CN102952175A - 固相多肽合成生长抑素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种固相多肽合成生长抑素的方法，包括如下步骤：以2-氯三苯基醇树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，得保护的还原型十四肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得还原型生长抑素，并在pH为7～9的条件下用双氧水氧化，获得生长抑素粗品，再经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长抑素精品。本发明具备规模化生产能力，工艺稳定，生产成本低，三废减少，副产物少，质量稳定，生产成本低，极具市场竞争力。
Description
技术领域
本发明涉及生长抑素的生产方法，尤其涉及固相多肽合成生长抑素的新生产工艺。
背景技术
中文名：生长抑素。其他名称：生长抑素释放抑制激素，商品名：施他宁。英文名：Somatostatin，Stilamin。
结构式：
分子式及分子量：C76H104N18O19S2，1637.9。
临床用途：严重急性食管静脉曲张破裂出血，严重急性胃、十二指肠溃疡出血，急性糜烂性胃炎或出血性胃炎，胰、胆和肠屡的辅助治疗，糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。
申请号02155189.8的专利“生长抑素全合成新方法”公开了固相多肽合成方法，该方法用DCC为缩合剂合成了12肽，再接上Boc-Ala-Gly-OH二肽，最后DMSO氧化，中压色谱柱层析纯化的方法。该专利所存在的显著缺陷是：(1)用DCC缩合反应时间长，生产周期太长，(2)制备二肽操作比较麻烦，(3)DMSO氧化三废较多，(4)中压色谱柱层析纯化速度较慢、精度较差。
申请号200910131201.4的专利“十四肽生长抑素的制备方法”公开了一种液相片段合成的方法，用液相法分别合成了5肽、3肽和6肽，然后将3个片段分别用液相法合成依次缩合而成。此法不足之处在于：(1)制备五肽、三肽和六肽的操作比较麻烦，反应周期也很长，(2)未进行分离纯化。
申请号2009101424202的专利“一种生长抑素的合成方法”公开了一种液相片段合成的方法，将4个4肽片段分别用液相法合成，再用将4个4肽片段依次缩合而成。此法不足之处在于：(1)制备4个四肽的操作比较麻烦，反应周期很长。(2)空气氧化反应需2-3天，不适用于工业化生产，(3)分离纯化用0.1％TFA专一性较差。
因此目前的方法限制了生长抑素的大规模生产和使用。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种固相多肽合成生长抑素的新生产工艺，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明的方法包括如下步骤：
以2-氯三苯基醇树脂(2-Chlorotritylalcohol Resin，2-CTA Resin)为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，得保护的还原型十四肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得还原型生长抑素，并在pH为7～9的条件下用双氧水氧化，获得生长抑素粗品，再经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长抑素精品。
按照本发明，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十四肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团的工艺包括如下步骤：
(1)生产Fmoc-Cys(Trt)-树脂
将2-氯三苯基醇树脂(100-150目，0.7mmol/g)，加入DCM，室温搅拌溶胀0.5～1小时，搅拌下，加入氯化亚砜，再于室温搅拌反应2～3小时，抽干，用DCM洗涤，抽干；
2-氯三苯基醇树脂与氯化亚砜的重量比为：1∶1～2；
加入DMF，再加入用DMF溶解的Fmoc-Cys(Trt)-OH和DIPEA，于32～38℃反应1.0～1.5小时，再加甲醇，32～37℃反应30～90分钟，抽干，树脂用甲醇洗涤一次，用DMF洗洗，抽干；
DMF中，Fmoc-Cys(Trt)-OH∶2-氯三苯基醇树脂＝1～2∶1，摩尔比；
DIPEA∶2-氯三苯基醇树脂＝5～7∶1，摩尔比；
(2)生产Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(1)的Fmoc-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的Fmoc-Ser(tBu)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32-37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
各个组分的用量，以2-氯三苯基醇树脂为基准，为：
重量浓度为25.5～26.5％的PIP∶2-氯三苯基醇树脂＝6～8∶1，重量；
Fmoc-Ser(tBu)-OH∶2-氯三苯基醇树脂＝3～4∶1，摩尔；
DMF：与2-氯三苯基醇树脂的重量比6～8∶1；
TBTU：的用量为2-氯三苯基醇树脂的3～4∶1，摩尔；
HOBT：的含量为2-氯三苯基醇树脂的3～4∶1，摩尔；
NMM：的含量为2-氯三苯基醇树脂的6～8∶1，摩尔；
(3)生产Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(2)的Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽22～24分钟，抽干，分别用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32-37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(4)生产Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(3)的Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32-37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(5)生产Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(4)的Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32-37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(6)生产Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(5)的Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(7)生产Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(6)的Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Fmoc-Trp-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(8)生产Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(7)的Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(9)生产Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(8)的Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF试剂溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(10)生产Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(9)的Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(11)生产Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(10)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32-35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(12)生产Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(11)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF试剂溶解的Fmoc-Cys(Trt)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(13)生产Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(12)的Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(14)生产Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(13)的Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25.5～26.5％PIP的DMF溶液，32～35℃脱帽反应22～24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF溶解的Boc-Ala-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，32～37℃缩合反应1.0～1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂，约得保护的十四肽树脂。
在步骤(2)～(14)中，各个组分的用量，以2-氯三苯基醇树脂为基准，为：
重量浓度为25.5～26.5％的PIP∶2-氯三苯基醇树脂＝6～8∶1，重量；
具有保护基团的氨基酸∶2-氯三苯基醇树脂＝3～4∶1，摩尔；
DMF：与2-氯三苯基醇树脂的重量比6～8∶1；
TBTU：的用量为2-氯三苯基醇树脂的3～4∶1，摩尔；
HOBT：的含量为2-氯三苯基醇树脂的3～4∶1，摩尔；
NMM：的含量为2-氯三苯基醇树脂的6～8∶1，摩尔。
优选的，所述的同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得还原型生长抑素的方法，包括如下步骤：
(15)生产Ala-Gly-Cys(SH)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(SH)-OH
在步骤(14)的Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入预冷至5～7℃的切肽试剂(TFA/TIS/PhOH/3-Map/H2O＝24300/1080ml/675ml/675/270ml)，31～33℃反应1.5～2.0小时，减压除溶剂后，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，P2O5真空干燥，获得切肽后的还原型生长抑素，约2.36kg。收率92.60％。
优选的，在pH7-8的条件下，用双氧水氧化，获得生长抑素粗品的方法，包括如下步骤：
(16)生产
在步骤(15)的Ala-Gly-Cys(SH)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(SH)-OH中，用重量浓度为5～25％的氨水调节pH至7～8，在15～17℃下，加入重量浓度为25～30％的双氧水，氧化反应25～27分钟，获得生长抑素粗品；
以2-氯三苯基醇树脂为基准，所述双氧水的用量为2.0～2.2kg/100ml；
优选的，经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长抑素精品的方法，包括如下步骤：
将步骤(16)的产物过滤，滤液经C18高效液相柱纯化，柱直径为210mm，柱长为265mm，流速为950ml/min；检测波长为：280nm；流动相为：磷酸三乙胺与乙腈混合溶液；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，再除尽乙腈、冻干，获得成品，总收率为：26.24％。
本发明的生长抑素新生产工艺具有下列特点，具备规模化生产能力，工艺稳定，生产成本低，三废减少，副产物少，质量稳定，生产成本低，极具市场竞争力。
具体实施方式
实施例1
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
实施例1
(1)生产Fmoc-Cys(Trt)-树脂
称取2.22kg 2-氯三苯基醇树脂(100-150目，0.7mmol/g)，加入50L多肽合成仪，加入14LDCM，室温搅拌溶胀1小时。搅拌下，30分钟内通过恒压漏斗缓慢滴加3.6kg氯化亚砜(d＝1.638)，再于室温搅拌反应3小时。
抽干，用72LDCM分6次洗涤，每次用12LDCM，搅拌15分钟后抽干。
加入DMF 7L，再加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Cys(Trt)-OH 1.76kg，DIPEA 1.187kg，于35±3℃反应1.5小时。再加甲醇2.5L，34.5±2.5℃反应30分钟。抽干，树脂用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
(2)生产Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(1)的Fmoc-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5脱帽反应24分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Ser(tBu)-OH 2.4kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，分别用DMF洗涤2次，抽干，获得Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(3)生产Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(2)的Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH 2.49kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(4)生产Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(3)的Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Phe-OH 2.42kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(5)生产Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(4)的Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH 2.49kg TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(6)生产Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(5)的Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH 2.93kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(7)生产Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(6)的Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Trp-OH 2.66kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(8)生产Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(7)的Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Phe-OH 2.42kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(9)生产Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(8)的Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L试剂溶解的Fmoc-Phe-OH 2.42kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)树脂。
(10)生产Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(9)的Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH 3.73kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)树脂。
(11)生产Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(10)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH 2.93kg TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(12)生产Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(11)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L试剂溶解的Fmoc-Cys(Trt)-OH 3.66kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(13)生产Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(12)的Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Gly-OH 1.86kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM 926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂。
(14)生产Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(13)的Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25％PIP的DMF溶液14.5kg，33.5±1.5℃脱帽反应24分钟，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干。
加入用DMF 7L溶解的Boc-Ala-OH 1.18kg、TBTU 2.01kg、HOBT 0.85kg和NMM926g的混合物，34.5±2.5℃缩合反应1.5小时，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂，约得保护的十四肽树脂6.55kg。
(15)生产Ala-Gly-Cys(SH)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(SH)-OH
在步骤(14)的Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入预冷至6±2℃的切肽试剂(TFA/TIS/PhOH/3-Map/H2O＝24300/1080ml/675ml/675/270ml)，33℃反应2.0小时，减压除溶剂后，加入100L乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，P2O5真空干燥，获得切肽后的还原型生长抑素，约2.36kg。收率：(2360/1640×1000)÷(2220×0.7)＝92.60％。
(16)生产
在步骤(15)的Ala-Gly-Cys(SH)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(SH)-OH中，用重量浓度为25％的氨水调节pH至7.9，在16±2℃下，用重量浓度为30％的双氧水100ml，氧化反应25分钟。获得生长抑素粗品。
过滤，滤液经C18高效液相柱分离纯化，柱直径为210mm，柱长为265mm，流速为950ml/min；检测波长为：280nm；流动相：0.1mol/L磷酸三乙胺∶乙腈(74∶26)；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，再除尽乙腈、冻干，获得成品668g(MW：1638)，总收率为：(668/1638×1000)÷(2220×0.7)＝26.24％。
Claims (8)
1.固相多肽合成生长抑素的方法，其特征在于，包括如下步骤：以2-氯三苯基醇树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，得保护的还原型十四肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得还原型生长抑素，并在pH为7～9的条件下用双氧水氧化，获得生长抑素粗品，再经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长抑素精品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十四肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团的方法，包括如下步骤：
(1)生产Fmoc-Cys(Trt)-树脂
将2-氯三苯基醇树脂，加入DCM，室温搅拌溶胀，加入氯化亚砜，再于室温反应2～3小时，抽干，用DCM洗涤，抽干；
2-氯三苯基醇树脂与氯化亚砜的重量比为：1∶1～2；
加入DMF，再加入用DMF溶解的Fmoc-Cys(Trt)-OH和DIPEA，于32～38℃反应1.0～1.5小时，再加甲醇，32～37℃反应30～90分钟，抽干，树脂用甲醇洗涤一次，用DMF洗洗，抽干；
DMF中，Fmoc-Cys(Trt)-OH∶2-氯三苯基醇树脂＝1～2∶1，摩尔比；
DIPEA∶2-氯三苯基醇树脂＝5～7∶1，摩尔比；
(2)生产Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(1)的Fmoc-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的Fmoc-Ser(tBu)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(3)生产Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(2)的Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽，抽干，分别用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(4)生产Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(3)的Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤二次，抽干，获得Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(5)生产Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(4)的Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇洗涤一次，用DMF洗五次，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(6)生产Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(5)的Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF 7L溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(7)生产Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(6)的Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Trp-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(8)生产Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(7)的Fmoc-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(9)生产Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(8)的Fmoc-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF试剂溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(10)生产Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(9)的Fmoc-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(11)生产Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(10)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(12)生产Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(11)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF试剂溶解的Fmoc-Cys(Trt)-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(13)生产Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(12)的Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；
(14)生产Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂
在步骤(13)的Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入重量浓度为25.5～26.5％PIP的DMF溶液，脱帽反应，抽干，依次用甲醇和DMF洗涤，抽干；
加入用DMF溶解的Boc-Ala-OH、TBTU、HOBT和NMM的混合物，缩合反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂，约得保护的十四肽树脂；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，各个步骤的脱帽反应温度为32～35℃，反应时间为22～24分钟，缩合反应温度为32-37℃，缩合反应1.0～1.5小时。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(2)～(14)中，各个组分的用量，以2-氯三苯基醇树脂为基准，为：
重量浓度为25.5～26.5％的PIP∶2-氯三苯基醇树脂＝6～8∶1，重量；
具有保护基团的氨基酸∶2-氯三苯基醇树脂＝3～4∶1，摩尔；
DMF：与2-氯三苯基醇树脂的重量比6～8∶1；
TBTU：的用量为2-氯三苯基醇树脂的3～4∶1，摩尔；
HOBT：的含量为2-氯三苯基醇树脂的3～4∶1，摩尔；
NMM：的含量为2-氯三苯基醇树脂的6～8∶1，摩尔。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，各个步骤的脱帽反应温度为32～35℃，反应时间为22～24分钟，缩合反应温度为32-37℃，缩合反应1.0～1.5小时。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得还原型生长抑素的方法，包括如下步骤：
(15)生产Ala-Gly-Cys(SH)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(SH)-OH
在步骤(14)的Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂中，加入预冷至5～7℃的切肽试剂(TFA/TIS/PhOH/3-Map/H2O＝24300/1080ml/675ml/675/270ml)，31～33℃反应1.5～2.0小时，减压除溶剂后，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，P2O5真空干燥，获得切肽后的还原型生长抑素。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在pH7-8的条件下，用双氧水氧化，获得生长抑素粗品的方法，包括如下步骤：
(16)生产
在步骤(15)的Ala-Gly-Cys(SH)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys(SH)-OH中，用重量浓度为5～25％的氨水调节pH至7～8，在15～17℃下，加入重量浓度为10～30％的双氧水，氧化反应25～27分钟，获得生长抑素粗品；
以还原型生长抑素粗品为基准，所述双氧水的用量为2.0～2.5kg/100ml。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长抑素精品的方法，包括如下步骤：将步骤(16)的产物过滤，滤液经C18高效液相柱纯化，柱直径为210mm，柱长为265mm，流速为950ml/min；检测波长为：280nm；流动相为：磷酸三乙胺与乙腈混合溶液；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，再除尽乙腈、冻干，获得成品。
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