JP2002507997A - 腸管細胞によるミネラルの吸収 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 食物からミネラルの吸収を増加または促進する方法。ラクトバチルス菌を含有する栄養組成物を哺乳動物に経腸投与する。栄養組成物はミネラルが欠乏する被検者の治療または予防に、低ミネラル食に基づく生理学的欠乏を補なうために、または児童、妊婦、授乳婦人および初老人のミネラルに対する主要な生理学的要求を満たすために適する。

Description

【発明の詳細な説明】 腸管細胞によるミネラルの吸収 本発明は一般食物から哺乳動物によるミネラルの吸収を促進または増加する方 法に関する。特に、本発明はラクトバチルス菌を含有する経腸組成物の投与を含 む方法に関する。 ミネラルは主要な生理学的プロセスにおける鍵要素である。例えば、カルシウ ムは骨および歯の形成、筋肉の収縮およびホルモンの合成に対し生体にとって重 要である。カルシウムは大部分の細胞活性化現象において必須の第２メッセンジ ャーでもある。 食物が主起源であるミネラルは腸粘膜を横断して身体により同化され、次に血 流に入る。実際に身体によるミネラルの同化（または吸収）度は、腸媒体におけ るその溶解度に左右され、また腸細胞の同化能や血液流への移行能に左右される （Ｒ．ワッセルマンら、インミネラル・アブソープション・イン・ザ・モノガス トリックＧＩ Trac．アドバンセズ・イン・エクスペリメンタル・メディシン・ アンド・バイオロジー，２４９，４５〜６５，プレナムプレスＮ．Ｙ．，１９８ ９）。 腸によるカルシウム吸収の位置、効力および機作は永与の間ラットおよびひよ こで研究された（ブロンナー・エフ．，J．Nutr.，１２２，６４１〜６４３，１ ９９２；シャヒター・ディ．，Am．J．Physiol.，１９６，３５７〜３６２，１ ９５９）。明かな倫理的および技術的理由で、このような研究はヒトでは限定さ れた（ハイランダー・イー．，ら，Scand．J．Gastro enterol.，２５，７０５ ，１９９０）、そして少数のインビトロによる研究のみが企画された（エルシェ リダ・エイら，ガストロエンテロロジー，１０９，８７６，１９９５；アー・ジ ェイ・ジェイ，Am．J．Physiol.，２４４，Ｃ３０３，１９８３；ファー・ジェ イ・ジェイ，セル・カルシウム，１０，１８９，１９８９）。 もっとも広く研究されたミネラル吸収の１つは毎日の食物の組成によるミネラ ルの生物利用性である（ブロンナー・エフ．，J．Nutr.，１２３，７９７，１９ ９３）。しかし高い生物利用性のある多くのミネラルは不安定なので、食物に使 用するには不適当でもある。さらに、食物に単に多量のミネラルを補充するのは 食物の官能性にしばしばマイナス効果を及ぼす。 問題の可能な解決は食物からミネラルの吸収を促進または改良することである 。しかし、食物からミネラルの吸収を促進または増加する方法に関する研究はほ とんどなく、結果には調和性がなかった。 ラシックらは、乳製品に含まれるミネラルはこの乳製品を発酵させると、同化 性が良くなることを報告した。この効果は発酵乳製品に含まれる酸に起因する（ ＸＰＯＯ ２０５２２３８：イン・ファーメンテッド・フレッシュ・ミルク・プ ロダクト，１巻、ｐ１１４〜１１５（１９７８）。 最近、ヤエシマらは、オリゴ糖およびビフィズス菌の組合せを消費すると、カ ルシウム−強化ホエイ食からカルシウムの吸収が増加することをラットで示した （ＸＰＯＯ ２０５２２３７：ブレチン・オブ・ザ・インターナショナル・デア リ・ファーメンテーション，No．３１３，１９９６）。 しかし、コットらはラクトバチルス・アシドフィルスは自然にＦｅ²⁺を内部移 行し、これをＦｅ³⁺に酸化することを報告した。Ｆｅ³⁺は不溶形であり、同化は 一層困難である(J．Agri．Food Chem.，４３，１２７６〜１２８２，１９９５） 。 従って、食物に含まれるミネラルの吸収を促進しまたは増加する方法に対する 要求が残っている。 従って、本発明は食物からミネラルの吸収を増進する方法を供する。この方法 はラクトバチルス菌を含有する栄養組成物を哺乳動物に経腸投与することを含む 。 ラクトバチルス菌はヒトの腸細胞によりミネラル、特にカルシウムの吸収を直 接促進または改良しうることを試験管内モデルの使用により分かった。理論に縛 られたくはないが、これは腸細胞周辺の微小環境の酸性化の誘導および腸細胞と 接触する細菌につながると考えられる。細菌および腸細胞の双方は酸性化の誘導 に関与し得る。この局部的酸性化はミネラルの可溶化、従って身体のミネラル同 化能に活性化役割を演じているのであろう。 別の特徴では、本発明は哺乳動物によるミネラルの吸収を促進または改良する 経腸栄養組成物の製造にラクトバチルス菌の使用を供する。経腸栄養組成物はミ ネラル欠乏の治療または予防に使用できる。 本発明の態様は図面を引用して例のみにより記載する、 図１はラクトバチルス菌が存在しない場合のＣａｃｏ−２腸細胞による基本的 カルシウム吸収を示す。 図２はＣａｃｏ−２腸細胞によるカルシウム吸収に及ぼす約６．７×１０⁷cfu ／mlの各種ラクトバチルス菌菌株の影響を示す。 図３はＣａｃｏ−２腸細胞によるカルシウム吸収に及ぼす約３．４×１０⁸cfu ／mlの各種ラクトバチルス菌菌株の影響を示す。 本発明は栄養組成物の経腸投与に関し、この組成物は毎日の食物に含まれるミ ネラルの吸収を促進または改善するラクトバチルス菌を含有する。ミネラルの例 はカルシウム、マグネシウム、鉄および／または亜鉛である。ラクトバチルス菌 の摂取はミネラルの生物利用性を増加する、すなわち、腸内でしばしば溶解性の 悪いミネラル腸細胞に一層近づきやすくする。 任意の食品級ラクトバチルス菌株を使用できる。例えば、次のラクトバチルス 菌を使用できる。ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパ ッス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、ラクトバ チルス・ガセリ、およびラクトバチルス・ジョンソニ；Ｌ．パラカゼイ；Ｌ．ロ イテリ；Ｌ．ブレビス；Ｌ．ファーメンタム；Ｌ．プランタルム；Ｌ．カゼイ特 にＬ．カゼイ亜種カゼイおよびＬ．カゼイ亜種ラムノサス；Ｌ．デルブルッキィ 特にＬ．デルブルッキィ亜種ラクティス、Ｌ．デルブルッキィ亜種ヘルベティカ スおよびＬ．デルブルッキィ亜種ブルガリカスおよびロイコノストック・メセン トロイデス特にＬ．メセントロイデス亜種クレモリス（バージィのマニュアル・ オブ・システマチック・バクテリオロジー，２巻、１９８６；フジサワら、Int ．Syst．Bact．４２，４８７〜４９１，１９９２）。 ラクトバチルス菌は腸細胞に付着できるが、必要ではない。しかし、少なくと も５０個の細菌、特に少なくとも８０個の細菌が１００個の腸細胞に対しインビ トロで付着しうるようなラクトバチルス菌が好ましい。このような付着型の細菌 を選択するために、細菌カルチャーを腸上皮細胞の不死化ラインの融合カルチャ ー上に延ばすことができ（ＥＰ ０８０２２５７）、融合カルチャーは洗浄し、 ラインの絨毛性（villosities）に付着する細菌数を計測する。 プロビオチック（probiotic）ラクトバチルス菌は特に興味を有するものであ る。実際、いくつかの菌株はヒトの腸細胞に付着し、ヒトの腸細胞上にある病原 菌に排除し、および／または外部攻撃に対し一層強力に反応できることにより（ 免疫修飾能）、例えばヒトの血液由来の顆粒球の食作用能を高めることによりヒ トの免疫系に作用しうるものである（ジャーナル・オブ・デアリー・サイエンス ，７８，４９１〜４９７，１９９５，ブタペスト条約により１９９２年６月３０ 日ＣＮＣＭ，２５rue docteur Roux，７５７２４パリにネステック社が寄託した Ｌａ−１菌株の免疫修飾能、この菌株は寄託番号ＣＮＣＭ １−１２２５となっ た）。この菌株はＥＰ第０５７７９０４号明細書に記載される。 例として、プロビオチック菌株ラクトバチルス・アシドフィルスＣＮＣＭ １ −１２２５を使用することができる。この菌株は最近ラクトバチルス・ジョンソ ニに再分類され、その後フジサワらにより新分類にすることが提案され、これは 好酸ラクトバチルス菌の分類学分野で信頼すべきものである（Int．J．Syst．Ba c.，４２，４８７〜７９１，１９９２）。他のプロビオチック菌も入手でき、こ れらは例えばＥＰ ０１９９５３５（ゴルバッファら）、米国特許第５２９６２ ２１号（ミツオカら）、米国特許第５５６７８５号（パスツール研究所）または 米国特許第５５９１４２８号（プロビＡＢ）などである。 栄養組成物は腸細胞によりミネラルの吸収を促進するのに十分量、例えば少な くとも１０⁶cfu／ml、特に１０⁷〜１０¹¹cfu／ml、好ましくは１０⁸〜１０¹¹cfu ／mlのラクトバチルス生菌を含むことが好ましい（「cfu」とは「コロニー形成 ユニット」を意味する）。 栄養組成物は必要に応じて他の細菌、例えば他のプロビオチック細菌を含有し てもよい。 栄養組成物は適当なタン白起源、例えば動物または植物タン白起源も含有でき る。適当なタン白起源は乳タン白、大豆タン白、米タン白、小麦タン白、モロコ シタン白などである。タン白はそのまま、または加水分解形でよい。 栄養組成物は適当な炭水化物起源、例えば蔗糖、フラクトース、グルコース、 マルトデキストリンなどを含むこともできる。 栄養組成物は適当な脂質起源、例えば適当な動物または植物脂質起源を含むこ ともできる。適当な脂質起源は乳脂肪、ヒマワリ油、ナタネ油、オリーブ油、ベ ニバナ油などを含む。 栄養組成物はミネラルおよびビタミンを強化することもできる。栄養組成物に カルシウムを強化することは特に好ましい。 栄養組成物はヒトまたは動物が消費するための食品組成物に製造できる。適当 な食品組成物は液体、粉末、固体形で供することができる。 栄養組成物は発酵して十分量のラクトバチルス菌を得ることができる。乳に基 づく発酵組成物は従って特に適する。乳とは動物乳に対してのみ適用するもので はなく、通常植物乳と呼ばれるもの、すなわち処理または未処理植物材料、例え ば豆類（大豆、エジプト豆、レンス豆など）または油糧種実（ナタネ、大豆、ゴ マ、綿実など）の抽出物にも適用する。これらの抽出物はタン白を溶液またはコ ロイドサスペンジョンで含有し、化学作用、酸発酵および／または加熱により凝 固する。これらの植物乳は動物乳の場合と同様の熱処理することができた。これ らの植物乳はこれらに特異的である脱色、脱臭などの処理、および望ましくない 味を抑える処理も行なうことができる。最後に、乳なる用語は動物乳および植物 乳の混合物も示す。 栄養組成物はその製造中、適当量のラクトバチルスカルチャーを液体形、濃縮 形、乾燥形またはカプセル形で、必要に応じ添加、混合または被覆することもで きる。 ラクトバチルス菌のマイクロカプセルは治療的利点を有することが分かった。 第一に、マイクロカプセル化により生存するラクトバチルス菌および従って腸に 到達するラクトバチルス菌の生存数が有意に増加する。一層重要なことは、ラク トバチルス菌は徐々に腸に放出され、これにより腸細胞によるミネラルの吸収に 対するラクトバチルスの作用を延長することができる。 ラクトバチルスをカプセル化するために、凍結乾燥または噴霧乾燥（ＥＰ ０ ８１８５２９）し、これらは例えば固化脂肪酸、アルギン酸ナトリウム、重合化 ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは重合化ポリビニルピロリドンから成 るゲルに添加することが好ましい。このため、ＦＲ２，４４３，２４７に示す教 示を参考として加える。 栄養組成物は腸媒体中でラクトバチルス菌による発酵の活性化に必要な炭水化 物を含有する必要はない。反対に、ミネラルの促進化吸収はラクトバチルス菌の 発酵活生とは別個であり、むしろラクトバチルス菌と腸細胞の直接接触に起因す ると思われる。これは微小環境の酸性化および、従って一層よいミネラルの可溶 性を誘発すると考えられる。 しかし、ミネラルの促進吸収効果を延長させるために腸媒体中のラクトバチル ス菌が新生または増加することが望ましい。これは腸媒体中のラクトバチルス菌 の特異的増加を促進する繊維を栄養組成物に添加することにより達成できる。こ れらの繊維は可溶性かつ発酵性である。 これらの繊維は例えば、植物ペクチン、キト−、フラクト−、ゲンチオ−、ガ ラクト−、イソマルト−、マンノ−またはキシロ−オリゴ糖または大豆からのオ リゴ糖から選択する（プレインら、ブレチン・オブ・ザＩＤＦ３１３，グループ Ｂ４２，アニュアルセッションオブ９月９５，ウィーン）。 好ましいペクチンは１０〜４００KDaの分子量を有するα−１，４−Ｄ−ガラ クチュロン酸のポリマーであり、これは例えば、ニンジンまたはトマトから精製 できる（ＪＰ６０１６４４３２）。好ましいガラクトオリゴ糖は構造［−α−Ｄ −Ｇｌｕ−（１→４）一β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→６）−］の２〜５個の反復単位 から成る糖部分を含む（ヤクルト本社、日本）。好ましいフラクト−オリゴ糖は チコリから抽出したイヌリン−オリゴフラクトースであり、これは例えば構造［ −β−Ｄ−Ｆｒｕ−（１→２）−β−Ｄ−Ｆｒｕ−（１→２）−］の１〜９個の 反復単位を含むことができる（ＷＯ９４／１２５４１，ラフィネリー・タールモ ンターズ社、ベルギー）またはオリゴ糖はシュクロースから合成され、これは構 造［−α−Ｄ−Ｇｌｕ−（１→２）−β−Ｄ−Ｆｒｕ−（１→２）−］の２〜９ 個の反復単位から成る糖部分を含むことができる（明治製菓、日本）。好ましい マルト−オリゴ糖は構造［−α−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−］の２〜７個の反復 単位から成る糖部分を含む（日本食品加工、日本）。好ましいイソマルトースは 構造［−α−Ｄ−Ｇｌｕ−（１→６）−］の２〜６個の反復単位から成る糖部 分を含む（昭和産業、日本）。好ましいゲンチオ−オリゴ糖は構造［−β−Ｄ− Ｇｌｕ−（１→６）−］の２〜５個の反復単位から成る糖部分を含む（日本食品 加工、日本）。最後に好ましいキシロ−オリゴ糖は例えば構造［−β−Ｘｙｌ− （１→４）−］の２〜９個の反復単位から成る糖部分を含む（サントリー、日本 ）。 栄養組成物の繊維量はラクトバチルス菌の発育を促進する能力による。一般に は栄養組成物はこのような繊維を１〜５０％含有できる（乾物重量％）。ラクト バチルス菌の濃度は１ｇの繊維につき少なくとも１０³ＣＦＵ、好ましくは１０⁴ 〜１０⁷ＣＦＵ／ｇ繊維でよい。 繊維により供される別の利点は、腸通過が繊維により遅延することである。特 に繊維量の多い場合、すなわち組成物重量に対し２０〜５０％の場合である。ラ クトバチルス菌は腸通過作用により徐々に排除される。このようにして腸による ミネラルの吸収に対しラクトバチルス菌の有利な作用を延長させることができる 。 栄養組成物は適当な経腸投与形食品であればよい。例えば、栄養組成物は発酵 乳（ＥＰ ０５７７９０４）、幼児（ＥＰ ０８２７６９７）、フレッシュチー ズ（ＰＣＴ／ＥＰ９７／０６９４７）、熟成チーズ、アイスクリーム（ＷＯ９８ ／０９５３５）、クリームフィリングビスケット（ＥＰ７０４１６４，ＥＰ６６ ６０３１）、ドライソーセージおよび／またはパテ（ＥＰ６８９７６９）形を取 ることができる。 栄養組成物は乳製品に耐容できない人に適する形態でもよい。これらの栄養組 成物はアレルギーを起こす乳誘導品を含有できない。例えば、乳タン白にアレル ギーをおこす小児では、栄養組成物は低アレルギー乳誘導品を含有する処方にす ることができる。これらの乳誘導品は、低アレルギー乳の場合、アレルギー誘発 タン白は免疫学的に未加水分解乳より少なくとも１００倍少ない検出量でなけれ ばならないとするヨーロッパ指令９６／４／ＥＣに従うのがよい（Off．J．Euro p．Comm．ＮＯＬ４９／１２．annex point ５，ａ，１９９６；Fritscheら、Int ．Arch．Aller．and Afhl．Imm.，９３，２８９〜２９３，１９９０）。 栄養組成物はミネラル欠乏症の治療または予防に、または低ミネラル食による 生理学的欠乏を補なうために、または小児、妊婦、授乳婦人および初老人の主要 な生理学的ミネラル要求量を満たすために特に適する。 本発明は特別の例によりさらに記載する。％は特記しない限り重量を示す。こ れらの例は例示のみのもので、どんな方法であっても本発明を限定するものでは ない。 例 １ −原料：⁴⁵ＣａＣｌ₂はアメルシャムから、ルシファー黄色はシグマから、コ ラーゲンＩはセントリックス・ファーマシューティカルから、ＰＢＳ，ＨＥ ＰＥＳおよび細胞倍地成分はギブコから、およびカルチャー支持体はファル コンから得た。 −細胞カルチャー：結腸線癌から単離したヒト細胞ラインＣａｃｏ−２はアメ リカン・タイプ・カルチャー・コレクション（継代培養４１）から得る。細 胞は４×１０⁴細胞／cm²量を４．５ｇグルコース／l、２０％熱−不活性化 した胎児子牛の血清、１mgファンギゾン／mg、１００Uペニシリン／ストレ プトマイシン／ml、２００μgゲンタマイシン／mlおよび１％非必須アミノ 酸を含有するＤＭＥＭの培地に入れる。細胞は規則正しくトリプシナイズ（ tripsinize）し、再度１：２０で培地に入れる。カルシウム輸送試験に使用 する細胞は予め５０μg／mlコラーゲンＩ層で被覆した透過性挿入物に１× １０⁵細胞／cm²で培地に入れる。すべての場合、細胞は３７℃で１０％ＣＯ ₂／９０％空気のインキュベータに保持し、培地は２日毎に交換する。 −Ｃａｃｏ−２細胞の生育性：ラクトバチルス菌の存在で腸細胞によるカルシ ウム吸収の潜在能力が細胞の損傷によることの可能性を排除するために、カ ルシウム検定に供する各試料の一部をヘキソースアミニダーゼ活性の検定に 使用した（ランデグレンら、J．Immnnol．Method，６７，３７９〜３７８， １９８４）。この比色試験は損傷細胞の細胞質ゾルから上澄中に遊離したヘ キソースアミニダーゼを測定することにより細胞崩壊および／または死亡を 定量化することができる。すべての試験において、ヘキソースアミニダーゼ 活性はラクトバチルス菌の存在で等しい結果を示す。 −細胞ローンの透過性：その生育の終りにＣａｃｏ−２細胞により形成される ローンおよびその分化の完全さを電圧計／オーム計Millicell−ＥＲＳを使 用して上皮を貫通する電気抵抗（ＴＥＥＲ）を測定し、評価する。カルシウ ム吸収試験はこの抵抗が少なくとも７００オーム×cm²に達すると行なう。 カルシウム吸収試験中の細胞ローンの透過性は細胞膜を横断しない分子のル シファー黄色の拡散量（％）を測定することにより評価する。 −カルシウムの輸送：Ｃａｃｏ−２細胞は３〜５週挿入物上で培養する。試験 日に、細胞ローンはＰＢＳで２回洗浄し、漿膜（細胞の基底外側の極）を添 加した挿入物の底部区画に２．５mlのキャリアバッファ（１４０mM Ｎａｃ ｌ，５．８mM ＫＣｌ，０．３４mM ＮａＨ₂ＰＯ₄，０．４４mM ＫＨ₂ＰＯ ₄，０．8mM ＭｇＳＯ₄，２０mM ＨＥＰＥ，４mMグルタミン、２．５mMグ ルコース、pH７．４）に２．５mM ＣａＣｌ₂を補充して入れ、一方腸管腔 （細胞の先端の極）を添加した挿入物の上部区画に１０mM ＣａＣｌ₂および 痕跡量の⁴⁵ＣａＣｌ₂およびルシファー黄色を補充した１．５mlのキャリア バッファを入れる。次に挿入物は３７℃に置き、底部および上部区画の５０ μl試料は規則正しい間隔で取り出す。 これらの試料に含まれる放射能は液体シンチレーション計数法により評価し 、冷ＣａＣｌ₂吸収量に外挿することができる。カルシウムの基本的輸送は 挿入物の底部区画に輸送したカルシウムnmolとして表わす。底部区画の分光 蛍光計により検出したルシファー黄色の拡散は上部区画に導入した量を％で 表わす。 −ラクトバチルスの影響：菌株ラクトバチルス・ジョンソニＬａ１（ＣＮＣＭ １−１２２５），Ｌａ１７，Ｌａ２２，Ｌａ３１，ラクトバチルス・アシド フィラスＬａ１０，Ｌａ１８，Ｌａ３１，ラクトバチルス・ブルガリカスＬ ｆｉ５，ＹＬ８，ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１，ラクトバチルス・ ガセリＬＧＡ７，ラクトバチルス・ロイテリＬＲ７およびストレプトコッカ ス・サーモフィルスＳｆｉ２０，ＹＳ４（ネステックコレクションローザン ヌ、スイス）は嫌気條件下で培地にラクトバチルス菌の場合ＭＲＳブロスに 、ストレプトコッカス菌の場合Ｍ１７に、挿入物の上部区画に導入する前に ＰＢＳで２回洗浄し、キャリアに再懸濁して２倍の２４時間入れる。Ｃａｃ ｏ−２：細菌比率は試験により約１：１００である（図２および３に示す試 験 では、挿入物の上部区画で６．７×１０⁷または３．４×１０⁸cfu／ml）。 カルシウムの吸収は上記プロトコルにより評価する。 −カルシウムの基本輸送結果：通常のヒト血漿濃度に相当する２．５mM Ｃａ Ｃｌ₂を下部区画に、および任意には食物のカルシウム含量に相当する１０ mM ＣａＣｌ₂を上部区画に導入することにより挿入物にカルシウム勾配を 樹立させた。図１に示す代表的試験結果が示すように、約３×１０⁶細胞を 含むＣａｃｏ−２細胞によるカルシウムの基本的吸収は４時間後、経時的に 増加し、６００nmol／挿入物まで到達した。試験中、細胞ローンの完全さの チェックとして、ルシファー黄色の拡散を測定し、２％未満であることが証 された。 −ラクトバチルスの影響の測定：図２および３では、Ｃａｃｏ−２細胞による カルシウムの吸収は付着性ラクトバチルス・ジョンソニ菌株Ｌａ１およびＬ ａ２２の存在で、非付着性Ｌａ１０およびＬａ１８ラクトバチルス・アシド フィルス菌株の存在で、およびＬ．パラカゼイ（ＳＴ１１），Ｌ．ガセリ（ ＬＧＡ７）およびＬ．ロイテリ（ＬＲ７）菌株の存在で有意に増加する。 従って乳酸菌の腸細胞への付着能は、これらの同じ細胞によるカルシウム吸収 増加能と直接関連するとは思えない。これらのすべての試験では、ルシーファ黄 色の拡散は同様な方法で調節されるが、無視しうる。 挿入物の上部区画のpH低下が観察される。その場合、Ｃａｃｏ−２細胞はＳｆ ｉ２０菌株を除き、菌株に関係なく、ラクトバチルス菌が存在する（表１）。従 って、カルシウム吸収の増加とこのpHの減少の間に相関関係はない。しかし、カ ルシウム吸収を増加しうる成る種の菌株はＣａｃｏ−２が存在しないと試験培地 を酸性化できない。これはＣａｃｏ−２および細菌の存在での酸性化は２つの型 の微生物間の協力を必要とすることを意味する。 表１： Ｃａｃｏ−２が存在または不存在下の試験培地のｐＨに及ぼすラクトバ チルス菌の影響 例 ２ 例１で行なったものと同様の試験を行ない、標識イヌリンの存在で、腸細胞に よるカルシウム吸収に及ぼすラクトバチルス菌の影響を測定した（³Ｈ−イヌリ ン、アメルシャム：トレーサープロビオチック繊維）。結果はラクトバチルス菌 がインビトロで腸細胞によるミネラルの吸収を増加させることを確証する。例 ３ 例１で行なったものと同様の試験を行ない、マグネシウム、鉄および亜鉛の吸 収に及ぼすラクトバチルス菌の影響を測定した。結果はインビトロでラクトバチ ルス菌は腸細胞によるミネラルの吸収を増加させることを確証する。例 ４ 乳酸菌のカプセル化 １００lタンクに、次の組成％を有する８０lの培地を調製する。 ラクトバチルス・ジョンソニＬａ１（ＣＮＣＭ １−１２２５）の２０時間培 養物１lを接種する。培地は３０℃で１２時間培養する。培地ブロスは遠心分離 し、２４０ｇの細胞を回収する。７％ラクトースを補充した脱脂乳２５０mlで回 収した細胞を稀釈する。混合物は液体窒素を使用して冷凍する。凍結乾燥を４０ ℃で一晩行なう。得た粉末の５％分散体を、４２℃の溶融点を有しかつ４５℃で 液化する水素添加植物脂肪にて調製する。分散体は４バールの加圧下４５℃で、 液体窒素と同時に、直径１．５ｍおよび高さ１０ｍの垂直円筒の上部に、５部の 窒素に対し１部の分散体量で注入する。容器は直径口０．１〜０．５ｍに変る液 体窒素を含有するシリンダーの底部に置き、そこで細菌を含有するマイクロビー ズを集める。次にマイクロビーズは流動床に置き、８％ゼインを含有するアルコ ール溶液を、マイクロビーズ周辺に形成するゼイン層がその５％重量を示すよう な量で床上に噴霧する。 次にマイクロビーズは腸細胞のミネラル吸収を促進するための食品組成物に添 加される。例 ５ アイスクリーム用濃厚ベースを６０〜６５℃で約１１％の乳脂肪、８．８％の 乳固体（無脂肪固体）、２．５％シュクロース、５％グルコースシラップおよび ０．６％のEmulstab（商標）ＳＥ３０を２０分間混合して調製する。ベースは７ ２〜７５℃および２１０バール（２１０／５０バールの２工程）で均質化し、８ ５℃で２２秒殺菌し（ＡＰＶパスチュライザー、フランス、Evreux，４００l／ 時間）、４℃に冷却し、ラクトバチルス・ジョンソニＬａ１（５×１０⁸cfu／ml ）およびビフィドバクテリウム・ロンガムＢｉ１６（３×１０⁸cfu／ml）菌株に より酸性化した４０％の乳をそこに添加する。この濃厚ベースの組成は下表に示 す。 ５℃で１２時間クリームを熟成した後、９５容量％のオーバーランまで冷凍す る（クレパコフリーザー、フランス、Evreux：１６０l／時間製品）。 下表に表示したレシピにより１０％フラクトーオリゴ糖Raftilose（商標）Ｌ ３０（ラフィネリィ・タールモンターズ社，ＢＥ）を含有するウエハードウを調 製する。ベーキング後、ウエハーは通例的にコーンに成形する。冷却後、コーン の内側に脂肪フィルムを噴霧−被覆し、次にコーンは上記ホイップアイスクリー ムを満たす。１１．５ｇウエハーコーンに対し１３０mlのホイップアイスクリー ム（約６５ｇ）および５ｇのチョコレート（クリーム上に噴霧）をこうして使用 する。 アイスクリームコーンにつき１．１gの繊維および約１０⁸cfu／gのラクトバチ ルス菌がこうして供される。繊維は腸管でラクトバチルス菌の特別の生育を促進 することにより、こうしてミネラルの同化を促進する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ａ６１Ｋ 35/20 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，Ｉ Ｌ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 1. 哺乳動物によるミネラルの吸収を促進し、または改良する経腸栄養組成物 の製造にラクトバチルス菌の使用。 2. ラクトバチルス菌は腸細胞に付着することができるラクトバチルス菌であ る、請求項１記載の使用。 3. ラクトバチルス菌はラクトバチルス・ジョンソニィＣＮＣＭ １−１２２ ５菌株である、請求項２記載の使用。 4. 経腸栄養組成物は１０⁷〜１０¹¹Cfuのラクトバチルス菌を含有する、請求 項１記載の使用。 5. 経腸栄養組成物はカルシウム、マグネシウム、鉄および／または亜鉛の吸 収を促進する、請求項１記載の使用。 6. 経腸栄養組成物は乳タン白を含有する、請求項１記載の使用。 7. 経腸栄養組成物は低−アレルギー性乳タン白加水分解物を含む幼児処方で ある、請求項６記載の使用。 8. 経腸栄養組成物はさらにプロビオチック繊維を含む、請求項１記載の使用 。 9. ミネラル欠乏を治療または予防する経腸栄養組成物の製造にラクトバチル ス菌の使用。 10. ラクトバチルス菌を含有する栄養組成物を哺乳動物に経腸投与すること を含む、食物からミネラルの吸収を増加する方法。