JP2002515445A

JP2002515445A - 細胞毒性活性を有する医薬品調製のためのｈｍｇ蛋白質の使用

Info

Publication number: JP2002515445A
Application number: JP2000549273A
Authority: JP
Inventors: アルベルトバルトレリ、
Original assignee: イスティトゥートディリチェルケ “ジォルジォシシーニ”
Priority date: 1998-05-19
Filing date: 1999-05-19
Publication date: 2002-05-28
Also published as: EP1079849B1; DE69900756D1; ES2171086T3; DE69900756T2; AU4363199A; EP1079849A2; DK1079849T3; IT1299583B1; PT1079849E; WO1999059609A2; WO1999059609A3; ATE211391T1; ITMI981094A1

Abstract

(57)【要約】活性成分として、ＨＭＧ群の蛋白質、その断片、または、ＨＭＧのアミノ酸配列に対応するあるいは由来するアミノ酸配列を有するペプチドを含んでなる、医薬組成物を記載する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、細胞毒性活性を有する医薬品の調製のためのＨＭＧ蛋白質の使用に
関するものである。

【０００２】本発明は、さらに、ＨＭＧ蛋白質のアミノ末端領域に相当する、または相同な
アミノ酸配列を有するペプチドに関するものである。

【０００３】（背景技術）ＨＭＧ蛋白質は、「高移動性群」蛋白質としても知られ、遺伝子発現の制御過
程に関与し、且つクロマチンに付随している、高度に保存された核蛋白質ファミ
リーに属している。

【０００４】ＨＭＧ蛋白質（以後、ＨＭＧと略す）の治療的用途は、これまで記載されてい
ない。最もよく研究されているＨＭＧ蛋白質には、ＨＭＧ−ＩおよびＨＭＧ−１
蛋白質が含まれる。

【０００５】別々の著者何人かが、最近、ＨＭＧのますます複雑な役割について報告してい
る。たとえば、Ｊａｙａｒａｍａｅｔａｌ．、ＧｅｎｅｓＤｅｖ．１９９
８、１２（４）：４６２〜４７２は、ｐ５３蛋白質の賦活体としてのＨＭＧ−Ｉ
の役割について開示している。

【０００６】Ｚａｐｐａｖｉｇｎａｅｔａｌ．、ＴｈｅＥｍｂｏＪ、１５（１８）
、１６／９／１９９６は、ＨＭＧ−Ｉ蛋白質は、ＨＯＸ遺伝子ファミリーによっ
てコードさている生成物が介する転写活性化における、補助因子であるという仮
説を呈している。

【０００７】Ｆａｌｃｉａｌａｅｔａｌ．、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７、
１３７（１）、１９〜２６は、ＨＭＧ−Ｉは、ヒストンＨ１とは異なり、体細
胞染色体としっかりとした結合をしてはいないことを報告している。

【０００８】Ｐａｓｓａｌａｑｕａｅｔａｌ．、ＦＥＢＳＬｅｔｔ．１９９７、４
００（３）、２７５〜９は、マウスの赤白血病細胞は、細胞の外皮表面上にＨＭ
Ｇ−Ｉを蓄積していることを示している。

【０００９】（発明の開示）ここに、ＨＭＧ蛋白質またはその配列に由来するペプチドが、動物ならびにヒ
トの血漿中において、腫瘍細胞に対する細胞毒性な抗体応答を誘起することを見
出した。

【００１０】前記抗体応答は、主に免疫グロブリンＧおよびＭ（ＩｇＧおよびＩｇＭ）の介
在によっており、腫瘍疾患に対して、特には、癌腫および腺癌の治療において、
有意な治療効果をもたらす。

【００１１】また、細胞毒性な抗体応答の誘起を主に担っているＨＭＧの領域は、ＨＭＧ蛋
白質のＮ末端に位置していることも見出した。

【００１２】したがって、本発明は、活性成分として、ＨＭＧ群の蛋白質、その断片、また
は、ＨＭＧ配列に対応するあるいは由来するアミノ酸配列を有するペプチドを含
んでなる医薬組成物を提供する。

【００１３】好適なＨＭＧ蛋白質には、哺乳類のＨＭＧ−ＩおよびＨＭＧ−１蛋白質が含ま
れる。

【００１４】好ましくは、断片は、Ｎ末端の配列を含み、また、ペプチドは、ＨＭＧのＮ末
端配列に対応する、あるいは由来している配列を有している。

【００１５】「ＨＭＧ−Ｉ蛋白質」または「ＨＭＧ−１蛋白質」の用語は、それぞれ、ＳＷ
ＩＳＳ−ＰＲＯＴデータ・ベースに、アクセス番号：Ｐ１７０９６として報告さ
れているヒトＨＭＧ−Ｉの配列、あるいは、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴデータ・ベー
スに、アクセス番号：Ｐ０９４２９として報告されているヒトＨＭＧ−１の配列
と、少なくとも７０％、好ましくは８０％より高い、より好ましくは９０％より
高い相同性を有する、非ヒストン染色体蛋白質を意味する。

【００１６】本発明は、また、アミノ酸の付加、削除、あるいは保存的な置換により得られ
るＨＭＧの変異体にも関する。前記変異体は、例えば、部位特異的変異法によっ
て得ることが可能である。

【００１７】本発明に従って、利用することが可能なＨＭＧは、異なる起源、好ましくは、
哺乳類起源、例えば、ヒト、ヤギ、マウス、ブタ、ウサギ、ラット由来であって
も構わない。

【００１８】「ＨＭＧ蛋白質の配列に対応する、あるいは由来するアミノ酸配列を有するペ
プチド」の用語は、先に定義したＨＭＧ配列と、少なくとも７０％、好ましくは
８０％より高い相同性を有する配列を備える、１０から４０個のアミノ酸、好ま
しくは１０から３０個のアミノ酸、より好ましくは１０から２５個のアミノ酸を
有するペプチドのことを意味する。

【００１９】ＨＭＧ−Ｉの１〜１９番目のペプチドは、ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ、サンタクルーズ、カリフォルニア、米国から市販されている
。

【００２０】本発明は、また、前記のものとは異なるペプチド、ならびに、かかるペプチド
およびＨＭＧを識別するモノまたはポリクローナル抗体にも関する。前記抗体は
、治療、あるいは、診断ならびに免疫組織化学的な方法に使用することが可能で
ある。

【００２１】このＨＭＧは、通常の抽出法、あるいはＤＮＡ組み換え法によって、調製する
ことが可能である。ＨＭＧをコードする遺伝子は、実際に公知となっており、原
核または真核細胞に対して適している発現ベクター内に挿入することが可能であ
る。

【００２２】本発明のペプチドは、固相および均質相の何れにおいても、通常のペプチド合
成法によって調製することが可能である。本発明のペプチドは、また、通常の手
法に用いる手段によって、代謝分解、例えば、プロテアーゼに対する安定化を施
すことも可能である。これらの手法は、非天然のＤ−アミノ酸、レトロ反転結合
あるいは、末端ＮＨ₂またはＣＯＯＨ基への、または配列中のアミノ酸のその他
の基への置換の利用に拠っている。

【００２３】本発明のペプチドは、また、公知の蛋白質、例えばアルブミン、の配列中に挿
入して、所望の安定性、薬物動態特性および担体特性を有するキメラ蛋白質を得
ることも可能である。

【００２４】このアミノ酸配列は、また、Ｈ．ＮｅｕｒａｔｈａｎｄＲ．Ｌ．Ｈｉｌｌ
「ＴｈｅＰｒｏｔｅｉｎｓ」、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ニューヨーク
、米国、１９７９に開示されているような、保存的なアミノ酸置換の手法により
、改変されてもよい。

【００２５】別法として、このペプチドは組み換えＤＮＡ法によって得ることも可能である
。この目的のために、合成、またはＨＭＧ−Ｉ遺伝子配列に適合したプライマー
を使用したＰＣＲ法によって得られる、適当なＤＮＡ配列は、公知の方法に従っ
て、原核または真核細胞用の発現ベクター中に挿入される。

【００２６】目標とする治療的な使用のため、ＨＭＧ、その断片、またはペプチドは、例え
ば「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ
ｓＨａｎｄｂｏｏｋ」、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、
ニューヨーク、米国に報告されているように、適した医薬組成物に処方の上、投
与することができる。

【００２７】本発明の組成物は、有効量のペプチド（あるいは、それらの誘導体ならびにキ
メラ蛋白質）、例えば、０．１から１００ｍｇのペプチドを含み、また、それは
、好ましくは、非経口経路、特には、皮下あるいは筋肉内経路によって投与する
ことができる。１日当たりの量は、疾患の重篤度、患者の体重、性別ならびに年
齢などの、様々な要因に明らかに依っており、また、それは、個々の単一ペプチ
ドあるいはその誘導体の毒性学的、薬物動態学的ならびに薬力学的な特性に基づ
き、決定される。

【００２８】一般に、ペプチドの１日当たりの用量は、体重１Ｋｇ当たり、１０から１５０
０μmolの範囲に含まれ、かつ、治療は長期に渡って継続される。また、例えば
、ＷＯ９３／２５５８３中に記載されているように、リポゾーム製剤を利用する
経口経路、あるいは、胃腸経路によるペプチドまたは蛋白質の投与ための既知の
他の手法などの、他の投与経路を使用することもできる。

【００２９】また、ドロップのような、投薬用の顆粒または溶液を利用して、舌下投与する
ことも可能である。かかる際、この投与経路によって顕著な効果が得られる可能
性が示されているので、ＨＭＧあるいはペプチドの用量は、ことの外低くしても
よい。

【００３０】以下の実施例により、本発明をさらに詳細に説明する。

【００３１】実施例５０〜６０日齢の雌性ラットを、３０ｍｇのジメチルベンズアントラセン（DM
BA）を、７日毎に３分割投与により、胃ゾンデで処置した。５０〜８０日後には
、腫瘍が検出される。

【００３２】９０匹のラットを無作為に３群に分け、週に１回、３週間続けて、ＨＭＧ−Ｉ
（３０μｇ/ラット）、１〜１９番目のペプチド（５０μｇ/ラット）（Ｓａｎｔ
ａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）、あるいは生理食塩水
溶液（０．５ｍｌ/ラット）をそれぞれ施した。

【００３３】処理開始時、ラットの体重は１７０〜２００ｇであり、７日毎に、腫瘍の大き
さを直径によって測定し、また、ラットの身体的状態および体重を調べた。

【００３４】試験終了時、最後の注射の１週間後に、動物を、塩酸ケタミンで麻酔した後、
頚動脈切開により屠殺した。腫瘍を取り出し、顕微鏡検査に供した。得られた結
果を、以下の表に記載する。

【００３５】ＨＭＧ−Ｉおよび１〜１９番目のペプチドは、対照群と比較して、明らかに腫
瘍の増殖を遅らせる。

【００３６】得られたデータの統計学的解析により、対照群と処置群との間に、有意差が示
され、後者の間では、遜色の無い結果が得られている。

【００３７】

【表１】

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年５月１６日（２０００．５．１６）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA02 BA01 BA02 BA17 BA19 BA44 CA17 CA18 CA21 CA23 DB25 DB26 NA14 ZB212 ZB262 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 BA15 BA16 BA17 BA18 BA19 CA40 DA30 EA28 FA10 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】活性成分として、ＨＭＧ群の蛋白質、その断片、または、Ｈ
ＭＧのアミノ酸配列に対応する、あるいは由来するアミノ酸配列を有するペプチ
ドを含んでなる医薬組成物。
【請求項２】活性成分として、哺乳類のＨＭＧ−ＩまたはＨＭＧ−１蛋白
質を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】ヒト起源、あるいはマウス、ラット、ウサギまたはブタに由
来するＨＭＧ−ＩまたはＨＭＧ−１を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】ＨＭＧ−ＩまたはＨＭＧ−１のＮ末端断片を含む、請求項１
に記載の医薬組成物。
【請求項５】ＨＭＧ群の配列に対して、少なくとも７０％相同なアミノ酸
配列を有する、１０から４０個のアミノ酸を持つペプチドを含む、請求項１に記
載の医薬組成物。
【請求項６】ＨＭＧ−Ｉの１〜１９番までのペプチド以外であって、ＨＭ
Ｇ−Ｉ蛋白質の配列と少なくとも７０％相同なアミノ酸配列を有する、１０から
４０個のアミノ酸を持つペプチド。
【請求項７】ＨＭＧ群蛋白質、その断片、または、ＨＭＧのアミノ酸配列
に対応する、あるいは由来するアミノ酸配列を有するペプチドの、抗腫瘍剤を調
製するための使用。
【請求項８】ＨＭＧあるいは請求項６に記載のペプチドを識別する、モノ
またはポリクローナル抗体。
【請求項９】細胞毒性薬剤および抗腫瘍剤を調製するための、請求項８に
記載の抗体の使用。