JP2001520028A - 反芻動物の乳脂肪および／または組織脂肪における共役リノール酸の濃度を増加させる方法。 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、反芻動物の乳脂肪および／または組織脂肪において、オクタデカジエン酸またはシス−９、トランス−１１異性体の濃度を増加させる方法に関する。この方法において、反芻動物は、オクタデセン酸のトランス−１１異性体を、他の脂肪酸と別々にまたは一緒に、そのままでまたは他の飼料と混合して給餌される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明は、反芻動物の乳脂肪および／または組織脂肪において、共役リノール
酸、即ち、化学的に正確に表示するとオクタデカジエン酸のシス−９、トランス
−１１異性体（CLA、シス−９、トランス−１１−C１８：２）の濃度を増加させ
るための方法に関し、バクセン酸、即ち化学的に正確に表示するとオクタデセン
酸のトランス−１１異性体（トランス−１１−C１８：１）を反芻動物にそのま までまたは他の飼料と混合して、他の脂肪酸と別々にまたは一緒に給餌する方法
である。

【０００２】 （背景技術） 近年、共役リノール酸、即ちＣＬＡは、癌の幾つかの形態に対して、非常に有
効な保護を提供するということが観察されている[Ha Y.L. et al., Cancer Res.
1990, 50:1097; Ip C.et al,Cancer 1994,74:1050]。ＣＬＡは、マウスの皮膚 癌および胃癌に対しておよびラットの乳腺の癌に対して有効であるということが
観察されている[Scimeca J.Ａ.et al., Diet and Breast Cancer. American Ins
t. Of Cancer Res.1994, Plenum Press, London]。ＣＬＡは、また、ヒト癌細胞
の増殖が細胞培養において上手く抑制されている[Shultzt T.D. et al., Canc.
lett.1992,63:125]。ＣＬＡは、また、他の代謝効果を有することも観察されて おり、その中のあるものは健康に対する効力を明らかに示唆している[Banni, S.
and J. -C. Martin. 1998Trans fatty acids in human nutrition .Ed. Sebedi
o and Christie, The Oily Press, Dundee. Trans fatty acids in human nutri
tion Ed. Sebedio and Christie, The Oily Press, Dundee]。

【０００３】 （発明の開示） （発明が解決しようとする技術的課題） 天然には、ＣＬＡは、反芻動物の組織脂肪および乳脂肪中の成分として主に存
在し、シス−９、トランス−１１が、主要な異性体（９０％）である。また、少
量の他の異性体が、乳汁中に存在するが、本明細書では、ＣＬＡは、具体的には
はシス−9、トランス−11異性体を示す。

【０００４】 即ち、本発明の目的は、反芻動物の乳脂肪および／または組織脂肪中のＣＬＡ
濃度を増加させることを可能にする動物管理のための適当な方法を提供すること
である。これは、付随した特許請求の範囲に開示されている方法で本発明に従っ
て達成される。

【０００５】 本発明の方法は、全ての反芻動物、特に乳牛などの泌乳反芻動物に対して適し
ている。これによって、脂肪酸組成を修飾した乳および乳製品を消費者向けに製
造することが可能である。この乳および乳製品の脂肪酸組成における変化は、消
費者の健康に対して有利である。通常、ＣＬＡ、即ちシス−9、トランス−11−Ｃ
18：２脂肪酸は、牛乳中の脂肪酸全体の０．３〜０．７重量％を構成する。この
濃度であっても、乳脂肪の摂取が十分高ければ、乳製品を摂取するヒトを癌から
保護することが可能である[Knekt P.R. et al., Brit. J.of Cancer 1996,73:68
7]。食品脂肪の消費における嗜好は、近年変化してきている。脂肪、特に乳脂肪
の消費は低下し、また、この結果、食品におけるＣＬＡ摂取も低下した。乳脂肪
の消費低下に対応する量まで乳汁中のＣＬＡ濃度を増加させることによって、脂
肪の消費を増加させる必要なしに、食品中のＣＬＡの摂取を以前のレベルにまで
戻すことが可能となる。即ち、乳汁中のＣＬＡ濃度の増加は、公衆衛生に対して
重大な意義を持ち得る。動物実験において、ＣＬＡの保護効果が明らかに用量反
応性を持つということが観察されているので[Ip C.et al., Cancer 1994,74:105
0]、以前よりも高いレベルに乳汁中のＣＬＡの濃度を増加することは、特に正の
効果を持ち得るであろう。また、食品中のＣＬＡは、血液中の悪玉コレステロー
ル（ＬＤＬ）の量を低下させ得る[Lee et al. 1994Atherosclerosis. 108:19]。
乳脂肪中の天然ＣＬＡ異性体が人々に摂取されているのは、何千年来であってな
んらの不都合も観察されていない。

【０００６】 （発明を実施するための最良の形態） 第一胃中におけるリノール酸(シス−9、シス−12−Ｃ18：2）の異性化過程での
共役リノール酸（シス−9、トランス−11Ｃ18：2）の形成を以下に記載する：

【０００７】 乳汁中のＣＬＡ濃度の増加は、リノール酸を含有する植物油を乳牛に与えるこ
とによって成功している[Griinari J.M. et al., J. Dairy Sci. 1998, 81:1251
]。Kelly et al.[Kelly M.L.et al., Nutr.1998, 128:881]らは、３種類の植物 油の飼料への添加、およびそれらの乳ＣＬＡ濃度に対する効果を比較し、最も高
い濃度のリノール酸（ヒマワリ油）の添加が、最良の乳ＣＬＡ応答を与えるとい
うことを知った。彼らは、乳汁中のＣＬＡ濃度を、リノール酸を含む動物の油脂
肪を飼料として与えることによって増加せしめ得ることを示した。

【０００８】 乳脂肪中に入っているＣＬＡは、動物の飼料中に存在するリノール酸から、即
ち、オクタデカジエン酸のシス−9、トランス−12異性体から、唯一誘導されると
考えられている。この異性体を、反芻胃の微生物が、シス−9、トランス−11Ｃ18
：2に異性化し、バクセン酸（トランス−11‐Ｃ18：1）に、さらにステアリン酸
（Ｃ18：0）に還元する。ＣＬＡは、リノレン酸、即ち、オクタデカトリエン酸 のシス−9、シス−12、シス−15‐Ｃ18：3の異性体の水素添加において、顕著な 量では形成しないが、バクセン酸も、リノレン酸の重要な生体水素添加生成物で
ある[Harfoot and Hazlewood 19988, The rumen microbial ecosystem. Ed.Hobs
on, P.N.Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, The Netherlands]。 有力な説によれば、リノール酸の生体水素添加おける中間生成物として形成され
る幾つかのＣＬＡは、バクセン酸に還元する前に反芻動物胃液の連続的な流出に
伴って第一胃から出る。第一胃から出たＣＬＡは、主に小腸で吸収され、血液循
環によって乳腺に移動し、乳脂肪の脂肪酸組成物の一部として存在する。

【０００９】 本発明者は、低いレベルのリノール酸を含有する魚油（表１において組成を示
す）が、乳汁中のＣＬＡ濃度を増加させるということを観察した（表２）。

【００１０】

【表１】

【００１１】

【表２】

【００１２】 また、牧草に存在する脂肪中の主要な脂肪酸はリノレン酸であり、リノール酸
の比率は非常に少ないのが普通であるので、一般的に認められている上記ＣＬＡ
形成機構（Harfoot and Hazlewood 1988）は、乳牛が唯一の飼料として牧草を得
る場合の乳汁中のＣＬＡ濃度の増加を説明していない[Griinri et al., 1998 J.
Dairy Sci. 81()Suupl. 1:300(Abst.)]。

【００１３】 上記の観察結果にもとづいて、本発明者は、乳汁中のＣＬＡも、第一胃におこ
るリノール酸異性化以外の別の起源物から誘導されるという結論に達した。さら
に、牧草以外で飼育する乳牛の第一胃において、特定のＣＬＡ異性体（シス−9、
トランス−11−Ｃ18：2およびトランス−9、トランス−11−Ｃ18：2）が、１：１
の平均比率で存在するが、乳汁中ではシス−9、トランス−11−Ｃ18：2異性体の 濃度は、トランス−９、トランス−11−Ｃ18：2異性体の濃度の１０倍であるの で[Griinari and Numela, unpblished]、本発明者は、乳脂肪のＣＬＡが、ある 飼育条件においては第一胃以外の場所で多量に形成し得ることに気づいた。上記
のＣＬＡ異性体は、消化管から殆ど同じ比率で乳に運ばれる。そのため、この状
態において関連することは、脂肪酸異性体の１つも差別されていない[Chouinard
et al. 1998.J.Dairy Sci.81 (Suppl.1):353(Abs)]。

【００１４】 即ち、本発明は、リノール酸の低いレベルを含有する飼料への油添加が、乳汁
中のＣＬＡ濃度の顕著な増加を起こすという驚くべき観察に基づく。しかし、Ｃ
ＬＡが唯一反芻動物の乳脂肪中および組織脂肪において十分量で存在するので、
ＣＬＡの開始物質は第一胃において形成されるはずである。

【００１５】 また、牧草のみを与えて飼育する乳牛では、数種のトランス−脂肪酸の濃度が
、第一胃からの消化流出物と乳汁とで近似していることが本発明に関連して観察
されている（図１）。第一胃消化物における該濃度と乳脂肪中との該濃度の密接
な相関は、これらの脂肪酸異性体が第一胃起源であるとの仮説を支持する。しか
し、ＣＬＡに関しては、この相関は当てはまらない（図２a）。第一胃から流出 消化された飼料中のバクセン酸(トランス‐11)の濃度は、乳汁中のＣＬＡ濃度に
おける変化をかなりよく説明する（図２ｂ）。乳脂肪中のバクセン酸とＣＬＡの
関係に関する試験は、その相関関係がさらに近似しているということを示す（図
２ｃ）。この非常に近似する相関は、おそらく代謝基質(トランス−11Ｃ18：１ ）と生成物(シス−9,トランス−11Ｃ18：２）との関係として説明される。

【００１６】 相関関係の上記試験および関連する結論に基づいて、驚くべき観察結果が本発
明に関連して得られた。乳ＣＬＡが、ある飼料条件ではバクセン酸のＣＬＡへの
脱飽和から主に形成され得ることである。以下のように、この転換は動物組織中
のΔ−９脱飽和酵素の作用下で起こる：

【００１７】 即ち、乳中のＣＬＡが反芻動物の組織で主に形成され得るのは、Δ−９脱飽和
酵素がシス−9の二重結合をトランス‐11−Ｃ18：1脂肪酸に加えるからである。
この脂肪酸は第一胃中で形成され、消化された飼料と一緒に第一胃から流出する
ものである。Δ−９脱飽和酵素は、数多くの異種組織における活性酵素であるが
、その活性は、乳牛乳腺において特に観察される。この酵素は乳腺ではステアリ
ン酸（Ｃ18：0）をオレイン酸（シス−９−Ｃ18：1）に脱飽和する[Kinsella J.
E. Lipids 1972, 7:349]。一方で、ラットの肝臓細胞中のミクロソームのΔ−９
脱飽和酵素が、インビトロでトランス−11Ｃ18:1脂肪酸をシス−9、トランス−11
ＣＬＡに脱飽和することが観察されている[Mahfouz M.M.et al., Biochim. Biop
hhys. Acta 1980, 618:1]。

【００１８】 バクセン酸、即ちトランス−11−Ｃ18：1脂肪酸の形成を第一胃において増加 させる飼料は、乳牛組織中で乳腺または他の場所でトランス−11−Ｃ18：1脂肪 酸の脱飽和により、乳汁中のＣＬＡ濃度を増加することができる。また、乳汁中
のＣＬＡ濃度を増加させる魚油の上記の効果は、このように、トランス−11−Ｃ
18：1脂肪酸の第一胃での合成に対する魚油の効果によって説明し得るであろう 。これは、Pennington and Davis[J. Dairy Sci.1975. 58:49]らによって、魚油
を乳牛に与えるときに、バクセン酸の第一胃での合成が増加するという観察結果
によって支持される。本発明によれば、ある飼料条件における乳汁中のＣＬＡ濃
度の増加についての主な説明は、第一胃におけるトランス−11−Ｃ18：1脂肪酸 の形成および乳牛生体内においてＣＬＡへの該脂肪酸の脱飽和によってなされる
。即ち、現在までに考えられてきたような第一胃におけるＣＬＡの形成によるも
のではない[Harfoot and Hazlewood 1988]。

【００１９】 牧草飼育の乳牛におけるトランス−9、トランス−11−ＣＬＡ異性体の濃度に比
例して乳汁中のシス−9、トランス−11−ＣＬＡ異性体が前記のように豊富に存在
することは、トランス−9,トランス−11異性体が乳牛組織中で形成されないとい
う事実による。一方、シス−9、トランス−11異性体が脱飽和の生成物として主に
形成され得る。各々、牧草飼料によっては、乳のシス−9、トランス−11−ＣＬＡ
の少い比率のみが第一胃で形成される。

【００２０】 本発明は、トランス−11−Ｃ18：１の脂肪酸、即ちバクセン酸を含有する脂肪
補足物、即ち生物体の天然Δ−９脱飽和酵素の基質を反芻動物に与えることによ
って、乳脂肪中および組織脂肪中のＣＬＡの濃度を増加させることに基礎をおい
ている。バクセン酸は、生体内で、例えば乳腺中でシス−9、トランス−11−ＣＬ
Ａに転換され、乳汁中に分泌される。同様に、組織中で形成されたＣＬＡは、組
織脂質に組みこまれ得る。

【００２１】 ＵＳ特許5, 416, 115は、トランス脂肪酸の使用によって、乳牛の乳脂肪を低 下させ、乳生成物を増加させうる方法を開示する。この方法では、例えば、トラ
ンス18：1異性体混合物が乳牛に注入される。しかし、この開示においては、動 物飼料中のトランス−18：１脂肪酸補足物が、乳脂肪中および／または組織脂肪
中のＣＬＡ濃度を上げるであろうことについては述べられていない。

【００２２】 トランス−11‐Ｃ18：1の脂肪酸を含有する食品は、従来の食餌から逸脱した やり方で試験物の食餌が非常に少量のポリ不飽和脂肪酸を含有するときに、血液
中のシス−9、トランス−11‐ＣＬＡの濃度を増加させることが分かっている[Sal
minen et al. J. Nutr. Biochem. 1998. 9:93]。Salminen et al.(1998)らの報 告の血液ＣＬＡ濃度増加によると、肝臓細胞中で以前に観察されたトランス脂肪
酸脱飽和（Mahfouz M.M. et al.,Biochim Biophys. Acta 1980, 618:1）は、ヒ トにおいても活性化過程であるが、この過程はポリ不飽和脂肪酸の制限量を含有
する食品に制限される。Santoraら(1998)[論文は、AOCSの年次大会で発表された
]は、バクセン酸をマウスに与えたときにマウス組織脂肪のＣＬＡ濃度が３倍に なることを示した。ＣＬＡの形成は、マウスの飼料が５％のコーン油を含有する
ときに低下した。コーン油は、大量のポリ不飽和脂肪酸を含有する。即ち、脱飽
和の活性は、飼料の不飽和の程度に依存する。

【００２３】 本発明は、バクセン酸（トランス-11−Ｃ18：１）を反芻動物の飼料に添加す ることによってヒトの食品について、天然の最も一般的なＣＬＡ異性体を製造す
るために、反芻動物が使用され得るということを示す。反芻動物は乳牛などの泌
乳反芻動物が好ましいが、本発明は、肉の製造を意図した反芻動物に適用するこ
とも可能である。

【００２４】 反芻動物の飼育において、第一胃の生体水素添加の影響からトランス−11−Ｃ
18：１の脂肪を、既知の保護方法によって、保護することは有利である。例えば
、ＵＳ特許4,642,317は、脂肪を保護するために一般に使用される方法を開示す る。

【００２５】 乳脂肪中のＣＬＡ濃度を増加するために大量の飽和脂肪酸を含有する混合物中
のバクセン酸、即ち、トランス−11−Ｃ18：１脂肪酸を飼料として与えることは
利点がある。なぜなら、乳腺への飽和脂肪酸の通過が乳腺Δ−９脱飽和酵素の活
性を促進させるので、それによってもトランス−11のシス-９，トランス−11Ｃ ＬＡへの転換を促進し得る。

【００２６】 バクセン酸の動物への投与の最も有利なやり方は、それを飼料と共に混合する
か、別々に飼料補足物としてバクセン酸を与えることである。添加されるべきバ
クセン酸の望ましい用量は、至適ＣＬＡレベルが乳汁で得られ、添加コストが十
分に経済的である観点からバクセン酸の量を測定することによって決定され得る
。

【００２７】 本発明は、実施例とともに以下に示される。

【００２８】 実施例１ この実験の目的は、泌乳乳牛第一胃に続く消化管の中に投与したトランス−11−
Ｃ18：１脂肪酸が組織中でシス−９，トランス-11ーＣＬＡに転換されるのを示す
ことであった。実験は、３日間(予備期間)、雛胃（第四胃）への連続注入によっ
て脂肪を含まない乳汁（担体５ｋｇ／ｄ）を乳牛に投与して行った。その次の３
日間（注入期間）、脂肪を含まない乳に乳化されたトランス−11脂肪酸とトラン
ス-12-Ｃ１8：1脂肪酸との混合物（２５ｇ/日）を乳牛に注入した。トランス-11
-Ｃ１8：1とＣＬＡの濃度を予備期間および注入期間のそれぞれ３日目で乳牛の 乳から測定した。

【００２９】

【表３】

【００３０】 注入期間中に増加した乳汁中のトランス-11-Ｃ１8：1の濃度からすると、注入
した脂肪酸は、吸収され、乳腺に運ばれ、乳脂肪の一部となっている。ＣＬＡの
濃度も増加し、動物が摂取したトランス-11-Ｃ１8：1脂肪酸のかなりの部分が乳
牛組織中でＣＬＡに転換された。この実験は、普通に体内でＣＬＡを生成する反
芻動物が、吸収できる形態（例えば反芻動物の飼料に添加）でトランス-11-Ｃ１
8：1脂肪酸を受容した場合、ＣＬＡの生成を増加させることを示す。トランス-1
1-Ｃ１8：1脂肪酸は、日々の飼料中に投与されるべきである飼料が中断すると、
乳汁中のＣＬＡ濃度がすぐに低下するからである。この実験において、乳汁中の
ＣＬＡ濃度は、トランス-脂肪酸の注入が中止された後２日間で元のレベルに低 下した（図３）。

【００３１】 実施例２ 乳牛（ｎ＝２）に、７．９％のトランス-11-Ｃ１8：1脂肪酸を含有する固形野菜
・脂肪混合物を飼料として与えた（０、２００、または４００ｇ/日）。固形野 菜・脂肪の飼料を増加させたときに、乳汁中のＣＬＡ濃度が増加した（表４）。
この実験は、トランス-11-Ｃ１8：1脂肪酸の食物の取り込みと牛乳のＣＬＡ濃度
の用量反応効果を示した。

【００３２】

【表４】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、トランス−11の濃度について、第一胃中と乳汁中との関
係を示す。

【図２】 図２aは、ＣＬＡについて第一胃中と乳汁中との関係を示す。図 ２ｂは、第一胃中のトランス−11の濃度と乳汁中のＣＬＡ濃度との関係を示す。
図２ｃは、乳汁中のＣＬＡと乳汁中のトランス−11との関係を示す。

【図３】 図３は、乳脂肪酸濃度とトランス−11の注入との関係を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 反芻動物の乳脂肪および／または組織脂肪中のオクタデカジ
   エン酸のシス−9、トランス−11異性体の濃度を増加する方法であって、オクタデ
   セン酸のトランス−11異性体を反芻動物に、そのままでまたは他の飼料と混合し
   て、他の脂肪酸と別々にまたは一緒に給餌することを特徴とする方法。
2. 【請求項２】 反芻動物が泌乳反芻動物であることを特徴とする、請求項１
   に記載の方法。
3. 【請求項３】 オクタデセン酸のトランス−11異性体が第一胃中の還元から
   保護されることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
4. 【請求項４】 他の脂肪酸が飽和脂肪酸であることを特徴とする、請求項１
   〜３のいずれかに記載の方法。
5. 【請求項５】 反芻動物の乳脂肪および／または組織脂肪中のオクタデカジ
   エン酸のシス−9、トランス−11異性体の濃度を増加するためのオクタデセン酸の
   トランス−11の異性体の使用であって、このものを反芻動物に、そのままでまた
   は他の飼料と混合して、他の脂肪酸と別々にまたは一緒に給餌する使用。
6. 【請求項６】 反芻動物が泌乳動物であることを特徴とする、請求項５に記
   載の使用。
7. 【請求項７】 オクタデセン酸のトランス−11異性体が第一胃において還元
   から保護されることを特徴とする、請求項６に記載の使用。
8. 【請求項８】 他の脂肪酸が飽和脂肪酸であることを特徴とする、請求項1 〜７のいずれかに記載の使用。
9. 【請求項９】 少なくともオクタデセン酸のトランス-11異性体を含有する ことを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の動物飼料組成物。
10. 【請求項１０】 さらに他の脂肪酸を含有することを特徴とする請求項９に
    記載の動物飼料組成物。