0.15M NaCl，0.3mM EDTA-d16溶于D2O中。记录1H NMR谱，残余水信号抑制，循环延迟12s，fid大小32K，扫描16次。对256个自由诱导衰变(fid)各自进行32次扫描，获得二维同核相关谱。二维TOCSY采用TPPI在相敏模式下测量，傅里叶变换为2Kx1K的数据矩阵，具有移相(π/3)平方正弦钟函数。在相敏增强纯吸收模式下，利用z梯度进行相干选择和碳解耦，获得了灵敏度增强的1H/13C化学位移相关(HSQC)谱。采集谱的循环延迟为2s，F2中1K数据点，F1中256次增量，每增量扫描24次。最终的矩阵大小是零填充到2Kx1K，并乘以移位的(π/3)正弦钟平方先验傅里叶变换。在500MHzBruker Avance光谱仪上获得了31P一维NMR、1H NMR与31P去耦和1H-31P HMBC谱。两种一维谱获取的回收延迟为5s，fid大小为20K，扫描128次，而二维HMBC谱的获取采用回收延迟为1.5s，每系列扫描16次，F2中2K数据点，F1中48次增量。谱优化后的nJCH长程为8Hz。
定量1H NMR分析。使用Bruker Topspin3.5p16版本中的定量分析模块对每个聚糖进行定量1H NMR分析。简单地说，在相同的实验条件下，得到了被测样品的谱和已知浓度的参比溶液的谱。选择合成的五糖(GlcNNS6S-G-GlcNNS3S6S-I2SGlcNNS6S OMe(34))，浓度为D2O中2.38mg/ml(1.57mM)作为参比。每个样品都使用了5mm NMR管。谱是在12秒的循环延迟下获得的，这使得碳水化合物的1H核完全弛豫(Guerrini，M.等，2001.Semin Thromb Hemost，27：473-82)。在此最佳条件下，所选参比分子H1与糖聚糖H1之间的积分比表示它们的摩尔比，可用于聚糖定量。Hep-2P，4P的纯度为92％，以此值用于进一步计算1H STD和31P NMR滴定实验的配体浓度。
1H STD NMR。在298K下，在Bruker Avance 600光谱仪上采集600MHz的1H STD NMR谱，该光谱仪配备有5mm TCI冷冻探头。8℃下，使用Vivaspin离心过滤器将VSX Fab用pH为7.2在D2O中的10mM磷酸盐缓冲液(含0.15M NaCl和0.3mM EDTA-d16)交换，截止为10kDa。每个配体5.5·10-4mmol(考虑定量1H NMR发现的浓度)溶解在0.5ml pH 7.2的磷酸盐缓冲液中，加入0.15M NaCl，0.3mM EDTA，加上5.5·10-6mmol Fab，达到100∶1配体与蛋白质的摩尔比。蛋白质的选择性照射，在1H STD NMR谱中，是通过一串截断率为1％、持续时间为50ms的高斯型脉冲来实现的。蛋白质以0.75ppm(共振时)和40ppm(非共振时)照射。用糟蹋(spoil)序列以破坏不需要的磁化和自旋锁以抑制蛋白质信号。
31P NMR滴定实验。在298K下，31P NMR谱在Bruker Avance 500上采集，频率为500MHz，循环延迟为3s，扫描512次。将含有0.26·10-4mmol Fab的溶液用20mg/ml配体溶液滴定，以达到最终的47：1、42∶1、30∶1、19∶1、10∶1摩尔配体与Fab的比率，并在每个浓度点获得31P NMR谱。
聚糖和VSX复合物的分子建模。配体2，4-P-Hep与VSX抗体的分子对接使用SwissDock web服务器进行。一个独特的解决方案显示配体与5个CDR环结合，在前20个解决方案中排名第六。对该解决方案的检查被确定为可能的结合模式，并用于进一步的分析。然后，利用AMBER力场(parm14.dat参数组)和软件NAMD 2.12分子动力学引擎(Case，D.A.等，AMBER 11，University of San Francisco，California；Jorgensen，W.1.等，1983.J.Chem.Phys.，79：926-935；Phillips，J.C.等，2005.J.Compt.Chem.，26：1781-802)，通过在显式水溶剂(TIP3P模型)中由MD模拟(20ns)来细化来自分子对接的VSX：聚糖构象。在100次运行后，2，4-P-Hep-Vsx配体-受体复合物几何图形使用Autodock 4.2自动对接获得(Morris，G.M.等，2009.J.Compt.Chem.，30：2785-91)，而参数化包括：种群规模为1000个体，最大代数为270’000，最大能量评价数为2.5·107。配体/受体构象搜索采用拉马克遗传算法4.2，涉及2，4-P-Hep的所有16个二面角，而VSX保持刚性。在所有的100次对接中随机选择配体/受体的相对初始位置和方向，然后使用公差RMSD对获得的位姿进行聚类。结合能最低、总体最高的簇(-6.0Kcal mol-1Autodock评分函数)显示2，4-P-Hep的C6-C7脂肪族尾与VSX结合袋相匹配，与图5A左侧报道的结构一致。从复合物：2，4-P-Hep-VSX的选定几何结构开始进一步细化对接，其特征是先前获得的Hep的4-P磷酸基团与VSX结合袋相匹配。在这进一步的100次运行中，autodock预测了一个额外的聚糖-VSX簇，其特征是契合VSX结合袋的Hep的4-P磷酸基团，如图5A右侧所示，其估计的结合能比之前的溶液略大(-3.8Kcalmol-1)。在对接过程结束时，通过显式水溶剂(TIP3P)中的MD模拟(约40ns)进一步细化了复合物2，4-P-Hep-VSX的两种对接位姿，其中C6-C7脂肪族尾或4-P磷酸基团与VSX结合袋契合。GLYCAM06力场被用来对2，4-P-Hep聚糖建模(Kirschner，K.N.等，2008.J.COmpt.Chem.，29：622-55；Holmberg，N.等，1999.Protein Eng.，12：851-6)。为了实现MD模拟轨迹的可视化，使用了操作和动态分析VMD 1.9.3和wordom 0.22软件(Humphrey，W.等，1996.J.Mol.Graph，14：33-8，27-8；Seeber，M.等，2007.Bioinformatics，23：2625-7)。在这些MD模拟中，评估和分析了配体/受体的相对距离和方向，特别是通过均方根波动(RMSF)函数比较了两种假设结合状态下的Hep动力学。
ADC的构建。将含有N末端GGG分选酶供体序列的肽连接到含有分选酶A识别序列LPETGGG(SEQ ID NO：244)的mAb重链的C末端。在连接之前，将mAb缓冲液交换成150mMNaCl/50mM Tris(pH 7.5)。优化的分选酶连接条件在150mM NaCl/50mM Tris(pH 7.5)中进行，使用20当量的肽，以1.5mg/mL mAb(150kDa)，10mM CaCl2，5.8μg/mL分选酶A(来自BPS生物科学公司(BPS Bioscience)，(21.7kDa))。在环境温度下在黑暗中孵育18小时后，将样品在PBS中稀释至10ml总体积并通过FPLC纯化。使用通过在10mM DTT中在65℃下加热5μg样品15分钟制备的还原的抗体，通过Q-TOF质谱法测定偶联效率。
血清稳定性的评估将正常人血清(NHS)(Sigma S-7023)解冻，在水中稀释，以13000rpm离心10分钟，并将上清液在水浴中温热至37℃。将20μl每种测试制品置于2.0ml圆底微量离心管中。向每个管中加入2ml稀释的NHS，并立即涡旋管，并将200μl转移到具有40μl 15％三氯乙酸(TCA)的新微量离心管中。将测定管在37℃下在时间点之间的旋转架中放置。将TCA管置于冰上15分钟，然后以13000rpm离心10分钟。收集每个管的上清液并在-20℃冷冻用于分析。收获样品并在不同时间点处理长达6小时。
抗微生物活性的评估。根据CLSI指南，在96孔微量滴定板中使用2倍连续化合物稀释确定MIC。简言之，将化合物在母板上在水中稀释，然后将2μl冲压至测定板，每个待测试菌株一个板。将细菌菌株在37℃下在琼脂平板上过夜继代培养。过夜平板用于在0.85％盐水中制备0.5McFarland培养物。将这些浓缩的培养物在生长培养基中以1∶200稀释至约5×105个细胞/ml。所有测定板每孔接受100μl稀释的培养物。将所有板置于37℃过夜。18小时后，使用镜面板读数器读取板并反射白炽灯光。MIC被定义为抑制生长至少80％的化合物的最低浓度。当通过眼睛阅读时，MIC及其以上的孔应该看起来没有生长。
为了评估微生物的杀伤能力，细菌细胞在37℃的琼脂板上进行过夜有氧培养。过夜平板用于接种在250ml通气烧瓶中的30ml生长培养基的培养物。培养物在37°有氧培养，以150rpm振荡。在A600处监测生长，并在对数中期生长时收获细菌细胞。将10ml培养物在4000xg下沉淀10分钟，并用PBS加1％BSA洗涤一次，然后再悬浮于2ml PBS+BSA中。将浓缩的培养物用于将6ml管的PBS加BSA接种至OD，得到浓度为1×108个细胞/ml。将培养物在PBS加BSA中稀释至1×104个细胞/ml。将测试制品在PBS+1％BSA中稀释，并将50μl每种测试浓度加载到96孔聚丙烯微量滴定板中。将50μl稀释的培养物加入所有测试孔以及没有化合物的对照孔。摇动平板并在37℃，90分钟，静态孵育。将来自每个测定孔的10μl接种到琼脂平板上，并在37℃下孵育过夜。由与没有化合物的对照孔的CFU相比的测试孔的CFU确定杀灭百分比。
混合微生物试验。将细菌菌株在37℃下在琼脂平板上过夜有氧培养。用过夜平板在6毫升PBS(约1x108细胞/ml)中建立0.5McFarland培养物。浓缩培养物在PBS中稀释到1x104个细胞/ml。将10μl每种稀释的培养物接种到血琼脂平板(BAP)上以确定初始浓度，检查纯度，并建立菌株形态。将1ml的每种稀释培养物合并(总共三)并且用PBS使体积达到10mL(1x103个细胞/ml各菌株)。将25μ1的混合培养物接种到BAP上，以确定每种菌株在t＝0时的CFU/ml。试验品在PBS中连续稀释4倍，最终体积为200μl，置于2.0ml圆底Eppendorf管中。包括无化合物对照。将200μl混合细菌培养物加入所有测定管中。旋涡管和立即将来自各管的50μl接种在单独的BAP上。测定管在37℃孵育，在时间点之间旋转。涂板过程每隔1小时重复2小时，所有板在37℃孵育过夜。第二天，计数所有的培养皿，记录每一菌种的CFU，以不同的形态区分，并将结果绘制为与无化合物对照相比的杀伤百分比。
中性粒细胞缺乏的小鼠模型CD1小鼠由查尔斯河公司(Charles River)(英国马盖特)提供，并且不含特定病原体。雄性小鼠在收到时为11-15g，并允许适应至少7天。小鼠被安置在消毒的单独通风笼子中，使小鼠始终暴露在HEPA过滤的无菌空气中。通过在感染前4天用200mg/kg和感染前1天用150mg/kg环磷酰胺腹膜内注射的免疫抑制使小鼠中性白细胞减少。免疫抑制方案在第一次注射给药后24小时开始导致中性粒细胞减少，这在整个研究中持续。铜绿假单胞菌菌株ATCC 27853用于评估体内保护。对于感染，首先通过以约15mL/kg递送的IP注射用氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉混合物(90mg/kg氯胺酮/9mg/kg甲苯噻嗪)麻醉动物。通过向小鼠鼻孔中鼻内滴注(每个鼻孔20μL，鼻孔之间5分钟)用0.04mL接种物感染麻醉的小鼠，并在感染后在绳架上保持直立位约10分钟。接种物浓度为2.83×105CFU/mL(约1.14×104CFU/肺)。试剂是按照实施例中指定的IN或IP给予的。监测动物的临床状况，并且对抵挡不住该疾病的动物进行人道安乐死。在感染后约24.5小时，当大多数载药小鼠出现明显临床症状时，研究终止。在感染后24.5小时，评估所有剩余动物的临床状况，并通过过量戊巴比妥使其人道安乐死。在移除肺并称重之前测定动物重量。使用Precellys珠粒打浆机将肺样品在冰冷的无菌磷酸盐缓冲盐水中匀浆；将匀浆物在假单胞菌选择性琼脂上定量培养，并在37℃下孵育16至24小时，然后计数菌落。数据分析使用StatsDirect软件(2.7.8版本)。非参数Kruskal-Wallis检验用于检验组织负荷数据的所有两两比较(Conover-Inman)。
急性肺部感染模型。急性肺部感染模型如前所述(3)进行了一些微小的修改。简单地，6-8周龄C3H/H3N雌性小鼠全身麻醉(氯胺酮和羟嗪腹腔注射)后，在每个鼻孔内接种10μL(1x106CFU)参比菌株铜绿假单胞菌PA14诱导急性肺部感染。接种物是在LB中培养的PA14的过夜培养物稀释后制备的。对小鼠进行了为期四天的监测，当它们出现即将死亡的迹象时，包括毛发皱缩、嗜睡、颤抖、呼吸频率高、触摸时无法移动或侧卧后无法恢复正常时，对它们进行人道安乐死。对于保护试验，ADC或对照化合物在细菌攻击后3小时以15/mg/kg，IP注射。
通过引用纳入
本文提到的所有出版物、专利和登记号在此通过引用全文纳入本文，如同每个单独的出版物或专利被明确单独指明通过引用纳入。
等同形式
尽管讨论了本文的组合物和方法的具体实施方式，但以上说明书仅为说明性而非限制性的。本领域的技术人员阅读了本说明书和所附权利要求后将清楚了解本发明的许多变化。本发明的全部范围应该通过参考所附权利要求书连同其等同物的全部范围，以及说明书连同此类变化来确定。
序列表
<110> 威特拉公司（VISTERRA, INC.）
<120> 抗体分子-药物偶联物及其用途
<130> P2029-7036WO
<140>
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<150> 63/004,946
<151> 2020-04-03
<160> 270
<170> PatentIn version 3.5
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 12
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 14
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
1 5
<210> 15
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 15
Tyr Pro Tyr His Gly Ile
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 16
Gly Gly Ser Arg Arg Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 17
Asp His Tyr Ile Asn
1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 18
Gly Ile Tyr Pro Tyr His Gly Ile Thr Lys Tyr Asn Arg Asn Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 19
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 20
Arg Asn Lys Arg Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 21
Gln Gly Arg Gly Tyr Thr Leu Asp Tyr
1 5
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 22
Asp Tyr Tyr Met Thr
1 5
<210> 23
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 23
Leu Ile Arg Asn Lys Arg Asn Gly Asp Thr Ala Glu Tyr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 24
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 24
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Leu Pro Glu Thr
1 5 10 15
Gly Gly Gly
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 25
Arg Ala Lys Ala Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 26
Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Pro Glu Thr Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 27
Asp Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 28
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 28
Leu Ile Arg Ala Lys Ala Asn Gly Asp Thr Ala Glu Tyr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 29
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1 5
<210> 30
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 30
Tyr Pro Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 31
Gly Ser Tyr Ser Leu Asp Tyr
1 5
<210> 32
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 32
Ser Tyr Trp Ile Thr
1 5
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 33
Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 34
Gly Phe Asn Ile Lys Asn Thr
1 5
<210> 35
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 35
Asp Pro Ala Asn Gly Asn
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 36
Ser Asn Tyr His Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 37
Asn Thr Tyr Met His
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 38
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 39
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr
1 5
<210> 40
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 40
Ser Tyr Asp Gly Ser
1 5
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 41
Trp Asn Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 42
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 42
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1 5
<210> 43
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 43
Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 10 15
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 44
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 45
Asn Pro Tyr Asn Gly Gly
1 5
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 46
Thr Arg Gln Leu Gly Leu Arg Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 47
Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 48
Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 49
Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 50
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 51
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 52
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Ile Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 53
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 54
Leu Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 55
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 56
Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 57
Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 58
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 58
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 59
Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 60
Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 61
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 61
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 62
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 63
Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 64
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 65
Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 66
Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 67
Ala Leu Trp Lys Thr Leu Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 68
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 68
Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly
20 25
<210> 69
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 69
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 70
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 70
Ala Leu Trp Lys Thr Leu Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 71
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 71
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 72
Lys Lys Leu Leu Lys Trp Leu Lys Lys Leu Leu
1 5 10
<210> 73
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 73
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 74
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 74
Arg Leu Gly Asn Phe Phe Arg Lys Ala Lys Lys Lys Ile Gly Arg Gly
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Asp Phe Leu Gly Asn Leu Val
20 25 30
Pro Arg Thr Glu Ser
35
<210> 75
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 75
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ile Gly Lys Phe Leu
1 5 10 15
Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe Val Lys Ile Leu Lys Lys
20 25 30
<210> 76
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 76
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala
20 25 30
<210> 77
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 77
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Trp Lys Thr Leu
1 5 10 15
Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Ala Ala Lys
20 25
<210> 78
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 78
Gly Trp Lys Lys Trp Phe Asn Arg Ala Lys Lys Val Gly Lys Thr Val
1 5 10 15
Gly Gly Leu Ala Val Asp His Tyr Leu Gly
20 25
<210> 79
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 79
Gly Ala Phe Gly Asn Phe Leu Lys Gly Val Ala Lys Lys Ala Gly Leu
1 5 10 15
Lys Ile Leu Ser Ile Ala Gln Cys Lys Leu Phe Gly Thr Cys
20 25 30
<210> 80
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 80
Gly Gly Gly Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly
1 5 10 15
Val Lys Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly
20 25 30
<210> 81
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 81
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgtg ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gaccactata taaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggaggt atttatcctt accacggtat tactaagtac 180
aaccggaatt tcaaggacaa ggccacattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctca acagcctgac atctgaactc tctgcagtct attactgtgc aagcggggga 300
agtcgccggt acttcgatgt ctggggcaca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 82
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 82
gaagtgcagc tcgtggaatc tggaggagga cttgtgcaac ctggaggttc cctgcgactg 60
tcgtgtgccg catccggttt caccttttcc gactactaca tgacctgggt cagacaggcg 120
ccggggaagg gactggagtg ggtcggcttg atccgcaaca agaggaacgg cgatactgct 180
gaatactcgg ccagcgtgaa ggggcggttc accatctcga gagatgacag caagaactcc 240
ctgtacctcc aaatgaactc cctgaaaacc gaggacactg cggtgtacta ctgcgcccgc 300
cagggtcgcg gctacacgct ggactattgg ggccagggca ccctggtcac tgtgtcaagc 360
<210> 83
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 83
gaagtgcagc tcgtggaatc tggaggagga cttgtgcaac ctggaggttc cctgcgactg 60
tcgtgtgccg catccggttt caccttttcc gactactgga tgacctgggt cagacaggcg 120
ccggggaagg gactggagtg ggtcggcttg atccgcgcca aggcgaacgg cgatactgct 180
gaatactcgg ccagcgtgaa ggggcggttc accatctcga gagatgacag caagaactcc 240
ctgtacctcc aaatgaactc cctgaaaacc gaggacactg cggtgtacta ctgcgcccgc 300
cagggtcgcg gctacacgct ggactattgg ggccagggca ccctggtcac tgtgtcaagc 360
<210> 84
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 84
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag cttgtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga taacctgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagat atttatcctg gtagtggtag tactaactac 180
aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca catcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaggtagc 300
tactcccttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348
<210> 85
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 85
gaggttcagc tgcagcagtc tgtggcagag cttgtgaggc caggggcctc agtcaagttg 60
tcctgcacag cttctggctt caacattaaa aacacctata tgcactgggt gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatggtaa tactaaatat 180
gccccgaagt tccagggcaa ggccactata actgcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccatct attactgtgc tcctagtaac 300
taccatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351
<210> 86
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 86
gatgtacagc ttcaggagtc aggacctggc ctcgtgaaac cttctcagtc tctgtctctc 60
acctgctctg tcactggcta ctccatcacc agtggttatt actggaactg gatccggcag 120
tttccaggaa acaaactgga atggatgggc tacataagct acgatggtag caataactac 180
aacccatctc tcaaaaatcg aatctccatc actcgtgaca catctaagaa ccagtttttc 240
ctgaagttga attctgtgac tactgaggac acagccacat attactgtgc aagatggaat 300
ggtaactact ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 87
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 87
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgtg ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactata tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagtt attaatcctt acaacggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaaccaga 300
cagctcgggc tacgttggtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 360
<210> 88
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 88
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagacttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336
<210> 89
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 89
gacatccaga tgactcagtc cccgtcctca gtctccgcat ccgtgggaga tcgcgtgacg 60
attacttgcc gggcgtcgca gaacatcaac atctggctgt cgtggtacca gcagaagccc 120
gggaaggctc cgaagctgct gatctacaag gcctcaaact tgcacaccgg cgtgccttcc 180
cgcttttctg gttcgggctc cgggactgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaggacttcg ccacctatta ctgcctccaa ggacagtcct acccaagaac cttcggcgga 300
ggaaccaagg tcgaaatcaa a 321
<210> 90
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 90
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtcttctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag cgcctgatat attatatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcaga gggtcaggaa ctgatttcac actgagaatc 240
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaaagtct agaatatcct 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaa 336
<210> 91
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 91
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336
<210> 92
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 92
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca aatccagtca gagtctgctc aacagtagaa cccgaaagaa ctacttggct 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttataatctg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336
<210> 93
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 93
gacattcaga tgacccagtc tcctgcctcc cagtctgcat ctctgggaga aagtgtcacc 60
atcacatgcc tggcaagtca gaccattggt acatggttag catggtatca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctcagctcct gatttatgct gcaaccagct tggcagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gtagtggatc tggcacaaaa ttttctttca agatcagcag cctacaggct 240
gaagattttg taagttatta ctgtcaacaa ctttacagta ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 94
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 94
Gly Ile Gly Lys His Val Gly Lys Ala Leu Lys Gly Leu Lys Gly Leu
1 5 10 15
Leu Lys Gly Leu Gly Glu Ser
20
<210> 95
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 95
Gly Arg Arg Lys Arg Lys Trp Leu Arg Arg Ile Gly Lys Gly Val Lys
1 5 10 15
Ile Ile Gly Gly Ala Ala Leu Asp His Leu
20 25
<210> 96
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 96
Gly Gly Leu Arg Ser Leu Gly Arg Lys Ile Leu Arg Ala Trp Lys Lys
1 5 10 15
Tyr Gly Pro Gln Ala Thr Pro Ala Thr Arg Gln
20 25
<210> 97
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 97
Ile Lys Trp Lys Lys Leu Leu Arg Ala Ala Lys Arg Ile Leu
1 5 10
<210> 98
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 98
Ile Gly Lys Lys Trp Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Lys Lys Phe Leu
1 5 10 15
Arg Lys Leu
<210> 99
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 99
Ile Leu Gly Lys Ile Trp Lys Ile Lys Lys Leu Phe
1 5 10
<210> 100
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 100
Arg Leu Gly Asp Ile Leu Gln Lys Ala Arg Glu Lys Ile Glu Gly Gly
1 5 10 15
Leu Lys Lys Leu Val Gln Lys Ile Lys Asp Phe Phe Gly Lys Phe Ala
20 25 30
Pro Arg Thr Glu Ser
35
<210> 101
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 101
Gly Gly Gly Gly Arg Phe Lys Arg Phe Arg Lys Lys Phe Lys Lys Leu
1 5 10 15
Phe Lys Lys Leu Ser Pro Val Ile Pro Leu Leu His Leu Gly
20 25 30
<210> 102
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 102
Gly Arg Phe Lys Arg Phe Arg Lys Lys Phe Lys Lys Leu Phe Lys Lys
1 5 10 15
Leu Ser Pro Val Ile Pro Leu Leu His Leu Gly
20 25
<210> 103
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 103
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 104
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 104
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His
20 25 30
Gly Ile Ser Pro Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Lys Phe Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 105
Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
1 5
<210> 106
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 106
Ser Ser Asp Gly Asp Ser
1 5
<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 107
Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 108
Asp Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 109
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 109
Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 110
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 110
Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His Gly Ile Ser Pro Met His
1 5 10 15
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 111
Arg Ala Ser Asn Leu Lys Phe
1 5
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 112
Gln Gln Ser Asn Glu Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 113
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 113
gaagtgaagt tggtggagtc tgggggagac ttggtgaaac ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgaatt cactttcagt gattatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggcgaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg atggtgatag tacctactat 180
ccggacaata ttaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctatac 240
ctgcaaatga acagtctgag gtctgaggac acggccatgt atttttgtgc aagagaaata 300
cggctaaggg ggtacttcga tgtctggggc gcagggacca cggtcaccgt ctcctca 357
<210> 114
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多核苷酸"
<400> 114
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atatcctgca gagccagtga aagtgttttt ggtcatggca ttagtcctat gcactggtac 120
cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctaaaattt 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240
cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga atatcctcgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggagatc aaa 333
<210> 115
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 115
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Val Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 116
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 116
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 117
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 117
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 118
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 118
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 119
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 119
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His
20 25 30
Gly Ile Ser Pro Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
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50 55 60
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多肽"
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<220>
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多肽"
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肽"
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<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 149
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<213> 人工序列
<220>
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多肽"
<400> 150
Gly Gly Gly Thr Leu Ile Ser Trp Ile Lys Asn Lys Arg Lys Gln Arg
1 5 10 15
Pro Arg Val Ser Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Gly Arg Arg Arg Arg
20 25 30
<210> 151
<211> 29
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
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肽"
<400> 151
Gly Gly Gly Gly Ile Gly Ala Ile Leu Lys Val Leu Ala Thr Gly Leu
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 152
Gly Gly Gly Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile
1 5 10 15
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35
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 153
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1 5 10 15
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20 25 30
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<220>
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多肽"
<400> 154
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<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 155
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1 5 10 15
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<213> 人工序列
<220>
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<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 156
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 157
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1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 158
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Cys Gly Lys Ala Cys
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 159
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 159
Gly Gly Gly Gly Arg Cys Lys Arg Phe Arg Lys Lys Cys Lys Lys Leu
1 5 10 15
Phe Lys Lys Leu Ser Pro Val Ile Pro Leu Leu His Leu Gly
20 25 30
<210> 160
<211> 5
<212> PRT
<213> 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 160
Leu Pro Xaa Thr Gly
1 5
<210> 161
<211> 5
<212> PRT
<213> 酿脓葡萄球菌（Staphylococcus pyogenes）
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 161
Leu Pro Xaa Thr Ala
1 5
<210> 162
<211> 5
<212> PRT
<213> 葡萄球菌种
<400> 162
Leu Pro Glu Thr Gly
1 5
<210> 163
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 163
Gly Gly Gly Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly
1 5 10 15
Lys Ala Phe Val Lys Ile Leu Lys Lys
20 25
<210> 164
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> D-Dab
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(6)
<223> Dab
<220>
<221> SITE
<222> (5)..(11)
<223> 环
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> D-Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(10)
<223> Dab
<400> 164
Gly Gly Gly Xaa Xaa Xaa Leu Phe Xaa Xaa Leu
1 5 10
<210> 165
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 变体
<222> (9)..(9)
<223> /替换="Thr"
<220>
<221> 变体
<222> (14)..(14)
<223> /替换="Ser"
<220>
<221> 变体
<222> (15)..(15)
<223> /替换="Val"
<220>
<221> 位点
<222> (1)..(17)
<223> /注="序列中给出的变体残基对于变体位置的注释中的那些没有偏好"
<400> 165
Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 166
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Ile"
<220>
<221> 变体
<222> (14)..(14)
<223> /替换="Leu"
<220>
<221> 位点
<222> (1)..(15)
<223> /注="序列中给出的变体残基对于变体位置的注释中的那些没有偏好"
<400> 166
Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His Gly Ile Ser Pro Met His
1 5 10 15
<210> 167
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 变体
<222> (4)..(4)
<223> /替换="Ser"
<220>
<221> 变体
<222> (5)..(5)
<223> /替换="Arg"
<220>
<221> 变体
<222> (7)..(7)
<223> /替换="Thr"或"Ser"
<220>
<221> 位点
<222> (1)..(7)
<223> /注="序列中给出的变体残基对于变体位置的注释中的那些没有偏好"
<400> 167
Arg Ala Ser Asn Leu Lys Phe
1 5
<210> 168
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 168
Leu Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 169
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 169
Leu Cys Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 170
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 170
Ala Ala Leu Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 171
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 171
Ser Gln Leu Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 172
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 172
Ala Ala Phe Met Thr Gly Arg
1 5
<210> 173
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 173
Ala Ala Phe Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 174
Ser Ala Phe Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 175
Ala Ser Ile Leu Thr Gly Lys
1 5
<210> 176
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 176
Val Ser Phe Leu Thr Gly Arg
1 5
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 177
Ala Ser Leu Leu Thr Gly Leu
1 5
<210> 178
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 178
Ala Ser Ile Leu Ile Thr Gly
1 5
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 179
Ser Ala Ile Met Thr Gly Arg
1 5
<210> 180
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 180
Ser Ala Ile Val Thr Gly Arg
1 5
<210> 181
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 181
Thr Asn Leu Trp Arg Gly
1 5
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 182
Thr Asn Leu Trp Arg Gly Gln
1 5
<210> 183
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 183
Thr Asn Leu Cys Ala Ala Ser
1 5
<210> 184
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 184
Val Ser Leu Trp Thr Gly Lys
1 5
<210> 185
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 185
Ser Met Leu Leu Thr Gly
1 5
<210> 186
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 186
Ser Met Leu Leu Thr Gly Asn
1 5
<210> 187
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 187
Ser Met Leu Leu Thr Gly Thr
1 5
<210> 188
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 188
Ala Ser Phe Met Ala Gly Gln
1 5
<210> 189
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 189
Gly Ser Leu Phe Thr Gly Arg
1 5
<210> 190
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Ala"
<220>
<221> 位点
<222> (1)..(7)
<223> /注="序列中给出的变体残基对于变体位置的注释中的那些没有偏好"
<400> 190
Cys Gly Pro Ser Arg Met Ser
1 5
<210> 191
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Ala"
<220>
<221> 位点
<222> (1)..(6)
<223> /注="序列中给出的变体残基对于变体位置的注释中的那些没有偏好"
<400> 191
Cys Gly Pro Ser Arg Met
1 5
<210> 192
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 192
Met Cys Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 193
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 193
Val Cys Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 194
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 194
Leu Cys Ser Pro Ser Arg
1 5
<210> 195
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 195
Leu Cys Ala Pro Ser Arg
1 5
<210> 196
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 196
Leu Cys Val Pro Ser Arg
1 5
<210> 197
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 197
Leu Cys Gly Pro Ser Arg
1 5
<210> 198
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 198
Ile Cys Thr Pro Ala Arg
1 5
<210> 199
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 199
Leu Cys Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 200
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 200
Met Cys Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 201
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 201
Val Cys Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 202
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 202
Leu Cys Ser Pro Ser Lys
1 5
<210> 203
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 203
Leu Cys Ala Pro Ser Lys
1 5
<210> 204
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 204
Leu Cys Val Pro Ser Lys
1 5
<210> 205
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 205
Leu Cys Gly Pro Ser Lys
1 5
<210> 206
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 206
Leu Cys Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 207
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 207
Ile Cys Thr Pro Ala Ala
1 5
<210> 208
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 208
Met Cys Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 209
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 209
Val Cys Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 210
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 210
Leu Cys Ser Pro Ser Ala
1 5
<210> 211
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 211
Leu Cys Ala Pro Ser Ala
1 5
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 212
Leu Cys Val Pro Ser Ala
1 5
<210> 213
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 213
Leu Cys Gly Pro Ser Ala
1 5
<210> 214
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 214
Leu Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 215
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 215
Met Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 216
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 216
Val Xaa Thr Pro Ser Arg
1 5
<210> 217
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 217
Leu Xaa Ser Pro Ser Arg
1 5
<210> 218
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 218
Leu Xaa Ala Pro Ser Arg
1 5
<210> 219
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 219
Leu Xaa Val Pro Ser Arg
1 5
<210> 220
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 220
Leu Xaa Gly Pro Ser Arg
1 5
<210> 221
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 221
Ile Xaa Thr Pro Ala Arg
1 5
<210> 222
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 222
Leu Xaa Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 223
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 223
Met Xaa Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 224
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 224
Val Xaa Thr Pro Ser Lys
1 5
<210> 225
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 225
Leu Xaa Ser Pro Ser Lys
1 5
<210> 226
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 226
Leu Xaa Ala Pro Ser Lys
1 5
<210> 227
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 227
Leu Xaa Val Pro Ser Lys
1 5
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 228
Leu Xaa Gly Pro Ser Lys
1 5
<210> 229
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 229
Leu Xaa Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 230
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 230
Met Xaa Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 231
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 231
Val Xaa Thr Pro Ser Ala
1 5
<210> 232
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 232
Leu Xaa Ser Pro Ser Ala
1 5
<210> 233
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 233
Leu Xaa Ala Pro Ser Ala
1 5
<210> 234
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 234
Leu Xaa Val Pro Ser Ala
1 5
<210> 235
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 甲酰甘氨酸
<400> 235
Leu Xaa Gly Pro Ser Ala
1 5
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 来源
<223> /注="关于取代和优选实施方式的详细说明参见提交的说明书"
<400> 236
Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 237
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<220>
<221> 来源
<223> /注="关于取代和优选实施方式的详细说明参见提交的说明书"
<400> 237
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 238
Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 239
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 239
Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 240
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 240
Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 241
Gly Gly Gly Ser Gly
1 5
<210> 242
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 242
Gly Ser Ser Ser Gly
1 5
<210> 243
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 243
Leu Cys Thr Pro Ser Arg Gly Gly Gly Gly Leu Cys Thr Pro Ser Arg
1 5 10 15
<210> 244
<211> 7
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 来源
<223> /注="未知的说明：分选酶A识别序列"
<400> 244
Leu Pro Glu Thr Gly Gly Gly
1 5
<210> 245
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 245
Gly Ile Gly Lys Phe Leu Lys Lys Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe
1 5 10 15
Val Lys Ile Leu Lys Lys
20
<210> 246
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 246
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Ala Leu Lys Lys Ser Val Ala Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Ala Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 247
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 247
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Thr Leu Lys Lys Ser Val Thr Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Thr Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 248
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 248
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Thr Leu Lys Lys Ser Val Lys Thr Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Thr Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 249
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 249
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Ala Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Ala Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 250
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 250
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Ala Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Ala Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 251
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 251
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Ser Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Ser Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 252
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 252
Gly Gly Gly Ala Phe Phe Ala Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 253
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 253
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Ala Lys Pro Ala Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe
<210> 254
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 254
Gly Gly Gly Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ala Gly Lys Phe Phe Arg Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro
20 25 30
Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro Phe
35 40
<210> 255
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 255
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe Ala Ala Ala Gly Glu Glu Glu Glu
35 40
<210> 256
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 256
Gly Gly Gly Lys Phe Phe Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Phe Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Phe Ala Ala Ala Gly Ala Val Glu Asp Leu Glu Asp
35 40
<210> 257
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 257
Gly Gly Gly Lys Leu Leu Arg Lys Leu Lys Lys Ser Val Lys Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Leu Leu Lys Lys Pro Arg Val Ile Gly Val Ser Ile Pro
20 25 30
Leu
<210> 258
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 258
Gly Gly Gly His Thr Ala Ser Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Ala Ala Asn Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser Met Ala
20 25
<210> 259
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
6xHis标签"
<400> 259
His His His His His His
1 5
<210> 260
<211> 5
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 来源
<223> /注="未知的说明：分选酶A识别序列"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 260
Leu Pro Xaa Thr Gly
1 5
<210> 261
<211> 7
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 来源
<223> /注="未知的说明：分选酶A识别序列"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<400> 261
Leu Pro Xaa Thr Gly Gly Gly
1 5
<210> 262
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<220>
<221> 位点
<222> (1)..(40)
<223> /注="该序列可包括2-20个'Gly Ser'重复单元"
<400> 262
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
20 25 30
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
35 40
<210> 263
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
肽"
<400> 263
Ser Ser Asp Gly Asp
1 5
<210> 264
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 264
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 265
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 265
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Arg Leu Arg Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 266
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 266
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Phe Gly His
20 25 30
Gly Ile Ser Pro Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 267
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 267
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Leu Pro
20 25 30
Glu Thr Gly Gly Ser Gly
35
<210> 268
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 268
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Leu Pro
20 25 30
Glu Thr Gly Gly Gly
35
<210> 269
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 269
Asn Arg Gly Glu Cys Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
20 25 30
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ala Ser Leu Pro Glu Thr Gly Gly Ser
35 40 45
Gly
<210> 270
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成
多肽"
<400> 270
Pro Gly Lys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
20 25 30
Ser Ala Ser Leu Pro Glu Thr Gly Gly Ser Gly
35 40

Claims (26)

1.一种抗体分子-药物偶联物(ADC)，其包含抗体分子和共价偶联的肽，
其中所述抗体分子包含重链可变区(VH)，其中VH包含三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中VH包含：
(a)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3，或
(b)包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的HCDR2；和包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的HCDR3，和
其中抗体分子包含轻链可变区(VL)，其中VL包含三个轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)，并且其中VL包含：包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的LCDR3；和
其中肽包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：257的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性。
2.如权利要求1所述的ADC，其中VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和其中VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列；或
其中VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和其中VL包含：LCDR1，包含SEQID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ IDNO：112的氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的ADC，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ IDNO：117的氨基酸序列有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性；和/或
其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：135的氨基酸序列有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同源性。
4.如权利要求1-3中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子能够结合假单胞菌(例如，铜绿假单胞菌)，例如，其中所述抗体能够结合假单胞菌上的脂多糖(LPS)，例如，假单胞菌上的LPS上的内部聚糖部分。
5.如权利要求1-4中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子不结合，或基本不结合：
(i)大肠杆菌LPS，例如，由Western印迹所确定；
(ii)庚糖或单磷酸化的庚糖类似物(例如，2-P-Hep或4-P-Hep)，例如，由生物层干涉分析所确定；和/或
(iii)大肠杆菌、肺炎克雷铂菌、鼠伤寒沙门氏菌、革兰氏阳性生物体或哺乳动物细胞中的一个或多个，例如，由全细胞ELISA所确定。
6.如权利要求1-5中任一项所述的ADC，其中所述抗体分子结合：
(i)二磷酸化的2，4-P-Hep单糖，例如，通过生物层干涉分析所确定；
(ii)二磷酸化的甘露糖(2，4-P-Man)，例如，其结合相比二磷酸化的2，4-P-Hep单糖有所降低，例如，通过生物层干涉分析所确定；
(iii)一个或多个本文所述的铜绿假单胞菌菌株，例如，对碳青霉烯类、抗假单胞菌第三代头孢菌素类或氟喹诺酮类有耐药性的一种或多种菌株，例如，具有约20至约150pM(例如，约50至约120pM)的表观亲合力，例如，通过全细菌细胞ELISA所确定；和/或
(iv)除铜绿假单胞菌以外的假单胞菌物种，例如，荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)或施氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri)中的一个或多个，例如，如全细菌细胞ELISA所确定。
7.如权利要求1-6中任一项所述的ADC，其中抗体分子是单克隆抗体分子，人源化抗体分子、分离的抗体分子、或合成抗体分子。
8.如权利要求1-7中任一项所述的ADC，其中抗体分子包含两个VH和两个VL；
可选地，其中：
(i)抗体分子还包含IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的重链恒定区，
(ii)抗体分子还包含来自κ或λ链的轻链恒定区，
(iii)抗体分子包含Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
9.如权利要求1-8中任一项所述的ADC，其中所述肽：
(i)包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个D-氨基酸，或肽中氨基酸残基的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％是D-氨基酸；
(ii)与VH，例如VH的C-端，例如间接(例如，通过恒定区，接头或两者)偶联；
(iii)通过酶促连接，例如，使用分选酶A(SrtA)，例如，通过分选酶识别序列(例如，LPETGGG(SEQ ID NO：244))与抗体分子偶联；和/或
(iv)包含分选酶供体序列，例如，N-末端GGG。
10.如权利要求1-9中任一项所述的ADC，其中所述ADC：
(i)在抗体分子和肽之间包含接头，例如，(Gly-Ser)n接头序列，其中n＝2至20(SEQ IDNO：262)；
(ii)具有约2至约8，例如，约2至约4的肽：抗体分子比，例如，如质谱所确定；和/或
(iii)具有约2的肽∶抗体分子比，例如，如质谱所确定。
11.如权利要求1-10中任一项所述的ADC，其中所述ADC在以下浓度下具有针对铜绿假单胞菌的体外杀菌活性：
(i)约2μg/mL至约50μg/mL，例如，约3.1μg/mL至约25μg/mL的浓度，和/或
(ii)与参比ADC，例如VSX-1相比，相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的浓度。
12.如权利要求1-11中任一项所述的ADC，其中所述ADC具有：
(i)对于铜绿假单胞菌，约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的平均裂解浓度(MLC)；
(ii)对于铜绿假单胞菌，与参比ADC，例如VSX-1相比，相差50％或更低，例如45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或更低的MLC；
(iii)对于铜绿假单胞菌，约500μg/mL或更大，例如，800μg/mL或更大的CC50(观察到哺乳动物细胞50％细胞毒性的浓度)；
(iv)对于铜绿假单胞菌，比参比ADC，例如，VSX-1高，例如高至少0.5、1、2、3、4或5倍的CC50；和/或
(v)与参比ADC，例如VSX-1相比，改善的生物分布，例如，通过药代动力学测量，全体成像，体内成像，器官分布评估(例如，ADC不基本上或主要分布到肝脏)，ELISA和/或血样质谱。
13.一种ADC，其包含抗体分子，其包含两个VH和两个VL，
其中VH与包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的肽共价偶联；和
其中：
(i)VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和VL包含：LCDR1，包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列；或
(ii)VH包含：HCDR1，包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；HCDR2，包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；和HCDR3，包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；和VL包含：LCDR1，包含SEQ IDNO：138的氨基酸序列；LCDR2，包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列；和LCDR3，包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列；
任选地，其中VH包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列；并且其中VL包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列；
任选地，其中肽通过(Gly-Ser)n接头与VH的C-末端偶联。
14.一种药物组合物，包括如权利要求1-13中任一项所述的ADC和药学上可接受的运载体。
15.如权利要求1-13中任一项所述的ADC，或如权利要求14所述的药物组合物，用于治疗或预防对象中与假单胞菌(例如，铜绿假单胞菌)相关的细菌感染的方法；
可选地，其中：
(i)以1-10mg/kg的剂量给予ADC；
(ii)ADC通过静脉内，皮下或鼻内或通过吸入给予；
(iii)在与细菌感染相关的症状发作之前或之后给予ADC；
(iv)对象具有以下一种或多种：肺炎、尿路感染(UTI)、败血症、脑膜炎、腹泻、软组织感染、皮肤感染、菌血症、呼吸系统感染、心内膜炎、腹腔内感染、脓毒性关节炎、骨髓炎、中枢神经系统感染、眼部感染、胆囊炎、胆管炎、脑膜炎、伤寒、食物中毒、肠胃炎、肠热病、志贺氏菌病、血流感染、腹腔内败血症、脑脓肿、脑膜炎、败血症、关节感染、骨骼感染、肠胃感染或伤口感染；
(v)细菌感染是医院感染或医院获得性感染；
(vi)对象是人或动物；
(vii)对象是免疫功能低下的患者或健康专业人员；
(viii)对象患有，或有患有以下的风险：HIV感染或AIDS，癌症，实体器官移植，干细胞移植，镰状细胞病或无脾，先天性免疫缺陷，慢性炎性病症，耳蜗植入，营养不良或脑脊液渗漏；
(ix)对象为18岁或更小，15岁或更小，12岁或更小，9岁或更小，或6岁或更小，或者为至少60岁，至少65岁，至少70岁，至少75岁，或至少80岁。
16.如权利要求15所述使用的ADC或组合物，其中所述方法还包括向所述对象给予第二抗微生物剂或疗法；
任选地，其中第二抗微生物剂或疗法包括抗生素或噬菌体疗法，例如，选自以下的抗生素：多粘菌素(例如，粘菌素)，β-内酰胺(例如，碳青霉烯，例如，美罗培南)，氨基糖苷，安莎霉素，碳头孢烯，碳青霉烯，头孢菌素，糖肽，林可酰胺，脂肽，大环内酯，单菌霉素，硝基呋喃，噁唑烷酮，青霉素，青霉素组合，多肽，喹诺酮或氟喹诺酮，磺胺，四环素或抗分枝杆菌药物，阿米卡星，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，奈替米星，妥布霉素，巴龙霉素，链霉素，壮观霉素，格尔德霉素，除莠霉素或利福昔明，劳拉卡头孢菌素，厄他培南，多利培南，亚胺培南/西司他丁，美罗培南，头孢羟氨苄，头孢唑啉，头孢噻吩，头孢噻吩，头孢氨苄，头孢克洛，头孢羟唑，头孢西丁，头孢丙烯，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢哌酮，头孢噻肟，头孢泊肟，头孢他啶，头孢布坦，头孢唑肟，头孢曲松，头孢吡肟，头孢洛林，头孢托罗，替考拉宁，万古霉素，特拉万星，达巴万星，奥利万星，克林霉素，林可霉素，达托霉素，阿奇霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，罗红霉素，竹桃霉素，泰利霉素，螺旋霉素，氨曲南，呋喃唑酮，呋喃妥因，利奈唑胺，泼斯唑来，雷得唑来，托拉唑来，阿莫西林，氨苄青霉素，阿洛西林，羧苄青霉素，氯唑西林，双氯西林，氟氯西林，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，青霉素g，青霉素v，哌拉西林，青霉素g，替莫西林，替卡西林，阿莫西林/克拉维酸，氨苄青霉素/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦，替卡西林/克拉维酸盐，杆菌肽，粘菌素，多粘菌素b，环丙沙星，依诺沙星，加替沙星，吉米沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，莫西沙星，萘啶酸，诺氟沙星，氧氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，司帕沙星，替马沙星，磺胺米隆，磺胺醋酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺，柳氮磺胺吡啶，磺胺异噁唑，甲氧苄啶-磺胺甲基异噁唑(复方磺胺甲噁唑)，偶氮磺胺，地美环素，强力霉素，米诺环素，土霉素，四环素，氯法齐明，氨苯砜，卷曲霉素，环丝氨酸，乙胺丁醇，乙硫氨酰胺，异烟肼，吡嗪酰胺，利福平，利福布汀，利福喷汀，链霉素，阿司匹林，氯霉素，磷霉素，夫西地酸，甲硝唑，莫匹罗星，安替霉素，奎奴普丁/达福普汀，甲砜霉素，替加环素，替硝唑，甲氧苄啶，左氧氟沙星，环丙沙星，庆大霉素，头孢曲松，氧氟沙星，阿米卡星，妥布霉素，氨曲南，或亚胺培南/西司他丁；
任选地，其中第二抗微生物剂或疗法在给予ADC之前给予，与给予ADC同时给予，或在给予ADC之后给予。
17.一种抑制或降低细菌感染的方法，所述方法包括用有效抑制或降低细菌感染的量的如权利要求1-13中任一项所述的ADC，或如权利要求14所述的药物组合物接触细胞；
任选地，其中所述ADC或药物组合物在体外，离体或体内与细胞接触。
18.一种试剂盒，其包括：如权利要求1-13中任一项所述的ADC或如权利要求14所述的药物组合物；和使用所述ADC或药物组合物的说明书。
19.一种容器，其包含如权利要求1-13中任一项所述的ADC或如权利要求14所述的药物组合物。
20.一种核酸分子，其编码：
(a)如权利要求1-13中任一项所述的ADC的抗体分子的VH，VL或两者；
(b)如权利要求1-13中任一项所述的ADC的抗微生物肽；
(c)(a)和(b)两者；或
(d)如权利要求1-13中任一项所述的ADC。
21.一种包含如权利要求20所述核酸分子的载体。
22.一种细胞，其包含如权利要求20所述的核酸分子或如权利要求21所述的载体。
23.一种产生ADC的方法，所述方法包括在允许产生ADC的条件下培养如权利要求22所述的细胞，从而产生所述ADC。
24.一种产生ADC的方法，所述方法包括将能结合LPS的抗体分子与包含抗微生物肽的肽，和任选地分选酶供体序列接触，所述接触在分选酶存在下，在允许分选酶介导的反应发生的条件下进行，从而产生所述ADC；
任选地，其中所述抗体分子包含分选酶受体序列，其包含分选酶识别序列，接头序列或两者。
25.一种治疗或预防细菌感染的方法，其包括以有效治疗或预防细菌感染的量向有需要的对象给予如权利要求1-13中任一项所述的ADC或如权利要求14所述的药物组合物。
26.如权利要求1-13中任一项所述的ADC在制备用于治疗或预防细菌感染的药物中的用途。
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