JP2002542192A - イソフラボンで臨床的な疾患を処置する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、イソフラボンで特定の医学的な状態を処置または予防する方法を提供する。より詳細には、本発明は、イソフラボンを含有している組成物を用いて、１つ以上の以下の医学的な状態を処置または予防する方法を提供する：肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷したグルコース寛容性、Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性。この方法は、治療有効量の少なくとも１つのイソフラボノイドを、１つ以上のこれらの状態を有しているかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体に対して投与する工程を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） （発明の分野） 本発明は、一般的には、イソフラボンを用いて特定の医学的な臨床的な状態を
処置または予防するための方法に関する。詳細には、本発明は、イソフラボンを
含有している組成物を用いて、１つ以上の以下の医学的な状態を処置または予防
する方法に関する：肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎（ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉ
ｓ）、インシュリン耐性、損傷したグルコース寛容性、Ｘ症候群、異常な血小板
機能、または異常な血管反応性。

【０００２】 （関連分野） 食餌療法用のダイズタンパク質は、ヒトおよび動物実験において低コレステロ
ール（ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ）であることが示されている（
Ｃａｒｒｏｌｌ，Ｋ．Ｋ．およびＫｕｒｏｗｓｋａ，Ｅ．Ｍ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．
１２５：５９４Ｓ−５９７Ｓ（１９９５））。ヒトにおいては、コレステロール
を減少させる効果が、食餌療法的な介入の前には高コレステロール血症であるヒ
トにおいて主に観察されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｗ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ
．Ｊ．Ｍｅｄ．３３３：２７６−２８２（１９９５））。ダイズタンパク質の食
餌療法は、ＩＩ型の高リポタンパク質血症の処置に特に有用である（Ｓｉｒｔｏ
ｒｉ，Ｃ．Ｒ．ら、Ｌａｎｃｅｔ １：２７５−２７７（１９７７）；Ｓｉｒｔ
ｏｒｉ，Ｃ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２５：５９８Ｓ−６０５Ｓ（１９９５）
）。これは、上昇した血漿のＬＤＬコレステロール（ＩＩａ型）または血漿のＬ
ＤＬおよびＶＬＤＬコレステロール、ならびにトリグリセリド（ＩＩｂ型）によ
って特徴付けられる。高脂血症は、アテローム性動脈硬化症、心臓血管の疾患（
ＣＶＤ）、およびインシュリン非依存性の真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の発症に関
連している（Ｄｅｓｐｒｅｓ，Ｊ．Ｐ．ら、Ａｒｔｈｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ
１０：４９７−５１１（１９９０））。従って、ダイズタンパク質の低コレス
テロールの効果によって、ＣＶＤおよびＮＩＤＤＭの危険性を低下させることが
可能である。

【０００３】 ダイズタンパク質のコレステロールを低下させる効果の原因である機構につい
ての仮説が提案されている（Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｍ．Ｓ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ
．Ｎｕｔｒ．６８：１３９０Ｓ−１３９３Ｓ（１９９８）；Ｐｏｔｔｅｒ，Ｓ．
Ｍ．、Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．５６：２３１−２３５（１９９８）；Ｓｉｒｔｏｒｉ
，Ｃ．Ｒ．ら、Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．８：３
３４−３４０（１９９８））。ダイズタンパク質のアミノ酸組成（ダイズタンパ
ク質に関連する、特異的なダイズペプチドおよびグロブリン、ならびにイソフラ
ボンおよびサポニン）は、低コレステロール応答に関与している因子として示唆
されている。肝臓は、胆汁の産生および分泌を通じて体全体のコレステロールの
排泄を中心となって調節する。従って、ダイズタンパク質の低コレステロール効
果に応答する機構はおそらく、異常な肝臓のコレステロールおよび胆汁酸代謝の
正常化を含む。肝臓はまた、アポリポタンパク質Ｂ（ａｐｏＢ）の産生、分泌、
および異化を通じて血漿コレステロールおよびトリグリセリド濃度を中心となっ
て調節する。さらに、臓器の肥満および上昇した肝門脈の遊離の脂肪酸の流れは
、肝臓の脂肪症を誘導し、そしてトリグリセリドを多く含むａｐｏＢ−リポタン
パク質の産生を上昇させる（Ｄｅｓｐｒｅｓ，Ｊ．Ｐ．ら、Ａｒｔｅｒｏｐｓｃ
ｌｅｒｏｓｉｓ １０：４９７−５１１（１９９０））。従って、ダイズタンパ
ク質の低コレステロール効果に応答する機構はまた、異常な肝臓の脂肪酸および
トリグリセリドの代謝の正常化を含み得る。

【０００４】 肥満体（ｆａ／ｆａ）のＺｕｃｋｅｒラットは、高インシュリン血症、高リポ
タンパク質血症であり、そして生後数週間以内に肝臓の脂肪症を発症する（Ｋｒ
ｉｅｆ，Ｓ．およびＢａｚｉｎ，Ｒ．，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．
Ｍｅｄ．１９８：５２８−５３８（１９９１））。このラットは、ＣＶＤおよび
ＮＩＤＤＭの発症に関連する症状についてのモデルシステムとして使用され得る
（Ｓｔ．Ｊｏｈｎ，Ｌ．Ｃ．およびＢｅｌｌ，Ｆ．Ｐ．，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅ
ｒｏｓｉｓ ８６：１３９−１４４（１９９１）；Ｋａｓｉｓｋｅ，Ｂ．Ｌ．ら
、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ（補遣１）１９：１１１０−１１１５（１９９２）
。明らかに上昇した膵臓のインシュリンの分泌は、肝臓の脂肪酸の異化を抑制し
、そして肝臓の脂質生成および脂肪酸のエステル化を刺激する。上昇したトリグ
リセリドおよびコレステリルエステルの利用能は、ａｐｏＢ−リポタンパク質の
分泌をアップレギュレートし、そして細胞質性の液滴中での脂質の保存を誘導す
る（Ｆｕｋｕｄａ，Ｎ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：１４０６６−１
４０７２（１９８２））。さらに、成体の雄性の肥満体のラットには、肝臓のコ
レステロール生成の飼料の摂取によって誘導される毎日の上昇および下降が存在
しない（Ｌｉｎ，Ｒ．Ｃ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｅｍ ３４：１９−２４（１９８
５））。そして糞便の中性のステロールは、やせているラットよりも肥満体のラ
ットにおいて５０％低い（ＭｃＮａｍａｒａ，Ｄ．Ｊ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｅｍ
３４：１３０−１３５（１９８５））。肝臓のＬＤＬレセプターの発現は、や
せているラットよりも肥満体のレットにおいては６０％低いが、ＬＤＬレセプタ
ーのｍＲＮＡには差異は存在しない（Ｌｉａｏ，Ｗ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ １３８：３２７６−３２８２（１９９７））。肝臓のコレステロール７
α−ヒドロキシラーゼの日周リズムもまた、肥満体のラットには存在しないこと
が示されている（Ｔａｎｇ，Ｐ．Ｍ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０：８５３−８５８（１９８８））。

【０００５】 血液の血小板もまた、ＣＶＤの発症において不可欠な役割を果たす（Ｒｏｓｓ
，Ｒ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１４：４８８−５００（１９８６））。
動脈のコレステロールの沈着および血液の血小板の感受性は、血漿のＬＤＬによ
って上昇させられ、そして血漿ＨＤＬによって低下させられる（Ｍｉｌｌｅｒ，
Ｎ．Ｅ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．２８２：１７４１−１７４４（１９８１）、Ｓ
ｕｒｙａ，Ｉ．Ｉ．およびＡｋｋｅｒｍａｎ，Ｗ．Ｎ．、Ｈｅａｒｔ Ｊ．１２
５：２７２−２７５（１９９３））。種間で見出される血漿板の感受性における
バリエーションは、ＣＶＤに対する種の感受性に直接相関することが示されてい
る（Ｈａｙｅｓ，Ｋ．Ｃ．およびＰｒｏｎｃｚｕｋ，Ａ．，Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１３１３：３４９−３５３（１９９６））。さらに
、血漿のＬＤＬコレステロール−対−ＨＤＬコレステロール比は、種間および種
内の両方で血小板の感受性を伴って直接変化することが見出されている。血小板
の活性化は、アテローム性動脈硬化症の病変の形成を促進する血小板内の顆粒球
からの化合物の放出によって達成される（Ｒｏｓｓ，Ｒ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔ
ｉｏｎ（補遣ＩＩＩ）７０：７７−８２（１９８４））。例えば、血小板に由来
する成長因子は、血管の平滑筋細胞の移動および動脈の内膜中での増殖を刺激す
る。活性化された血小板はまた、５−ヒドロキシトリプタミン（５ＨＴ）を放出
する。これは、セロトニンとして一般的に公知である。これは、本質的な高血圧
の病因において役割を果たす（Ｎｉｔｙａｎａｎｄ，Ｓ．ら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ
．４６：３６７−３７２（１９９０））。イソフラボンを多く含む食餌療法用の
ダイズタンパク質は、アテローム形成の食餌療法を与えた雄性のカニクイザルに
おいて、アテローム性動脈硬化症の病変の発症を減少させることが示されている
（Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｍ．Ｓ．ら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖ
ａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１７：２５２４−２５３１（１９９７））。イソフラボンを
多く含むダイズタンパク質の血小板の凝集能力に対する阻害効果が、雌性のアカ
ゲザルにおいて報告されている（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｋ．およびＣｌａｒｋ
ｓｏｎ，Ｔ．Ｂ．，Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ．９：７５９−７
６４（１９９８））。イソフラボンを多く含むダイズタンパク質のこれらの効果
は、血漿のＬＤＬコレステロール−対−ＨＤＬコレステロール比における減少に
よって一部生じ得る。別の研究は、ダイズのイソフラボンのゲニスチンの静脈内
注入の後の、雌性のマカクの狭窄症の動脈における血管収縮の迅速な阻害を示す
（Ｈｏｎｏｒｅ，Ｅ．Ｋ．ら、Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．６７：１４８−１
５４（１９９７））。改善された全身性の動脈のコンプライアンスもまた、更年
期の女性において食餌療法用のイソフラボンの補充後に示されている（Ｎｅｓｔ
ｅｌ，Ｐ．Ｊ．ら、Ａｘｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｅ．Ｂｉ
ｏｌ．１７：３３９２−３３９８（１９９７））。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、以下の臨床的な医学的状態の１つ以上の症状を予防または処置する
方法を提供する：肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷したグル
コース寛容性、Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性。この方
法は、治療有効量の少なくとも１つのイソフラボノイドを、１つ以上のこれらの
状態を有しているかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体に対
して投与する工程を包含する。

【０００７】 本発明はさらに、ダイズタンパク質と組合せて、治療有効量の少なくとも１つ
のイソフラボノイドを、１つ以上のこれらの状態を有しているかまたはこれらの
状態についての素因を有している被験体に対して投与することによって、上記の
臨床的な医学的な状態の１つ以上の症状を予防または処置する方法を提供する。

【０００８】 本発明はまた、ダイズタンパク質以外の食餌療法の成分またはサプリメントと
組合せて、治療有効量の少なくとも１つのイソフラボノイドを、１つ以上のこれ
らの状態を有しているかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体
に対して投与することによって、上記の臨床的な医学的な状態の１つ以上の症状
を予防または処置する方法を提供する。

【０００９】 本発明はさらに、ダイズタンパク質のイソフラボンを多く含む画分中に含まれ
る少なくとも１つのイソフラボノイドの治療有効量を、１つ以上のこれらの状態
を有しているかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体に対して
投与することによって、上記の臨床的な医学的な状態の１つ以上の症状を予防ま
たは処置する方法を提供する。

【００１０】 本発明はまた、ダイズタンパク質と組合せて、ダイズタンパク質のイソフラボ
ンを多く含む画分中に含まれる少なくとも１つのイソフラボノイドの治療有効量
を、１つ以上のこれらの状態を有しているかまたはこれらの状態についての素因
を有している被験体に対して投与することによって、上記の臨床的な医学的な状
態の１つ以上の症状を予防または処置する方法を提供する。

【００１１】 本発明はさらに、ダイズタンパク質以外の食餌療法の成分またはサプリメント
と組合せて、ダイズタンパク質のイソフラボンを多く含む画分中に含まれる少な
くとも１つのイソフラボノイドの治療有効量を、１つ以上のこれらの状態を有し
ているかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体に対して投与す
ることによって、上記の臨床的な医学的な状態の１つ以上の症状を予防または処
置する方法を提供する。

【００１２】 本発明のさらなる目的、利点、および新規の特徴は、本発明の以下の詳細な説
明から明らかとなる。

【００１３】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 以下の記載においては、参照は、生化学の分野および薬理学的な分野の当業者
に公知である種々の用語および方法論について行われる。このような公知の用語
および方法論を記述している刊行物および他のものが、その全体を通じて示され
ているかのようにそれらの全体において本明細書中で参考として援用される。

【００１４】 本発明は、１つ以上の以下の医学的な状態を処置または予防する方法に関する
：肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷したグルコース寛容性、
Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性。この方法は、少なくと
も１つのイソフラボノイドの治療有効量を、これらの状態の１つ以上を有してい
るかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体に対して投与する工
程を包含する。

【００１５】 好ましい実施形態においては、本発明は、ダイズタンパク質と組合せて、治療
有効量の少なくとも１つのイソフラボノイドを、１つ以上のこれらの状態を有し
ているかまたはこれらの状態についての素因を有している被験体に対して投与す
ることによって、上記の臨床的な医学的な状態の１つ以上の症状を予防または処
置する方法を提供する。

【００１６】 別の実施形態においては、本発明は、ダイズタンパク質以外の食餌療法の成分
またはサプリメントと組合せて、治療有効量の少なくとも１つのイソフラボノイ
ドを、１つ以上のこれらの状態を有しているかまたはこれらの状態についての素
因を有している被験体に対して投与することによって、上記の臨床的な医学的な
状態の１つ以上の症状を予防または処置する方法を提供する。

【００１７】 別の実施形態においては、本発明は、ダイズタンパク質のイソフラボンを多く
含む画分中に含まれる少なくとも１つのイソフラボノイドの治療有効量を、１つ
以上のこれらの状態を有しているかまたはこれらの状態についての素因を有して
いる被験体に対して投与することによって、上記の臨床的な医学的な状態の１つ
以上の症状を予防または処置する方法を提供する。

【００１８】 別の好ましい実施形態においては、本発明は、ダイズタンパク質と組合せて、
ダイズタンパク質のイソフラボンを多く含む画分中に含まれる少なくとも１つの
イソフラボノイドの治療有効量を、１つ以上のこれらの状態を有しているかまた
はこれらの状態についての素因を有している被験体に対して投与することによっ
て、上記の臨床的な医学的な状態の１つ以上の症状を予防または処置する方法を
提供する。

【００１９】 別の実施形態においては、本発明は、ダイズタンパク質以外の食餌療法の成分
またはサプリメントと組合せて、ダイズタンパク質のイソフラボンを多く含む画
分中に含まれる少なくとも１つのイソフラボノイドの治療有効量を、１つ以上の
これらの状態を有しているかまたはこれらの状態についての素因を有している被
験体に対して投与することによって、上記の臨床的な医学的な状態の１つ以上の
症状を予防または処置する方法を提供する。

【００２０】 以下の定義および記述は、本発明者らが本発明であると見なす発明の内容（ｓ
ｕｂｊｅｃｔ ｍａｔｔｅｒ）を明確にするために提供される。

【００２１】 本明細書中で使用される場合は、用語「肝臓の脂肪症」は、肝細胞の細胞質中
での脂質の蓄積をいう。

【００２２】 本明細書中で使用される場合は、用語「脂肪性肝炎」は、肝細胞が脂肪症を示
す肝臓の炎症性の状態をいう。

【００２３】 本明細書中で使用される場合は、用語「インシュリン耐性」は、膵臓が十分な
量のホルモンを産生するが、細胞はインシュリンの作用に対して鈍感になり、そ
してそれを正常な状態よりもゆっくりと吸収し、それによって血液中での糖（グ
ルコース）およびインシュリンの蓄積を生じる状態をいう。

【００２４】 本明細書中で使用される場合は、用語「Ｘ症候群」は、集中的な肥満、高血圧
、インシュリン耐性、増大したＬＤＬコレステロール、減少したＨＤＬコレステ
ロール、および上昇した血漿のインシュリンとして特徴付けられる、医学的な臨
床的な状態をいう。

【００２５】 イソフラボンは、植物のフラボノイドの特有のクラスである。これらは、植物
界に限定された分布を有し、そして無色、結晶質のケトンとして物理的に記載さ
れ得る。ほとんどの一般的なイソフラボン化合物は、結合体、グルコシド、およ
びアグルコンの形態である。これらのイソフラボンの最も一般的なそして重要な
食餌療法用の供給源はダイズである。本発明においては、イソフラボンは、好ま
しくは、以下の群から選択される：ゲニステイン、ゲニスチン、６’−Ｏ−マロ
ニルゲニスチン、６’’−Ｏ−アセチルゲニスチン；ダイドゼイン、ダイドジン
、６’’−Ｏ−マロニルダイドジン、６’’−Ｏ−アセチルゲニスチン；グリシ
テイン、グリシチン、６’’−Ｏ−マロニルグリシチン、６’’−Ｏ−アセチル
グリシチン。ダイズのイソフラボンの９７から９８パーセントが、グリコシル化
された形態である。

【００２６】 本明細書中で使用される場合は、用語「ダイズタンパク質」は、「ダイズタン
パク質単離物」または「ダイズタンパク質濃縮物」のいずれかをいう。

【００２７】 本明細書中で使用される場合は、用語「ダイズタンパク質単離物」は、「単離
されたダイズタンパク質」と同等のものであり、そして「高イソフラボンのダイ
ズタンパク質」または「イソフラボンを多く含むダイズタンパク質」とも同じで
ある。これは、単離プロセスの間に球形のダイズタンパク質へのイソフラボン（
および他のダイズの構成成分（例えば、サポニン））の吸着に好ましい手順によ
ってダイズから単離されるダイズタンパク質である。これは、本明細書中で使用
され、そして「ＨＳ食餌療法」または「ＨＩ食餌療法」の成分と呼ばれる、２つ
の型のダイズタンパク質調製物の１つである。これは、「高イソフラボンのダイ
ズタンパク質食餌療法」と定義される。

【００２８】 本明細書中で使用される場合は、「ダイズタンパク質濃縮物」は、イソフラボ
ンを伴わないダイズから単離されるダイズタンパク質をいう。「ダイズタンパク
質濃縮物」は、ダイズタンパク質単離物よりも全タンパク質濃度において低い傾
向にある。

【００２９】 本明細書中で使用される場合は、用語「低イソフラボンのダイズタンパク質」
は、「アルコール洗浄されたダイズタンパク質」または「イソフラボンを除去さ
れたダイズタンパク質」と同等である。出発物質は、ダイズタンパク質単離物で
ある。ダイズタンパク質単離物は、次いで、代表的には、イソフラボン、サポニ
ン、および可能性のある他の同定されていない生物学的に有意な成分を含む、吸
着した物質を除去するために水性のエタノール混合物で洗浄される。これは、本
明細書中で使用され、そして「ＬＳ食餌療法」または「ＬＩ食餌療法」の成分と
呼ばれる２つの型のダイズタンパク質調製物の２番目のものである。これは、「
低イソフラボンのダイズタンパク質食餌療法」と定義される。

【００３０】 本明細書中で使用される場合は、用語「ダイズタンパク質のイソフラボンを多
く含む画分」は、上記に記載されるようなタンパク質の洗浄によってダイズタン
パク質から除去される物質からなる。水性のエタノール抽出物中のイソフラボン
はさらに、より高いイソフラボン濃縮物を得るためにさらに精製される。この生
成物は、サポニンおよび他の生物学的に活性な物質を含み得る。

【００３１】 １つの実施形態においては、肝臓の脂肪症、インシュリン耐性、および血漿板
の感受性を低下させる高イソフラボンのダイズタンパク質の全体的な治療上の利
点は、タンパク質の成分または別の食餌療法の成分（単数または複数）、あるい
はコレステロールおよび胆汁酸の吸収を調節する消化管中のダイズタンパク質の
生理学的な作用を「模倣する」、ダイズタンパク質以外のサプリメント（単数ま
たは複数）に依存する。

【００３２】 種々の天然に存在している成分および化合物、ならびに合成の食餌療法の成分
および化合物が、腸での脂質の消化および吸収を調節することが示されている。
例えば、腸の胆汁酸結合樹脂、コレスチラミンは、肝臓中のダイズイソフラボン
の効果を治療用の利点を生じるように強化する。メチル−β−シクロデキストリ
ンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（これらは、腸内でコレ
ステロールおよび胆汁酸と封入複合体を形成し得る）は、イソフラボンと組合せ
て使用され得る。別の可能な実施形態は、ダイズ、イネ、またはオート麦外皮の
ようなシリカポリマーを多く含む食餌療法用の繊維供給源を、腸管のステロイド
の恒常性を調節するために使用することである。肝臓と腸管との間での共作用は
また、ダイズのイソフラボンまたはダイズタンパク質のイソフラボンを多く含む
画分と、可溶性の食餌療法用の繊維の伝統的な供給源（ペクチン、β−グルカン
、オート麦糠、米糠、オオバコ繊維、および任意の他の特定されていない可溶性
の穀物、野菜、または果実の繊維調製物を含む）との組合せを通じて達成される
。

【００３３】 別の実施形態においては、醗酵可能な（ｆｅｒｍｅｎｔａｂｌｅ）可溶性の食
餌療法用の繊維は、イソフラボンの生体利用可能性に影響を与える。ほとんどの
イソフラボンは、グリコシル化されたイソフラボン結合体としてダイズ中に中に
存在し、そして特異的な繊維の型は、生物学的に活性なアグリコンの形態を生じ
るために必要とされる酵素を産生する腸内細菌を選択する。

【００３４】 肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷したグルコース寛容性、
Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性を処置または予防するた
めのイソフラボンの使用（単独で、または他のダイズタンパク質、食餌療法用の
成分、または他のサプリメントと組合せてのいずれか）は、現在投与されている
薬学的な治療薬を上回る明らかな利点を提供する。第１に、本発明は、おそらく
、処置がコンプライアンスでないことまたは時期の悪い終了を代表的には導く、
薬物に関連する副作用を最少にする。第２に、天然に存在しているイソフラボン
の使用は、現在の治療薬に関連する長期間の健康問題のいくつかを克服し、次い
でこれは、個体が疾患の再発を持続的に予防するため延長された治療レジメンを
維持する可能性を増大させる。

【００３５】 用語「治療有効投与量」は、本明細書中で使用される場合は、ヒトおよび動物
の両方において、上記の状態および／または疾患の有効な処置または予防を提供
する投与量として、定義される。

【００３６】 肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷したグルコース寛容性、
Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性の処置および予防におい
ては、イソフラボンは、上記の臨床的な医学的状態の１つ以上を有すると診断さ
れたか、または代表的にこれらに関連している徴候を経験している被験体（ヒト
または動物）に対して、治療有効投与量で投与される。本発明の予防的な局面は
、上記の臨床的な医学的状態の１つ以上を発症する危険性を有している被験体に
対して治療有効投与量のイソフラボンを投与する工程を包含する。発症する危険
を受けやすい被験体の他のグループが、当業者に明らかである。

【００３７】 本発明での使用について意図されるイソフラボンの代謝産物として、エクオー
ル（ｅｑｕｏｌ）ならびにゲニステイン、ダイドゼイン、および他のイソフラボ
ンの結合体が挙げられる。他のフィトエストロゲンの任意の誘導体（クメスタン
およびリグナンまたはそれらの結合体を含む）が、本明細書中の上記の状態およ
び／または疾患を処置または予防することにおいて使用され得ることが、さらに
意図される。

【００３８】 イソフラボン化合物は、植物（例えば、マメ科植物、クローバー、およびクズ
（ｋｕｄｚｕ ｖｉｎｅ）の根（葛根））中に見出され得る天然に存在している
物質であり得る。これらのイソフラボン化合物の一般的な豆鞘の供給源として、
ダイズ、ヒヨコマメ、および種々の他の型の豆およびエンドウが挙げられる。こ
れらのイソフラボン化合物のクローバー供給源として、ムラサキツメクサおよび
ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａｎクローバーが挙げられる。ダイズは、イソフラボン化
合物（ダイズ中には存在しないｂｉｏｃｈａｎｉｎ Ａを除く）の特に好ましい
供給源である。

【００３９】 イソフラボンは、それらが天然に存在する植物の供給源から単離され得、そし
ていくつかのイソフラボンは、当該分野で公知のプロセスによって合成により調
製され得る。例えば、ダイドゼインはＷｏｎｇ Ｊ．Ｓｃｉ．Ｆｏｏｄ Ａｇｒ
． １３：３０４（１９６２））によって開示されているように、ムサラキツメ
クサから単離され得るか、またはＧａｎｇｕｌｙおよびＳａｒｒｅ（Ｃｈｅｍ．
＆ Ｉｎｄ（Ｌｏｎｄｏｎ）、２０１頁（１９７０））によって提供されている
ような糸状菌のＭｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｈａｌｏｐｈｙｔｉｃａから単
離され得る。これらの両方の参考文献は、本明細書中で参考として援用されてい
る。ダイドゼインは、Ｂａｋｅｒら、（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２７４頁（１
９３３））、Ｗｅｓｌｅｙら、Ｂｅｒ．６６：６８５頁（１９３３））、Ｍａｈ
ａｌら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１７６９頁（１９３４））、Ｂａｋｅｒら、
Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１８５２頁（１９５３））、またはＦａｒｋａｓ Ｂ
ｅｒ．，９０：２９４０（１９５７））によって提供されている方法によって、
合成によって調製され得る。これらのそれぞれの参考文献は、本明細書中で参考
として援用されている。ダイドジンは、本明細書中で参考として援用されている
Ｆａｒｋａｓら、Ｂｅｒ．，９２：８１９（１９５９））の方法によって、合成
によって調製され得る。ダイドゼインイソフラボン結合体である６’−ＯＭａｌ
ダイドジンおよび６’−ＯＡｃダイドジンは、それぞれ、マロニルまたはアセチ
ル無水物でのダイドジンの従来のエステル化によって調製され得る。

【００４０】 ゲニステインは、Ｂａｋｅｒら（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，３１１５頁（１９
２８））；Ｎａｒａｓｉｍｈａｃｈａｒｉら、（Ｊ．Ｓｃｉ．Ｉｎｄ．Ｒｅｓ．
，第１２巻、２８７頁（１９５３））；Ｙｏｄｅｒら、（Ｐｒｏｃ．Ｉｏｗａ
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，第６１巻、２７１頁（１９５４）；およびＺｅｍｐｌｅｎら
、（Ａｃｔａ．Ｃｈｉｍ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｈｕｎｇ．，第１９巻、２７７頁
（１９５９））によって提供されている方法によって合成によって調製され得る
。これらの参考文献のそれぞれは、本明細書中で参考として援用されている。ゲ
ニスチンは、本明細書中で参考として援用されているＺｅｍｐｅｌら（Ｂｅｒ．
，第７６Ｂ巻、１１１０頁（１９４３））の方法によって、合成によって調製さ
れ得る。ゲニスチンのイソフラボン結合体である、６’−ＯＭａｌゲニスチンお
よび６’−ＯＡｃゲニスチンは、それぞれ、マロニルまたはアセチル無水物での
ゲニスチンの従来のエステル化によって調製され得る。

【００４１】 Ｂｉｏｃｈａｎｉｎ Ａは、本明細書中で参考として援用されているＢａｋｅ
ｒら（Ｎａｔｕｒｅ １６９：７０６（１９５２））によって提供される方法に
よって、合成によって調製され得る。Ｂｉｏｃｈａｎｉｎ Ａもまた、本明細書
中で参考として援用されているＰｏｐｅら（Ｃｈｅｍ．＆ Ｉｎｄ．（Ｌｏｎｄ
ｏｎ）、１０９２頁（１９５３））によって提供されている方法によって、ムラ
サキツメクサから分離され得る。ホモノネチンは、Ｗｅｓｓｅｌｙら（Ｂｅｒ．
６６：６８５（１９３３））およびＫａｇｅｌら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔｅｒｓ、５９３頁（１９６２））によって開示されている方法によって、
合成によって調製され得る。これらの参考文献の両方ともが、本明細書中で参考
として援用されている。ホモノネチンは、Ｗａｌｚ（Ａｎｎ．４８９：１１８（
１９３１））の方法によってダイズのミールから単離され得るか、またはＢｒａ
ｄｂｕｒｙら（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、３４４７頁（１９５１））の方法によ
ってクローバー種から単離され得る。これらの参考文献の両方ともが、本明細書
中で参考として援用されている。

【００４２】 それらが天然に存在している植物材料からイソフラボンを単離する好ましい方
法は、植物材料からイソフラボンを取り出すために、アルコール（好ましくは、
メタノールまたはエタノール）または水性の溶液（好ましくは、水性のアルカリ
溶液）を用いて植物材料を抽出することである。植物材料からのイソフラボン化
合物の回収を最大にするためには、イソフラボンを抽出する前に、植物材料を粉
末にすることが好ましい。イソフラボンは、逆相高速液体クロマトグラフィー（
「ＨＰＬＣ」）のような従来の分離手順によって抽出物から単離され得る。

【００４３】 好ましい実施形態においては、イソフラボン：ゲニステイン、ゲニスチン、６
’−ＯＭａｌゲニスチン、６’−ＯＡｃゲニスチン、ダイドゼイン、ダイドジン
、６’−ＯＭａｌダイドジン、６’−ＯＡｃダイドジン、グリシテイン、グリシ
チン、および６’−ＯＭａｌグリシチンが、ダイズ材料から、好ましくは、商業
的に入手可能なダイズ材料から単離される。イソフラボンが単離され得るダイズ
材料として；ダイズ、外皮を取り除かれたダイズ、ダイズミール、ダイズ粉、挽
き割りダイズ、ダイズフレーク（完全に平らなものおよび平らではないもの）、
ダイズのｃｏｔｙｌｄｅｏｎｓ、ダイズの糖蜜、ダイズタンパク質濃縮物、ダイ
ズ乳清、ダイズ乳清タンパク質、およびダイズタンパク質単離物が挙げられる。
１つの実施形態においては、イソフラボンは、ダイズ、外皮を取り除かれたダイ
ズ、ダイズミール、ダイズ粉、挽き割りダイズ、ダイズフレーク、ダイズタンパ
ク質濃縮物、ダイズ乳清タンパク質、またはダイズタンパク質単離物から、好ま
しくは、ダイズメール、ダイズ粉、挽き割りダイズ、またはダイズフレークから
、低分子量の有機抽出溶媒（好ましくは、アルコール、酢酸エチル、アセトン、
またはエーテル、および最も好ましくは、水性のエチルアルコールまたはメチル
アルコール）を用いて、抽出される。最も好ましくは、抽出溶媒は、抽出溶媒か
ら抽出されるダイズタンパク質の量を最少にするように、ほぼダイズタンパク質
の等電点（約ｐＨ４からｐＨ５）のｐＨを有する。

【００４４】 本発明の方法に従う使用のためのダイズタンパク質の材料は、ダイズの種子全
体、または種子全体から形成され得るダイズタンパク質誘導体である。ダイズ全
体のダイズタンパク質の誘導体として、脂肪を含有しているかまたは脱脂された
：ダイズタンパク質単離物、ダイズタンパク質濃縮物、ダイズ粉、およびダイズ
ミール（これらは、このような材料を形成するための従来の方法に従って形成さ
れる）が挙げられる。ダイズ全体のダイズタンパク質誘導体としてまた、ダイズ
タンパク質の材料を加水分解するための従来の方法（例えば、酵素的または酸加
水分解）に従ってダイズタンパク質を含有している材料を加水分解することによ
って形成されるペプチド材料もまた挙げられる。

【００４５】 好ましい実施形態においては、本発明の方法において使用されるダイズタンパ
ク質材料は、ダイズタンパク質単離物である。イソフラボンを含有しているダイ
ズタンパク質単離物を形成するために、商業的に入手可能な脱脂されたダイズフ
レーク材料が、イソフラボン、タンパク質、およびダイズフレーク材料の他の水
溶性の成分を含有している抽出物から、水性のアルカリ溶液（代表的には、約６
から約１０のｐＨを有している水酸化カルシウム、または水酸化ナトリウム溶液
）を用いて抽出される。抽出物は、不溶性のダイズ材料から分離され、次いでほ
ぼタンパク質の等電点（好ましくは、約４から約５、そして最も好ましくは、約
４．４から約４．６のｐＨ）にまで抽出物のｐＨを低下させるために酸で処理さ
れ、それによってタンパク質カードを沈殿させる。これは、タンパク質とイソフ
ラボンとの間の水素結合の結果としてイソフラボンの有意な量を捕捉する。好ま
しくは、結合体およびグルコシドイソフラボンは、タンパク質カード中に捕捉さ
れるアグルコンイソフラボンの量を増大させるために、上記に記載されているよ
うに抽出物中のアグルコンイソフラボンに転換させられる。次いで、タンパク質
カードが抽出物から、好ましくは、遠心分離によって分離され、そしてタンパク
質単離物を形成するように乾燥させられる。

【００４６】 別の好ましい実施形態においては、本発明の方法において使用されるダイズタ
ンパク質材料は、ダイズタンパク質濃縮物である。イソフラボンを含有している
ダイズタンパク質を形成するために、商業的に入手可能な脱脂されたダイズフレ
ーク材料が、水性アルコール（例えば、８０％のエタノールまたは８０％のメタ
ノール）またはダイズタンパク質の等電点（約４．４から約４．６）に等しいｐ
Ｈを有している水溶液で、洗浄される。洗浄液は、タンパク質材料から分離され
、それによってダイズタンパク質濃縮物を生じる。

【００４７】 イソフラボンを含有している抽出物は、イソフラボンを多く含む抽出物を形成
するように、不溶性のダイズ材料から分離される。所望される場合は、イソフラ
ボンを多く含む材料は、溶媒を除去するために抽出物を濃縮することによって回
収され得、それによって固形のイソフラボンを多く含む材料を産生する。別の実
施形態においては、タンパク質濃縮物中のイソフラボンの量を増大させるために
、さらなる抽出液が、アルコールで洗浄されたダイズタンパク質（ダイズタンパ
ク質濃縮物）に添加される。

【００４８】 別の好ましい実施形態においては、イソフラボンは、抽出物中のイソフラボン
を吸着する材料と抽出物とを接触させること、および吸着材料から別々に溶出さ
れるイソフラボンを生じる溶媒を用いて吸着材料から吸着されたイソフラボンを
溶出させることによって、抽出液中に可溶性の他のダイズ材料からさらに精製さ
れる。

【００４９】 別の好ましい実施形態においては、本発明は、１つ以上の上記の臨床的な医学
的状態の１つ以上の症状を有しているかまたはそれらの状態についての素因を有
している被験体に対して、サポニン、レシチン、フェノール酸、トリプシンイン
ヒビター、フィトステロール、ペプチド、およびオリゴサッカライドからなる群
より選択される少なくとも１つのイソフラボンを多く含む画分の成分の治療有効
量を投与することによって、１つ以上のこれらの状態を予防または処置する方法
を提供する。

【００５０】 本発明は本明細書中で完全に記載されているが、同じものが、本発明またはそ
の任意の実施形態の範囲を逸脱することなく、条件、処方物、および他のパラメ
ーターの広範囲でかつ同等の範囲内で行われ得ることが、当業者に理解される。
本明細書中に引用されるすべての特許または刊行物は、その全体が本明細書中で
十分に参考として援用される。

【００５１】 以下の実施例は、本発明の方法および組成物を例示するが、限定するものでは
ない。種々の状態およびパラメーターの他の適切な改変および適用が、通常は行
われ、そして本発明の精神および範囲内にあることが当業者に明らかである。

【００５２】 （実施例１） （雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび肥満体のＺｕｃｋｅｒラットに
おける、肝臓の脂質および血液の血小板活性の感受性に対するイソフラボンをあ
まり含んでいないダイズタンパク質およびイソフラボンを多く含むダイズタンパ
ク質の効果の実験） 動物および食餌療法。雄性のＺｕｃｋｅｒ肥満体ラット（ｆａ／ｆａ）および
それらのやせているラット（Ｆａ／ＦａまたはＦａ／ｆａ）の同腹子（Ｈａｒｌ
ａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，
ＩＮによる、８週齢の、１つの食餌療法のグループあたりｎ＝３またはｎ＝４の
やせているラット、および１つの食事療法のグループあたりｎ＝５の肥満体のラ
ット）に、カゼイン（Ｃ）、低イソフラボンのダイズタンパク質単離物（ＬＳ食
餌療法）、または高イソフラボンのダイズタンパク質単離物（ＨＳ食餌療法）の
いずれかを含有している食餌療法を、７０日間にわたってタンパク質の供給源と
して摂取させた。基底（Ｃ）の食餌療法（表１）は、研究室用のげっ歯類につい
ての改変されたＡＩＮ−７６半精製された食餌療法である。スクロースは、５０
０ｇ／ｋｇ食餌療法（ＡＩＮ−７６食餌療法）から３００ｇ／ｋｇ食餌療法に減
少させ、そしてトウモロコシデンプンは、１５０ｇ／ｋｇ食餌療法（ＡＩＮ−７
６食餌療法）から３５０ｇ／ｋｇ食餌療法に増大させた。全ての３つの食餌療法
の正味のタンパク質含有量は、１７４ｇ／ｋｇ食餌療法であり、そしてタンパク
質の供給源（カゼイン、低イソフラボンのダイズタンパク質単離物、または高イ
ソフラボンのダイズタンパク質単離物）だけが、食餌療法によって可変であった
。ＬＳおよびＨＳ食餌療法の全イソフラボン濃度は、それぞれ、３．８ｍｇ／１
００ｇ食餌療法および５７．８ｍｇ／１００ｇ食餌療法であった。ゲニステイン
−、ダイドゼイン−、およびグリシテイン−を含有している化合物（アグリコン
＋グリコシド＋グリコシドエステル）としての個々のイソフラボン濃度は、それ
ぞれ、２．４、１．２、および０．２ｍｇ／１００ｇ食餌療法（ＬＳ食餌療法）
ならびに、３７．０、１７．９、および２．９ｍｇ／１００ｇ食餌療法（ＨＳ食
餌療法）であった。

【００５３】 ７０日間の実験期間の終わりに、１２時間の間ラットから食物を奪い、次いで
、ペントバルビトールナトリウム（５ｍｇ／１００ｇ体重）の静脈内注射で麻酔
した。血液を、４％のクエン酸ナトリウムのような予想される血液容量の１０％
を予め充填したシリンジに心臓の穿刺によって、血小板の単離のために麻酔した
ラットから採取した。肝臓を切り出し、そしてコレステロールおよびトリグリセ
リド分析のために−８０℃で凍結させた。血小板を、血小板を多く含む血漿から
単離し、そして休止期の血小板およびトロンビンで刺激した血小板中でのインビ
トロでの血小板活性の感受性を、変数に依存して分泌された（内膜血小板５ＨＴ
％）セロトニン（５ＨＴ）の量を使用して概算した。

【００５４】 肝臓のコレステロールおよびトリグリセリドの分析。凍結−融解させた肝臓の
一部を、本質的にはＦｏｌｃｈ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２２６：４
９７−５０９（１９５７）の方法によって、クロロホルム：メタノール（２：１
）を用いて抽出した。コレステロールの分析のために、脂質抽出物のアリコート
（５〜５０μＬ）をアセトン中の５０μＬの１５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００
と混合し、そして溶媒を減圧下で蒸発させた。全コレステロール濃度およびエス
テル化されていないコレステロールの濃度を、酵素的な手順によって比色によっ
て決定し（Ａｌｌａｉｎ，Ｃ．Ｃ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．２０：４７０−４
７５（１９７４））、そしてコレステリルエステルを、差から計算した。肝臓の
トリグリセリドを、Ｈａｎｔｚｃｈ反応を利用する手順によって、（トリオレイ
ン標準を用いて）定量した（Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｍ．Ｊ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ
．Ａｃｔａ ２２：３９３−３９７（１９６８））。

【００５５】 血漿のコレステロールの分析。全コレステロールを、酵素的な手順を使用して
血小板を多く含む血漿中で測定した（Ａｌｌａｉｎ，Ｃ．Ｃ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃ
ｈｅｍ．２０：４７０−４７５（１９７４））。

【００５６】

【表１】 血小板単離物および血小板活性の感受性の測定。抗凝固血液（８〜９ｍＬ）を
、ｐＨ７．４の緩衝化した生理食塩水グルコース−クエン酸（ＢＳＧ−Ｃ）（１
．５ｍＬ）と混合し、そして血小板を多く含む血漿（ＰＲＰ）を、２２℃で５分
間の８５０×ｇでの遠心分離によって得た。ＰＲＰを、２２℃で２０分間の１４
５０×ｇでの、２工程のＣｅｌｌＳｅｐ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ（Ｃａｒｄｉｎａ
ｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｆｅ，ＮＭ）勾配を通じて遠心分離し
た。単離した血小板を、勾配の界面から採取し、ＢＳＧ−Ｃで洗浄し、そしてｐ
Ｈ７．６のＴｙｒｏｄｅ’ｓ緩衝液中に２〜４×１０⁸個の細胞／ｍＬの濃度で
再懸濁した。懸濁した血小板のアリコートを、３時間の間２２℃で平衡化させ、
次いで３分間の間、トロンビン（０．１５Ｕ／ｍＬ）を用いてまたはそれを用い
ないでのいずれかで処理した。トロンビンで刺激した血小板および未刺激の血小
板をペレット状にし、そして上清をすぐに取り出し、そして−８０℃で凍結させ
た。血小板のペレットを、ｐＨ７．５の溶解緩衝液中に溶解させ、そしてタンパ
ク質を、本質的にはＬｏｗｒｙ，Ｏ．Ｈ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９３
：２６５−２７５（１９５１）の方法によって、Ｓｉｇｍａ Ａｓｓａｙ Ｋｉ
ｔ Ｎｏ．Ｐ５６５６および標準としてＢＳＡを使用して定量した。トロンビン
で刺激した血小板溶解物および未刺激の血小板溶解物および上清のアリコートを
、内部標準としてメチル５−ヒドロキシトリプタミン（メチルセロトニン）を含
有している０．３２Ｍの過塩素酸で稀釈した。セロトニンを、逆相ＨＰＬＣを使
用して定量した。最初の血小板のセロトニン含有量を、それぞれの懸濁した血小
板サンプルから分泌されたセロトニンの量に対してそれぞれの血小板溶解物中の
セロトニンの量を添加することによって、計算した。未刺激の血小板サンプルお
よびトロンビンで刺激した血小板サンプルから分泌されたセロトニンを、最初の
血小板のセロトニン含有量の割合として表す（最初の血小板５ＨＴ％）。

【００５７】 統計学的分析。体重、体重の増加、エネルギーの摂取、およびエネルギー効率
比を、２方法のＡＮＯＶＡを使用して、食餌療法のグループ（Ｃ、ＬＳ、および
ＨＳ）の主な効果および相互作用的効果、ならびに表現型（やせている、肥満体
）について分析した。肝臓のコレステロールおよびトリグリセリド、ならびに血
漿のコレステロール濃度を同様に分析し、そして図１および２に示す結果は、食
餌療法のグループの平均±ＳＥＭとして示す。血小板のデータを、食餌療法のグ
ループ（Ｃ、ＬＳ、およびＨＳ）の主な効果および相互作用的効果、ならびに表
現型（やせている、肥満体）について、２方法のＡＮＯＶＡ（血小板タンパク質
および最初の血小板の５ＨＴについて）または同時変化量として血小板タンパク
質を用いる２工程のＡＮＣＯＶＡ（未刺激の５ＨＴの分泌、およびトロンビンで
刺激した５ＨＴの分泌について）のいずれかを使用して分析した。図３に示す結
果は、食餌療法のグループの最少の平方の平均±ＳＥＭとして示す。血小板のデ
ータもまた、表現型にはよらず、食餌療法のグループ（Ｃ、ＬＳ、ＨＳ）の効果
について、上記のように１方法のＡＮＯＶＡまたは１方法のＡＮＣＯＶＡのいず
れかを使用して分析した。

【００５８】 結果。最初の体重および最後の体重は、それぞれ、やせているラットにおいて
は平均して１８３ｇおよび４０８ｇであり、そして肥満体のラットにおいてはそ
れぞれ、２４２ｇおよび５８４ｇであった。これは、やせているラットにおいて
は３．２ｇ／日の平均体重の増加、そして肥満体のラットにおいては４．９ｇ／
日の平均体重の増加に対応した。エネルギーの摂取およびエネルギー効率比は、
それぞれ、やせているラットにおいては平均して３６０ｋＪ／日および９．０ｇ
／ＭＪであり、そして肥満体のラットにおいてはそれぞれ、４４１ｋＪ／日およ
び１１．１ｇ／ＭＪであった。表現型の効果は、有意であった（ｐ＜０．００１
）が、食餌療法のグループの影響はそれぞれの変数については有意ではなかった
（ｐ＞０．０５）。

【００５９】 肥満体のラットの肝臓の重量（図１Ａ）は、２７．２ｇ（Ｃ食餌療法）から２
０．４ｇ（ＬＳ食餌療法）から１５．５ｇ（ＨＳ食餌療法）に、ダイズタンパク
質によって減少させられた。これは、４．９ｇ／１００ｇ体重（Ｃ食餌療法）か
ら３．６ｇ／１００ｇ体重（ＬＳ食餌療法）から２．７ｇ／１００ｇ体重（ＨＳ
食餌療法）までの相対的な肝臓の重量（図１Ｂ）における減少に対応する。肝臓
のトリグリセリド（図１Ｃ）は、やせているラットにおいては、両方のダイズタ
ンパク質の食餌療法によって、６７μｍｏｌ／ｇ肝臓（Ｃ食餌療法）から３４〜
３６μｍｏｌ／ｇ肝臓（ＬＳおよびＨＳ食餌療法）に低下し、そして肥満体のラ
ットにおいては、２７９μｍｏｌ／ｇ肝臓（Ｃ食餌療法）から１８７μｍｏｌ／
ｇ肝臓（ＬＳ食餌両方）から１４２μｍｏｌ／ｇ肝臓（ＨＳ食餌療法）に低下し
た。肝臓の全コレステロール（図１Ｄ）は、やせているラットおよび肥満体のラ
ット（Ｃ食餌療法）における、８．９μｍｏｌ／ｇ肝臓および１１．８μｍｏｌ
／ｇ肝臓から、それぞれ、５．８〜６．１μｍｏｌ／ｇ肝臓に低下した（ＨＳ食
餌両方）。肝臓のエステル化されていないコレステロールに対するダイズタンパ
ク質の一貫した効果（図１Ｅ）は観察されなかったが、肝臓のコレステリルエス
テル（図１Ｆ）は、コントロール値（Ｃ食餌療法）からＨＳ食餌療法によって、
やせているラットおよび肥満体のラットの両方において、８８％および７７％に
までそれぞれ劇的に減少した。ＬＳ食餌療法は、やせている動物および肥満体の
動物において肝臓のコレステリルエステルおよび全コレステロールの中程度の減
少を生じた。血漿の全コレステロール（図２）は、やせているラットにおいては
食餌療法によっては影響されなかった；しかし、血漿のコレステロールは、肥満
体のラットにおいては、６．３ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｃ食餌療法）から５．０ｍｍｏｌ
／Ｌ（ＬＳ食餌療法）から４．５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＨＳ食餌療法）に減少した。

【００６０】 血小板タンパク質濃度は、平均して、食餌療法のグループまたは表現型にはよ
らず、やせているラットおよび肥満体のラットにおいて、１６５μｇ／サンプル
であった。最初の血小板の５ＨＴ（セロトニン）濃度は、食餌療法のグループに
はよらず、やせているラット（２．１ｎｇ／μｇタンパク質）よりも肥満体のラ
ット（２．５ｎｇ／μｇタンパク質）において高い傾向にあった（Ｐ＝０．０７
）。エステル化されていない５ＨＴの分泌（図３Ａ）またはトロンビンで刺激さ
れた５ＨＴの分泌（図３Ｂ）のいずれについても、食餌療法のグループまたは表
現型の有意な影響は存在しなかった；しかし、未刺激の５ＨＴの分泌は、やせて
いるラット（３．９％）よりも肥満体のラット（５．０％）において高い傾向に
あった（Ｐ＝０．１）。さらに、未刺激の５ＨＴの分泌においては、５．６％（
Ｃ食餌療法）から４．１％（ＨＳ食餌療法）への減少（１方法のＡＮＣＯＶＡ、
Ｐ＝０．０４）、ならびにＬＳ食餌療法によっては４．３％への減少（Ｐ＝０．
０６）が存在した。

【００６１】 （実施例ＩＩ） （雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、肝臓の脂肪および血
液の血小板活性化の感受性に対する、イソフラボンをあまり含んでいないダイズ
タンパク質およびイソフラボンを多く含むダイズタンパク質の効果の実験） 動物、食餌療法、および分析手順。雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラッ
ト（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａ
ｐｏｌｉｓ，ＩＮによる、６週齢の、１つの食餌療法のグループあたりｎ＝１０
）に、４２日間にわたって、カゼイン（Ｃ）、低イソフラボンのダイズタンパク
質単離物（ＬＳ食餌療法）、または高イソフラボンのダイズタンパク質単離物（
ＨＳ食餌療法）のいずれかを含有している食餌療法を、タンパク質の供給源とし
て摂取させた。食餌療法は、表１（実施例Ｉ）に列挙するものと同一であった。
肝臓のコレステロールおよびトリグリセリド濃度、血漿の全コレステロール濃度
、ならびに血小板活性化の感受性の決定のための分析手順は、Ｉ節に記載した。

【００６２】 統計学的分析。体重、体重の増加、エネルギーの摂取、およびエネルギー効率
比を、１方法のＡＮＯＶＡを使用して、食餌療法のグループ（Ｃ、ＬＳ、および
ＨＳ）の影響について分析した。肝臓のコレステロールおよびトリグリセリド濃
度、ならびに血漿の全コレステロール濃度を、同様に分析した（表２）。血小板
のデータを、食餌療法のグループの効果について、１方法のＡＮＯＶＡ（血小板
タンパク質および最初の血小板の５ＨＴについて）、または同時変化量として血
小板タンパク質を用いる１方法のＡＮＣＯＶＡ（未刺激の５ＨＴの分泌およびト
ロンビンで刺激した５ＨＴの分泌について）のいずれかを使用して、分析した。
図４に示す結果は、食餌療法のグループの最少の平方の平均±ＳＥＭとして示す
。

【００６３】

【表２】 結果。最初の体重および最後の体重は、それぞれ、食餌療法のグループにはか
かわらず、平均して１２５ｇおよび３４１ｇであった。これは、５．１ｇ／ｄの
体重の増加に対応した。エネルギーの摂取は、Ｃ食餌療法を与えたラット（３５
２ｋＪ／ｄ）よりも、ＬＳ食餌療法を与えたラット（３１０ｋＪ／ｄ）およびＨ
Ｓ食餌療法を与えたラット（３２４ｋＪ／ｄ）において低かった。そしてエネル
ギー効率比は、１４．５ｇ／ＭＪ（Ｃ食餌療法）から１６．６ｇ／ＭＪ（ＬＳ食
餌療法）および１６．０ｇ／ＨＳ食餌療法）に増大した。

【００６４】 相対的な肝臓の重量（表２）は、Ｃ食餌療法のグループ（３．０ｇ／１００ｇ
体重）よりも、ＬＳおよびＨＳ食餌療法のグループ（２．８ｇ／１００ｇ体重）
において低い傾向（Ｐ≦０．１）にあった。肝臓のコレステリルエステルにおい
ては、コントロール（Ｃ食餌療法）の値から、ＨＳ食餌療法によって、２３％の
減少、そして肝臓の全トリグリセリドにおいては２７％の減少の傾向にあった（
Ｐ≦０．１）。肝臓のエステル化されていないコレステロールは、イソフラボン
を多く含むダイズタンパク質（ＨＳ食餌療法）を与えたラットにおいては、４．
５μｍｏｌ／ｇ肝臓（Ｃ食餌療法）および４．６μｍｏｌ／ｇ肝臓（ＬＳ食餌療
法）から、５．０μｍｏｌ／ｇ肝臓に増大した（Ｐ＝０．０５）。血漿の全コレ
ステロール濃度は、食餌療法のグループによっては有意には影響を受けなかった
。

【００６５】 血小板タンパク質濃度および最初の血小板の５ＨＴ（セロトニン）濃度は、食
餌療法のグループにはかかわらず、それぞれ平均して、２１１μｇ／サンプルお
よび３．１ｎｇ／μｇタンパク質であった。未刺激の５ＨＴの分泌（図４Ａ）は
、両方のダイズタンパク質の食餌療法によって、４．７％（Ｃ食餌療法）から３
．０％に低下した。トロンビンで刺激した５ＨＴの分泌（図４Ｂ）は、５９．７
％（Ｃ食餌療法）から５２．２％に低下した（ＨＳ食餌療法）が、一方、ＬＳ食
餌療法は、中間体の還元を５５．９％にまで生じる傾向にあった（Ｐ＝０．１）
。

【００６６】 （実施例ＩＩＩ） （コントロールまたはアテローム形成性の食餌療法を与えた雄性のＳｐｒａｇ
ｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける肝臓の脂質および血液の血小板活性化の感受
性に対する、ダイズイソフラボンの効果の実験） 動物、食餌療法、および分析手順。雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラッ
ト（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａ
ｐｏｌｉｓ，ＩＮによる、８週齢の、１つの食餌療法のグループあたりｎ＝１０
）に、６３日間にわたって、コントロール（Ｃ）食餌療法（ｎ＝２０）またはア
テローム形成性の（Ａ）食餌療法（ｎ＝３０）のいずれかを摂取させた。食餌療
法の組成は表３に示す。コントロールの食餌療法（Ｃ＋Ｉ食餌療法）を投与した
ラットの半分、およびアテローム形成性の食餌療法（Ａ＋Ｉ食餌療法）を投与し
たラットの３分の１に、コントロールまたはダイズのイソフラボン抽出物を補充
したアテローム形成性の食餌療法（これによって、１００ｇの食餌療法あたり９
８．３ｍｇの全イソフラボンを提供した）を与えた。さらに、アテローム形成性
の食餌療法（Ａ＋ＨＳ食餌療法）を投与したラットの３分の１に、高イソフラボ
ンのダイズタンパク質単離物によって置換したカゼインを有するアテローム形成
性の食餌療法を与えた（１００ｇの食餌療法あたり５７．８ｇの全イソフラボン
）。個々のイソフラボン濃度（ゲニステイン−、ダイドゼイン−およびグリシテ
イン−を含有している化合物（アグリコン＋グリコシド＋グリコシドエステル）
として）は、５３．５、４１．１、および３．７ｍｇ／１００ｇ食餌療法（Ｃ＋
ＩおよびＡ＋Ｉ食餌療法）、ならびに３７．０、１７．９、および２．９ｍｇ／
１００ｇ食餌療法（Ａ；ＨＳ食餌療法）であった。基底の食餌療法（Ｃ食餌療法
）は、研究室用のげっ歯類についての、改変したＡＩＮ−７６半精製した食餌療
法である。基底の食餌療法については、スクロースは５００ｇ／ｋｇ食餌療法（
ＡｆＮ−７６食餌療法）から２００ｇ／ｋｇ食餌療法に減少させ、そしてトウモ
ロコシデンプンは、１５０ｇ／ｋｇ食餌療法（ＡｆＮ−７６食餌療法）から４５
０ｇ／ｋｇ食餌療法に増大させた。全ての５個の食餌療法の正味のタンパク質含
有量は、１７４ｇ／ｋｇ食餌療法であった。コントロールの食餌療法を、２００
から４００ｇ／ｋｇ食餌療法にまでスクロース含有量を増大させること、４５０
から１４５ｇ／ｋｇ食餌療法にまでトウモロコシデンプンの含有量を減少させる
こと、５０から２０ｇ／ｋｇ食餌療法にまでトウモロコシ油の含有量を減少させ
ること、ならびにココナッツオイル（７０ｇ／ｋｇ食餌療法）、ラード（５０ｇ
／ｋｇ食餌療法）、コレステロール（１２ｇ／ｋｇ食餌療法）、およびコール酸
（２ｇ／ｋｇ食餌療法）を添加することによって、アテローム形成性の食餌療法
に転換した。肝臓のコレステロールおよびトリグリセリド濃度、血漿の全コレス
テロール濃度、ならびに血小板活性化の感受性の決定のための分析手順は、実施
例１に記載したとおりであった。

【００６７】 統計学的分析。体重、体重の増加、エネルギーの摂取、およびエネルギー効率
比を、２方法のＡＮＯＶＡを用いて、食餌療法の型（Ｃ、およびＣ＋Ｉ食餌療法
、対Ａ、Ａ＋Ｉ、およびＡ＋ＨＳ食餌療法）の主な影響および相互的な影響につ
いて、そして食餌療法（ＣおよびＡ食餌療法、対Ｃ＋Ｉ、Ａ＋Ｉ、およびＡ＋Ｈ
Ｓ食餌療法）におけるイソフラボンの存在について、分析した。肝臓のコレステ
ロールおよびトリグリセリド濃度、ならびに血漿の全コレステロール濃度（表４
）を、同様に分析した。さらに、１方法のＡＮＯＶＡを、３つのアテローム形成
性の食餌療法の間での個々の処置の影響を区別するために、肝臓の脂質および血
漿のコレステロールのデータに対して適用した。血小板のデータを、２方法のＡ
ＮＯＶＡ（血小板タンパク質および最初の血小板の５ＨＴについて）、または同
時変化量として血小板タンパク質を用いる２方法のＡＮＣＯＶＥ（未刺激の５Ｈ
Ｔの分泌およびトロンビンで刺激した５ＨＴの分泌について）のいずれかを使用
して、食餌療法の型の主な影響および相互的な影響について、そして上記に記載
した食餌療法中のイソフラボンの存在について分析した。図５に示す結果は、個
々の食餌療法のグループの最少の平方の平均±ＥＭとして示す。

【００６８】

【表３】 結果。最初の体重および最後の体重は、それぞれ、食餌療法のタイプまたはイ
ソフラボンの存在にはかかわらず、平均して１８３ｇおよび４２０ｇであった。
これは、３．８ｇ／ｄの平均の体重の増加に対応した。５つの処置グループのそ
れぞれについての同様の増殖速度にもかかわらず、エネルギーの摂取は、コント
ロール食餌療法（ＣおよびＣ＋Ｉ食餌療法）を与えたラットにおける３５５ｋＪ
／ｄの平均から、アテローム形成性の食餌療法（Ａ、Ａ＋Ｉ、およびＡ＋ＨＳ）
を与えたラットにおける３０２ｋＪ／ｄにまで低下した（Ｐ≦０．００１）。さ
らに、エネルギー摂取は、イソフラボンを含有していない食餌療法（ＣおよびＡ
食餌療法）を与えたラットにおける３１５ｋＪ／ｄの平均から、イソフラボンを
含有している食餌療法（Ｃ＋Ｉ、Ａ＋Ｉ、およびＡ＋ＨＳ）を与えたラットにお
ける３２９ｋＪ／ｄにまで増大した（Ｐ≦０．００２）。

【００６９】 同様に、エネルギー効率比は、コントロールの食餌療法を与えたラットにおけ
る１０．４ｇ／ＭＪの平均から、アテローム形成性の食餌療法を与えたラットに
おける１２．７ｇ／ＭＪにまで増大し（Ｐ≦０．００１）、そしてイソフラボン
を有さない食餌療法を与えたラットにおける１２．３ｇ／ＭＪの平均からイソフ
ラボンを有する食餌療法を与えたラットにおける１１．５ｇ／ＭＪにまで減少し
た。

【００７０】 肝臓の重量（表４）は、コントロールの食餌療法（ＣおよびＣ＋Ｉ食餌療法）
を与えたラットにおける２．６ｇ／１００ｇ体重の平均から、アテローム形成性
の食餌療法（Ａ、Ａ＋Ｉ、およびＡ＋ＨＳ食餌療法）を与えたラットにおいては
４．４ｇ／１００ｇ体重にまで増大した。アテローム形成性の食餌療法のグルー
プの中では、肝臓の重量は、ＡおよびＡ＋ＨＳ食餌療法（それぞれ、４．３およ
び４．２ｇ／１００ｇ体重）を与えたラットにおけるよりも、Ａ＋Ｉ食餌療法を
与えたラット（４．７ｇ／１００ｇ体重）において有意に高かった（Ｐ≦０．０
１）。肝臓のエステル化されていないコレステロールは、コントロールの食餌療
法を与えたラットにおける、４．４μｍｏｌ／ｇ肝臓の平均から、そして肝臓の
コレステリルエステルは、１．７μｍｏｌ／ｇ肝臓の平均から、それぞれ、アテ
ローム形成性の食餌療法を与えたラットにおいては、９．３μｍｏｌ／ｇ肝臓お
よび１０４．８μｍｏｌ／ｇ肝臓にまで増大した（Ｐ≦０．００１）。肝臓の全
トリグリセリドもまた、１６．０μｍｏｌ／ｇ肝臓の平均から、アテローム形成
性の食餌療法によって４６．８μｍｏｌ／ｇ肝臓にまで増大した（Ｐ≦０．００
１）。アテローム形成性の食餌療法のグループの中では、肝臓のエステル化され
てないコレステロールは、イソフラボンを有さないアテローム形成性の食餌療法
（Ａ食餌療法）を与えたラットにおけるよりも、イソフラボンを有するアテロー
ム形成性の食餌療法（Ａ＋ＩおよびＡ＋ＨＳ食餌療法）を与えたラットにおいて
有意に高く（Ｐ≦０．０１）、そして肝臓のトリグリセリドは有意に低かった（
Ｐ≦０．００１）。血漿の全コレステロール濃度は、コントロールの食餌療法を
与えたラットにおける２．６ｍｍｏｌ／Ｌの平均から、アテローム形成性の食餌
療法を与えたラットにおいては４．７ｍｍｏｌ／Ｌにまで増大した（Ｐ≦０．０
０１）。そしてこれは、Ａ＋ＨＳ食餌療法（４．４ｍｍｏｌ／Ｌ）を与えたラッ
トにおけるよりも、Ａ＋Ｉ食餌療法（５．１ｍｍｏｌ／Ｌ）を与えたラットにお
いて高かった（Ｐ≦０．０５）。

【００７１】

【表４】 血小板タンパク質の濃度は、平均して、３１２μｇ／サンプルであり、そして
食餌療法または食餌療法用のイソフラボンのタイプにはよる影響は受けなかった
。しかし、最初の血小板の５ＨＴ濃度は、コントロールの食餌療法（Ｃ、および
Ｃ＋Ｉ食餌療法）を与えたラットにおける２．４ｎｇ／μｇタンパク質の平均か
ら、アテローム形成性の食餌療法（Ａ、Ａ＋Ｉ、およびＡ＋ＨＳ食餌療法）を与
えたラットにおいては１．９ｎｇ／μｇタンパク質にまで減少した（Ｐ≦０．０
０１）。未刺激の５ＨＴの分泌（図５Ａ）は、６．５％から５．２％の平均にま
で減少した（Ｐ≦０．００１）。そしてトロンビンで刺激した５ＨＴの分泌（図
５Ｂ）は、アテローム形成性の食餌療法を与えたラットにおいては、５０．１％
から５４．４％の平均にまで増大した（Ｐ≦０．０２）。イソフラボン抽出物（
Ｃ＋ＩおよびＡ＋Ｉ食餌療法）としてまたはダイズタンパク質の成分（Ａ＋ＨＳ
食餌療法）としてのいずれかの食餌療法用のイソフラボンの存在は、未刺激の５
ＨＴの分泌またはトロンビンで刺激した５ＨＴの分泌には有意な影響は与えなか
った。

【００７２】 （実施例ＩＶ） （雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける肝臓および代謝のパラ
メーターに対する、ゲニステイン、ダイドゼイン、およびエストラジオールの効
果） 動物および処置。４０匹の雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａ
ｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉ
ｓ，ＩＮによる、５週齢の、ｎ＝９〜１０ラット／処置）に、ゲニステイン（Ｇ
）、ダイドゼイン（Ｄ）、エストラジオール（Ｅ）、またはビヒクルコントロー
ル（Ｖ）のいずれかを注射した。グループＶのそれぞれの動物に、６週間にわた
って、１０％のエタノール−９０％のオリーブオイル溶液の０．１ｃｃの皮下注
射を毎日受容させた；他の処置を、毎日の０．１ｃｃの皮下注射としてのそれら
のそれぞれの化合物（例えば、１０％のエタノール−９０％のオリーブオイル溶
液中の、０．１μｇの化合物／ｇ体重）を、６週間にわたって受容させた。

【００７３】 食餌および体重測定。動物の体重および飼料の摂取を、６週間の実験の間に毎
週測定し、そして続いて飼料効率比［ＦＥＲ（ｇの体重変化／ｇの飼料の摂取）
］を、決定した。屠殺後、異常な脂肪パッド、肝臓、および再生器官を採取し、
そして比較のために秤量した。

【００７４】 血漿グルコースおよび血漿の全コレステロールの分析。収集した血液をヘパリ
ン化し、そして遠心分離し、次いで血漿のアリコートを、標準的なグルコースオ
キシダーゼ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）
およびコレステロールキット（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用してグルコースおよび全コレステロールのために使用し
た。肝臓のコレステロールおよびトリグリセリド分析。肝臓の全コレステロール
、エステル化されていないコレステロール、コレステリルエステル、およびトリ
グリセリド濃度の決定のための分析手順は、実施例１に記載するとおりである。

【００７５】 肝臓のＣｕ、Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼ分析。ラッ
トの肝臓中の抗酸化酵素（ＡＯＥ）、カタラーゼ（ＣＡＴ）、およびＣｕ、Ｚｎ
スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）の活性またはレベルを、フリーラジカ
ルの防御システムに対するＧ、Ｄ、およびＥ注射の投与の効果を決定するために
測定した。５０ｍｇの凍結させた全肝臓の断片を採取し、そしてＴＢＳおよび１
％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００中で超音波処理した。次いでサンプルを、４℃で
１３，０００×ｇで２５分間遠心分離し、そして上清を回収した。全タンパク質
濃度を、肝臓のＡＯＥ活性または１ミリグラムの全タンパク質あたりの絶対的な
レベルの続く決定のためにアッセイした。ＳＯＤ活性を、スーパーオキシドジェ
ネレーターとしてキサンチン／キサンチンオキシダーゼを使用してＩ＝５６０ｎ
ｍで分光高度測定装置によって決定し、そして公知のＳＯＤ活性の標準曲線に対
して測定した（Ｓｕｎら、１９８８、１９９４）。カタラーゼのレベルを、Ｓｌ
ｏｔ ｂｌｏｔによって決定した。これは、非特異的結合を検出しない代表的な
ウェスタンブロットに従って行った（Ｔｏｂｉｎら、１９７９）。カタラーゼに
対応するバンドを、デンシトメトリーによって定量した。

【００７６】 統計学的分析。これらの実験には、ランダム化した設計を使用した。全てのデ
ータを、変数の１方法の分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析し、そしてｈｏｃ後の
比較をＴｕｋｅｙ ｐａｉｒｗｉｓｅ比較試験を用いて行った。有意性を、Ｐ≦
０．０５（ＳＹＳＴＡＴ ７．０、ＳＰＳＳ ＩＮＣ．，１９９７）で確認し、
そして全ての値を、平均±平均の標準誤差で報告する。

【００７７】 結果。飼料および体重測定：飼料の摂取は、Ｖ処置した動物と比較した場合に
は、Ｄ、Ｇ、およびＥ処置した動物において有意に高かった（Ｐ＜０．０５）（
表５）。体重、精巣、および前立腺の重量は、Ｄ、Ｇ，およびＶ処置した動物と
比較した場合には、Ｅ処置した動物において明らかに低かった（ｐ＜０．０５）
。結果として、ＦＥＲは、Ｖと比較した場合には、Ｄ、Ｇ、およびＥ処置した動
物において低く（Ｐ＜０．０５）、そしてＥ処置した動物は、ＤおよびＧ処置に
対して明らかに低い（Ｐ＜０．０５）ＦＥＲを有した。腹腔内の脂肪パッドの重
量は、Ｅグループにおいて有意に低かった（Ｐ＜０．０５）；しかし、この効果
は、体重について補正した場合には、失われた。

【００７８】

【表５】 Ｖグループ（図６）。Ｖグループに対して、Ｇで処置した動物においては、よ
り低い血漿コレステロールレベルに対する有意な傾向は存在しなかった（Ｐ＜０
．５）（図６）。さらに、Ｅで処置したグループにおいては、より低いグルコー
スレベルに向うＶの有意ではない傾向（Ｐ＜０．１）に対する動物が存在した（
図７）。

【００７９】 肝臓の重量および脂質の評価：肝臓の重量は、Ｖグループに対して、Ｄ、Ｇ、
およびＥで処置した動物においてかなり低かった（Ｐ＜０．０５）（表６）。驚
くべきことに、体重の％としての肝臓の重量を評価した場合には、Ｅで処置した
動物は、Ｖで処置した動物と同様の値を有した；それにもかかわらず、Ｄおよび
Ｇグループはなお、相対的な肝臓の大きさの減少を示した。肝臓の全コレステロ
ールは、Ｖ、Ｇ、およびＤ動物と比較した場合には、Ｅで処置したラットにおい
て有意に高かった（Ｐ＜０．０５）。肝臓のコレステリルエステルは、Ｖおよび
Ｇでの処置と比較した場合には、Ｅで処置したラットにおいて有意に高かった（
Ｐ＜０．０５）。肝臓のトリグリセリド濃度は、Ｅでの処置と比較した場合には
、Ｄでの処置において有意に低かった（Ｐ＜０．０５）。

【００８０】

【表６】 肝臓のフリーラジカルスカベンジャーの評価：エストロゲン様化合物（すなわ
ち、Ｇ、Ｄ、およびＥ）の皮下注射は、これらのラットの肝臓中で試験した抗酸
化防御システムの状態に対して様々な効果を有した。カタラーゼのレベルは、任
意のこれらの化合物での処置によっては影響されないようであった。平均はそれ
ぞれのグループについて同様であり、そしてそれらの間での差異は、１０％未満
で変化した（図８）。対照的に、全ての３つの処置グループが、適合したビヒク
ルコントロールよりも有意に高いレベルのＳＯＤ活性を有した（図８）。３つの
処置グループの少なくともＳＯＤに影響を与えるゲニステインは、１５％までこ
の酵素の活性を惹起した（Ｐ＜０．０５）。比較によって、ダイドゼイン、およ
びエストラジオール（これらは、これらの試行においては同等の有効性である）
は、両方とも約３３％まで、コントロールの活性を上回るＳＯＤ活性に上昇させ
た（Ｐ＜０．０５）。Ｖラットの肝臓全体にわたる活性における増大に加えて、
ＥおよびＤでの処置のＳＯＤ活性の上昇は、Ｇでの処置を用いて見られるよりも
有意に高かった（Ｐ＜０．０５）。

【００８１】 （実施例Ｖ） （ラットの心臓血管の疾患に関連する症状に対する、ダイズタンパク質および
ダイズのイソフラボンの効果） 動物および食餌療法。３０匹の雄性および３０匹の雌性のＳｐａｒａｇｕｅ−
Ｄａｗｌｅｙラットを、以下の３つの処置グループの１つにランダムに分けた：
高イソフラボン（２．３９ｍｇ／ｇタンパク質）ダイズタンパク質（ＨＳ）；低
イソフラボン（０．１１ｍｇ／ｇタンパク質）ダイズタンパク質（ＬＳ）、また
は非ダイズ（カゼイン）タンパク質（Ｃ）。全ての他のマイクロ／マクロ栄養素
を、食餌療法中で一定に維持した。屠殺後、血液を、インシュリンをとばす（ｗ
ｉｎｇ）ために回収し、そしてグルコースの測定および異常な脂肪パッド、およ
び再生器官を採取し、そして秤量した。

【００８２】 飼料および体重の測定。動物の体重および飼料の摂取を、６週間の実験の間に
毎週測定し、そして続いて飼料効率比［ＦＥＲ（ｇの体重変化／ｇの飼料の摂取
）］を、決定した。屠殺後、異常な脂肪パッド、肝臓、および再生器官を採取し
、そして比較のために秤量した。

【００８３】 血漿グルコース、コレステロール、およびインシュリンの分析。収集した血液
をヘパリン化し、そして遠心分離し、次いで血漿のアリコートを、標準的なグル
コースオキシダーゼ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ
，ＭＯ）、コレステロールキット（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔ
．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、およびインシュリンＲＩＡキットを使用する、グルコー
ス、全コレステロール、およびインシュリンの決定のために使用した。

【００８４】 統計学的分析。これらの実験には、ランダマイズした設計を使用した。全ての
データを、変数の１方法の分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析し、そしてｈｏｃ後
の比較をＴｕｋｅｖ ｐａｉｒｗｉｓｅ比較試験を用いて行った。有意性を、Ｐ
≦０．０５（ＳＹＳＴＡＴ ７．０、ＳＰＳＳ ＩＮＣ．，１９９７）で確認し
、そして全ての値を、平均±平均の標準誤差で報告する。

【００８５】 結果。ＬＳおよびＨＳを与えた雄性のラットにおいては、Ｃと比較した場合に
は、体重および腹腔内の異常な脂肪の重量が明らかに減少した（Ｐ＜０．０５）
。任意の雄性のグループの間に性腺の差異は存在しなかった。雄性のＨＳラット
は、Ｃに対して、ＦＥＲ、インシュリン、およびインシュリン対グルコース比（
Ｉ／Ｇ）における減少を有した（図９）。さらに、雄性のＨＳラットはまた、Ｃ
動物と比較した場合には、血漿の全コレステロールにおいて有意ではない減少傾
向（Ｐ＜０．１）を実証した。雄性のラットにおける全体的な生理学的および代
謝の影響は、雌性のラットにおいては明らかではなかった。さらに、雌性のＬＳ
ラットは、Ｃに対して、腹腔内の脂肪の増大を有し（Ｐ＜０．０５）、そして雌
性のＨＳラットは、Ｃに対して、血漿グルコースの増大を有した（Ｐ＜０．０５
）。

【００８６】 （実施例ＶＩ） （高イソフラボンのダイズタンパク質は雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットの
損傷したグルコース寛容性および脂肪性肝炎を緩和する） 材料および方法。雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットを、以下の３つの処置グ
ループの１つにランダムに分けた：高イソフラボンのダイズタンパク質（ＨＩＳ
）、低イソフラボンのダイズタンパク質（ＬＩＳ）、または非ダイズ（カゼイン
）タンパク質（Ｃ）食餌療法。１０週間の実験の間に、体重、飼料の摂取、およ
び飼料効率比（ＦＥＲ）を評価した。さらに、グルコース寛容性試験を行い、そ
して血漿、異常な脂肪パッド、肝臓および再生器官を回収し、秤量し、そして続
く分析のために凍結させた。

【００８７】 結果。高イソフラボンのダイズタンパク質（ＨＩＳ）食餌療法は、低イソフラ
ボンのダイズタンパク質および非ダイズ（カゼイン）タンパク質（Ｃ）食餌療法
と比較して、グルコース寛容性（図１０）、脂肪性肝炎（すなわち、減少した肝
臓重量、肝臓のコレステロール、および肝臓のトリグリセリド）（図１１〜１３
）、ならびに血漿のコレステロール（図１４）を有意に（Ｐ＜０．０５）改善し
た。

【００８８】 本発明が、上記の記載および実施例に特に記載されている以外で行われ得るこ
とが明らかである。

【００８９】 本発明の多数の改変およびバリエーションが、上記の技術から可能であり、従
って、添付の特許請求の範囲内にある。

【００９０】 本明細書中で引用されている全ての刊行物（特許、特許出願、定期刊行物、研
究室マニュアル、書籍、および他の文献を含む）の全体の開示が、本明細書中で
参考として援用されている。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 図１Ａ−Ｆは、カゼイン（Ｃ）、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタ
ンパク質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に
基づく食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび
肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける、肝臓のコレステロールおよびトリグリセ
リドの濃度を示す一連の棒グラフを示す。

【図１Ｂ】 図１Ａ−Ｆは、カゼイン（Ｃ）、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタ
ンパク質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に
基づく食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび
肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける、肝臓のコレステロールおよびトリグリセ
リドの濃度を示す一連の棒グラフを示す。

【図１Ｃ】 図１Ａ−Ｆは、カゼイン（Ｃ）、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタ
ンパク質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に
基づく食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび
肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける、肝臓のコレステロールおよびトリグリセ
リドの濃度を示す一連の棒グラフを示す。

【図１Ｄ】 図１Ａ−Ｆは、カゼイン（Ｃ）、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタ
ンパク質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に
基づく食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび
肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける、肝臓のコレステロールおよびトリグリセ
リドの濃度を示す一連の棒グラフを示す。

【図１Ｅ】 図１Ａ−Ｆは、カゼイン（Ｃ）、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタ
ンパク質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に
基づく食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび
肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける、肝臓のコレステロールおよびトリグリセ
リドの濃度を示す一連の棒グラフを示す。

【図１Ｆ】 図１Ａ−Ｆは、カゼイン（Ｃ）、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタ
ンパク質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に
基づく食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび
肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける、肝臓のコレステロールおよびトリグリセ
リドの濃度を示す一連の棒グラフを示す。

【図２】 図２は、カゼイン、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタンパク質（Ｌ
Ｓ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に基づく食餌療
法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび肥満体のＺｕ
ｃｋｅｒラットにおける、血漿の全コレステロール濃度を示す棒グラフを示す。

【図３Ａ】 図３Ａ−Ｂは、カゼイン、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタンパク
質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に基づく
食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび肥満体
のＺｕｃｋｅｒラットから単離した、未刺激の血漿板およびトロンビンで刺激し
た血小板からのセロトニン（５ＨＴ）の分泌を示す２つの棒グラフを示す。

【図３Ｂ】 図３Ａ−Ｂは、カゼイン、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタンパク
質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に基づく
食餌療法を７０日間与えた、雄性のやせているＺｕｃｋｅｒラットおよび肥満体
のＺｕｃｋｅｒラットから単離した、未刺激の血漿板およびトロンビンで刺激し
た血小板からのセロトニン（５ＨＴ）の分泌を示す２つの棒グラフを示す。

【図４Ａ】 図４Ａ−Ｂは、カゼイン、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタンパク
質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に基づく
食餌療法を４２日間与えた、雄性のやせているＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラ
ットから単離した、未刺激の血漿板およびトロンビンで刺激した血小板からのセ
ロトニン（５ＨＴ）の分泌を示す２つの棒グラフを示す。

【図４Ｂ】 図４Ａ−Ｂは、カゼイン、イソフラボンをあまり含んでいないダイズタンパク
質（ＬＳ）、またはイソフラボンを多く含む（ＨＳ）ダイズタンパク質に基づく
食餌療法を４２日間与えた、雄性のやせているＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラ
ットから単離した、未刺激の血漿板およびトロンビンで刺激した血小板からのセ
ロトニン（５ＨＴ）の分泌を示す２つの棒グラフを示す。

【図５Ａ】 図５Ａ−Ｂは、ダイズのイソフラボンを用いてまたはそれを用いずに６３日間
コントロールまたはアテローム形成性の食餌療法を与えた、雄性のＳｐｒａｇｕ
ｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから単離した、未刺激の血漿板およびトロンビンで刺激
した血小板からのセロトニン（５ＨＴ）の分泌を示す２つの棒グラフを示す。

【図５Ｂ】 図５Ａ−Ｂは、ダイズのイソフラボンを用いてまたはそれを用いずに６３日間
コントロールまたはアテローム形成性の食餌療法を与えた、雄性のＳｐｒａｇｕ
ｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから単離した、未刺激の血漿板およびトロンビンで刺激
した血小板からのセロトニン（５ＨＴ）の分泌を示す２つの棒グラフを示す。

【図６】 図６は、６週間にわたってビヒクルコントロール、ゲニステイン、ダイドゼイ
ン、またはエストラジオールを注射した、雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ
ラットにおける血漿の全コレステロール濃度を示す棒グラフである。

【図７】 図７は、６週間にわたってビヒクルコントロール、ゲニステイン、ダイドゼイ
ン、またはエストラジオールを注射した、雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ
ラットにおける血漿の断食（ｆａｓｔｉｎｇ）グルコースレベルを示す棒グラフ
である。

【図８】 図８は、６週間にわたってビヒクルコントロール、ゲニステイン、ダイドゼイ
ン、またはエストラジオールを注射した、雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ
ラットにおけるスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）およびカタラーゼ（Ｃ
ＡＴ）の肝臓の細胞性の抗酸化剤レベルを示す棒グラフである。

【図９】 図９は、６週間にわたって高イソフラボンのダイズタンパク質（ＨＳ）、低イ
ソフラボンのダイズタンパク質（ＬＳ）、または非ダイズ（カゼイン）タンパク
質（Ｃ）を与えた、雄性および雌性のＳｐａｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに
おける、インシュリン対グルコース比を示す棒グラフである。

【図１０】 図１０は、雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおけるグルコース寛容性試験
（ＧＴＴ）を示すグラフである。

【図１１】 図１１は、雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける肝臓の重量を示す棒グ
ラフである。

【図１２】 図１２は、雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける肝臓のコレステロール
を示す棒グラフである。

【図１３】 図１３は、雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける肝臓のトリグリセリド
を示す棒グラフである。

【図１４】 図１４は、雌性の肥満体のＺｕｃｋｅｒラットにおける血漿の全コレステロー
ルを示す棒グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 7/00 7/00 9/00 9/00 9/12 9/12 // Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｂ (72)発明者 ペルソ， マイケル アール． アメリカ合衆国 イリノイ 62958， マ カンダ， キャンプ シーダー ポイント レーン 2110 (72)発明者 ウィンターズ， トッド エイ． アメリカ合衆国 イリノイ 62966， マ ーフィスボロー， ブリアン アベニュー 43 (72)発明者 シャナーン， マイケル エフ． アメリカ合衆国 イリノイ 62901， カ ーボンデイル， アンバー レーン 192 Ｆターム(参考） 4B018 MD07 MD20 MD58 ME03 ME04 4C086 AA02 BA08 MA02 MA03 MA04 MA52 ZA36 ZA75 ZC33 ZC35 4C088 AB61 AC04 BA06 BA16 MA07 MA52 ZA36 ZA51 ZA75 ZC33 ZC35

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷したグ
   ルコース寛容性、Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性からな
   る群より選択される状態を処置またはそれらについての素因を減少させるための
   方法であって、少なくとも１つの治療有効量のイソフラボノイドを、該状態を有
   しているまたは該状態についての素因を有している被験体に対して投与する工程
   を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記イソフラボノイドがダイズに由来する、請求項１に記載
   の方法。
3. 【請求項３】 前記イソフラボノイドが、ダイズタンパク質のイソフラボン
   を多く含む画分中に含まれる、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記イソフラボノイドが、ゲニステイン、ゲニスチン、６’
   '−Ｏ−マロニルゲニスチン、６’’−Ｏ−アセチルゲニスチン；ダイドゼイン
   、ダイドジン、６’’−Ｏ−マロニルダイドジン、６’’−Ｏ−アセチルゲニス
   チン；グリシテイン、グリシチン、６’’−Ｏ−マロニルグリシチン、６’’−
   Ｏ−アセチルグリシチン、Ｂｉｏｃｈａｎｉｎ Ａ、またはホルモノネチンを含
   有している化合物の少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記イソフラボノイドがダイズタンパク質と組合せて投与さ
   れる、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記ダイズタンパク質がダイズタンパク質単離物である、請
   求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記ダイズタンパク質がダイズタンパク質濃縮物である、請
   求項５に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記イソフラボンを多く含む画分が、ダイズタンパク質と組
   合せて投与される、請求項３に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記ダイズタンパク質がダイズタンパク質単離物である、請
   求項８に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記ダイズタンパク質がダイズタンパク質濃縮物である、
    請求項８に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記イソフラボノイドが、ダイズタンパク質以外の少なく
    とも１つの食餌療法用の成分またはサプリメントと組合せて投与される、請求項
    １に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記イソフラボンを多く含む画分が、ダイズタンパク質以
    外の少なくとも１つの食餌療法用の成分またはサプリメントと組合せて投与され
    る、請求項３に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記イソフラボンを多く含む画分が、サポニン、レシチン
    、フェノール酸、トリプシンインヒビター、フィトステロール、ペプチド、およ
    びオリゴサッカライドからなる群より選択される少なくとも１つの成分を含有し
    ている、請求項３に記載の方法。
14. 【請求項１４】 肝臓の脂肪症、脂肪性肝炎、インシュリン耐性、損傷した
    グルコース寛容性、Ｘ症候群、異常な血小板機能、または異常な血管反応性から
    なる群より選択される状態を処置またはそれらの状態に対する素因を減少させる
    ための方法であって、サポニン、レシチン、フェノール酸、トリプシンインヒビ
    ター、フィトステロール、ペプチド、およびオリゴサッカライドからなる群より
    選択される少なくとも１つのイソフラボンを多く含む画分の成分の治療有効量を
    、該状態を有しているかまたは該状態に対する素因を有している被験体に対して
    投与する工程を包含する、方法。