JP2002517471A - 炭化樹脂ｄｎａ免疫吸着剤の製造方法 - Google Patents
炭化樹脂ｄｎａ免疫吸着剤の製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造方法に関する。この製造方法に従い、スチレンアクリロニトリル、ジビニルベンゼン、トルエン、液体パラフィン、過酸化ベンゾイル及びポリビニルアルコール水溶液を原料として、炭化樹脂及び炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤を製造することにより、ＤＮＡ含量が０．３〜０．５ｍｇ／ｍ樹脂であるＤＮＡ免疫吸着剤が得られた。この免疫吸着剤は吸着性が高く、かつ発熱物質が含まれておらず、製造コストも低いため、全身性エリテマトーデスの臨床的治療に応用できる。
Description
【０００１】
本発明は、医療用吸着材料、特に免疫吸着剤に関する。この吸着剤は、活性物
質ＤＮＡを担体の炭化樹脂に固定することにより、ＤＮＡ免疫吸着剤としたもの
で、全身性エリテマトーデスの血液灌流治療に応用できる。
質ＤＮＡを担体の炭化樹脂に固定することにより、ＤＮＡ免疫吸着剤としたもの
で、全身性エリテマトーデスの血液灌流治療に応用できる。
【０００２】
全身性エリテマトーデス（以下ＳＬＥと略称する）は自己免疫欠陥疾患であり
、臨床的には良い治療法がない。病因不明、全身重要器官の萎縮を起こし、死亡
率が高い。
、臨床的には良い治療法がない。病因不明、全身重要器官の萎縮を起こし、死亡
率が高い。
【０００３】 ＤＮＡ免疫吸着剤を用た血液灌流は、最近十年ほどの間に、新しい治療法とし
て使われるようになり、Jnes, Frank R(EP 0272 792 A1, 1987)はこの治療法に
対して詳細な説明をした。ＤＮＡ免疫吸着剤の吸着作用は、発病物質抗ＤＮＡ抗
体に対する特別識別作用を利用して患者の血液中の発病物質を除去し、患者の免
疫機能を改善する。本治療法は顕著な治療効果を有し、臨床的にますます注目さ
れている。
て使われるようになり、Jnes, Frank R(EP 0272 792 A1, 1987)はこの治療法に
対して詳細な説明をした。ＤＮＡ免疫吸着剤の吸着作用は、発病物質抗ＤＮＡ抗
体に対する特別識別作用を利用して患者の血液中の発病物質を除去し、患者の免
疫機能を改善する。本治療法は顕著な治療効果を有し、臨床的にますます注目さ
れている。
【０００４】 Terman DS[Lancet, 1979, 2(8147): 824-7]等は初めて活性炭を担体として用
い、コロジオン被膜でＤＮＡを固定した。得られたＤＮＡ免疫吸着剤を重症ＳＬ
Ｅ患者の血液灌流治療に応用して、３１日もの延命が達成された。これをきっか
けにして、ＳＬＥ免疫吸着治療法が応用されるようになった。しかし、担体とし
て使われた活性炭は機械強度が低く、小粒が脱落し易いので、毛細血管を閉塞し
易い。楊彦ら［中国生物医学工程学報、1985,4(2):88-95；高等学校化学学報、1
985,6(9):843-847］は、日本産炭化樹脂を担体として用い、コロジオン被膜で予
めBlue tetrazolium（ＢＴ）とコンプレックス化されたＤＮＡを固定したところ
、得られたＤＮＡ免疫吸着剤の機械強度は増強し、ＤＮＡも脱落しなかった。こ
のように製造されたＤＮＡ免疫吸着剤は中国で臨床治療に応用され、顕著な効果
が得られた。しかし、患者に震えを起こさせるので、吸着剤に発熱物質が存在し
ていると考えられた。さらに、製造コストを低下するため炭化樹脂の製造過程を
改善すること及び被膜条件を改善することも期待されている。
い、コロジオン被膜でＤＮＡを固定した。得られたＤＮＡ免疫吸着剤を重症ＳＬ
Ｅ患者の血液灌流治療に応用して、３１日もの延命が達成された。これをきっか
けにして、ＳＬＥ免疫吸着治療法が応用されるようになった。しかし、担体とし
て使われた活性炭は機械強度が低く、小粒が脱落し易いので、毛細血管を閉塞し
易い。楊彦ら［中国生物医学工程学報、1985,4(2):88-95；高等学校化学学報、1
985,6(9):843-847］は、日本産炭化樹脂を担体として用い、コロジオン被膜で予
めBlue tetrazolium（ＢＴ）とコンプレックス化されたＤＮＡを固定したところ
、得られたＤＮＡ免疫吸着剤の機械強度は増強し、ＤＮＡも脱落しなかった。こ
のように製造されたＤＮＡ免疫吸着剤は中国で臨床治療に応用され、顕著な効果
が得られた。しかし、患者に震えを起こさせるので、吸着剤に発熱物質が存在し
ていると考えられた。さらに、製造コストを低下するため炭化樹脂の製造過程を
改善すること及び被膜条件を改善することも期待されている。
【０００５】
担体材料の構成及び血液への可容性がＤＮＡ免疫吸着剤の使用機能に直接に影
響するため、本発明の目的は、改善された炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造方法
を提供することである。
響するため、本発明の目的は、改善された炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造方法
を提供することである。
【０００６】
本発明の方法は、炭化樹脂被膜法におけるＤＮＡの被膜条件を改善したため、
吸着剤の吸着性が増強され、製造中の発熱物質も除去され、臨床応用により適合
する。さらに、製造コストも低減された。
吸着剤の吸着性が増強され、製造中の発熱物質も除去され、臨床応用により適合
する。さらに、製造コストも低減された。
【０００７】 本発明の製造方法によれば、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤は、炭化樹脂を担体と
し、その上に有効量のＤＮＡを固定したものであり、ＤＮＡの含量は０．３〜０
．５ｍｇ／ｍＬ樹脂である。その製造方法は次のとおりである。
し、その上に有効量のＤＮＡを固定したものであり、ＤＮＡの含量は０．３〜０
．５ｍｇ／ｍＬ樹脂である。その製造方法は次のとおりである。
【０００８】 （１）炭化樹脂の製造 スチレンモノマー及びアクリロニトリルモノマーと、架橋剤としてのジビニル
ベンゼンと、孔形成剤としてのトルエン及び液体パラフィン（重量比でモノマー
及び架橋剤の三倍）と、開始剤としての過酸化ベンゾイルとを、１〜２％のポリ
ビニルアルコール水溶液に分散し、８０℃で５時間反応させ、９６℃でトルエン
を蒸留した。１００℃で３時間球重合体を煮沸し、更に重合及び硬化させた。熱
水で洗浄し、５０℃で乾燥させた。石油エーテルでパラフィンを溶離させ、三元
共重合超大孔径樹脂が得られた。
ベンゼンと、孔形成剤としてのトルエン及び液体パラフィン（重量比でモノマー
及び架橋剤の三倍）と、開始剤としての過酸化ベンゾイルとを、１〜２％のポリ
ビニルアルコール水溶液に分散し、８０℃で５時間反応させ、９６℃でトルエン
を蒸留した。１００℃で３時間球重合体を煮沸し、更に重合及び硬化させた。熱
水で洗浄し、５０℃で乾燥させた。石油エーテルでパラフィンを溶離させ、三元
共重合超大孔径樹脂が得られた。
【０００９】 上述の樹脂を不活性気体の存在下で、管式電気炉の中に１００〜３００℃で、
８〜１０時間焼き、５００〜８００℃に昇温させ、水蒸気で０．５〜１時間活性
化させた後、冷却し、炭化樹脂が得られた。
８〜１０時間焼き、５００〜８００℃に昇温させ、水蒸気で０．５〜１時間活性
化させた後、冷却し、炭化樹脂が得られた。
【００１０】 （２）炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造 小牛胸腺ＤＮＡ溶液とコロジオンエーテル溶液を混合し、攪拌しながら処理し
た炭化樹脂を加入し、速やかに攪拌した。液体が直ちに吸収され、その後５０〜
６０℃の水浴で２時間保温し、よくかき混ぜて、溶媒が完全に揮発するまで洗浄
した。続いて、５０℃で２時間真空乾燥し、水で数回洗浄した後、洗浄塔に入れ
、流出液は波長２６０ｎｍのところに紫外吸収がなくなるまで洗浄した。さらに
数回洗浄し、５０℃で真空乾燥した後、吸着剤製品が得られた。
た炭化樹脂を加入し、速やかに攪拌した。液体が直ちに吸収され、その後５０〜
６０℃の水浴で２時間保温し、よくかき混ぜて、溶媒が完全に揮発するまで洗浄
した。続いて、５０℃で２時間真空乾燥し、水で数回洗浄した後、洗浄塔に入れ
、流出液は波長２６０ｎｍのところに紫外吸収がなくなるまで洗浄した。さらに
数回洗浄し、５０℃で真空乾燥した後、吸着剤製品が得られた。
【００１１】 本発明により製造されたＤＮＡ免疫吸着剤中のＤＮＡ含量は、０．３〜０．５
ｍｇ／ｍｌ樹脂であった。
ｍｇ／ｍｌ樹脂であった。
【００１２】 本発明により製造されたＤＮＡ免疫吸着剤を特製の吸着缶に入れ、消毒処理し
た後、医療用血液吸着装置として使用した。血液は患者の動脈から導出され、吸
着装置を流れ、血液中の発病物質がＤＮＡ免疫吸着剤に吸着されるため、清潔な
血液が吸着装置から流出し、静脈により体内に戻した。この灌流治療過程は一般
的に２〜３時間かかった。血液透析と同じように、血液灌流は安全、簡単、低価
な治療法と考えられる。
た後、医療用血液吸着装置として使用した。血液は患者の動脈から導出され、吸
着装置を流れ、血液中の発病物質がＤＮＡ免疫吸着剤に吸着されるため、清潔な
血液が吸着装置から流出し、静脈により体内に戻した。この灌流治療過程は一般
的に２〜３時間かかった。血液透析と同じように、血液灌流は安全、簡単、低価
な治療法と考えられる。
【００１３】
以下に本発明による方法の詳細を述べる。
【００１４】 １．炭化樹脂の製造 ５．０〜７．５％ｗ／ｗのスチレン、１０．０〜１２．５％ｗ／ｗのジビニル
ベンゼン、７．５〜１０．０％ｗ／ｗのアクリロニトリル及び５０．０％ｗ／ｗ
のトルエンを混合し、０．１５〜０．３％ｗ／ｗの過酸化ベンゾイル開始剤を溶
かした後、２５．０％ｗ／ｗ液体パラフィンを入れ、混合し、有機相となった。
孔形成剤としてのトルエン及び液体パラフィンは、重量比でモノマー総量の三倍
であった。３Ｌの三口フラスコに１〜２％のポリビニルアルコール溶液（体積は
有機相の２倍）を入れ、水浴で５０℃まで加熱し、有機相を入れた。攪拌しなが
ら８０℃まで昇温し、３〜５時間反応させた。さらに、９０〜１００℃まで昇温
し、トルエンを蒸留した。１００℃で２時間球重合体を煮沸し、より完全に重合
及び硬化させた後、濾過した。熱蒸留水で数回洗浄し、５０℃で乾燥させた。さ
らに、石油エーテルで洗浄または抽出し、液体パラフィンを除去した後、三元共
重合超大孔径樹脂が得られた。標準篩で０．４５〜１．０ｍｍの樹脂を得た。
ベンゼン、７．５〜１０．０％ｗ／ｗのアクリロニトリル及び５０．０％ｗ／ｗ
のトルエンを混合し、０．１５〜０．３％ｗ／ｗの過酸化ベンゾイル開始剤を溶
かした後、２５．０％ｗ／ｗ液体パラフィンを入れ、混合し、有機相となった。
孔形成剤としてのトルエン及び液体パラフィンは、重量比でモノマー総量の三倍
であった。３Ｌの三口フラスコに１〜２％のポリビニルアルコール溶液（体積は
有機相の２倍）を入れ、水浴で５０℃まで加熱し、有機相を入れた。攪拌しなが
ら８０℃まで昇温し、３〜５時間反応させた。さらに、９０〜１００℃まで昇温
し、トルエンを蒸留した。１００℃で２時間球重合体を煮沸し、より完全に重合
及び硬化させた後、濾過した。熱蒸留水で数回洗浄し、５０℃で乾燥させた。さ
らに、石油エーテルで洗浄または抽出し、液体パラフィンを除去した後、三元共
重合超大孔径樹脂が得られた。標準篩で０．４５〜１．０ｍｍの樹脂を得た。
【００１５】 上述の樹脂を管式電気炉の中に１００〜３００℃で、８〜１０時間焼き、Ｎ2
の存在下に１００℃／ｈｒの速度で５００〜８００℃まで昇温させ、水蒸気で０
．５〜１時間活性化させた後、室温まで冷却し、０．４５〜０．９ｍｍの炭化樹
脂約３５０ｍＬが得られた。
の存在下に１００℃／ｈｒの速度で５００〜８００℃まで昇温させ、水蒸気で０
．５〜１時間活性化させた後、室温まで冷却し、０．４５〜０．９ｍｍの炭化樹
脂約３５０ｍＬが得られた。
【００１６】 得られた炭化樹脂を２倍体積の５％塩酸に入れ、３０分間煮沸し、蒸留水で中
性まで洗浄した。さらに、２倍体積の５％水酸化ナトリウムに３０分間煮沸し、
蒸留水で中性まで洗浄した後、５０℃で乾燥させた。無水アルコールで２４時間
抽出し、乾燥した。
性まで洗浄した。さらに、２倍体積の５％水酸化ナトリウムに３０分間煮沸し、
蒸留水で中性まで洗浄した後、５０℃で乾燥させた。無水アルコールで２４時間
抽出し、乾燥した。
【００１７】 ２．炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造 （ａ）ＤＮＡ溶液の調製：高純度の小牛胸腺ＤＮＡを０．２ｍｏｌ／ＬのＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ＝７．４）緩衝液に溶かし、濃度は４ｍｇ／ｍＬであった。
順番に等体積のＢＴ飽和水溶液及び等体積の無水アルコールを入れ、溶解するま
で攪拌した。
ｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ＝７．４）緩衝液に溶かし、濃度は４ｍｇ／ｍＬであった。
順番に等体積のＢＴ飽和水溶液及び等体積の無水アルコールを入れ、溶解するま
で攪拌した。
【００１８】 （ｂ）コロジオンの調整：５％コロジオンエーテル溶液を無水エーテルで７．
４倍稀釈した。
４倍稀釈した。
【００１９】 （ｃ）被膜：１９〜２０％ｖ／ｖのＤＮＡ溶液と２１．４〜２２．９ｖ／ｖの
コロジオンを混合し、攪拌しながら５７．１〜５９〜５％ｖ／ｖの炭化樹脂を入
れ、液体が直ちに吸収された。５０〜６０℃の水浴で１〜２時間恒温させ、よく
かき混ぜて、５０℃で２時間真空乾燥した。流出液は、波長２６０ｎｍでの紫外
吸収が０．０００になるまで注射用水で洗浄した。さらに、５０℃で数時間真空
乾燥して、製品の炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤が得られた。
コロジオンを混合し、攪拌しながら５７．１〜５９〜５％ｖ／ｖの炭化樹脂を入
れ、液体が直ちに吸収された。５０〜６０℃の水浴で１〜２時間恒温させ、よく
かき混ぜて、５０℃で２時間真空乾燥した。流出液は、波長２６０ｎｍでの紫外
吸収が０．０００になるまで注射用水で洗浄した。さらに、５０℃で数時間真空
乾燥して、製品の炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤が得られた。
【００２０】 本発明により製造された炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤２５０ｍＬを吸着缶に入れ
、密封後に消毒した。使用する前に無菌生理食塩水に３０分間以上浸し、３００
０ｍＬ無菌生理食塩水で洗浄した。患者の大腿動脈及び上腕静脈に挿管し、灌流
する１０〜２０分間前に、ヘパリンを１〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重で静脈注射した
。また、灌流システム全体を３７℃に保持した。動、静脈を連結し、灌流をスタ
ートしたところ、血液流速が５０ｍＬ／ｍｉｎから徐々に２００ｍＬ／ｍｉｎま
で増大した。動脈側から血液を採り、ＤＮＡ抗体、免疫複合物などの生化学項目
を測定した。
、密封後に消毒した。使用する前に無菌生理食塩水に３０分間以上浸し、３００
０ｍＬ無菌生理食塩水で洗浄した。患者の大腿動脈及び上腕静脈に挿管し、灌流
する１０〜２０分間前に、ヘパリンを１〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重で静脈注射した
。また、灌流システム全体を３７℃に保持した。動、静脈を連結し、灌流をスタ
ートしたところ、血液流速が５０ｍＬ／ｍｉｎから徐々に２００ｍＬ／ｍｉｎま
で増大した。動脈側から血液を採り、ＤＮＡ抗体、免疫複合物などの生化学項目
を測定した。
【００２１】 本発明では、新しい方法を用いて優れた免疫吸着剤担体炭化樹脂を製造した。
一つは、多量の孔形成剤（重量比でモノマーおよび架橋剤の総体量の三倍）を用
い、開始剤用量および昇温速度を厳しくコントロールしたことである。即ち、重
合速度を厳しくコントロールした。もう一つは、孔形成剤であるトルエンを速や
かに蒸留したことである。こうして、超大孔径及び大きい比表面積を有する樹脂
が得られた。その他、炭化樹脂を製造する過程での樹脂の予焼き、昇温、炭化温
度、水蒸気での活性化なども、炭化樹脂の収率及び樹脂機能に直接影響する。本
発明により得られた炭化樹脂は、至適な孔径および比表面積（孔径２０〜３５Å
、比表面積８００〜１２００ｍ2／ｍＬ）を有するため、ＤＮＡ免疫吸着剤を製
造するための優れた担体材料である。しかも、優れた血液相容性も有し、血小板
、赤血球、白血球に対する破壊率も非常に低い。
一つは、多量の孔形成剤（重量比でモノマーおよび架橋剤の総体量の三倍）を用
い、開始剤用量および昇温速度を厳しくコントロールしたことである。即ち、重
合速度を厳しくコントロールした。もう一つは、孔形成剤であるトルエンを速や
かに蒸留したことである。こうして、超大孔径及び大きい比表面積を有する樹脂
が得られた。その他、炭化樹脂を製造する過程での樹脂の予焼き、昇温、炭化温
度、水蒸気での活性化なども、炭化樹脂の収率及び樹脂機能に直接影響する。本
発明により得られた炭化樹脂は、至適な孔径および比表面積（孔径２０〜３５Å
、比表面積８００〜１２００ｍ2／ｍＬ）を有するため、ＤＮＡ免疫吸着剤を製
造するための優れた担体材料である。しかも、優れた血液相容性も有し、血小板
、赤血球、白血球に対する破壊率も非常に低い。
【００２２】 本発明により製造された炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤は、全国１７都市の２８カ
所の病院で臨床に応用され、病例数１５０、有効率は９８％に達した。患者の命
が延長され、労働能力も回復した。一部分のＳＬＥ臨床報告を表１及び表２に示
す。
所の病院で臨床に応用され、病例数１５０、有効率は９８％に達した。患者の命
が延長され、労働能力も回復した。一部分のＳＬＥ臨床報告を表１及び表２に示
す。
【表１】
【００２３】
【表２】
【００２４】 表１に示したように、１０人の患者において、血液灌流治療を施した後、血液
中の発病物質抗ｄｓ〜ＤＮＡ抗体の濃度が顕著に低下し、尿蛋白、赤血球沈降速
度及び抗核抗体滴定度も改善された。１０人中に１人が死亡し（３８ヶ月生存）
、９人が３２ヶ月以上生存し、生活及び仕事に回復した。
中の発病物質抗ｄｓ〜ＤＮＡ抗体の濃度が顕著に低下し、尿蛋白、赤血球沈降速
度及び抗核抗体滴定度も改善された。１０人中に１人が死亡し（３８ヶ月生存）
、９人が３２ヶ月以上生存し、生活及び仕事に回復した。
【００２５】 表２に示したように、５人のＳＬＥ患者に数回血液灌流を行ったところ、患者
の血液生化学項目及び臨床症状が改善され、しかも、ステロイド薬物投与を停止
することができた。その中の１人は生存１年後に疾患症候群で死亡し、ほかの４
人は、それぞれ９、１２、２４、２４ヶ月も生存した（追跡調査は１９９６年末
まで）。これらの結果から、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤治療法は患者の病状を寛
解し、免疫系機能を改善するほかに、長時間効果もあるため、治癒する可能性も
考えられる。
の血液生化学項目及び臨床症状が改善され、しかも、ステロイド薬物投与を停止
することができた。その中の１人は生存１年後に疾患症候群で死亡し、ほかの４
人は、それぞれ９、１２、２４、２４ヶ月も生存した（追跡調査は１９９６年末
まで）。これらの結果から、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤治療法は患者の病状を寛
解し、免疫系機能を改善するほかに、長時間効果もあるため、治癒する可能性も
考えられる。
【００２６】 例 １： 炭化樹脂の製造 ４５．０ｇのスチレン、６０．０ｇのジビニルベンゼン、４５〜０ｇのアクリ
ロニトリル及び３００ｇのトルエンを混合し、１．５ｇの過酸化ベンゾイル開始
剤を溶かした後、１６０．０ｇ液体パラフィンを入れ、混合し、モノマー溶液と
した。３０００ｍＬの三口フラスコに１％のポリビニルアルコール溶液１１５０
ｍＬを入れ、水浴で５０℃まで加熱し、モノマー溶液を添加した。攪拌しながら
１時間以内に８０℃まで昇温し、５時間反応させた。さらに９０℃以上昇温し、
トルエンが全部なくなるまで１時間ぐらい蒸留した。１００℃で２時間球重合体
を煮沸し、より完全に重合及び硬化させ、濾過した。熱蒸留水で数回洗浄し、ポ
リビニルアルコールを除去した。さらに、５０℃で乾燥させ、石油エーテル（６
０〜９０℃）で樹脂を洗浄し、孔形成剤中の液体パラフィンを除去した。標準篩
で０．４５〜１．０ｍｍの樹脂を取り、約４００ｍＬの樹脂が得られた。
ロニトリル及び３００ｇのトルエンを混合し、１．５ｇの過酸化ベンゾイル開始
剤を溶かした後、１６０．０ｇ液体パラフィンを入れ、混合し、モノマー溶液と
した。３０００ｍＬの三口フラスコに１％のポリビニルアルコール溶液１１５０
ｍＬを入れ、水浴で５０℃まで加熱し、モノマー溶液を添加した。攪拌しながら
１時間以内に８０℃まで昇温し、５時間反応させた。さらに９０℃以上昇温し、
トルエンが全部なくなるまで１時間ぐらい蒸留した。１００℃で２時間球重合体
を煮沸し、より完全に重合及び硬化させ、濾過した。熱蒸留水で数回洗浄し、ポ
リビニルアルコールを除去した。さらに、５０℃で乾燥させ、石油エーテル（６
０〜９０℃）で樹脂を洗浄し、孔形成剤中の液体パラフィンを除去した。標準篩
で０．４５〜１．０ｍｍの樹脂を取り、約４００ｍＬの樹脂が得られた。
【００２７】 上述の樹脂１０００ｍＬを管式電気炉の中に２００℃でｌ０時間焼き、Ｎ2の
存在下で１００℃／ｈｒの速度で８００℃までに昇温させ、水蒸気で１時間活性
化させた後、室温まで冷却し、０．４５〜０．９ｍｍの炭化樹脂約３５０ｍＬが
得られた。得られた樹脂の孔径は２０〜３５Å、比表面積１０００〜１２０００
ｍ2／ｇであった。
存在下で１００℃／ｈｒの速度で８００℃までに昇温させ、水蒸気で１時間活性
化させた後、室温まで冷却し、０．４５〜０．９ｍｍの炭化樹脂約３５０ｍＬが
得られた。得られた樹脂の孔径は２０〜３５Å、比表面積１０００〜１２０００
ｍ2／ｇであった。
【００２８】 炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造 得られた炭化樹脂２５０ｍＬを２倍体積の５％塩酸の中に入れ、３０分間煮沸
し、蒸留水で中性まで洗浄した。さらに、２倍体積の５％水酸化ナトリウム中で
３０分間煮沸し、蒸留水で中性になるまで洗浄した後、５０℃で乾燥させた。無
水アルコールで２４時間抽出し、乾燥した。
し、蒸留水で中性まで洗浄した。さらに、２倍体積の５％水酸化ナトリウム中で
３０分間煮沸し、蒸留水で中性になるまで洗浄した後、５０℃で乾燥させた。無
水アルコールで２４時間抽出し、乾燥した。
【００２９】 製造中に用いた溶液は注射用水で調製され、ＤＮＡも純水のＤＮＡであった。
発熱物質を防ぐために無菌条件下で製造を行った。
発熱物質を防ぐために無菌条件下で製造を行った。
【００３０】 １０００ｍＬビーカーに小牛胸腺ＤＮＡ溶液８０ｍＬ（ＤＮＡを０．２Ｍ、ｐ
Ｈ＝７．４のＴｒｉｓ−ＨＣ緩衝液に溶かし、濃度は４ｍｇ／ｍＬであった。順
番に等体積のＢＴ飽和水溶液及び等体積の無水アルコールを入れ、溶解するまで
攪拌した）を入れ、９０ｍＬのコロジオン溶液（５５ｍＬ５％コロジオンエーテ
ル溶液を３５０ｍＬ無水エーテルで稀釈した）を添加し、混合し、攪拌しながら
２５０ｍＬの上述の炭化樹脂を入れ、液体が直ちに吸収された。５０〜６０℃の
水浴で２時間恒温させ、溶媒が全部揮発するまでよくかき混ぜて、５０℃で２時
間真空乾燥した。注射用水て数回洗浄し、洗浄塔に入れて、波長２６０ｎｍでの
紫外吸収がなくなるまで流出液を注射用水で洗浄した。さらに数回洗浄し、５０
℃で真空乾燥して、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製品が得られた。ＤＮＡ含量は
０．３８ｍｇ／ｍＬ樹脂であった。ウサギで発熱物質実験を行い、発熱物質がな
いと示された。
Ｈ＝７．４のＴｒｉｓ−ＨＣ緩衝液に溶かし、濃度は４ｍｇ／ｍＬであった。順
番に等体積のＢＴ飽和水溶液及び等体積の無水アルコールを入れ、溶解するまで
攪拌した）を入れ、９０ｍＬのコロジオン溶液（５５ｍＬ５％コロジオンエーテ
ル溶液を３５０ｍＬ無水エーテルで稀釈した）を添加し、混合し、攪拌しながら
２５０ｍＬの上述の炭化樹脂を入れ、液体が直ちに吸収された。５０〜６０℃の
水浴で２時間恒温させ、溶媒が全部揮発するまでよくかき混ぜて、５０℃で２時
間真空乾燥した。注射用水て数回洗浄し、洗浄塔に入れて、波長２６０ｎｍでの
紫外吸収がなくなるまで流出液を注射用水で洗浄した。さらに数回洗浄し、５０
℃で真空乾燥して、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製品が得られた。ＤＮＡ含量は
０．３８ｍｇ／ｍＬ樹脂であった。ウサギで発熱物質実験を行い、発熱物質がな
いと示された。
【００３１】 例 ２： 本実施例は、予焼きするとき５８０℃まで昇温した点を除き、他の操作は実施
例１と同じであった。その結果、得られた炭化樹脂の比表面積は約ｌ００ｍ2／
ｇであり、ＤＮＡ含量は大きく減少したことが示された。
例１と同じであった。その結果、得られた炭化樹脂の比表面積は約ｌ００ｍ2／
ｇであり、ＤＮＡ含量は大きく減少したことが示された。
【００３２】 例 ３ 本実施例は、水蒸気で０．５時間活性化した点を除き、他の操作は実施例１と
同じであった。その結果、得られた炭化樹脂の比表面積は約８００〜１０００ｍ 2 ／ｇであり、製品吸着剤中のＤＮＡ含量は僅かに減少したことが推定された。
同じであった。その結果、得られた炭化樹脂の比表面積は約８００〜１０００ｍ 2 ／ｇであり、製品吸着剤中のＤＮＡ含量は僅かに減少したことが推定された。
【００３３】 例 ４： 本実施例では、２００℃で１０時間の予焼きをすることなく、Ｎ2の存在下で
直接８００℃までに昇温した点を除き、他の操作は実施例１と同じであった。そ
の結果、炭化樹脂の収率が非常に低かった。同様の投与量で、２００ｍＬ未満の
炭化樹脂しか得られなかった。予焼きは製品の収率を大いに増加することが示さ
れた。
直接８００℃までに昇温した点を除き、他の操作は実施例１と同じであった。そ
の結果、炭化樹脂の収率が非常に低かった。同様の投与量で、２００ｍＬ未満の
炭化樹脂しか得られなかった。予焼きは製品の収率を大いに増加することが示さ
れた。
【００３４】 例 ５： 本実施例における投与量は小牛胸腺ＤＮＡ溶液８７．５ｍＬ、コロジオン溶液
１００ｍＬ、炭化樹脂２５０ｍＬであり、他の操作は実施例１と同じであった。
その結果、製品吸着剤ＤＮＡ含量は０．４２ｍｇ／ｍＬまで増加した。
１００ｍＬ、炭化樹脂２５０ｍＬであり、他の操作は実施例１と同じであった。
その結果、製品吸着剤ＤＮＡ含量は０．４２ｍｇ／ｍＬまで増加した。
【００３５】 例 ６： 本実施例では、注射用水の代わりに再蒸留水を用いたが、他の操作は実施例１
と同じであった。その結果、発熱物質実験では、発熱物質が測定され、発熱物質
を防ぐために注射用水の応用は重要な役割を果たすと考えられた。
と同じであった。その結果、発熱物質実験では、発熱物質が測定され、発熱物質
を防ぐために注射用水の応用は重要な役割を果たすと考えられた。
【００３６】
本発明による炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤の製造方法は、ＤＮＡを固定する被膜
条件を改善し、吸着剤の吸着機能を増強し、しかも、発熱物質を排除することが
できる。また、吸着率の高い、より臨床に適応するＤＮＡ免疫吸着剤を得ること
ができる。さらに、本発明で用いた原料が入手し易いので、製造コストを低下す
ることができる。
条件を改善し、吸着剤の吸着機能を増強し、しかも、発熱物質を排除することが
できる。また、吸着率の高い、より臨床に適応するＤＮＡ免疫吸着剤を得ること
ができる。さらに、本発明で用いた原料が入手し易いので、製造コストを低下す
ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4C076 AA31 CC14 EE59A 4C084 AA02 AA13 DC50 MA65 NA06 ZA511 4C086 AA01 EA16 FA03 MA01 MA04 MA65 NA06 NA20 ZA51
Claims (2)
- 【請求項１】 炭化樹脂を担体とし、その上に有効量（０．３〜０．５ｍｇ
／ｍｌ）のＤＮＡを固定したＤＮＡ免疫吸着剤の製造方法であって： （Ａ）スチレンモノマー及びアグリロニトリルモノマーと、架橋剤ジビニルベ
ンゼン、孔形成剤としてのトルエン及び液体パラフィン（重量比でモノマー及び
架橋剤の三倍）と、過酸化ベンゾイル開始剤とを１〜２％のポリビニルアルコー
ル水溶液に分散し、８０℃で５時間反応させ、９６℃でトルエンを蒸留し、さら
に、得られた球重合体を１００℃で２〜３時間煮沸し、より完全に重合及び硬化
させた後、熱い水で洗浄し、５０℃で乾燥させ、続いて石油エーテルでハラフィ
ンを溶離させて三元共重合超大孔径樹脂が得ら、該三元共重合超大孔径樹脂を不
活性気体の存在下で、管式電気炉の中においてｌ００〜３００℃で８〜１０時間
焼き、５００〜８００℃に昇温させ、水蒸気で０．５〜１．０時間活性化させた
後、冷却することにより、炭化樹脂を得る工程と； （Ｂ）小牛胸腺ＤＮＡ溶液とコロジオンエーテル溶液を混合し、攪拌しながら
処理した上記炭化樹脂を加え、速やかに攪拌して液体を直ちに吸収させ、５０〜
６０℃の水浴中で２時間保温し、よくかき混ぜて、溶媒が完全に揮発するまで洗
浄し、続いて５０℃で２時間真空乾燥し、水で数回洗浄した後、洗浄塔に入れ、
流出液を波長２６０ｎｍでの紫外吸収がなくなるまで洗浄し、さらに数回洗浄し
、５０℃で真空乾燥することにより、炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤を得る工程とを
具備した方法。 - 【請求項２】 請求項１に記載の炭化樹脂ＤＮＡ免疫吸着剤製造方法であっ
て： （Ａ）前記炭化樹脂の製造において、有機相の成分はスチレンモノマーが５．
０〜７．５％ｗ／ｗ及びアクリロニトリルモノマーが７．５〜１０．０％ｗ／ｗ
、架橋剤としてのジビニルベンゼンが１０．０〜１２．５％ｗ／ｗ、孔形成剤と
してのトルエンが５０．０％ｗ／ｗ及び液体パラフィンが２５．０％ｗ／ｗ、過
酸化ベンゾイル開始剤が０．１５１０．３％であり、過酸化ベンゾイル開始剤の
量はスチレンモノマーおよびジビニルベンゼンの総合量の０．５〜１．０％であ
り、水相は１〜２％のポリヒーニルアルコール水溶液であり、有機相と水相の重
量比は１：２であることと； （Ｂ）免疫吸着剤の製造において、炭化樹脂は５７．１〜５９．５％ｖ／ｖ、
ＤＮＡ溶液は１９〜２０％ｖ／ｖ、コロジオンエーテル溶液は２１．４〜２２．
９％ｖ／ｖであり、ＤＮＡ濃度は１．３３ｍｇ／ｍＬ、コロジオン濃度は０．６
８％であることとを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN98102355A CN1209548A (zh) | 1998-06-08 | 1998-06-08 | 碳化树脂dna免疫吸附剂的制备方法 |
| CN98102355.X | 1998-06-08 | ||
| PCT/CN1999/000076 WO1999064071A1 (fr) | 1998-06-08 | 1999-06-07 | Procede de preparation d'un immunoadsorbant adn dans une resine carbonisee |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002517471A true JP2002517471A (ja) | 2002-06-18 |
Family
ID=5217286
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000553139A Pending JP2002517471A (ja) | 1998-06-08 | 1999-06-07 | 炭化樹脂ｄｎａ免疫吸着剤の製造方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6262172B1 (ja) |
| JP (1) | JP2002517471A (ja) |
| CN (1) | CN1209548A (ja) |
| GB (1) | GB2343511A (ja) |
| WO (1) | WO1999064071A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| DE10149251B4 (de) * | 2001-10-05 | 2007-04-19 | Sartorius Ag | Vorrichtung zur genetischen Immunisierung durch Einbringen von Wirkstoffen in ein Gewebe und Verfahren zur Herstellung einer Injektionslösung |
| CN101033248B (zh) * | 2006-03-10 | 2011-08-17 | 周逸明 | 一种制备小牛胸腺alpha1的新工艺 |
| CN105032373B (zh) * | 2015-05-29 | 2017-11-24 | 珠海健帆生物科技股份有限公司 | 一种具有仿生包膜材料的吸附剂及其制备方法 |
| CN106994336A (zh) * | 2016-01-25 | 2017-08-01 | 于杰 | 适用于精准血液净化疗法的医用吸附树脂 |
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| CN108246264B (zh) * | 2016-12-28 | 2020-12-15 | 健帆生物科技集团股份有限公司 | 一种dna免疫吸附剂及其制备方法 |
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|---|---|---|---|---|
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| DE3485711D1 (de) * | 1983-03-04 | 1992-06-17 | Scripps Clinic Res | Immunoadsorbens und verfahren zur zurueckgewinnung von vitamin-k-abhaengigen proteinen mittels dieses adsorbens. |
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1998
- 1998-06-08 CN CN98102355A patent/CN1209548A/zh active Pending
-
1999
- 1999-06-07 GB GB0002399A patent/GB2343511A/en not_active Withdrawn
- 1999-06-07 WO PCT/CN1999/000076 patent/WO1999064071A1/zh active Application Filing
- 1999-06-07 JP JP2000553139A patent/JP2002517471A/ja active Pending
-
2000
- 2000-02-07 US US09/499,312 patent/US6262172B1/en not_active Expired - Lifetime
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|---|---|
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