CN100366633C - 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用 - Google Patents

棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN100366633C
CN100366633C CNB2006100126062A CN200610012606A CN100366633C CN 100366633 C CN100366633 C CN 100366633C CN B2006100126062 A CNB2006100126062 A CN B2006100126062A CN 200610012606 A CN200610012606 A CN 200610012606A CN 100366633 C CN100366633 C CN 100366633C
Authority
CN
China
Prior art keywords
polypeptide
leucine
frog
zongdian
tuanwa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB2006100126062A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1831004A (zh
Inventor
刘敬泽
梁建国
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Normal University
Original Assignee
Hebei Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Normal University filed Critical Hebei Normal University
Priority to CNB2006100126062A priority Critical patent/CN100366633C/zh
Publication of CN1831004A publication Critical patent/CN1831004A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100366633C publication Critical patent/CN100366633C/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及棕点湍蛙抗病毒多肽及其应用。本发明的棕点湍蛙抗病毒多肽是一种单链多肽，分子量1335.7道尔顿，等电点8.75，多肽全序列表示为：见右式。通过常规的生物化学手段，从棕点湍蛙皮肤分泌液中分离纯化得到该多肽并测定其序列，按照所得的序列可以合成该多肽。本发明的棕点湍蛙抗病毒多肽用于制备抗病毒药物，具有很好的抗艾滋病毒的作用，同时还具有无溶血活性、无血浆凝固活性等优点。

Description

棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用
技术领域
本发明涉及一种棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用，属于生物医学技术领域。
背景技术
获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，是一种由人免疫缺陷病毒引起，使全身免疫系统严重损害的传染性疾病，感染者终生携带病毒，且缺乏治愈该病的有效方法。艾滋病被视为“超级癌症”和“世纪瘟疫”，已成为威胁全人类的重大传染病。据联合国艾滋病规划署统计，从1981年美国发现首例艾滋病至今，全世界约有5600万艾滋病患者和HIV感染者，并已造成1390万人死亡，每天新增感染者16000例。自1987年3月第一种抗艾滋病病毒药物齐多夫定(AZT)问世以来，已通过美国食品与药物管理局(FDA)批准用于艾滋病临床治疗的药物达4大类27种，包括核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂(PI)和融合抑制剂(Fusion Inhibitors)。HIV/AIDS患者的抗病毒治疗方案也从最初的AZT单药治疗，过渡到AZT、ddI、D4T、3TC的二联组合治疗，到现在的高效抗逆转录病毒治疗(HAART)，自1996年HAART用于临床以来，艾滋病的发病率和死亡率明显下降，患者的免疫功能得到重建，生存质量得到了显著改善。
很多两栖类动物在中国属于传统中药和民族药物而广泛应用，如中华蟾蜍(Bufo gargarizans)，大蹼铃蟾(Bombina maxima)，黑斑蛙(pelophylaxnigromaculata)，沼蛙(Hylarana guentheri)和泽蛙(Euphlyctislimnocharis)等。这些两栖类动物的皮肤和内脏具有广泛的药理活性和临床疗效，已报道药理活性有广谱抗微生物作用、抗肿瘤、镇痛、局部麻醉、免疫调节、心血管系统作用等。两栖类皮肤特定药理活性单体化合物的寻找已是新药发明的热点。从南美叶泡蛙(Phyllomedusa sauvagi)皮肤得到的抗菌多肽dermaseptin对疱疹病毒也显示强烈的抑制作用；从中国大蹼铃蟾皮肤得到的抗菌多肽maximin 3显示抗艾滋病病毒活性。我国对两栖类药物的应用有悠久的历史，但对其活性成分和药理性质的研究主要集中于生物碱等有机小分子，对其皮肤活性肽类物质研究不多。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的棕点湍蛙抗病毒多肽。
本发明的目的还在于提供一种棕点湍蛙抗病毒多肽在制药中的应用，特别是该多肽在制备治疗艾滋病药物中的应用。
本发明的目的是这样实现的。由于两栖类动物除了具有生物碱等一系列有机药用小分子外，其皮肤还含有大量的活性肽类物质，这是新药发现的一个重要来源。本发明从分布于中国四川、云南省的两栖类动物棕点湍蛙(Amolops loloensis)皮肤分泌液中分离得到一种单链多肽，并将其命名为棕点湍蛙抗病毒多肽，其分子量为1335.7道尔顿，等电点8.75，多肽全序列表示为：
Leu Leu Pro Ile Val Gly Lys Leu Leu Ser Gly Leu Leu-NH2。
1               5                   10
发明人将本发明的棕点湍蛙抗病毒多肽全序列结构经蛋白数据库进行搜索比较，未发现有任何相同的多肽。
上述棕点湍蛙抗病毒多肽的制备方法是：用乙醚刺激棕点湍蛙，将收集的皮肤分泌液离心去除沉淀，冷冻干燥后经一系列的生物化学手段分离纯化得到该多肽，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构，根据所得到的氨基酸序列合成该多肽。采用飞行时间质谱法测定分子量，等电聚焦测定等电点，自动氨基酸测序仪确认氨基酸序列结构。
本发明的棕点湍蛙抗病毒多肽是从天然生物资源得到的产物，实验证明具有很好的抗艾滋病毒的作用，同时还具有无溶血活性、无血浆凝固活性等优点，可用于制备治疗艾滋病的药物。
本发明取得的技术效果是：利用我国两栖类动物资源，为制备治疗艾滋病药物提供了新的选择。
具体实施方式
下面实施例用来进一步说明本发明。但本发明的内容并不局限于此。
实施例
一、棕点湍蛙抗病毒多肽的制备
将采自中国四川的两栖类动物棕点湍蛙活体用水清洗干净，置于带盖的玻璃容器中，滴加无水乙醚(1升体积容积加1毫升无水乙醚)，密闭容器3-5分钟，可见大量的泡沫状物质从棕点湍蛙皮肤分泌出来，收集分泌物，离心(10000rpm，20分钟)、冷冻干燥后保存，并经以下制备过程：
(1)Sephadex G-50凝胶过滤柱层析，按上述方法获得的原材料棕点湍蛙皮肤分泌液冻干粉300mg溶解于5ml纯净水，10000rpm 4℃离心10min去除沉淀。Sephadex G-50凝胶过滤柱(长1000mm，直径26mm)用0.1M Na2HPO4-NaH2PO4pH 6.0缓冲液平衡，充分后将样品上于该柱。用同样缓冲液洗脱，收集活性峰。
(2)反相高压液相色谱为：Sephadex G-50凝胶过滤得到的活性成分的峰上样于经含1‰三氟乙酸的超纯水充分平衡的C18反相柱(长300mm，直径5mm)用含1‰三氟乙酸的乙晴缓冲液从0％至100％的梯度洗脱。收集具有抗病毒作用的活性峰。
(3)纯化的棕点湍蛙抗病毒多肽用高效液相色谱HPLC方法鉴定其纯度，分子量测定采用飞行时间质谱法(Time of flight mass spectrometry，TOF-MS)，等电聚焦电泳测定等电点，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。
通过上述方法制备的棕点湍蛙抗病毒多肽的分子量为1335.7道尔顿，等电点8.75，多肽全序列为：亮氨酸-亮氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-缬氨酸-甘氨酸-赖氨酸-亮氨酸-亮氨酸-丝氨酸-甘氨酸-亮氨酸-亮氨酸-酰胺化；或表示为：
Leu Leu Pro Ile Val Gly Lys Leu Leu Ser Gly Leu Leu-NH2
1               5                   10
二、棕点湍蛙抗病毒多肽抑制HIV-1繁殖作用的实验
在96孔平底细胞培养板上，将待测化合物用完全培养基进行5倍或2倍倍比稀释，共6个稀释度，每孔100μl，同时设置正常细胞对照，HIV感染细胞对照。每实验孔滴加3×104个C8166细胞和200 TCID50的HIV-1IIIB，即感染复数为0.007，每孔的总体积为200μl。置37℃，5％C02培养箱内培养。感染后第3天观察待测化合物对合胞体形成的影响。在100倍的倒置显微镜下，选取5个不重叠的视野，计数HIV-1IIIB诱导C8166细胞形成的合胞体数。IC50为抑制合胞体形成达50％时的药物浓度。EC50是对50％宿主细胞产生细胞毒作用时的药物浓度，治疗指数(SI)为IC50/EC50的比值。
表1棕点湍蛙抗病毒多肽抑制HIV-1繁殖的作用：
 IC<sub>50</sub>(μg/ml)   EC<sub>50</sub>(μg/ml)   SI
  棕点湍蛙抗病毒多肽   12.1   1.8   6.7
上述实验表明：本发明的棕点湍蛙抗病毒多肽具有显著的抑制HIV-1繁殖作用，可用于制备治疗艾滋病的药物。

Claims (2)

1.棕点湍蛙抗病毒多肽，其特征是该多肽是从棕点湍蛙中分离得到的一种单链多肽，其分子量为1335.7道尔顿，等电点8.75，多肽全序列表示为：
Leu Leu Pro Ile Val Gly Lys Leu Leu Ser Gly Leu Leu-NH2。
1               5                   10
2.如权利要求1所述的棕点湍蛙抗病毒多肽的应用，其特征是该多肽用于制备治疗艾滋病药物。
CNB2006100126062A 2006-04-18 2006-04-18 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用 Expired - Fee Related CN100366633C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100126062A CN100366633C (zh) 2006-04-18 2006-04-18 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100126062A CN100366633C (zh) 2006-04-18 2006-04-18 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1831004A CN1831004A (zh) 2006-09-13
CN100366633C true CN100366633C (zh) 2008-02-06

Family

ID=36993521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2006100126062A Expired - Fee Related CN100366633C (zh) 2006-04-18 2006-04-18 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN100366633C (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1082053A (zh) * 1992-04-16 1994-02-16 普罗托斯分子设计有限公司 合成多肽
WO1995010534A1 (en) * 1993-10-14 1995-04-20 Seikagaku Corporation Polypeptide and anti-hiv agent prepared therefrom
CN1233257A (zh) * 1996-10-15 1999-10-27 生化学工业株式会社 多肽过渡金属盐以及增强多肽抗hiv活性的方法
CN1351611A (zh) * 1999-05-17 2002-05-29 康久化学公司 病毒感染的长效融合肽抑制剂

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1082053A (zh) * 1992-04-16 1994-02-16 普罗托斯分子设计有限公司 合成多肽
WO1995010534A1 (en) * 1993-10-14 1995-04-20 Seikagaku Corporation Polypeptide and anti-hiv agent prepared therefrom
CN1233257A (zh) * 1996-10-15 1999-10-27 生化学工业株式会社 多肽过渡金属盐以及增强多肽抗hiv活性的方法
CN1351611A (zh) * 1999-05-17 2002-05-29 康久化学公司 病毒感染的长效融合肽抑制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
蛙皮多肽. 黄嘉鑫，陆一安.国外医学.药学分册，第01期. 1982 *
蛙类皮肤及其分泌物中生物活性肽的研究进展. 姜丽丽等.中国生化药物杂志，第26卷第4期. 2005 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN1831004A (zh) 2006-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101412753A (zh) 金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF及其基因和应用
CN110655556B (zh) 一种免疫调节肽的制备及方法
CN102925522A (zh) 一种采用酶解法制取鹿茸多肽干粉的方法
CN103819552A (zh) 一种发形霞水母多肽生长因子及其制备方法和应用
CN101434651B (zh) 一种重组胸腺素β4二串体蛋白的制备方法
CN104356218B (zh) 少棘蜈蚣镇痛肽前体蛋白Ssm‑A及其产物Ssm‑A1和Ssm‑A2的制备和应用
CN100366633C (zh) 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用
CN101544693B (zh) 重组胸腺素α1二串体蛋白及其制备方法
CN102675450A (zh) 一种纯化胸腺素β4的方法
CN106699842B (zh) 一种新的抗炎小分子多肽及其应用
CN101037469A (zh) 从毛蚶中提取小分子活性多肽的方法
CN100581584C (zh) 无指盘臭蛙丝氨酸蛋白酶抑制剂及其应用
CN115724907A (zh) 红托竹荪多肽及其应用
CN1142181C (zh) 大蹼铃蟾多肽在制备抗肿瘤和艾滋病药物中的应用
CN100417662C (zh) 无指盘臭蛙胰岛素释放促进肽和在制药中的应用
CN1142180C (zh) 大蹼铃蟾蛋白酶抑制剂及其制备方法和在制药中的应用
JP2021521276A (ja) 免疫学的抽出物及び製造方法
CN1170845C (zh) 大蹼铃蟾抗肿瘤蛋白及其制备方法和其基因
CN111454352B (zh) 一种活性蛋白hmei-a、活性蛋白hmei-a的编码基因及应用
CN116715744A (zh) 花狭口蛙免疫促进肽及其基因和在制药中的应用
CN114957394B (zh) 一种促皮肤修复多肽pm-7及应用
CN100389125C (zh) 无指盘臭蛙丙精肽、基因和变异体
CN103172721A (zh) 一种海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-1及其基因、分离纯化、化学合成和应用
CN109485711B (zh) 一种蚁狮小分子肽及其分离纯化方法和应用
CN1170846C (zh) 大蹼铃蟾血管扩张因子及其制备方法和其基因

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20080206

Termination date: 20120418