JP2002509247A - 混合方法 - Google Patents
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Abstract
Description
細には本発明は、定量および定性分析ができるように使い捨て装置内で混合を実
施する方法に関する。本発明はさらに、このような分析を実行する方法ならびに
このような分析を実行するときの使用に適した装置に関する。
行物EP469097号およびWO96/33399号に開示されている。これ
らのミクロキュベットは、血液などの液体試料の採取、液体試料と試薬の混合、
および試薬と混合した試料の直接光学分析を目的とする。ミクロキュベットは、
測定領域を含む空洞を有する本体を備える。空洞は、入口を介して本体の外側の
環境と連絡する。さらに空洞は所定の容積を有し、毛管力によって試料がその中
に入るように設計される。乾性試薬が、測定空洞の表面に塗布される。この種の
ミクロキュベットは商業的にかなりの成功を収めており、現在は、例えば全血中
のヘモグロビンおよびグルコースの定量に使用されている。この成功に寄与した
重要な要因は、試料採取から応答までの時間が非常に短いということである。こ
の時間が非常に短い1つの理由は、ヘモグロビンおよびグルコースの定量に使用
される試薬組成物が、ミクロキュベットの毛管空洞に吸入された小量の血液に簡
単に溶け、その結果、試薬成分が一様に分布した混合が実用上即座に得られるこ
とである。しかしこれらの従来技術ミクロキュベットは、溶けにくくかつ/また
は拡散に問題があり、したがって溶解および反応に比較的長い時間を要する試薬
を必要とする成分の定量にはそれほど適していないことが判っている。
に特に開発された方法が、米国特許第4936687号に提案されている。この
方法では、混合を達成する手段として小さな磁性粒子が使用され、実際の混合操
作は、特別に設計され、特別な方法で配置され、所定の方法で操作される外部磁
石を使用して実施される。混合手順の後、磁性粒子は試料の分析対象部分から分
離される。この方法はある種の液体/試薬に対しては非常に有効であるが、磁石
の特別な構成および設計が必要なため工業的および商業的見地からは特に魅力的
というわけではない。繊細な磁性粒子を使用し、混合段階後にこれらの粒子を分
離するのには時間と労力を必要であり、このことがこの方法を複雑で比較的費用
のかかるものとしている。さらに、磁性粒子によって試料と試薬の両方に化学的
障害が生じる危険もある。
。この方法によれば、混合は、互いに向かって相対運動することができる2枚の
平行なプレートを備える反応容器内で実施される。反応容器を充てんするときに
はわずかに数マイクロリットルの試薬および試料をプレートの特定の接着面に或
いは接着面内のさまざまな位置に適用し、試料と試薬の混合は、プレートを試料
と試薬によって形成された液体層に垂直に互いに向かって運動させることによっ
て実施される。したがってこの従来技術の方法では、試料と試薬がともに液体と
して存在する必要があり、これによって、溶解しにくい乾性試薬を用いる上記ミ
クロキュベットに比べて混合の実施が容易となる。液体層を層の平面に対して垂
直に運動させるこの種の混合は、上記種類のミクロキュベット内で混合を達成す
ることが確かめられているが、十分に有効であるとは見られていない。
にくい試薬の溶解促進に適した方法があれば、ミクロキュベットおよびそれと同
じ基本設計の装置の双方で実施できる定量の数は増大するであろう。その結果、
現在のところ実施できない分析、または試料採取と分析を実質的に同時に実施す
る使い捨て装置および試料の毛管吸入に関して以前には関心が持たれなかった分
析も、興味を呼ぶものとなろう。
の混合が、互いに対して実質的に不動の壁を実質的に液体層の平面内で運動させ
、この運動を液体に接した壁によって生じた毛管力と釣り合わせ、液体層と周囲
の媒体の間の界面をこの界面が弾性膜として機能するように選択することによっ
て実施される。本発明はさらに、この方法を実施するとき、特に試料採取および
分析にこの方法を実施するときに使用する使い捨て装置に関する。
上記種類の使い捨て装置またはミクロキュベット内にある液体薄層内での試料と
試薬のより効率的な混合を達成するのによく適している。しかしこの混合方法は
原則的に、互いから毛管距離のところに配置された実質的に平行な壁と壁の間の
薄層の形態をとる全ての液体に対して適用することができる。
の距離によって決まる。運動の振動数および振幅パラメータは、個々のケースで
存在する毛管力と釣り合っていなければならず、これらのパラメータは、振動数
/振幅が大きすぎる場合に起こる可能性がある、液体の一部がミクロキュベット
から漏れる危険なしに混合を実施するのに十分なものでなければならない。
ない場合には、弾性膜の長さ、すなわち空気などの周囲の媒体と試料との界面の
長さに上限が存在する。下限は、試料液体、試薬、適当なうなり振動数、空洞の
深さなどに基づいて実験的に決定される。
溶解した或いは溶解途中の試薬組成物中の化合物を液体の運動とともに運動させ
る弾性膜として機能し、その結果、液体薄層中の試料液体と試薬が混合される。
層の平面内で、所望の混合を達成するのに十分な時間および速度で運動させるこ
とによって混合が実施される。運動は回転運動でもよいが、往復運動のほうが好
ましい。これらの運動を任意に組み合わせて使用することもできる。前述のとお
り、この新規な混合方法の重要な特徴は、液体試料が装置から流れ出ないように
運動を毛管力と釣り合わせることにある。毛管力は、試料の種類および装置の壁
の材料によって決まり、釣り合いをとる操作は実験的に実施することが好ましい
。先に指摘したように、試料と周囲の環境との間の界面をこの界面が弾性膜とし
て機能するように選択することは重大な特徴である。使い捨て装置またはミクロ
キュベットの入口の試料と空気の間の界面が弾性膜として機能するのは、この入
口の長さが十分であるか、または装置が、実質的に非毛管空洞であり、別の弾性
膜を形成することができる少なくとももう一つの空洞を含む場合に限られる。後
者の場合には、キュベットの入口が、測定空洞を画定する実質的に面平行な壁と
壁の間の距離よりも大きい必要はないが、前者の場合、すなわち試料液体のボリ
ュームが周囲の媒体(空気)に対して連続する界面(連続する膜)を形成すると
きには、入口の長さが、測定空洞内の液体層の深さの少なくとも5倍、好ましく
は少なくとも10倍でなければならない。
定の距離のところに配置された実質的に平行な2つの面によって画定された測定
空洞を有する本体を備える。測定空洞は所定の容積を有し、毛管入口が空洞を本
体の外側の環境に接続する。毛管力の作用下で試料は入口を通して測定空洞内に
吸入される。所定量の乾性試薬が測定空洞内に配置される。例えば空洞の表面に
塗布される。ミクロキュベットの壁は透明かつ非弾性であることが好ましい。キ
ュベットの容積は0.1μl〜1mlとすることができ、薄層の厚さは0.01
〜2.00mm、好ましくは0.1〜1.0mmとすることができる。キュベッ
トの入口または開口のところの壁と壁の間の距離は0.01〜1mmであること
が好ましく、測定空洞内での壁と壁との間の距離よりも大きいことが好ましい。
測定に使用することが目的ではない装置の中での混合にも適しているが、液体薄
層内での混合一般に適用可能である。その他の種類の測定の例は放射能測定であ
り、この場合には光路長および透明な壁が不要である。一般的には、試料採取装
置は目的とする分析に関して設計され、試料採取装置の共通の特徴は、毛管力の
作用下で試料を毛管空洞中に吸入することができ、試料と試薬の混合が毛管液体
層内で実施されるということにあると言うことができる。
装置内の液体試料中の成分の定量とを実質的に同時に実行することが望ましいと
きに特に適用可能である。この試料採取/定量は、 −定量する成分を含む試料を、前記成分用の乾性試薬を少なくとも含む使い捨
て装置に挿入する段階であって、この装置には、実質的に面平行な2つの壁によ
って画定された毛管空洞内の入口を通して毛管力の作用下で試料を吸い込むこと
ができる段階、 −試薬の溶解および液体薄層内での試薬と試料の混合を促進するために装置を
運動させる段階であって、前記層が、空洞を画定する面平行な壁と壁の間に形成
され、前記運動が実質的に液体層の平面内で起こり、壁によって液体に及ぼされ
る毛管力と釣合いがとられ、液体層と周囲の媒体の間の界面が弾性膜として機能
するよう界面が選択される段階、および −その結果得られた混合物を測定領域内での測定にかける段階 を含む。
施されること、すなわち運動が毛管空洞の主平面に実質的に平行に実施されるこ
とにあり、この運動は、実験的に決定された振動数および振幅で往復運動する振
動であることが好ましい。主平面からの小さな偏差は許容されるが、この面から
の偏差が20゜を超えると混合効果が明らかに低下することが判っている。
物などの比較的溶解しにくい試薬を使用するときに特別な利点が得られる。
ルブミンやその他のタンパク質などの高分子化合物である。その他のタンパク質
には、例えば比濁測定が可能な抗原−抗体凝集体を生成することができるCRP
(C反応性タンパク質)がある。本発明の応用としてさらに、多糖などの非タン
パク質ベースの抗原を含めることができる。本発明の原理は、比濁測定による検
体の定量が可能な多くの文脈で適用可能である。ミクロキュベット内でのこのよ
うな光学測定では、所定の光路長を有する壁が測定領域に配置される。
応に基づく分析であり、人間のアルブミンに対する抗体を尿試料中のアルブミン
と反応させる尿中のμアルブミンの定量などがある。所定量の抗アルブミン抗体
をPEG6000とともにキュベットの空洞に供給し、乾燥させる。所定の容積
およびすき間を有するキュベット空洞の中に試料を入れると、キュベットを振動
数60ビート/秒で振動させた場合に試薬が溶解する。尿試料中に存在するアル
ブミンが溶解した抗体と反応し、凝集体が形成される。この凝集体によって、試
料中のアルブミン濃度に比例し470nmで分光測光可能な濁りが生じる。これ
に対応して、血液または血漿中のアルブミンまたはその他のタンパク質の分析を
実行することが可能となる。本発明に基づく混合は迅速で再現可能な応答の重要
な条件であり、スウェーデン特許出願第9800072−2号に開示されている
型の分光光度計で実施することが好ましい。
空洞に隣接して配置され、入口および測定空洞と実質的に一列に配置される。こ
の実施形態の液体試料を本発明に基づいてキュベット内に吸い込ませ混合すると
きには、空洞内の液体と通常は空気である非毛管空洞内に存在する媒体が、やは
り弾性膜として機能する別の界面を形成する。
い込ませたときに周囲の空気に対して弾性膜を形成する毛管入口を示す。
性膜が形成され、3は毛管入口を示し、4は実質的に非毛管のより深い空洞を示
す。
るキュベットを使用した。
れる。良好な撹拌は、深さ400μmのキュベットでの60ビート/秒の振動で
得られたが、30ビート/秒では得られなかった。空洞の深さがこれよりも浅く
なると撹拌は起こらない。
Claims (13)
- 【請求項1】 互いに対して実質的に不動で互いから毛管距離のところに配
置された実質的に平行な壁と壁の間に配置された液体薄層内で混合を実施する方
法であって、壁を実質的に液体層の平面内で運動させ、前記運動を、壁が液体へ
及ぼす毛管力と釣り合わせ、液体層と周囲の媒体の間の界面をこの界面が弾性膜
として機能するように選択することによって混合を実施する方法。 - 【請求項2】 前記運動が実質的に往復運動である、請求項1に記載の方法
。 - 【請求項3】 請求項1または請求項2に記載のとおりに液体薄層内で混合
を実施する装置(1)であって、装置の入口(2,3)を装置(1)の外側の環
境に接続し、乾性試薬が塗布された毛管空洞の入口(2,3)を通して毛管力の
作用下で液体試料を吸い込むことができる装置(1)において、互いに対して実
質的に不動であり空洞を画定する実質的に平行な2つの壁の間の距離が最大で1
000μm、好ましくは400μmから600μmであり、入口の長さが壁間の
距離の少なくとも5倍、好ましくは少なくとも10倍である装置(1)。 - 【請求項4】 請求項1または請求項2に記載のとおりに液体薄層内で混合
を実施する装置(1)であって、装置の入口(2,3)を装置(1)の外側の環
境に接続し、乾性試薬が塗布された毛管空洞の入口(2,3)を通して毛管力の
作用下で液体試料を吸い込むことができる装置(1)において、互いに対して実
質的に不動であり空洞を画定する実質的に平行な2つの壁の間の距離が最大で1
000μm、好ましくは400μmから600μmであり、実質的に非毛管の空
洞(4)が、入口(3)および測定空洞と実質的に一列に毛管空洞と隣接して配
置された装置(1)。 - 【請求項5】 面平行な壁が透明でかつ実質的に非弾性であることを特徴と
する、請求項3または請求項4に記載の装置(1)。 - 【請求項6】 液体試料の採取および液体試料中の成分の定量を実質的に同
時に実施する方法であって、 定量する成分を含む試料を、前記成分用の乾性試薬を少なくとも含む使い捨て
装置に挿入する段階であって、装置には、実質的に面平行な2つの壁によって画
定された毛管空洞内の、該空洞を使い捨て装置の外部の環境に接続する入口を通
して毛管力の作用下で試料を吸い込むことができる段階と、 試薬の溶解および液体薄層内での試薬と試料の混合を促進するために装置を運
動させる段階であって、前記層が、空洞を画定する面平行な壁と壁の間に形成さ
れ、前記運動が実質的に液体層の平面内で起こり、壁によって液体に及ぼされる
毛管力と釣合いがとられ、液体層と周囲の媒体との間の界面が弾性膜として機能
するよう界面が選択される段階と、 その結果得られた混合物を測定にかける段階と を含む方法。 - 【請求項7】 前記成分が、タンパク質、炭水化物などの高分子化合物であ
ることを特徴とする、請求項6に記載の方法。 - 【請求項8】 前記試薬が抗体またはレクチンであることを特徴とする、請
求項6に記載の方法。 - 【請求項9】 混合時に試薬と高分子化合物が、抗体−抗原複合体またはレ
クチン−炭水化物複合体から成る凝集体を形成することを特徴とする、請求項6
から請求項8までのいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項10】 前記高分子化合物が、アルブミン、C反応性タンパク質(
CRP)などの血漿タンパク質から成ることを特徴とする、請求項7に記載の方
法。 - 【請求項11】 前記運動が実質的に往復運動である、請求項6から請求項
9までのいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項12】 前記測定が光学測定であることを特徴とする、前記請求項
のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項13】 前記光学測定が比濁測定またはネフェロ測定であることを
特徴とする、請求項7に記載の方法。
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