JP2002522497A - Ｃ３ａ受容体リガンド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 新規Ｃ３Ａリガンドが提供される。免疫および炎症性疾患治療のための本発明の化合物の使用方法もまた提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規Ｃ３Ａ受容体リガンド、これらの化合物を含む医薬組成物およ
び炎症治療のためのこの化合物の使用方法に関する。

【０００２】 （発明の背景） アナフィラトキシンは、補体の活性化の間にインビボで生じるＣ５、Ｃ３およ
びＣ４の７４〜７７個のアミノ酸の生物活性フラグメントである。アナフィラト
キシンは、ある特定の細胞の表面にある受容体に結合することで炎症プロセスを
開始させ持続させる。該フラグメントは、ヒスタミン、サイトカインおよび他の
炎症メディエーターの放出を伴うマスト細胞および好塩基性細胞の脱顆粒を引き
起こし、平滑筋細胞収縮を誘発すると考えられている。それらのフラグメントは
、細胞性脱顆粒、平滑筋収縮、アラキドン酸代謝、サイトカイン放出、細胞の走
化性を誘発する強力な炎症メディエーターである。Gerard, C., and Gerard, N.
P. (1994) Annu. Rev. Immunol. 12, 775-808；Hugli, T.E. (1984) Springer S
emin. Immunopathol. 7, 193-219；Bitter-Suermann, D. (1988) in The Comple
ment System, Ed. by K. Rother & G. Till, Springer Verlag, Heidelberg 367
-395 を参照のこと。

【０００３】 本発明のフラグメントは、多くの炎症性疾患の病因に関与している。Vogt, W.
(1986) Complement 3, 177-188；Morgan, B.P. (1994) European J Clin Inves
tigation 24, 219-228 を参照のこと。モルモットの血小板、ラットのマスト細
胞、ヒトの好中球、好酸球および血小板上にＣ３Ａ受容体（Ｃ３Ａ−Ｒ）が存在
することが研究により明らかにされた（Bitter-Suermann, D. (1988) in The Co
mplement System, Ed. by K. Rother & G. Till, Springer Verlag, Heidelberg
367-395）。単一クラスの高親和性Ｃ３Ａ結合部位が、ヒト好中球および分化し
たＵ９３７細胞にて特徴付けられた（Klos, A., Bank, S., Gietz, C., Bautsch
, W., Koehl, J., Burg, M., and Kretzschmar, T. (1992) Biochemistry 31, 1
1274-11282）。競争結合および機能的脱感作の研究は、Ｃ５Ａ−Ｒと異なるＣ３
Ａの受容体の存在と一致している（Bitter-Suermann, D. (1988) in The Comple
ment System, Ed. by K. Rother & G. Till, Springer Verlag, Heidelberg 367
-395；Klos, A., Bank, S., Gietz, C., Bautsch, W., Koehl, J., Burg, M., a
nd Kretzschmar, T. (1992) Biochemistry 31, 11274-11282）。しかしながら、
Ｃ３ＡおよびＣ４Ａは、この２種類のアナフィラトキシンがモルモットの回腸組
織を交差脱感作するので同じ受容体に結合することが証明されているが（Hugli,
T. E. (1984) Springer Semin. Immunopathol. 7, 193-219；Bitter-Suermann,
D. (1988) in The Complement System, Ed. by K. Rother & G. Till, Springe
r Verlag, Heidelberg 367-395）、モルモットのマクロファージを用いた他の研
究者らは、別々の受容体があると指摘している（Murakami, Y., Yamamoto, T.,
Imamichi, T., Nagasawa, S. (1993) Immunol. Lett. 36, 301-304）。Ｃ３Ａ−
Ｒの機能的活性は、百日咳毒素に敏感であり、結合部位がＧＰＣＲで構成されて
いることと一致する（Klos, A., Bank, S., Gietz, C., Bautsch, W., Koehl, J
., Burg, M., and Kretzschmar, T. (1992) Biochemistry 31, 11274-11282）。

【０００４】 クローン化受容体が無いため、炎症性応答の病因におけるＣ３Ａの役割を完全
に理解することが妨げられてきた。本発明は、ヒトＣ３Ａ受容体の使用方法およ
び機能的特徴付け方法を提供する。この同じ受容体は、最近、独立して、ｆＭｅ
ｔＬｅｕＰｈｅ受容体プローブを用いる低ストリンジェンシースクリーニングに
よりＨＬ−６０ライブラリーからクローン化されたが、機能データを欠いており
、オーファン受容体（ＡＺ３Ｂ,８）であると主張された。ＡＺ３Ｂを発現する
マウスＬ細胞は、試験したアゴニストと結合せず応答しなかったが、Ｃ３Ａは試
験されなかった（Roglic, A., Prossnitz, E.R., Cavanagh, S. L., Pan, Z, Zo
u, A. & Ye, R.D. (1996) Biochimica et Biophysica Acta 1305, 39-43）。本
発明は、Ｃ３Ａ受容体機能を拮抗する化合物を開示する。

【０００５】 明らかに、機能不全および疾患における炎症作用およびそれらの役割を媒介す
る因子が必要とされている。したがって、Ｃ３Ａ受容体機能を拮抗し、機能不全
または疾患の予防、改善または治療における役割を果たすことができる化合物の
同定および特徴付けが必要とされている。

【０００６】 このように、Ｃ３Ａリガンドは、慢性関節リウマチ、アルツハイマー病、乾癬
、通風、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、糸球体腎炎および成人呼吸窮迫症候
群などの免疫および炎症性疾患の薬物療法に対して独特な方法を提供する。

【０００７】 （発明の概要） 本発明は、下記式（Ｉ）で示される化合物、ならびにアナフィラトキシンの補
体活性および／または濃度増加に伴う、慢性関節リウマチ、アルツハイマー病、
乾癬、通風、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、糸球体腎炎および成人呼吸窮迫
症候群を包含するがこれらに限定されるものではない種々の疾患の治療において
有用であるＣ３Ａ受容体リガンドとしてのそれらの使用を包含する。 本発明は、さらに、ヒトを含む動物におけるＣ３Ａ受容体の拮抗方法であって
、かかる拮抗作用を必要とする動物に有効量の下記式（Ｉ）で示される化合物を
投与することからなる方法を提供する。

【０００８】 （発明の詳細な記載） 本発明の化合物は、下記式（Ｉ）：

【化２】 ［式中、 Ａは、非置換またはＣ_１−４アルキルもしくはアリールにより置換されていて
もよいＣ_１−４アルキレンを表すか；または Ａは、隣接するフェニル環と一緒になって５員〜８員の縮合脂肪族環を形成し
； ｍは、１〜３の整数であり； 各Ｒ_１は、独立して、ハロ、Ｃ_１−４アルキル、メタンスルホニル、アルコキ
シ、ニトリル、ジメチルアミン、メチレンジオキシおよびＣＦ_３からなる群から
選択され； Ｒ_２は、水素またはメチルである］ で示される化合物から選択される。

【０００９】 好ましくは、Ａは、フェネチルを表す。 好ましくは、ｍは、０である。 好ましくは、Ｒ_１は、水素を表す。 好ましくは、Ｒ_２は、水素を表す。

【００１０】 本明細書で用いる場合、「アルキル」なる用語は、炭素−炭素単結合によって
一緒に結合した置換されてもよい炭化水素基を示す。アルキル炭化水素基は、直
鎖、分枝鎖または環状であってよく、飽和していてもまたは飽和していなくても
よい。好ましくは、該基は、直鎖である。好ましくは、該基は、非置換である。
好ましくは、該基は、飽和している。

【００１１】 本明細書で用いる場合、「シクロアルキル」なる用語は、３員〜７員炭素環を
示す。 本明細書で用いる場合、「ヘテロシクロアルキル」なる用語は、Ｎ、Ｏおよび
Ｓから選択されるヘテロ原子１〜２個を含む４員〜７員複素環を示す。 本明細書で用いる場合、「アリール」なる用語は、共役π電子系を有する少な
くとも１個の環を有し、２個までの共役結合または縮合した環系を含む、置換さ
れてもよい芳香族基を示す。「アリール」なる用語は、炭素環式アリール、複素
環式アリールおよびビアリール基を包含し、それら全ては置換されていてもよい
。好ましいアリール基は、フェニルである。 本明細書で用いる場合、「アシル」なる用語は、アルキルカルボニルを示す。

【００１２】 本発明の化合物は、１個またはそれ以上の不斉炭素原子を含み、ラセミ体およ
び光学活性形態で存在してもよい。これらの化合物およびジアステレオマーの全
ては本発明の範囲内にある。

【００１３】 本発明の好ましい化合物としては、以下の化合物が挙げられる： １−ナフチルオキシアセチルアルギニン； １−[７−(４−ヒドロキシフェニルメチル)ナフチルオキシ]アセチルアルギニ
ン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン； (３−クロロベンジルオキシ)アセチルアルギニン； ２−ナフチルオキシアセチルアルギニン； (２,３−ジメチルフェノキシ)アセチルアルギニン； ８−(キノリニルオキシ)アセチルアルギニン； ６−(キノリニルオキシ)アセチルアルギニン； ２−(１−ブロモナフチルオキシ)アセチルアルギニン； (４−ベンジルオキシフェノキシ)アセチルアルギニン；および ２−(６−メトキシナフチルオキシ)アセチルアルギニン。

【００１４】 本発明のさらに好ましい化合物としては、以下の化合物が挙げられる： １−ナフチルオキシアセチルアルギニン； １−[７−(４−ヒドロキシフェニルメチル)ナフチルオキシ]アセチルアルギニ
ン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン；および ２−ナフチルオキシアセチルアルギニン。

【００１５】 本発明の最も好ましい化合物としては、以下の化合物が挙げられる： １−ナフチルオキシアセチルアルギニン；および (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン。 本発明の特に好ましい化合物は、(２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアル
ギニンである。

【００１６】 本発明の化合物はまた、その医薬上許容される塩および複合物として処方する
こともできる。医薬上許容される塩は、その化合物を投与する量および濃度にお
いて非毒性の塩である。

【００１７】 医薬上許容される塩は、酸付加塩、例えば、硫酸塩、塩酸塩、フマル酸塩、マ
レイン酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石
酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−
トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩およびキナ酸塩を含む
酸塩付加塩を包含する。医薬上許容される塩は、塩酸、マレイン酸、硫酸、リン
酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホ
ン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シク
ロヘキシルスルファミン酸、フマル酸およびキナ酸から調製することができる。

【００１８】 医薬上許容される塩は、また、酸性官能基、例えば、カルボン酸またはフェノ
ールが存在する場合、塩基付加塩、例えば、ベンザチン、クロロプロカイン、コ
リン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、プロカイン、アル
ミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、アン
モニウム、アルキルアミンおよび亜鉛を含む塩基付加塩も包含する。

【００１９】 本発明は、標準的技法を用いて調製できる上記式（Ｉ）で示される化合物を提
供する。本明細書に記載した好ましい化合物を調製するための包括的ストラテジ
ーは、このセクションに記載するように行うことができる。下記実施例は、特定
の化合物の合成を例示している。本明細書に記載のプロトコルをモデルとして用
いると、当業者は、本発明の別の化合物を容易に調製することができる。 全ての試薬および溶媒は、市販品であった。出発物質（例えば、アミンおよび
エポキシド）は、標準的な技法および方法を用いて合成した。本発明は、標準的
技法を用いて調製できる上記式（Ｉ）で示される化合物を提供する。本明細書に
記載した好ましい化合物を調製するための包括的ストラテジーは、このセクショ
ンの記載に従って行うことができる。下記実施例は、特定の化合物の合成を例示
している。本明細書に記載のプロトコルをモデルとして用いると、当業者は、本
発明の別の化合物を容易に調製することができる。 全ての試薬および溶媒は、市販品であった。出発物質は、標準的技法および方
法を用いて合成した。

【００２０】 アリールオキシアセチルアルギニン（例えば、５）は、固相上で製造すること
ができる。Ｆｍocアルギニン(Ｂoc)_２（１）のような適当に保護したアルギニン
誘導体を、ジイソプロピルアミンのようなアミン塩基を用いてクロロトリチル樹
脂にカップリングさせて２を得る。脱保護し、ブロモ酢酸を用いて誘導すること
によりブロモアセトアミド中間体３を得る。これを、ＤＭＳＯ中、炭酸カリウム
またはアミン塩基などの塩基性条件下で加熱しながらアリールアルコールと反応
させて、アリールオキシアセチル生成物４を得る。トリイソプロピルシラン、ジ
メチルスルフィド、エタンジチオール、アニソール、水またはこれらを組合せた
ものなどの陽イオンスカベンジャーの存在下でＴＦＡを用いて脱保護して開裂生
成物５を得る。

【００２１】 アルキルオキシおよびアリールオキシ誘導体は、Ｆｍocアルギニン(Ｍtr)（６
）のような適当に保護されたアルギニン誘導体をＷａｎｇ樹脂とカップリングさ
せることにより製造することができる。脱保護し、アルキルオキシ酢酸またはア
リールオキシ酢酸とカップリングさせて、保護された樹脂結合中間体７を得る。
最後に、陽イオンスカベンジャーの存在下でＴＦＡを用いて脱保護して最終生成
物８を得る。

【００２２】

【化３】

【００２３】 いずれもの化学的官能基の適当な操作および保護を用いて、式（Ｉ）で示され
る残りの化合物の合成は、上記方法および実験セクションに記載する方法と類似
の方法により行われる。

【００２４】 式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩をヒトおよび他の哺
乳動物の治療に使用するためには、それは、通常、標準的な製薬プラクティスに
従って医薬組成物として製剤化される。

【００２５】 本発明のリガンドは、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、経口
投与、局所投与、経皮投与または経粘膜投与を包含する種々の経路により投与す
ることができる。全身投与については、経口投与が好ましい。経口投与について
は、例えば、当該化合物を、カプセル剤、錠剤および液体調製物、例えば、シロ
ップ剤、エリキシル剤および濃縮滴剤などの慣用経口投与剤形に製剤化すること
ができる。

【００２６】 別法として、注射（非経口投与）、例えば、筋肉注射、静脈注射、腹腔内注射
および皮下注射を用いることができる。注射については、本発明の化合物は、液
体溶液、好ましくは、生理学上適合するバッファーまたは溶液、例えば、生理食
塩水、ハンクス溶液またはリンゲル溶液中にて製剤化される。さらに、当該化合
物は、固体形態に製剤化されてもよく、使用直前に溶解または懸濁される。凍結
乾燥形態もまた調製することができる。

【００２７】 全身投与は、また、経粘膜または経皮手段によることができる。経粘膜または
経皮投与については、障壁を透過するのに適した浸透剤を製剤中に用いる。かか
る浸透剤は、一般に、当該技術分野で知られており、例えば、経粘膜投与につい
ては、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が挙げられる。さらに、界面活性剤を用
いて透過を容易にしてもよい。経粘膜投与は、例えば、鼻用スプレー剤、直腸用
坐剤、または膣用坐剤を介してもよい。

【００２８】 局所投与については、本発明の化合物は、一般に、当該技術分野で知られてい
るように、軟膏剤（ointments）、軟膏剤（salves）、ゲル剤、またはクリーム
剤に製剤化することができる。

【００２９】 種々のカルシウム溶解性化合物の投与量は、化合物ＩＣ５０、ＥＣ５０、化合
物の生物学的半減期、患者の年齢、大きさおよび体重、ならびに患者に関連する
疾患または障害などの因子を考慮して標準的な方法により決定することができる
。

【００３０】 投与量は、また、投与経路および経口生物学的利用能の程度に依存する。例え
ば、経口生物学的利用能が低い化合物については、相対的に高い投与量を投与し
なければならないであろう。

【００３１】 好ましくは、当該組成物は、一回投与型剤形である。経口投与については、例
えば、錠剤、またはカプセル剤を投与してもよく、鼻への投与については、定量
型エアゾール剤を投与してもよく、経皮投与については、局所製剤またはパッチ
剤を投与してもよく、経粘膜デリバリーについては、バッカルパッチ剤を投与し
てもよい。各々の場合、投薬は、患者が一回投与量を投与できるようにする。

【００３２】 経口投与用の各投与単位は、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容
される塩を、遊離塩基に換算して、適当には、０.０１〜５００ｍｇ／ｋｇ、好
ましくは、０.１〜５０ｍｇ／ｋｇ含有する。経口経路、経鼻経路、経口吸入経
路、経粘膜経路または経皮経路用の日用量は、式（Ｉ）で示される化合物を、適
当には、０.０１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ含有する。局所製剤は、式（Ｉ）で示
される化合物を、適当には、０.０１〜５.０％含有する。有効成分は、当業者に
容易に明らかなように、所望の活性を示すのに十分な量を１日１〜６回、好まし
くは、１回投与する。

【００３３】 本明細書において、疾患の「治療」なる用語は、疾患の予防（prevention）、
遅延および予防（prophylaxis）を包含するが、これらに限定されるものではな
い。

【００３４】 治療または予防できる疾患および障害としては、慢性関節リウマチ、アルツハ
イマー病、乾癬、痛風、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、糸球体腎炎および成
人呼吸窮迫症候群などの免疫および炎症関連疾患または障害が挙げられる。

【００３５】 経口投与した場合に活性である式（Ｉ）で示される化合物およびそれらの医薬
上許容される塩は、シロップ剤、錠剤、カプセル剤およびロゼンジ剤として製剤
化することができる。シロップ剤は、一般に、当該化合物または塩の、フレーバ
ーまたは着色料を含有する、エタノール、落花生油、オリーブ油、グリセリンま
たは水などの液体担体中懸濁液または溶液からなる。当該組成物が錠剤の剤形で
ある場合、固体製剤の調製に慣用的に用いられる医薬担体を用いることができる
。かかる担体の例としては、ステアリン酸マグネシウム、白土、タルク、ゼラチ
ン、アラビアガム、ステアリン酸、デンプン、ラクトースおよびスクロースが挙
げられる。当該組成物がカプセル剤の剤形である場合、例えば、ハートゼラチン
カプセルシェル中に上記担体を用いるような慣用的なカプセル化が適当である。
当該組成物がソフトゼラチンシェルカプセルの剤形である場合、例えば、水性ガ
ム、セルロース、シリケートまたは油などの分散液または懸濁液を調製するのに
慣用的に用いられる医薬担体が考えられ、ソフトゼラチンカプセルシェルに取り
込まれる。

【００３６】 典型的な非経口組成物は、当該化合物または塩の、非経口上許容される油、例
えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油ま
たは胡麻油などを含有していてもよい無菌水性または非水性担体中溶液または懸
濁液からなる。

【００３７】 吸入用の典型的な組成物は、液剤、懸濁剤もしくは乳剤の剤形、またはジクロ
ロジフルオロメタンもしくはトリクロロフルオロメタンなどの慣用の噴射剤を用
いるエアゾール剤の剤形である。

【００３８】 典型的な坐剤製剤は、この方法で投与した場合に活性である式（Ｉ）で示され
る化合物またはその医薬上許容される塩を、結合剤および／または滑沢剤、例え
ば、高分子グリコール、ゼラチン、カカオ脂、または他の低融点植物油脂または
それらの合成アナログと一緒に含有する。

【００３９】 典型的な皮膚および経皮製剤は、慣用の水性または非水性ビヒクルを含有し、
例えば、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤またはパスタ剤である、または、薬
用プラスター剤、パッチ剤または膜剤の剤形である。

【００４０】 好ましくは、当該組成物は、一回投与剤形であり、例えば、錠剤、カプセル剤
または計量該エアゾール剤であり、患者は、一回投与量を投与することができる
。

【００４１】 本発明の化合物を本発明に従って投与した場合、許容されない毒物的作用は、
予想されない。 式（Ｉ）で示される化合物の生物活性は、下記試験により示される。

【００４２】 ＲＢＬ−２Ｈ３細胞におけるＣ３Ａ受容体の安定な発現 哺乳類細胞中での発現用にＣ３Ａ受容体を調製するために、完全なＣ３Ａ受容
体オープンリーディングフレームを含む、１.６ｋｂのｃＤＮＡフラグメントを
ＰＣＲ増幅法によって得た。該フラグメントを哺乳類発現ベクターであるｐＣＤ
Ｎ（Aiyar, N., et al. (1994) Mol. Cell. Bio. 131, 75-86）のＫｐｎＩ／Ｈ
ｉｎｄ ＩＩＩ部位にサブクローンした。ＰＣＲ増幅法に用いたオリゴヌクレオ
チドプライマーは、5'-GA AGT GGT ACC ATG GCG TC-3'および5'-GC TCC AAG CTT
TCA CAC AGT TG-3'（下線部は、翻訳開始コドンおよび停止コドンである）であ
る。DeMartino, J.A., et al., (1994) J. Biol. Chem. 269, 14446-14450 の記
載に正確に従って、ｐＣＤＮ哺乳類発現ベクター中のＣ３Ａを用いてＲＢＬ−２
Ｈ３細胞を電気穿孔処理した（Aiyar, N. et al., (1994) Mol. Cell. Bio. 131
, 75-86）。個々のＧ４１８耐性（４００μｇ／ｍｌ）コロニーを単離し膨張さ
せた。カルシウム動員アッセイにおいてＣ３Ａに応答する細胞系の能力によって
決定されるＣ３Ａ受容体を発現するクローン細胞系をさらなる機能および結合の
実験のために選択する。

【００４３】 膜の製造 ５％ＣＯ_２／９５％空気を有する加湿インキュベーター中、非必須アミノ酸、
１０％ウシ胎児血清および４００μｇ／ｍｌのＧ４１８を補足したアール（Ｅａ
ｒｌｓ）ＭＥＭ中にて、３７℃で、ヒトＣ３Ａ受容体（ｈＣ３ＡＲ）を発現する
ＲＢＬ−２Ｈ３細胞を集密になるまで培養した。この細胞系は、通常、付着して
いるが、付着していない細胞は、常に、培養物中に存在する。この非付着細胞を
懸濁液中で増殖させた。３個のＴ−１５０フラスコから得た非付着細胞を１,０
００×ｇで１０分間遠心分離し、２５０ｍｌの振盪フラスコの中の上記培地５０
−ｍｌに再懸濁させ、７〜１０日間にわたって細胞をスピナーフラスコ中で２.
５リットルに膨張させた。細胞を４℃で１,０００×ｇで１０分間遠心分離して
収穫し、ロスらの方法（Ross et al., (1977)）の改良方法を用いて膜を単離し
た。すなわち、細胞ペレットをＰＢＳで洗浄し、低張膜バッファー（２０ｍＭ
Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７.５）、２ｍＭ ＭgＣl_２、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴ
Ｔ、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、１μＭロイペプチン、１μＭ
ペプスタチンＡ）３０ｍｌに再び懸濁させ、氷面上で５分間インキュベートした
。細胞懸濁液を４０ｍｌのダンス（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイザーにてホモジナ
イズし、１,０００×ｇで１５分間遠心分離して核および細胞片を除去した。細
胞膜を４℃で１００,０００×ｇで３０分間ペレット状にした。膜を１０％スク
ロースを含有する膜バッファーに再び懸濁させ、４０％スクロースを含有する膜
バッファー上に積層させ、４℃で１００,０００×ｇで９０分間遠心分離した。
界面にある膜を単離し、１００,０００×ｇで３０分間遠心分離した。膜ペレッ
トを膜バッファー５.０ｍｌに再び懸濁し、アリコートを−８０℃で貯蔵した。
蛋白濃度をＢＣＡ蛋白アッセイ試薬（イリノイ州ロックフォードのピアス（Pier
ce））を用いて定量した。

【００４４】 シンチレーション近接アッセイ 全てのアッセイは、９６ウェルマイクロタイタープレートフォーマットを用い
て行う。９６ウェルプレート（１４５０−４０１）は、フィンランド国トゥルク
のワラック（Wallac）から入手する。ヒトアナフィラトキシンＣ３Ａは、マサチ
ューセッツ州ボストンのエヌイーエヌ・リサーチ・プロダクツ（NEN Research P
roducts）が２２００Ｃｉ／ミリモルの比活性を有するようにＢｏｌｔｏｎ−Ｈ
ｕｎｔｅｒカスタムヨウ素化を行ったものを、カリフォルニア州サンディエゴの
アドバンスト・リチーサ・テクノロジズ（Advanced Research Technologies）か
ら入手した。小麦胚芽凝集素ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）ビーズは
、イリノイ州アーリントン・ハイツのアマシャム・コーポレーション（Amersham
Corp.）から入手した。結合バッファーは、２０ｍＭビス−トリスプロパン、２
５ｍＭ ＮaＣl、１ｍＭ ＭgＳＯ_４、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８.０）から構成
されている。各反応混合物は、結合バッファー中に、^１２５Ｉ Ｃ３Ａ（２５ｐ
Ｍ、マサチューセッツ州ボストンのエヌイーエヌ（NEN）から入手）、小麦胚芽
凝集素ＳＰＡビーズ（０.１ｍｇ）、ＲＢＬ−２Ｈ３ Ｃ３Ａ受容体膜０.３５μ
ｇ（これは膜調製物の質によって異なることがある）、２３ｕｇ／ｍｌのＢＳＡ
および０.０３％ＣＨＡＰＳを含有する。

【００４５】 膜を振盪しながら氷上で３０分間ＳＰＡビーズに予め結合させた。膜およびビ
ーズの混合物を２０００ｒｐｍで３分間遠心分離した。上清を除去し、ペレット
を５０ｕｇ／ｍＬのＢＳＡを含有する結合バッファーに再懸濁させて元の体積に
した。問題のサンプルを純粋なＤＭＳＯに溶解して２０倍溶液を得、次いで、Ｈ _２ Ｏと１：１の割合で混合して１０倍の５０％ＤＭＳＯ使用液を得た。添加する
順序は、サンプル１０ｕＬ、膜結合ＳＰＡビーズ４５ｕＬ、次いで、０.０６％
ＣＨＡＰＳを含有する結合バッファー中の放射性標識リガンド４５ｕＬであった
。プレートをダイネックス・テクノロジズ・インコーポレイテッド（Dynex Tech
nologies, Inc）製のプレートシーラーで覆い、２０分間振盪させ、室温でさら
に４０分間インキュベートした。次いで、プレートを２０００ｒｐｍで３分間遠
心分離し、Ｗａｌｌａｃ １４５０ Ｍｉｃｒｏ Ｂｅｔａ Ｐｌｕｓ液体シンチレ
ーションカウンターで計数した。

【００４６】 カルシウム機能アッセイ ＨＥＫ２９３細胞中で発現される７ＴＭ受容体は、ＰＬＣの活性化およびカル
シウム動員および／またはｃＡＭＰの刺激または阻害に機能的に関係付けられる
ことがわかっている。受容体−トランスフェクト細胞またはベクター対照細胞中
のＨＥＫ２９３細胞の基底カルシウム濃度は、通常１００ｎＭ〜２００ｎＭの範
囲にある。組換え受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞をフラ２でローディングし
、１日に１５０種より多くの選択されたリガンドまたは組織／細胞抽出物を、カ
ルシウム動員を誘発するアゴニストについて評価する。カルシウム過渡を示すア
ゴニストをベクター対照細胞中でテストして、応答が受容体を発現するトランス
フェクト細胞に特有のものであるかを決定する。

【００４７】 カルシウム動員：Ｃ３ａ受容体を有するＲＢＬ−２Ｈ３細胞中のＣ３ａ誘発性
応答 生物学的アッセイ Ｃ３ａ受容体のアンタゴニストの機能的活性について、Ｃ３ａを安定に発現し
ているＲＢＬ−２Ｈ３細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ）中でＣ３ａ誘発性Ｃa^２
＋動員を用いて証明する。

【００４８】 ＰＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細胞培養条件： Ｔ−１５０フラスコ中、３７℃で、非必須アミノ酸およびＬ−グルタミン酸塩
、ならびに１０％ウシ胎児血清（ギブコ（Gibco））および４００ｕｇ／ｍｌ Ｇ
４１８（ギブコ）を補足したアール塩（ギブコ）を有するアールＭＥＭ中、５％
ＣＯ_２／９５％空気を有する加湿インキュベータ中でＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細
胞を集密になるまで培養した。

【００４９】 蛍光計測−カルシウム動員 化合物のアンタゴニスト活性の評価に使用される機能的アッセイは、無傷ＲＢ
Ｌ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細胞中でのＣ３ａ誘発性カルシウム動員であった。細胞を１
ｍＭ ＥＤＴＡを含有する５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７.４）で洗浄した。[Ｃa^２
＋]_ｉは、カルシウム蛍光プローブフラ２（Grynkiewicz, et al., J. Biol. Che
m., 1985, 260, 3440-3450）で評価される。Ｔ−１５０フラスコ中でほぼ集密に
達したＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細胞から培地を吸引し、次いで、０.１％ＢＳＡ
、１.１ｍＭ ＭgＣl_２および５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.４）を含有するＫｒｅ
ｂｓ Ｒｉｎｇｅｒ Ｈｅｎｓｉｌｅｔ（バッファーＡ）４０ｍｌを添加した。フ
ラ２のジアセトキシメトキシエステル（フラ２／ＡＭ）を２μＭの濃度で添加し
、３７℃で４５分間インキュベートした。バッファーＡをＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３
ａ細胞から吸引し、該細胞にバッファーＡ ４０ｍｌを添加し、さらに２０分間
インキュベートして、捕捉されているエステルを完全に加水分解した。バッファ
ーＡを吸引し、細胞を１ｍＭ ＥＤＴＡ（カルシウムまたはマグネシウム不含）
を含有するデルベッコス（Delbeccos）リン酸緩衝生理食塩水約５ｍｌで、３７
℃で５分間、覆った。バッファーを吸引し、バッファーＡ ４０ｍｌを細胞に添
加し、次いで、その細胞を機械的にフラスコより引き離した。３時間以内に行う
蛍光アッセイに使用するまでＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細胞を室温で保存した。

【００５０】 細胞を含むフラ２の蛍光は、ジョンソン・ファウンデーション・バイオメディ
カル・インストラメンション・グループ（Johnson Fundation Biomedical Instr
umention Group）により設計されて蛍光計で測定した。該蛍光計は、キュベット
ホルダーの下に温度調節器および磁気攪拌器を装備していた。波長は、励起につ
いては３４０ｎｍ（１０ｎｍ帯域幅）に、放出については５１０ｎｍ（２０ｎｍ
帯域幅）に設定した。全実験は、一定に撹拌しながら３７℃で行った。化合物実
験については、フラ２をローディングした細胞を遠心分離し、ＢＳＡを除いた１
ｍＭ ＣaＣl_２を含有するバッファーＡに細胞１０^６個／ｍＬの濃度で再び懸濁
した。アゴニスト活性の評価については、ＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細胞のアリコ
ート２ｍＬをキュベットに添加し、水浴中で３７℃まで加温した。１ｃｍ^２のキ
ュベットを蛍光計に移し、蛍光を１５秒間記録して、化合物を添加する前に安定
な基線を確認した。化合物の添加後、蛍光を連続的に２分まで記録してアゴニス
ト活性の存在についてモニターリングした。

【００５１】 アンタゴニスト実験については、種々の濃度の化合物またはビヒクルを、フラ
２をローディングしたＲＢＬ−２Ｈ３−Ｃ３ａ細胞に添加し、１分間モニター観
察して蛍光基線が変化しないことを確認した後、１ｎＭ Ｃ３ａを添加した。次
いで、各サンプルについて最大[Ｃa^２＋]／フラ２蛍光を決定した。[Ｃa^２＋]_ｉ を下記式を用いて計算した。

【化４】 それぞれの濃度の化合物について、最大Ｃ３ａ（１ｎＭ）誘発性[Ｃa^２＋]_ｉの
パーセントを測定し、ＩＣ_５０を、最大Ｃ３ａ応答の５０％を阻害する試験化合
物の濃度と定義した。濃度応答曲線（５−７種の濃度）を実行した。

【００５２】 高処理量スクリーニング−カルシウムアッセイ： 上記カルシウムアッセイを、Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓから
、９６ウェルＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅ
ｒ（ＦＬＩＰＲ）を用いる高処理量スクリーン（ＨＴＳ）に換えた。該技術によ
って、９６ウェルのプレートの底面に付着した細胞における細胞内カルシウム動
員を計測することができる。 かかる方法については、上記のとおりＴ−１５０フラスコから細胞を得た。該
細胞を細胞３０,０００個／ウェルで９６ウェルプレートにて平板培養した。細
胞インキュベーター中、加湿環境中、３７℃で１８〜２４時間インキュベートす
ると、細胞が９６ウェルのプレートの底面に付着した。

【００５３】 ＦＬＩＰＲは、可視波長カルシウム指示薬であるＦｌｕｏ−３およびカルシウ
ムグリーン（Ｃａｌｃｉｕｍ ｇｒｅｅｎ）−１を用いると最もよく作動する。
これらの色素は、共に、ＨＴＳアッセイに成功裏に用いられたが、一般に、Ｆｌ
ｕｏ−３が用いられた。典型的には、ウシ胎児血清を含まず１.５ｍＭスルフィ
ンピラゾンを含有する細胞培地中、３７℃で１時間、４μＭ Ｆｌｕｏ−３を細
胞にローディングして、細胞からの色素放出を阻害した。培地を細胞から吸引し
、新鮮な培地を３７℃で１０分間添加して、色素を加水分解し、細胞外の色素を
除去した。培地を吸引し、ＫＲＨバッファー（上記バッファーＡ）で置換した。
３７℃で１０分後、細胞を分析用のＦＬＩＰＲ装置に移した。

【００５４】 ＦＬＩＰＲは、３種類の９６ウェルプレートを有する。色素をローディングし
た細胞を含有するプレートに加え、種々の濃度の化合物またはビヒクルを含有す
るプレートがあり、第３のプレートには、アゴニストの能力を確立するためには
種々の濃度のアゴニストが、また、例えば、アンタゴニスト活性については１ｎ
Ｍ Ｃ３ａのような単一濃度のアゴニストが存在する。アンタゴニストの実験に
ついては、ＦＬＩＰＲは、約３０秒間、基線の蛍光を示し、その後、９６個のウ
ェル全てに同時に化合物を添加し、細胞内Ｃa^２＋の変化をモニターリングし始
める。２分後、その内容物またはアゴニストプレートを細胞に添加した。ビヒク
ル（１００％）の存在下または種々の濃度の化合物の存在下、１ｎＭ Ｃ３ａに
対する最大Ｃa^２＋応答（光学単位における）を測定した。実質的には上記単一
キュベットフラ２アッセイについて記載したように、阻害曲線を作成した。

【００５５】 以下の実施例は、本発明を説明するものであるが、如何なる場合も限定するも
のではない。

【００５６】 実施例１ (２−ナフチルオキシ)アセチルアルギニン ａ）Ｆｍocアルギニン(Ｂoc)_２−クロロトリチル樹脂 Ｆｍocアルギニン(Ｂoc)_２（１２.２ｇ）および−クロロトリチル樹脂（１.８
ｇ、ローディング＝１.０５ｍｍｏｌ／ｇ）のＣＨ_２Ｃl_２ ３０ｍＬ中混合物に
ジイソプロピルエチルアミン（７００ｕＬ）を添加した。該混合物を１６時間撹
拌し、液相を排出した。得られた樹脂をＮ−メチルピロリジン（２×）およびＣ
Ｈ_２Ｃl_２（３×）で洗浄して生成物２.２ｇを得た。

【００５７】 ｂ）ブロモアセチルアルギニン(Ｂoc)_２−クロロトリチル樹脂 Ｆｍocアルギニン(Ｂoc)_２−クロロトリチル樹脂（２.２ｇ）にＣＨ_２Ｃl_２中
２０％ピペリジン（５０ｍＬ）を添加した。該混合物を１時間撹拌し、液相を排
出した。得られた樹脂をＣＨ_２Ｃl_２（５×）で洗浄した。 該樹脂をＤＭＦ中で膨潤させ、該混合物にブロモ酢酸（５.８ｇ）およびＥＤ
Ｃ（２.９ｇ）を添加した。該溶液を４時間撹拌し、液相を排出した。得られた
樹脂をＮ−メチルピロリジン（２×）およびＣＨ_２Ｃl_２（４×）で洗浄した。

【００５８】 ｃ）２−ナフチルオキシアセチルアルギニン(Ｂoc)_２−クロロトリチル樹脂 ＤＭＳＯ １.５ｍＬ中のブロモアセチルアルギニン(Ｂoc)_２−クロロトリチル
樹脂（７５ｍｇ）に２−ナフトール（１０当量）および炭酸カリウム（１００ｍ
ｇ）を添加し、該混合物を８０°で４時間振盪した。液相を排出し、該樹脂をＮ
−メチルピロリジン（２×）およびＣＨ_２Ｃl_２（３×）で洗浄した。

【００５９】 ｄ）２−ナフチルオキシアセチルアルギニン ２−ナフチルオキシアセチルアルギニン(Ｂoc)_２−クロロトリチル樹脂（約７
５ｍｇ）をＣＨ_２Ｃl_２／ＴＦＡ（１：１）中２.５％トリイソプロピルシラン（
ＴＩＳ）５ｍＬ中にて２時間撹拌した。液相をフラスコ中に回収し、溶媒を減圧
下で蒸発させた。残留物をＴＦＡ １ｍＬに溶解し、エーテル７ｍＬに添加して
、生成物を白色固体として晶出させた。不均質混合物を遠心分離し、溶媒をデカ
ントした。得られた固体にエーテルを添加し、再度、該混合物を遠心分離し、溶
媒をデカントした。該生成物を真空乾燥した。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ／ｅ＝３５９.
２（Ｍ＋Ｈ）。

【００６０】 実施例２ １−ナフチルオキシアセチルアルギニン ａ）Ｆｍocアルギニン(Ｍtr)−Ｗａｎｇ ＣＨ_２Ｃl_２（２５０ｍＬ）中のＷａｎｇ樹脂（１０ｇ、１２ｍｍｏｌ）にＦ
ｍocアルギニン(Ｍtr)（９.３１ｇ、１５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２.９３ｇ、１５
ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（１.４４ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。アルゴ
ンを通気して、該反応物を一夜撹拌した。スラリーを濾過し、ＣＨ_２Ｃl_２で３
０分間洗浄した。溶媒を排出し、同条件で２回目の洗浄を５時間行った。次いで
、スラリーを濾過し、ＣＨ_２Ｃl_２（１×）、ＮＭＰ（３×）、ＣＨ_２Ｃl_２（３
×）で洗浄し、２.４時間真空乾燥させてＦｍocアルギニン(Ｍtr)−Ｗａｎｇを
得た。窒素分析により０.７３ｍｍｏｌ／ｇの置換が示された。

【００６１】 ｂ）１−ナフチルオキシアセチルアルギニン(Ｍtr)−Ｗａｎｇ ＣＨ_２Ｃl_２中２０％ピペリジン（２００ｍＬ）を用いてＦｍocアルギニン(Ｍ
tr)−Ｗａｎｇを３０分間脱保護した。溶液相を排出し、２回目の脱保護を１５
分間行った。該溶液を排出し、該樹脂をＣＨ_２Ｃl_２（５×）で洗浄してアルギ
ニン(Ｍtr)−Ｗａｎｇを得た。ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のこの中間体（２ｇ、２.
４ｍｍｏｌ）に１−ナフチルオキシ酢酸（２.４３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ
（２.３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢＴ（１.６２ｍｍｏｌ、１２ｍｍｏｌ
）を添加した。一夜振盪した後、スラリーを濾過し、ＤＭＦ（２×）／ＣＨ_２Ｃ
l_２（６×）で洗浄した。

【００６２】 ｃ）１−ナフチルオキシアセチルアルギニン １−ナフチルオキシアセチルアルギニン(Ｍtr)−ＷａｎｇにＴＦＡ中２.５％
ＴＩＳ（４５ｍＬ）を添加した。５時間振盪した後、溶媒を減圧下で蒸発させた
。残留物を分取用ＨＰＬＣにより精製して標記化合物を得た。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ
／ｅ＝３５９.４（Ｍ＋Ｈ）。

【００６３】 実施例３ １−[７−(４−ヒドロキシフェニルメチル)ナフチルオキシ]アセチルアルギニ
ン 実施例２ｃ）における副生成物として標記化合物を得た。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ／
ｅ＝４６５.４（Ｍ＋Ｈ）。

【００６４】 実施例４ (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン ａ）Ｆｍocアルギニン(Ｂoc)_２−Ｗａｎｇ ＣＨ_２Ｃl_２（４０ｍＬ）中のＦｍocアルギニン(Ｂoc)_２（１.８ｇ、３ｍｍｏ
ｌ）および−Ｗａｎｇ樹脂（２ｇ、２ｍｍｏｌ）にＥＤＣ（５７３ｍｇ、３ｍｍ
ｏｌ）およびＤＭＡＰ（２４４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を一夜
振盪し、ＤＭＦ（２×）／ＣＨ_２Ｃl_２（６×）で洗浄した。

【００６５】 ｂ）(２,２−ジフェニルエトキシ)酢酸 Ａr下、０℃で、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の２,２−ジフェニルエタノール（１ｇ
）に６０％水素化ナトリウム（３５０ｍｇ）を添加した。該溶液を１０分間撹拌
し、ブロモ酢酸ｔ−ブチル（８８８ｕＬ）を添加し、該溶液を室温に加温した。
３０分間撹拌した後、該反応物を水（２０ｍＬ）でクエンチし、水溶液をエーテ
ル（２５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（２０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）
で洗浄した。有機溶液を乾燥させ（ＭgＳＯ_４）、シリカゲルフラッシュクロマ
トグラフィー（３％酢酸エチル／ヘキサン）に付して(２,２−ジフェニルエトキ
シ)酢酸ｔ−ブチルを得た。該中間体を２５％ＴＦＡ／ＣＨ_２Ｃl_２で１時間処理
した。溶媒を除去し、痕跡量のＴＦＡをトルエンとの共沸により除去して、標記
化合物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl_３）δ ７.１−７.４（ｍ，１０Ｈ）、４.
３２（ｔ，Ｊ＝８.４Ｈz，１Ｈ）、４.０−４.１（ｍ，４Ｈ）。

【００６６】 ｃ）(２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン(Ｂoc)_２−Ｗａｎｇ Ｆｍocアルギニン(Ｂoc)_２−Ｗａｎｇ（２００ｍｇ）をＣＨ_２Ｃl_２中２０％
ピペリジン（５ｍＬ）で３０分間処理した。溶媒を排出し、樹脂をＣＨ_２Ｃl_２
（６×）で洗浄した。ＤＭＦ（３.５ｍＬ）中のこの樹脂に(２,２−ジフェニル
エトキシ)酢酸（９２ｍｇ）、ＥＤＣ（６９ｍｇ）、およびＨＯＢＴ（４９ｍｇ
）を添加し、該混合物を一夜振盪した。溶液を排出し、樹脂をＤＭＦ（２×）／
ＣＨ_２Ｃl_２（６×）で洗浄した。

【００６７】 ｄ）(２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン 樹脂をＴＦＡ／ＣＨ_２Ｃl_２（１：１）中２.５％ＴＩＳ溶液で９０分間処理し
た。開裂溶液を回収し、溶媒を減圧除去し、痕跡量のＴＦＡをトルエンとの共沸
により除去した。残留物をヘキサン（２×）で洗浄して標記化合物を得た。ＥＳ
(＋) ＭＳ ｍ／ｅ＝４１３.３（Ｍ＋Ｈ）。

【００６８】 実施例５ (３−クロロベンジルオキシ)アセチルアルギニン ２,２−ジフェニルエタノールの代わりに３−クロロベンジルアルコールを用
いた以外は実施例４の方法に従って標記化合物を製造した。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ／
ｅ＝３５７.２（Ｍ＋Ｈ）。

【００６９】 実施例６ (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン ａ）Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr)ＯＭe・ＴＦＡ塩 ０℃の乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のＢoc−Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr)（１
ｇ、２ｍｍｏｌ）にエーテル（１０ｍＬ）中のジアゾメタン（５ｍｍｏｌ）を添
加した。該溶液を２時間撹拌し、酢酸でクエンチした。酢酸エチル（５０ｍＬ）
を添加し、該溶液を１０％水酸化ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、有機層を乾
燥させた（ＭgＳＯ_４）。 ０℃でＢoc−Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr)ＯＭeをＴＦＡ／（１：１）に溶
解し、室温に加温しながら２時間撹拌した。ＴＬＣにより反応が完了したことが
確認されると、溶媒を減圧除去した。痕跡量のＴＦＡをトルエンとの共沸により
除去した。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ／ｅ＝４１５.４（Ｍ＋Ｈ）。

【００７０】 ｂ）(２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr)
ＯＭe ＤＭＦ ２ｍＬ中のＮα−メチルアルギニン(Ｍtr)ＯＭe・ＴＦＡ塩（０.１８
８ｇ、０.３６ｍｍｏｌ）にＤＩＥＡ（０.０７８ｇ、０.６０ｍｍｏｌ）を添加
した。次いで、２,２−ジフェニルエトキシ酢酸（０.１００ｇ、０.３９ｍｍｏ
ｌ）、ＰyＢＯＰ（０.３７０ｇ、０.７１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０.１９６
ｇ、１.５１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ １ｍＬ中予備混合溶液を添加した。該溶液を室
温で一夜撹拌した。酢酸エチルを添加し、該溶液を３Ｎ ＨＣl、食塩水、ＮaＨ
ＣＯ_３（飽和）、および、再度、食塩水で洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭgＳ
Ｏ_４）、濾過し、溶媒を減圧除去した。シリカゲルクロマトグラフィー（５０％
酢酸エチル／ヘキサン）に付すことにより精製して標記化合物（８６ｍｇ）を得
た。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ／ｅ＝６５３.３（Ｍ＋Ｈ）。

【００７１】 ｃ）(２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr) (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr)ＯＭe
にＴＨＦ ２ｍＬおよび１Ｍ ＬiＯＨ ２ｍＬを添加した。該溶液を室温で２.５
時間撹拌し、酢酸エチルを添加し、水性層を３Ｎ ＨＣlで酸性化した。有機層を
乾燥させ（ＭgＳＯ_４）、濾過し、溶媒を減圧除去した。シリカゲルクロマトグ
ラフィー（０.１％ＡcＯＨ／２％ＭeＯＨ／ＣＨ_２Ｃl_２）に付すことにより精製
して標記化合物を得た（４０ｍｇ）。ＥＳ(＋) ＭＳ ｍ／ｅ＝６３９.２（Ｍ＋
Ｈ）。

【００７２】 ｄ）(２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン(Ｍtr)（０.
０４０ｇ、０.０６ｍｍｏｌ）にＣＨ_２Ｃl_２／ＴＦＡ（１：１）溶液中２.５％
ＴＩＰＳ ２ｍＬを添加した。該溶液を室温で４時間撹拌した。溶媒を減圧除去
し、ジエチルエーテルを用いて溶液から標記化合物を晶出させた。ＥＳ(＋) Ｍ
Ｓ ｍ／ｅ＝４２７.３（Ｍ＋Ｈ）。

【００７３】 実施例７ 吸入剤製剤 定量型吸入器から式（Ｉ）で示される化合物（１ｍｇ〜１００ｍｇ）をエアゾ
ール化して、１回使用あたり所望量の薬物を射出する。

【００７４】 実施例８ 錠剤製剤錠剤／成分 錠剤１個にあたり １．有効成分 ４０ｍｇ (式（Ｉ）で示される化合物) ２．コーンスターチ ２０ｍｇ ３．アルギン酸 ２０ｍｇ ４．アルギン酸ナトリウム ２０ｍｇ ５．ステアリン酸マグネシウム １.３ｍｇ

【００７５】 錠剤製剤の調製方法 成分１、２、３および４を適当なミキサー／ブレンダー中でブレンドする。塊
がコンシステンシーを有して湿顆粒に転換できるようなるまで、該ブレンドに十
分量の水を滴下し、各添加後に慎重に混合する。湿マスを、Ｎo. ８メッシュ（
２.３８ｍｍ）スクリーンを用いて振動式造粒器に通すことにより、該湿マスを
顆粒に転換する。次いで、湿顆粒を１４０°Ｆ（６０℃）のオーブン中で乾燥す
るまで乾燥させる。乾燥顆粒を成分５を用いて滑沢化し、滑沢処理した顆粒を適
当な打錠器にて圧縮する。

【００７６】 実施例９ 非経口製剤 ポリエチレングリコールに適当な量の式（Ｉ）で示される化合物を加熱しなが
ら溶解することにより非経口投与用医薬組成物を調製する。次いで、この溶液を
注射用液で（１００ｍＬに）希釈する。次いで、該溶液を０.２２ミクロン膜フ
ィルターで濾過滅菌し、滅菌容器中に密封する。

【００７７】 本明細書にて引用した特許および特許出願を包含するがこれらに限定されない
全ての刊行物は、個々の刊行物が十分に開示されているかの如く具体的かつ個別
的に出典明示により本明細書の一部とすることが明示されていたとしても、出典
明示により本明細書の一部とする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 19/02 Ａ６１Ｐ 19/02 25/28 25/28 29/00 29/00 Ｃ０７Ｄ 215/20 Ｃ０７Ｄ 215/20 215/24 215/24 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＭ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，Ｙ Ｕ，ＺＡ (72)発明者 ウィリアム・イー・ボンディネル アメリカ合衆国19087ペンシルベニア州ウ ェイン、フランクリン・レイン1512番 (72)発明者 アンソニー・ジェイ・ジュレウィッツ アメリカ合衆国19468ペンシルベニア州ロ イヤーズフォード、フルート・ファーム・ ロード523番 Ｆターム(参考） 4C031 DA04 FA03 4C086 AA01 AA03 BC28 MA04 NA14 ZA16 ZA59 ZA89 ZA96 ZB15 4C206 AA01 AA03 FA53 HA32 MA04 NA14 ZA16 ZA59 ZA89 ZA96 ZB11 ZB15 4H006 AA01 AA03 AB21 AB22

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、 Ａは、非置換またはＣ_１−４アルキルもしくはアリールにより置換されていて
   もよいＣ_１−４アルキレンを表すか；または Ａは、隣接するフェニル環と一緒になって５員〜８員の縮合脂肪族環を形成し
   ； ｍは、１〜３の整数であり； 各Ｒ_１は、独立して、ハロ、Ｃ_１−４アルキル、メタンスルホニル、アルコキ
   シ、ニトリル、ジメチルアミン、メチレンジオキシおよびＣＦ_３からなる群から
   選択され； Ｒ_２は、水素またはメチルである］ で示される化合物。
2. 【請求項２】 アステリスク＊がＳ配置を表す請求項１記載の化合物。
3. 【請求項３】 Ａがフェネチルである請求項２記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｒ_１が水素である請求項３記載の化合物。
5. 【請求項５】 ｍが０である請求項４記載の化合物。
6. 【請求項６】 以下の化合物からなる群から選択される請求項１記載の化合
   物： １−[７−(４−ヒドロキシフェニルメチル)ナフチルオキシ]アセチルアルギニ
   ン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン； (３−クロロベンジルオキシ)アセチルアルギニン； ２−ナフチルオキシアセチルアルギニン； (２,３−ジメチルフェノキシ)アセチルアルギニン； ８−(キノリニルオキシ)アセチルアルギニン； ６−(キノリニルオキシ)アセチルアルギニン； ２−(１−ブロモナフチルオキシ)アセチルアルギニン； (４−ベンジルオキシフェノキシ)アセチルアルギニン；および ２−(６−メトキシナフチルオキシ)アセチルアルギニン。
7. 【請求項７】 以下の化合物からなる群から選択される請求項６記載の化合
   物： １−[７−(４−ヒドロキシフェニルメチル)ナフチルオキシ]アセチルアルギニ
   ン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン；および ２−ナフチルオキシアセチルアルギニン。
8. 【請求項８】 (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン。
9. 【請求項９】 請求項１記載の化合物および医薬上許容される担体を含む医
   薬組成物。
10. 【請求項１０】 Ｃ３Ａ受容体の拮抗方法であって、かかる拮抗作用を必要
    とする対象に有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む方法。
11. 【請求項１１】 化合物が １−ナフチルオキシアセチルアルギニン； １−[７−(４−ヒドロキシフェニルメチル)ナフチルオキシ]アセチルアルギニ
    ン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチルアルギニン； (２,２−ジフェニルエトキシ)アセチル−Ｎα−メチルアルギニン； (３−クロロベンジルオキシ)アセチルアルギニン； ２−ナフチルオキシアセチルアルギニン； (２,３−ジメチルフェノキシ)アセチルアルギニン； ８−(キノリニルオキシ)アセチルアルギニン； ６−(キノリニルオキシ)アセチルアルギニン； ２−(１−ブロモナフチルオキシ)アセチルアルギニン； (４−ベンジルオキシフェノキシ)アセチルアルギニン；および ２−(６−メトキシナフチルオキシ)アセチルアルギニン からなる群から選択される請求項１０記載の方法。
12. 【請求項１２】 異常レベルのアナフィラトキシンにより特徴付けられる免
    疫性または炎症性疾患または障害の治療方法であって、かかる治療を必要とする
    対象に有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む方法。
13. 【請求項１３】 疾患または障害が慢性関節リウマチ、アルツハイマー病、
    乾癬、痛風、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、糸球体腎炎および成人呼吸窮迫
    症候群からなる群から選択される請求項１４記載の方法。