CN101033248B - 一种制备小牛胸腺alpha1的新工艺 - Google Patents
一种制备小牛胸腺alpha1的新工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种制备小牛胸腺alpha 1(天然存在于小牛等动物胸腺细胞中)的新工艺。本发明利用Fmoc-策略固相法制备胸腺alpha 1的新工艺。包括以下步骤：a.RinkAmide PEGA树脂或Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂或Rink AmidePEGA树脂其中的任何一种为起始原料，用Fmoc保护的氨基酸为单体挂上树脂后，按照固相合成的方法依次连接各种保护氨基酸得到保护二十八肽树脂；b.其间依次用醋酐封头；c.其间依次脱去Fmoc-保护基团；d.脱侧链保护基团及切肽同步进行，得粗品；e.粗品经反相HPLC分离纯化，制得胸腺肽α1精品。本发明具备规模生产能力，工艺简单，成本低，三废少，质量上乘(纯度≥98％)。接肽收率高(每步接肽收率为≥99％)。总收率约为：12％，便于工业化实施，具有产业化前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然存在的胸腺肽制备方法，尤其涉及一种制备小牛胸腺alpha 1的新工艺。
背景技术
胸腺肽，中文名：胸腺肽α1；小牛胸腺alpha 1；胸腺素alpha 1；胸腺28肽；
英文名：Thymosinα1；Thymosin alpha 1；
商品名：日达仙，
化学结构式：
Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH
分子式及分子量：C145H240N44O48S2 3431.9
胸腺素α1最早是从牛的胸腺中分离到的。由于组织提取受到材料来源的限制，且产率极低，不适合大批量生产。
1979年Wang等用液相化学合成方法合成本品之后，有人陆续报道了用固相全合成和片段合成法化学合成，为生产创造了条件。目前市场上出售的胸腺素α1均为化学合成，国外的产品已获得美国FDA批准，并且已成功进入我国市场。
胸腺肽a1由瑞士诺华制药公司研制开发，商品名为密钙息(英文名：Miacaicic)，1991年3月获得FDA批准上市。
美国专利(USP508,382)报道了一种固相法合成胸腺肽α1的制备方法：采用Bco策略合成胸腺肽α1的方法，该所述文献公开的方法使用剧毒、腐蚀性试剂，三废多，工艺复杂，成本高，工业化实施具有一定的难度，不能满足临床应用的需要。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种制备小牛胸腺alpha 1的新工艺，以克服现有技术存在的缺陷，满足临床应用的需要。
本发明的方法包括如下步骤：
(1)以Rink Amide PEGA树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂其中的任何一种为起始原料，在接肽试剂中，与Fmoc-Asn(R1)-OH或Fmoc-Asp(R2)-R3接肽反应，以TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt其中的任何一种为缩合剂，逐个接上氨基酸，其间依次加入醋酐进行乙酰化封头反应、加入脱帽试剂脱帽反应，脱去Fmoc-保护基团，获得保护二十八肽树脂；
其中：R1＝-H，-Trt，-Xan。
R2＝-OH，-OAll，-OMe，-OEt，-OPr，-OBu，-OtBu，-Obzl或OcHx。
R3＝-OH，-OAll，-OMe，-OEt，-OPr，-OBu，-OtBu，-OBzl，OcHx或-OPfp。
所说的接肽试剂为TBTU(MW：321.1)、HBTU(MW：379.3)或BOP(MW：442.3)其中的任何一种、HOBT(MW：135.1)或HOAT(MW：136.1)、NMM(MW＝101.2)或DIPEA(MW＝129.2)和DMF，NMM或DIPEA和DMF的体积比为：NMM或DIPEA∶DMF＝1∶5～15；
以被封头的树脂的重量为基准，醋酐的用量为2～20毫升/克；
所说的脱帽试剂为六氢吡啶的DMF溶液，六氢吡啶的重量浓度为15～55％，以被脱帽的树脂的重量为基准，脱帽试剂的用量为5～20毫升/克；
接肽反应温度为15～55℃，反应时间为0.5～3小时；乙酰化封头反应温度为15～55℃，反应时间为0.5～3小时；脱帽反应温度为15～55℃，反应时间为10～50分钟；
(2)加入切肽试剂切肽，得胸腺肽α1粗品；
(3)在C18柱或C8中进行分离纯化，获得目标产物。
总收率约为：12％。
其中：保护二十八肽树脂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将原料树脂Rink Amide-AM树脂、Rink Amide-MBHA树脂或Rink Amide PEGA树脂其中的任何一种，用DMF浸泡0.5～2小时，使树脂充分溶胀，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(A)；
(2)然后加入Fmoc-Asp-OtBu和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(B)；
NMM或DIPEA和DMF的混合溶液中：
(A)的重量浓度为5～20％，Fmoc-Asp-OtBu的摩尔数为(A)的2～5倍，TBTU、HBTU或BOP的摩尔数为(A)的2～5倍，HOBT或HOAT的摩尔数为(A)的2～5倍；
(3)在(B)中加入脱帽试剂，15～55℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Glu(OtBu)-OH(MW：425.5)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(C)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(B)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(4)在步骤(3)的(C)中加入脱帽试剂，15～55℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
加入Fmoc-Ala-OH(MW：311.3)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(D)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(C)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(5)在步骤(4)的(D)中加入脱帽试剂，15～55℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(E)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(D)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(6)在步骤(5)的(E)中加入脱帽试剂，15～55℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(F)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(E)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的重量为摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(7)在步骤(6)的(F)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Val-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(G)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(F)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(8)在步骤(7)的(G)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Val-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(H)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(G)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(9)在步骤(8)的(H)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Glu(OtBu)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(I)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(H)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(10)在步骤(9)的(I)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Lys(Boc)-OH(FW：468.5)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(J)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(I)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(11)在步骤(10)的(J)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Lys(Boc)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(K)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(J)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(12)在步骤(11)的(K)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(L)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(K)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(13)在步骤(12)的(L)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Lys(Boc)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(M)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(L)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(14)在步骤(13)的(M)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Leu-OH(FW：335.4)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(N)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(M)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(15)在步骤(14)的(N)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Asp(OtBu)-OH(FW：411.5)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，依用DMF洗涤，氮气吹干，获得(O)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(N)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(16)在步骤(15)的(O)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Lys(Boc)-OH(FW：468.5)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(P)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(O)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(17)在步骤(16)的(P)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Thr(tBu)-OH(FW：397.5)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Q)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(P)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(18)在步骤(17)的(Q)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Thr(tBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(R)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(Q)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(19)在步骤(18)的(R)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ile-OH(FW：353.4)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(S)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(R)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ile-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
醋酐的DMF溶液中，醋酐的重量浓度同上；
(20)在步骤(19)的(S)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(T)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(S)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(21)在步骤(20)的(T)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW：383.4)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(U)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(T)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(22)在步骤(21)的(U)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ser(tBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(V)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(U)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(23)在步骤(22)的(V)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干。加Fmoc-Thr(tBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(X)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(V)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(24)在步骤(23)的(X)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Asp(OtBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Y)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(X)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(25)在步骤(24)的(Y)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Val-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(Y)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(26)在步骤(25)的(Z)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ala-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干，获得(Z1)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(Z)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(27)在步骤(27)的(Z1)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ala-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z2)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(Z1)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(28)在步骤(27)的(Z2)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Asp(OtBu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z3)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(Z2)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(29)在步骤(28)的(23)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ser(tBu)-OH(FW：383.4)和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得(Z4)；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(Z3)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(30)在步骤(29)的(Z4)中加入脱帽试剂，20～30℃脱帽反应10～50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加入醋酐15～55℃乙酰化反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干，甲醇洗涤，干燥，获得保护的28肽树脂：
Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBtu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-He-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-树脂。
所说的切肽包括如下步骤：
将所说的保护的28肽树脂加入切肽试剂：(TFA/TIS/EDT/H2O＝900/40/25/10，体积)，25-30℃搅拌1～3小时，过滤，氮气吹干，滤液加无水乙醚沉淀，过滤，收集沉淀获得胸腺肽α1粗品；
保护的28肽树脂与切肽试剂的重量比例为：
保护的28肽树脂∶切肽试剂＝1∶5～20；
所说的纯化包括如下步骤：
将上述收集的滤液通过C18或C8柱纯化，流动相为：0.05-1M醋酸盐或磷酸盐或三氟乙酸盐∶乙腈(10-90∶90-10)；流速为：50～650ml/min检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，冻干，收集目标产物，收率17.2％(以Rink AmideMBHA-树脂的18.7mmol计)，纯度≥98％。
由上述公开的技术方案可见，本发明的方法，具备规模生产能力，工艺简单，成本低，三废少，质量上乘(纯度≥98％)。接肽收率高(每步接肽收率为≥99％)。生产成本低。采用C18柱进行分离纯化，流动相为：0.05-1M醋酸盐或磷酸盐或三氟乙酸盐∶乙腈(10-60∶90-40)；流速为：50～1000ml/min的方法，避免使用氟化氢，减少三废。每步接肽收率均在99％以上；总收率约为：12％。
由此可见，本发明的方法便于工业化实施，具有较大的产业化前景。
具体实施方式
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
其中：R1＝-H，-Trt，-Xan。
R2＝-OH，-OAll，-OMe，-OEt，-OPr，-OBu，-OtBu，-Obzl或OcHx。
R3＝-OH，-OAll，-OMe，-OEt，-OPr，-OBu，-OtBu，-OBzl，OcHx或-OPfp。
| No | 品名 | 生产厂商 |
| 1 | Rink Amide AM树脂 | 天津和成科技有限公司 |
| 2 | Rink Amide MBHA树脂 | 天津和成科技有限公司 |
| 3 | Fmoc-Asn-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 4 | Fmoc-Asn(Trt)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 5 | Fmoc-Asn(Xan)-OH | 四川三生化高股份有限公司 |
| 7 | Fmoc-Asp(OBzl)-OH | 四川三生化高股份有限公司 |
| 8 | Fmoc-Asp-OBzl | 四川三生化高股份有限公司 |
| 9 | Fmoc-Asp-OtBu | 四川三高生化股份有限公司 |
| 10 | Fmoc-Asp(OtBu)-OH | 四川三生化高股份有限公司 |
| 11 | Fmoc-Glu(OtBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 12 | Fmoc-Ala-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 13 | Fmoc-Val-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 14 | Fmoc-Lys(Boc)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 15 | Fmoc-Leu-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 16 | Fmoc-Asp(OtBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 17 | Fmoc-Thr(tBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 18 | Fmoc-Ile-OH | 四川三生化高股份有限公司 |
| 19 | Fmoc-Ser(tBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 20 | HOBt(N-Hydroxybenzotriazole) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 21 | HBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium hexafluorophosphate) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 22 | TBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium tetrafluoroborate) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 23 | BOP(Benzotriazole-1-yl-oxy-tris-(dimethylamino)-phosphoniumhexaflorophosphate | 四川三高生化股份有限公司 |
| 24 | 三氟乙酸(TFA) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 25 | 二甲氨基吡啶(DMAP) | Merck公司 |
| 26 | N-甲基吗啡啉(NMP) | Merck公司 |
| 27 | 乙二硫醇(EDT) | Merck公司 |
| 28 | 三异丙基硅烷(TIS) | Merck公司 |
| 29 | 醋酐 | 上海化学试剂公司 |
| 30 | 六氢吡啶(PIP) | 上海化学试剂公司 |
实施例1
实施例中，所说的脱帽试剂为六氢吡啶的DMF溶液，六氢吡啶的重量浓度为25％。
(1)制备Fmoc-Asp-(OtBu)-树脂
取50gRink Amide MBHA树脂(0.8mmol/g树脂，40mmol)装入反应容器中，用500ml DMF浸泡、洗涤，使树脂充分溶胀，氮气吹干。DMF洗涤六次，氮气吹干。
取82g(FW：411.5，200mmol)Fmoc-Asp-OtBu，64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器，25℃反应2小时。氮气吹干，分别用用DMF洗涤六次，氮气吹干。
加入500ml醋酐∶DMF(1∶1，体积，下同)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(2)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟，氮气吹干，以DMF洗涤六次。加入85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤三次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(3)制备Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加62.3g(FW：311.3，200mmol)Fmoc-Ala-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(4)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(5)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(6)制备Fmoc-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(7)制备Fmoc-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(8)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
在上述脱帽反应后的树脂中，加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(9)制备Fmoc-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加93.7g(FW：468.5，200mmol)Fmoc-Lys(Boc)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(10)制备Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加93.7g(FW：468.5，200mmol)Fmoc-Lys(Boc)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(11)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(12)制备Fmoc-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加93.7g(FW：468.5，200mmol)Fmoc-Lys(Boc)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(13)制备Fmoc-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加70.7g(FW：353.4，200mmol)Fmoc-Leu-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(14)制备Fmoc-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加82.3g(FW：411.5，200mmol)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(15)制备Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加93.7g(FW：468.5，200mmol)Fmoc-Lys(Boc)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(16)制备Fmoc-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加79.5g(FW：397.5，200mmol)Fmoc-Thr(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(17)制备Fmoc-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加79.5g(FW：397.5，200mmol)Fmoc-Thr(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(18)制备Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加70.7g(FW：353.4，200mmol)Fmoc-Thr(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(19)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(20)制备Fmoc-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加76.7g(FW：383.4，200mmol)Fmoc-Ser(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(21)制备Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加76.7g(FW：383.4，200mmol)Fmoc-Ser(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(22)制备Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加70.7g(FW：353.4，200mmol)Fmoc-Thr(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(23)制备Fmoc-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加82.3g(FW：411.5，200mmol)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(24)制备Fmoc-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加85.1g(FW：425.5，200mmol)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(25)制备Fmoc-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加62.3g(FW：311.3，200mmol)Fmoc-Ala-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(26)制备Fmoc-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加62.3g(FW：311.3，200mmol)Fmoc-Ala-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(27)制备Fmoc-Asp(OtBtu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加82.3g(FW：411.5，200mmol)Fmoc-Asp(OtBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(28)制备Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBtu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加76.7g(FW：383.4，200mmol)Fmoc-Ser(tBu)-OH、64.2g(200mmol)TBTU、27.0g(200mmol)HOBT，用500ml DMF溶解，加入反应容器。25℃反应1小时。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，用DMF洗涤六次，氮气吹干。
(29)制备Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBtu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-树脂
加入500ml脱帽试剂，25℃反应15分钟。DMF洗涤六次，氮气吹干。加入500ml醋酐∶DMF(1∶1)，25℃反应1小时。氮气吹干，分别用DMF、无水乙醇、和DMF和无水乙醇各洗涤三次；
氮气吹干后，放入真空干燥器中干燥，称重，保护的28肽树脂约120g。
(30)制备Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH的粗品
保护的28肽树脂转移到2000ml反应瓶中，加入事先配制好的试剂(TFA/EDT/H2O/TIS＝800ml/30ml/15ml/15ml)，25℃搅拌2小时。滤去树脂，树脂用TFA洗3次，合并滤液及洗涤液，减压浓缩至小体积，加入1500ml冷甲基叔丁基醚沉淀，离心收集，用甲基叔丁基醚洗后，P2O5真空干燥，得肽粗品约72g。
6分离纯化
将肽粗品溶于水后，过滤，滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.2M磷酸缓冲液∶乙腈(7.5∶2.5)；流速为500ml/min检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后冻干，得12g白色块状物成品。总收率：12％。
实施例2～3
采用与实施例1相同的方法和工艺条件，其中：
分别以Rink Amide AM树脂或Rink Amide PEGA树脂作起始原料，同前法接上Fmoc-Asp(R1)-R2后，再加入脱帽试剂，25℃反应2小时，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-氨基酸、TBTU或HBTU和HOBT的混合物，25℃反应2小时，再经切肽等反应，得到11.2g和13.1g白色疏松块状物成品，收率分别为11.3％和13.2％。
Claims (4)
1.一种制备小牛胸腺alpha 1的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以Rink Amide PEGA树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂其中的任何一种为起始原料，在接肽试剂中，与Fmoc-Asp(R2)-R3加缩合剂进行接肽反应，逐个接上氨基酸，其间依次加入醋酐进行乙酰化封头反应、加入脱帽试剂进行脱帽反应，脱去Fmoc-保护基团，获得保护二十八肽树脂；
其中：
R2＝-OH，-OAll，-OMe，-OEt，-OPr，-OBu，-OtBu，-OBzl或OcHx；
R3＝-OH，-OAll，-OMe，-OEt，-OPr，-OBu，-OtBu，-OBzl，OcHx或-Opfp；
所说的接肽试剂为：NMM或DIPEA中的一种和DMF，NMM或DIPEA和DMF的体积比为：NMM或DIPEA∶DMF＝1∶5～15；
所说缩合剂为：TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt及或TBTU/HOAt或HBTU/HOAt或BOP/HOAt其中的任何一种为缩合剂：
第一种，TBTU/HOBt，第二种HBTU/HOBt，第三种，BOP/HOBt，第四种TBTU/HOAt，第五种，HBTU/HOAt，第六种，BOP/HOAt；
所说的脱帽试剂为六氢吡啶的DMF溶液；
(2)加入切肽试剂进行切肽，得胸腺肽α1粗品；
(3)在C18柱或C8中进行分离纯化，获得目标产物；
所述的六氢吡啶的重量浓度为15～55％，以被脱帽树脂的重量为基准，脱帽试剂的用量为5～20毫升/克；
接肽反应温度为15～55℃，反应时间为0.5～3小时；乙酰化封头反应温度为15～55℃，反应时间为0.5～3小时；脱帽反应温度为15～55℃，反应时间为10～50分钟；
以被封头的树脂的重量为基准，醋酐的用量为2～20毫升/克；
所述的保护二十八肽树脂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将原料树脂Rink Amide AM树脂、Rink Amide MBHA树脂或Rink Amide PEGA树脂其中的任何一种用DMF浸泡0.5～2小时，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得A；
(2)然后加入Fmoc-Asp-OtBu和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；
加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得B；
NMM或DIPEA和DMF的混合溶液中：
A的重量浓度为5～20％，Fmoc-Asp-OtBu的摩尔数为A的2～5倍，TBTU、HBTU或BOP的摩尔数为A的2～5倍，HOBT或HOAT的摩尔数为A的2～5倍；
(3)在B中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干：加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得C；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
B的重量浓度为5～20％：Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(4)在步骤3的C中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；
加入Fmoc-Ala-OH，MW：311.3和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得D；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
C的重量浓度为5～20％：Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(5)在步骤4的D中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得E；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
D的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(6)在步骤5的E中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得F；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
E的重量浓度为5～20％：Fmoc-Glu(OtBu)-OH的重量为摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(7)在步骤6的F中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Val-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得G；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
F的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(8)在步骤7的G中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-VaI-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得H；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
G的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(9)在步骤8的H中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DIVIF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Glu(OtBu)和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得I；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
H的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(10)在步骤9的I中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Lys(Boc)-OH，FW：468.5和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得J；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
I的重量浓度为5～20％：Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍：TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(11)在步骤10的J中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Lys(Boc)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得K；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
J的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍：HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(12)在步骤11的K中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Glu(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得L：
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
K的重量浓度为5～20％：Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2-5倍；
(13)在步骤12的L中加入脱帽试剂，脱帽反应，氨气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Lys(Boc)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得M；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
L的重量浓度为5～20％；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(14)在步骤13的M中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Leu-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氨气吹干，用DMF洗涤，获得N；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
M的重量浓度为5～20％；Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(15)在步骤14的N中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Asp(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干：加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得O；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
N的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍：HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(16)在步骤15的O中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Lys(Boc)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得P；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
O的重量浓度为5～20％：Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(17)在步骤16的P中加入脱帽试剂，20-30℃脱帽反应10-50分钟，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Thr(tBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Q；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
P的重量浓度为5～20％：Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(18)在步骤17的Q中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹于，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Thr(tBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得R；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
Q的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(19)在步骤18的R中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ile-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得S；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
R的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ile-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
醋酐的DMF溶液中，醋酐的重量浓度同上；
(20)在步骤19的S中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Glu(Otlu)-OH和接肽试剂，15～55℃接肽反应0.5～3小时，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得T；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
S的重量浓度为5～20％；Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(21)在步骤20的T中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ser(tBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得U；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
T的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2-5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(22)在步骤21的U中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ser(tBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干：加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得V；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
U的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍：HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(23)在步骤22的V中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-ThrtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得X；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
V的重量浓度为5～20％；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍：HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(24)在步骤23的X中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoe-Asp(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Y；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
(X)的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍：TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(25)在步骤24的Y中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Val-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Z；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
Y的重量浓度为5～20％；Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(26)在步骤25的Z中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气干，加Fmoc-Ala-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Z1；
NMM或DII′EA与DMF的混合溶液中：
Z的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(27)在步骤26的Z1中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ala-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Z2；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
Z1的重量浓度为5-20％；Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍：HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(28)在步骤27的Z2中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干；加Fmoc-Asp(OtBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Z3；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
Z2的重量浓度为5～20％；Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(29)在步骤28的Z3中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加Fmoc-Ser(tBu)-OH和接肽试剂，接肽反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干；加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，获得Z4；
NMM或DIPEA与DMF的混合溶液中：
Z3的重量浓度为5～20％；Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍：HOBT或HOAT的摩尔数为树脂的2～5倍；
(30)在步骤29的Z4中加入脱帽试剂，脱帽反应，氮气吹干，用DMF洗涤，氮气吹干，加入醋酐乙酰化反应，氮气吹干，DMF洗涤，氮气吹干，甲醇洗涤，干燥，获得保护的28肽树脂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的切肽包括如下步骤：将所说的保护的28肽树脂加入切肽试剂：TFA/TIS/EDT/H2O＝900ml/40ml/25ml/10ml，25-30℃搅拌1～3小时，过滤，氮气吹干，滤液加无水乙醚沉淀，过滤，收集沉淀获得胸腺肽α1粗品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，保护的28肽树脂与切肽试剂的重量比例为：保护的28肽树脂∶切肽试剂＝1∶5～20。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的分离纯化包括如下步骤：将上述收集的滤液通过C18或C8柱纯化，流动相：0.05-1M醋酸盐或磷酸盐或三氟乙酸盐∶乙腈的比例为10-40∶90-60；流速为：50～1000ml/min；检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，冻干，收集目标产物。
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