JP2002136291A - 心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド - Google Patents
心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチドInfo
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】
【課題】心筋梗塞の遺伝的要素を有するか否かを判定し
うる方法を提供する。 【解決手段】ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子に
おける多型を分析することからなる心筋梗塞の遺伝的要
因を判定するための方法。
うる方法を提供する。 【解決手段】ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子に
おける多型を分析することからなる心筋梗塞の遺伝的要
因を判定するための方法。
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】本発明は心筋梗塞の遺伝的要
因を検出するための方法及びこれに使用されるオリゴヌ
クレオチドに関する。
因を検出するための方法及びこれに使用されるオリゴヌ
クレオチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】心筋梗塞の発病には、いくつかの遺伝的
因子と生活習慣等の非遺伝的因子とが関わっていると考
えられるが、その発病のメカニズムは解明されていな
い。従って、心筋梗塞を発病する可能性の高い遺伝的因
子が明らかになれば、発病のメカニズムの解明に大きな
役割を果たすと共に、その遺伝的因子の判定により心筋
梗塞に罹患する可能性の高い患者に対し、生活習慣等の
非遺伝的因子を最小限とする指導を行い、発病の危険性
を著しく低下させ得ると考えられる。本発明の発明者
は、１０個のエキソンを有するヒトプロスタサイクリン
合成酵素遺伝子のゲノムＤＮＡ構造（Gene Bank D8411
5）を解明しているが（T.Nakayama et al., BIOCHEMICA
L AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS 221, 803
-806 (1996))、さらにその機能を研究する過程で、プロ
スタサイクリン遺伝子における多型が、心筋梗塞の発症
に関連することを見出し、本発明を完成させた。
因子と生活習慣等の非遺伝的因子とが関わっていると考
えられるが、その発病のメカニズムは解明されていな
い。従って、心筋梗塞を発病する可能性の高い遺伝的因
子が明らかになれば、発病のメカニズムの解明に大きな
役割を果たすと共に、その遺伝的因子の判定により心筋
梗塞に罹患する可能性の高い患者に対し、生活習慣等の
非遺伝的因子を最小限とする指導を行い、発病の危険性
を著しく低下させ得ると考えられる。本発明の発明者
は、１０個のエキソンを有するヒトプロスタサイクリン
合成酵素遺伝子のゲノムＤＮＡ構造（Gene Bank D8411
5）を解明しているが（T.Nakayama et al., BIOCHEMICA
L AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS 221, 803
-806 (1996))、さらにその機能を研究する過程で、プロ
スタサイクリン遺伝子における多型が、心筋梗塞の発症
に関連することを見出し、本発明を完成させた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の多型の分
析により心筋梗塞の遺伝的要因を判定する方法を提供す
ることにある。
は、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の多型の分
析により心筋梗塞の遺伝的要因を判定する方法を提供す
ることにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】第１に、本発明は、下記
の方法に関する。 （１） ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子におけ
る多型を分析することからなる心筋梗塞の遺伝的要因を
判定するための方法。 （２） 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番号１に
示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子のエキ
ソン８（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の塩基番号１
８２の部位を含む配列を増幅し、得られた増幅産物を分
析することにより該塩基がＡかＣかを決定することを含
む（１）の方法。 （３） 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番号２の
開始コドン（塩基番号５０１〜５０３）の上流側の配列
（塩基番号１〜６００、好ましくは塩基番号３００〜５
００）を増幅し、増幅産物を分析してＣＣＧＣＣＡＧＣ
Ｃを繰り返し単位とするＶＮＴＲ多型の繰り返し数を決
定することを含む（１）の方法。 （４） 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番号１に
示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子のエキ
ソン８（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の塩基番号１
８２の部位を含む配列を増幅し、得られた増幅産物を分
析することにより該部位がＡかＣかを決定すること、及
び配列表の配列番号２の塩基番号５０１〜５０３の開始
コドンの上流側の配列（塩基番号１〜６００、好ましく
は塩基番号３００〜５００）を増幅し、増幅産物を分析
してＣＣＧＣＣＡＧＣＣを繰り返し単位とするＶＮＴＲ
多型の繰り返し数を決定することを含む（１）の方法。
の方法に関する。 （１） ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子におけ
る多型を分析することからなる心筋梗塞の遺伝的要因を
判定するための方法。 （２） 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番号１に
示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子のエキ
ソン８（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の塩基番号１
８２の部位を含む配列を増幅し、得られた増幅産物を分
析することにより該塩基がＡかＣかを決定することを含
む（１）の方法。 （３） 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番号２の
開始コドン（塩基番号５０１〜５０３）の上流側の配列
（塩基番号１〜６００、好ましくは塩基番号３００〜５
００）を増幅し、増幅産物を分析してＣＣＧＣＣＡＧＣ
Ｃを繰り返し単位とするＶＮＴＲ多型の繰り返し数を決
定することを含む（１）の方法。 （４） 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番号１に
示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子のエキ
ソン８（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の塩基番号１
８２の部位を含む配列を増幅し、得られた増幅産物を分
析することにより該部位がＡかＣかを決定すること、及
び配列表の配列番号２の塩基番号５０１〜５０３の開始
コドンの上流側の配列（塩基番号１〜６００、好ましく
は塩基番号３００〜５００）を増幅し、増幅産物を分析
してＣＣＧＣＣＡＧＣＣを繰り返し単位とするＶＮＴＲ
多型の繰り返し数を決定することを含む（１）の方法。
【０００５】第二に、本発明は下記のプローブ及びプラ
イマーに関する。 （５） 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを
表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の
部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列にハイ
ブリダイズし得る（１）、（２）または（４）の方法に
おいてプローブとして使用されるオリゴヌクレオチド。 （６） 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを
表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の
部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列を増幅
するためのフォワードプライマーまたはリバースプライ
マーとして機能し得る（１）、（２）または（４）の方
法に使用されるオリゴヌクレオチド。 （７） 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを
表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の
部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列を、１
塩基または数塩基の置換、欠失、付加を導入することに
より、１８２の部位の塩基がＡまたはＣのいずれか一方
である場合にのみ特定の制限酵素による認識配列が生じ
るように増幅するためのフォワードプライマーまたはリ
バースプライマーとして機能し得る（１）、（２）また
は（４）の方法に使用されるオリゴヌクレオチド。 （８） （１）〜（４）の方法に使用されるフォワード
プライマーとリバースプライマーとして機能する一組の
オリゴヌクレオチドであって、フォワードプライマーま
たはリバースプライマーの一方が配列番号１の配列（配
列中、ｍはＡまたはＣを表す）の一部であって、配列番
号１の塩基番号１８２の部位を含んで連続する配列にハ
イブリダイズすることができ、他方が配列番号１の配列
の他の部分にハイブリダイズすることができる一組のオ
リゴヌクレオチド。 （９） 配列番号２の配列または配列番号２の配列にお
いてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位が４単位ではな
く２，３，５，６または７単位含まれる配列の一部であ
って、ＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位のＶＮＴＲ多
型部分を含んで連続する配列を増幅するためのフォワー
ドプライマーまたはリバースプライマーとして機能し得
る（１）、（３）または（４）の方法に使用されるオリ
ゴヌクレオチド。さらに、本発明は、少なくとも、
（５）のオリゴヌクレオチドの一またはそれ以上が基板
に固定化されている（１）〜（４）の方法に使用される
ＤＮＡチップに関する。また、本発明は、少なくとも、
（５）〜（９）のオリゴヌクレオチドの一またはそれ以
上、及び／または（１０）のＤＮＡチップを含む（１）
〜（４）の方法に使用されるキットに関する。なお、上
記において、オリゴヌクレオチドは適宜標識されたもの
であってもよい。
イマーに関する。 （５） 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを
表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の
部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列にハイ
ブリダイズし得る（１）、（２）または（４）の方法に
おいてプローブとして使用されるオリゴヌクレオチド。 （６） 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを
表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の
部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列を増幅
するためのフォワードプライマーまたはリバースプライ
マーとして機能し得る（１）、（２）または（４）の方
法に使用されるオリゴヌクレオチド。 （７） 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを
表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の
部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列を、１
塩基または数塩基の置換、欠失、付加を導入することに
より、１８２の部位の塩基がＡまたはＣのいずれか一方
である場合にのみ特定の制限酵素による認識配列が生じ
るように増幅するためのフォワードプライマーまたはリ
バースプライマーとして機能し得る（１）、（２）また
は（４）の方法に使用されるオリゴヌクレオチド。 （８） （１）〜（４）の方法に使用されるフォワード
プライマーとリバースプライマーとして機能する一組の
オリゴヌクレオチドであって、フォワードプライマーま
たはリバースプライマーの一方が配列番号１の配列（配
列中、ｍはＡまたはＣを表す）の一部であって、配列番
号１の塩基番号１８２の部位を含んで連続する配列にハ
イブリダイズすることができ、他方が配列番号１の配列
の他の部分にハイブリダイズすることができる一組のオ
リゴヌクレオチド。 （９） 配列番号２の配列または配列番号２の配列にお
いてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位が４単位ではな
く２，３，５，６または７単位含まれる配列の一部であ
って、ＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位のＶＮＴＲ多
型部分を含んで連続する配列を増幅するためのフォワー
ドプライマーまたはリバースプライマーとして機能し得
る（１）、（３）または（４）の方法に使用されるオリ
ゴヌクレオチド。さらに、本発明は、少なくとも、
（５）のオリゴヌクレオチドの一またはそれ以上が基板
に固定化されている（１）〜（４）の方法に使用される
ＤＮＡチップに関する。また、本発明は、少なくとも、
（５）〜（９）のオリゴヌクレオチドの一またはそれ以
上、及び／または（１０）のＤＮＡチップを含む（１）
〜（４）の方法に使用されるキットに関する。なお、上
記において、オリゴヌクレオチドは適宜標識されたもの
であってもよい。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明において、「心筋梗塞の遺
伝的要因を判定する」とは、被験者が心筋梗塞の発症の
危険性が高いことを示す対立遺伝子型を有するか否かを
判定することを意味する。上記、本発明の判定方法にお
いて、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子（以下、
場合よりＰＧＩＳ遺伝子と記す）における多型を分析す
るとは、ＰＧＩＳ遺伝子のゲノムＤＮＡのエキソンまた
はイントロン、ＰＧＩＳ遺伝子の上流側（例えば、塩基
番号１〜５００）等における多型を分析するこという。
多型の分析は、例えば多型を含む部分の配列を増幅し、
対立遺伝子型を分析することからなる。また、ゲノムＤ
ＮＡの分析であっても、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡの分析
であってもよい。本発明において使用される試料は、任
意の生物学的試料、例えば血液、毛髪、組織片、尿等で
あり得る。多型は、例えばSingle nucleotide polymorp
hism（ＳＮＰ）多型、variable number of tandem repe
at（ＶＮＴＲ）多型等であり得る。
伝的要因を判定する」とは、被験者が心筋梗塞の発症の
危険性が高いことを示す対立遺伝子型を有するか否かを
判定することを意味する。上記、本発明の判定方法にお
いて、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子（以下、
場合よりＰＧＩＳ遺伝子と記す）における多型を分析す
るとは、ＰＧＩＳ遺伝子のゲノムＤＮＡのエキソンまた
はイントロン、ＰＧＩＳ遺伝子の上流側（例えば、塩基
番号１〜５００）等における多型を分析するこという。
多型の分析は、例えば多型を含む部分の配列を増幅し、
対立遺伝子型を分析することからなる。また、ゲノムＤ
ＮＡの分析であっても、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡの分析
であってもよい。本発明において使用される試料は、任
意の生物学的試料、例えば血液、毛髪、組織片、尿等で
あり得る。多型は、例えばSingle nucleotide polymorp
hism（ＳＮＰ）多型、variable number of tandem repe
at（ＶＮＴＲ）多型等であり得る。
【０００７】（増幅）多型を含む部分の増幅は、例えば
ＰＣＲによって行われるが、他の公知の増幅方法、例え
ばＮＡＳＢＡ、ＬＣＲ、ＲＣＲ等で行ってもよい。プラ
イマーの選択は、例えば、多型部分を含む１０塩基以上
の配列を増幅するように行い得る。増幅される配列は、
ＳＮＰの場合には１０〜１００塩基、好ましくは１０〜
５０塩基であり得る。ＶＮＴＲ多型の場合には、繰り返
し単位を構成するヌクレオチドの数及び最大繰り返し数
によるが、例えば２０〜３００塩基であり得る。また、
プライマーは、試料が一の対立遺伝子型の場合にのみ増
幅されるように、フォワードプライマー（以下、Ｆプラ
イマーと記す）またはリバースプライマー（以下、Ｒプ
ライマーと記す）の一方が多型部位にハイブリダイズす
るように選択してもよい。プライマーは必要に応じて蛍
光，ＲＩ等の適当な手段により標識され得る。
ＰＣＲによって行われるが、他の公知の増幅方法、例え
ばＮＡＳＢＡ、ＬＣＲ、ＲＣＲ等で行ってもよい。プラ
イマーの選択は、例えば、多型部分を含む１０塩基以上
の配列を増幅するように行い得る。増幅される配列は、
ＳＮＰの場合には１０〜１００塩基、好ましくは１０〜
５０塩基であり得る。ＶＮＴＲ多型の場合には、繰り返
し単位を構成するヌクレオチドの数及び最大繰り返し数
によるが、例えば２０〜３００塩基であり得る。また、
プライマーは、試料が一の対立遺伝子型の場合にのみ増
幅されるように、フォワードプライマー（以下、Ｆプラ
イマーと記す）またはリバースプライマー（以下、Ｒプ
ライマーと記す）の一方が多型部位にハイブリダイズす
るように選択してもよい。プライマーは必要に応じて蛍
光，ＲＩ等の適当な手段により標識され得る。
【０００８】（多型の分析）多型の分析は、公知の方法
を適宜選択して行い得る。分析方法の例を下記に示す。 ａ．ハイブリダイゼーション 多型の分析は、一の対立遺伝子型に特異的なプローブと
のハイブリダイゼーションにより行うことができる。プ
ローブは、必要に応じて、蛍光，ＲＩ等の適当な手段に
より標識され得る。プローブは、例えば多型部分を含む
１０塩基以上、好ましくは１０〜１００塩基の配列にハ
イブリダイズし得るオリゴヌクレオチドである。ＳＮＰ
の分析の場合には、１０〜５０塩基の配列を有するのが
好ましい。また、ＳＮＰの分析の場合、多型部位がプロ
ーブのほぼ中心部に存在するようにプローブを選択する
のが好ましい。本発明において、ハイブリダイゼーショ
ン条件は、対立遺伝子型を区別するのに十分な条件であ
る。例えば、試料が一の対立遺伝子型の場合にはハイブ
リダイズするが、他の対立遺伝子型の場合にはハイブリ
ダイズしないような条件、例えばストリンジェントな条
件である。プローブの一端を基板上に固定化してなるＤ
ＮＡチップを用いてもよい。
を適宜選択して行い得る。分析方法の例を下記に示す。 ａ．ハイブリダイゼーション 多型の分析は、一の対立遺伝子型に特異的なプローブと
のハイブリダイゼーションにより行うことができる。プ
ローブは、必要に応じて、蛍光，ＲＩ等の適当な手段に
より標識され得る。プローブは、例えば多型部分を含む
１０塩基以上、好ましくは１０〜１００塩基の配列にハ
イブリダイズし得るオリゴヌクレオチドである。ＳＮＰ
の分析の場合には、１０〜５０塩基の配列を有するのが
好ましい。また、ＳＮＰの分析の場合、多型部位がプロ
ーブのほぼ中心部に存在するようにプローブを選択する
のが好ましい。本発明において、ハイブリダイゼーショ
ン条件は、対立遺伝子型を区別するのに十分な条件であ
る。例えば、試料が一の対立遺伝子型の場合にはハイブ
リダイズするが、他の対立遺伝子型の場合にはハイブリ
ダイズしないような条件、例えばストリンジェントな条
件である。プローブの一端を基板上に固定化してなるＤ
ＮＡチップを用いてもよい。
【０００９】ｂ．制限酵素断片長多型を利用する方法 多型の分析は、制限断片長多型を利用して行うこともで
きる。この方法は、多型部位がいずれの遺伝子型をとる
かによって、制限酵素により切断されるか否かが異なっ
てくる制限酵素で試料核酸を消化し、消化物の断片の大
きさを調べることにより、該制限酵素で試料核酸が切断
されたか否かを調べ、それによって試料の多型を分析す
る方法である。 ｃ．配列決定 多型の分析を、増幅産物の配列決定により行ってもよ
い。配列決定は、例えばジデオキシ法、Maxam-Gilbert
法等の公知の方法により行い得る。 ｄ．変性勾配ゲル電気泳動 試料ＤＮＡまたはＲＮＡの増幅産物を変性勾配ゲル電気
泳動にかけることにより分析することもできる。 ｅ．その他 ＳＳＣＰ（single-strand conformation polymorphis
m）法、Allele SpecificPCR法等を多型の分析に使用す
ることもできる。
きる。この方法は、多型部位がいずれの遺伝子型をとる
かによって、制限酵素により切断されるか否かが異なっ
てくる制限酵素で試料核酸を消化し、消化物の断片の大
きさを調べることにより、該制限酵素で試料核酸が切断
されたか否かを調べ、それによって試料の多型を分析す
る方法である。 ｃ．配列決定 多型の分析を、増幅産物の配列決定により行ってもよ
い。配列決定は、例えばジデオキシ法、Maxam-Gilbert
法等の公知の方法により行い得る。 ｄ．変性勾配ゲル電気泳動 試料ＤＮＡまたはＲＮＡの増幅産物を変性勾配ゲル電気
泳動にかけることにより分析することもできる。 ｅ．その他 ＳＳＣＰ（single-strand conformation polymorphis
m）法、Allele SpecificPCR法等を多型の分析に使用す
ることもできる。
【００１０】本発明は、上記多型の分析方法により分析
した結果を、所望により他の多型分析、及び／または他
の検査結果と合わせて、心筋梗塞に罹患する可能性を判
断することを含む心筋梗塞の診断方法にも関する。該方
法において、いくつかのヒトプロスタサイクリン合成酵
素遺伝子の多型分析を組み合わせて利用することも有効
である。また、本発明は上記診断方法による診断の結
果、さらに精密な検査を行うこと、心筋梗塞の治療を行
うこと、及び／または食餌内容等の生活習慣の改善を指
導することを含む心筋梗塞の予防または治療方法にも関
する。
した結果を、所望により他の多型分析、及び／または他
の検査結果と合わせて、心筋梗塞に罹患する可能性を判
断することを含む心筋梗塞の診断方法にも関する。該方
法において、いくつかのヒトプロスタサイクリン合成酵
素遺伝子の多型分析を組み合わせて利用することも有効
である。また、本発明は上記診断方法による診断の結
果、さらに精密な検査を行うこと、心筋梗塞の治療を行
うこと、及び／または食餌内容等の生活習慣の改善を指
導することを含む心筋梗塞の予防または治療方法にも関
する。
【００１１】上記本発明の方法の実施態様の一つとし
て、上記方法において、ヒトプロスタサイクリン合成酵
素遺伝子のエキソン８におけるＳＮＰ、具体的には配列
番号１の配列の塩基番号１８２の部位におけるＳＮＰを
検出することを含む方法が挙げられる。なお、配列番号
１の配列において、エキソン８は塩基番号９０〜２７１
の部分である。該方法においては、プライマーとして、
配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の
一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の部位を含
んで連続する少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜５
０塩基、例えば１５〜３０塩基の配列を増幅するための
ＦプライマーまたはＲプライマーとして機能し得るオリ
ゴヌクレオチド、またはＦプライマーとＲプライマーか
らなる一組のプライマーであって、Ｆプライマーまたは
Ｒプライマーの一方が配列番号１の配列（配列中、ｍは
ＡまたはＣを表す）の一部であって、配列番号１の塩基
番号１８２の部位を含んで連続する少なくとも１０塩
基、好ましくは１０〜５０塩基、例えば１５〜３０塩基
の配列にハイブリダイズし、他方が配列番号１の配列の
他の部分の少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜５０
塩基、例えば２０〜２５塩基の配列にハイブリダイズす
る一組のプライマーを使用することができる。この場
合、ＰＣＲ条件は、例えば下記のものであり得る。 プライマー濃度：０．１〜１．０μＭ ＭｇＣｌ２濃度：０．７〜１．５μＭ ｄＮＴＰ濃度：各１００〜２００μＭ 至適酵素量：０．５〜２．５Ｕ／５０μｌ 鋳型ゲノムＤＮＡ量：５０〜５００ｎｇ サイクル数：２５〜３５サイクル denature温度：約９４℃ denature時間：２０〜３０秒 annealing温度：５５〜６５℃ annealing時間：２０〜６０秒間 extension温度：７２〜７５℃ extension時間：２０〜１８０秒間 アガロースゲル濃度：０．４〜２．０％
て、上記方法において、ヒトプロスタサイクリン合成酵
素遺伝子のエキソン８におけるＳＮＰ、具体的には配列
番号１の配列の塩基番号１８２の部位におけるＳＮＰを
検出することを含む方法が挙げられる。なお、配列番号
１の配列において、エキソン８は塩基番号９０〜２７１
の部分である。該方法においては、プライマーとして、
配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の
一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の部位を含
んで連続する少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜５
０塩基、例えば１５〜３０塩基の配列を増幅するための
ＦプライマーまたはＲプライマーとして機能し得るオリ
ゴヌクレオチド、またはＦプライマーとＲプライマーか
らなる一組のプライマーであって、Ｆプライマーまたは
Ｒプライマーの一方が配列番号１の配列（配列中、ｍは
ＡまたはＣを表す）の一部であって、配列番号１の塩基
番号１８２の部位を含んで連続する少なくとも１０塩
基、好ましくは１０〜５０塩基、例えば１５〜３０塩基
の配列にハイブリダイズし、他方が配列番号１の配列の
他の部分の少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜５０
塩基、例えば２０〜２５塩基の配列にハイブリダイズす
る一組のプライマーを使用することができる。この場
合、ＰＣＲ条件は、例えば下記のものであり得る。 プライマー濃度：０．１〜１．０μＭ ＭｇＣｌ２濃度：０．７〜１．５μＭ ｄＮＴＰ濃度：各１００〜２００μＭ 至適酵素量：０．５〜２．５Ｕ／５０μｌ 鋳型ゲノムＤＮＡ量：５０〜５００ｎｇ サイクル数：２５〜３５サイクル denature温度：約９４℃ denature時間：２０〜３０秒 annealing温度：５５〜６５℃ annealing時間：２０〜６０秒間 extension温度：７２〜７５℃ extension時間：２０〜１８０秒間 アガロースゲル濃度：０．４〜２．０％
【００１２】上記プライマーとしてのオリゴヌクレオチ
ドは、配列番号１の配列の一部に相補的な配列を有して
いてもよく、また、上記プライマーとして機能し得る限
り、該配列において１またはそれ以上の置換、欠失、付
加を含んでいてもよい。上記方法においては、プローブ
として配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを表
す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の部
位を含んで連続する少なくとも１０塩基、好ましくは１
０〜５０塩基、例えば１５〜３０塩基の配列にハイブリ
ダイズするオリゴヌクレオチドを使用することができ
る。該オリゴヌクレオチドは、配列番号１の配列の目的
とする部位と相補的な配列を有していてもよく、またプ
ローブとして機能し得る限り、即ち、目的の対立遺伝子
型の配列とハイブリダイズするが、他の対立遺伝子型の
配列とはハイブリダイズしない条件下でハイブリダイズ
する限り、該配列において１またはそれ以上の置換、欠
失、付加を含んでいてもよい。このプローブは、一端を
各々基板に固定してなるＤＮＡチップとして用いること
もできる。この場合、ＤＮＡチップには、一の対立遺伝
子型（即ちｍがＡまたはＣ）に対応するプローブのみが
固定されていても、両方の対立遺伝子型に対応するプロ
ーブが固定されていてもよい。ＤＮＡチップには、本発
明で検出できる多型と異なる多型を分析するためのプロ
ーブも共に固定され得る。
ドは、配列番号１の配列の一部に相補的な配列を有して
いてもよく、また、上記プライマーとして機能し得る限
り、該配列において１またはそれ以上の置換、欠失、付
加を含んでいてもよい。上記方法においては、プローブ
として配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまたはＣを表
す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１８２の部
位を含んで連続する少なくとも１０塩基、好ましくは１
０〜５０塩基、例えば１５〜３０塩基の配列にハイブリ
ダイズするオリゴヌクレオチドを使用することができ
る。該オリゴヌクレオチドは、配列番号１の配列の目的
とする部位と相補的な配列を有していてもよく、またプ
ローブとして機能し得る限り、即ち、目的の対立遺伝子
型の配列とハイブリダイズするが、他の対立遺伝子型の
配列とはハイブリダイズしない条件下でハイブリダイズ
する限り、該配列において１またはそれ以上の置換、欠
失、付加を含んでいてもよい。このプローブは、一端を
各々基板に固定してなるＤＮＡチップとして用いること
もできる。この場合、ＤＮＡチップには、一の対立遺伝
子型（即ちｍがＡまたはＣ）に対応するプローブのみが
固定されていても、両方の対立遺伝子型に対応するプロ
ーブが固定されていてもよい。ＤＮＡチップには、本発
明で検出できる多型と異なる多型を分析するためのプロ
ーブも共に固定され得る。
【００１３】上記本発明の方法の他の実施態様として
は、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の開始コド
ンから１〜約１００塩基上流の範囲に存在するＣＣＧＣ
ＣＡＧＣＣを繰り返し単位とするＶＮＴＲ多型を分析す
ることを含む方法が挙げられる。ヒトプロスタサイクリ
ン合成酵素遺伝子の上流側の配列は、配列番号２に示さ
れる。配列番号２において、ヒトプロスタサイクリン合
成酵素遺伝子の開始コドンは塩基番号５０１〜５０３で
ある。該方法に使用されるプライマーとしては、配列番
号２の配列または配列番号２の配列においてＣＣＧＣＣ
ＡＧＣＣの繰り返し単位が４単位ではなく２，３，５，
６または７単位含まれる配列の一部であって、該配列に
示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の上流
のＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位のＶＮＴＲ多型部
分を含んで連続する配列を増幅するためのフォワードプ
ライマーまたはリバースプライマーとして機能し得る上
記方法に使用されるオリゴヌクレオチドを使用すること
ができる。該プライマーは配列番号２の配列または配列
番号２の配列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単
位が４単位ではなく２，３，５，６または７単位含まれ
る配列の一部に相補的な配列を有していてもよく、ま
た、上記プライマーとして機能し得る限り、該配列にお
いて１またはそれ以上の置換、欠失、付加を含んでいて
もよい。上記方法においては、プローブとして配列番号
２または配列番号２の配列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣ
の繰り返し単位が４単位ではなく２，３，５，６または
７単位含まれる配列の多型部分を含んで連続する５０塩
基以上、好ましくは５０〜２００塩基の配列とハイブリ
ダイズするオリゴヌクレオチドを使用することができ
る。これらのオリゴヌクレオチドは、配列番号２または
配列番号２の配列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返
し単位が４単位ではなく２，３，５，６または７単位含
まれる配列の多型を含む部分の配列に相補的な配列を有
していてもよく、また、プローブとして機能し得る限
り、該配列において１またはそれ以上の置換、欠失、付
加を含んでいてもよい。各繰り返し数の配列に対応する
全てまたは一部のオリゴヌクレオチドからなる一組のプ
ローブセットを使用することもできる。また、該プロー
ブセットを構成する各プローブの一端が基板に固定され
ているＤＮＡチップとして用いることもできる。ＤＮＡ
チップには、上記のエキソン８のＳＮＰを検出するため
のプローブが共に固定されていてもよい。また、本発明
で検出できる多型と異なる多型を分析するためのプロー
ブが共に固定されていてもよい。
は、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の開始コド
ンから１〜約１００塩基上流の範囲に存在するＣＣＧＣ
ＣＡＧＣＣを繰り返し単位とするＶＮＴＲ多型を分析す
ることを含む方法が挙げられる。ヒトプロスタサイクリ
ン合成酵素遺伝子の上流側の配列は、配列番号２に示さ
れる。配列番号２において、ヒトプロスタサイクリン合
成酵素遺伝子の開始コドンは塩基番号５０１〜５０３で
ある。該方法に使用されるプライマーとしては、配列番
号２の配列または配列番号２の配列においてＣＣＧＣＣ
ＡＧＣＣの繰り返し単位が４単位ではなく２，３，５，
６または７単位含まれる配列の一部であって、該配列に
示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の上流
のＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位のＶＮＴＲ多型部
分を含んで連続する配列を増幅するためのフォワードプ
ライマーまたはリバースプライマーとして機能し得る上
記方法に使用されるオリゴヌクレオチドを使用すること
ができる。該プライマーは配列番号２の配列または配列
番号２の配列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単
位が４単位ではなく２，３，５，６または７単位含まれ
る配列の一部に相補的な配列を有していてもよく、ま
た、上記プライマーとして機能し得る限り、該配列にお
いて１またはそれ以上の置換、欠失、付加を含んでいて
もよい。上記方法においては、プローブとして配列番号
２または配列番号２の配列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣ
の繰り返し単位が４単位ではなく２，３，５，６または
７単位含まれる配列の多型部分を含んで連続する５０塩
基以上、好ましくは５０〜２００塩基の配列とハイブリ
ダイズするオリゴヌクレオチドを使用することができ
る。これらのオリゴヌクレオチドは、配列番号２または
配列番号２の配列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返
し単位が４単位ではなく２，３，５，６または７単位含
まれる配列の多型を含む部分の配列に相補的な配列を有
していてもよく、また、プローブとして機能し得る限
り、該配列において１またはそれ以上の置換、欠失、付
加を含んでいてもよい。各繰り返し数の配列に対応する
全てまたは一部のオリゴヌクレオチドからなる一組のプ
ローブセットを使用することもできる。また、該プロー
ブセットを構成する各プローブの一端が基板に固定され
ているＤＮＡチップとして用いることもできる。ＤＮＡ
チップには、上記のエキソン８のＳＮＰを検出するため
のプローブが共に固定されていてもよい。また、本発明
で検出できる多型と異なる多型を分析するためのプロー
ブが共に固定されていてもよい。
【００１４】本発明は、上記で説明したプライマーと、
上記プローブとしてのオリゴヌクレオチド及び／または
上記ＤＮＡチップを含む心筋梗塞診断用キットにも関す
る。キットは、さらに制限断片長多型法に使用される制
限酵素、ポリメラーゼ、ヌクレオシド三リン酸、標識の
ための手段、緩衝液等、本発明の方法を実施するのに必
要な他の要素を含んでいてもよい。なお、本発明に使用
されるプライマー及びプローブは市販のＤＮＡ合成機等
により合成することができる。また、本発明において、
ハイブリダイゼーションは、Sambrook，J．Fritsch，E.
F.，Maniatis T.（1989）Molecular Cloning．A labora
tory manual，第２版，Cold Spring Harbor Laboratory
Press，Cold Spring Harbor，New Yorkの記載を参考に
行うことができる。また、ＰＣＲ法は、下記の文献を参
考に行うことができる：PCR Technology，J.A．Ehrlich
編，Stockholm Press，New York（1989）; Molecular M
ethods for Virus Detection，D.L．Wiedbrauk及びD.
H．Farkas編，Academic Press，New York(1995)．Nucle
ic AcidHybridisation，B.D．Hames及びS.J．Higgins
編，IRL Press，Oxford，Washington DC(1985)）。本明
細書において、塩基番号は添付の配列表に基づく。
上記プローブとしてのオリゴヌクレオチド及び／または
上記ＤＮＡチップを含む心筋梗塞診断用キットにも関す
る。キットは、さらに制限断片長多型法に使用される制
限酵素、ポリメラーゼ、ヌクレオシド三リン酸、標識の
ための手段、緩衝液等、本発明の方法を実施するのに必
要な他の要素を含んでいてもよい。なお、本発明に使用
されるプライマー及びプローブは市販のＤＮＡ合成機等
により合成することができる。また、本発明において、
ハイブリダイゼーションは、Sambrook，J．Fritsch，E.
F.，Maniatis T.（1989）Molecular Cloning．A labora
tory manual，第２版，Cold Spring Harbor Laboratory
Press，Cold Spring Harbor，New Yorkの記載を参考に
行うことができる。また、ＰＣＲ法は、下記の文献を参
考に行うことができる：PCR Technology，J.A．Ehrlich
編，Stockholm Press，New York（1989）; Molecular M
ethods for Virus Detection，D.L．Wiedbrauk及びD.
H．Farkas編，Academic Press，New York(1995)．Nucle
ic AcidHybridisation，B.D．Hames及びS.J．Higgins
編，IRL Press，Oxford，Washington DC(1985)）。本明
細書において、塩基番号は添付の配列表に基づく。
【００１５】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説
明する。しかしながら、これらは本発明を限定するもの
ではない。 実施例１ エキソン８の多型と心筋梗塞との関連について、心筋梗
塞と診断された患者１２２名（ＭＩ群）及び年齢を一致
させた健常人１５５名（non-ＭＩ群）を年齢を一致させ
て選択した。各被験者の末梢血を採取し、標準方法（例
えばSambrook，J．Fritsch，E.F.，Maniatis T.（198
9）Molecular Cloning．A laboratory manual，第２
版，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Sprin
g Harbor，New Yorkに記載）により、ゲノムＤＮＡを抽
出し、下記に示す方法によりプロスタサイクリン遺伝子
のエキソン８の多型部位を増幅した。200ngの上記ゲノ
ムＤＮＡ、下記の配列を有する濃度19pmol/μｌのＦプ
ライマー溶液及びＲプライマー溶液各々0.8μｌ、ヌク
レオチド三リン酸（Takara社製造）各々２５mM、２．５
ｍＭのＭｇＣｌ２４μl、TaqＤＮＡポリメラーゼ（Taka
ra社製）０．２Ｕ／４０μl、水２５．０μl及び１０倍
緩衝液（Takara社製）４μlの混合物計４０μｌの系に
て、ＰＣＲ装置（PerkinElmer GeneAmp9700）を用いて
増幅した。ＰＣＲ条件は、９５℃で３分間、続いて９８
℃２５秒間、６３℃１分間、７２℃１分間のサイクルを
３０サイクル、その後、７２℃で１０分間の後、４℃に
保温とした。
明する。しかしながら、これらは本発明を限定するもの
ではない。 実施例１ エキソン８の多型と心筋梗塞との関連について、心筋梗
塞と診断された患者１２２名（ＭＩ群）及び年齢を一致
させた健常人１５５名（non-ＭＩ群）を年齢を一致させ
て選択した。各被験者の末梢血を採取し、標準方法（例
えばSambrook，J．Fritsch，E.F.，Maniatis T.（198
9）Molecular Cloning．A laboratory manual，第２
版，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Sprin
g Harbor，New Yorkに記載）により、ゲノムＤＮＡを抽
出し、下記に示す方法によりプロスタサイクリン遺伝子
のエキソン８の多型部位を増幅した。200ngの上記ゲノ
ムＤＮＡ、下記の配列を有する濃度19pmol/μｌのＦプ
ライマー溶液及びＲプライマー溶液各々0.8μｌ、ヌク
レオチド三リン酸（Takara社製造）各々２５mM、２．５
ｍＭのＭｇＣｌ２４μl、TaqＤＮＡポリメラーゼ（Taka
ra社製）０．２Ｕ／４０μl、水２５．０μl及び１０倍
緩衝液（Takara社製）４μlの混合物計４０μｌの系に
て、ＰＣＲ装置（PerkinElmer GeneAmp9700）を用いて
増幅した。ＰＣＲ条件は、９５℃で３分間、続いて９８
℃２５秒間、６３℃１分間、７２℃１分間のサイクルを
３０サイクル、その後、７２℃で１０分間の後、４℃に
保温とした。
【００１６】プライマー配列 Ｆプライマー：TGGCATATGAGCAGGTGAAGGG（配列番号：
３） Ｒプライマー：CCACGTCGCAGGTTGAATTGT（配列番号：
４） 得られたＰＣＲ産物をエタノール沈殿により精製し、dr
y upペレットにした後、制限酵素溶液（１０ｘ緩衝液
（第一化学）５μl、水４４μl及び制限酵素BsmAI１
（第一化学）１μlと反応させ、１．５％アガロースゲ
ル電気泳動にかけた。制限酵素BsmAIの認識配列はGAGAC
であり、上記配列番号１の配列の塩基番号１８２の部位
の塩基がＡである場合は切断され、Ｃである場合は切断
されない。上記の方法により、各試料を分析したとこ
ろ、下記の表に示す結果が得られた。表中、Ａは上記配
列番号１の配列の塩基番号１８２の部位がＡである遺伝
子型を意味し、Ｃは、該塩基がＣである遺伝子型を意味
する。なお、被験者は全て日本人である。
３） Ｒプライマー：CCACGTCGCAGGTTGAATTGT（配列番号：
４） 得られたＰＣＲ産物をエタノール沈殿により精製し、dr
y upペレットにした後、制限酵素溶液（１０ｘ緩衝液
（第一化学）５μl、水４４μl及び制限酵素BsmAI１
（第一化学）１μlと反応させ、１．５％アガロースゲ
ル電気泳動にかけた。制限酵素BsmAIの認識配列はGAGAC
であり、上記配列番号１の配列の塩基番号１８２の部位
の塩基がＡである場合は切断され、Ｃである場合は切断
されない。上記の方法により、各試料を分析したとこ
ろ、下記の表に示す結果が得られた。表中、Ａは上記配
列番号１の配列の塩基番号１８２の部位がＡである遺伝
子型を意味し、Ｃは、該塩基がＣである遺伝子型を意味
する。なお、被験者は全て日本人である。
【００１７】
【表１】
【００１８】これを対立遺伝子頻度として下記の表に示
した。
した。
【００１９】
【表２】
【００２０】上記の結果をχ2解析により分析したとこ
ろ、対立遺伝子と表現型とは統計学的に有意な相関を有
していた（ｐ値＝０．００７６）。従って、配列番号１
の塩基番号１８２がＣである場合に心筋梗塞の発症の危
険性が高いと判定することができる。
ろ、対立遺伝子と表現型とは統計学的に有意な相関を有
していた（ｐ値＝０．００７６）。従って、配列番号１
の塩基番号１８２がＣである場合に心筋梗塞の発症の危
険性が高いと判定することができる。
【００２１】実施例２：ヒトプロスタサイクリン合成酵
素遺伝子のエキソン１の上流側に存在するＶＮＴＲ多型
を調べるために、心筋梗塞と診断された患者１１０名
（ＭＩ群）及び年齢を一致させた健常者１３４名（non-
ＭＩ群）を年齢を一致させて選択した。各患者の抹消血
白血球から実施例１と同様の標準的な方法により、下記
に示す方法によりヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝
子のエキソン１の上流側の約２００塩基を増幅した。プ
ライマーとしては、下記の配列を有するプライマーを使
用した。 Ｆプライマー：5'-ACATTTTCCCCCAGGCCTGAGCTGC-3'（配
列番号：５） Ｒプライマー：5'-CGGCTCAGTAGCAGCAGCAGCAACAGT-3'
（配列番号：６）
素遺伝子のエキソン１の上流側に存在するＶＮＴＲ多型
を調べるために、心筋梗塞と診断された患者１１０名
（ＭＩ群）及び年齢を一致させた健常者１３４名（non-
ＭＩ群）を年齢を一致させて選択した。各患者の抹消血
白血球から実施例１と同様の標準的な方法により、下記
に示す方法によりヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝
子のエキソン１の上流側の約２００塩基を増幅した。プ
ライマーとしては、下記の配列を有するプライマーを使
用した。 Ｆプライマー：5'-ACATTTTCCCCCAGGCCTGAGCTGC-3'（配
列番号：５） Ｒプライマー：5'-CGGCTCAGTAGCAGCAGCAGCAACAGT-3'
（配列番号：６）
【００２２】50ngの上記ゲノムＤＮＡ、３２Ｐで標識し
た上記配列を有するＦプライマー0.125pmol、未標識の
Ｒプライマー0.125pmol、ヌクレオチド三リン酸（Takar
a社製）各々２５mM、２．５ｍＭのＭｇＣｌ２４μl、Ta
qＤＮＡポリメラーゼ（Takara社製）０．２Ｕ／４０μ
l、水２５．０μl及び１０倍緩衝液（Takara社製）４μ
lの混合物を調製し、ＰＣＲ装置（PerkinElmer GeneAmp
9700）を用いて増幅した。ＰＣＲ条件は９５℃で３分
間、続いて９８℃２５秒間、６８℃９０秒間、７２℃の
２Ｓｔｅｐサイクルを３０サイクル、その後、７２℃で
１０分間の後、４℃に保温とした。増幅された断片をpC
RＴＭ2.1（Invitrogen)にサブクローニングした後、ジ
デオキシ法によりＤＮＡシーケンシングを行い、これを
標準とした。各群のサンプル及び標準のプラスミドクロ
ーンを増幅した後、同時に６％ポリアクリルアミドシー
ケンシングゲルにて電気泳動する事により遺伝子型を決
定した。なお、７タンデムリピートアレルＰＣＲ産物の
大きさは３１７ｂｐであり、３タンデムリピートアレル
ＰＣＲ産物の大きさは２８１ｂｐであった。non−ＭＩ
群及びＭＩ群のタンデムリピート数を下記に示す。な
お、被験者は全て日本人である。
た上記配列を有するＦプライマー0.125pmol、未標識の
Ｒプライマー0.125pmol、ヌクレオチド三リン酸（Takar
a社製）各々２５mM、２．５ｍＭのＭｇＣｌ２４μl、Ta
qＤＮＡポリメラーゼ（Takara社製）０．２Ｕ／４０μ
l、水２５．０μl及び１０倍緩衝液（Takara社製）４μ
lの混合物を調製し、ＰＣＲ装置（PerkinElmer GeneAmp
9700）を用いて増幅した。ＰＣＲ条件は９５℃で３分
間、続いて９８℃２５秒間、６８℃９０秒間、７２℃の
２Ｓｔｅｐサイクルを３０サイクル、その後、７２℃で
１０分間の後、４℃に保温とした。増幅された断片をpC
RＴＭ2.1（Invitrogen)にサブクローニングした後、ジ
デオキシ法によりＤＮＡシーケンシングを行い、これを
標準とした。各群のサンプル及び標準のプラスミドクロ
ーンを増幅した後、同時に６％ポリアクリルアミドシー
ケンシングゲルにて電気泳動する事により遺伝子型を決
定した。なお、７タンデムリピートアレルＰＣＲ産物の
大きさは３１７ｂｐであり、３タンデムリピートアレル
ＰＣＲ産物の大きさは２８１ｂｐであった。non−ＭＩ
群及びＭＩ群のタンデムリピート数を下記に示す。な
お、被験者は全て日本人である。
【００２３】
【表３】
【００２４】これを対立遺伝子頻度として下記の表に示
した。
した。
【００２５】
【表４】
【００２６】上記の結果をχ2解析により分析したとこ
ろ、対立遺伝子と表現型とは統計学的に有意な相関を有
していた（ｐ値＝０．０３７５）。従って、繰り返し数
が少ない場合に心筋梗塞発症の危険性が高いと考えら
れ、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の上記ＶＮ
ＴＲ多型は心筋梗塞の遺伝的要因の判定に利用できるこ
とが明らかである。
ろ、対立遺伝子と表現型とは統計学的に有意な相関を有
していた（ｐ値＝０．０３７５）。従って、繰り返し数
が少ない場合に心筋梗塞発症の危険性が高いと考えら
れ、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子の上記ＶＮ
ＴＲ多型は心筋梗塞の遺伝的要因の判定に利用できるこ
とが明らかである。
【００２７】
【発明の効果】本発明の方法により、心筋梗塞の遺伝的
要素を有するか否かが判定でき、これにより心筋梗塞の
危険性を予測することができる。さらに、その結果に基
づき、食餌内容等の生活習慣の改善により心筋梗塞の環
境的要因を最低限に押さえる指導を行い、心筋梗塞の予
防または治療を行うことができる。
要素を有するか否かが判定でき、これにより心筋梗塞の
危険性を予測することができる。さらに、その結果に基
づき、食餌内容等の生活習慣の改善により心筋梗塞の環
境的要因を最低限に押さえる指導を行い、心筋梗塞の予
防または治療を行うことができる。
【配列表】 SEQUENCE LISTING 〈110〉 Nihon university 〈120〉 Method for determining genetic factor of myocardial infarction a nd nucleotides used therefor 〈130〉 PANU003 〈160〉 6 〈210〉 1 〈211〉 363 〈212〉 DNA 〈221〉 exon 〈400〉 1 atcttcctct gtaaaataag agctggggtt ggcatatgag caggtgaagg gatagcccgc 60 tgactcttcc ttgcacctgc cccatgcaga tagcgtgctg agtgagagcc tcaggcttac 120 agctgccccc ttcatcaccc gcgaggttgt ggtggacctg gccatgccca tggcagacgg 180 gmgagaattc aacctgcgac gtggtgaccg cctcctcctc ttccccttcc tgagccccca 240 gagagaccca gaaatctaca cagacccaga ggtaaatggc aggggcgcct ggtcatatgg 300 ggtctgtggg agaacaatca gtgactttgg gatgagccag atctgagtgg cagcctggct 360 ctg 363 〈210〉 2 〈211〉 636 〈212〉 DNA 〈400〉 2 gctgtttccc catcgtcccg ccgtcttccc acattccctc ctcttccctt ccccaaaagt 60 cctctcccat cttccccatc cctcttccct ccccgcatat aatctcttcc ttcctgtaaa 120 tcctctccct ctcccctccc ttccatcacc ccccagtcca ccacatcccc ctcagtcccc 180 catctatctc ctttcccctt gatcactccc cagcccacca catcccttcc gccccctccc 240 cctccccctc cttctcccct cccctccctc ccacattttc ccccaggcct gagctgcggg 300 gagcagggtt tctcccagag cgcccgggtc cgacccctgc ggacctcgga gggccccatc 360 ccccaccccc cccaccccgc cccaaagcgg gctggggtgg gcggagtggg aggggcgcgg 420 cgggtggggg cggggaactt tacctgggag tgggccaggc cgccagcccc gccagccccg 480 ccagccccgc cagccccgcg atggcttggg ccgcgctcct cggcctcctg gccgcactgt 540 tgctgctgct gctactgagc cgccgccgca cgcggtgagt gtcctgctcc gctcggcccc 600 gccagacaaa gggggcggct cccgcccggg ctgcag 636 〈210〉 3 〈211〉 22 〈212〉 DNA 〈213〉 Artificial Sequence 〈400〉 3 tggcatatga gcaggtgaag gg 22 〈210〉 4 〈211〉 21 〈212〉 DNA 〈213〉 Artificial Sequence 〈400〉 4 ccacgtcgca ggttgaattg t 21 〈210〉 5 〈211〉 25 〈212〉 DNA 〈213〉 Artificial Sequence 〈400〉 5 acattttccc ccaggcctga gctgc 25 〈210〉 6 〈211〉 27 〈212〉 DNA 〈213〉 Artificial Sequence 〈400〉 6 cggctcagta gcagcagcag caacagt 27
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 Ｆ Ｆターム(参考） 2G045 AA25 CA25 CA26 DA12 DA13 FB01 FB02 FB05 4B024 AA11 CA01 CA03 CA09 HA12 HA19 4B029 AA07 AA23 BB20 FA15 4B063 QA01 QA12 QA19 QQ02 QQ42 QR08 QR56 QR62 QR84 QS14 QS25 QS34
Claims (11)
- 【請求項１】 ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子
における多型を分析することからなる心筋梗塞の遺伝的
要因を判定するための方法。 - 【請求項２】 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番
号１に示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子
のエキソン８（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の塩基
番号１８２の部位を含む配列を増幅し、得られた増幅産
物を分析することにより該塩基がＡかＣかを決定するこ
とを含む請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番
号２の開始コドンの上流側の配列を増幅し、増幅産物を
分析してＣＣＧＣＣＡＧＣＣを繰り返し単位とするvari
able number of tandem repeat多型の繰り返し数を決定
することを含む請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 試料から核酸を抽出し、配列表の配列番
号１に示されるヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子
のエキソン８（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の塩基
番号１８２の部位を含む配列を増幅し、得られた増幅産
物を分析することにより該部位がＡかＣかを決定するこ
と、及び配列表の配列番号２の開始コドンの上流側の配
列を増幅し、増幅産物を分析してＣＣＧＣＣＡＧＣＣを
繰り返し単位とするvariable number of tandem repeat
多型の繰り返し数を決定することを含む請求項１記載の
方法。 - 【請求項５】 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまた
はＣを表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１
８２の部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列
にハイブリダイズし得る請求項１、２または４記載の方
法においてプローブとして使用されるオリゴヌクレオチ
ド。 - 【請求項６】 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまた
はＣを表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１
８２の部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列
を増幅するためのフォワードプライマーまたはリバース
プライマーとして機能し得る請求項１、２または４記載
の方法に使用されるオリゴヌクレオチド。 - 【請求項７】 配列番号１の配列（配列中、ｍはＡまた
はＣを表す）の一部であって、配列番号１の塩基番号１
８２の部位を含んで連続する少なくとも１０塩基の配列
を、１塩基または数塩基の置換、欠失、付加を導入する
ことにより、１８２の部位の塩基がＡまたはＣのいずれ
か一方である場合にのみ特定の制限酵素による認識配列
が生じるように増幅するためのフォワードプライマーま
たはリバースプライマーとして機能し得る請求項１、２
または４記載の方法に使用されるオリゴヌクレオチド。 - 【請求項８】 請求項１〜４の方法に使用されるフォワ
ードプライマーとリバースプライマーとして機能する一
組のオリゴヌクレオチドであって、フォワードプライマ
ーまたはリバースプライマーの一方が配列番号１の配列
（配列中、ｍはＡまたはＣを表す）の一部であって、配
列番号１の塩基番号１８２の部位を含んで連続する配列
にハイブリダイズすることができ、他方が配列番号１の
配列の他の部分にハイブリダイズすることができる一組
のオリゴヌクレオチド。 - 【請求項９】 配列番号２の配列または配列番号２の配
列においてＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位が４単位
ではなく２，３，５，６または７単位含まれる配列の一
部であって、ＣＣＧＣＣＡＧＣＣの繰り返し単位のvari
able numberof tandem repeat多型部分を含んで連続す
る配列を増幅するためのフォワードプライマーまたはリ
バースプライマーとして機能し得る請求項１、３または
４記載の方法に使用されるオリゴヌクレオチド。 - 【請求項１０】 少なくとも、請求項５に記載のオリゴ
ヌクレオチドの一またはそれ以上が基板に固定化されて
いる請求項１〜４の方法に使用されるＤＮＡチップ。 - 【請求項１１】 少なくとも、請求項５〜９に記載のオ
リゴヌクレオチドの一またはそれ以上、及び／または請
求項１０に記載のＤＮＡチップを含む請求項１〜４の方
法に使用されるキット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000336676A JP4111481B2 (ja) | 2000-11-02 | 2000-11-02 | 心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000336676A JP4111481B2 (ja) | 2000-11-02 | 2000-11-02 | 心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002136291A true JP2002136291A (ja) | 2002-05-14 |
| JP4111481B2 JP4111481B2 (ja) | 2008-07-02 |
Family
ID=18812186
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000336676A Expired - Lifetime JP4111481B2 (ja) | 2000-11-02 | 2000-11-02 | 心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4111481B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009521905A (ja) * | 2004-03-05 | 2009-06-11 | アプレラ コーポレイション | 冠動脈心疾患に関連する遺伝的多型、その検出方法および使用 |
| US7754422B2 (en) | 2002-08-08 | 2010-07-13 | Riken | Method of judging inflammatory disease |
| US8026063B2 (en) | 2005-01-11 | 2011-09-27 | Riken | Method of examining inflammatory disease and method of screening remedy for imflammatory disease |
| US8048625B2 (en) | 2004-12-24 | 2011-11-01 | Riken | Method of examining inflammatory disease and method of screening remedy for inflammatory disease |
-
2000
- 2000-11-02 JP JP2000336676A patent/JP4111481B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7754422B2 (en) | 2002-08-08 | 2010-07-13 | Riken | Method of judging inflammatory disease |
| JP2009521905A (ja) * | 2004-03-05 | 2009-06-11 | アプレラ コーポレイション | 冠動脈心疾患に関連する遺伝的多型、その検出方法および使用 |
| US8048625B2 (en) | 2004-12-24 | 2011-11-01 | Riken | Method of examining inflammatory disease and method of screening remedy for inflammatory disease |
| US8026063B2 (en) | 2005-01-11 | 2011-09-27 | Riken | Method of examining inflammatory disease and method of screening remedy for imflammatory disease |
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|---|---|
| JP4111481B2 (ja) | 2008-07-02 |
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