JP2002369877A - 神経再建生体材料およびその製造方法 - Google Patents
神経再建生体材料およびその製造方法Info
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- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/32—Materials or treatment for tissue regeneration for nerve reconstruction
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ラミニンに匹敵する再生神経の誘導作用を持
つ臨床応用可能な人工神経再建生体材料の開発。 【構成】 キチンまたはキトサン表面にラミニンフラグ
メントを修飾した神経再建生体材料。ラミニンフラグメ
ントはＹＩＧＳＲまたはＩＫＶＡＶのアミノ酸配列を含
むもの。例えば、キチンまたはキトサン表面にカルボキ
シル基を導入し、ついで、カルボキシル基活性化試薬水
溶液に浸漬して、導入したカルボキシル基を活性化し、
次いで、チオール基を持つ分子を固定化し、次いで、導
入されたチオール基をチオール基活性化試薬と反応させ
Ｓ−Ｓ結合を形成させることによりカルボキシル基に固
定化されたチオール基を活性化し、次いで、ペプチドを
含んだリン酸緩衝液中に浸漬してペプチド末端のチオー
ル基と予め形成していたＳ−Ｓ結合とのジスルフィド交
換反応によりペプチドの活性部位を保護した状態形で固
定化することにより製造する。
つ臨床応用可能な人工神経再建生体材料の開発。 【構成】 キチンまたはキトサン表面にラミニンフラグ
メントを修飾した神経再建生体材料。ラミニンフラグメ
ントはＹＩＧＳＲまたはＩＫＶＡＶのアミノ酸配列を含
むもの。例えば、キチンまたはキトサン表面にカルボキ
シル基を導入し、ついで、カルボキシル基活性化試薬水
溶液に浸漬して、導入したカルボキシル基を活性化し、
次いで、チオール基を持つ分子を固定化し、次いで、導
入されたチオール基をチオール基活性化試薬と反応させ
Ｓ−Ｓ結合を形成させることによりカルボキシル基に固
定化されたチオール基を活性化し、次いで、ペプチドを
含んだリン酸緩衝液中に浸漬してペプチド末端のチオー
ル基と予め形成していたＳ−Ｓ結合とのジスルフィド交
換反応によりペプチドの活性部位を保護した状態形で固
定化することにより製造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、キチンまたはキト
サン表面にラミニンフラグメントを修飾した神経再建生
体材料およびその製造方法に関する。
サン表面にラミニンフラグメントを修飾した神経再建生
体材料およびその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】１９９０年にマッキノン（Mackinnon)は
ポリグリコール酸（ＰＧＡ）生体吸収性チューブを指神
経損傷に管腔移植している。現在、臨床で使用されてい
る人工神経はこのＰＧＡチューブだけであるが、生体適
合性、親和性等に問題があり、いまだ、わが国における
臨床症例は報告されていない。現在の人工神経では、架
橋できる長さが１０ｃｍにも満たない。しかし、通常行
われる上下肢神経欠損部への移植であれば、人工神経移
植で機能的再生が得られる。例えば、京大のグループ
は、ＰＧＡコラーゲンチューブにラミニンを被覆したコ
ラーゲンファイバーを挿入した人工神経を開発した。
ポリグリコール酸（ＰＧＡ）生体吸収性チューブを指神
経損傷に管腔移植している。現在、臨床で使用されてい
る人工神経はこのＰＧＡチューブだけであるが、生体適
合性、親和性等に問題があり、いまだ、わが国における
臨床症例は報告されていない。現在の人工神経では、架
橋できる長さが１０ｃｍにも満たない。しかし、通常行
われる上下肢神経欠損部への移植であれば、人工神経移
植で機能的再生が得られる。例えば、京大のグループ
は、ＰＧＡコラーゲンチューブにラミニンを被覆したコ
ラーゲンファイバーを挿入した人工神経を開発した。
【０００３】また、チューブ内壁、あるいはファイバー
にラミニンを被覆したり、ラミニンや神経栄養因子を混
ぜたコラーゲンゲルをチューブに注入する方法などが盛
んに試みられ、特許出願もなされている（例えば、特開
平５−２３７１３９号公報、特表平９−５０１９３２号
公報、再公表特許ＷＯ９８／２２１５５号公報）。
にラミニンを被覆したり、ラミニンや神経栄養因子を混
ぜたコラーゲンゲルをチューブに注入する方法などが盛
んに試みられ、特許出願もなされている（例えば、特開
平５−２３７１３９号公報、特表平９−５０１９３２号
公報、再公表特許ＷＯ９８／２２１５５号公報）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】糖たんぱく質であるラ
ミニンは、図１に示すように、分子量約９０万の柔軟な
十字架状分子構造を有し、上皮細胞を結合組織に接着さ
せる働き、神経細胞の突起伸長促進作用があり、神経再
建に有用と期待される。しかし、上記の従来技術で用い
られるラミニンは、ＥＨＳ ｒａｔ由来の腫瘍性産物な
ので、人体には使えない。また、ラミニンの分子量は大
きいので合成することも困難である。
ミニンは、図１に示すように、分子量約９０万の柔軟な
十字架状分子構造を有し、上皮細胞を結合組織に接着さ
せる働き、神経細胞の突起伸長促進作用があり、神経再
建に有用と期待される。しかし、上記の従来技術で用い
られるラミニンは、ＥＨＳ ｒａｔ由来の腫瘍性産物な
ので、人体には使えない。また、ラミニンの分子量は大
きいので合成することも困難である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ラミニンに
匹敵する再生神経の誘導作用を持つ臨床応用可能な人工
神経再建生体材料についての研究開発を鋭意行い、キチ
ンまたはキトサン側鎖にラミニンペプチドを結合させる
ことによりその目的が達成できることを見出した。
匹敵する再生神経の誘導作用を持つ臨床応用可能な人工
神経再建生体材料についての研究開発を鋭意行い、キチ
ンまたはキトサン側鎖にラミニンペプチドを結合させる
ことによりその目的が達成できることを見出した。
【０００６】すなわち、本発明は、キチンまたはキトサ
ン表面にラミニンフラグメントを修飾した神経再建生体
材料である。また、本発明は、ラミニンフラグメントが
ＹＩＧＳＲまたはＩＫＶＡＶのアミノ酸配列を含むもの
であることを特徴とする上記の神経再建生体材料であ
る。
ン表面にラミニンフラグメントを修飾した神経再建生体
材料である。また、本発明は、ラミニンフラグメントが
ＹＩＧＳＲまたはＩＫＶＡＶのアミノ酸配列を含むもの
であることを特徴とする上記の神経再建生体材料であ
る。
【０００７】また、本発明は、キチンまたはキトサン表
面にカルボキシル基を導入し、次いで、ペプチドを含ん
だリン酸緩衝液中に浸漬してカルボキシル基の負電荷に
よりキチンまたはキトサン表面にペプチドを静電吸着さ
せることを特徴とする上記の神経再建生体材料の製造方
法である。
面にカルボキシル基を導入し、次いで、ペプチドを含ん
だリン酸緩衝液中に浸漬してカルボキシル基の負電荷に
よりキチンまたはキトサン表面にペプチドを静電吸着さ
せることを特徴とする上記の神経再建生体材料の製造方
法である。
【０００８】また、本発明は、キチンまたはキトサンあ
るいはカルボキシル基を導入したキチンまたはカルボキ
シル基を導入したキトサン表面にリン酸カルシウムを結
着し、次いで、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬
してリン酸カルシウムの負電荷によりキチンまたはキト
サン表面にペプチドを静電吸着させることを特徴とする
上記の神経再建生体材料の製造方法である。
るいはカルボキシル基を導入したキチンまたはカルボキ
シル基を導入したキトサン表面にリン酸カルシウムを結
着し、次いで、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬
してリン酸カルシウムの負電荷によりキチンまたはキト
サン表面にペプチドを静電吸着させることを特徴とする
上記の神経再建生体材料の製造方法である。
【０００９】また、本発明は、キチンまたはキトサン表
面にカルボキシル基を導入し、次いで、カルボキシル基
活性化試薬水溶液に浸漬して、導入したカルボキシル基
を活性化し、次いで、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中
に浸漬してキチンまたはキトサン表面のカルボキシル基
とペプチドの水酸基およびアミノ基を反応させ共有結合
させることを特徴とする上記の神経再建生体材料の製造
方法である。
面にカルボキシル基を導入し、次いで、カルボキシル基
活性化試薬水溶液に浸漬して、導入したカルボキシル基
を活性化し、次いで、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中
に浸漬してキチンまたはキトサン表面のカルボキシル基
とペプチドの水酸基およびアミノ基を反応させ共有結合
させることを特徴とする上記の神経再建生体材料の製造
方法である。
【００１０】また、本発明は、キチンまたはキトサン表
面にカルボキシル基を導入し、次いで、カルボキシル基
活性化試薬水溶液に浸漬して、導入したカルボキシル基
を活性化し、次いで、チオール基を持つ分子を固定化
し、次いで、導入されたチオール基をチオール基活性化
試薬と反応させＳ−Ｓ結合を形成させることによりカル
ボキシル基に固定化されたチオール基を活性化し、次い
で、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬してペプチ
ド末端のチオール基と予め形成していたＳ−Ｓ結合との
ジスルフィド交換反応によりペプチドの活性部位を保護
した状態形で固定化することを特徴とする上記の神経再
建生体材料の製造方法である。
面にカルボキシル基を導入し、次いで、カルボキシル基
活性化試薬水溶液に浸漬して、導入したカルボキシル基
を活性化し、次いで、チオール基を持つ分子を固定化
し、次いで、導入されたチオール基をチオール基活性化
試薬と反応させＳ−Ｓ結合を形成させることによりカル
ボキシル基に固定化されたチオール基を活性化し、次い
で、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬してペプチ
ド末端のチオール基と予め形成していたＳ−Ｓ結合との
ジスルフィド交換反応によりペプチドの活性部位を保護
した状態形で固定化することを特徴とする上記の神経再
建生体材料の製造方法である。
【００１１】本発明の神経再建生体材料は、神経再建材
料として、神経細胞の突起伸長促進作用や細胞接着作用
を有し、優れた生体親和性と生分解性を有している。
料として、神経細胞の突起伸長促進作用や細胞接着作用
を有し、優れた生体親和性と生分解性を有している。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明は、キチンまたはキトサン
表面にラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ（チ
ロシン−イソロイシン−グリシン−セリン−アルギニ
ン）、ＩＫＶＡＶ（イソロイシン−リシン−バリン−ア
ラニン−バリン）などのアミノ酸配列を有するペプチ
ド、を修飾することによって得られた神経再建生体材料
である。この材料は、神経架橋用キトサンチューブの壁
面に該ペプチドを直接修飾して用いる方法、キトサン繊
維表面に該ペプチドを修飾し、神経架橋用チューブ内に
充填する方法、該ペプチドを修飾したキトサンゲルを充
填する方法などにより使用される。ＹＩＧＳＲは細胞接
着性を有し、ＩＫＶＡＶは細胞接着性と神経細胞突起伸
長促進作用を有するが、コラーゲン充填シリコンチュー
ブ（vivo）では効果がない。
表面にラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ（チ
ロシン−イソロイシン−グリシン−セリン−アルギニ
ン）、ＩＫＶＡＶ（イソロイシン−リシン−バリン−ア
ラニン−バリン）などのアミノ酸配列を有するペプチ
ド、を修飾することによって得られた神経再建生体材料
である。この材料は、神経架橋用キトサンチューブの壁
面に該ペプチドを直接修飾して用いる方法、キトサン繊
維表面に該ペプチドを修飾し、神経架橋用チューブ内に
充填する方法、該ペプチドを修飾したキトサンゲルを充
填する方法などにより使用される。ＹＩＧＳＲは細胞接
着性を有し、ＩＫＶＡＶは細胞接着性と神経細胞突起伸
長促進作用を有するが、コラーゲン充填シリコンチュー
ブ（vivo）では効果がない。
【００１３】以下に、本発明の神経再建生体材料の製造
方法を具体的に説明する。 １）キチンまたはキトサン表面にモノクロロ酢酸等を使
用してカルボキシル基を導入する。例えば、キチンまた
はキトサンのフィルムやチューブを水酸化ナトリウム水
溶液に浸漬し、これにモノクロロ酢酸等を滴下する。水
酸化ナトリウム濃度が高すぎる（２５Ｍ以上）と、反応
が進みすぎるため溶解してしまう。好ましくは５〜２０
Ｍである。カルボキシル基が導入されたキトサン（ＣＭ
−キトサン）は水溶性である。反応が進みすぎて水溶性
になるのを防ぐために、ある程度まで（例えば、ｐＨ１
０まで）モノクロロ酢酸を滴下し、その後に塩酸などの
酸で中和する方法もある。
方法を具体的に説明する。 １）キチンまたはキトサン表面にモノクロロ酢酸等を使
用してカルボキシル基を導入する。例えば、キチンまた
はキトサンのフィルムやチューブを水酸化ナトリウム水
溶液に浸漬し、これにモノクロロ酢酸等を滴下する。水
酸化ナトリウム濃度が高すぎる（２５Ｍ以上）と、反応
が進みすぎるため溶解してしまう。好ましくは５〜２０
Ｍである。カルボキシル基が導入されたキトサン（ＣＭ
−キトサン）は水溶性である。反応が進みすぎて水溶性
になるのを防ぐために、ある程度まで（例えば、ｐＨ１
０まで）モノクロロ酢酸を滴下し、その後に塩酸などの
酸で中和する方法もある。
【００１４】次いで、ＣＭ−キトサンをペプチドを含ん
だリン酸緩衝液中に浸漬する。使用ペプチドは、シグマ
Ｃ１６６８ ＣＤＰＧＹＵＧＳＲまたはシグマＣ６１７
１ＣＳＲＡＲＫＱＡＡＳＩＫＶＡＶＳＡＤＲのいずれか
である。カルボキシル基の負電荷により、キチンまたは
キトサン表面にペプチドが静電吸着する。リン酸緩衝液
濃度が高いほど吸着量が多くなる。また、浸漬時間は長
いほど吸着量が多くなるが、５時間以上ではあまり変化
が無い。この方法は、修飾されたペプチドの活性が維持
されやすいが、表面への固着力が共有結合よりも弱い。
だリン酸緩衝液中に浸漬する。使用ペプチドは、シグマ
Ｃ１６６８ ＣＤＰＧＹＵＧＳＲまたはシグマＣ６１７
１ＣＳＲＡＲＫＱＡＡＳＩＫＶＡＶＳＡＤＲのいずれか
である。カルボキシル基の負電荷により、キチンまたは
キトサン表面にペプチドが静電吸着する。リン酸緩衝液
濃度が高いほど吸着量が多くなる。また、浸漬時間は長
いほど吸着量が多くなるが、５時間以上ではあまり変化
が無い。この方法は、修飾されたペプチドの活性が維持
されやすいが、表面への固着力が共有結合よりも弱い。
【００１５】２）キチンまたはキトサンあるいはカルボ
キシル基を導入したキチンまたはカルボキシル基を導入
したキトサン表面にリン酸カルシウムを結着する。例え
ば、キチンまたはキトサンのフィルムやチューブを塩化
カルシウム、酢酸カルシウム、乳酸カルシウムなどの水
溶液に浸漬する。浸漬時間が長いほど生成量は大きい。
次いで、これを生理食塩水または蒸留水で洗浄する。次
いで、これをリン酸を含む水溶液、例えば、リン酸水素
ナトリウム水溶液、リン酸二水素ナトリウム水溶液、リ
ン酸水素二アンモニウム水溶液、に浸漬する。次いで、
これを生理食塩水または蒸留水で洗浄する。以上の一連
の操作を数回、例えば５回程度繰り返す。回数が多いほ
ど生成量が大きい。
キシル基を導入したキチンまたはカルボキシル基を導入
したキトサン表面にリン酸カルシウムを結着する。例え
ば、キチンまたはキトサンのフィルムやチューブを塩化
カルシウム、酢酸カルシウム、乳酸カルシウムなどの水
溶液に浸漬する。浸漬時間が長いほど生成量は大きい。
次いで、これを生理食塩水または蒸留水で洗浄する。次
いで、これをリン酸を含む水溶液、例えば、リン酸水素
ナトリウム水溶液、リン酸二水素ナトリウム水溶液、リ
ン酸水素二アンモニウム水溶液、に浸漬する。次いで、
これを生理食塩水または蒸留水で洗浄する。以上の一連
の操作を数回、例えば５回程度繰り返す。回数が多いほ
ど生成量が大きい。
【００１６】この後、ペプチドを含んだリン酸緩衝溶液
中に浸漬する。リン酸カルシウムの負電荷により、キチ
ンまたはキトサン表面に燐酸カルシウムを介してぺプチ
ドが静電吸着する。この方法は、修飾されたペプチドの
活性が維持されやすいが、表面への固着力が共有結合よ
りも弱い。
中に浸漬する。リン酸カルシウムの負電荷により、キチ
ンまたはキトサン表面に燐酸カルシウムを介してぺプチ
ドが静電吸着する。この方法は、修飾されたペプチドの
活性が維持されやすいが、表面への固着力が共有結合よ
りも弱い。
【００１７】３）上記の１）と同様に、キチンまたはキ
トサン表面にモノクロロ酢酸等を使用してカルボキシル
基を導入する。次いで、下記の式、
トサン表面にモノクロロ酢酸等を使用してカルボキシル
基を導入する。次いで、下記の式、
【００１８】
【化１】 に示すカルボキシル基活性化試薬（WSC:Water Soluble
Carbodiimide、N-hydroxysccinimideなど）水溶液に浸漬
して、下記の式に示すように、導入したカルボキシル基
を活性化する。ＷＳＣ濃度は、例えば、３０ｍＭ程度と
し、浸漬時間は３０分程度とする。ＷＳＣ濃度が高いほ
ど、修飾量は多くなるが、高すぎると、キトサン内の分
子間架橋が進むため、導入したカルボキシル基が減少し
効果が悪くなる。
Carbodiimide、N-hydroxysccinimideなど）水溶液に浸漬
して、下記の式に示すように、導入したカルボキシル基
を活性化する。ＷＳＣ濃度は、例えば、３０ｍＭ程度と
し、浸漬時間は３０分程度とする。ＷＳＣ濃度が高いほ
ど、修飾量は多くなるが、高すぎると、キトサン内の分
子間架橋が進むため、導入したカルボキシル基が減少し
効果が悪くなる。
【００１９】
【化２】
【００２０】浸漬時間が長すぎてもキトサンに導入され
たカルボキシル基とキトサン中の水酸基あるいはアミノ
基との分子内架橋が進むため導入したカルボキシル基が
減少し効率が悪くなる。また、浸漬時間が短かすぎると
キトサンに導入されたカルボキシル基が十分に活性化さ
れない可能性がある。そのため、最適な活性化時間の設
定が必要である。また、温度条件はあまり高い温度では
活性が落ちるので５０℃程度以下が望ましい。室温程度
であれば問題はなく、４℃程度であればより望ましい。
この後、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬する。
この処理により、キトサン表面のカルボキシル基とペプ
チドの水酸基およびアミノ基が反応し、共有結合で結合
する。
たカルボキシル基とキトサン中の水酸基あるいはアミノ
基との分子内架橋が進むため導入したカルボキシル基が
減少し効率が悪くなる。また、浸漬時間が短かすぎると
キトサンに導入されたカルボキシル基が十分に活性化さ
れない可能性がある。そのため、最適な活性化時間の設
定が必要である。また、温度条件はあまり高い温度では
活性が落ちるので５０℃程度以下が望ましい。室温程度
であれば問題はなく、４℃程度であればより望ましい。
この後、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬する。
この処理により、キトサン表面のカルボキシル基とペプ
チドの水酸基およびアミノ基が反応し、共有結合で結合
する。
【００２１】この方法は、上記１）、２）の方法より固
着力が強いが、下記の式に示すように、ペプチドの活性
部位にＯＨ、ＮＨ２があるため、固定化反応によりペプ
チドの活性がなくなってしまう可能性があり、ペプチド
との結合部位を指定できないことから、活性の低下が起
こる（例えば、ＣＤＰＧＹＩＧＳＲのうち、ＣＤＰＧと
反応したものは活性が維持されるが、ＹＩＧＳＲと反応
したものは失活する）。
着力が強いが、下記の式に示すように、ペプチドの活性
部位にＯＨ、ＮＨ２があるため、固定化反応によりペプ
チドの活性がなくなってしまう可能性があり、ペプチド
との結合部位を指定できないことから、活性の低下が起
こる（例えば、ＣＤＰＧＹＩＧＳＲのうち、ＣＤＰＧと
反応したものは活性が維持されるが、ＹＩＧＳＲと反応
したものは失活する）。
【００２２】
【化３】
【００２３】４）上記の３）と同様に、キチンまたはキ
トサン表面にモノクロロ酢酸等を使用してカルボキシル
基を導入した後、カルボキシル基活性化試薬を用いて導
入したカルボキシル基を活性化する。上記の３）と同様
に、ＷＳＣ濃度が高いほど、固定化量は多くなるが、高
すぎると、キトサン内の分子間架橋が進むため、導入し
たカルボキシル基が減少し効率が悪くなる。
トサン表面にモノクロロ酢酸等を使用してカルボキシル
基を導入した後、カルボキシル基活性化試薬を用いて導
入したカルボキシル基を活性化する。上記の３）と同様
に、ＷＳＣ濃度が高いほど、固定化量は多くなるが、高
すぎると、キトサン内の分子間架橋が進むため、導入し
たカルボキシル基が減少し効率が悪くなる。
【００２４】また、浸漬時間が長すぎてもキトサンに導
入されたカルボキシル基とキトサン中の水酸基あるいは
アミノ基との分子内架橋が進むためシスティンの固定化
効率が低くなる。また、浸漬時間が短かすぎるとキトサ
ンに導入されたカルボキシル基が十分に活性化されない
可能性がある。そのため、最適な活性化時間の設定が必
要である。
入されたカルボキシル基とキトサン中の水酸基あるいは
アミノ基との分子内架橋が進むためシスティンの固定化
効率が低くなる。また、浸漬時間が短かすぎるとキトサ
ンに導入されたカルボキシル基が十分に活性化されない
可能性がある。そのため、最適な活性化時間の設定が必
要である。
【００２５】次いで、システィンのリン酸緩衝液に浸漬
し、カルボキシル基にシスティン等のチオール基を持つ
分子を固定化する。濃度が高いほど吸着量が多くなる。
次いで、下記の式に示すように、システィン固定化ＣＭ
−キトサンを予想されるシスティンの固定化量より大過
剰の5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)(DTNB)等の
リン酸緩衝液に浸漬し、導入されたチオール基をチオー
ル基活性化試薬と反応させＳ−Ｓ結合を形成させること
により、カルボキシル基に固定化されたシスティン等の
分子内に存在するチオール基を活性化する。システィン
とＤＴＮＢとの反応は、混合後すぐに終了するが、固定
化表面へのＤＴＮＢの拡散を考慮して浸漬時間は３０分
程度とする。
し、カルボキシル基にシスティン等のチオール基を持つ
分子を固定化する。濃度が高いほど吸着量が多くなる。
次いで、下記の式に示すように、システィン固定化ＣＭ
−キトサンを予想されるシスティンの固定化量より大過
剰の5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)(DTNB)等の
リン酸緩衝液に浸漬し、導入されたチオール基をチオー
ル基活性化試薬と反応させＳ−Ｓ結合を形成させること
により、カルボキシル基に固定化されたシスティン等の
分子内に存在するチオール基を活性化する。システィン
とＤＴＮＢとの反応は、混合後すぐに終了するが、固定
化表面へのＤＴＮＢの拡散を考慮して浸漬時間は３０分
程度とする。
【００２６】
【化４】
【００２７】その後、下記の式に示すように、ペプチド
含有リン酸緩衝液中に浸漬することによってペプチド末
端のチオール基（活性部位以外）と予め形成していたＳ
−Ｓ結合とのジスルフィド交換反応によりペプチドの活
性部位を保護した状態形で固定化する。
含有リン酸緩衝液中に浸漬することによってペプチド末
端のチオール基（活性部位以外）と予め形成していたＳ
−Ｓ結合とのジスルフィド交換反応によりペプチドの活
性部位を保護した状態形で固定化する。
【００２８】
【化５】
【００２９】この方法は、修飾過程が煩雑になるが、上
記１）、２）の方法より固着力が強く、ぺプチドとの結
合部位を指定できる。その結果、活性を維持できる（Ｃ
ＤＰＧＹＩＧＳＲのうち、Ｃと反応するため、ＹＩＧＳ
Ｒの活性が維持される）。
記１）、２）の方法より固着力が強く、ぺプチドとの結
合部位を指定できる。その結果、活性を維持できる（Ｃ
ＤＰＧＹＩＧＳＲのうち、Ｃと反応するため、ＹＩＧＳ
Ｒの活性が維持される）。
【００３０】
【実施例】実施例１ 以下、製造方法を実施例を用いて詳細に説明する。直径
２ｍｍ、長さ１５ｍｍ、厚さ０．１ｍｍのキトサンチュ
ーブを１０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌに浸漬
した。これに、２．５Ｍのモノクロロ酢酸をｐＨが７に
なるまで滴下した。この操作により、キトサン表面にカ
ルボキシル基が導入された。得られたカルボキシメチル
化キトサン（ＣＭ−キトサン）は、よく水洗して副生成
物を除去した。ＣＭ化の確認はＦＴ−ＩＲ（Spectrum20
00,Perkin-Elmer)による分析において、カルボキシル基
が検出されることにより確認した。
２ｍｍ、長さ１５ｍｍ、厚さ０．１ｍｍのキトサンチュ
ーブを１０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌに浸漬
した。これに、２．５Ｍのモノクロロ酢酸をｐＨが７に
なるまで滴下した。この操作により、キトサン表面にカ
ルボキシル基が導入された。得られたカルボキシメチル
化キトサン（ＣＭ−キトサン）は、よく水洗して副生成
物を除去した。ＣＭ化の確認はＦＴ−ＩＲ（Spectrum20
00,Perkin-Elmer)による分析において、カルボキシル基
が検出されることにより確認した。
【００３１】これを、シグマ１６６８ ＣＤＰＧＹＩＧ
ＳＲ（ラミニンフラグメント）１００μｇ／ｍｌのリン
酸バッファー水溶液に３時間浸漬した。ラミニンフラグ
メントを吸着したＣＭ−キトサンを４Ｍの塩酸水溶液中
で３時間加水分解した後、４Ｍの水酸化ナトリウム水溶
液で中和した。この溶液を、市販のＢＣＡプロティンア
ッセイ キット（PIERSE製）で分析したところ、４．７
μｇ／ｃｍ2 のラミニンフラグメントが吸着しているこ
とが確認された。
ＳＲ（ラミニンフラグメント）１００μｇ／ｍｌのリン
酸バッファー水溶液に３時間浸漬した。ラミニンフラグ
メントを吸着したＣＭ−キトサンを４Ｍの塩酸水溶液中
で３時間加水分解した後、４Ｍの水酸化ナトリウム水溶
液で中和した。この溶液を、市販のＢＣＡプロティンア
ッセイ キット（PIERSE製）で分析したところ、４．７
μｇ／ｃｍ2 のラミニンフラグメントが吸着しているこ
とが確認された。
【００３２】実施例２ 直径２ｍｍ、長さ１５ｍｍ、厚さ０．１ｍｍのキトサン
チューブを、濃度２．２％の塩化カルシウム水溶液中に
５分間浸漬し、次いで、これを取り出した後、生理食塩
水に３０秒間浸漬させ材料表面を洗浄した。次いで、こ
の材料を濃度４．３％のりん酸水素二ナトリウム水溶液
に５分間浸漬し、次いで、これを取り出した後、生理食
塩水に３０秒間浸漬させ材料表面を洗浄した。以上の一
連の操作を、５回繰り返して行った。このような操作を
行うことにより、キトサン表面にりん酸カルシウム系化
合物を結着させた。
チューブを、濃度２．２％の塩化カルシウム水溶液中に
５分間浸漬し、次いで、これを取り出した後、生理食塩
水に３０秒間浸漬させ材料表面を洗浄した。次いで、こ
の材料を濃度４．３％のりん酸水素二ナトリウム水溶液
に５分間浸漬し、次いで、これを取り出した後、生理食
塩水に３０秒間浸漬させ材料表面を洗浄した。以上の一
連の操作を、５回繰り返して行った。このような操作を
行うことにより、キトサン表面にりん酸カルシウム系化
合物を結着させた。
【００３３】これをシグマ１６６８ ＣＤＰＧＹＩＧＳ
Ｒ（ラミニンフラグメント）１００μｇ／ｍｌのリン酸
バッファー水溶液に３時間浸漬した。ラミニンフラグメ
ントを吸着したＣＭ−キトサンを４Ｍの塩酸水溶液中で
３時間加水分解した後、４Ｍの水酸化ナトリウム水溶液
で中和した。この溶液を、市販のＢＣＡプロティンアッ
セイ キット（PIERSE製）で分析したところ、３．２μ
ｇ／ｃｍ2 のラミニンフラグメントが吸着していること
が確認された。
Ｒ（ラミニンフラグメント）１００μｇ／ｍｌのリン酸
バッファー水溶液に３時間浸漬した。ラミニンフラグメ
ントを吸着したＣＭ−キトサンを４Ｍの塩酸水溶液中で
３時間加水分解した後、４Ｍの水酸化ナトリウム水溶液
で中和した。この溶液を、市販のＢＣＡプロティンアッ
セイ キット（PIERSE製）で分析したところ、３．２μ
ｇ／ｃｍ2 のラミニンフラグメントが吸着していること
が確認された。
【００３４】実施例３ 直径２ｍｍ、長さ１５ｍｍ、厚さ０．１ｍｍのキトサン
チューブを１０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌに
浸漬した。これに２．５Ｍのモノクロロ酢酸をｐＨが７
になるまで滴下した。この操作により、キトサン辰面に
カルボキシル基が導入された。得られたカルボキシメチ
ル化キトサン（ＣＭ−キトサン）は、よく水洗して副生
成物を除去した。
チューブを１０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌに
浸漬した。これに２．５Ｍのモノクロロ酢酸をｐＨが７
になるまで滴下した。この操作により、キトサン辰面に
カルボキシル基が導入された。得られたカルボキシメチ
ル化キトサン（ＣＭ−キトサン）は、よく水洗して副生
成物を除去した。
【００３５】これを、３０ｍＭのＷＳＣ水溶液に３０分
間浸漬し、次いで、これを取り出した後、シグマ１６６
８ ＣＤＰＧＹＩＧＳＲ（ラミニンフラグメント）１０
０μｇ／ｍｌのリン酸バッファー水溶液に３時間浸漬し
た。次いで、これを取り出した後、ラミニンフラグメン
トの静電吸着分を除去するため、３００ｍＭの食塩水中
で３時間浸漬し洗浄した。吸着分が除去され、共有結合
によりラミニンフラグメントが修飾されたＣＭ−キトサ
ンを４Ｍの塩酸水溶液中で３時間加水分解した後、４Ｍ
の水酸化ナトリウム水溶液で中和した。この溶液を、市
販のＢＣＡプロティン アッセイ キット（PIERSE製）
で分析したところ、１０．１μｇ／ｃｍ2 のラミニンフ
ラグメントが修飾していることが確認された。
間浸漬し、次いで、これを取り出した後、シグマ１６６
８ ＣＤＰＧＹＩＧＳＲ（ラミニンフラグメント）１０
０μｇ／ｍｌのリン酸バッファー水溶液に３時間浸漬し
た。次いで、これを取り出した後、ラミニンフラグメン
トの静電吸着分を除去するため、３００ｍＭの食塩水中
で３時間浸漬し洗浄した。吸着分が除去され、共有結合
によりラミニンフラグメントが修飾されたＣＭ−キトサ
ンを４Ｍの塩酸水溶液中で３時間加水分解した後、４Ｍ
の水酸化ナトリウム水溶液で中和した。この溶液を、市
販のＢＣＡプロティン アッセイ キット（PIERSE製）
で分析したところ、１０．１μｇ／ｃｍ2 のラミニンフ
ラグメントが修飾していることが確認された。
【００３６】実施例４ 直径２ｍｍ、長さ１５ｍｍ、厚さ０．１ｍｍのキトサン
チューブを１０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌに
浸漬した。これに２．５Ｍのモノクロロ酢酸をｐＨが７
になるまで滴下した。この操作により、キトサン表面に
カルボキシル基が導入された。得られたカルボキシメチ
ル化キトサン（ＣＭ−キトサン）は、よく水洗して副生
成物を除去した。
チューブを１０Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌに
浸漬した。これに２．５Ｍのモノクロロ酢酸をｐＨが７
になるまで滴下した。この操作により、キトサン表面に
カルボキシル基が導入された。得られたカルボキシメチ
ル化キトサン（ＣＭ−キトサン）は、よく水洗して副生
成物を除去した。
【００３７】これを、１００ｍＭのＷＳＣ水溶液に３０
分間浸漬し、次いで、これを取り出した後、システィン
のリン酸緩衝液（ｐＨ５．８）水溶液に３時間浸漬し
た。これを取り出した後、システィンの静電吸着分を除
去するため、３００ｍＭの食塩水中で３時間浸漬し洗浄
した。吸着分が除去され、共有結合によりシスティンが
固定化されたＣＭ−キトサンを得た。システィン固定化
ＣＭ−キトサンを１０ｍＭの5,5'-dithiobis-(2-nitrob
enzoic acid)(DTNB)リン酸緩衝液（ｐＨ８）に３０分間
浸漬し、Ｓ−Ｓ結合形成反応によってシスティンのチオ
ール基を活性化させた。
分間浸漬し、次いで、これを取り出した後、システィン
のリン酸緩衝液（ｐＨ５．８）水溶液に３時間浸漬し
た。これを取り出した後、システィンの静電吸着分を除
去するため、３００ｍＭの食塩水中で３時間浸漬し洗浄
した。吸着分が除去され、共有結合によりシスティンが
固定化されたＣＭ−キトサンを得た。システィン固定化
ＣＭ−キトサンを１０ｍＭの5,5'-dithiobis-(2-nitrob
enzoic acid)(DTNB)リン酸緩衝液（ｐＨ８）に３０分間
浸漬し、Ｓ−Ｓ結合形成反応によってシスティンのチオ
ール基を活性化させた。
【００３８】その後、シグマ１６６８ ＣＤＰＧＹＩＧ
ＳＲ（ラミニンフラグメント）１００μｇ／ｍｌのリン
酸緩衝液水溶液（ｐＨ７．４）に１〜２０時間浸漬する
ことによるジスルフィド交換反応によりラミニンフラグ
メントの末端で固定化した。ラミニンフラグメントの固
定化量は、ジスルフィド交換反応によって遊離してくる
5-thio-(2-nitrobenzoic acid)(TNB）の４１２ｎｍにお
ける吸光度を測定し、ＴＮＢのモル吸光係数（Ｅmol ；
13,600）を用いて算出した。その結果、１９μｇ／ｃｍ
2 のラミニンフラグメントが固定化されていることが確
認された。
ＳＲ（ラミニンフラグメント）１００μｇ／ｍｌのリン
酸緩衝液水溶液（ｐＨ７．４）に１〜２０時間浸漬する
ことによるジスルフィド交換反応によりラミニンフラグ
メントの末端で固定化した。ラミニンフラグメントの固
定化量は、ジスルフィド交換反応によって遊離してくる
5-thio-(2-nitrobenzoic acid)(TNB）の４１２ｎｍにお
ける吸光度を測定し、ＴＮＢのモル吸光係数（Ｅmol ；
13,600）を用いて算出した。その結果、１９μｇ／ｃｍ
2 のラミニンフラグメントが固定化されていることが確
認された。
【図１】図１は、ラミニンの分子構造を示す模式図であ
る。
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山口 勇 茨城県つくば市千現２−８−７ヴェルジェ 301号 (72)発明者 田口 哲志 茨城県つくば市稲荷前19−８スプリーム成 城Ｂ205 (72)発明者 田中 順三 茨城県つくば市鹿島台３−６ (72)発明者 四宮 謙一 東京都北区田端５−12−13パインマンショ ン502 (72)発明者 伊藤 聰一郎 東京都文京区水道シャンポール小石川901 (72)発明者 福崎 裕延 兵庫県龍野市揖保町揖保上341−１ (72)発明者 岡 洋一 茨城県つくば市稲荷前25−10メルベーユフ レア101号 Ｆターム(参考） 4C081 AB18 AC03 BA12 CD091 CD112 DA03 DA04 DB07 DC03 EA03 4C097 AA14 AA20 BB01 CC03 DD14 EE16 MM04
Claims (6)
- 【請求項１】 キチンまたはキトサン表面にラミニンフ
ラグメントを修飾した神経再建生体材料。 - 【請求項２】 ラミニンフラグメントがＹＩＧＳＲまた
はＩＫＶＡＶのアミノ酸配列を含むものであることを特
徴とする請求項１記載の神経再建生体材料。 - 【請求項３】 キチンまたはキトサン表面にカルボキシ
ル基を導入し、ついで、ペプチドを含んだリン酸緩衝液
中に浸漬してカルボキシル基の負電荷によりキチンまた
はキトサン表面にペプチドを静電吸着させることを特徴
とする請求項１記載の神経再建生体組織再生材料の製造
方法。 - 【請求項４】 キチンまたはキトサンあるいはカルボキ
シル基を導入したキチンまたはカルボキシル基を導入し
たキトサン表面にリン酸カルシウムを結着し、ついで、
ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬してリン酸カル
シウムの負電荷によりキチンまたはキトサン表面にペプ
チドを静電吸着させることを特徴とする請求項１記載の
神経再建生体材料の製造方法。 - 【請求項５】 キチンまたはキトサン表面にカルボキシ
ル基を導入し、ついで、カルボキシル基活性化試薬水溶
液に浸漬して、導入したカルボキシル基を活性化し、次
いで、ペプチドを含んだリン酸緩衝液中に浸漬してキチ
ンまたはキトサン表面のカルボキシル基とペプチドの水
酸基およびアミノ基を反応させ共有結合させることを特
徴とする請求項１記載の神経再建生体材料の製造方法。 - 【請求項６】 キチンまたはキトサン表面にカルボキシ
ル基を導入し、ついで、カルボキシル基活性化試薬水溶
液に浸漬して、導入したカルボキシル基を活性化し、次
いで、チオール基を持つ分子を固定化し、次いで、導入
されたチオール基をチオール基活性化試薬と反応させＳ
−Ｓ結合を形成させることによりカルボキシル基に固定
化されたチオール基を活性化し、次いで、ペプチドを含
んだリン酸緩衝液中に浸漬してペプチド末端のチオール
基と予め形成していたＳ−Ｓ結合とのジスルフィド交換
反応によりペプチドの活性部位を保護した状態形で固定
化することを特徴とする請求項１記載の神経再建生体材
料の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001180789A JP2002369877A (ja) | 2001-06-14 | 2001-06-14 | 神経再建生体材料およびその製造方法 |
| PCT/JP2002/005885 WO2002102429A1 (fr) | 2001-06-14 | 2002-06-12 | Biomateriaux utilises pour la reconstruction nerveuse et procede de fabrication de ceux-ci |
| EP02733496A EP1493454A1 (en) | 2001-06-14 | 2002-06-12 | Biomaterials for nerve reconstruction and process for producing the same |
| US10/480,596 US20040248777A1 (en) | 2001-06-14 | 2002-06-12 | Biomaterials for nerve reconstruction and process for producing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001180789A JP2002369877A (ja) | 2001-06-14 | 2001-06-14 | 神経再建生体材料およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002369877A true JP2002369877A (ja) | 2002-12-24 |
Family
ID=19021150
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001180789A Pending JP2002369877A (ja) | 2001-06-14 | 2001-06-14 | 神経再建生体材料およびその製造方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040248777A1 (ja) |
| EP (1) | EP1493454A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002369877A (ja) |
| WO (1) | WO2002102429A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008200299A (ja) * | 2007-02-20 | 2008-09-04 | Hokkaido Soda Kk | 神経再生チューブ及びその製造方法 |
| JP2009066227A (ja) * | 2007-09-13 | 2009-04-02 | National Cardiovascular Center | 神経誘導管 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8680182B2 (en) | 2009-06-04 | 2014-03-25 | Clemson University Research Foundation | Methods for promoting the revascularization and reenervation of CNS lesions |
| US8481067B2 (en) * | 2009-06-04 | 2013-07-09 | Clemson University Research Foundation | Methods for promoting the revascularization and reenervation of CNS lesions |
| US8609409B2 (en) | 2009-06-04 | 2013-12-17 | Clemson University | Methods and compositions for cell culture platform |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ219198A (en) * | 1987-02-05 | 1990-11-27 | Sensasel Worldwide Ltd | Illuminated sign with proximity sensor |
| JPH06507383A (ja) * | 1991-01-25 | 1994-08-25 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ | ラミニンのａ鎖のドメイン６のポリペプチド |
| US5305197A (en) * | 1992-10-30 | 1994-04-19 | Ie&E Industries, Inc. | Coupon dispensing machine with feedback |
| EP1124590B1 (en) * | 1997-04-03 | 2009-06-17 | California Institute Of Technology | Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering |
| JP4410879B2 (ja) * | 1998-09-09 | 2010-02-03 | 株式会社クラレ | 神経再生用材料 |
| JP4721482B2 (ja) * | 1999-05-18 | 2011-07-13 | 株式会社高研 | 神経再建用基材 |
-
2001
- 2001-06-14 JP JP2001180789A patent/JP2002369877A/ja active Pending
-
2002
- 2002-06-12 WO PCT/JP2002/005885 patent/WO2002102429A1/ja not_active Application Discontinuation
- 2002-06-12 EP EP02733496A patent/EP1493454A1/en not_active Withdrawn
- 2002-06-12 US US10/480,596 patent/US20040248777A1/en not_active Abandoned
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008200299A (ja) * | 2007-02-20 | 2008-09-04 | Hokkaido Soda Kk | 神経再生チューブ及びその製造方法 |
| JP2009066227A (ja) * | 2007-09-13 | 2009-04-02 | National Cardiovascular Center | 神経誘導管 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1493454A9 (en) | 2005-03-23 |
| US20040248777A1 (en) | 2004-12-09 |
| EP1493454A1 (en) | 2005-01-05 |
| WO2002102429A1 (fr) | 2002-12-27 |
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