JP2002531505A - 糖脂質蓄積症を治療する薬物製造のためのデオキシノジリマイシンの長鎖ｎ−アルキル誘導体の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ゴーシェ病または他のそのような糖脂質蓄積症患者の治療のための新規方法を開示する。該方法は、デオキシノジリマイシンの長鎖Ｎ−アルキル誘導体の治療的有効量を前記患者に投与することを含む。長鎖アルキル基は、約９から約２０の炭素原子を持ち、好ましくはノニルまたはデシルである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の背景 本発明はゴーシェ病および他の糖脂質蓄積症治療のための方法に関する。

【０００２】 ゴーシェ病は異化酵素ベータ‐グルコセレブロシダーゼ活性の遺伝的欠損によ
り引き起こされる糖脂質蓄積症である。Ｂｅｕｔｌｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０ ，５３８４−５３９０（１９９３）。この病気
の症状は造血障害、骨折、骨皮質のひ薄化および脾臓と肝臓の腫脹である。

【０００３】 近年、ゴーシェ病の治療のためのいくつかの療法が提案されてきた。初期の治
療法には欠損酵素の補充療法がある。。例えば、Ｄａｌｅ ａｎｄ Ｂｅｕｔｌ
ｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７３，４６７２−４６
７４（１９７６）；Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ７８，１１８
３−１１８９（１９９１）；およびＢｅｕｔｌｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６，
７９４−７９９（１９９２）を参照されたい。

【０００４】 酵素補充のための主な市販品にはヒト胎盤組織由来のＣＥＲＥＤＡＳＥ（グル
コセレブロシダーゼ）、およびＣＥＲＥＺＹＭＥ（組み換え型ヒトグルコセレブ
ロシダーゼ）があり、それらは共にＧｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐ．により製造され
ている。例えば、米国特許第３，９１０，８２２号；第５，２３６，８３８号；
および第５，５４９，８９２号を参照されたい。

【０００５】 ゴーシェ病の治療のための、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とグルコセレ
ブロシダーゼの結合体（conjugates）もＥｎｚｏｎ Ｉｎｃ．により提案されて
きた。例えば、米国特許第５，７０５，１５３号；および第５，６２０，８８４
号を参照されたい。

【０００６】 さらに該疾患治療のための別の方法には遺伝子療法があり、該方法にはｅｘ
ｖｉｖｏ遺伝子導入法がある。 別の最近の方法には、それぞれＰｌａｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ ｈｅｍ．２６９ ，８３６２−８３６５（１９９４）；同上．２６９，２７１０８
−２７１１４（１９９４）に記載の全合成薬、Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシ
ンおよびＮ−ブチルデオキシガラクトノジリマイシンの適用がある。米国特許第
５，４７２，９６９号；第５，７８６，３６８号；第５，７９８，３６６号；お
よび第５，８０１，１８５号も参照されたい。

【０００７】 Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシン（Ｎ−ブチル−ＤＮＪ）および関連するＤ
ＮＪのＮ−アルキル誘導体はＮ−結合オリゴ糖プロセシング酵素、α‐グルコシ
ダーゼＩおよびＩＩの既知の阻害剤である。Ｓａｕｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７ ，１４１５５−１４１６１（１９８２）；Ｅｌｂ
ｅｉｎ，Ａｎｎ，Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６，４９７−５３４（１９８７）
。グルコース類似体として、それらはまたグリコシルトランスフェラーゼの阻害
能を持つ。Ｎｅｗｂｒｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｒａｌ Ｂｉｏｌ．２ ８ ，５１６−５３６（１９８３）；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄ ｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３４ ，４０３−４０６（１９９３）。グリコシダーゼに対し
て阻害活性を持つことから、抗高血糖薬および抗ウイルス薬としてこれらの化合
物は開発されてきた。例えば、ＰＣＴ国際特許出願ＷＯ８７／０３０９０３およ
び米国特許第４，０６５，５６２；第４，１８２，７６７号；第４，５３３，６
６８号；第４，６３９，４３６号；第５，０１１，８２９号；および第５，０３
０，６３８号を参照されたい。

【０００８】 特に、Ｎ−ブチル−ＤＮＪはＫａｒｐａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５ ，９２２９−９２３３（１９８８）、米国
特許第４，８４９，４３０号に記載のようにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の
阻害剤；およびＢｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ ｃｉ．ＵＳＡ ９１ ，２２３５−２２３９（１９９４）、ＰＣＴ国際特許出願Ｗ
Ｏ９５／１９１７２に記載のようにＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の阻害剤として
開発されてきた。 発明の簡単な説明 本発明に従って、ゴーシェ病または他のそのような糖脂質蓄積症患者の治療の
ための新規方法を提供する。該方法はアルキル鎖に９から約２０の炭素原子を持
つ１，５−ジデオキシ−１，５−イミノ−Ｄ−グルシトールの長鎖Ｎ−アルキル
誘導体の治療的有効量を前記患者に投与することを含む。Ｎ−アルキル置換基は
従って例えば、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサ
デシル、シス−１１−ヘキサデセニル、オクタデシル、シス−１３−オクタデセ
ニル、およびエイコシルであってもよい。治療的有効量とは、ゴーシェ病または
他のそのような糖脂質蓄積症の患者において、前期疾患を緩和または妨げるため
に有効な量を意味する。

【０００９】 これら長鎖Ｎ−アルキル−ＤＮＪ化合物中のアルキル基は、好ましくは９から
１０炭素原子（すなわち、ノニルおよびデシル）を含む。最も好ましい化合物は
デオキシノジリマイシン（ＤＮＪ）のＮ−ノニル誘導体としても既知の、Ｎ−ノ
ニル−１，５−ジデオキシ−１，５−イミノ−Ｄ−グルシトールであり、本明細
書中ではＮ−ノニル−ＤＮＪとしても略記する。

【００１０】 一般有機化学の分野において、長鎖アルキル基は短鎖アルキル基よりも化合物
をより疎水性にすることが知られている。すなわち、水溶性は鎖長の増加および
温度の低下と共に減少する。例えば、４６℃ではカプロン酸（短鎖ヘキシル基）
は水に１０重量％溶解するが、ステアリン酸（長鎖オクタデシル基）はより高温
の６９℃でさえ、０．９２％しか溶解しない。Ｂａｉｌｅｙ’ｓ Ｉｎｄｕｓｔ ｒｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ｆａｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ，Ｄａｎｉｅｌ Ｓｗｅ
ｒｎ編，第３版，１９６４，ｐ．１２６。

【００１１】 ＤＮＪの長鎖Ｎ−アルキル誘導体は既知のアミノ糖化合物である。それらは元
来、グルコシダーゼＩ阻害活性および抗ウイルス活性を共にもつＤＮＪの短鎖お
よび長鎖Ｎ−アルキル誘導体グループの一員として記載されたが、長鎖Ｎ−アル
キル誘導体に関するデータは開示されなかった。例えば、ドイツ特許第３、７３
７，５２３号，ヨーロッパ特許第３１５，０１７号および米国特許第４，２６０
，６２２；第４，６３９，４３６号；および第５，０５１，４０７号を参照され
たい。

【００１２】 別の初期の研究では、塩基ＤＮＪのＮ−アルキル化はグルコシダーゼＩの５０
％阻害に必要な濃度を低下させたが、阻害活性はＮ−アルキル鎖の長さがＮ−メ
チルからＮ−デシルに増加するにつれて低下した（Ｓｃｈｗｅｄｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４８，３３５−３４０，
（１９８６）の３３８ページに記載）。

【００１３】 どれか特定のウイルスに対するアミノ糖化合物の抗ウイルス活性に関する限り
、前もっていずれか具体的な類似体の活性を予測することはできない。例えば、
Ｆｌｅｅｔ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２３７，１２８−１３２（１
９８８）は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する阻害活性の生物学的試験
において、Ｎ−置換体のわずかな変化が抗ウイルス活性に関して顕著な効果をも
たらすことを示した。米国特許第４，８４９，４３０号に開示されたように、Ｄ
ＮＪのＮ−ブチル誘導体は意外なことに、ＨＩＶの阻害剤として、Ｎ−メチル類
似体よりも対数で２桁分（two log orders）以上、より効果的であり、Ｎ−エチ
ル類似体よりも対数で３桁分（three log orders）、より効果的であった。

【００１４】 糖脂質生合成阻害活性を目的としたＤＮＪのＮ−アルキル誘導体の別の研究で
は、ＤＮＪのＮ−ヘキシル誘導体は０．２ｍｇ／ｍｌを必要としたが、相当する
Ｎ−ブチル類似体はわずか０．０１−０．１を必要とした。一方、Ｎ−メチル類
似体は不活性であった。従って、前期活性のためのＮ−アルキル基の効果的な炭
素鎖長は米国特許第５，４７２，９６９号記載によると２から８の範囲であった
。その中にはＤＮＪのＮ−ノニルまたは他の長鎖Ｎ−アルキル誘導体に関する開
示は見られなかった。

【００１５】 Ｎ−ノニル−ＤＮＪは、Ｂｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉ ｃｉｎｅ ４ （５）６１０−６１４（１９９８）によると、細胞小胞体（ＥＲ）
のアルファ−グルコシダーゼの阻害に基づきＢ型肝炎（ＨＢＶ）の阻害剤として
も効果的であると報告されてきた。

【００１６】 ゴーシェ病および他のそのような糖脂質蓄積症治療のための本発明の方法にお
けるＤＮＪの長鎖Ｎ−アルキル誘導体の有効性は、チャイニーズハムスター卵巣
（ＣＨＯ）細胞およびヒト骨髄性（ＨＬ−６０）細胞の糖脂質生合成に対するＮ
−ノニルおよびＮ−デシルＤＮＪの阻害活性により本明細書中で例証して示す。

【００１７】 ＣＨＯ細胞は既知の糖蛋白質分泌性哺乳動物細胞である。代表的なＣＨＯ細胞
系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，
Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤから入手可能な、受託番号ＡＴＣＣ ＣＣＬ ６１のＣ
ＨＯ−Ｋ１である。

【００１８】 ＨＬ−６０細胞はＣｏｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２７０，３
４７−３４９（１９７７）に記載のヒト前骨髄細胞である。それらも受託番号Ａ
ＴＣＣ ＣＣＬ ２４０として、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤから容易に入手できる。

【００１９】 慣用のウシ腎臓細胞（例えば、ＭＤＢＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ２２）および肝細
胞癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２、ＡＴＣＣ ＨＢ ８０６５）におけるＮ−ノニ
ル−ＤＮＪの有効活性も、本明細書中でさらに詳細に例証して示す。

【００２０】 Ｎ−ノニル−ＤＮＪの糖脂質生合成に対する予測不可能な作用を上記の２細胞
系における阻害活性により本明細書中に示す。Ｎ−ノニル−ＤＮＪは意外にも等
価の濃度で、Ｎ−ブチル−ＤＮＪよりＣＨＯ細胞において約１０から約２０倍、
ＨＬ−６０細胞において約４００倍高い活性を示した。Ｎ−デシル−ＤＮＪはＮ
−ブチル−ＤＮＪの１／５０の低濃度でＨＬ−６０細胞において効果的な阻害剤
であることを示した。

【００２１】 Ｎ−ノニル−ＤＮＪは取り込みにおいて、Ｎ−ブチル−ＤＮＪに比べより著し
い差を示し、事実上低レベルでの使用を可能にする。臓器分布の試験において、
Ｎ−ノニル−ＤＮＪはＮ−ブチル−ＤＮＪより５倍多く脳へ取り込まれた。従っ
て、Ｎ−ノニル−ＤＮＪは全身的でない側面を含む糖脂質蓄積症を治療するため
の事実上、より優れた化合物であると考えられる。

【００２２】 Ｎ−ノニル−ＤＮＪおよびＮ−デシル−ＤＮＪは好都合には、米国特許第４，
６３９，４３６号の実施例２に記載のＤＮＪのＮ−ブチル化に類似した方法で、
ｎ−ブチルアルデヒドのかわりにｎ−ノニルアルデヒドまたはｎ−デシルアルデ
ヒドの等量を使用することによる１，５−ジデオキシ−１，５−イミノ−Ｄ−グ
ルシトール（ＤＮＪ）のＮ−ノニル化またはＮ−デシル化によりそれぞれ製造で
きる。出発物質は市販品から容易に入手できる。例えば、ＤＮＪはＳｉｇｍａ，
Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．から市販されている。１−ノナナールまたはペラルゴ
ンアルデヒドとしても既知のｎ―ノニルアルデヒド、およびデカナールとしても
既知のｎ−デシルアルデヒドはＡｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ．か
ら市販されている。しかし、本発明の方法が、Ｎ−ノニル−ＤＮＪ、Ｎ−デシル
−ＤＮＪ、または他のＤＮＪの長鎖Ｎ−アルキル誘導体合成のどれか特定の方法
に限定されないということは認識されるであろう。

【００２３】 Ｎ−ノニル−ＤＮＪ、Ｎ−デシル−ＤＮＪ、および他のＤＮＪの長鎖Ｎ−アル
キル誘導体は、治療薬を投与する慣用の方法により、ゴーシェ病および他の糖脂
質蓄積症患者の治療に使用することができる。従って、活性な化合物は好ましく
は薬剤的に受容できる希釈剤およびキャリアと共に製剤する。活性薬は遊離アミ
ン型または塩型で使用できる。薬剤的に受容できる塩型には、例えばＨＣｌ塩が
ある。活性薬の投与量は効果的な量、すなわち、ゴーシェ病または他の糖脂質蓄
積症に対して医学的に有効な量であるが、使用に伴う好都合な点を妨害するよう
な有害な毒性作用を示さない、効果的な量でなけらばならない。ヒト成人の一日
投与量は普通、活性化合物の約０．１から１０００ミリグラムの範囲であること
が期待されるであろう。好ましい投与経路は、カプセル、錠剤、シロップ、エリ
キシル、ゲルなどの形状での経口的経路であるが、非経口的投与経路も使用でき
る。

【００２４】 治療量における薬剤的に受容できる希釈剤およびキャリア中の活性化合物の適
切な剤型を、当業者は製薬分野で一般的な教科書および専門書、例えば、Ｒｅｍ ｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ，Ａｒｔ
ｈｕｒ Ｏｓｏｌ編，第１６版，１９８０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，および第１８版，１９９０を参照することにより
製造できる。

【００２５】 本発明の方法の適用範囲に含まれる他の糖脂質蓄積症には、例えば、ティーサ
ックス（Ｔａｙ−Ｓａｃｈｓ）病、ザントホフ（Ｓａｎｄｈｏｆｆ）症、ファブ
リー（Ｆａｂｒｙ）病、ＧＭ１ガングリオシドーシスおよびフコース蓄積症があ
る。

【００２６】 発明の詳細な説明 本明細書は、本発明を形成するものと考えられる主題を特に指摘し、明確に主
張する請求の範囲で終わるが、本発明は以下に提出した本発明の態様とそれに伴
う図面によりさらによく理解されるであろう。

【００２７】 本発明をより詳細に説明するために、以下の具体的な実験室実施例を行った。
具体的な実施例を本明細書中にこのように説明するが、本発明がこれらの具体的
で、説明的な実施例またはその中の詳細に限定されないということは認識される
であろう。

【００２８】 実施例Ｉ Ｎ−ブチル−ＤＮＪおよびＮ−ノニル−ＤＮＪの糖脂質生合成阻害作用を比較
し、効力は細胞および鎖長に依存することを示した。糖脂質生合成の前駆体（放
射標識パルミチン酸）および各種濃度の阻害剤存在下で培養したチャイニーズハ
ムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞およびヒト骨髄性（ＨＬ−６０）細胞を溶媒で処理
し、Ｐｌａｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，８３６２−
８３６５（１９９４）に記載された方法で糖脂質を抽出した。

【００２９】 放射標識された脂質をＴＬＣで分離し（図１）、グルコシルセラミドおよびラ
クトシルセラミドに相当するバンドを走査型デンシトメトリーにより定量し、糖
脂質生合成の阻害を評価した。これらのデータをプロットし、両細胞系および化
合物の阻害定数（ＩＣ₅₀）を得た（表１）。

【００３０】 これらのデータは細胞系がＮ−ブチル−およびＮ−ノニル−ＤＮＪの両方に異
なる感受性をもっていることを示す。ＨＬ−６０細胞はＣＨＯ細胞より１０倍Ｎ
−ブチル−ＤＮＪに感受性で、Ｎ−ノニル−ＤＮＪに１００倍感受性である。こ
の細胞特異性は意外であった。さらに、Ｎ−ノニル−ＤＮＪはＮ−ブチル−ＤＮ
Ｊより１０から３６５倍効果的であった。

【００３１】 アルキル化デオキシノジリマイシン化合物により阻害される酵素、セラミドグ
ルコシルトランスフェラーゼの作用機序を探るための詳細な研究は、これらの化
合物がセラミドの競合的阻害剤であり、ＵＤＰ−グルコースの非競合的阻害剤で
あることを示している（図２）。Ｎ−ノニル−ＤＮＪはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセ
イにおいて、Ｎ−ブチル−ＤＮＪより１０倍強いセラミドグルコシルトランスフ
ェラーゼ阻害作用を持つ（ＩＣ₅₀値はそれぞれ２．８μＭおよび２７．１μＭで
ある、図３参照）。

【００３２】 アルキル化デオキシノジリマイシン化合物の作用機序はセラミドの模倣である
と提案し、分子レベルでこの模倣を示すモデルを図４に示す。ＮＢ−ＤＮＪおよ
びセラミドの最小エネルギー分子モデルは３つのキラル中心とＮＢ−ＤＮＪのア
ルキル鎖の構造的相同性を予言する。このｉｎ ｖｉｔｒｏでの効力の増大は細
胞系での糖脂質生合成阻害における著しい差を説明しない。

【００３３】 活性は細胞への異なる取り込みにより説明する。３つの細胞系、ＣＨＯ、ＭＤ
ＢＫおよびＨｅｐＧ２において、放射標識したＮ−ノニル−ＤＮＪおよびＮ−ブ
チル−ＤＮＪを２４時間までインキュベートし、細胞に関連した放射活性の量を
測定した。すべての場合において、Ｎ−ノニル−ＤＮＪの活性は３．５〜５倍増
大したが、Ｎ−ノニル−ＤＮＪによる阻害の増強に重要なことは、阻害作用と取
り込み増大の組み合わせであることは明らかである。

【００３４】 アルキル鎖がより長いほどよりよく取り込まれるというさらに別の証拠は、マ
ウスのｉｎ ｖｉｖｏの研究から得られている。放射標識したＮ−ノニル−ＤＮ
ＪおよびＮ−ブチル−ＤＮＪを経口的胃管投与後３０，６０，および９０分に、
放射活性推定のために体液を集め、臓器を取り除いた（図５）。肝および脳で回
収した放射活性の量は９０分後ではＮ−ブチル−ＤＮＪよりＮ−ノニル−ＤＮＪ
の方が１０倍多かった（表２参照）。

【００３５】 より長鎖（Ｃ９以上）ＤＮＪ化合物はより効果的なグルコシルトランスフェラ
ーゼ阻害剤であるという証拠を得た。このことは、増大した効力はセラミド模倣
と関連することを示す（図４）、作用研究から得られた機序に従う。より具体的
に述べると、上記記載のＨＬ−６０細胞に基づいたアッセイにおいて、Ｎ−デシ
ル−ＤＮＪ（Ｃ１０）はＮ−ブチル−ＤＮＪの１／５０の低濃度で阻害を示す。
上記データから、ＤＮＪの長鎖Ｎ−アルキル誘導体は糖脂質蓄積症の治療に効果
的である。

【００３６】

【表１】

【００３７】 表１．Ｎ−ブチル−ＤＮＪおよびＮ−ノニル−ＤＮＪによる糖脂質の阻害。図１
の放射標識したグルコシルセラミドおよびラクトシルセラミドバンドを走査型デ
ンシトメトリーにより定量し、対照（無処理、トラックａ、図１）の百分率を化
合物の量と比較して表した。一次曲線から、ＩＣ₅₀値を得た。一連の値を放射標
識された生成物の変動性を表すために引用する。

【００３８】

【表２】

【００３９】 表２．正常マウスに適用後の放射標識化合物の回収率。放射標識化合物胃管投与
後の異なる時間にマウス体液および臓器を集めた。各サンプルの放射活性を測定
し、回収した放射活性の百分率として表した（図５のデータによる）。

【００４０】 実施例ＩＩ 実施例Ｉの実験法を行い、デオキシノジリマイシンの長鎖Ｎ−アルキル誘導体
が短鎖類似体と比較して糖脂質蓄積症の治療に好都合な点をさらに詳細に示した
。この実施例で比較した類似体の化学構造を図７に示す。モノ−不飽和であるＣ
１６およびＣ１８アルキル鎖類似体以外は、これらの類似体は飽和されている。

【００４１】 セラミドグリコシルトランスフェラーゼ（ＣｅｒＧｌｃｔ）およびアルファ−
グルコシダーゼに対して測定したＮ−アルキルシリーズの阻害定数（ＩＣ₅₀）を
図８に示す。傾向は図３に示したものと同様で、鎖長が増大するとグリコシルト
ランスフェラーゼの阻害が増大するが、グルコシダーゼに対する阻害は増大しな
い。このことは、セラミド模倣の機序が図４に示した阻害の基礎であることを支
持する。最適の鎖長はＣ１０（デシル）であると思われる。

【００４２】 図９は、鎖長の増大が細胞への取り込みを時間依存的に増大するという図５で
示した傾向を確証した。Ｃ１６およびＣ１８類似体の二重結合の効果は、Ｃ１６
が飽和Ｃ１０類似体と同様の反応速度を示し、Ｃ１８が飽和Ｃ１２類似体と同様
の反応速度を示すということにおいて見られる。

【００４３】 図１０では、図６のように放射標識した類似体を経口胃管投与した結果を別の
類似体に対して示す。短鎖類似体（Ｃ４からＣ６）は時間依存的に速やかに排出
される。Ｃ９およびＣ１０類似体は蓄積増加およびより遅いクリアランスを示す
。Ｃ１２からＣ１８類似体は肝での蓄積が減少するが、時間と共に蓄積が増大す
る。３０分後の肝におけるＣ９類似体の蓄積は短鎖Ｃ４類似体で見られる蓄積の
１０倍であることから、これらの結果は、より長いアルキル鎖類似体の組織への
取り込み増大の機序を支持する。

【００４４】 図１１は、マウス脳でも見られる累進的な蓄積は遅い反応速度を持つことを示
し、それによってより長鎖のアルキル類似体の腸による吸着が減少することを示
唆する。

【００４５】 胃管投与後の時間がより長い時点を組織蓄積のモニターに使用した図１２およ
び１３で、減少した吸着のさらに詳細な証拠を示す。従って図１２は、肝ではＣ
４の放射活性の大部分は１．５時間後に観察されるが、鎖長の増大と共にクリア
ランス時間が次第に増大し、Ｃ１８では胃管投与２４時間後に著しい蓄積が見ら
れることを示す。図１３は、マウス脳でも同じ効果が見られるが、より長い時間
が経過した時点で腸から血液、そして脳への伝達の低下を反映することを示す。

【００４６】 図１４は、デオキシノジリマイシンのＮ−アルキル化類似体の蛋白結合能を示
す。短鎖類似体（Ｃ４からＣ６）の結合量は少ないが、Ｃ１０以上の類似体はほ
とんど完全に蛋白に結合する。Ｃ８およびＣ９類似体は蛋白と溶液相に等しく分
布するらしい。

【００４７】 まとめると、実施例ＩＩに示したデオキシノジリマイシンの長鎖アルキル類似
体の腸からの遅い取り込みは肝への遅い伝達と累進的蓄積をもたらす。この時間
経過に伴う肝での蓄積は脳でも見られる。これらの結果は、特に脳での糖脂質の
蓄積がゴーシェ型ＩＩ／ＩＩＩ、ティー‐サックス病およびザントホフ症の病理
学を示すとき、糖脂質蓄積症の治療に大きな意義がある。本発明の開示を読めば
、本発明の意図および範囲から逸脱することなく、各種の他の実施例が当業者に
は明らかであろう。そのような他のすべての実施例は添付の請求の範囲内に含む
つもりである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 処理した（ａ）ＣＨＯおよび（ｂ）ＨＬ−６０細胞の薄層クロマトグラフィー
を示す。細胞は放射標識したパルミチン酸および以下の濃度の化合物： ａ）対照、化合物を含まない ｂ）５０μＭ ＮＢ−ＤＮＪ ｃ）５μＭ ＮＢ−ＤＮＪ ｄ）２．５μＭ ＮＢ−ＤＮＪ ｅ）０．２５μＭ ＮＢ−ＤＮＪ ｆ）０．０２５μＭ ＮＢ−ＤＮＪ ｇ）５０μＭ ＮＮ−ＤＮＪ ｈ）５μＭ ＮＮ−ＤＮＪ ｉ）２．５μＭ ＮＮ−ＤＮＪ ｊ）０．２５μＭ ＮＮ−ＤＮＪ ｋ）０．００２５μＭ ＮＮ−ＤＮＪ の存在下で４日間培養した。抽出後、放射標識した糖脂質をＴＬＣで分離し、ラ
ジオオートグラフィーにより視覚化した。

【図２】 ２つの部分、図２ａおよび図２ｂはＮ−ブチル−ＤＮＪ（ＮＢ−ＤＮＪ）によ
るセラミドグルコシルトランスフェラーゼ阻害の二重逆数プロットを示す。ＨＬ
−６０細胞セラミドグルコシルトランスフェラーゼ活性は５−２０μＭ のセラ
ミド濃度（図２ａ）および０．５９−５．９μＭ のＵＤＰ−グルコース濃度を
使用して測定した。５−１００μＭ のＮＢ−ＤＮＪ濃度を使用した。阻害定数
（Ｋ_i）は挿入図中に示した阻害剤濃度に対するラインウィーバー−バーク（Ｌ
ｉｎｅｗｅａｂｅｒ−Ｂｕｒｋ）式の傾きをプロットすることにより計算した。

【図３】 Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（○）およびＮ−ノニル−ＤＮＪ（●）によるＨＬ−６０
細胞セラミドグルコシルトランスフェラーゼ活性の阻害を示す。活性は阻害剤を
加えない対照に対する百分率として表し、ＩＣ₅₀値は示した速度曲線から計算し
た。Ｎ−ブチル−ＤＮＪ＝２７．１μＭ；Ｎ−ノニル−ＤＮＪ＝２．８μＭ。

【図４】 ＮＢ−ＤＮＪとセラミドグルコシルトランスフェラーゼ基質との構造的相関を
示す。 （ａ）グルコシルセラミドの結晶構造由来のセラミドの構造。受容体ヒドロキシ
ルはＣ１′上である。 （ｂ）ＮＭＲおよび分子モデリングに基づいたＮＢ−ＤＮＪ（Ｎ−アルキル）の
構造 （ｃ）セラミドおよびＮＢ−ＤＮＪのかさなりの１つの可能性

【図５】 ２つの部分、図５ａおよび図５ｂは推定した放射活性を棒グラフで示す。培養
したＣＨＯ、ＭＤＢＫおよびＨｅＰＧ２細胞に、放射標識したＮ−ブチル−ＤＮ
Ｊ（図５Ｂ）およびＮ−ノニル−ＤＮＪ（図５Ａ）を示した時間に加えた。細胞
を十分に洗浄し、酸で沈降させた。ＮａＯＨで溶解後、細胞に関連した放射活性
を測定し、加えた放射標識化合物の百分率として表した。

【図６】 放射標識したＮ−ブチル−ＤＮＪ（ＮＢ−ＤＮＪ）およびＮ−ノニル−ＤＮＪ
（ＮＮ−ＤＮＪ）の臓器分布を棒グラフで示す。放射標識した化合物を胃管投与
後、異なる時間にマウス体液および臓器を集めた。各サンプルの放射活性を測定
し、回収した放射活性の百分率として表した。点で満たした棒はＮＮ−ＤＮＪ、
斜線をつけた棒はＮＢ−ＤＮＪを示す。

【図７】 本明細書中で例示したＮ−アルキル化したデオキシノジリマイシンの構造を示
す。Ｃ１６およびＣ１８Ｎ−アルキル鎖がそれぞれ窒素から１０および１２炭素
原子の位置で不飽和結合を含むが、他は飽和されていることを注意されたい。

【図８】 セラミドグルコシルトランスフェラーゼおよびα−グルコシダーゼに対するＣ
４からＣ１８ＤＮＪ類似体による阻害定数を示す。図８は、セラミドグルコシル
トランスフェラーゼ（ＣｅｒＧｌｃＴ）およびα−グルコシダーゼに対して測定
したＮ−アルキルシリーズの阻害定数（ＩＣ₅₀、μＭ）を示している図３のデー
タの付加的なデータを含む。傾向は図３の記載に類似し、鎖長の増大につれてグ
ルコシルトランスフェラーゼの阻害が増大するが、グルコシダーゼに対する阻害
は増大しない。

【図９】 ＭＢＤＫ細胞におけるＣ４からＣ１８類似体の取り込みを示し、放射活性取り
込み／ｃｐｍ蛋白を時間（ｈ）に対してプロットする。図９はＣ４−Ｃ１８Ｎ−
アルキル化ＤＮＪ化合物を使用し、図５で示したデータの付加的なデータを示す
。傾向は明らかで、鎖長の増大と共に時間依存的に細胞への取り込みが増大する
。不飽和Ｃ１６およびＣ１８類似体がそれぞれ飽和Ｃ１０およびＣ１２類似体と
同様の速度論を示すことから、二重結合はここでは何かの作用をもつ。

【図１０】 マウス肝におけるＮ−アルキル化ＤＮＪ類似体の分布を示す。３０分（白抜き
の棒）、６０分（斜線をつけた棒）および９０分（点で満たした、黒い棒）で回
収した放射活性（％）を、Ｎ−アルキル鎖長（Ｃ４からＣ１８）に対してプロッ
トした。図１０は図６に記載した方法を使用して放射標識したＮ−アルキル化化
合物を経口胃管投与した結果を示す。短鎖化合物（Ｃ４−Ｃ６）は時間依存的に
速やかに排出される。Ｃ９およびＣ１０化合物は蓄積の増加およびより遅いクリ
アランスを示す。Ｃ１２からＣ１８類似体は逆の傾向を示し、肝における蓄積が
減少し、時間と共に蓄積が増大する。

【図１１】 マウス脳におけるＮ−アルキル化ＤＮＪ類似体の分布を示す。３０分（白抜き
の棒）、６０分（斜線をつけた棒）および９０分（点で満たした、黒い棒）で回
収した放射活性（％）を、Ｎ−アルキル鎖長（Ｃ４からＣ１８）に対してプロッ
トした。図１１は、脳でも見られる累積的蓄積が反応速度を遅くすることを示し
、腸によるより長いアルキル鎖化合物の吸着の減少を暗示する。

【図１２】 デオキシノジリマイシン（ＤＮＪ）の４種の異なるＮ−アルキル類似体を胃管
投与した後の時間（ｈ）に対して、肝で見られる放射活性（ｃｐｍ）をプロット
した連続した４つの棒グラフ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄである。示した４種の類似体は：
図１２Ａ、Ｎ−ブチル（Ｃ４）；図１２Ｂ、Ｎ−ノニル（Ｃ９）；図１２Ｃ、Ｎ
−ドデシル（Ｃ１２）；図１２Ｄ、Ｎ−シス−１３−オクタデセニル（Ｃ１８）
である。図１２は、肝ではＣ４の放射活性の大部分は１．５時間後に見られるが
、鎖長の増大と共にクリアランス時間が増大し、Ｃ１８では胃管投与２４時間後
において著しい蓄積が見られることを示す。

【図１３】 図１２と同じ類似体化合物を胃管投与した後の時間（ｈ）に対して脳で見られ
る放射活性（ｃｐｍ）をプロットした、連続した４つの棒グラフ、Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄである。示した４種の類似体は：図１３Ａ、Ｎ−ブチル（Ｃ４）；図１３Ｂ、
Ｎ−ノニル（Ｃ９）；図１３Ｃ、Ｎ−ドデシル（Ｃ１２）；図１３Ｄ、Ｎ−シス
−１３−オクタデセニル（Ｃ１８）である。図１３は、図１２において肝で見ら
れた作用と同様の作用が脳でも見られることを示し、さらに長い時間が経過した
時点での腸から血液そして脳への伝達の低下を反映している。

【図１４】 血清蛋白へのイミノ糖（Ｎ−アルキルＤＮＪ）結合を示す。化合物放射活性の
百分率をＮ−アルキル鎖長（Ｃ４からＣ１８）に対しプロットし、蛋白が結合し
た割合を○、非結合の割合を●で示す。図１４はＮ−アルキル化化合物の蛋白結
合能を示す。短鎖化合物（Ｃ４−Ｃ６）は結合能が低く、Ｃ１０以上の長鎖化合
物はほとんど完全に蛋白に結合する。Ｃ８およびＣ９類似体は蛋白と溶液相に等
しく分布するらしい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，Ｔ Ｊ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ジェイコブ，ゲーリー・エス アメリカ合衆国ミズーリ州63141，セン ト・ルイス，メイソン・フォレスト・ドラ イブ 12541 (72)発明者 プラット，フランセス・エム イギリス国オックスフォード オーエック ス１・３キューユー，サウス・パークス・ ロード，ユニバーシティ・オブ・オックス フォード，デパートメント・オブ・バイオ ケミストリー，グリコバイオロジー・イン スティチュート (72)発明者 バターズ，テリー・ディー イギリス国オックスフォード オーエック ス１・３キューユー，サウス・パークス・ ロード，ユニバーシティ・オブ・オックス フォード，デパートメント・オブ・バイオ ケミストリー，グリコバイオロジー・イン スティチュート (72)発明者 ドゥエック，レイモンド・エイ イギリス国オックスフォード オーエック ス１・３キューユー，サウス・パークス・ ロード，ユニバーシティ・オブ・オックス フォード，デパートメント・オブ・バイオ ケミストリー，グリコバイオロジー・イン スティチュート Ｆターム(参考） 4C054 AA02 BB03 CC02 DD04 DD08 DD12 EE24 FF24 4C086 AA01 AA02 BC21 MA01 ZC21 ZC33 ZC35 ZC54

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 糖脂質蓄積症を緩和または防ぐために効果的な量の、アルキル鎖
   に９から約２０の炭素原子を持つデオキシノジリマイシンの長鎖Ｎ−アルキル誘
   導体を糖脂質蓄積症患者に投与することを含む、前期患者を治療する方法。
2. 【請求項２】 デオキシノジリマイシンの長鎖Ｎ−アルキル誘導体がＮ−ノニル
   −ＤＮＪまたはＮ−デシル−ＤＮＪである請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 デオキシノジリマイシンのＮ−アルキル誘導体がＮ−ノニル−Ｄ
   ＮＪである請求項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 糖脂質蓄積症がゴーシェ病である請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 糖脂質蓄積症がゴーシェ病である請求項２に記載の方法。
6. 【請求項６】 糖脂質蓄積症がゴーシェ病である請求項３に記載の方法。
7. 【請求項７】 薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリア中のデオキシノジリマ
   イシンのＮ−アルキル誘導体を約０．１から約１０００ｍｇの用量で投与する請
   求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】 薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリア中のＮ−ノニル−ＤＮ
   ＪまたはＮ−デシル−ＤＮＪを約０．１から約１０００ｍｇの用量で投与する請
   求項２に記載の方法。
9. 【請求項９】 薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリア中のＮ−ノニル−ＤＮ
   Ｊを約０．１から約１０００ｍｇの用量で投与する請求項３に記載の方法。
10. 【請求項１０】 薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリア中のデオキシノジリ
    マイシンのＮ−アルキル誘導体を約０．１から約１０００ｍｇの用量で投与する
    請求項４に記載の方法。
11. 【請求項１１】 薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリア中のＮ−ノニル−Ｄ
    ＮＪまたはＮ−デシル−ＤＮＪを約０．１から約１０００ｍｇの用量で投与する
    請求項５に記載の方法。
12. 【請求項１２】 薬剤的に受容できる希釈剤またはキャリア中のＮ−ノニル−Ｄ
    ＮＪを約０．１から約１０００ｍｇの用量で投与する請求項６に記載の方法。