JP2001354572A

JP2001354572A - 肝疾患処置剤

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Publication number: JP2001354572A
Application number: JP2000172095A
Authority: JP
Inventors: Kimihide Nakamura; 公英中村
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 2000-06-08
Filing date: 2000-06-08
Publication date: 2001-12-25
Anticipated expiration: 2020-06-08
Also published as: JP4627580B2

Abstract

(57)【要約】【課題】ヒアルロン酸を有効成分とし、より効果が高
い肝疾患処置剤を提供する。【解決手段】重量平均分子量７０万〜１１０万のヒア
ルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分と
する、肝疾患処置剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、重量平均分子量７
０万〜１１０万のヒアルロン酸またはその薬学的に許容
される塩を有効成分とする、肝疾患処置剤に関する。ま
た本発明は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容され
る塩を有効成分とする、経口投与用の肝疾患処置剤に関
する。

【０００２】

【従来の技術】米国特許第５,６７４,８５７号明細書に
は、ヒアルロン酸を肝臓の虚血再灌流障害に適用する旨
が記載されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ヒアルロン
酸を有効成分とし、より効果が高い肝疾患処置剤を提供
することを目的とする。特に肝炎、なかでも劇症肝炎や
自己免疫性肝炎の処置に有効な肝疾患処置剤を提供する
ことを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は上記課題を解
決するために鋭意検討を行った結果、特定の重量平均分
子量のヒアルロン酸が、肝疾患、特に劇症肝炎や自己免
疫性肝炎のような肝炎に対して極めて顕著な効果を有
し、これを使用することにより上記課題を解決し得る処
置剤を提供し得ることを見出した。また本発明者は、ヒ
アルロン酸を経口投与することによっても上記効果を得
られることを見出した。本発明はこれらの知見に基づき
完成されたものである。

【０００５】すなわち本発明は、重量平均分子量７０万
〜１１０万のヒアルロン酸またはその薬学的に許容され
る塩を有効成分とする、肝疾患処置剤（以下、本発明処
置剤という）を提供する。

【０００６】本発明処置剤に用いられるヒアルロン酸ま
たはその薬学的に許容される塩の重量平均分子量は好ま
しくは７５万〜１０５万、より好ましくは８０万〜１０
０万、さらに好ましくは８５万〜９５万であり、約９０
万であることが特に好ましい。なお、上述の先行技術に
おいてはこのような特定の分子量範囲のヒアルロン酸ま
たはその薬学的に許容される塩が肝疾患に対して顕著な
効果を有することは何等開示されていない。

【０００７】本発明処置剤は、肝炎、なかでも劇症肝炎
または自己免疫性肝炎の処置に好ましく用いられる。ま
た、本発明処置剤中のヒアルロン酸またはその薬学的に
許容される塩の濃度は０．０５〜１％(w/v)であること
が好ましい。

【０００８】本発明処置剤は、好ましくは肝疾患の予防
剤として投与することができる。また本発明は、ヒアル
ロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分とす
る、経口投与用の肝疾患処置剤を提供する。

【０００９】

【発明の実施の形態】＜１＞ヒアルロン酸またはその薬
学的に許容される塩本発明において用いるヒアルロン酸またはその薬学的に
許容される塩の由来は特に限定されず、鶏冠、臍帯、ヒ
アルロン酸を産生する微生物等から分離、精製されたヒ
アルロン酸を用いることができる。特に、高純度に精製
され、医薬として混入が許されない物質を実質的に含ま
ないものが好ましい。

【００１０】ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩とし
ては、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、リチウ
ム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩、アンモニ
ウム塩等の無機塩基との塩、またはジエタノールアミン
塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基
との塩のうち、薬学的に許容される塩を用いることがで
きる。なかでもヒアルロン酸ナトリウムであることが好
ましい。

【００１１】本発明処置剤において用いるヒアルロン酸
またはその薬学的に許容される塩の重量平均分子量は、
７０万以上、１１０万以下である限りにおいて特に限定
されない。後述の実施例に示すように、ヒアルロン酸ま
たはその薬学的に許容される塩は重量平均分子量９０万
付近において肝疾患に対して最も顕著な効果、すなわち
最も顕著な薬理作用を示し、上記のような特定の重量平
均分子量の範囲において有意な効果を示すものである。
本発明に使用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許
容される塩の重量平均分子量の下限は、好ましくは７５
万、より好ましくは８０万、さらに好ましくは８５万で
あり、その上限は好ましくは１０５万、より好ましくは
１００万、さらに好ましくは９５万である。本発明に使
用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩
の重量平均分子量は特に好ましくは約９０万程度であ
る。なお、本発明に使用されるヒアルロン酸またはその
薬学的に許容される塩の重量平均分子量は、第十三改正
日本薬局方：一般試験法・第３６項粘度測定法に従って
極限粘度を測定し、Laurentらの式（Biochim. Biophys.
Acta, 42, 476(1960)）によって算出できる。

【００１２】また、前記ヒアルロン酸またはその薬学的
に許容される塩は、約１３〜１８．５ｄｌ／ｇ、より好
ましくは約１３．５〜１８ｄｌ／ｇ、さらに好ましくは
約１４．５〜１７．０ｄｌ／ｇ、特に好ましくは１５．
０〜１６．５ｄｌ／ｇ、極めて好ましくは１６ｄｌ／ｇ
程度の極限粘度を有するものである。

【００１３】上記のようなヒアルロン酸またはその薬学
的に許容される塩を用いることにより、極めて優れた薬
理作用を有する肝疾患処置剤とすることができる。

【００１４】なお、本発明に使用されるヒアルロン酸ま
たはその薬学的に許容される塩中のエンドトキシン濃度
は、溶液形態の剤とした場合において０．３ＥＵ／ｍＬ
以下であることが好ましい。エンドトキシン濃度は、当
業者に周知慣用のエンドトキシンの測定法を用いて測定
することができるが、カブトガニ・アメボサイト・ライ
セート成分を用いるリムルス試験法が好ましい。なおＥ
Ｕ（エンドトキシン単位）は、日本工業規格生化学試薬
通則（ＪＩＳＫ８００８）に従って測定・算出でき
る。また、鉄含量は２０ｐｐｍ以下であることが好まし
い。

【００１５】＜２＞本発明処置剤の剤型等本発明処置剤の投与方法は、本発明処置剤による肝疾患
に対する効果が発揮される限りにおいて特に限定されな
いが、例えば注射（静脈内等）等による非経口投与、経
口投与等の投与方法が挙げられる。投与方法に応じてヒ
アルロン酸またはその薬学的に許容される塩を適宜製剤
化して、本発明処置剤とすることができる。剤形として
は、注射剤（溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解用固形剤
等）、錠剤、カプセル剤、液剤等が挙げられる。

【００１６】本発明処置剤中のヒアルロン酸またはその
薬学的に許容される塩の濃度も特に限定されないが、
０．０５〜１％(w/v)とするのが好ましい。特に本発明
処置剤を注射剤として提供する場合には、０．０５〜
０．５％(w/v)程度とするのが好ましく、０．０５〜
０．４％(w/v)程度とするのがより好ましく、０．１〜
０．４％(w/v)程度とするのがさらに好ましい。また本
発明処置剤を経口投与用の製剤、例えば液剤とする場合
には、０．１％(w/v)以上とすることが好ましく、０．
２〜１％(w/v)程度とすることがより好ましい。

【００１７】本発明処置剤を注射剤として提供する場
合、その形態は、溶液状、凍結状、または凍結乾燥状の
いずれであっても良い。これをアンプル、バイアル、注
射用シリンジ等の適当な容器に充填・密封し、そのまま
流通させあるいは保存して、注射剤として投与できる。

【００１８】本発明処置剤の製剤化は、公知の方法を用
いることができる。また製剤化にあたり、ヒアルロン酸
またはその薬学的に許容される塩に悪影響を与えず、か
つ本発明の効果に影響を与えない限りにおいて、他の医
薬活性成分や、慣用の安定化剤、乳化剤、浸透圧調整
剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤、着色剤、賦
形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤等、通常医薬に用いられ
る成分を使用できる。

【００１９】＜３＞本発明処置剤の投与対象等本発明処置剤が投与される動物は、脊椎動物、特に哺乳
動物が好ましく、とりわけヒトが好ましい。本発明処置
剤は、これらの動物の肝疾患の予防薬、進行抑制(悪化
防止)薬、または治療薬として投与することができる。

【００２０】本発明処置剤は後述の実施例に示すように
肝機能の障害を有意に抑制し得るので、本発明処置剤は
肝機能の障害を示す肝疾患に広く適用でき、特に限定さ
れないが、特にコンカナバリンＡ惹起肝障害を顕著に抑
制したことから、肝炎、特に劇症肝炎や、自己免疫性肝
炎に対して好ましく適用することができる。

【００２１】本発明処置剤におけるヒアルロン酸または
その薬学的に許容される塩の配合量、１回あたりの投与
量、投与間隔等は、本発明処置剤の投与方法、投与形
態、使用目的等、患者の具体的症状、年齢、性別、体重
等に応じて個別に決定されるべき事項であり特に限定さ
れないが、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される
塩の臨床量として、注射による非経口投与の場合、成人
１人１回当り１００〜５００mg、１日当り２００〜１０
００mg、経口投与の場合、成人１人１回当り５００〜２
５００mg、１日当り１０００〜５０００mg程度の投与量
が例示される。

【００２２】また本発明処置剤の投与間隔は、１日１回
程度でもよく、１日２〜３回に分けて投与することもで
きる。また１日〜３日に１回程度投与してもよい。

【００２３】

【実施例】以下に、本発明の実施例を具体的に説明す
る。しかしながら、これらにより本発明の技術的範囲が
限定されるものではない。

【００２４】＜１＞材料等まず、本実施例において用いた被験物質等を説明する。

【００２５】(1)被験物質・生理食塩水・ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量25万）・ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量47万；極限
粘度 9.5 dl/g）・ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量78万；極限
粘度 14 dl/g）・ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量90万；極限
粘度 16 dl/g）・ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量125万；極
限粘度 20.5 dl/g）

【００２６】ヒアルロン酸ナトリウム（以下、ＨＡとい
う）は、以下の薬効薬理試験に応じて所定の濃度となる
ように生理食塩水に溶解して用いた。生理食塩水に溶解
した後のエンドトキシン濃度はいずれも０．３ＥＵ／ｍ
Ｌ以下であり、また鉄含量はいずれも２０ｐｐｍ以下で
あった。

【００２７】(2)実験動物 Balb/cマウス（雌、７〜８週齢）を使用した。

【００２８】＜２＞コンカナバリンＡ(Con A)惹起肝障
害モデルに対する効果の検討本発明処置剤の肝障害に対する効果を調べるため、Con
Aで肝障害を惹起したモデルを用いた。この肝障害モデ
ルは、Con Aの投与によりＴ細胞が活性化され、過剰生
産されたサイトカイン(インターフェロン(INF)-γ、腫
瘍壊死因子(TNF)-αなど)によって肝臓に特異的な壊死
炎症が生じるモデルであり、ヒトの自己免疫性肝炎や劇
症肝炎などの研究に有用なモデルと考えられている。

【００２９】自己免疫性肝炎を含めた自己免疫疾患は女
性に好発する（Beeson PB, Am. J.Med. 1994; 96: P457
-462）ことから、本モデルについて性差を調べた。その
結果、組織学的変化及び血清ＧＰＴ値（グルタミン酸-
ピルビン酸トランスアミナーゼ活性単位）の上昇の程度
から、雌マウスでは、ヒトと同様に、より重度の肝細胞
障害が生じることが明らかとなった。また本モデルは、
例えばエンドトキシン（ＬＰＳ）モデルのような他の肝
障害モデルに比して肝類洞に強い炎症が認められること
からも、よりヒトの劇症肝炎、自己免疫性肝炎に近いモ
デルであるといえることから、本実施例では本モデルを
用いることとした。

【００３０】(1) 薬効薬理試験１（ＨＡの分子量による
効果の相違）実験動物を、被験物質ごとに以下の通り群分けし、下記
の被験物質のそれぞれの生理食塩水中の0.25％(w/v)濃
度の溶液0.5 mlを、それぞれの実験動物の尾静脈に注射
した。

【００３１】生理食塩水投与群（コントロール群）１０匹ＨＡ(25万)投与群８匹ＨＡ(47万)投与群４匹ＨＡ(78万)投与群４匹ＨＡ(90万)投与群９匹ＨＡ(125万)投与群４匹

【００３２】被験物質投与の１２時間後、Con A(Type I
V；シグマ社) を20 mg/kg体重となるように生理食塩水
0.3 mlに溶解して、それぞれの実験動物の尾静脈から１
回注射して肝炎を惹起させた。８時間後に血清中のＧＰ
Ｔ値を酵素法（トランスアミナーゼCII−テストワコー
（和光純薬工業株式会社））により測定した。結果を図
１に示す。なお統計処理は、ANOVA（Fisher LSD）検定
により行った。

【００３３】図１中のp<0.05及びp<0.001は、コントロ
ール群に比してそれぞれ危険率p<0.05及び危険率p<0.00
1で統計学的有意差があることを示す。図１から、重量
平均分子量７８万のＨＡを投与した群及び重量平均分子
量９０万のＨＡを投与した群において、コントロール群
及び他の重量平均分子量のヒアルロン酸ナトリウムを投
与した群に比して、顕著に血清中のＧＰＴ値が低下して
おり、肝障害が顕著に抑制されていることが示された。

【００３４】(2) 薬効薬理試験２（ＨＡの投与のタイミ
ングによる効果の相違）実験動物を、Con Aによる肝炎惹起前のＨＡ投与のタイ
ミングについて以下の通り群分けし、生理食塩水中のＨ
Ａ(重量平均分子量90万)の0.35％(w/v)濃度の溶液0.5 m
lをそれぞれの実験動物の尾静脈に注射した。

【００３５】Con A投与の１８時間前投与群５匹 Con A投与の１２間前投与群５匹 Con A投与の８時間前投与群５匹 Con A投与の４時間前投与群５匹 Con A投与の２時間前投与群５匹 Con A投与の１時間前投与群４匹上記それぞれの群に対応する生理食塩水溶液投与群（コ
ントロール群）各４匹（ただし、Con A投与の１時間
前投与群に対応するコントロール群については３匹）

【００３６】被験物質投与から上記所定の時間後、薬効
薬理試験１と同様にCon Aを注射して肝炎を惹起させ
た。８時間後に血清中のＧＰＴ値を、薬効薬理試験１と
同様に酵素法により測定した。結果を図２に示す。なお
統計処理は、Student’ t検定により行った。図２中、
*** は、コントロール群に対して危険率p<0.001で有
意差があることを示す。

【００３７】図２から、Con Aによる肝炎惹起前２時間
までにＨＡを投与した群は、顕著に血清中のＧＰＴ値が
低下しており、肝障害が顕著に抑制されていることが示
唆された。特に、Con Aによる肝炎惹起の８時間以上前
にＨＡを投与した群では血清中のＧＰＴ値は極めて顕著
に低下していたことから、このようなタイミングでＨＡ
を投与することにより、肝障害に対してより高い効果を
示すことが示唆された。

【００３８】(3) 薬効薬理試験３（ＨＡの濃度による効
果の相違）実験動物を、投与するＨＡの濃度について以下の通り群
分けし、生理食塩水中所定の濃度としたＨＡ(重量平均
分子量90万)溶液0.5 mlをそれぞれの実験動物の尾静脈
に注射した。

【００３９】生理食塩水投与群（コントロール群）４匹 0.05％(w/v)濃度投与群４匹 0.1％(w/v)濃度投与群４匹 0.25％(w/v)濃度投与群４匹 0.35％(w/v)濃度投与群５匹

【００４０】被験物質投与から１２時間後、薬効薬理試
験１と同様にCon Aを注射して肝炎を惹起させた。８時
間後に血清中のＧＰＴ値を、薬効薬理試験１と同様に酵
素法により測定した。結果を図３に示す。なお統計処理
は、ANOVA検定により行った。図３中、 *** は、コン
トロール群に対して危険率p<0.001で有意差があること
を示す。

【００４１】図３から、全ての投与群において血清中の
ＧＰＴ値の低下が見られた。またこの効果はＨＡ濃度に
依存して増大し、0.1％(w/v)、0.25％(w/v)及び0.35％
(w/v)投与群において血清ＧＰＴ値の有意な低下が見ら
れた。

【００４２】(4) 薬効薬理試験４（IFN-γの産生抑制効
果） INF-γ(肝障害を引き起こす原因となるサイトカインの
１つ)の産生に対するＨの効果を調べた。実験動物を、
血中INF-γ測定のタイミングについて以下の通り群分け
し、生理食塩水中の0.35％(w/v)濃度のＨＡ(重量平均分
子量90万)溶液0.5 mlをそれぞれの実験動物の尾静脈に
注射した。

【００４３】Con A投与直後測定群４匹 Con A投与後２時間目測定群５匹 Con A投与後４時間目測定群６匹 Con A投与後８時間目測定群５匹上記それぞれの群に対応する生理食塩水投与群（コント
ロール群）各５匹

【００４４】被験物質投与から１２時間後、薬効薬理試
験１と同様にCon Aを注射して肝炎を惹起させた。上記
各群所定の時間後に血中のINF-γ濃度をELISAキット(Ge
nzyme社)で測定した。結果を図４に示す。なお統計処理
は、ANOVA検定により行った。図４中、 **、及び ***
は、コントロール群に対してそれぞれ危険率p<0.01、危
険率p<0.001で有意差があることを示す。

【００４５】図４から、全て測定群においてＨＡ投与に
より血中INF-γ濃度が低下していることが示された。特
に、Con A投与後２時間目、４時間目に血中INF-γ濃度
の顕著な低下が見られた。この結果から、ＨＡが肝障害
に対して効果を発揮する一因として、INF-γ産生の抑制
が関係していることが示唆された。

【００４６】(5) 薬効薬理試験５（ＨＡの経口投与によ
る効果）実験動物を、経口投与するＨＡの濃度について以下の通
り群分けし、所定の濃度としたＨＡ(重量平均分子量90
万)の生理食塩水溶液0.5mlをそれぞれの実験動物に経口
投与した。

【００４７】生理食塩水投与群（コントロール群）４匹 0.25％(w/v)濃度投与群５匹 0.5％(w/v)濃度投与群５匹 1.0％(w/v)濃度投与群５匹被験物質の経口投与から１２時間後、薬効薬理試験１と
同様にCon Aを注射して肝炎を惹起させた。８時間後に
血清中のＧＰＴ値を、薬効薬理試験１と同様に酵素法に
より測定した。結果を図５に示す。

【００４８】図５から、全ての投与群において血清中の
ＧＰＴ値の低下が見られた。またこの効果は、ＨＡ濃度
に依存して増大した。

【００４９】以上の結果から、ＨＡを有効成分とする本
発明処置剤は、肝障害、特に肝炎（なかでも劇症肝炎や
自己免疫性肝炎）に対して極めて有効であることが示さ
れた。また本発明処置剤は、肝障害のおそれがある投与
対象に対して予め投与することにより、さらに優れた効
果を発揮することが示されたことから、予防剤として特
に有効であることが示された。またHAは、経口投与によ
っても肝障害に対する効果を発揮することが示された。

【００５０】

【発明の効果】特定の重量平均分子量のＨＡを有効成分
とする本発明処置剤は、前記薬効薬理試験の結果からも
明らかな通り、肝障害に対して、他の重量平均分子量の
ＨＡには見られない顕著な効果を発揮することから、肝
障害の処置に極めて有用である。特に本発明処置剤は、
肝障害のおそれがある投与対象に対して予め投与するこ
とによってさらに優れた効果を発揮することが示された
ことから、予防剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】種々の重量平均分子量を有するＨＡによる、
肝障害に対する効果（血清ＧＰＴ値の低下）を示す図で
ある。

【図２】ＨＡの投与のタイミングによる、肝障害に対
する効果（血清ＧＰＴ値の低下）の相違を示す図であ
る。

【図３】ＨＡの濃度による、肝障害に対する効果（血
清ＧＰＴ値の低下）の相違を示す図である。

【図４】ＨＡの肝障害に対する効果（血中INF-γ濃度
の低下）を示す図である。

【図５】経口投与によるＨＡの肝障害に対する効果
（血清ＧＰＴ値の低下）を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】重量平均分子量７０万〜１１０万のヒア
ルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分と
する、肝疾患処置剤。
【請求項２】ヒアルロン酸またはその薬学的に許容さ
れる塩の重量平均分子量が７５万〜１０５万の範囲にあ
る、請求項１に記載の処置剤。
【請求項３】肝疾患が肝炎である、請求項１または２
に記載の処置剤。
【請求項４】肝炎が、劇症肝炎または自己免疫性肝炎
である、請求項３に記載の処置剤。
【請求項５】ヒアルロン酸またはその薬学的に許容さ
れる塩を、０．０５〜１％(w/v)の濃度で含有すること
を特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の処
置剤。
【請求項６】肝疾患の予防剤である、請求項１〜５の
いずれか１項に記載の処置剤。
【請求項７】ヒアルロン酸またはその薬学的に許容さ
れる塩を有効成分とする、経口投与用の肝疾患処置剤。