JP2002503691A - 医薬として用いるインドール−３−プロピオン酸、並びにそれらの塩およびエステル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 細胞に及ぼすアミロイドβタンパク質の細胞毒性の影響は、それらの細胞を有効量のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルと接触させることによって防止される。更に、線維素生成を防止するかまたは後退させるのに有効な量のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを投与することによって、ヒト被験者の線維素生成疾患は処置することができる。生物学的試料の酸化は、その生物学的試料を有効量のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルに接触させることによって減少させることができる。加えて、フリーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果たしている疾患または他の病気は、有効量のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを投与することによって処置することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明はインドール−３−プロピオン酸の使用に関するものであり、より具体
的にはアミロイドベータタンパク質の細胞毒性の影響を防止するために、線維素
生成疾患を処置するために、生物学的試料の酸化を減少させるために、およびフ
リーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果たしている疾患または他の
病気を処置するために、インドール−３−プロピオン酸を使用することに関する
。

【０００２】 （背景技術） ６５歳より上のヒトの１０パーセントは軽度から重度の痴呆を有すると見積も
られている。アルツハイマー病（「ＡＤ」）は慢性的な痴呆の最も一般的な原因
であり、米国の２百万人のヒトがその疾患を患っている。この疾患はかっては中
年の病気であると考えられてきたが、アルツハイマー病の組織病理学的病変（す
なわち、神経炎アミロイドプラーク、神経原線維変性および顆粒空胞ニューロン
変性）は痴呆の老人の脳にも見られることが現在分かっている。それらの病変の
数は知力の低下の程度と相関関係にある。この高い羅患率は人口における年配者
の割合が増加する速度と合わせて、痴呆（および特に痴呆）を最も重要な現代の
社会的健康問題の一つにしている。

【０００３】 大脳アミロイド沈着はアルツハイマー病の主要な神経病理学上のマーカーであ
る。そのアミロイドは４０〜４２個のアミノ酸ペプチドからなり、このものはア
ミロイドベータタンパク質（「Ａβ」）と呼ばれる（グレナー（Ｇｌｅｎｎｅｒ
）およびワング（Ｗｏｎｇ）により１９８４）。ＡＤにおけるアミロイド沈着物
は主に老人班の成分として見出され、そして中枢血管や髄膜血管の壁に見出され
る（ロバキス（Ｒｏｂａｋｉｓ）およびパンガロス（Ｐａｎｇａｌｏｓ）により
１９９４）。

【０００４】 分子クローニングにより、Ａβはより大きなアミロイド前駆体タンパク質（「
ＡＰＰ」）の小領域を含むことが示されている（ロバキスらにより１９８７；ワ
イドマン（Ｗｉｄｅｍａｎｎ）らにより１９８９）。要するに、このものは大き
な細胞質外部分、より小さい細胞質内領域および単一の膜貫通ドメインを有する
Ｉ型の内在性膜糖タンパク質である。ＡＰＰは、そのＮ−末端部の分泌前に（サ
ムバムルチ（Ｓａｍｂａｍｕｒｔｉ）らにより１９９２；ロバキスおよびパンガ
ロスにより１９９４）、広範囲な翻訳後修飾を受ける（パッポラ（Ｐａｐｐｏｌ
ｌａ）およびロバキスにより１９９５；ロバキスおよびパンガロスにより１９９
４）。ＡＰＰの生理的プロセシングは、未同定の酵素、α−セクレターゼによる
Ａβ配列内の切断を含む（アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）らにより１９９１
）。より少量のＡＰＰ分子はアミロイド性分泌型ＡＰＰまたは膜結合型ＡＰＰを
潜在的に産生できる他の２つの部位で切断される（ロバキスおよびパンガロスに
より１９９４）。正常な細胞代謝の間に、Ａβも産生される（ハス（Ｈａａｓｓ
らにより１９９２；ショージ（Ｓｈｏｊｉ）らにより１９９２）。

【０００５】 アミロイドがＡＤを引き起こすかどうかについてはいくつかの論争があるが、
主に３方向の証拠がそれらアミロイド仮説を強化している。第１の証拠は、ＡＰ
Ｐ遺伝子内でいくつかの点突然変異体が同定されることで示される。これらの変
異体は家族性障害を患っている患者のサブグループに限られており、従ってＡＰ
Ｐ遺伝子とＡＤとの病原論上の関連が示唆されている（シャルティエ（Ｃｈａｒ
ｔｉｅｒ）−ハーリン（Ｈａｒｌｉｎ）らにより１９９１；ケネディー（Ｋｅｎ
ｎｅｄｙ）らにより１９９３）。第２の証拠として、アミロイドの一次的な沈着
は神経原線維の変化の発生前に起こり（パッポラ（Ｐａｐｐｏｌｌａ）らにより
１９９６）、この観察はアミロイドとニューロン変性の関連とも一致する。最後
の証拠として、Ａβはニューロンに対して毒性であること（ヤンクナー（Ｙａｎ
ｋｎｅｒ）らにより１９９０；ベール（Ｂｅｈｌ）らにより１９９２；ベールら
により１９９４；チャン（Ｚｈａｎｇ）らにより１９９４）、アミロイドペプチ
ドがＡＤにおけるニューロンの病状の原因となり得るという仮説を強化するとい
う発見がこれまでに示されている。

【０００６】 Ａβが神経毒性を有しているという発見は、アミロイド蓄積と神経変性との関
連性があり得ることを示している。老化とＡＤとの密接な関連性、および両状態
の神経病理学上の類似のため、酸化ストレスはＡＤ病変の病因に役割を果たして
いると提案された。

【０００７】 何人かの研究者により、酸素フリーラジカル（「ＯＦＲｓ」）がＡβの細胞毒
性に関連することが実証されている（ベール（Ｂｅｈｌ）により１９９２；ベー
ルによる１９９４；ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）らにより１９９５；バターフィール
ド（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ）らにより１９９４；グッドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ
）およびマトソン（Ｍａｔｔｓｏｎ）により１９９４）。酸化性傷害のマーカー
はＡＤの神経病理学上の病変と局所解剖的に関連しているので、それらの発見は
重要である（パッポラらにより１９９２；フルタらにより１９９５；スミスらに
より１９９５；パッポラらにより１９９６）。これらの観察のため、抗酸化剤は
ＡＤの強力な治療剤として提案されている（マトソンにより１９９４；ヘンスリ
ー（Ｈｅｎｓｌｅｙ）らにより１９９４；パッポラらにより１９９６）。

【０００８】 ＡＤおよび他の線維素生成疾患を処置する方法についての要求はなお続いてあ
る。

【０００９】 （発明の要約） 本発明は細胞に及ぼすアミロイドベータタンパク質の細胞毒性の影響を防止す
る方法に関する。その方法はその細胞を有効量のインドール−３−プロピオン酸
またはそれらの塩もしくはエステルと接触させることを含む。

【００１０】 本発明は更に、ヒトの被験者の線維素生成疾患を処置する方法に関する。その
方法はヒトの被験者に、線維素生成を抑制するかまたは後退させるのに有効な量
のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを投与する
ことを含む。

【００１１】 本発明は生物学的試料における酸化を減少させる方法にも関する。その方法は
その生物学的試料を有効量のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩も
しくはエステルと接触させる方法を含む。

【００１２】 本発明はより更に、フリーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果た
す疾患または他の病気を処置する方法に関する。その方法はヒトの被験者に、そ
れらの疾患または病気を処置するのに有効な量のインドール−３−プロピオン酸
またはそれらの塩もしくはエステルを投与することを含む。

【００１３】 （詳細な説明） 本発明は、天然の化合物であるインドール−３−プロピオン酸（「ＩＰＡ」）
は細胞に及ぼすアミロイドβタンパク質の細胞毒性の影響を防止するのに特に有
用であり、いずれかの線維素生成疾患を処置するのに特に有用であり、且つ細胞
を酸化性損傷から保護するのに特に有用であると言う性質を合わせて有している
という発見に基づいている。従って、本発明の化合物はアルツハイマー疾患およ
び他の線維素生成疾患（例えば、プリオン−関連の疾患が挙げられるが、これに
限定しない）の強力な治療剤である。そのものは、フリーラジカルおよび／また
は酸化ストレスが役割を果たしている他の疾患の処置についての治療剤としても
使用できる。これらの病気としてはパーキンソン病、リューイ小体痴呆、筋萎縮
性側索硬化症、進行性核上麻酔、他の種類のアミロイドーシス、発作、アテロー
ム硬化症、気腫およびいくつかの種類の癌を含む。更に、データはＩＰＡも抗線
維素生成活性をも有することを示す。

【００１４】 本発明は、細胞に及ぼすアミロイドベータタンパク質の細胞毒性の影響を防止
する方法を提供する。その方法は、それらの細胞を有効量のインドール−３−プ
ロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルに曝露させることを含む。

【００１５】 本明細書で使用する「アミロイドベータタンパク質」（「Ａβ」）とは、アル
ツハイマー病（「ＡＤ」）の主要な神経病理学的マーカーである大脳アミロイド
を構成する４０〜４２個のアミノ酸のペプチドを意味し、そして細胞に対して細
胞毒性の影響を引き起こすことができるＡβのフラグメントを意味する。例えば
、それらＡβフラグメントの１つはＡβの２５〜３５アミノ酸残基よりなるフラ
グメントである（グレナー（Ｇｌｅｎｎｅｒ）およびワング（Ｗｏｎｇ）による
、Ａβの完全アミノ酸配列（ｆｕｌｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ ｏｆ Ａβ）１９８４を参照、これは本明細書の一部を構成する）。

【００１６】 本明細書で使用するインドール−３−プロピオン酸とは、式

【化１】 ［式中、 Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は水素、置換アルキル基、無置換アルキル
基、置換アリール基、無置換アリール基、アルコキシ基、置換または無置換アミ
ノ基、チオール基、アルキルチオ基、アリールチオ基などからなる群から独立に
選ばれる］ を有する化合物を含むことを意味する。Ｒ⁵およびＲ⁶は水素が好ましい。適当な
インドール−３−プロピオン酸の一例は、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶の
各々が水素である上記の式を有するインドール−３−プロピオン酸である。好ま
しい置換基は、抗酸化性および抗線維素生成性質に有意に影響を及ぼさない基で
あり、これについては以下でより詳細に記載する。他の好ましい置換基は脳への
浸透を増大させる基であり、例えば共有結合した親油性部分である。これらの置
換基は利用可能な水素原子を有するインドール核のいずれかの原子上に存在して
もよい。親油性部分の結合様式は重要ではなく、このものは炭素−炭素結合、炭
素−酸素結合、炭素−窒素結合または炭素−硫黄結合によって与えられる。しか
しながら、得られた化合物の親油性を最大限とするには、極性が最少限となるよ
うな結合が与えられることが好ましい。従って、親油性部分は炭素−炭素結合で
結合することが好ましい。それら親油性部分とは炭化水素（例えば５〜２０個の
炭素原子を有するアルキル基）であってもよい。これらのアルキル基は無置換で
あってもよく（例えば、ヘキシルまたはドデシル）、または置換アルキル基がベ
ンジル基またはフェニルエチル基である場合のように、例えばアリール部分等で
置換されていてもよい。或いは、親油性部分は置換または無置換のホモサイクリ
ック環（例えば、フェニル基またはトリル基）、ホモサイクリック環系、ヘテロ
サイクリック環、ヘテロサイクリック環系、または多環性の親油性「かご状」部
分（例えば、アダマンタン）であってもよい。特に、多環「かご状」化合物を用
いることは特に有利である（ツヅキ（Ｔｓｕｚｕｋｉ）により１９９１）。

【００１７】 いくつかのインドール−３−プロピオン酸は商業的に入手可能である。他のも
のはインドール−３−プロピオン酸の製造についての従来法の改変によって製造
可能であり、その従来法としては例えばジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）およびク
ロスビー（Ｃｒｏｓｂｙ）による１９６９の文献、および米国特許第５,３００,
５０６号、米国特許第５,０７７,２９３号および特開平３,１２７,７３２号（こ
れらは本明細書の一部を構成する）が挙げられる。

【００１８】 上で示す通り、本発明は上記のインドール−３−プロピオン酸の塩を用いても
行なうことができる。適当な塩としては、例えば医薬的に許容し得る塩（例えば
、ナトリウム塩、カリウム塩およびアンモニウム塩）を含む。インドール−３−
プロピオン酸の塩は、その酸の水溶液または分散したものを適当な塩基（例えば
、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸ナトリウムま
たは炭酸カリウム）と混合することによって、対応するインドール−３−プロピ
オン酸から従来の方法によって製造可能である。

【００１９】 加えて、上でも示した通り、本発明は上記のインドール−３−プロピオン酸の
エステルを用いて行なうことができる。それらエステルの例としては、メチルエ
ステル、エチルエステル、プロピルエステル、ベンジルエステルなどを含む。例
えば、上に記載の親油性エステル部分を持つインドール−３−プロピオン酸エス
テルは、インドール−３−プロピオン酸エステルの脳への浸透を増大させるのに
有利に使用することもできる。インドール−３−プロピオン酸エステルは、当該
分野の当業者にとって知られた様々な方法によって、それらに対応する酸または
塩から製造することができ、例えば、まずそれらの酸を酸クロリドに変換し、次
いでその酸クロリドを適当なアルコールと反応させることによって製造すること
ができる。エステルを製造するための他の適当な方法については、ケンプ（Ｋｅ
ｍｐ）およびベラシオ（Ｖｅｌｌａｃｃｉｏ）により１９８０に記載されている
。

【００２０】 インドール−３−プロピオン酸、それらの塩またはエステルは、抗酸化性およ
び／または抗線維素発生性質を有し、および／またはＡβの細胞毒性の影響を防
止するものが好ましい。様々なインドール−３−プロピオン酸、その塩およびエ
ステルは、Ａβの細胞毒性の影響を防止する機能が保持されていることを確認す
るために、本明細書に開示の方法を用いて容易にアッセイすることができ、それ
らのアッセイとしては例えば、細胞の生存度、脂質過酸化、細胞内Ｃａ²⁺および
酸素フリーラジカルについてのアッセイが挙げられる。細胞に及ぼすＡβの他の
細胞毒性の影響の防止としては、例えば膜の水ぶくれ、細胞収縮、染色質の異常
な分布および核崩壊の防止を容易に顕微鏡観察することができる。様々なインド
ール−３−プロピオン酸による抗酸化性効果および抗線維素生成効果は従来の方
法（例えば、本出願の実施例に記載の方法）によってアッセイすることができる
。

【００２１】 上で示したように、Ａβの細胞毒性上の影響または細胞殺傷上の影響は、例え
ば細胞の生存度の減少（すなわち、細胞死）、脂質過酸化の増加（酸素フリーラ
ジカルの増加の指標）、細胞内のＣａ²⁺レベルの増加、分散した膜の水ぶくれ、
細胞収縮、核膜に対する染色質の異常分布および核崩壊を含む。

【００２２】 Ａβの細胞毒性の影響は、ニューロン細胞（中枢神経系および末梢神経系の細
胞を含む）で最も容易に見られ、そして線維素生成疾患（例えば、アルツハイマ
ー病）を患っているヒトの被験者において最も容易に起こる。

【００２３】 Ａβの細胞毒性の影響を防止するためのインドール−３−プロピオン酸（また
はそれらの塩もしくはエステル）の有効量は、当該分野で知られる従来の方法（
例えば、以下に記載する用量−応答曲線の決定）によって容易に決めることがで
きる。本発明に従って投与されるべきインドール−３−プロピオン酸（またはそ
れらの塩もしくはエステル）の実際の好ましい量は、インドール−３−プロピオ
ン酸の具体的な形態（すなわち、塩、エステルもしくは酸）、製剤化された具体
的な組成物および投与方法によって変わることは、認められるであろう。インド
ール−３−プロピオン酸（またはそれらの塩もしくはエステル）の作用を改変し
得る多数の因子が当業者によって考慮され、それらの因子としては例えば、体重
、性別、規定食、投与時間、投与経路、排泄の割合、被験者の体調、薬物の組み
合わせ、および反応感度や激烈が挙げられる。投与は、最大許容用量の範囲内で
連続してまたは周期的に行なうことができる。ある病気の組に対する最適な投与
の割合は、従来の用量投与試験を用いて当業者によって確かめられることができ
る。

【００２４】 本発明はヒトの被験者の線維素生成疾患を処置する方法を更に提供する。その
方法は、線維素生成を抑制するかまたは後退させる（すなわち、線維素原の生成
を抑制するかまたは後退させる）のに有効な量のインドール−３−プロピオン酸
またはそれらの塩もしくはエステルを投与することを含む。本明細書で使用する
「線維素生成疾患」とは望ましくない線維素原（フィブリル）の沈積を伴ういず
れかの疾患または病気を含むことを意味する。非限定的な例として、それらの病
気または疾患はアミロイドまたはアミロイド様沈積物の異常な生成から生じる障
害または病気を含み、例えばプリオン関連のエンセファロパシー、アルツハイマ
ー痴呆またはアルツハイマー病（「ＡＤ」）および他のアミロイドーシス障害を
含むが、これらに限定されない。プリオン関連のエンセファロパシーの例として
は、ヒトのクロイツフェルト−ヤコブ病（「ＣＪＤ」）およびゲルストマン−ス
トロイスラー−シャインカー病（「ＧＳＳ」）、羊やヤギのスクラピーおよび蓄
牛の海綿上脳症を含む。

【００２５】 本発明はフリーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果たしている疾
患または他の病気を処置する方法を更に提供する。その方法は、それらの疾患ま
たは病気を処置するのに有効な量のインドール−３−プロピオン酸またはそれら
の塩もしくはエステルを投与することを含む。フリーラジカルおよび／または酸
化ストレスが役割を果たしている疾患または病気としては、パーキンソン病、リ
ューイ小体痴呆、筋萎縮性側索痴呆、進行性核上麻痺、気腫および他の種類の癌
を含むが、これらに限定されない。

【００２６】 インドール−３−プロピオン酸並びにそれらの塩およびエステルは、アミロイ
ドベータタンパク質が細胞に及ぼす細胞毒性の影響を防止するのと同様に、フリ
ーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果たしている疾患または他の病
気を処置するのに有効であるので、これらの化合物はアミロイドベータタンパク
質が関与する疾患（例えば、ＡＤ）を処置するのに特に有用であると期待される
。

【００２７】 インドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルに関する全
ての指示として、適当な用量については上述の通りであり、そして適当な投与経
路については全身投与（特に、用いたインドール−３−プロピオン酸またはそれ
らの塩もしくはエステルが血液脳関門を越える場合）を含む。全身投与としては
、以下で更に詳細に述べる通り、非経口投与および経口投与を含む。

【００２８】 インドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルは、単独で
投与するかまたは組成物として適合し得る担体と一緒に投与することができる。
適合し得る担体としては、例えば適当な医薬的担体または希釈剤を含む。それら
の希釈剤成分または担体成分は、本発明で使用するインドール−３−プロピオン
酸またはそれらの塩もしくはエステルの治療学的効果を低下させないように、選
択すべきである。

【００２９】 それらの組成物は望む用途（例えば経口投与、非経口投与または局所投与）に
適したいずれかの適当な形態に調剤することができる。経口用途に適当な用量形
態は、錠剤、分散させた粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、シロップ剤、エ
リキシル剤および皮膚パッチ剤を含む。錠剤のための不活性な希釈剤および担体
は、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトースおよびタルクを含む。
錠剤は顆粒化剤および崩壊剤（例えば、デンプンおよびアルギン酸）、結合剤（
例えば、デンプン、ゼラチンおよびアカシア）および滑沢剤（例えば、ステアリ
ン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルク）を含んでもよい。錠剤はコーテ
ィングしないか、または崩壊および吸収を遅延させるために公知の技術によって
コーティングしてもよい。カプセル剤で使用し得る不活性な希釈剤および担体と
しては、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムおよびカオリンを含む。懸濁
剤、シロップ剤およびエリキシル剤は従来の賦形剤（例えば、セルロースメチル
、トラガカント、アルギン酸ナトリウム）；湿潤剤（例えば、レシチンおよびポ
リオキシエチレンステアレート）；および保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息
香酸エチル）を含んでもよい。

【００３０】 非経口投与に適当な用量形態としては、溶液剤、懸濁剤、分散剤、乳化剤など
を含む。それらは減菌した固体の組成物の形態で製造して、使用する直前に減菌
した注射可能な媒質中に溶解するかまたは懸濁してもよい。それらは当該分野で
公知の懸濁化剤または分散化剤を含有してもよい。非経口投与の例としては、心
室内投与、大脳内投与、筋肉内投与、静脈内投与、腹膜内投与、直腸投与および
皮下投与が挙げられる。

【００３１】 本発明は生物学的試料の酸化を減少させる方法にも関する。この方法を用いて
減少させることのできる酸化の種類としては例えば、酸素フリーラジカルプロセ
スによって媒介される脂質過酸化および酸化を含む。生物学的試料としては、例
えば細胞または細胞の群（例えば、組織）であってもよい。それら生物学的試料
を上で記載したようなインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくは
エステルと接触させる。接触はいずれかの適当な方法を用いて行なうことができ
る。例えば、インドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステル
は、生物学的試料の周辺にある細胞外環境にまで運搬され得る。或いは、インド
ール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルは、例えば微量注入
によって細胞へ直接に導入することができる。インドール−３−プロピオン酸ま
たはそれらの塩もしくはエステルの酸化プロセスを減少させるのに有効な量は従
来法によって決めることができ、それらの方法としては例えば様々な量のインド
ール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを運搬し、そして酸
化の生成物（例えば、酸素フリーラジカル）または脂質過酸化の生成物の濃度を
追跡することが挙げられる。

【００３２】 本発明は、以下に示す非限定的な例により一層理解されるであろう。

【００３３】実施例１ 試験は、ＩＰＡがアルツハイマーアミロイドペプチド（「Ａβ」）に対する神
経保護活性を有するか否かを調べるために行なった。この４０〜４３アミノ酸ペ
プチドの広範囲での大脳沈積は、アルツハイマー病におけるニューロンの広範囲
な変性およびニューロンの死を引き起こす。

【００３４】 Ａβの細胞毒性の影響に対するＩＰＡの細胞保護作用を示す目的で、ヒトの神
経芽細胞系ＳＫ−Ｎ−ＳＨの細胞を用いた。これらの細胞を、５０μＭのＡβ（
２５〜３５）に、Ａβの活性な毒性フラグメント（ヤンクナー（Ｙａｎｋｎｅｒ
）らにより１９９０）に、５０μＭのＩＰＡと共に、またはＩＰＡなしに曝露さ
せた。コントロールとして、その実験をＡβなしで繰り返した。正のコントロー
ルとしては、ＩＰＡの代わりに公知の抗酸化剤、フェニル−Ｎ−ｔ−ブチルニト
ロン（「ＰＢＮ」）を用いた。

【００３５】 その結果を図１に示すが、その図の棒グラフはパーセントで表わす生存度を示
す。Ａβのみでは細胞に対して著しい細胞毒性の影響を有するが、ＩＰＡおよび
ＰＢＮは共に強力な保護的活性を有する。

【００３６】実施例２ 実施例１の実験を、ＰＣ１２ラットクロム親和性細胞腫細胞を用いて繰り返し
た。その結果を図２に示すが、その結果は図１に示した結果と本質的に同一であ
る。

【００３７】実施例３ 実施例１の実験を、ＳＫ−Ｎ−ＳＨヒト神経芽細胞腫細胞系を用いたＡβ(１ 〜４２)ペプチドを用いて繰り返した。その結果を図３に示すが、その結果は実 施例１について示した結果と一致する。

【００３８】実施例４ ＩＰＡの細胞保護の性質は少なくとも部分的には抗酸化剤活性の結果であると
いう可能性を調べるために、Ａβまたは酸化ストレスに曝露させたＰＣ１２細胞
中におけるマロン酸ジアルデヒド（「ＭＤＡ」）のレベル、脂質過酸化のマーカ
ーを調べた。細胞をジエチルジチオカルボネート（「ＤＤＴＣ」）、スーパーオ
キシドジスムターゼ阻害剤およびある決まった酸化性損傷のモデルに曝露させる
ことによって、酸化ストレスをかけた。ＰＣ１２細胞を、アミロイドペプチドの
みに曝露させるか、またはＩＰＡと一緒にアミロイドペプチドに曝露させた。他
の実験では、細胞をＤＤＴＣのみに曝露させるか、またはＩＰＡと一緒にＤＤＴ
Ｃに曝露させた。その結果を図４に示す。ＩＰＡは処置した細胞中でのマロン酸
ジアルデヒドの産生を有意に減少させることが見られ、このことはＩＰＡが抗酸
化剤活性を有することを示している。図４はＩＰＡについての神経保護活性およ
び抗酸化剤活性の両方を示す。

【００３９】実施例５ 実施例４で見られた観察を更に確認するために、我々はＩＰＡが酸化ストレス
（ＤＤＴＣ）に曝露させた細胞の死を防止するのに有効であるかどうかを調べた
。ＰＣ１２神経芽細胞腫の細胞を様々な量のＤＤＴＣで、様々な量のＩＰＡと共
にまたはＩＰＡなしに処理した。その結果を図５に示す。ＩＰＡの抗酸化剤活性
は、ＤＤＴＣによるスーパーオキシドジスムターゼの阻害によって誘発される神
経芽細胞腫細胞の細胞死を防止することによって示される。このことは、ＩＰＡ
がＤＤＴＣに曝露させた細胞の生存率を増加するという先に得られたデータと一
致する。

【００４０】実施例６ ＩＰＡがＡβ線維素生成に影響を及ぼすかどうかを決定するために、１５０μ
ＭのＡβ（１〜４０）を超純水（すなわち、蒸留し、ろ過し且つ減菌した水）に
ｐＨ７で溶解させた３００μＭのＩＰＡおよび塩化ナトリウムと一緒にインキュ
ベートした。コントロールとして、その超純水を用いて等量の塩化ナトリウムを
含有するＩＰＡを溶解させ、このものを１５０μＭのＡβ（１〜４０）にｐＨ７
で加えた。１つの実験においては、その溶液（すなわち、ＩＰＡ含有溶液および
コントロール溶液）を２４時間インキュベートした。第２の実験では、よれらの
各溶液を４８時間インキュベートした。各インキュベーションの期間の最後に、
２μＭのチオフラビンＴを含有する５０ｍＭのグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ
９.２）を各試料（５μＬ）に加えて、最終的な量を２ｍＬとした。βシート形 成の直接的な尺度である蛍光を、日立Ｆ−２０００蛍光分光計を用いて、励起波
長４３５ｎｍで、発光波長４８５ｎｍで測定した。各条件につき３つの試料の平
均の標準偏差を決定し、その結果を図６Ａ（インキュベーションを２４時間）お
よび図６Ｂ（インキュベーションを４８時間）に示す（棒グラフとして）。２４
時間および４８時間インキュベーションした実験の両方において、蛍光量はコン
トロール（標識したＡβ）と比べて、ＩＰＡ含有試料（標識したＡβ＋ＩＰＡ）
の場合には有意に低い。このことは、コントロールと比べてＩＰＡ含有試料の場
合にはβシート形成が起こりにくいことを示し、言いかえればＩＰＡが抗線維素
生成であることを示す。

【００４１】 好ましい実施態様を本明細書で詳細に示し且つ記載してきたが、様々な改良、
追加、置換などを本発明の精神から逸脱せずに行なうことができ、従ってそれら
は特許請求の範囲に記載する本発明の範囲内であるとみなされることは、当該分
野の当業者にとって明らかであろう。

【００４２】

【表１】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１はＡβ(２５〜３５)のみに曝露させるか、またはＩＰＡもし
くはＰＢＮと同時に曝露させたＳＫ−Ｎ−ＳＨヒト神経芽腫細胞を用いた場合の
、パーセントで表わす生存度を示す棒グラフである。

【図２】 図２はＡβ(２５〜３５)のみに曝露させるか、またはＩＰＡもし
くはＰＢＮと同時に曝露させたＰＣ１２ラットフェオクロモチトーム細胞を用い
た場合の、パーセントで表わす生存度を示す棒グラフである。

【図３】 図３はＡβ(１〜４２)のみに曝露させるか、またはＩＰＡもしく
はＰＢＮと同時に曝露させたＳＫ−Ｎ−ＳＨヒト神経芽腫細胞を用いた場合の、
パーセントで表わす生存度を示す棒グラフである。

【図４】 図４はアミロイドペプチドＡβ(１〜４２)もしくはＤＤＴＣのみ
に曝露させるか、またはそれぞれをＩＰＡと一緒に曝露させることによって誘発
される脂質過酸化の程度（ＭＤＡを測定）を示す棒グラフである。

【図５】 図５はＤＤＴＣによるスーパーオキシドジスムターゼの阻害によ
って誘発されるＰＣ１２ラット神経芽腫細胞の細胞死を防止することによる、Ｉ
ＰＡの抗酸化剤的活性を示す棒グラフである。

【図６】 図６Ａおよび図６Ｂは、２４時間（図６Ａ）および４８時間（図
６Ｂ）、Ａβ(１〜４０)をインキュベーションした時のβシート形成に及ぼすＩ
ＰＡの影響を示す棒グラフである。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年４月２８日（２０００．４．２８）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/28 Ａ６１Ｐ 25/28 35/00 35/00 43/00 43/00 １１１ １１１ Ｃ０７Ｄ 209/18 Ｃ０７Ｄ 209/18 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ Ｔ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ， ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 ニューヨーク・ユニバーシティ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ アメリカ合衆国 10012 ニューヨーク、 ニューヨーク、ワシントン・スクエア・サ ウス 70 (72)発明者 ミゲル・エイ・パッポラ アメリカ合衆国36695アラバマ州モービル、 ヒルクレスト・ロード1500番、アパートメ ント1128 (72)発明者 ブラス・フランジオーネ アメリカ合衆国10116ニューヨーク州ニュ ーヨーク、イースト・サーティフォース・ ストリート330番、アパートメント35ビー (72)発明者 ジョージ・ギソ アメリカ合衆国11373ニューヨーク州エル ムハースト、エイティエイス・ストリート 47−09番 (72)発明者 ブルクハルト・ペゲラー ドイツ連邦共和国37085ゲッティンゲン、 アイゼナッハー・シュトラーセ７番 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 BC14 MA01 MA04 NA14 ZA02 ZA16 ZA45 ZA59 ZA94 ZB21 ZB26 ZC21 ZC37 ZC41 ZC54 4C204 BB01 CB02 DB25 EB02 FB01 GB01

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 細胞に及ぼすアミロイドベータタンパク質の細胞毒性の影響
   を防止する方法であって、その細胞を有効量のインドール−３−プロピオン酸ま
   たはそれらの塩もしくはエステルに細胞を曝露させることを含む方法。
2. 【請求項２】 細胞毒性の影響は細胞死である、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 細胞毒性の影響は脂質過酸化の増加である、請求項１に記載
   の方法。
4. 【請求項４】 細胞毒性の影響は細胞内Ｃａ²⁺の増加である、請求項１に記
   載の方法。
5. 【請求項５】 細胞毒性の影響は酸素フリーラジカルの増加である、請求項
   １に記載の方法。
6. 【請求項６】 細胞はニューロン細胞である、請求項１に記載の方法。
7. 【請求項７】 細胞はヒトの被験者に存在し、そしてその細胞の曝露がイン
   ドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを全身投与するこ
   とを含む、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】 細胞が線維素生成疾患を有するヒトの被験者に存在する、請
   求項１に記載の方法。
9. 【請求項９】 ヒトの被験者の線維素生成疾患を処置する方法であって、ヒ
   トの被験者の線維素生成を防止するかまたは後退させるのに有効な量のインドー
   ル−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを投与することを含む
   方法。
10. 【請求項１０】 全身投与を行なう、請求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 線維素生成疾患はアルツハイマー病である、請求項９に記
    載の方法。
12. 【請求項１２】 線維素生成疾患はプリオン関連のエンセファロパシーであ
    る、請求項１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 生物学的試料の酸化を減少させる方法であって、その生物
    学的試料を有効量のインドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエ
    ステルと接触させることを含む方法。
14. 【請求項１４】 生物学的試料は細胞である、請求項１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 酸化を減少させることで脂質過酸化を減少させる、請求項
    １３に記載の方法。
16. 【請求項１６】 酸化を減少させることで酸素フリーラジカルを減少させる
    、請求項１３に記載の方法。
17. 【請求項１７】 フリーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果た
    している疾患または他の病気を処置する方法であって、それらの処置を必要とす
    る患者にそれらの疾患または病気を処置するのに有効な量のインドール−３−プ
    ロピオン酸またはそれらの塩もしくはエステルを投与することを含む方法。
18. 【請求項１８】 全身投与を行なう、請求項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 疾患または他の病気はパーキンソン病、リューイ小体痴呆
    、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、発作、アテローム硬化症、気腫および
    癌からなる群から選ばれるものである、請求項１７に記載の方法。
20. 【請求項２０】 アミロイドベータタンパク質の細胞毒性の影響が関与した
    疾患の処置における、インドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくは
    エステルの使用。
21. 【請求項２１】 線維素生成疾患の処置における、インドール−３−プロピ
    オン酸またはそれらの塩もしくはエステルの使用。
22. 【請求項２２】 アルツハイマー病、プリオン関連のエンセファロパシーま
    たはそれらの組み合わせの処置における、インドール−３−プロピオン酸または
    それらの塩もしくはエステルの使用。
23. 【請求項２３】 フリーラジカルおよび／または酸化ストレスが役割を果た
    している疾患または他の病気の処置における、インドール−３−プロピオン酸ま
    たはそれらの塩もしくはエステルの使用。
24. 【請求項２４】 パーキンソン病、リューイ小体痴呆、筋萎縮性側索硬化症
    、進行性核上麻痺、発作、アテローム硬化症、気腫、癌またはそれらの組み合わ
    せの処置における、インドール−３−プロピオン酸またはそれらの塩もしくはエ
    ステルの使用。