JP2001322935A - 神経細胞賦活剤およびその利用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】神経成長因子（ＮＧＦ）様作用およびＮＧＦの
作用を増強させる効果を有する新規な神経細胞賦活剤を
提供し、β−アミロイド蛋白等による脳神経細胞の障害
を予防し得る有用な組成物を提供する。 【解決手段】次の式（Ｉ） 【化１】 （但し、Ｒ_１及びＲ_２は炭素数が１４〜２２で、二重結
合数が０〜６の脂肪酸のアルキル残基又はアルケニル残
基）で表されるＳＱＤＧを有効成分としてなる脳神経細
胞賦活剤及び該賦活剤を配合してなる医薬用又は食用組
成物。前記ＳＱＤＧは望ましくは紅藻類、褐藻類等の藻
類から抽出される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、脳神経細胞の賦活
剤およびその利用に関する。より詳しくは、神経細胞の
分化を促進し、神経細胞の障害に対して保護作用を有す
る神経細胞賦活剤、該賦活剤を配合してなる医薬用組成
物および食用組成物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来より、脳神経細胞の細胞死をともな
う疾病に対し、直接その細胞を賦活することにより前記
疾病を予防あるいは治療する薬剤は広く探索されている
が、実用上有効な薬剤は未だ見い出されていない。この
ため、外傷、代謝性の要因、脳虚血、パーキンソン病ま
たはダウン症等によって生じる脳神経細胞障害の治療薬
及び予防効果のある機能性食品の開発が切望されてい
る。

【０００３】わが国では人口の高齢化スピードが速くな
るにつれて痴呆高齢者が増えており、とりわけアルツハ
イマー型痴呆が急増している。アルツハイマー型老年痴
呆においては、大脳基底核神経細胞であるアセチルコリ
ン作動性神経細胞の変性および脱落が、学習・記憶力や
知的活動能力の低下の要因として深く関わっていること
が示唆されている（Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２１５，
１２，ｐ３７，１９８２）。神経成長因子（ＮＧＦ）
は、繊維切断によるアセチルコリン作動性神経細胞の変
性および脱落を抑制すること（Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃ
ｅ Ｌｅｔｔ．Ｖｏｌ．６６，ｐ１７５，１９８６）、
また、老齢ラットの迷路学習障害を改善すると共にアセ
チルコリン作動性神経細胞の萎縮を抑制することが報告
されている。さらに、ＮＧＦは脳虚血スナネズミの海馬
神経細胞の脱落を防ぐことも確かめられており、脳卒中
による後遺症の治療薬としても有用であると考えられ
る。

【０００４】これに関連して、神経突起の伸展作用やβ
−アミロイド蛋白により惹起される神経細胞のアポトー
シスを阻害する作用を有するものとしてイリドイド化合
物、トリテルペノイドサポニン類、ガングリオシド等が
知られている。

【０００５】一方、高等植物や藻類の組織に存在する糖
脂質については、その生理活性面では解明されていない
部分が多く、報告類も少ないのが実情である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、脳神
経細胞の細胞死をともなうことなく該細胞の増殖能を抑
制し、かつ分化誘導を促進させ得る神経細胞賦活剤、お
よびこれを利用した医薬用組成物ならびに食用組成物を
提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決するために、種々の海苔、藻類や陸生植物に存在
する糖脂質についてラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神
経系樹立細胞であるＰＣ１２細胞の増殖抑制能および分
化誘導促進作用に対する影響を検討したところ、スルホ
キノボシルジアシルグリセロール（以下、ＳＱＤＧと略
す）がＮＧＦ機能の増強効果さらにはβ−アミロイドに
起因する神経細胞死の抑制効果を奏することを見い出
し、本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明によれば、次に示す式
（Ｉ）

【０００９】

【化２】 （ただし、式（Ｉ）においてＲ_１およびＲ_２は炭素数が
１４〜２２であり、二重結合の数が０〜６の脂肪酸のア
ルキル残基またはアルケニル残基である。）で表される
ＳＱＤＧを有効成分としてなる脳神経細胞賦活剤によっ
て前記課題を解決できる。

【００１０】本発明に係るＳＱＤＧにおいて、これを構
成する脂肪酸残基としては上記の式（Ｉ）のなかのＲ_１
がアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタ
エン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれ
る１種または２種以上の多価不飽和脂肪酸を含む脂肪酸
のアルキル残基またはアルケニル残基であり、Ｒ_２がミ
リスチン酸および／またはパルミチン酸を含む脂肪酸の
アルキル残基またはアルケニル残基であることが望まし
い。

【００１１】また、本発明に係るＳＱＤＧは天然物由来
のものでも化学合成したものでもさしつかえないが、例
えば、藍藻類、紅藻類、褐藻類または緑藻類に属する藻
類を原料として、これから有機溶剤を用いて抽出して得
られるものを適宜に精製処理を施して用いることが好ま
しい。

【００１２】なお、本発明の脳神経細胞賦活剤において
は、脳神経細胞に関する賦活作用が脳神経細胞の外傷性
要因による障害、代謝性要因による障害、β−アミロイ
ド蛋白質による障害または脳虚血性要因による障害を予
防する作用あるいは治癒する作用であるものを対象にす
るのがよい。

【００１３】さらに、本発明によれば、前記の脳神経細
胞賦活剤を有効成分として配合してなる医薬用組成物ま
たは食用組成物によって前記課題を解決できる。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明に用いられるＳＱＤＧはグ
リセロール骨格の１位もしくは２位に炭素数１４〜２２
の飽和脂肪酸ならびに不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として
有する。飽和脂肪酸の主なものはミリスチン酸、パルミ
チン酸、ステアリン酸等であり、不飽和脂肪酸の主たる
ものはパルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、
リノレン酸（ω３）、オクタデカテトラエン酸、アラキ
ドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、
ドコサヘキサエン酸等を例示できる。なお、本発明にお
いて、ＳＱＤＧはそのナトリウム塩やカリウム塩等の薬
学的に許容され得る塩を対象に含むものとする。

【００１５】グリセロール骨格の１位および２位の構成
脂肪酸の種類はとくに限定されるものではないが、前記
の式（Ｉ）において、Ｒ_１はアラキドン酸、エイコサペ
ンタエン酸、ドコサペンタエン酸およびドコサヘキサエ
ン酸からなる群から選ばれる１種または２種以上の多価
不飽和脂肪酸を主体に含む脂肪酸のアルキル残基または
アルケニル残基であり、かつＲ_２はミリスチン酸および
／またはパルミチン酸を主体として含む脂肪酸のアルキ
ル残基またはアルケニル残基であるものが望ましい。

【００１６】なお、本発明に用いるＳＱＤＧを天然物か
ら採取するには、原料として藍藻類（Ａｎａｂａｅｎａ
ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ａｎａｃｙｓｔｉｓ ｎｉｄ
ｕｌａｎｓ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉ
ｓ：スピルリナ等）、紅藻類（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅ
ｚｏｅｎｓｉｓ：スサビノリ、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ ａｍ
ａｎｓｉｉ：マクサ、Ｇｉｇａｒｔｉｎａ ｔｅｎｅｌ
ｌａ：スギノリ、Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ ｖｅｒｒｕｃ
ｏｓａ：オゴノリ等）、褐藻類（Ｕｎｄａｒｉａｐｉｎ
ｎａｔｉｆｉｄａ：ワカメ、Ｈｉｚｉｋｉａ ｆｕｓｉ
ｆｏｒｍｉｓ：ヒジキ、Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏ
ｎｉｃａ：マコンブ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｈｏｒｎｅ
ｒｉ：アカモク等）または緑藻類（Ｃｈｌａｍｉｄｏｍ
ｏｎａｓｓｐ．：クラミドモナスの一種、Ｅｎｔｅｒｏ
ｍｏｒｐｈａ ｓｐ．：アオサの一種、Ｃｈｌｏｒｅｌ
ｌａ ｓｐ．：クロレラ等）に属する藻の藻体を用いる
のが好適である。また、ホウレンソウや大麦の葉等の陸
生植物を原料としてもさしつかえない。

【００１７】これらの藻類から得られるＳＱＤＧの構成
脂肪酸は、１位が多価不飽和脂肪酸を主成分とし、２位
が飽和脂肪酸を主成分とするものが多い。本発明ではこ
のようなタイプのものが好ましい。例えば、紅藻類のア
マノリ属スサビノリの場合、その構成脂肪酸は１位にエ
イコサペンタエン酸、２位にパルミチン酸がそれぞれ多
く存在する（Ｊａｐ．Ｊ．Ｐｈｙｃｏｌ．，Ｖｏｌ．３
４，ｐ９４，１９８６）。紅藻類のオゴノリ属オゴノリ
の場合は、１位にアラキドン酸、ミリスチン酸およびパ
ルミチン酸が主として存在し、２位にパルミチン酸が多
く存在する（Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ ２０４／
２０５，ｐ５１３，１９９０）。紅藻類のツノマタ属ツ
ノマタでは、１位にミリスチン酸、パルミチン酸、アラ
キドン酸、エイコサペンタエン酸を、２位にパルミチン
酸を主成分として含む。ヒジキ、ワカメなどの褐藻類で
は、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン
酸が多く、また、エイコサペンタエン酸やアラキドン酸
も存在する（Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，
Ｖｏｌ．３２，ｐ６２３，１９９１）。

【００１８】本発明に用いられるＳＱＤＧは、以下のよ
うにして調製することができる。すなわち、前記原料を
適宜に細断ないしは粉砕し、ヘキサン、クロロホルム、
アセトン、メタノール、エタノール等の脂質成分抽出用
有機溶媒を用いて抽出処理し、該抽出液から溶媒を除去
して全脂質を得る。ついで、シリカゲル、アルミナ、セ
ファデックス、逆相吸着剤（オクタデシルシリル化シリ
カゲル等）、イオン交換樹脂等を用いたカラムクロマト
グラフィーで分画処理して濃縮画分を採取し、さらに必
要に応じて濃縮精製し、最終的には薄層クロマトグラフ
ィーにより精製処理して目的物であるＳＱＤＧを調製す
ることができる。本発明では、かくして得られる適当な
純度のＳＱＤＧ含有物をそのまま神経細胞賦活剤として
使用できる。あるいは、デンプン、デキストリン、セル
ロース等の公知の賦形剤を混合、成形して本発明の賦活
剤となすことも可能である。

【００１９】前述のＳＱＤＧを有効成分としてなる本発
明の神経細胞賦活剤は、脳神経細胞を賦活し、細胞死を
誘発することなくその増殖を抑制して分化を促進する。
すなわち、神経細胞賦活因子として代表的なＮＧＦは、
ＰＣ１２細胞を刺激して神経細胞様に分化せしめ、神経
突起を伸展させる作用を有するが、本発明のＳＱＤＧ含
有賦活剤はＮＧＦの共存下においてＰＣ１２細胞を神経
細胞様に分化せしめ、神経突起を伸展させる作用が顕著
である。

【００２０】また、ＳＱＤＧを有効成分としてなる本発
明の賦活剤は脳神経細胞の外傷性要因、代謝性要因、β
−アミロイド蛋白質、脳虚血性要因等の種々の要因によ
る障害に対して予防作用あるいは治癒作用を有する。こ
の一例として、β−アミロイド蛋白質の活性部位を抜き
出したモデルペプチドであるβ２５−３５が惹起する神
経細胞への細胞毒性を濃度依存的に軽減する。なお、β
−アミロイド蛋白質は、アルツハイマー病患者の脳に沈
着するアミロイドを構成する蛋白質であり、アルツハイ
マー病の原因の一つであると考えられている（「医学の
あゆみ」、Ｖｏｌ．１７４，ｐ６１４−６１８，１９９
５）。このことから、本発明のＳＱＤＧ含有賦形剤は、
β−アミロイド蛋白質の毒性に起因する脳神経細胞の障
害に対しても保護作用を有することが明らかとなった。

【００２１】次に、本発明の神経細胞賦活剤を配合して
なる医薬用組成物および食用組成物について説明する。
ＳＱＤＧを有効成分としてなる本発明の前記賦活剤は、
これをそのまま、あるいは慣用の医薬製剤担体とともに
医薬用組成物となし、動物およびヒトに投与することが
できる。医薬用組成物の剤形としては特に制限されるも
のではなく、必要に応じて適宜に選択すればよいが、例
えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経
口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤があげられる。投与量
は、通常、成人でＳＱＤＧの重量として１日あたり２０
〜６００ｍｇを数回に分けて服用するのが適当である。

【００２２】本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、細粒剤、散剤としての経口剤は、例えば、デンプ
ン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロ
ース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従っ
て製造される。これらの製剤中のＳＱＤＧの配合量は特
に限定されるものではなく適宜設計できる。この種の製
剤には本発明の賦活剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活
性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等
を適宜に使用することができる。

【００２３】ここに、結合剤としてデンプン、デキスト
リン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピル
スターチ、メチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロー
ス、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等を例示でき
る。崩壊剤としてはデンプン、ヒドロキシプロピルスタ
ーチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボ
キシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセ
ルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等を例
としてあげることができる。界面活性剤の例としてラウ
リル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、蔗糖脂肪酸エステ
ル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等を
あげることができる。滑沢剤では、タルク、ロウ類、水
素添加植物油、蔗糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグ
ネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アル
ミニウム、ポリエチレングリコール等を例示できる。流
動性促進剤では、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム等を例としてあげることができる。また、ＳＱＤＧは
懸濁液、エマルション剤、シロップ剤、エリキシル剤と
しても投与することができ、これらの各種剤形には、矯
味矯臭剤、着色剤を含有させてもよい。

【００２４】非経口剤として本発明の所望の効果を発現
せしめるには、患者の年齢、体重、疾患の程度により異
なるが、通常、成人でＳＱＤＧの重量として１日あたり
１〜６０ｍｇの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が
適当である。この非経口投与剤は常法に従って製造さ
れ、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブ
ドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、
大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール等を用
いることができる。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐
剤、安定剤を加えてもよい。また、この非経口剤は安定
性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾
燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液
剤を再調製することもできる。さらに必要に応じて、等
張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤を加えてもよい。こ
れら製剤中のＳＱＤＧの配合量は特に限定されるもので
はなく任意に設定できる。その他の非経口剤の例とし
て、外用液剤、軟膏等の塗布剤、直腸内投与のための坐
剤等があげられ、これらも常法に従って製造される。

【００２５】本発明の他の組成物の好適な態様は食用組
成物である。すなわち、前述のようにして得られるＳＱ
ＤＧを有効成分としてなる脳神経細胞賦活剤は、これを
そのまま液状、ゲル状あるいは固形状の食品、例えばジ
ュース、清涼飲料、茶、スープ、豆乳、サラダ油、ドレ
ッシング、ヨーグルト、ゼリー、プリン、ふりかけ、育
児用粉乳、ケーキミックス、粉末状または液状の乳製
品、パン、クッキー等に添加したり、必要に応じてデキ
ストリン、乳糖、澱粉等の賦形剤や香料、色素等ととも
にペレット、錠剤、顆粒等に加工したり、またゼラチン
等で被覆してカプセルに成形加工して健康食品や栄養補
助食品等として利用できる。

【００２６】これらの食品類あるいは食用組成物におけ
る本発明の神経細胞賦活剤の配合量は、当該食品や組成
物の種類や状態等により一律に規定しがたいが、約０．
０１〜５０重量％、より好ましくは０．１〜３０重量％
である。配合量が０．０１重量％未満では経口摂取によ
る所望の効果が小さく、５０重量％を超えると食品の種
類によっては風味を損なったり当該食品を調製できなく
なる場合がある。なお、本発明の神経細胞賦活剤は、こ
れをそのまま食用に供してもさしつかえない。

【００２７】本発明の医薬用組成物および食用組成物
は、脳神経細胞の障害を予防あるいは治癒をねらいとし
て利用するものであれば、それを使用する上で何ら制限
を受けることなく適用されるが、とりわけ外傷性脳神経
細胞障害、代謝性の要因による脳神経細胞障害、脳虚血
性脳神経細胞障害、パーキンソン病またはダウン症によ
る脳神経細胞障害等の治癒に対して有効である。また、
これらの疾患の予防措置の手段としても使用することが
可能である。

【００２８】実施例１ スサビノリの乾燥物（約３ｇ）を細断し、クロロホルム
／メタノール（１：１，ｖ／ｖ、以下とくに断らないか
ぎり同様。）１００ｍｌを加え、ホモジナイザー中で室
温下１５分間抽出処理を行った。同様の操作をさらに２
回繰り返し、抽出液を集め、細かい抽出残渣を濾過して
除去した後、分液漏斗に移し、Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法
に従ってクロロホルム層と水−メタノール層とに分離し
た。クロロホルム層を採り、減圧下で濃縮、乾固して乾
固物を得た（抽出量５４ｍｇ、収率１．８％）。この乾
固物を少量のクロロホルム／メタノール（１：４）に溶
解させ、これを脂質の粗抽出液とした。

【００２９】実施例２ 実施例１において、クロロホルム／メタノール（１：
１）１００ｍｌに代えてヘキサン／エタノール（１：
１）６０ｍｌを用い、５０℃にて２時間抽出処理するこ
とを除いて同様に処理し、抽出乾固物（抽出量３５ｍ
ｇ、収率１．２％）を得た。この乾固物を少量のクロロ
ホルム／メタノール（１：４）に溶解させ、脂質の粗抽
出液とした。

【００３０】実施例１−１ １Ｍ酢酸ナトリウム水溶液で酢酸型としてメタノールに
懸濁させたＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｌ（東ソー社製）
を内径１０ｍｍのガラスカラムに約５０ｍｍの高さに充
填し、クロロホルム／メタノール（１：４）１００ｍｌ
で前記カラムを洗浄した。これに実施例１に記載の方法
で２バッチ処理して得た粗抽出液を添加し、クロロホル
ム／メタノール（１．４）１００ｍｌで溶出させフラク
ション１を得た。次に、５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液
０．５ｍｌを添加したクロロホルム／メタノール（１：
４）１００ｍｌで溶出させフラクション２を得た。

【００３１】実施例１−２ イアトロビーズ（Ｉａｔｒｏｎ Ｌａｂ．社製）をメタ
ノール懸濁させ内径１０ｍｍのガラスカラムに約５０ｍ
ｍの高さに充填し、５０ｍｌのメタノールと５０ｍｌの
クロロホルムで順次カラムを洗浄した。濃縮・乾固した
実施例１−１で得たフラクション１の濃縮乾固物をクロ
ロホルムに溶解させ、前記イアトロビーズカラムに添加
した。まず、クロロホルム／アセトン（２０：５）５０
ｍｌで溶出させフラクション３を得た。ついで、アセト
ン１００ｍｌさらにメタノール５０ｍｌを流し、順次カ
ラム内に残留する脂質を溶出させ、アセトン溶出画分
（フラクション４）およびメタノール溶出画分（フラク
ション５）を得た。

【００３２】実施例１−３ 実施例１−１および１−２で得たフラクション２〜５の
各画分を減圧下で濃縮し、少量のクロロホルム／メタノ
ール（１：１）に溶解させ、これを脂質類の分析用試料
とした。各分析用試料を薄層クロマトグラフィー（ＴＬ
Ｃ）に供して同定を行った。なお、ＴＬＣの展開溶媒の
組成は、フラクション２：クロロホルム／アセトン／メ
タノール／酢酸／水＝５０：２０：１０：１５：５、フ
ラクション３：ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸＝８
０：２０：０．５、フラクション４および５：クロロホ
ルム／メタノール／水＝７０：２１：３であった。各フ
ラクションに含まれる脂質の組成は次のとおりであっ
た。 フラクション２：ホスファチジルグリセロール（Ｐ
Ｇ）、ＳＱＤＧ、微量のホスファチジン酸（ＰＡ）およ
びホスファチジルイノシトール（ＰＩ）。 フラクション３：トリアシルグリセロール（ＴＧ）、微
量の未同定物質。 フラクション４：モノガラクトシルジアシルグリセロー
ル（ＭＧＤＧ）、ジガラクトシルジアシルグリセロール
（ＤＧＤＧ）。 フラクション５：ホスファチジルエタノールアミン（Ｐ
Ｅ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、微量の未同定物
質。

【００３３】以上の実験を定量化して行い、その結果か
ら、原料（スサビノリ乾燥物）中の脂質成分の組成を求
めたところ、ＭＧＤＧ：１０．５％、ＤＧＤＧ：２５．
４％、ＰＧ：２１．５％、ＳＱＤＧ：１７．０％、Ｐ
Ｃ：１５．７％、ＰＥ：微量、ＴＧ：３．０％、その
他：６．８％であった。

【００３４】実施例３ 実施例１−３で得たフラクション２のＴＬＣプレートか
らＳＱＤＧに相当するスポットをかきとり、クロロホル
ム／メタノール（１：１）に溶解させ、濾過および溶媒
除去してほぼ純品のＳＱＤＧを得た。ついで、これを常
法により塩酸加水分解処理、またはリゾプス デレマー
（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）由来のリパーゼ
（シグマ社製試薬）を用いて酵素加水分解処理して、前
者からＳＱＤＧの１位および２位の構成脂肪酸、後者か
ら１位の構成脂肪酸を遊離せしめた。各々のメチルエス
テル化処理を経てガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）分
析に供した。この結果、ＳＱＤＧの１位を構成する主な
脂肪酸はエイコサペンタエン酸．９１．０％、アラキド
ン酸：１．８％、パルミチン酸：４．６％であり、２位
の主な構成脂肪酸はパルミチン酸：９２．５％、オレイ
ン酸：２．８％であった。

【００３５】実施例４ 神経細胞のモデル細胞であるＰＣ１２細胞は、ラット副
腎髄質由来褐色細胞腫より樹立された細胞株（親クロム
細胞腫細胞）であり、神経成長因子（ＮＧＦ）に応答し
て神経突起を伸展し、神経細胞様に分化する。そこで、
このＰＣ１２細胞（ドイツ・マックスプランク研究所か
ら分譲）をＴ−２５培養フラスコ中で静置培養し、ＳＱ
ＤＧの神経突起伸展作用、すなわち分化誘導能を検討し
た。培養液はＲＰＭＩ１６４０培地に１０％（ｖ／ｖ）
馬血清と５％（ｖ／ｖ）牛胎児血清を含み、３７℃、５
％二酸化炭素混有空気中でｐＨ７．２〜７．４に保っ
た。ＳＱＤＧ（実施例３記載の方法により調製）は、ジ
メチルスルホキシドに溶解し、ミリポアフィルター
（０．２μｍ）にて濾過滅菌後、ＰＣ１２細胞培養液に
終濃度１０μＭを添加した。 分化誘導の陽性対照に
は、ＮＧＦ（シグマ社製試薬）をリン酸緩衝液に溶解さ
せ終濃度１００ｎｇ／ｍｌを添加し、ＳＱＤＧ単独及び
ＮＧＦとＳＱＤＧ共存下での分化誘導への影響を４日間
光学顕微鏡により形態観察を行った。なお、分化誘導は
細胞体の長径より長い突起を形成したものを陽性と判断
した。この結果を表１に示す。同表中の記号は、培養４
日後の神経突起形成状態について−：なし、＋：あり、
＋＋および＋＋＋：顕著にありを意味する。

【００３６】

【表１】

【００３７】表１に示したデータから、ＮＧＦで神経突
起の伸展が見られたが、ＳＱＤＧ単独では細胞形態の桿
状化が観察されたものの神経突起の明確な伸展作用は観
察されなかった。しかし、ＮＧＦとＳＱＤＧの共存によ
り、ＮＧＦの神経突起形成は顕著に促進されることが明
らかになった。

【００３８】実施例５ アルツハイマー病における神経細胞死の原因物質の１つ
にβ−アミロイド蛋白質（４２アミノ酸残基）の関与が
明らかになっている。本実施例では、β−アミロイドペ
プチドの強毒性フラグメント（β−アミロイドの２５残
基から３５残基の１１残基ペプチド、以下β２５−３５
と略す）を用いて、神経細胞のモデル細胞に対する細胞
死誘導とそれに対するＳＱＤＧの防衛効果を検討した。
ポリオルニチンで細胞接着面に処理を施した９６ウェル
プレートでＰＣ１２細胞（実施例４と同じ）を培養し、
β２５−３５（大阪ペプチド研究会より入手）およびＳ
ＱＤＧ（実施例４と同じ）を各単独あるいは同時添加し
た。２日間培養後培養上清中に細胞内から漏出する乳酸
脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定し、細胞死の指標とし
た。この結果を表２に示す。

【００３９】

【表２】

【００４０】表２に示したデータから、ＳＱＤＧ単独の
添加は対照群（無添加群）と比較して有意な差は認めら
れなかったが、β２５−３５添加群は対照群と比較して
著しい細胞死が誘導された。また、β２５−３５とＳＱ
ＤＧの同時添加群では細胞死が防御され、ＳＱＤＧはβ
−アミロイドペプチドの強毒性フラグメントであるβ２
５−３５のＰＣ１２細胞に対する毒性を軽減させること
が判明した。

【００４１】実施例６ 実施例３に記載の方法により調製したほぼ純品のＳＱＤ
Ｇ１５０ｍｇ、精製大豆油１２５ｍｇ、ミツロウ１５ｍ
ｇおよびビタミンＥ１０ｍｇを窒素ガス雰囲気下で約４
０℃に加温し、十分に混合して均質な液状物とした。こ
れをカプセル充填機に供給して１粒内容量３００ｍｇの
ゼラチン被覆カプセル製剤を試作した。この製剤は医薬
用組成物または食用組成物として利用できるものであ
る。

【００４２】実施例７ 海苔を原料として食用味付け焼き海苔を製造する方法に
おいて、採取したアサクサノリおよびスサビノリを篩付
き木製型枠に流し込んですき、乾燥機中で約５０℃にて
２時間乾燥し、さらにトンネル型ヒーターで１５０〜１
８０℃にて６〜７秒間加熱処理して焼き海苔をつくっ
た。別に、味付け用タレとして塩５．０ｋｇ、調味料
２．０ｋｇ、砂糖８．６ｋｇ、唐辛子０．３ｋｇ、醤油
２．０リットル、みりん１．８リットル、水６．０リッ
トルの混合液に加えて実施例２に記載の方法により調製
した抽出乾固物２５０ｇを配合して均質化したものを作
成し、このタレを前記焼き海苔に塗布し乾燥して本発明
の味付け焼き海苔を試作した。このものは、市販の味付
け焼き海苔と比較して外観、風味および食感のいずれに
おいても孫色なく、健康の維持増進を訴求する食品とし
て利用できるものであった。

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、脳神経細胞に対して賦
活作用および保護作用を示し、外傷、代謝性の要因、脳
虚血、β−アミロイド蛋白質、パーキンソン病およびダ
ウン症等による脳神経細胞障害に対する予防および治癒
に極めて有用なＳＱＤＧを有効成分としてなる神経細胞
賦活剤が提供される。該賦活剤は神経成長因子（ＮＧ
Ｆ）と併用することにより、神経細胞の分化誘導を顕著
に促進し、相乗的な神経突起形成能を発現させる機能を
有する。また、本発明によれば、前記機能を有する神経
細胞賦活剤を配合してなる医薬用組成物および食用組成
物が提供され、これらの組成物は脳神経細胞の障害に対
する予防あるいは治療のための手段として活用され得
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ １１１ １１１ // Ｃ０７Ｈ 15/04 Ｃ０７Ｈ 15/04 Ｄ (72)発明者 多田 幹郎 岡山県岡山市津島中１−３−102 (72)発明者 羽田 尚彦 岡山県赤磐郡熊山町徳富363番地 備前化 成株式会社内 (72)発明者 井上 良計 岡山県赤磐郡熊山町徳富363番地 備前化 成株式会社内 (72)発明者 荒木 繁 東京都大田区大森東５−４−６ 株式会社 山本海苔店山本海苔研究所内 Ｆターム(参考） 4B018 MD08 MD10 MD11 MD12 MD27 MD89 ME14 4C057 JJ07 4C086 AA01 AA02 EA05 MA01 MA04 NA14 ZA15 ZA16 ZA36 ZC02 4C088 AA13 AA14 AA15 AC15 CA09 CA14 MA03 NA14 ZA15 ZA16 ZA36 ZC02

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】次に示す式（Ｉ） 【化１】 （ただし、Ｒ_１およびＲ_２は炭素数が１４〜２２で、二
   重結合の数が０〜６の脂肪酸のアルキル残基またはアル
   ケニル残基である。）で表されるスルホキノボシルジア
   シルグリセロールを有効成分としてなる脳神経細胞賦活
   剤。
2. 【請求項２】上記の式（Ｉ）において、Ｒ_１がアラキド
   ン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およ
   びドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれる１種また
   は２種以上の多価不飽和脂肪酸を含む脂肪酸のアルキル
   残基またはアルケニル残基であり、Ｒ_２がミリスチン酸
   および／またはパルミチン酸を含む脂肪酸のアルキル残
   基またはアルケニル残基である請求項１に記載の賦活
   剤。
3. 【請求項３】上記の式（Ｉ）で表されるスルホキノボシ
   ルジアシルグリセロールが藍藻類、紅藻類、褐藻類また
   は緑藻類に属する藻類の藻体を原料とし、これから溶剤
   抽出されるものである請求項１または２に記載の賦活
   剤。
4. 【請求項４】脳神経細胞に対する賦活作用が脳神経細胞
   の外傷性障害、代謝性要因による障害、β−アミロイド
   蛋白質による障害または脳虚血性障害を予防あるいは治
   癒する作用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の
   賦活剤。
5. 【請求項５】請求項１〜４のいずれか１項に記載の脳神
   経細胞賦活剤を有効成分として配合してなる医薬用組成
   物。
6. 【請求項６】請求項１〜４のいずれか１項に記載の脳神
   経細胞賦活剤を有効成分として配合してなる食用組成
   物。