JP2002528098A

JP2002528098A - 金の析出方法

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Publication number: JP2002528098A
Application number: JP2000578659A
Authority: JP
Inventors: ブラウン、イレズ; アイチェン、ヨアヴ; シヴァン、ウリ
Original assignee: Technion Research and Development Foundation Ltd
Current assignee: Technion Research and Development Foundation Ltd
Priority date: 1998-10-27
Filing date: 1999-10-27
Publication date: 2002-09-03
Anticipated expiration: 2019-10-27
Also published as: ES2263289T3; JP4453856B2; EP1125128A1; US7851149B2; DE69930285T2; RU2242005C2; WO2000025136A1; AU6485999A; CA2348415A1; IL126776A0; CA2348415C; CN1331800A; CN1145028C; EP1125128B1; US7056748B1; IL126776A; US20040033626A1; DE69930285D1; ATE320002T1; AU759205B2

Abstract

(57)【要約】基材上に金を析出させる方法を提供する。この観点より、核形成中心を基材上の１つまたはそれ以上の部位に核形成中心を結合、析出または形成し、ついで、基材を、金が核形成中心に金を析出させ金析出物を生成させる可溶性金供給剤と接触させる。本発明の方法は、種々の画像増大技術ならびに診断および検出体の検出技術なために使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】［発明の分野］本発明は、基材への金メタルの化学析出に関する。

【０００２】［発明の背景］金属物質を基材に析出させる様々な技術や用途がある。このような様々な方法
では、析出する金属は、たとえば水溶液に可溶な錯体または分子の形態で提供さ
れる。適当な条件下において、錯体または分子を減圧し、基材上に金属をさせる
。

【０００３】このとき、溶液から基材への金属の析出を確実にするために、基材に核形成中
心（nucleation centers）を最初に供給することが好ましい。このような核形成
中心は、たとえば表面に析出または付着した様々な金属錯体、クラスターまたは
小さな金属粒子である。

【０００４】金属析出を含む技術の具体例としては、写真、光学顕微鏡または電子顕微鏡に
対する様々なイメージ形成法または潜在的なイメージコントラスト拡大技術であ
る。金属錯体を基材上に析出させる実験室的な技術の他の具体例としては、たと
えばタンパク質または核酸といった分離生成物のイメージングや、クロマトグラ
フィまたは電子泳動技術に存在する。

【０００５】このような技術において最も一般的に使用される金属は銀である。しかしなが
ら、銀析出における典型的な欠点は、析出は完全に特異的ではなく、核形成中心
へのアプリオリな析出無しに、銀の自発的な析出もある程度進行するであろうこ
とである。このように、イメージ拡大またはコントラスト拡大法で銀析出が使用
される場合には、一般的に限られた信号−ノイズ比である。

【０００６】［発明の記載］本発明は、その目的のひとつとして、基材上の特異な部位へ金を析出させる方
法を提供することである。本発明の他の目的は、このような方法に使用する組成
物およびキットを提供することにある。

【０００７】本発明にしたがえば、金含有分子、クラスターまたは錯体といった可溶な金供
給剤に最初に含まれた金を、核形成中心に析出させる。ここで使用する用語“核
形成中心”とは、金含有分子または錯体から金メタルへ金を変換する触媒的な特
性を有する塩、錯体、クラスター、または粒子をいう。金属表面を有する粒子は
、たとえばコロイド金属粒子、金属原子を有する様々な金属錯体、クラスターな
どである。

【０００８】本発明によれば、基材上の１つまたはそれ以上の部位に金を析出させる方法を
提供するものであって、該方法は、（ａ）前記１またはそれ以上の部位に核形成中心を結合、析出または形成する工
程、（ｂ）前記１またはそれ以上の部位に、前記金供給剤および試薬からなる処理組
成物を接触する工程であって、前記組成物は速度論的に安定であって、核形成中
心が基材上に存在しないかぎり、金メタルは本質的に基材には析出せず、および
前記１またはそれ以上の部位における核形成中心の存在下で、金原子が、前記金
供給剤から放出され、前記核形成中心に析出して、前記１またはそれ以上の部位
に金メタル析出物が形成される工程からなる。

【０００９】理解されるように、一度金が基材上に析出すると、さらなる金析出に対する核
形成中心として機能する。金析出（いくつかは、後で略述する）に影響する他の
条件とともに、加温放置時間（incubation time）を適切に制御することによっ
て、析出部位へ析出する金の量を制御できる。さらに、初期の金析出は、基材上
の別個の部位で行なわれるが、金析出物を析出させ、つづいてさらに成長させる
ことによって、別個の部位は結合し、そのような結合部位を包み込むようなひと
つのより大きな金析出物を形成する。

【００１０】用語「実質的に析出しない」とは、溶液からの金の分離がないことを意味し、
金原子は可溶分子または錯体中にとどまり、基材への金メタル析出は無視できて
、全くまたはほとんど観察および観測できない程度であって、高いシグナル対ノ
イズ比を示すことを意味する。

【００１１】第1の態様によれば、核形成中心は、１つまたはそれ以上の部位への核形成中
心形成剤の化学的または物理的析出によって形成される。他の態様によれば、こ
のような核形成中心は、前記１つまたはそれ以上の部位に、金属イオン、とくに
銀イオンが金属銀へ酸化されるレドックス反応によって、化学的に形成されるで
あろう。このような核形成中心の化学的形成は、それ自体公知である（たとえば
、ＷＯ９９／０４４０２およびＰＣＴ／ＩＬ９９／００２３２参照）。

【００１２】他の態様によれば、核形成中心は、前記１つまたはそれ以上の部位に、核形成
中心形成剤を結合することによって、形成する。このような薬剤は、前記１つま
たはそれ以上の部位に対して結合親和性（特異的または非特異的であることがで
きる）を有する１種以上の結合部分からなり、その部分は１種以上の核形成中心
部分と結合している。核形成中心部分は、金メタル析出に対して触媒として作用
する種であって、たとえば金属原子または金属含有錯体の塩、金属粒子、クラス
ターである。結合部分は、たとえば認識グループの他のメンバーが形成し、前記
１つまたはそれ以上の部位に含まれる認識グループの１メンバーである。認識グ
ループ、典型的には認識カップルは、一方から他方へ結合親和性を有する２つま
たはそれ以上の物質からなる。認識グループは、以下のカップルのいずれであっ
てもよいが、これらに限定されない。すなわち、抗原と抗体または抗原の結合ド
メインと相補性を有する抗体誘導体；砂糖とレクチン；レセプターとリガンド；
ヌクレオチドシーケンスと相補性を有するヌクレオチドシーケンス；ヌクレオチ
ドシーケンスとその結合タンパク質または合成結合剤；ビオチンおよびアビジン
（avidin）またはストレプトアビジン（streptavidin）；セルロースまたはキチ
ンおよびセルロース結合ドメイン。

【００１３】核形成中心部分は、金粒子または金原子を含むクラスターであることが好まし
く、たとえばＡｕ₁₁、Ａｕ₅₅またはＡｕ₁₄₇（それぞれ１１、５５または１４７
金原子を含む金クラスター）である。処理組成物は、典型的には水溶液である。
前記金供給剤は、Ａｕ^I（ＳＣＮ）₂ ^-などの金錯体であることが好ましく、通常
アルカリ金属（たとえばＮａ⁺、またはＫ⁺）またはアンモニウム塩の形態である
。

【００１４】処理組成物における試薬は、還元剤であってもよい。前記金供給剤がＡｕ^I（
ＳＣＮ）₂ ^-であれば、試薬はキノン、たとえばハイドロキノン（ＨＱ）またはナ
フトハイドロキノン（ＮＨＱ）であることが好ましい。しかしながら、金含有分
子または錯体を還元し金メタルを得る他の試薬も用いることができるが、速度論
的な制限（たとえば高い活性化エネルギーおよび低いプレエクスポネンシャル因
子）のため、核形成中心が存在しないと、無視できる速度で、核形成中心が存在
すると、意味ある速度（すなわち、長すぎない時間間隔で観測できる結果を生じ
る速度）で起こるであろう。

【００１５】酸性媒体中でＡｕ^I（ＳＣＮ）₂ ^-およびＨＱからなる処理組成物は安定であり
、これは金が溶液に可溶な種として存在し、固体金属のような沈殿物を核形成中
心以外の固体基材に堆積させないことを意味する。このような処理組成物のｐＨ
が約６以下であれば、処理組成物は特に安定である。核形成中心と接触させるこ
とによって、金メタルは核形成中心からなる基材の部位に堆積される。

【００１６】金メタルの析出速度は、たとえば処理組成物のｐＨの制御によって制御でき、
ｐＨの増加によって金析出の速度は増加し、ｐＨの減少によって析出速度は減少
するであろう。さらに、析出の速度は様々な他の手段によっても制御できるであ
ろう。たとえば、処理組成物のフローパラメータの制御（早いフローによって、
たとえば金析出の速度を減少させるＣＮ^-などの副生成物による汚染を防止する
）；析出速度を増加または減少させることができる界面活性剤を添加する（たと
えばポリアミン、ポリ酸またはポリアルコール、および他の界面活性剤が金析出
の速度を変える効果を有するであろう）。さらに、たとえば前述したような物な
どの種々の添加物の使用によって、堆積した金の表面の粗さが変化する（このよ
うな変化によって堆積した金の色調および電気特性が変化するであろう）。

【００１７】本発明の方法は、基材上の部位における特定の物質の存在と濃度を評価するた
めに使用できる。このような方法は以下の工程からなる。（ａ）前記基材を有する部位に核形成中心を形成させる条件を供給する工程、（ｂ）前記基材を、前記金供給剤および試薬からなる処理組成物と接触させる工
程であって、前記組成物は速度論的に安定であって、このような露出において、
核形成中心が基材上に存在しない限り、金メタルは本質的に基材上に堆積せず、
前記部位に核形成中心が存在すると、金原子は前記金供給剤から放出され、前記
核形成中心上に堆積し、前記部位に金メタルが形成される工程、；および（ｃ）前記基材上の金析出物を検出する工程であって、基材上の部位における金
析出物が前記部位における前記物質の存在を示す工程

【００１８】この分析方法は、たとえば（光学または電子顕微鏡であることができる）顕微
鏡による試料の視覚化を含む技術、もしくはあらゆるＳＰＭ（）技術
などの様々な分析技術に、または基材上の特定の分離生成物（たとえば、ゲル中
またはＤＮＡチップなどの固体基材上に含まれる電気泳動またはクロマトグラフ
ィーの分離生成物）の同定に適用できる。このような分析においては、特定の結
合親和性を有する部分が認識グループのひとつのメンバーである前記核形成中心
形成剤の使用によって、核形成中心が形成される。この認識グループは前述のも
のであって、分析される試薬は、そのグループの他方のメンバーである。

【００１９】他の実施の形態によれば、本発明の金析出方法は、試料中の検出体の存在を検
出することを意図する分析に使用される。とくに、本発明は、基材上に保持され
た捕獲剤が用いられ、捕獲剤に特異的に結合した試料中の検出体を検出するよう
な方法に適用することができる。このような捕獲剤は認識グループのメンバーで
あって、検出体はそのグループの他のメンバーである。特定の具体例としては、
試料中のターゲットオリゴヌクレオチドの存在を分析する場合であって、捕獲剤
はそれらと相補性を有するシーケンスを有するオリゴヌクレオチドである。核形
成中心形成部分は、試料中に存在する検出体、たとえば試料中のヌクレオチドに
結合することができ、そして試料を基材と反応させた後で、前述の金析出反応を
実行し、金析出物の形成によって試料中に検出体が存在することが示される。

【００２０】本発明である顕微鏡でのイメージ化のための試料の作成方法は、以下の工程か
らなる。（ａ）試料の選択的部位に核形成中心を形成させるための条件を提供する工程、（ｂ）前記試料を、前記金供給剤および試薬からなる処理組成物と接触させる工
程からなり、前記組成物は速度論的に安定であって、核形成中心が基材上に存在
しないかぎり、金が本質的には試料に析出せず、それによって前記金供給剤から
金原子は放出され、前記選択的部位の前記試料上に堆積する工程

【００２１】本発明である試料中の検出体の存在を検出する方法は、以下の工程からなる。（ａ）もし、試料中に存在するのであれば、試料を処理し、核形成中心形成部分
を検出体に結合させる工程、（ｂ）基材と試料を反応させ、前記検出体に特異的に結合した捕捉剤を保持し、
さらに非結合試料部分を取り除く工程、（ｃ）前記基材を、前記金供給剤および試薬からなる処理組成物と接触させる工
程であって、前記組成物は速度論的に安定であって、核形成中心が基材上に存在
しないかぎり、このような処理によって金メタルが本質的には基材には析出せず
、前記部位における核形成中心の存在下で、金原子は前記金供給剤から放出され
、前記核形成中心に堆積し、前記部位に金メタルを形成する工程；および（ｄ）前記基材上の金堆積物を検出する工程であって、金堆積物が試料中に存在
する検出体の存在を示す工程

【００２２】この方法は、具体的にはオリゴヌクレオチドチップ内で使用される。オリゴヌ
クレオチドチップは、チップ上の別の部位に置かれた、別の捕獲されたオリゴヌ
クレオチドを有している。前記方法を使うと、試料内の別のオリゴヌクレオチド
の多数を同時に分析することができる。

【００２３】そのように調製した試料では、前記選択的な部位が、それおらを視覚化する金
の被膜を有する。前記選択的な部位は、通常、特定の物質を持っており、そして
、核形成中心が、前記特定の物質と特異的な結合親和力のある部分を持つ核形成
中心形成剤により、前記部位において形成される。この方法により、例えば、特
定のセル、細胞器官、特性の物質に富んだ部分などを、はっきりと視覚化するこ
とができる。

【００２４】特定の分離生成物の配置を同定する本発明による方法は、次のステップを有し
ている：（ａ）前記特定の分離生成物を含有する前記基材上にある部位で、核形成中心を
形成することのできる条件を提供し；（ｂ）前記金供給剤と試薬からなる処理組成物と前記基材とを接触する（この組
成物は動的に安定であり、金は主に、核形成中心がある基材のうえに析出し、そ
れにより、そのような接触によって前記金供給剤からの金原子は解放され、金の
金属を形成するために、前記核形成中心上に析出する）（ｃ）基材上に金が存在することを検出する（この金は、金が見つかった部位の
基材上に前記特定の分離生成物があることを示している）

【００２５】試料を、適用条件下の培地（通常、ゲルまたは固体）を通して、異なった基材
の異なった移動速度により様々なフラクションにわける分離技術、例えば電気泳
動、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）などにおいて、核形成中心形成剤は、分
離の前に試料と混合される。これは、通常好ましい。このように核形成中心形成
剤を最初に追加することは、必要な物質が少ないので、より経済的であろう。さ
らに、このような薬剤は、分離の後で基材に適用され、培地の中に位置している
分離した基材に到達するために、培地を通して拡散されなければならない；その
ような拡散は、分離したフラクションの特有の金着色（gold-staining）での限
界因子（limiting factor）である。しかしながら、すぐに認識されるので、分
離の後に核形成中心形成剤を時々加えることも、可能である。

【００２６】本発明はまた、試料内の検出体の存在を分析する方法も提供する。そのような
方法は、以下のステップを有している：（ａ）前記検出体と結合する捕獲剤を担持する基材の提供；（ｂ）前記検出体を前記捕獲剤と結合することによる前記基材と前記試料の接触
；（ｃ）前記検出体を有する前記基材の部位に核形成中心を形成させる条件の供与
；（ｄ）前記基材と前記金供給剤を含む処理組成物の接触。この組成物は動的に安
定であり、金は主に、その上の部位に核形成中心がある基材のうえに析出する；（ｅ）前記基材上にある金属の金の被膜（前記試料に前記検出体が存在すること
を示す）の検出。

【００２７】試料内の検出体の存在を分析する方法のステップ（ｅ）の検出は、基材上の金
被膜の出現を試みることで達成するだろう（金被膜は、サイズやラフさによるが
、黄色からオレンジ、赤色の範囲の色を有しているだろう）。

【００２８】本発明の一形態のとおりに、ステップ（ｅ）での検出は、金被膜の電気伝導度
に基づく。この形態において、捕獲剤は、基材上の電極の間に担持され、または
１つ、あるいはそれ以上の電極上に担持される。そしてステップ（ｄ）の核形成
中心上の金被膜は、電極間の電気的接触をもたらす。ステップ（ｅ）での金被膜
の検出は、電極間の電気的接触の存在を明らかにすること、たとえば、電極間の
電流−電位の関係を測定することにより、達成される。電流電位の関係の大きさ
は、試料の試薬濃度の基準として使用することができる。あるいはまた、電極対
の間、または上に担持された同じ捕獲剤をもつ類似した電極対の大きな配列にお
ける接続の数を明らかにすることで、検出体濃度の定量的な測定も得られるだろ
う。

【００２９】分析された検出体は、上述の評価カップルのいずれかのメンバーとなるだろう
。カップルの他のメンバーは、捕獲剤の一部分として含まれている。ステップ（
ｃ）の核形成中心の形成は、金属粒子、金属原子を含んだクラスター、あるいは
金属含有錯体、金を含んだ分子種を金のメタルにする触媒作用特性をもつ他の種
などの核を形成する部分と結合された捕獲剤によって基材上に捕獲された検出体
と特定の結合親和力をもつ結合部分を有する薬剤の提供である。例えば、検出体
は結合対のメンバーであるが、その結合部分はもう一方のメンバーだろう（たと
えば、検出体が抗原である場合、その核形成中心形成剤は、捕獲剤として使用さ
れる抗体として同じ、あるいは違う抗体であることができる）。本発明は、上記
方法で使用するキットもまた提供する。そのようなキットは、通常、処理組成物
より構成されている。加えて、そのようなキットはまた、基材の特定の部位に核
形成中心形成剤を含んでいる。例えば、上記の結合対のいずれかのメンバーであ
る特定の結合部分を有している。加えて、上記分析方法で使用するキットはまた
、いくつかの形態によると、核形成中心を形成する部分を持つ試料の検出体にし
るしをつけるための試薬システムを含むことができる。さらには、発明のいくつ
かの形態にある通り、このキットは、電極の間、および／または上に配置された
捕獲剤をもつ電極を有する基材を含むことができる。

【００３０】発明を理解するため、実施においてどのように達成されるかを見るために、限
定されない例として、時折図面を参照しながら、好ましい態様を記載する。

【００３１】［好ましい実施の形態による詳細な説明］処理組成物の調製と通常の金析出のスキーム本発明の好ましい実施の形態に関する処理組成物は、金を含有する錯体−Ａｕ ^I ＳＣＮ^-を含む。この処理組成物を調製するために、最初の段階では、ＫＡｕ^II ^I Ｃｌ₄とＫＳＣＮを含む溶液を、２つのストック溶液（通常は、金を含む錯体を
含有するものとＫＳＣＮを含むもの）を混合することにより、調製する。たとえ
ば、そのような溶液は、約０．５ＭのＫＳＣＮを含む第１の溶液と０．０５Ｍの
ＫＡｕ^IIIＣｌ₄を含む第２の溶液を同じ量混合することで、形成される。混合の
結果、ＫＡｕ（ＳＣＮ）₄の錯体が形成される（図１のスキーム（ａ））。この
錯体は、沈殿するが、自然にＫＡｕ^I（ＳＣＮ）₂錯体を形成する。通常、ＫＡｕ ^III （ＳＣＮ）₄が沈殿した後、洗浄し、再び水、あるいは緩衝液中に件濁させる
と、上記したように自発的に反応する（図１のスキーム（ｂ））。

【００３２】ＫＡｕ^I（ＳＣＮ）₂溶液は、例えば、約０．０５５Ｍのヒドロキノン（ＨＱ）
などの還元剤と混合される。ヒドロキノンによる金を含有する錯体の還元は、好
ましくは熱を発生するが、大きな活性化エネルギーと低い前指数（pre-exponent
ial）因子のために、速度はとても低い。ｐＨが約６より低いと、自発的な還元
は事実上ゼロである。したがって、溶液は安定しており、金のメタルは、自発的
に析出しない。

【００３３】しかしながら、図１のスキーム（ｃ）のように、核形成中心（ＮＣ）にさらす
ことにより、触媒として作用し、例えば金コロイドや、他の金属コロイド、金属
原子のクラスター、金属含有錯体、金属イオンなどであることができ、ベンゾキ
ノン（ＢＱ）の形成とともに、金メタル（Ａｕ）は核形成中心の表面に析出する
。

【００３４】ｐＨレベルは、金の析出速度をコントロールする。溶液の酸性化、すなわちｐ
Ｈの低下は、金属の析出をおそくし、一方、塩基を加えると、すなわちｐＨの向
上は、金属の析出速度を早める。

【００３５】塩基性のｐＨ下では、金の自発的な析出は、核形成中心がなくても起こること
を特筆しておかなければならない。

【００３６】処理溶液に最初から加わっていたり、析出の過程で加えられた様々な添加物は
、金の析出過程の速度や金被膜のパターン（被膜のサイズや、表面の粗さ、色な
ど）に影響を与えうる。例えば、処理組成物にハロゲンイオンを加えると、成長
する金属中心の表面に害をおよぼす。これは、金の析出過程の速度を減少させ、
ついには停止させてしまう。このような添加物を使用すると、析出した金の結晶
性、粒子サイズ、金の析出速度、析出した金の表面粗さ、電気的特性などをコン
トロールすることができる。金の析出過程は、様々な他のパラメータ、たとえば
、温度、酸素濃度、光束（light flux）、溶液の攪拌速度などの変化によっても
コントロールされうる。

【００３７】本発明の金の析出過程は、以下で説明するいくつかの例とは別にも様々に応用
することができる。

【００３８】試料の検出体の検出発明の１形態に関する分析は、図２に示されている。この形態では、装置２０
は、電気伝導性の電極２３を担持する非伝導性の基材２２を備えている。基材２
２は、電極間の隙間に、捕獲剤２４を備えている。捕獲剤２４は、分析されるべ
き検出体２６と特定の結合親和力を有している。

【００３９】検出体２６を含む試料Ｓは、核形成中心２８を加えられ、核形成中心が、共有
結合、あるいは非共有結合により検出体と結合されて、修飾検出体３０が生成す
る方法で処理されることにより前処理されている。オリゴヌクレオチド検出体の
場合、このような結合は、例えば、シス−プラチナ−ビオチンの存在下で試料を
加熱し、適切に誘導されたクラスター、例えば、Ａｕ₅₅（Ｐｈ₃Ｐ）₁₂Ｃｌ₆−ス
トレプトアビジン（streptavidin）クラスターを加えることにより生じるだろう
。シス−プラチナ−ビオチンは、オリゴヌクレオチドと結合し、Ａｕ₅₅（Ｐｈ₃
Ｐ）₁₂Ｃｌ₆−ストレプトアビジンは前記ヌクレオチド上のビオチン部分と結合
する。そして核部分が検出体と結合する。非ヌクレオチド検出体の場合は、例え
ばアミノ誘導したクラスターまたはコロイドが検出体のカルボキシ部分と結合す
ること；カルボキシ誘導したクラスターまたはコロイドを検出体のアミノ部分に
結合すること；またマレイミド誘導したクラスターやコロイドを検出体のチオー
ル部分と結合することなどによって、結合されうる。試料のほかの基材もまた、
この過程の核形成中心によりしるしが付されうる。しかしながら、それらは捕獲
剤２４とは結合しない。さらにそれらに結合した核形成中心は、処理後に基材上
に残っていない（下記参照）。

【００４０】デバイス２０に接触して、改質検出体３０が捕獲剤と結合し、基材２２上に固
定化された核形成中心形成錯体３２を生成する。基材の洗浄は、結合されていな
い物質（ＮＢ）を取り除く。

【００４１】デバイス２０は、そののち、ＫＡｕ^I（ＳＣＮ）₂などの金含有錯体およびヒド
ロキノン（ＨＱ）などの還元剤からなる処理溶液３４と接触してもよく、結果的
に核形成中心２８と接触して、金は核形成中心上に堆積し、電極２３間を繋ぐ連
続的な金塊３６を形成する。電極２３が核形成中心として働くのを防ぐために、
それらは、触媒性能に欠ける伝導性材料、たとえば、長鎖のアルキルを有しシリ
カで不活性化した、または、不活性材料でコーティングして不活性化したシリコ
ンからなってもよく、電極が金属からなる場合、金堆積触媒として不活性にする
ために、たとえば、１−オクタデシル−チオールなどの長鎖のアルカンチオール
を含む溶液でインキュベートすることによって、それらを前処理してもよい。

【００４２】電流−電圧の関係を、測定装置４０を用いて測定することによって、その存在
が分析される試料中の検出体の存在を示す電極２３間の電気接点の存在を決定す
ることができる。

【００４３】一般に当業者によって予測されるように、捕獲剤の基材への結合は、多くの方
法によって達成することができる。たとえば、酸化物表面を（ＣＨ₃ＣＨ₂Ｏ）₃
Ｓｉ−Ｒ−Ｘなどのシリコン試薬で誘導することができる。ここで、Ｒは、アル
キル、アリールまたは他のスペーサーであることができ、Ｘは次の捕獲剤の部位
Ｙとの結合のための活性部位であることができる。ＸとＹの性質は、その組み合
わせにより、当業者によく知られ、明らかなように、酸とアミン、ヒドロキシと
酸、付加環化反応、ラジカル反応、求核置換、非共有結合などからなる組み合わ
せから選択することができる。基材が高分子材料からなる場合、結合は、前記の
型の反応またはそのほかのもののいずれによっても、捕獲剤と高分子材料の側鎖
との間でも達成できる。

【００４４】デバイス２０は２つまたはそれより多い電極、典型的には配列された複数の電
極を有することができる。その配列は、異なる幾何学的配置と仮定することがで
きる。同じ捕獲剤を異なる電極対の間に担持させることができ、および／または
、異なる捕獲剤を異なる電極間に堆積することができる。後者の種類のデバイス
は、多くの検出体を同時決定するための多重分析に使用することができる。さら
に、同じ捕獲剤を異なる電極対の間に担持させる場合は、検出体濃度の定量分析
を実行することが可能となりうる。たとえば、濃度は、異なる電極対の間に形成
される電気接点の数に基づいて分析することができる。多くの電気接点は高い濃
度を示し、少しのものは低い濃度に対応する。

【００４５】電極配列は、また、様々な部品、たとえば、ダイオード、トランジスタ、コン
ダクタ、コンデンサなどからなるより複雑な電気的配置の一部とすることができ
る。

【００４６】また別の本発明に係わる分析の実施の形態を、図３に見ることができる。図３
の実施の形態の場合における図２に記載されたものとの主な違いは、核形成中心
２８を検出体２６に結合して改質検出体３０を得るために扱う試料Ｓよりも、む
しろ図３の実施の形態の場合では、核形成中心形成剤１５０が供給されることに
ある。この検出体の他の成分は、図２のものと非常に類似しており、したがって
、図２で使用したものを１００（すなわち“１”プリフィックス）で移行した同
じ参照番号を、３図において、同じような成分を示すために利用した。

【００４７】デバイス１２０を試料と接触させたのち、検出体１２６を捕獲剤１２４と結合
させ、そして試料に含まれる遊離した（結合していない（ＮＢ））検出体分子お
よび他の物質を洗浄したのち、デバイスを、今は捕獲剤１２４と結合している検
出体１２６に対して特異的な結合親和性を有する部位１５２を含み、核形成中心
１５４に結合した核形成中心形成剤１５０と接触させる。このように、固定化核
形成中心１３２が、電極１２３間の隙間の基材に形成される。つぎに、結合され
ていない薬剤１５０（ＮＢ）を除去し、処理組成物１３４を添加したのち、電極
間に、図２に示されるのと同様にして決定することのできる電気接点を与える金
塊１３６を形成する。

【００４８】さらに別の本発明に係わる分析の実施の形態は、図４に見られる。図４では、
図２および３と同様の要素を、１００（すなわち“２”プリフィックス）で移行
された図２で使用したものと同じ参照番号で特徴付けた。検出体２２６を含む試
料Ｓをビオチン２２７と反応させ、検出体ビオチン錯体２３１を有する処理試料
Ｓ’を生成させる。これらを、つぎに、電極２２３間に取り付けられた捕獲剤２
２４を有する基材２２２に接触させて、基材２２２上に改質捕獲錯体２３３を生
成させる。

【００４９】金のコロイド粒子２４０をアビジンまたはストレプトアビジン２４２と反応さ
せ、核形成中心形成剤２４３を生成させる。薬剤２４３を改質基材２２２と接触
させて固定化核形成中心２３５を生成させる。つぎに、その対象物を図２および
３と同様に処理溶液２３４と接触させて、金を堆積させ、電極２２３間に連続的
な金塊２３６を形成することができる。

【００５０】当業者によって予測されることが疑いもないように、前記に示された実施の形
態に様々な変更を施すことが可能である。

【００５１】分離生成物の視覚化本発明の方法は、ゲル電気泳動、ゲルろ過技術、サイズ排除クロマトグラフィ
ー、親和クロマトグラフィー、および他のものなどの多くの分離技術において得
られた分離生成物を視覚化するために用いることができる。これは概念的に図５
に図示されている。

【００５２】基材２００は、様々なレーン２０２を有するゲルまたは固体基材であることが
でき、各レーンは複数のバンド２０４を含み、各バンドは各レーンで分離された
試料の特定のフラクションである。前記基材２００は、前述したいずれの技術に
よっても得ることができる。

【００５３】特定の物質の存在を視覚化し、そのバンドの位置を突き止めるために、核形成
中心２１０においてその物質に特異的に結合する部位２０８を有する核形成中心
形成剤２０６を、基材２００に接触させ、接触（アクセス）ののち、薬剤２０６
を洗い流し、基材を処理溶液２１２と接触させ、結果的に金の堆積物２１４がそ
の物質を含むバンド上に形成される（他のバンドは見えず、図示する目的のため
だけに描かれている）。しかしながら、後で添加された核形成中心形成剤の拡散
は、これらの薬剤が分離された物質に結合するのを達成する制限因子となりうる
ので、好ましくは、核形成中心形成剤２０６は、分離過程の始まる前に基材に添
加する。

【００５４】とりわけ堆積された金塊の表面の粗さを決定することになる厳密な堆積条件に
よれば、バンドの色は黄色から黒の間で変化しうる。様々な視覚化技術を用いれ
ば、バンドの吸光度または透過率の測定に基づいて、分離された物質の定量を行
なうことができる。

【００５５】一方、光学的技術よりも、むしろ金の堆積をさまざまな電気検出技術によって
検出することもできる。これは、たとえば、自動電気検出を可能にする分離マト
リックスを挟む２つの平行配列の電極を付与することによって達成することがで
きる。

【００５６】画像技術におけるコントラストの促進ある構成要素を見るためにコントラスト剤を必要とする多くの画像技術がある
。そのようなものは、原子力顕微鏡などの他の画像技術と同様に、光学顕微鏡、
電子顕微鏡（透過電子顕微鏡、走査電子顕微鏡）における場合である。これまで
、前記画像技術には、銀金属堆積や炭素堆積および他のいくつかがあった。

【００５７】生物学的な試料の場合は、コントラスト促進剤が特定の組織、細胞、細胞器官
などの視覚化を可能にするために必要とされる。

【００５８】本発明に合わせて、図６に図示されるように、目に見えない細胞器官３０４を
有する細胞３０２からなる生物学的試料３００を、細胞器官３０４に含まれる物
質に特異的な結合部位３０８、および核形成中心３１０を有する核形成中心形成
剤３０６に連続してさらすことにより、本発明に沿って処理し、処理組成物３１
２で処理すると、細胞器官３０４は、暗いまたは不透明な堆積物３１４として目
に見える。

【００５９】オリゴヌクレオチドハイブリッドの画像化特定配列のオリゴヌクレオチドの存在と濃度を分析することは、現在では、物
質のわかった位置に結合させた相補性のシークエンスからなるオリゴヌクレオチ
ドプローブを使用して、典型的に行なわれている。特別な、そして広く用いられ
ている前記システムの例は、いわゆるＤＮＡ−チップである。前記チップは、表
面のわかった、そして、考慮した位置に、複数のオリゴヌクレオチドプローブ配
列を担持する表面である。試料は、チップ上のプローブ配列と相補性を有するタ
ーゲット配列を含んでもそうでなくてもよいが、すべてのＤＮＡフラグメントが
（通常、蛍光ラベルによって）ラベルされるように処理する。試料をチップの表
面と適切な条件のもとで接触させると、ターゲットオリゴヌクレオチドは、表面
に相補性配列を担持している位置において結合する。ハイブリッド生成物の検出
は、通常、ラベルされた重複部位の蛍光に続けて行なわれる。ハイブリッド生成
物の位置はプローブの配列を示し、蛍光強度は表面の濃度を示す。

【００６０】今、光学的技術（吸収、反射）、非光学的視覚化技術（ＡＭＦ、ＳＴＭなど）
などの様々な可能な視覚化技術を用いて、ハイブリッド生成物をＤＮＡ−チップ
上で視覚化するのに、本発明の金の堆積方法を応用することを示す図７について
言及する。疑いなく予測されるように、これは、一般にプローブのターゲットへ
の視覚化結合、たとえば、ｃ−ＤＮＡストランドの相補性ストランドへの結合、
抗体の抗原への結合、他の種類の知られている組み合わせのために、本発明の方
法を使用する一例に過ぎない。

【００６１】ＤＮＡ−チップ基材４００は、複数のＤＮＡプローブサイトを担持するが、３
つ４０２、４０４および４０６が例示されており、それぞれが異なるヌクレオチ
ド配列を有している。ターゲットオリゴヌクレオチド４１０を含むことのできる
試料Ｓを、溶液中のすべてのＤＮＡ種がラベル４１２によってラベルされるよう
な方法で処理し、（もし検出体がＳ中に存在するならば）改質検出体を含むこと
のできる改質試料Ｓ’を得る。改質試料Ｓ’をＤＮＡ−チップ物質４００と適切
な条件下で接触させると、もし改質試料Ｓ’に存在するならば、ターゲットオリ
ゴヌクレオチドに、チップ上のＤＮＡプローブが選択的にハイブリッドすること
が可能となる。チップを洗浄したのち、もしチップの異なる部位に存在するなら
ば、ラベルされたオリゴヌクレオチドのラベル４１２に結合することができるよ
うに、核形成中心形成剤４３０をシステムに導入する。洗浄ののち、核形成中心
は、チップ上のプローブと溶液からのターゲットとの間でハイブリッド化が起こ
る位置にのみ存在する。ハイブリッドの視覚化は、本発明の金堆積方法を適用す
ることによって達成され、チップ上の核形成中心から金の粒子が成長し、光学的
技術、ＳＰＭ技術（ＡＦＭ、ＳＴＭなど）などの様々な技術を用いて金４４０の
粒子を検出する。

【００６２】別の実施の形態では、ラベルは、それ自体で核形成中心として働く。そのよう
な場合、核形成中心をラベルに結合させる工程は省略される。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施の形態による処理組成物の合成方法の反応スキーム（スキーム（
ａ）とスキーム（ｂ））と、核形成中心にある金被膜の反応スキーム（スキーム
（ｃ））を示す図である。

【図２】本発明の実施の形態による試料上の検出体の分析の概念を示した図である。

【図３】本発明の別の実施の形態による検出体の分析の概念を示した図である。

【図４】本発明のさらに別の実施の形態による検出体の分析の概念を示した図である。

【図５】クロマトグラフィーまたは電気泳動により分離された、固体またはゲルの基材
上にある特定の結合を強調する方法の概念を図解した図である。

【図６】マイクロスコープ試料の特定の部分の像のための本発明の実施の形態による方
法の概念を図解した図である。

【図７】ある試料のこの特定の例において、検出体、すなわち、特定の配列を有するオ
リゴヌクレオチドの検出のシステムの使用を示した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者アイチェン、ヨアヴイスラエル国、32922 ハイファ、ラモトサピア、ゴットレヴィンストリート 23 (72)発明者シヴァン、ウリイスラエル国、34602 ハイファ、アインスタインストリート 53エーＦターム(参考） 4B024 AA11 AA19 CA01 CA09 CA11 HA14 4B063 QA01 QQ41 QR32 QR50 QR55 QR66 QR82 QS34 QS36 QS39 QX01 QX04

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】基材上の１つまたはそれ以上の部位に金を析出させるための
方法であって、（ａ）前記１またはそれ以上の部位に核形成中心を結合、析出または形成する工
程；（ｂ）前記１またはそれ以上の部位に、金含有分子または錯体である可溶性金供
給剤および試薬からなる処理組成物を接触する工程であって、前記組成物が速度
論的に安定であって、基材上に核形成中心が存在しないかぎり、金が本質的に基
材上に析出せず、前記１つまたはそれ以上の部位における核形成中心の存在下で
、金原子が、前記金供給剤から放出され、前記核形成中心に析出して、前記１つ
またはそれ以上の部位に金金属析出物が形成される工程からなる方法。
【請求項２】（ａ）工程が：（ａ１）金属粒子、金属原子含有クラスターおよび金属含有錯体からなる群の１
つまたはそれ以上である少なくとも１つの核形成中心に結合する前記１つまたは
それ以上の部位に特異的な結合親和性を有する少なくとも１つの部分を有する核
形成中心形成剤を供給する工程；および（ａ２）前記１つまたはそれ以上の部位を前記試薬と接触させる工程からなる請求項１記載の方法。
【請求項３】前記部分が、相互に特異的に結合する２つまたはそれ以上の
分子または錯体からなる認識グループのメンバーであり、他のメンバーが前記１
つまたはそれ以上の部位に含まれるか、または、部位を形成する請求項２記載の
方法。
【請求項４】前記認識グループが、抗原および抗体または抗原結合領域を
有する抗体誘導体；砂糖およびレクチン；レセプターおよびリガンド；ヌクレオ
チド配列および相補性を有するヌクレオチド配列；ヌクレオチド配列およびその
結合タンパク質または他の特異的結合剤；ビオチンおよびアビジンまたはストレ
プトアビジン；セルロースまたはキチンおよびセルロース結合領域からなる群の
メンバーである請求項３記載の方法。
【請求項５】前記核形成中心が金粒子または金原子含有クラスターである
請求項２、３または４記載の方法。
【請求項６】前記処理組成物が水溶液である請求項１、２、３、４または
５記載の方法。
【請求項７】前記金供給剤がＡｕ^I（ＳＣＮ）₂ ^-である請求項６記載の方
法。
【請求項８】前記試薬が、ヒドロキノンまたはナフトヒドロキノンである
請求項７記載の方法。
【請求項９】基材上の部位における特定の物質の存在を分析するための方
法であって、（ａ）前記物質を有する部位に核形成中心を形成させる条件を付与する工程、（ｂ）前記基材を、金含有分子または錯体である可溶性金供給剤および試薬から
なる処理組成物と接触させる工程であって、前記組成物が速度論的に安定であっ
て、そのようにさらすことによって、核形成中心が基材上に存在しない限り、金
金属が本質的に基材上に析出せず、前記部位に核形成中心が存在すると、金原子
が前記金供給剤から放出され、前記核形成中心上に析出し、前記部位に金金属析
出物が形成される工程；および（ｃ）前記基材上の金属金析出物を検出する工程であって、基材上の部位におけ
る金析出物が前記部位における前記物質の存在を示す工程からなる方法。
【請求項１０】工程（ａ）が、（ａ１）前記物質に対する特異的な結合親和性を有し、金属粒子、金属原子含有
クラスターおよび金属含有錯体からなる群の１つまたはそれ以上である少なくと
も１つの核形成中心に結合する少なくとも１つの部分を有する核形成中心形成剤
を供給する工程；および（ａ２）前記基材を前記薬剤に接触させる工程からなる請求項９記載の方法。
【請求項１１】前記部分が、相互に特異的に結合する２分子または錯体か
らなる認識対の一方のメンバーに含まれ、他方のメンバーが前記物質に含まれる
か、または前記物質を構成する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】前記認識対が、抗原および抗体または抗原結合領域を有す
る抗体誘導体；砂糖およびレクチン；レセプターおよびリガンド；ヌクレオチド
配列および相補性を有するヌクレオチド配列；ヌクレオチド配列およびその結合
タンパク質またはほかの特異的結合剤；ビオチンおよびアビジンまたはストレプ
トアビジン；セルロースまたはキチンおよびセルロース結合領域からなる群のメ
ンバーであり、前記部分が前記認識対の一方であり、前記物質が他方であるかま
たは他方を含む請求項１１記載の方法。
【請求項１３】試料中の特定のターゲット配列を有する１またはそれ以上
のターゲットオリゴヌクレオチドの存在を検出するための請求項９、１０、１１
または１２記載の方法であって：（ａ）それぞれ前記ターゲット配列に相補性を有するプローブ配列を有する１つ
またはそれ以上のプローブヌクレオチドを担持する基材を供給する工程；（ｂ）前記基体を試料と接触させ、ターゲットオリゴヌクレオチドがプローブオ
リゴヌクレオチドにハイブリダイズする核形成中心の形成を可能とする条件を付
与する工程；（ｃ）前記基材を、金含有分子または錯体である金供給剤および試薬からなる処
理組成物と接触させる工程であって、前記組成物が速度論的に安定であって、さ
らすことによって、核形成中心が基材上に存在しないかぎり、金金属が本質的に
は基材上に析出せず、前記部位における核形成中心の存在下で、金原子が前記金
供給剤から放出され、前記核形成中心に析出し、前記部位に金金属析出物を形成
する工程；および（ｄ）前記基材上の金属金析出物を検出する工程であって、基材上の部位の金析
出物が前記部位に前記物質が存在することを示す工程からなる方法。
【請求項１４】工程（ｂ）が（ｂ１）前記試料を処理して、試料中のオリゴヌクレオチドにラベルを結合する
工程；（ｂ２）前記試料を前記基材に接触させる工程；および（ｂ３）前記基材に前記ラベルに特異的に結合することができる核形成中心含有
剤を接触させる工程からなる請求項１３記載の方法。
【請求項１５】前記工程（ｂ）が（ｂ１）前記試料を処理してその中に存在するオリゴヌクレオチドに核形成中心
を結合する工程；および（ｂ２）前記試料を前記基材と接触させる工程からなる請求項１３記載の方法。
【請求項１６】前記核形成中心が金粒子または金原子含有クラスターであ
る請求項９、１０、１１、１２、１３、１４または１５記載の方法。
【請求項１７】前記処理組成物が水溶液である請求項９、１０、１１、１
２、１３、１４、１５または１６記載の方法。
【請求項１８】前記金供給剤がＡｕ^I（ＳＣＮ）₂ ^-であり、前記試薬がキ
ノンである請求項１７記載の方法。
【請求項１９】前記基材が画像化技術における観察のための試験片である
請求項９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８記載の
方法。
【請求項２０】顕微鏡観察のための試験片を製造するための請求項１９記
載の方法であって、（ａ）前記試験片の選択的な部位に核形成中心を形成させる条件を付与する工程
；および（ｂ）前記試験片を、金含有分子または錯体である可溶性金供給剤および試薬か
らなる処理組成物と接触させる工程であって、前記組成物が速度論的に安定であ
って、金が本質的に、核形成中心がその上に存在する試験片上に析出しておらず
、それによって、前記金供給剤から金原子が放出され、前記試験片上に選択的部
位に析出する工程からなる方法。
【請求項２１】前記基材が試料の分離されたフラクションを含有する請求
項９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８記載の方法
。
【請求項２２】前記基材上における特定の分離生成物の位置を同定するた
めの請求項２１記載の方法であって：（ａ）前記特定の分離生成物を含有する前記基材上の部位に核形成中心を形成す
ることのできる条件を付与し；（ｂ）前記基材に、金含有分子または錯体である可溶性金供給剤および試薬から
なる処理組成物を接触させる工程であって、前記組成物が動的に安定であり、金
は主にその上に核形成中心が存在する基材のうえに析出し、それにより、そのよ
うな接触によって前記金供給剤から金原子が放出され、前記核形成中心上に析出
する工程；および（ｃ）前記基材上に金が存在することを検出する工程であって、前記金が、金が
検出された部位の基材上に前記特定の分離生成物が存在することを示す工程からなる方法。
【請求項２３】試料中の検出体の存在を分析する方法であって（ａ）前記検出体と結合する捕獲剤を担持する基材を供給する工程；（ｂ）前記基材を前記試料と接触させる工程であって、前記検出体が前記捕獲剤
と結合する工程；（ｃ）前記検出体を有する前記基材の部位に核形成中心を形成させる条件を供与
する工程；（ｄ）前記基材を、可溶性金含有分子または錯体および試薬からなる処理組成物
と接触させる工程であって、前記組成物が動的に安定であり、金が主にその上の
部位に核形成中心を有する基材上に析出する工程；（ｅ）前記基材上の前記試料に前記検出体が存在することを示す金属金析出物を
検出する工程からなる方法。
【請求項２４】工程（ｃ）が（ｃ１）前記検出体に対する特異的な結合親和性を融資、金属粒子、金属原子の
クラスターおよび金属含有錯体からなる群の１つまたはそれ以上である少なくと
１つの核形成中心と結合した少なくとも１つの部位を有する核形成中心形成剤を
供給する工程；および（ｃ２）前記基材を前記薬剤と接触させる工程からなる請求項２３記載の方法。
【請求項２５】前記検出体が、抗原および抗体または抗原結合領域を有す
る抗体誘導体；砂糖およびレクチン；レセプターおよびリガンド；ヌクレオチド
配列および相補性を有するヌクレオチド配列；ヌクレオチド配列およびその結合
タンパク質またはほかの特異的な結合剤；ビオチンおよびアビジンまたはストレ
プトアビジン；セルロースまたはキチンおよびセルロース結合領域からなる結合
対の一方であり、前記少なくとも１つの部位が前記結合対の他方である請求項２
４記載の方法。
【請求項２６】工程（ｂ）が（ｂ１）前記試料を核形成中心と接触させる工程であって、核形成中心が金属粒
子、金属原子のクラスターおよび金属含有錯体からなる群の１つまたはそれ以上
であり、試料が存在すると、前記核形成中心が検出体と結合する条件を付与する
工程；および（ｂ２）前記基剤を前記捕獲剤と結合した修飾検出体と接触させる工程からなる請求項２３記載の方法。
【請求項２７】検出体が、抗原および抗体または抗原結合領域を有する抗
体誘導体；砂糖およびレクチン；レセプターおよびリガンド；ヌクレオチド配列
および相補性を有するヌクレオチド配列；ヌクレオチド配列およびその結合タン
パク質またはほかの特異的結合剤；ビオチンおよびアビジンまたはストレプトア
ビジン；セルロースまたはキチンおよびセルロース結合領域からなる結合対の一
方であり、前記捕獲剤が前記結合対の他方である請求項２６記載の方法。
【請求項２８】前記捕獲剤を電極間の基体上に担持さることによって、工
程（ｄ）において前記核形成中心が前記電極間に電気的接点を形成するようにし
；かつ工程（ｅ）における金析出物の検出を前記電極間の電流−電位の関係を測定する
ことによって行なう請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の方法。
【請求項２９】前記少なくとも１つの金属粒子、金属原子クラスターまた
は金属含有錯体が金粒子または金原子含有クラスターである請求項２３、２４、
２５、２６、２７または２８記載の方法。
【請求項３０】前記処理組成物が水溶液である請求項２３、２４、２５、
２６、２７、２８または２９記載の方法。
【請求項３１】前記金供給剤がＡｕ^I（ＳＣＮ）₂ ^-である請求項３０記載
の方法。
【請求項３２】前記試薬がヒドロキノンである請求項３１記載の方法。
【請求項３３】請求項１〜３２のいずれか記載方法に使用するためのキッ
ト。
【請求項３４】金含有分子または錯体である可溶性金供給剤および試薬か
らなる処理組成物を含み、前記組成物が速度論的に安定であり、基体との接触に
よって、金が本質的に核形成中心を含有する基体の部位にのみ析出する請求項３
３記載のキット。
【請求項３５】さらに、前記基体上の１つまたはそれ以上の部位に核形成
中心を形成するための核形成中心形成剤を含み、前記形成剤がそれぞれ少なくと
も１つの核形成中心部分に結合した前記１つまたはそれ以上の部位に存在する物
質に特異的な結合親和性を有する少なくとも１つの部分を有し、前記部分が金属
粒子、金属原子のクラスターおよび金属含有錯体からなる群の１つまたはそれ以
上である請求項３３または３４記載のキット。
【請求項３６】試料中の検出体を分析するための請求項２３、２４、２５
、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２記載の方法において使用する
ためのキットであって：（ｉ）前記検出体に結合する補核剤を担持した基材；（ii）前記検出体が固定化される基材の部位にある核形成中心形成剤；（iii）可溶性金含有分子または錯体および試薬からなり、速度論的に安定であ
って金が本質的に基材上の核形成中心を有する部位においてのみ基材上に析出す
る処理組成物からなるキット。
【請求項３７】前記核形成中心形成剤が、核形成中心および前記核形成中
心を前記検出体に結合させるために必要な物質からなる請求項３６記載のキット
。
【請求項３８】さらに、それぞれ、前記検出体にたいする特的な結合親和
性を有する少なくとも１つの部分を有し、金属粒子、金属原子のクラスターおよ
び金属含有錯体からなる群の１つまたはそれ以上である少なくとも１つの核形成
中心部分と結合する核形成中心形成剤を含む請求項３６記載のキット。
【請求項３９】前記基材が、２つまたはそれ以上の電極からなり、前記捕
獲剤が電極間の隙間に担持されている請求項３６、３７または３８記載のキット
。