JP2002540069A - 遺伝子操作した動物から得られるヒトポリクローナル抗体 - Google Patents
遺伝子操作した動物から得られるヒトポリクローナル抗体Info
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Abstract
(57)【要約】
実質的にヒトの抗血清は、一般に少なくとも約１ｋｇの重量の家畜を遺伝的に修飾することによって提供される。家畜は、不活性な重および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を発生させ、そしてヒト重および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも機能的部分を組込むことによって遺伝的に修飾され、それによりヒト遺伝子座は、免疫応答を発生する。抗血清は、疾病、免疫適合した患者の治療、および移殖の場合での用途を見出す。
Description
【０００１】 導入 技術分野 本発明の分野は、ヒトの予防的および治療的処置のための実質的にはヒトポリ
クローナル抗血清である。
クローナル抗血清である。
【０００２】 背景技術 細菌、真菌、ウイルスおよび寄生虫によって引き起こされる感染性疾病の治療
は、主に化学療法に基づいている。しかし、薬剤耐性生物の発生は、新たな抗生
物質の継続的開発が要求される。同時に、感染の制御は、新たな病原体の発生に
よって脅されている。栄養失調、ＡＩＤＳ、癌の医療的治療、自己免疫疾病およ
び臓器移植により増加する免疫無防備状態の個体の数は、抗生物質療法の効力を
減少させ、感染を制御する困難さを増大させる。
は、主に化学療法に基づいている。しかし、薬剤耐性生物の発生は、新たな抗生
物質の継続的開発が要求される。同時に、感染の制御は、新たな病原体の発生に
よって脅されている。栄養失調、ＡＩＤＳ、癌の医療的治療、自己免疫疾病およ
び臓器移植により増加する免疫無防備状態の個体の数は、抗生物質療法の効力を
減少させ、感染を制御する困難さを増大させる。
【０００３】 悪性疾患および癌に罹った患者の治療もまた、化学療法に基づいている。しか
し、これらの治療の多くは、効力がなく、疾病に罹った患者の死亡率は高い。モ
ノクローナル抗体技術での利点は、モノクローナル抗体の免疫原性およびそれら
の効力の欠如のため、ほとんど改善を供しなかった。モノクローナル抗体療法を
受けている患者における抗イデオタイプ抗体反応は、抗体治療の効果を無くさせ
得る。
し、これらの治療の多くは、効力がなく、疾病に罹った患者の死亡率は高い。モ
ノクローナル抗体技術での利点は、モノクローナル抗体の免疫原性およびそれら
の効力の欠如のため、ほとんど改善を供しなかった。モノクローナル抗体療法を
受けている患者における抗イデオタイプ抗体反応は、抗体治療の効果を無くさせ
得る。
【０００４】 移殖臓器のステロイド耐性拒絶の治療は、移殖受容者での進行中のアロ免疫反
応を逆行する生物学上の試薬（モノクローナルまたはポリクローナル抗体製品）
の使用を必要とする。しかし、抗体製品の免疫原性は、そのような治療の効果を
なくさせ、そして拒絶が逆行することを防止させ得る。結果として、移殖臓器は
、拒絶される可能性がある。同様に、自己免疫疾病患者の抗体療法は、抗体製品
の免疫原性により成功が限定されたものである。抗体のヒト化は、免疫原性を減
少させる一方で、このような抗体の有効性は、抗イデオタイプ抗体反応、および
モノクローナル抗体の効力の欠如によって限定される。免疫反応を調節するため
の非免疫原性で強力な試薬が、開発されなければならない。
応を逆行する生物学上の試薬（モノクローナルまたはポリクローナル抗体製品）
の使用を必要とする。しかし、抗体製品の免疫原性は、そのような治療の効果を
なくさせ、そして拒絶が逆行することを防止させ得る。結果として、移殖臓器は
、拒絶される可能性がある。同様に、自己免疫疾病患者の抗体療法は、抗体製品
の免疫原性により成功が限定されたものである。抗体のヒト化は、免疫原性を減
少させる一方で、このような抗体の有効性は、抗イデオタイプ抗体反応、および
モノクローナル抗体の効力の欠如によって限定される。免疫反応を調節するため
の非免疫原性で強力な試薬が、開発されなければならない。
【０００５】 感染性疾病の治療のためのポリクローナル抗体療法は、前世紀の終わりに導入
された。１９３０年代まで、血清療法は、結核、髄膜炎、猩紅熱、百日咳、炭疽
、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、ブルセラ症、赤痢、野兎病、ジフテリア、麻
疹、ポリオ流行性耳下腺炎、および水痘を含めた細菌性およびウイルス性感染の
治療のために使用された。しかし、動物血清の全身性投与は、発熱、悪寒、およ
びアレルギー反応を引き起こした。血清の病気は、治療された個人の１０〜５０
％で起こった。
された。１９３０年代まで、血清療法は、結核、髄膜炎、猩紅熱、百日咳、炭疽
、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、ブルセラ症、赤痢、野兎病、ジフテリア、麻
疹、ポリオ流行性耳下腺炎、および水痘を含めた細菌性およびウイルス性感染の
治療のために使用された。しかし、動物血清の全身性投与は、発熱、悪寒、およ
びアレルギー反応を引き起こした。血清の病気は、治療された個人の１０〜５０
％で起こった。
【０００６】 多様な適応症の治療で抗体を使用することの効力は、非常に高い。標的実体に
特異的に結合する能力は、実体を結合し、そして破壊する多様な機会を提供する
。しかし、上に示されるとおり、異種およびヒト化抗体を使用することに対する
多くの障害があった。モノクローナル抗体の限定は、減少された親和性の付加的
な障害を加える。したがって、感染性疾患および悪性疾患に対する保護、または
移殖受容者および自己免疫疾病の患者の免疫調節を提供する代替の薬剤使用法を
見出す緊急の必要がある。
特異的に結合する能力は、実体を結合し、そして破壊する多様な機会を提供する
。しかし、上に示されるとおり、異種およびヒト化抗体を使用することに対する
多くの障害があった。モノクローナル抗体の限定は、減少された親和性の付加的
な障害を加える。したがって、感染性疾患および悪性疾患に対する保護、または
移殖受容者および自己免疫疾病の患者の免疫調節を提供する代替の薬剤使用法を
見出す緊急の必要がある。
【０００７】 関連の文献 感染性疾病における抗体基本の療法は、最近、Ａ．Ｃａｓａｄｅｖａｌｌおよ
びＭ．Ｄ．Ｓｃｈａｒｆｆ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓ
ｅａｓｅｓ １５０−１６１頁；１９９５年によって再検討された。
びＭ．Ｄ．Ｓｃｈａｒｆｆ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓ
ｅａｓｅｓ １５０−１６１頁；１９９５年によって再検討された。
【０００８】 癌および悪性疾患の治療のための抗体の使用は、Ｃ．Ｂｏｔｔｉ、Ａ．Ｍａｒ
ｉｎｅｔｔｉ、Ｓ．Ｎｅｒｉｎｉ−Ｍｏｌｔｅｎｉ、およびＬ Ｆｅｒｒａｒｉ
、Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｒｋｅｒｓ １２（４）巻：１４１−１４７頁、
１９９７年；Ｄ．Ｒ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ａ．Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ、Ｃ．
ＶａｒｎｓおよびＫ．Ｓ．Ｃｈｅｍｂｅｒｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａ
ｎｓ ２５（２）巻：７０５−７０８頁、１９９７年；Ｃ．Ｒｅｎｎｅｒ、Ｌ．
ＴｒｕｍｐｅｒおよびＭ．Ｐｆｒｅｕｎｄｓｃｈｕｈ、Ｌｅｕｋｅｍｉａ １１
巻補追２：Ｓ５５−５９頁、１９９７年；Ｂ．Ｂｏｄｅｙ、Ｓ．Ｅ．Ｓｉｅｇｅ
ｌおよびＨ．Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６（２）巻
：６６１−６７４頁、１９９６年によって、最近、再検討された。
ｉｎｅｔｔｉ、Ｓ．Ｎｅｒｉｎｉ−Ｍｏｌｔｅｎｉ、およびＬ Ｆｅｒｒａｒｉ
、Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｒｋｅｒｓ １２（４）巻：１４１−１４７頁、
１９９７年；Ｄ．Ｒ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ａ．Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ、Ｃ．
ＶａｒｎｓおよびＫ．Ｓ．Ｃｈｅｍｂｅｒｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａ
ｎｓ ２５（２）巻：７０５−７０８頁、１９９７年；Ｃ．Ｒｅｎｎｅｒ、Ｌ．
ＴｒｕｍｐｅｒおよびＭ．Ｐｆｒｅｕｎｄｓｃｈｕｈ、Ｌｅｕｋｅｍｉａ １１
巻補追２：Ｓ５５−５９頁、１９９７年；Ｂ．Ｂｏｄｅｙ、Ｓ．Ｅ．Ｓｉｅｇｅ
ｌおよびＨ．Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６（２）巻
：６６１−６７４頁、１９９６年によって、最近、再検討された。
【０００９】 移殖拒絶の治療のためにポリクローナル抗体製品を使用は、Ｎ．Ｂｏｎｎｅｆ
ｏｙ−ＢｅｒａｒｄおよびＪ．Ｐ．Ｒｅｖｉｌｌａｒｄ、Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕ
ｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５（５）巻：４３５−４４２頁、１９９６年；
Ｃ．Ｃｏｌｂｙ、Ｃ．Ａ．ＳｔｏｕｋｉｄｅｓおよびＴ．Ｒ．Ｓｐｉｔｚｅｒ、
Ａｎｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ３０（１０）巻：１１６４５−１１７４頁
、１９９６年；Ｍ．Ｊ．Ｄｕｇａｎ、Ｔ．Ｅ．ＤｅＦｏｒ、Ｍ．Ｓｔｅｉｎｂｕ
ｃｈおよびＡ．Ｈ．Ｆｉｌｉｐｏｖｉｃｈ、Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ７５（１
−２）巻：４１−４６頁、１９９７年によって、最近、再検討された。
ｏｙ−ＢｅｒａｒｄおよびＪ．Ｐ．Ｒｅｖｉｌｌａｒｄ、Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕ
ｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５（５）巻：４３５−４４２頁、１９９６年；
Ｃ．Ｃｏｌｂｙ、Ｃ．Ａ．ＳｔｏｕｋｉｄｅｓおよびＴ．Ｒ．Ｓｐｉｔｚｅｒ、
Ａｎｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ３０（１０）巻：１１６４５−１１７４頁
、１９９６年；Ｍ．Ｊ．Ｄｕｇａｎ、Ｔ．Ｅ．ＤｅＦｏｒ、Ｍ．Ｓｔｅｉｎｂｕ
ｃｈおよびＡ．Ｈ．Ｆｉｌｉｐｏｖｉｃｈ、Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ７５（１
−２）巻：４１−４６頁、１９９７年によって、最近、再検討された。
【００１０】 自己免疫性疾病のためにポリクローナル抗体療法を使用は、Ｗ．Ｃｅｎｄｒｏ
ｗｓｋｉ、Ｂｏｌｌ Ｉｓｔ Ｓｉｅｒｏｔｅｒ Ｍｉｌａｎ ５８（４）巻：
３３９−３４３頁、１９９７年；Ｌ．Ｋ．Ｋａｓｔｒｕｋｏｆｆ、Ｄ．Ｒ．Ｍｃ
ＬｅａｎおよびＴ．Ａ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｃａｎ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃ
ｉ ５（２）巻：１７５−１７８頁、１９７８年；Ｊ．Ｅ．Ｗａｌｋｅｒ、Ｍ．
Ｍ ＨｏｅｈｎおよびＮ．Ｋａｓｈｉｗａｇｉ、Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ ２
９（２−４）巻：３０３−３０９頁、１９７６年によって記述された。
ｗｓｋｉ、Ｂｏｌｌ Ｉｓｔ Ｓｉｅｒｏｔｅｒ Ｍｉｌａｎ ５８（４）巻：
３３９−３４３頁、１９９７年；Ｌ．Ｋ．Ｋａｓｔｒｕｋｏｆｆ、Ｄ．Ｒ．Ｍｃ
ＬｅａｎおよびＴ．Ａ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｃａｎ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃ
ｉ ５（２）巻：１７５−１７８頁、１９７８年；Ｊ．Ｅ．Ｗａｌｋｅｒ、Ｍ．
Ｍ ＨｏｅｈｎおよびＮ．Ｋａｓｈｉｗａｇｉ、Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ ２
９（２−４）巻：３０３−３０９頁、１９７６年によって記述された。
【００１１】 抗体製品を使用する脂肪細胞の消耗は、Ｌ．Ｄｅ Ｃｌｅｒｃｑ、Ｊ．Ｍｏｕ
ｒｏｔ、Ｃ．Ｇｅｎａｒｔ、Ｖ．ＤａｖｉｄｔｓおよびＣ．Ｂｏｏｎｅ、Ｊ．Ａ
ｎｉｍ Ｓｃｉ ７５（７）巻：１７９１−１７９７頁、１９９７年；Ｊ．Ｔ．
ＷｒｉｇｈｔおよびＧ．Ｊ．Ｈａｕｓｍａｎ、Ｏｂｅｓ Ｒｅｓ ３（３）巻：
２６５−２７２頁、１９９５年によって記述された。
ｒｏｔ、Ｃ．Ｇｅｎａｒｔ、Ｖ．ＤａｖｉｄｔｓおよびＣ．Ｂｏｏｎｅ、Ｊ．Ａ
ｎｉｍ Ｓｃｉ ７５（７）巻：１７９１−１７９７頁、１９９７年；Ｊ．Ｔ．
ＷｒｉｇｈｔおよびＧ．Ｊ．Ｈａｕｓｍａｎ、Ｏｂｅｓ Ｒｅｓ ３（３）巻：
２６５−２７２頁、１９９５年によって記述された。
【００１２】 細胞から動物をクローニングすることは、Ｔ．Ｗａｋａｙａｍａ、Ａ．Ｃ．Ｆ
．Ｐｅｒｒｙ、Ｍ．Ｚｕｃｃｏｔｔｉ、Ｋ．Ｒ．ＪｏｈｎｓｏｎおよびＲ．Ｙａ
ｎａｇａｃｈｉ、Ｎａｔｕｒｅ ３９４巻：３６９−３７４頁、１９９８年；Ｊ
．Ｂ．Ｃｉｂｅｌｌｉ、Ｓ．Ｌ．Ｓｔｉｃｅ、Ｐ．Ｊ．Ｇｏｌｕｅｋｅ、Ｊ．Ｊ
．Ｋａｎｅ、Ｊ．Ｊｅｒｒｙ、Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、Ａ．Ｐｏｎｃｅ ｄｅ
ＬｅｏｎおよびＪ．Ｍ．Ｒｏｂｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８０巻：１２５６−１
２５８頁、１９９８年；Ｊ．Ｂ．Ｃｉｂｅｌｌｉ、Ｓ．Ｌ．Ｓｔｉｃｅ、Ｐ．Ｊ
．Ｇｏｌｕｅｋｅ、Ｊ．Ｋ．Ｋａｎｅ、Ｊ．Ｊｅｒｒｙ、Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌ、Ｆ．Ａｂｅｌ ｄｅ ＬｅｏｎおよびＪ．Ｒｏｂｌ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６巻：６４２−６４６頁、１９９８年；Ａ．Ｅ．Ｓｃ
ｈｎｉｅｋｅ、Ａ．Ｊ．Ｋｉｎｄ、Ｗ．Ａ．Ｒｉｔｃｈｉｅ、Ｋ．Ｍｙｃｏｃｋ
、Ａ．Ｒ．Ｓｃｏｔｔ、Ｍ．Ｒｉｔｃｈｉｅ、Ｉ．Ｗｉｌｍｕｔ、Ａ．Ｃｏｌｍ
ａｎ ＡおよびＫ．Ｈ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８（５３４６
）巻：２１３０−２１３３頁、１９９７年；Ｋ．Ｈ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｊ．Ｍ
ｃＷｈｉｒ、Ｗ．Ａ．ＲｉｔｃｈｉｅおよびＩ．Ｗｉｌｍｕｔ、Ｎａｔｕｒｅ
３８０（６５６９）巻：６４−６６頁、１９９６年によって記述されている。
．Ｐｅｒｒｙ、Ｍ．Ｚｕｃｃｏｔｔｉ、Ｋ．Ｒ．ＪｏｈｎｓｏｎおよびＲ．Ｙａ
ｎａｇａｃｈｉ、Ｎａｔｕｒｅ ３９４巻：３６９−３７４頁、１９９８年；Ｊ
．Ｂ．Ｃｉｂｅｌｌｉ、Ｓ．Ｌ．Ｓｔｉｃｅ、Ｐ．Ｊ．Ｇｏｌｕｅｋｅ、Ｊ．Ｊ
．Ｋａｎｅ、Ｊ．Ｊｅｒｒｙ、Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、Ａ．Ｐｏｎｃｅ ｄｅ
ＬｅｏｎおよびＪ．Ｍ．Ｒｏｂｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８０巻：１２５６−１
２５８頁、１９９８年；Ｊ．Ｂ．Ｃｉｂｅｌｌｉ、Ｓ．Ｌ．Ｓｔｉｃｅ、Ｐ．Ｊ
．Ｇｏｌｕｅｋｅ、Ｊ．Ｋ．Ｋａｎｅ、Ｊ．Ｊｅｒｒｙ、Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌ、Ｆ．Ａｂｅｌ ｄｅ ＬｅｏｎおよびＪ．Ｒｏｂｌ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６巻：６４２−６４６頁、１９９８年；Ａ．Ｅ．Ｓｃ
ｈｎｉｅｋｅ、Ａ．Ｊ．Ｋｉｎｄ、Ｗ．Ａ．Ｒｉｔｃｈｉｅ、Ｋ．Ｍｙｃｏｃｋ
、Ａ．Ｒ．Ｓｃｏｔｔ、Ｍ．Ｒｉｔｃｈｉｅ、Ｉ．Ｗｉｌｍｕｔ、Ａ．Ｃｏｌｍ
ａｎ ＡおよびＫ．Ｈ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８（５３４６
）巻：２１３０−２１３３頁、１９９７年；Ｋ．Ｈ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｊ．Ｍ
ｃＷｈｉｒ、Ｗ．Ａ．ＲｉｔｃｈｉｅおよびＩ．Ｗｉｌｍｕｔ、Ｎａｔｕｒｅ
３８０（６５６９）巻：６４−６６頁、１９９６年によって記述されている。
【００１３】 トランスジェニック動物からの抗体の生成は、米国特許番号第５，８１４，３
１８頁；第５，５４５，８０７頁；および第５，５７０，４２９頁に記述されて
いる。キメラの哺乳類宿主についての相同的組換えは、米国特許番号第５，４１
６，２６０号に例示される。胚にＤＮＡを導入する方法は、米国特許番号第５，
５６７，６０７号に記述される。胚の幹細胞の維持および拡張は、米国特許番号
第５，４５３，３５７号に記述されている。
１８頁；第５，５４５，８０７頁；および第５，５７０，４２９頁に記述されて
いる。キメラの哺乳類宿主についての相同的組換えは、米国特許番号第５，４１
６，２６０号に例示される。胚にＤＮＡを導入する方法は、米国特許番号第５，
５６７，６０７号に記述される。胚の幹細胞の維持および拡張は、米国特許番号
第５，４５３，３５７号に記述されている。
【００１４】 発明の要約 遺伝的に改変された軽および重鎖免疫グロブリン遺伝子座および少なくともヒ
ト軽および重鎖免疫グロブリン遺伝子座の一部を含むトランスジェニック家畜が
、供給されることを特徴とする、特異的抗原に対する実質的にヒトポリクローナ
ル抗血清の産生の方法が提供される。前記方法は、抗体レパートリーが、遺伝子
変換によって優先的に多様化される家畜（例えば、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ
）の段階的修飾を使用する。前記方法は、対応のヒト等価物との免疫グロブリン
遺伝子座の内因性要素の相同的組換えによる置換、特に、重および軽鎖の定常領
域、およびＤ領域の遺伝子座に近傍のものを含めた１種または数種の可変部要素
をコードする１種または数種のエキソンの置換に関与する。抗体多様性が、遺伝
子変換によって優先的に発生される動物では、ヒトＶ領域要素に、主にＤ領域に
近傍のＶ領域を置換することは、免疫グロブリンの大半でのヒトＶ要素の発現を
生じる。この遺伝子操作に続いて、同じ種の宿主を交配し、そして宿主グリコシ
ル化を用いた実質的にヒトの抗血清の産生で免疫化に応答する能力のある宿主に
ついて選択し、免疫グロブリンは、ヒト重鎖の少なくとも機能的部分を有する。
実質的にヒトのタンパク質配列免疫グロブリンを発現する動物を、目的の免疫原
、特に、治療活性を示す抗体産生を開始させる免疫原との免疫化によるポリクロ
ーナル抗体製品の生成のために使用する。抗血清の精製後、このような抗血清を
、それ自身または、感染性試薬、悪性細胞、癌、歓迎されない標的細胞または免
疫調節の消耗のための他の試薬との組み合わせで使用し得る。
ト軽および重鎖免疫グロブリン遺伝子座の一部を含むトランスジェニック家畜が
、供給されることを特徴とする、特異的抗原に対する実質的にヒトポリクローナ
ル抗血清の産生の方法が提供される。前記方法は、抗体レパートリーが、遺伝子
変換によって優先的に多様化される家畜（例えば、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ
）の段階的修飾を使用する。前記方法は、対応のヒト等価物との免疫グロブリン
遺伝子座の内因性要素の相同的組換えによる置換、特に、重および軽鎖の定常領
域、およびＤ領域の遺伝子座に近傍のものを含めた１種または数種の可変部要素
をコードする１種または数種のエキソンの置換に関与する。抗体多様性が、遺伝
子変換によって優先的に発生される動物では、ヒトＶ領域要素に、主にＤ領域に
近傍のＶ領域を置換することは、免疫グロブリンの大半でのヒトＶ要素の発現を
生じる。この遺伝子操作に続いて、同じ種の宿主を交配し、そして宿主グリコシ
ル化を用いた実質的にヒトの抗血清の産生で免疫化に応答する能力のある宿主に
ついて選択し、免疫グロブリンは、ヒト重鎖の少なくとも機能的部分を有する。
実質的にヒトのタンパク質配列免疫グロブリンを発現する動物を、目的の免疫原
、特に、治療活性を示す抗体産生を開始させる免疫原との免疫化によるポリクロ
ーナル抗体製品の生成のために使用する。抗血清の精製後、このような抗血清を
、それ自身または、感染性試薬、悪性細胞、癌、歓迎されない標的細胞または免
疫調節の消耗のための他の試薬との組み合わせで使用し得る。
【００１５】 特定の実施形態の説明 宿主を免疫原で免疫化させることによって、異種宿主中で実質的にヒトの抗血
清を生成する方法が提供される。宿主は、内因性抗血清を産生する能力が少なく
とも実質的になく、免疫原物質に露出することにより実質的にヒトのポリペプチ
ド抗血清を優先的に産生する能力のあること；免疫グロブリン遺伝子座を転位し
、Ｖ、（ＤＨ）、ＪおよびＣ領域を組換えて、実質的にヒトのタンパク質抗血清
を産生させるそれの能力を保持することによって特徴づけられ、少なくとも１つ
のヒト免疫グロブリン定常領域および／または少なくとも１つのヒト可変（Ｖ）
部要素を含む。特に目的であるのは、Ｃγサブクラス１、２、３および４のいず
れかを含めたＣαまたはＣγのサブクラスの定常領域である。ヒト定常領域およ
び可変部をコードするＤＮＡ断片は、対応する内因性要素の相同的組換えおよび
置換によって、ゲノムに組込まれる。
清を生成する方法が提供される。宿主は、内因性抗血清を産生する能力が少なく
とも実質的になく、免疫原物質に露出することにより実質的にヒトのポリペプチ
ド抗血清を優先的に産生する能力のあること；免疫グロブリン遺伝子座を転位し
、Ｖ、（ＤＨ）、ＪおよびＣ領域を組換えて、実質的にヒトのタンパク質抗血清
を産生させるそれの能力を保持することによって特徴づけられ、少なくとも１つ
のヒト免疫グロブリン定常領域および／または少なくとも１つのヒト可変（Ｖ）
部要素を含む。特に目的であるのは、Ｃγサブクラス１、２、３および４のいず
れかを含めたＣαまたはＣγのサブクラスの定常領域である。ヒト定常領域およ
び可変部をコードするＤＮＡ断片は、対応する内因性要素の相同的組換えおよび
置換によって、ゲノムに組込まれる。
【００１６】 種々な動物、特に適度な量の抗血清を供給できる家畜が、使用され得る。動物
は、一般に、少なくとも１ｋｇ、好ましくは２ｋｇであり、そして小型の動物は
、適切であるとして使用できるが、成体の場合、５ｋｇまたはそれ以上であって
よい。さらに、妊娠期間は、１２ヶ月未満、通常、１から４ヶ月の範囲にあるベ
きである。例示の動物は、ウサギ目、例えば、ネズミを除いた、ウサギ、ヒツジ
、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ等が挙げられる。特に目的であるものは、抗体レパー
トリーの多様性が、遺伝子変換によって優先的に達成される動物（すなわち、ウ
サギ、ブタ、ヒツジ、ウシ）である。これらの動物の中で、Ｄ領域に近傍のＶ領
域要素の、ヒトＶ領域要素への置換は、大半の免疫グロブリンでのヒトＶ領域要
素の発現を生じる。主題の発明の説明された遺伝子操作のアプローチ法は、マウ
スで行われた他のアプローチ法より実質的に早い。しかし、マウスでは、抗体レ
パートリーの多様化は、遺伝子転位によって優先的に達成される。
は、一般に、少なくとも１ｋｇ、好ましくは２ｋｇであり、そして小型の動物は
、適切であるとして使用できるが、成体の場合、５ｋｇまたはそれ以上であって
よい。さらに、妊娠期間は、１２ヶ月未満、通常、１から４ヶ月の範囲にあるベ
きである。例示の動物は、ウサギ目、例えば、ネズミを除いた、ウサギ、ヒツジ
、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ等が挙げられる。特に目的であるものは、抗体レパー
トリーの多様性が、遺伝子変換によって優先的に達成される動物（すなわち、ウ
サギ、ブタ、ヒツジ、ウシ）である。これらの動物の中で、Ｄ領域に近傍のＶ領
域要素の、ヒトＶ領域要素への置換は、大半の免疫グロブリンでのヒトＶ領域要
素の発現を生じる。主題の発明の説明された遺伝子操作のアプローチ法は、マウ
スで行われた他のアプローチ法より実質的に早い。しかし、マウスでは、抗体レ
パートリーの多様化は、遺伝子転位によって優先的に達成される。
【００１７】 宿主細胞、例えば線維芽細胞、ケラチン細胞、ミオサイト、肝細胞、上皮細胞
、または培地で育成および拡張され得るが、転位ゲノムを有しない他の細胞は、
断片が宿主ゲノムに介入し始める細胞へのＤＮＡ断片の導入によって形質転換（
遺伝的に修飾）される。裸のＤＮＡ、ウイルス性ベクターでの形質移入、融合、
バイオリスティックス、リポソームなどを含めた種々の方法による導入がなされ
得る。特定の方法は、ＤＮＡの導入、および介入の効力の目的にしたがって選択
される。機能的免疫グロブリン軽および重鎖遺伝子座は、相同的組換えによって
、宿主重鎖定常領域の少なくとも一部を、ヒト重鎖定常領域の少なくとも機能性
部分に、そして所望の場合、類似に、宿主軽鎖定常領域を、ヒト軽鎖定常領域に
置換することによって修飾される。特に目的であるのは、Ｄ領域に最も近傍のＶ
領域を、ヒトＶ領域要素に置換することでもある。この方法では、免疫グロブリ
ンのある部分は、宿主配列である一方で、抗血清は、抗血清中の非常に多様な可
変部の観点で、強力な免疫応答を引き起こしそうにない。抗体多様性が、遺伝子
変換によって優先的に発生される動物では、Ｄ領域に最も近傍のＶ領域をヒトＶ
領域要素に置換することで、大半の免疫グロブリン中のヒトＶ要素の発現を生じ
る。定常領域の置換について、定常領域の３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２および
ＣＨ３の内の少なくとも約２を含むこと、特にＣＨ３を含むことは、特に目的の
ものである。その範囲まで、このような抗血清は、宿主で、特に免疫適合化宿主
で機能でき、このような抗血清を産生する宿主を保持する減少した数の段階は魅
力的である。
、または培地で育成および拡張され得るが、転位ゲノムを有しない他の細胞は、
断片が宿主ゲノムに介入し始める細胞へのＤＮＡ断片の導入によって形質転換（
遺伝的に修飾）される。裸のＤＮＡ、ウイルス性ベクターでの形質移入、融合、
バイオリスティックス、リポソームなどを含めた種々の方法による導入がなされ
得る。特定の方法は、ＤＮＡの導入、および介入の効力の目的にしたがって選択
される。機能的免疫グロブリン軽および重鎖遺伝子座は、相同的組換えによって
、宿主重鎖定常領域の少なくとも一部を、ヒト重鎖定常領域の少なくとも機能性
部分に、そして所望の場合、類似に、宿主軽鎖定常領域を、ヒト軽鎖定常領域に
置換することによって修飾される。特に目的であるのは、Ｄ領域に最も近傍のＶ
領域を、ヒトＶ領域要素に置換することでもある。この方法では、免疫グロブリ
ンのある部分は、宿主配列である一方で、抗血清は、抗血清中の非常に多様な可
変部の観点で、強力な免疫応答を引き起こしそうにない。抗体多様性が、遺伝子
変換によって優先的に発生される動物では、Ｄ領域に最も近傍のＶ領域をヒトＶ
領域要素に置換することで、大半の免疫グロブリン中のヒトＶ要素の発現を生じ
る。定常領域の置換について、定常領域の３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２および
ＣＨ３の内の少なくとも約２を含むこと、特にＣＨ３を含むことは、特に目的の
ものである。その範囲まで、このような抗血清は、宿主で、特に免疫適合化宿主
で機能でき、このような抗血清を産生する宿主を保持する減少した数の段階は魅
力的である。
【００１８】 予定された部位での組込みについて、配列中に、組込みのためのＤＮＡ断片、
および少なくとも約３０ｎｔの相同性配列によって境界線をなした第一のマーカ
ー遺伝子、および第二のマーカー遺伝子を含めた構築物が作製され、それにより
、相同性組込みで、第二のマーカー遺伝子の損失を生じる。負の選択を供する第
二のマーカー遺伝子を有することによって、第二のマーカー遺伝子を有する細胞
は、細胞混合物に対して選択され、それから除去される；正の選択を供する第一
のマーカー遺伝子を有することによって、第一のマーカー遺伝子を有する細胞は
、第二のマーカー遺伝子が感受性がある培地を使用することによって保持される
。この手段で、構築物が、任意に組込まれるような細胞は、減少される。第一の
マーカー遺伝子に感受性のある培地を用いることに続いて、第一のマーカー遺伝
子を保持しない細胞は、減少される。この方法で、残りの細胞は、相同的組換え
を有するものであるべきである。望ましくは、細胞は、非増殖状態よりむしろ、
迅速に増殖する状態にある。ＦＣＳおよび成長因子を補足したＲＰＭＩ１６４０
またはＤＭＥＭのような育成用培地を使用することによって、成長サイクルが誘
導され得る。
および少なくとも約３０ｎｔの相同性配列によって境界線をなした第一のマーカ
ー遺伝子、および第二のマーカー遺伝子を含めた構築物が作製され、それにより
、相同性組込みで、第二のマーカー遺伝子の損失を生じる。負の選択を供する第
二のマーカー遺伝子を有することによって、第二のマーカー遺伝子を有する細胞
は、細胞混合物に対して選択され、それから除去される；正の選択を供する第一
のマーカー遺伝子を有することによって、第一のマーカー遺伝子を有する細胞は
、第二のマーカー遺伝子が感受性がある培地を使用することによって保持される
。この手段で、構築物が、任意に組込まれるような細胞は、減少される。第一の
マーカー遺伝子に感受性のある培地を用いることに続いて、第一のマーカー遺伝
子を保持しない細胞は、減少される。この方法で、残りの細胞は、相同的組換え
を有するものであるべきである。望ましくは、細胞は、非増殖状態よりむしろ、
迅速に増殖する状態にある。ＦＣＳおよび成長因子を補足したＲＰＭＩ１６４０
またはＤＭＥＭのような育成用培地を使用することによって、成長サイクルが誘
導され得る。
【００１９】 細胞が、形質転換または形質移入された後、使用されたマーカー、通常、抗生
物質耐性またはｔｋ遺伝子による選択性培地に、細胞を入れる。その細胞を、培
養中に拡張し、その後クローン化する。その後、クローン中の個々の細胞を、所
望の遺伝的修飾についてスクリーニングし得る。都合よく、ＰＣＲは、所望の修
飾、消耗または組込みが起こったことを同定するために使用され得る。
物質耐性またはｔｋ遺伝子による選択性培地に、細胞を入れる。その細胞を、培
養中に拡張し、その後クローン化する。その後、クローン中の個々の細胞を、所
望の遺伝的修飾についてスクリーニングし得る。都合よく、ＰＣＲは、所望の修
飾、消耗または組込みが起こったことを同定するために使用され得る。
【００２０】 遺伝的修飾は、単独の修飾、または所望により、第一の修飾を示す細胞の拡張
後、細胞を、次に第二の修飾にかけ得る。例えば、重鎖定常領域を置換した後、
軽鎖定常領域を置換し得る。
後、細胞を、次に第二の修飾にかけ得る。例えば、重鎖定常領域を置換した後、
軽鎖定常領域を置換し得る。
【００２１】 個々の修飾が生じるとき、正の選択のための単独のマーカーを使用し、そして
反復して同じマーカーを使用し得る。同じ細胞に対する２つまたはそれ以上の修
飾が、発生されるとき、様々な正の選択マーカーは、独立に各段階で選択するた
めに、使用されるべきである。すでに示されるとおり、膨大な抗生物質耐性遺伝
子があり、そしてその遺伝子は、組合せて使用でき、それにより各段階での選択
に対処する。選択のために有用な遺伝子は、ｎｅｏ、ｔｅｔ、ｃａｍ、ｔｋ、ｐ
ｅｎ、ｍｔｘなどが挙げられる。宿主細胞が修飾され、そして所望の修飾を有す
ることが示された後、その後、細胞は、除核された核移殖単位細胞、例えば卵母
細胞または胚の幹細胞、機能性新生仔を形成する全能性および能力のある細胞と
融合させ得る。十分に樹立された従来の技術によって、融合は行われる。例えば
、Ｃｉｂｅｌｌｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８年）２８０巻：１２５６頁参照
。代替的には、卵母細胞の除核および核移殖は、注入ピペットを使用した微細手
術によって行われ得る。（例えば、Ｗａｋａｙａｍａら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９
８年）３９４巻：３６９頁参照）。その後、生じた機能性卵細胞は、適切な培地
で培養され、そして同調した受容体に移殖される。
反復して同じマーカーを使用し得る。同じ細胞に対する２つまたはそれ以上の修
飾が、発生されるとき、様々な正の選択マーカーは、独立に各段階で選択するた
めに、使用されるべきである。すでに示されるとおり、膨大な抗生物質耐性遺伝
子があり、そしてその遺伝子は、組合せて使用でき、それにより各段階での選択
に対処する。選択のために有用な遺伝子は、ｎｅｏ、ｔｅｔ、ｃａｍ、ｔｋ、ｐ
ｅｎ、ｍｔｘなどが挙げられる。宿主細胞が修飾され、そして所望の修飾を有す
ることが示された後、その後、細胞は、除核された核移殖単位細胞、例えば卵母
細胞または胚の幹細胞、機能性新生仔を形成する全能性および能力のある細胞と
融合させ得る。十分に樹立された従来の技術によって、融合は行われる。例えば
、Ｃｉｂｅｌｌｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８年）２８０巻：１２５６頁参照
。代替的には、卵母細胞の除核および核移殖は、注入ピペットを使用した微細手
術によって行われ得る。（例えば、Ｗａｋａｙａｍａら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９
８年）３９４巻：３６９頁参照）。その後、生じた機能性卵細胞は、適切な培地
で培養され、そして同調した受容体に移殖される。
【００２２】 核移殖単位細胞を生成する別の方法は、ヒト移入遺伝子を含むＤＮＡ構築物を
、受精卵に導入することである。その後、卵を、胚の幹細胞を提供するために拡
張し、そしてそれを、所望の遺伝的修飾についてスクリーニングし、そして続い
て、卵を終末に至らせる育成母親に胚を移殖し、そして生じた新生仔を、修飾ゲ
ノタイプについてスクリーニングする。
、受精卵に導入することである。その後、卵を、胚の幹細胞を提供するために拡
張し、そしてそれを、所望の遺伝的修飾についてスクリーニングし、そして続い
て、卵を終末に至らせる育成母親に胚を移殖し、そして生じた新生仔を、修飾ゲ
ノタイプについてスクリーニングする。
【００２３】 その後、生じた突然変異宿主は、他の突然変異宿主と交配させるために使用し
得る。例えば、改変した重鎖免疫グロブリン遺伝子座を有する宿主を、改変した
軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を有する宿主と交配させて、実質的にヒトのポリペ
プチド免疫グロブリンを産生する能力のある宿主を交配し得る。その後、２つの
突然変異遺伝子を含有する半接合姉妹細胞を交配させて、同型接合姉妹細胞を生
じさせる。同型接合性は、歓迎されない遺伝子配列の不在によって容易に決定さ
れ得る。各交配の後、宿主を、その細胞、特に生殖細胞中の遺伝的修飾の存在に
ついて分析し、そして通常３世代より多くない別の世代に交配させて、修飾が、
継代世代を通して安定に維持されることを確実にし得る。種々の子孫のゲノムを
、遺伝的修飾の維持について分析し得るか、または適切な場合、子孫を、遺伝的
修飾が発生した生物学的変化について分析し得る。
得る。例えば、改変した重鎖免疫グロブリン遺伝子座を有する宿主を、改変した
軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を有する宿主と交配させて、実質的にヒトのポリペ
プチド免疫グロブリンを産生する能力のある宿主を交配し得る。その後、２つの
突然変異遺伝子を含有する半接合姉妹細胞を交配させて、同型接合姉妹細胞を生
じさせる。同型接合性は、歓迎されない遺伝子配列の不在によって容易に決定さ
れ得る。各交配の後、宿主を、その細胞、特に生殖細胞中の遺伝的修飾の存在に
ついて分析し、そして通常３世代より多くない別の世代に交配させて、修飾が、
継代世代を通して安定に維持されることを確実にし得る。種々の子孫のゲノムを
、遺伝的修飾の維持について分析し得るか、または適切な場合、子孫を、遺伝的
修飾が発生した生物学的変化について分析し得る。
【００２４】 いったん宿主が発生されると、宿主は、ここで、使用されて、種々の条件下で
抗血清を生成し得る。抗血清の使用によって、抗原、抗原に共有結合で結合した
ハプテンを含む免疫原、生物、例えばウイルスおよび単細胞生物、生の、弱毒化
した、または死滅した生物の断片、オルガネラ、細胞、特に、ヒト細胞または細
胞の断片等が使用し得る。このように、抗血清を、抗原、小さな有機分子または
種々の実体が、ヒト宿主に対して内因性または外因性であり得る細胞に向け得る
。その免疫化組成物を、任意の従来の手段で、アジュバントと共に、またはなし
に投与しでき、そして予め決定された日程にしたがって投与され得る。その後、
免疫化組成物についての親和性が、監視でき、そしてその抗血清が、所望の特異
性および親和性を示すときに収集される。抗血清の親和性は、少なくとも約１０ −７ 、通常少なくとも約１０−８、好ましくは少なくとも約１０−９、またはそ
れ以上である。
抗血清を生成し得る。抗血清の使用によって、抗原、抗原に共有結合で結合した
ハプテンを含む免疫原、生物、例えばウイルスおよび単細胞生物、生の、弱毒化
した、または死滅した生物の断片、オルガネラ、細胞、特に、ヒト細胞または細
胞の断片等が使用し得る。このように、抗血清を、抗原、小さな有機分子または
種々の実体が、ヒト宿主に対して内因性または外因性であり得る細胞に向け得る
。その免疫化組成物を、任意の従来の手段で、アジュバントと共に、またはなし
に投与しでき、そして予め決定された日程にしたがって投与され得る。その後、
免疫化組成物についての親和性が、監視でき、そしてその抗血清が、所望の特異
性および親和性を示すときに収集される。抗血清の親和性は、少なくとも約１０ −７ 、通常少なくとも約１０−８、好ましくは少なくとも約１０−９、またはそ
れ以上である。
【００２５】 ある種の用途については、Ｄ領域に近傍のＶ要素が種々のヒトＶ領域要素に置
換された宿主を使用し得る。この方法で、同じ免疫原に対する様々な免疫応答は
、可変部配列が遺伝子変換の結果であり得る様々な宿主から得られ、そしてそれ
により様々の対立遺伝子が提供される。様々な宿主から得られる抗血清を混合し
て、境界線のレパートリーの抗体を提供し得る。１０個までまたはそれ以上の異
なる宿主が、目的の抗原によって、使用され得る。
換された宿主を使用し得る。この方法で、同じ免疫原に対する様々な免疫応答は
、可変部配列が遺伝子変換の結果であり得る様々な宿主から得られ、そしてそれ
により様々の対立遺伝子が提供される。様々な宿主から得られる抗血清を混合し
て、境界線のレパートリーの抗体を提供し得る。１０個までまたはそれ以上の異
なる宿主が、目的の抗原によって、使用され得る。
【００２６】 抗体製品は、ヒト配列免疫グロブリンを発現する遺伝子操作した動物の血液を
分画することによって得られる。濃縮免疫グロブリン分画は、クロマトグラフィ
ー（親和性、イオン交換、ゲル濾過など）、硫酸アンモニウムのような塩、エタ
ノールのような有機溶媒、またはポリエチレングリコールのような高分子との選
択的沈降によって製造され得る。
分画することによって得られる。濃縮免疫グロブリン分画は、クロマトグラフィ
ー（親和性、イオン交換、ゲル濾過など）、硫酸アンモニウムのような塩、エタ
ノールのような有機溶媒、またはポリエチレングリコールのような高分子との選
択的沈降によって製造され得る。
【００２７】 分画した抗体は、ヒトでの静脈投与のために適切な非毒性で、非発熱物質の培
地、例えば滅菌平衡生理食塩水に溶解または希釈され得る。ある種の用途では、
抗体製品は、上皮に直接塗布され得る。このような用途のために、分画した抗体
は、ＫＹゼリー等のような水溶性ゲルに溶解させ得る。
地、例えば滅菌平衡生理食塩水に溶解または希釈され得る。ある種の用途では、
抗体製品は、上皮に直接塗布され得る。このような用途のために、分画した抗体
は、ＫＹゼリー等のような水溶性ゲルに溶解させ得る。
【００２８】 投与のために使用される抗体製品は、０．１から１００ｍｇ／ｍｌ、さらに通
常には１から１０ｍｇ／ｍｌまでの免疫グロブリン濃度を示すポリクローナル抗
体集団を含むことによって一般に特徴づけられる。抗体製品は、種々のイソタイ
プの免疫グロブリンを含有し得る。代替的には、抗体製品は、ただ１つのイソタ
イプ、または多数の選択イソタイプの抗体を含有できる。
常には１から１０ｍｇ／ｍｌまでの免疫グロブリン濃度を示すポリクローナル抗
体集団を含むことによって一般に特徴づけられる。抗体製品は、種々のイソタイ
プの免疫グロブリンを含有し得る。代替的には、抗体製品は、ただ１つのイソタ
イプ、または多数の選択イソタイプの抗体を含有できる。
【００２９】 ほとんどの例では、抗体製品は、未修飾免疫グロブリンから構成される。代替
的には、免疫グロブリン分画は、酵素的消化（例えば、ペプシン、パパイン、プ
ラスミン、グリコシダーゼ、ヌクレアーゼなどを用いた）、加熱などのような処
置にかけ、および／またはさらに分画し得る。
的には、免疫グロブリン分画は、酵素的消化（例えば、ペプシン、パパイン、プ
ラスミン、グリコシダーゼ、ヌクレアーゼなどを用いた）、加熱などのような処
置にかけ、および／またはさらに分画し得る。
【００３０】 抗体製品は、一般に、適切な静脈に埋められたカテーテルを介して注射または
輸液により都合よく静脈で導管系に投与される。抗体製品を、一般に約１０分か
ら約２４時間まで、さらに一般的には約３０分から約６時間までの範囲に入る適
切な速度で、液体が患者によって許容され得る速度によって投与する。有効な投
与量の投与は、単回注入、または一連の注入で起こり得る。反復注入は、抗体製
品の半減期および医療上の指示によって、一日一回、週一回、月一回、または三
ヶ月に一回投与され得る。上皮表面への塗布については、抗体製品を、治療の必
要な表面に、意図される最終結果を提供するのに十分な量で塗布し、そして必要
とされる場合、繰返され得る。
輸液により都合よく静脈で導管系に投与される。抗体製品を、一般に約１０分か
ら約２４時間まで、さらに一般的には約３０分から約６時間までの範囲に入る適
切な速度で、液体が患者によって許容され得る速度によって投与する。有効な投
与量の投与は、単回注入、または一連の注入で起こり得る。反復注入は、抗体製
品の半減期および医療上の指示によって、一日一回、週一回、月一回、または三
ヶ月に一回投与され得る。上皮表面への塗布については、抗体製品を、治療の必
要な表面に、意図される最終結果を提供するのに十分な量で塗布し、そして必要
とされる場合、繰返され得る。
【００３１】 その抗体製品は、疾病を引き起こすか、または所望でないか、または異常な免
疫応答を発揮するヒトの体組織中の抗原性実体を結合し、そして中性にするそれ
らの能力での用途を見出す。「抗原性実体」は、タンパク質、並びに、少なくと
も抗体に結合する能力があり、そして好ましくは免疫応答を刺激する能力もある
細胞または感染性疾病を引き起こす生物または剤を含めた任意の溶解性または細
胞表面結合分子を含むことがここに定義される。
疫応答を発揮するヒトの体組織中の抗原性実体を結合し、そして中性にするそれ
らの能力での用途を見出す。「抗原性実体」は、タンパク質、並びに、少なくと
も抗体に結合する能力があり、そして好ましくは免疫応答を刺激する能力もある
細胞または感染性疾病を引き起こす生物または剤を含めた任意の溶解性または細
胞表面結合分子を含むことがここに定義される。
【００３２】 単独療法、または化学療法との組合せとして感染性の剤に対する抗体製品の投
与で、感染性粒子の排除を生じる。抗体の単回投与は、一般に１０から１００倍
まで、より一般的には１０００倍以上、感染性粒子の数を減少させる。同様に、
単独療法または化学療法との組み合わせとして悪性疾病を有する患者での抗体療
法は、一般に１０から１００倍まで、または１０００倍以上、悪性細胞の数を減
少させる。療法は、拡張量の時間を越えて繰返されて、感染性粒子、悪性細胞な
どの完全な排除を保証し得る。ある種の例では、抗体製品を用いた療法は、検出
可能な量の感染性粒子または歓迎されない細胞の不在下で、拡張量の時間継続さ
れる。同様に、免疫応答の調節のための抗体療法の使用は、治療用抗体の単回ま
たは多重投与から構成され得る。療法は、任意の疾病症状の不在下で、拡張量の
時間継続され得る。
与で、感染性粒子の排除を生じる。抗体の単回投与は、一般に１０から１００倍
まで、より一般的には１０００倍以上、感染性粒子の数を減少させる。同様に、
単独療法または化学療法との組み合わせとして悪性疾病を有する患者での抗体療
法は、一般に１０から１００倍まで、または１０００倍以上、悪性細胞の数を減
少させる。療法は、拡張量の時間を越えて繰返されて、感染性粒子、悪性細胞な
どの完全な排除を保証し得る。ある種の例では、抗体製品を用いた療法は、検出
可能な量の感染性粒子または歓迎されない細胞の不在下で、拡張量の時間継続さ
れる。同様に、免疫応答の調節のための抗体療法の使用は、治療用抗体の単回ま
たは多重投与から構成され得る。療法は、任意の疾病症状の不在下で、拡張量の
時間継続され得る。
【００３３】 主題の治療は、感染性疾病または悪性疾患を阻害するのに十分な投与量で、化
学療法と共に使用され得る。自己免疫疾病の患者または移植受容者で、抗体療法
は、免疫反応を阻害するのに十分な投与量で免疫抑制療法と共に使用され得る。
学療法と共に使用され得る。自己免疫疾病の患者または移植受容者で、抗体療法
は、免疫反応を阻害するのに十分な投与量で免疫抑制療法と共に使用され得る。
【００３４】 以下の実施例は、例示として供与され、そして限定としてでない。
【００３５】 実験 実質的にヒトの免疫グロブリンを発現するトランスジェニック・ウサギの発生 ヒト定常領域要素および可変部要素をコードするエキソンは、相同的組換えに
よりウサギ線維芽細胞のゲノムに組込まれる。ウサギ線維芽細胞を、ヒト免疫グ
ロブリン遺伝子座要素を含む種々の線状ＤＮＡ構築物と形質移入させる。成功裏
に形質移入した細胞を選択し、そしてウサギのクローニングに使用する。
よりウサギ線維芽細胞のゲノムに組込まれる。ウサギ線維芽細胞を、ヒト免疫グ
ロブリン遺伝子座要素を含む種々の線状ＤＮＡ構築物と形質移入させる。成功裏
に形質移入した細胞を選択し、そしてウサギのクローニングに使用する。
【００３６】 ウサギのクローニング 成熟オランダ・ベルトンウサギを、毎１２時間（０．３ｍｇ×２および０．４
ｍｇ×４）に、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の皮下注射によって過剰排卵させる
。卵発生は、最後のＦＳＨ注射の１２時間後に、０．５ｍｇの黄体形成ホルモン
（ＬＨ）の静脈注射によって誘導される。卵母細胞は、ＬＨ注射の１７時間後の
卵管洗浄によって回収される。卵母細胞は、成熟の１６〜１９時間後に機械的に
除核される。染色体除去は、紫外線下で、ｂｉｓＢＥＮＳＩＭＩＤＥ（ホエスト
３３３４２、ミズーリー州セントルイスのシグマ）染料で評価する。
ｍｇ×４）に、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の皮下注射によって過剰排卵させる
。卵発生は、最後のＦＳＨ注射の１２時間後に、０．５ｍｇの黄体形成ホルモン
（ＬＨ）の静脈注射によって誘導される。卵母細胞は、ＬＨ注射の１７時間後の
卵管洗浄によって回収される。卵母細胞は、成熟の１６〜１９時間後に機械的に
除核される。染色体除去は、紫外線下で、ｂｉｓＢＥＮＳＩＭＩＤＥ（ホエスト
３３３４２、ミズーリー州セントルイスのシグマ）染料で評価する。
【００３７】 除核した卵母細胞を、１５ｕｓ（エレクロセル・マニュピュレーター２００、
カリフォルニア州サンディエゴのジェネトロニックス）について１８０Ｖ／ｃｍ
の１回の電気パルスを使用することによって、活発に分割する線維芽細胞と融合
させる。３〜５時間後、卵母細胞を、４分間、カルシウムイオノファー（６ｕＭ
）（番号４０７９５２、カリフォルニア州サンディエゴのカルビオケム）、およ
び３時間、３ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン（脂肪酸不含、シグマ）を用いて、
ＣＲ２培地（特に、ニュージャージー州ラバレットのメディア中の）２ｍＭの６
−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ、シグマ）で化学的に活性化させる。活性化
に続いて、胚を、ハムスター胚培養用培地（ＨＥＣＭ）−ヘペスで５回洗浄し、
そして順次、７日間、３７．８℃で、そして空気中５％ＣＯ２で、３ｍｇ／ｍｇ
ｌ脂肪酸不含ＢＳＡを含むＣＲ２培地で培養する。その後、胚を、同調させた受
容体に移殖させる。子孫を、ＰＣＲによって移入遺伝子のセグメントについて分
析する。
カリフォルニア州サンディエゴのジェネトロニックス）について１８０Ｖ／ｃｍ
の１回の電気パルスを使用することによって、活発に分割する線維芽細胞と融合
させる。３〜５時間後、卵母細胞を、４分間、カルシウムイオノファー（６ｕＭ
）（番号４０７９５２、カリフォルニア州サンディエゴのカルビオケム）、およ
び３時間、３ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン（脂肪酸不含、シグマ）を用いて、
ＣＲ２培地（特に、ニュージャージー州ラバレットのメディア中の）２ｍＭの６
−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ、シグマ）で化学的に活性化させる。活性化
に続いて、胚を、ハムスター胚培養用培地（ＨＥＣＭ）−ヘペスで５回洗浄し、
そして順次、７日間、３７．８℃で、そして空気中５％ＣＯ２で、３ｍｇ／ｍｇ
ｌ脂肪酸不含ＢＳＡを含むＣＲ２培地で培養する。その後、胚を、同調させた受
容体に移殖させる。子孫を、ＰＣＲによって移入遺伝子のセグメントについて分
析する。
【００３８】 ウサギで、Ｂ型肝炎表層抗原に対して発現されるヒト抗体の結合 遺伝子操作したウサギ（上に記述されるとおり）に、０日目および１４日目に
、精製Ｂ型肝炎表層抗原（ＨＢｓＡｇ）（不完全フロイントアジュバント中１０
μｇ）を筋肉内に免疫した。２８日目に、動物を、耳から出血させ、そして血清
を作成する。ＥＬＩＳＡプレート（ＮＵＮＣ、デンマーク）に、１時間、室温で
、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのＨＢｓＡｇを被覆させる。続いて、利用可能な結合
部位は、ＰＢＳ中１％非脂肪スキムミルク（ＮＦＭ）（３００μｌ／ウエル）で
のインキュベーションによって遮断される。ウサギ血清を、ＰＢＳ／１％ＮＦＭ
に希釈し、そして被覆ウエルに添加する。１時間のインキュベーションの後、プ
レートを、３回、ＰＢＳ／０．０５％ツイーン２０で洗浄し、そして結合Ｉｇを
、西洋ワサビペルオキシダーゼで接合させたヤギ抗ヒトＩｇを使用して検出する
。接合ヤギ抗体を、１ｍｇ／ｍｌでｏ−フェニレンジアミン・ジヒドロクロリド
（シグマ）を使用して検出する。比色反応を、１Ｍ ＨＣｌ溶液の添加によって
停止させ、そして吸光度を、４９０ｎｍで測定する。対照として、非免疫ウサギ
から得た血清を、使用する。非免疫ウサギから得た血清は、ＨＢｓＡｇと反応し
ない。１：１００の希釈で、未被覆およびＨＢｓＡｇ被覆ウエルで測定した光学
密度は、０．４未満である。対照的に、免疫ウサギから得た血清は、ＨＢｓＡｇ
と反応性のある実質的にヒトの抗体を含有する。１：１００の血清希釈で、測定
された光学密度は、２．８である。血清のさらなる希釈で、測定された光学密度
は、０．２に（２５６００の希釈で）減少する。ヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ接
合体と反応性のある抗体は、まったく検出されない。これは、遺伝子操作したウ
サギは、免疫化に続く実質的にヒトの抗−ＨＢｓＡｇ抗体を産生することを示す
。
、精製Ｂ型肝炎表層抗原（ＨＢｓＡｇ）（不完全フロイントアジュバント中１０
μｇ）を筋肉内に免疫した。２８日目に、動物を、耳から出血させ、そして血清
を作成する。ＥＬＩＳＡプレート（ＮＵＮＣ、デンマーク）に、１時間、室温で
、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのＨＢｓＡｇを被覆させる。続いて、利用可能な結合
部位は、ＰＢＳ中１％非脂肪スキムミルク（ＮＦＭ）（３００μｌ／ウエル）で
のインキュベーションによって遮断される。ウサギ血清を、ＰＢＳ／１％ＮＦＭ
に希釈し、そして被覆ウエルに添加する。１時間のインキュベーションの後、プ
レートを、３回、ＰＢＳ／０．０５％ツイーン２０で洗浄し、そして結合Ｉｇを
、西洋ワサビペルオキシダーゼで接合させたヤギ抗ヒトＩｇを使用して検出する
。接合ヤギ抗体を、１ｍｇ／ｍｌでｏ−フェニレンジアミン・ジヒドロクロリド
（シグマ）を使用して検出する。比色反応を、１Ｍ ＨＣｌ溶液の添加によって
停止させ、そして吸光度を、４９０ｎｍで測定する。対照として、非免疫ウサギ
から得た血清を、使用する。非免疫ウサギから得た血清は、ＨＢｓＡｇと反応し
ない。１：１００の希釈で、未被覆およびＨＢｓＡｇ被覆ウエルで測定した光学
密度は、０．４未満である。対照的に、免疫ウサギから得た血清は、ＨＢｓＡｇ
と反応性のある実質的にヒトの抗体を含有する。１：１００の血清希釈で、測定
された光学密度は、２．８である。血清のさらなる希釈で、測定された光学密度
は、０．２に（２５６００の希釈で）減少する。ヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ接
合体と反応性のある抗体は、まったく検出されない。これは、遺伝子操作したウ
サギは、免疫化に続く実質的にヒトの抗−ＨＢｓＡｇ抗体を産生することを示す
。
【００３９】 ヒト抗体を使用するウイルス感染セルラインの補体指向性細胞毒性 ＨＢｓＡｇを発現するヒト肝癌腫セルラインを、１時間、３７℃で、１００ｕ
ｌのＰＢＳ中の０．１ｍＣｉ５１Ｃｒで標識する。２千個の５１Ｃｒ標識細胞を
、抗−ＨＢｓＡｇ免疫グロブリンを発現する遺伝子操作したウサギから得た血清
（上記参照）とインキュベートする。３７℃で、２時間後、上清への５１Ｃｒの
放出は、シンチレーション測定装置を用いて放射活性を測定することによって測
定される。最大限の放出の測定のために、１％トリトン×１００を添加する。細
胞溶解の程度は、以下のとおり計算される： 溶解率（％）＝実験的ＣＰＭ±自発的ＣＰＭ数／ＣＰＭ総数±自発的ＣＰＭ。非
免疫化ウサギから得た血清（１：３０に希釈）との標識細胞のインキュベーショ
ンは、細胞溶解（＜１０％）を生じる。しかし、免疫化ウサギから得られる血清
を用いた細胞のインキュベーションは、８０％細胞溶解を引き起こす。加熱処理
（３０分間、５６℃）による血清中の補体の不活性化は、免疫化ウサギから得た
血清を不活性にさせる。これらの結果は、遺伝子操作したウサギによって産生さ
れる実質的にヒトの抗体は、ＨＢｓＡｇ陽性細胞に結合し、そして補体依存性溶
解を引き起こすことを示す。
ｌのＰＢＳ中の０．１ｍＣｉ５１Ｃｒで標識する。２千個の５１Ｃｒ標識細胞を
、抗−ＨＢｓＡｇ免疫グロブリンを発現する遺伝子操作したウサギから得た血清
（上記参照）とインキュベートする。３７℃で、２時間後、上清への５１Ｃｒの
放出は、シンチレーション測定装置を用いて放射活性を測定することによって測
定される。最大限の放出の測定のために、１％トリトン×１００を添加する。細
胞溶解の程度は、以下のとおり計算される： 溶解率（％）＝実験的ＣＰＭ±自発的ＣＰＭ数／ＣＰＭ総数±自発的ＣＰＭ。非
免疫化ウサギから得た血清（１：３０に希釈）との標識細胞のインキュベーショ
ンは、細胞溶解（＜１０％）を生じる。しかし、免疫化ウサギから得られる血清
を用いた細胞のインキュベーションは、８０％細胞溶解を引き起こす。加熱処理
（３０分間、５６℃）による血清中の補体の不活性化は、免疫化ウサギから得た
血清を不活性にさせる。これらの結果は、遺伝子操作したウサギによって産生さ
れる実質的にヒトの抗体は、ＨＢｓＡｇ陽性細胞に結合し、そして補体依存性溶
解を引き起こすことを示す。
【００４０】 感染を示す動物の処置 実質的にヒトの免疫グロブリンを、硫酸アンモニウム沈降およびイオン変換ク
ロマトグラフィーにより、遺伝子操作したウサギの血清から精製する。ＳＣＩＤ
マウスに、ＨＢｓＡｇを発現する百万個のヒト肝臓癌腫細胞を注射する。続いて
、２５μｇの免疫グロブリンを、日当たり一回腹膜に注射する。非免疫化ウサギ
血清から単離される抗体で処置した動物は、約６０日後に死ぬ。これは、肝臓癌
腫細胞の未処置受容者に類似する。対照的に、免疫化ウサギ血清から単離される
抗体で処置されるマウスは、１５０日以上の間生存する。これは、遺伝子操作さ
れるウサギで産生されるヒト抗体は、ＳＣＩＤマウスからヒト癌腫細胞を排出す
る能力のあることを示す。
ロマトグラフィーにより、遺伝子操作したウサギの血清から精製する。ＳＣＩＤ
マウスに、ＨＢｓＡｇを発現する百万個のヒト肝臓癌腫細胞を注射する。続いて
、２５μｇの免疫グロブリンを、日当たり一回腹膜に注射する。非免疫化ウサギ
血清から単離される抗体で処置した動物は、約６０日後に死ぬ。これは、肝臓癌
腫細胞の未処置受容者に類似する。対照的に、免疫化ウサギ血清から単離される
抗体で処置されるマウスは、１５０日以上の間生存する。これは、遺伝子操作さ
れるウサギで産生されるヒト抗体は、ＳＣＩＤマウスからヒト癌腫細胞を排出す
る能力のあることを示す。
【００４１】 実質的にヒトの免疫グロブリン遺伝子を発現する遺伝子操作されたウサギを用
いることによって、抗原、感染性粒子、癌細胞等に対するポリクローナル抗体製
品を発生させ得ることは、上の結果から明らかである。このようなポリクローナ
ル抗体製品は、感染性疾病または悪性疾患に罹っている患者を治療するために使
用できる。抗血清も、細胞副集団の排出、サイトカインなどによる免疫応答を調
節するために使用し得る。ヒト抗体製品は、ヒト患者での免疫応答を生む見込み
が実質的に減少されたことを示し、異種の抗血清に比べると、ほとんど副作用を
示さず、そして正の結果で安全に使用できる。
いることによって、抗原、感染性粒子、癌細胞等に対するポリクローナル抗体製
品を発生させ得ることは、上の結果から明らかである。このようなポリクローナ
ル抗体製品は、感染性疾病または悪性疾患に罹っている患者を治療するために使
用できる。抗血清も、細胞副集団の排出、サイトカインなどによる免疫応答を調
節するために使用し得る。ヒト抗体製品は、ヒト患者での免疫応答を生む見込み
が実質的に減少されたことを示し、異種の抗血清に比べると、ほとんど副作用を
示さず、そして正の結果で安全に使用できる。
【００４２】 ここに引用される文献の全ては、各文献が、個々に全体的に組み込まれるよう
に、参照してここに組み込まれる。
に、参照してここに組み込まれる。
【００４３】 多くの変化および修飾が、付随の請求項の概念および範囲から逸脱することな
く、そこに行われ得ることは、当業者のだれにも明らかである。
く、そこに行われ得ることは、当業者のだれにも明らかである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 15/09 ＺＮＡ 5/00 Ｂ (31)優先権主張番号 ６０／１３４，６７４ (32)優先日 平成11年５月18日(1999．5．18) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
Claims (32)
- 【請求項１】 非ヒト動物のポリクローナル抗血清組成物であって、前記抗
血清組成物は、ヒト重鎖ポリペプチドの少なくとも一部で構成される実質的にヒ
トの免疫グロブリンタンパク質分子で優先的に構成され、前記実質的にヒトの免
疫グロブリンタンパク質分子が、前記免疫原に特異的結合する組成物。 - 【請求項２】 前記トランスジェニック非ヒト動物が、前記抗原性実体で免
疫され、少なくとも１ｋｇの重量であり、相同的組換えによりそのゲノムに組込
まれた機能的ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含む請求項１に
記載のポリクローナル抗血清。 - 【請求項３】 前記トランスジェニック非ヒト動物が、遺伝子変換により優
先的に抗体多様性を生じる請求項１に記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項４】 前記トランスジェニック非ヒト動物が、ウサギ目からのもの
である請求項１に記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項５】 前記機能的ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子の一部が、少なく
とも１つの定常領域要素を含む請求項１に記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項６】 前記機能的ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子の一部が、さらに
、少なくとも１つの可変部要素を含む請求項５に記載のポリクローナル抗血清組
成物。 - 【請求項７】 前記可変部要素が、Ｄ領域に近傍の可変部要素である請求項
６に記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項８】 前記免疫原が、疾病を引き起こす生物またはその抗原性部分
を含む請求項１に記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項９】 前記免疫原が、ヒトに対して内在性の抗原である請求項１に
記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項１０】 前記免疫原が、ヒトに対して外因性の抗原である請求項１
に記載のポリクローナル抗血清組成物。 - 【請求項１１】 少なくとも１ｋｇの重量であり、相同的組換えによりその
ゲノムに組み込まれる機能的ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を
含むトランスジェニック非ヒト動物であって、前記機能的ヒト重鎖免疫グロブリ
ン遺伝子の一部は、少なくとも部分的にヒト重鎖免疫グロブリンポリペプチド配
列を含む機能的で実質的にヒトの抗体分子をコードする、前記非ヒト動物に内在
性の重鎖免疫グロブリン配列枠内で再配列し、前記動物が、免疫を与えられたと
きに、前記機能的で実質的にヒトの抗体分子を優先的に生成するトランスジェニ
ック非ヒト動物。 - 【請求項１２】 少なくとも１ｋｇの重量であり、相同的組換えによりその
ゲノムに組込まれた機能的ヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含
むトランスジェニック非ヒト動物であって、前記ヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
が、少なくとも部分的にヒト軽鎖免疫グロブリンポリペプチド配列を含む機能的
で実質的にヒトの抗体分子をコードする前記非ヒト動物に、内在の配列枠内で再
配列するトランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項１３】 前記トランスジェニック非ヒト動物が、遺伝子変換により
優先的に抗原多様性を発生する請求項１１または１２に記載のトランスジェニッ
ク非ヒト動物。 - 【請求項１４】 前記トランスジェニック非ヒト動物が、ウサギ目からのも
のである請求項１１または１２に記載のトランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項１５】 前記機能的ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子の一部が、少な
くとも１つの定常領域要素を含む請求項１１または１２に記載のトランスジェニ
ック非ヒト動物。 - 【請求項１６】 前記機能的ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子の一部が、さら
に、少なくとも１つの可変部要素を含む請求項１５に記載のトランスジェニック
非ヒト動物。 - 【請求項１７】 前記可変部要素が、Ｄ領域に近傍の可変部要素である請求
項１６に記載のトランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項１８】 前記ヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子が、κ鎖をコードする
請求項１２に記載のトランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項１９】 請求項１１に記載のトランスジェニック非ヒト動物によっ
て産生される抗血清組成物。 - 【請求項２０】 前記体内要素を、請求項１に記載の抗血清組成物と接触さ
せ、それにより、前記抗血清組成物における前記実質的にヒトの免疫グロブリン
タンパク質分子が、特異的に結合し、そして前記抗原性実体を中和することを含
むヒト体内要素での抗原性実体を中和する方法。 - 【請求項２１】 前記抗原性実体が、感染性疾病を引き起こす生物から得ら
れる請求項２０に記載の方法。 - 【請求項２２】 前記抗原性実体が、細胞表面分子である請求項２０に記載
の方法。 - 【請求項２３】 前記細胞表面分子が、リンパ球または脂肪細胞から得られ
る請求項２２に記載の方法。 - 【請求項２４】 前記抗原性実体が、ヒトサイトカインまたはヒトケモカイ
ンである請求項２０に記載の方法。 - 【請求項２５】 前記抗原性実体が、悪性癌細胞上の細胞表面分子である請
求項２０に記載の方法。 - 【請求項２６】 少なくとも１ｋｇの重量であり、相同的組換えによってそ
のゲノムに組込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニック非ヒ
ト動物を産生する方法であって、前記動物が、免疫化されたときにヒト免疫グロ
ブリンポリペプチド配列の少なくとも一部から構成される機能的で実質的にヒト
の抗体分子を優先的に産生し、前記方法は、 定常および／または可変部要素が、前記動物の細胞核の遺伝的改変によりヒト
重鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも機能的部分に置換される重鎖免疫グロ
ブリン遺伝子座を含む第一の突然変異動物を産生し；前記細胞核を、除核した核
移殖単位細胞に導入して、第一の胚幹細胞を提供し；前記第一の核移殖単位細胞
を、雌受容体宿主に導入して、第一の突然変異新生仔を産生し； 定常および／または可変部要素が、前記動物の細胞核の遺伝的改変によってヒ
ト軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも機能的部分に置換される軽鎖免疫グ
ロブリン遺伝子座を含む第二の突然変異動物を産生し；前記細胞核を、除核した
核移殖単位細胞に導入して、第二の胚細胞幹細胞を提供し；前記第二の核移殖単
位細胞を、雌受容体宿主に導入して、第二の突然変異新生仔を産生し；そして 成熟した第一および第二突然変異新生仔を交配させ、そして実質的にヒトの抗
血清を産生する能力があり、そして内因性抗血清を産生する能力の少なくとも実
質的にない動物を選択することを含む。 - 【請求項２７】 少なくとも１ｋｇの重量であり、相同的組換えによってそ
のゲノムに組込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニック非ヒ
ト動物を産生する方法であって、前記動物が、免疫化されたときにヒト免疫グロ
ブリンポリペプチド配列の少なくとも一部から構成される機能的に実質的なヒト
抗体分子を優先的に産生し、前記方法は、 定常および／または可変部要素が、前記動物の細胞核の遺伝的改変により少な
くとも機能的部分またはヒト重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン遺伝子座に
置換される重および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含む突然変異動物を産生し；
前記細胞核を、除核した核移殖単位細胞に導入して、胚幹細胞を提供し；前記核
移殖単位細胞を、雌受容与体宿主に導入して、突然変異新生仔を産生し；そして 成熟した突然変異新生仔を交配させ、そして実質的にヒト抗血清を産生する能
力があり、そして内因性抗血清を産生する能力が少なくとも実質的にない動物を
選択することを含む。 - 【請求項２８】 前記核移殖単位細胞が、卵母細胞である請求項２６または
２７に記載の方法。 - 【請求項２９】 前記動物が、ウサギ目から得られるものである請求項２６
または２７に記載の方法。 - 【請求項３０】 前記重鎖遺伝子座が、少なくとも１つの定常領域要素を含
む請求項２６または２７に記載の方法。 - 【請求項３１】 前記重鎖遺伝子座が、少なくとも１つの可変部要素を含む
請求項２６または２７に記載の方法。 - 【請求項３２】 前記重鎖遺伝子座が、Ｄ領域に近傍の可変部要素を含む請
求項２６または２７に記載の方法。
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