JP2001299343A

JP2001299343A - Ｃｄ５７抗体

Info

Publication number: JP2001299343A
Application number: JP2000120112A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Wakasugi; 尋若杉
Original assignee: Nichirei Corp
Current assignee: Nichirei Corp
Priority date: 2000-04-20
Filing date: 2000-04-20
Publication date: 2001-10-30

Abstract

(57)【要約】【解決手段】ヒトＣＤ５７抗原と特異的に結合するク
ラスがＩｇＧであるモノクローナル抗体、及び該抗体を
産生するハイブリドーマが提供される。【効果】本抗体によればＣＤ５７の正確なアッセイが
できるので、ＣＤ５７を産生するＮＫ細胞のアッセイが
可能となり、そのうえ本抗体はクラスがＩｇＧであるた
め、取り扱い易いほか、免疫沈降等も可能である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＣＤ５７と特異的
に結合し、且つクラスがＩｇＧである新規モノクローナ
ル抗体及びその利用に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ＮＫ細胞（Natural killer Cell）は、
Ｔ細胞・Ｂ細胞などと同じくリンパ球のサブセットであ
る。ＮＫ細胞は主に骨髄中で造血幹細胞から成熟・分化
すると考えられている。ＮＫ細胞は抗原特異的受容体を
発現してはいないが、防御的免疫機能において重要な役
割を担っている。例えば、ＮＫ細胞は免疫的な刺激を受
けると、ある種のサイトカインを分泌して細胞障害活性
を示す。特に、特定のウイルス、細胞内細菌類、寄生
虫、種々の腫瘍細胞に対してこのような活性を有してい
る。

【０００３】一方、ＣＤ５７抗原は、ＮＫ細胞およびＴ
細胞の一部に発現する分子量１１０ｋＤａの分子として
発見された。ＣＤ５７陽性（ＣＤ５７抗原を発現する）
細胞は、ヒト正常末梢リンパ球の約１５％であり、その
割合は加齢とともに増すといわれている。またＣＤ５７
陽性細胞は骨髄や肝臓にも存在しているが、胸腺には存
在しない。最近の研究によれば、大腸菌、慢性リンパ性
白血病、ＡＩＤＳ、リウマチ性関節炎あるいは、腎臓・
心臓・骨髄移植後の患者では、ＣＤ５７陽性Ｔ細胞が増
加することが報告されている。

【０００４】これまで、ＮＫ細胞のマーカーとしては、
ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７などが、単独あるいは組
み合わせて用いられてきた。ＣＤ５７抗体は１９８１年
に安保らによって初めて作製されて以来、数種類のモノ
クローナル抗体が報告されている。しかしながら、その
いずれも、イムノグロブリンのサブクラスが、ＩｇＭで
あり、免疫沈降やウエスタンブロットなどには使用する
ことが不適であって、わずかにフローサイトメトリーな
ど限られた用途にしか使用できないものであった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】ＩｇＭは、サブユニッ
ト（ＩｇＭｓ）が５個結合したマクログロブリンであっ
て、分子量が大きく、一般的に取扱いにくいものであ
り、また、プロテインＡとの結合性も低いため、精製し
にくいという欠点を本質的に有しているが、ＩｇＧの場
合はこのようなことはない。

【０００６】また、モノクローナル抗体を用いる各種の
解析手法においても、イムノグロブリンのクラスがＩｇ
ＭよりもＩｇＧであることが有利な場合が多く、例え
ば、免疫沈降やウエスタンブロットなどにおいてはＩｇ
Ｇの方が有利である。また、フローサイトメトリーに用
いる際に必要となるモノクローナル抗体の各種蛍光物質
による標識操作においてもＩｇＧクラスのものの方が有
利な点が多い。そこで、本発明者は、ＣＤ５７抗原を認
識するイムノグロブリンのクラスがＩｇＧであるモノク
ローナル抗体を創製することにより、ＮＫ細胞の研究及
びＮＫ細胞が関与すると考えられる各種疾患の診断・治
療の発展に多大な寄与ができるものと考えるに至った。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、鋭意研究の結果、
イムノグロブリンのクラスがＩｇＧである新規のＣＤ５
７抗体を創製するに至り、本発明の完成に至ったもので
ある。以下、本発明について詳述する。

【０００８】目的とするモノクローナル抗体を産生する
ための融合細胞（以下、ハイブリドーマということもあ
る）を創製するため、本発明においては、免疫原として
ヒトの抹消血中のＮＫ細胞分画を用いることとする。す
なわち、自動細胞分離装置（FACS Vantageセルソータ
ー）を用いてヒト末梢血より、ＣＤ３陽性ＣＤ５６陽性
細胞及びＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性細胞を分離した後、そ
れらを混合し免疫原とする。

【０００９】免疫に使用する動物については、ヤギ、ヒ
ツジ、ウマ、ウサギ、ラット、マウス等の動物が挙げら
れるが、モノクローナル抗体を作成するためには融合に
用いる骨髄腫細胞との相性の問題により、通常、マウス
かラットが使用できる。免疫に際しては、免疫応答を促
進するために免疫原を各種アジュバンドと混合して使用
してもよい。免疫はある間隔で、マウスの腹腔、皮下、
あるいは静脈に、血清中の抗体価の上昇が明らかに認め
られるまで続け、最終免疫の数日後に、細胞融合のため
に脾臓を無菌的に摘出する。

【００１０】モノクローナル抗体を産生するハイブリド
ーマの作製は、（Koehler, G. andMilstein, C., Natur
e 256, 495(1975)）に準じて実施することができる。す
なわち、免疫動物から摘出した脾臓細胞、リンパ節細胞
又はＢリンパ球から選ばれる抗体産生細胞と骨髄腫細胞
を混合し、細胞融合促進剤の存在下で融合する。細胞融
合に用いる骨髄腫細胞はＰ３−Ａｇ８−γ、ｐ３−Ｘ６
３−Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ１、ＮＳＩ−Ａ
ｇ４／１、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５．３、ＳＰ２／０−
Ａｇ１４、ＭＰＣ１１−４５、６ＴＧ１．７、Ｓ１９４
／５ＸＸ０、ＢＵ．１等が用いられる。好ましい細胞融
合促進剤としては、例えば平均分子量が１０００〜６０
００のポリエチレングリコールなどが挙げられる。ま
た、電気パルスによる融合も可能である。

【００１１】次いで、ハイブリドーマの選択を次のよう
にして行う。細胞融合に使用する骨髄腫細胞は、８−ア
ザグアニン耐性株でヌクレオチド生合成のサルベージ系
路に必要なヒポキサンチン−グアニン−ホスホリボシル
トランスフェラーゼを欠くため、ＨＡＴ培地（ヒポキサ
ンチン、アミノプテリン、チミジンを含む培地）中では
ヌクレオチドの合成ができず、生き残れない。よって細
胞融合を行った後、ＨＡＴ培地にて１０〜１４日間培養
することにより、脾細胞と骨髄腫が融合したハイブリド
ーマのみを選択することができる。

【００１２】このようにして得たハイブリドーマの中か
ら、目的とする抗ＮＫ細胞抗体産生ハイブリドーマをス
クリーニングするため、ヒト末梢血中のＣＤ３陽性細胞
の約１０〜３０％程度と特異的に結合する抗体を産生す
るクローンを選択する。このクローンを用いることによ
って、モノクローナル抗体を得る事ができる。さらに、
これらのモノクローナル抗体のうち既存のＣＤ５７抗体
と同様の細胞群と反応しかつ、イムノグロブリンのクラ
スがＩｇＧであるものを選択する。

【００１３】このようにしてヒトＣＤ５７抗原と特異的
に反応することができ、イムノグロブリンのクラスがＩ
ｇＧであるＣＤ５７抗体を安定的に産生できるハイブリ
ドーマを得た。このようにして得たハイブリドーマは、
ＪＮＫ−１と命名し、これを工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託した（ＦＥＲＭＰ−１７８１３）。

【００１４】モノクローナル抗体の製造は、ハイブリド
ーマを血清添加培地ならびに無血清培地にて培養するイ
ン・ビトロ法、あるいはハイブリドーマをマウス腹腔に
移植して、腹水を採取する、イン・ビボ法にて行い、硫
安塩析、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交
換カラムクロマトグラフィー、分子篩カラムクロマトグ
ラフィー、プロテインＡカラムクロマトグラフィー、抗
原固定化カラムクロマトグラフィー等によって精製でき
る。得られたモノクローナル抗体は、免疫沈降法等によ
って、目的とするＣＤ５７抗体であることが確認され
た。

【００１５】このようにして作製した抗体は、ヒトＣＤ
５７に対する特異性がきわめて高く、ＣＤ５７を特異
的、選択的に認識して反応し、これと結合する特質を有
するため、本抗体を利用して各種方法によってヒトＣＤ
５７のイムノアッセイを行うことができる。したがっ
て、本抗体を利用することによって、ＣＤ５７産生細
胞、ＣＤ５７含有細胞のイムノアッセイも可能となり、
例えばＮＫ細胞のイムノアッセイを迅速、正確に行うこ
とが可能となる。

【００１６】イムノアッセイとしては、既述したよう
に、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩ
Ａ）、蛍光免疫測定法、化学発光免疫測定法、免疫組織
化染色法、免疫沈降法その他が例示され、本抗体を第一
抗体及び／又は酵素標識した第二抗体として使用すれば
よい。

【００１７】標識物質としては、酵素、蛍光物質、発光
物質、放射性物質などがあげられる。また、本発明に係
るイムノアッセイにおいて、酵素標識抗体を使用するほ
か、アビジン−ビオチン系を利用して、酵素標識抗体に
かえてビオチン標識した抗体を用い、そして酵素として
アビジン標識酵素を用いてアッセイ系を組み立ててもよ
い。アビジンとしては、卵白由来のアビジン、微生物由
来のアビジン（例えばストレプトアビジン）等がいずれ
も使用可能である。

【００１８】標識酵素としては、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼ（ＨＲＰ）、ウシ小腸アルカリフォスファター
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオ
キシダーゼ等の酵素免疫分析法（ＥＩＡ）に常用される
酵素が適宜使用され、これらの酵素に適合したＥＩＡで
常用される発色基質が適宜使用される。発色基質として
は、例えばＨＲＰの場合は、３，３，５，５−テトラメ
チルベンジジン（ＴＭＢＺ）、ＴＭＢＺ・ＨＣｌ、ＴＭ
ＢＺ・ＰＳ、ＡＢＴＳ、ｏ−フェニレンジアミン、ｐ−
ヒドロキシフェニル酢酸等が使用され、アルカリフォス
ファターゼの場合は、ｐ−ニトロフェニルフォスフェー
ト、４−メチルウンベリフェリルフォスフェート等が使
用され、β−ガラクトシダーゼの場合は、ｏ−ニトロフ
ェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、４−メチルウン
ベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等が使用さ
れる。

【００１９】蛍光物質としては、フロオレッセインイソ
チオシアネート、テトラメチルローダミンイソチオシア
ネートなど、発光物質としては、ルミナール、アクリジ
ニウムエステル、ルシフェリンなど、また、放射性物質
としては、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、¹⁴Ｃ、³Ｈ、³⁵Ｓなどを使用
することができるが、これら例示したものに限らず、免
疫測定法に使用しうるものであれば、他の物質も使用す
ることができる。

【００２０】また本発明は、ヒトＣＤ５７抗原と特異的
に結合するクラスがＩｇＧである新規モノクローナル抗
体、それを利用するヒトＣＤ５７の検出、測定方法、ひ
いてはそれを発現生成している細胞（例えばＮＫ細胞）
の染色、検出、測定方法を新たに提供するだけでなく、
抗ヒトＣＤ５７抗体、標識化抗ヒトＣＤ５７抗体、抗Ｎ
Ｋ細胞抗体、標識化抗ＮＫ細胞抗体、酵素基質、発色試
薬、緩衝液、その他必要な物質を含有するヒトＣＤ５７
（又はその産生ないし含有細胞）測定用キットも提供す
るものである。

【００２１】以下、本発明の実施例について述べる。

【００２２】

【実施例１；モノクローナル抗体の作製】ヒトＣＤ５７
と特異的に結合するサブクラスがＩｇＧであるモノクロ
ーナル抗体を以下により作製した。

【００２３】（１）免疫原の作製自動細胞分離装置（FACS Vantageセルソーター）を用い
てヒト末梢血より、ＣＤ３陽性ＣＤ５６陽性細胞及びＣ
Ｄ３陽性ＣＤ５７陽性細胞を分離した後、それらを混合
し免疫原とした。

【００２４】（２）ハイブリドーマの作製ハイブリドーマ（融合細胞）の作製は次のようにして行
った。

【００２５】ａ）免疫および細胞融合Ｂａｌｂ／ｃマウスに上記の細胞を数回投与した後、免
疫されたマウスの脾細胞とマウス骨髄腫由来細胞株（Ｐ
３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ１；Ｐ３Ｕ１）を細胞融合促進
剤としてポリエチレングリコールを用い、常法にしたが
って細胞融合した。次いでＨＡＴ培地（１×１０^-4Ｍ
ヒポキサンチン、４×１０^-7Ｍアミノプテリン、１．
６×１０^-3Ｍチミジン含有）にて培養し、生育したク
ローンを脾細胞と骨髄腫細胞が融合したハイブリドーマ
として選択した。

【００２６】ｂ）ＣＤ５７抗体産生ハイブリドーマのス
クリーニング上記で得たハイブリドーマの中から、抗ＮＫ細胞抗体産
生ハイブリドーマのスクリーニングとして、ヒト末梢血
中のＣＤ３陽性細胞の約１０〜３０％程度と特異的に結
合する抗体を産生するクローンを選択した。さらに既存
のＣＤ５７抗体と同様の反応性を示しかつイムノグロブ
リンのクラスがＩｇＧであるものを選択した。その結
果、クローンＪＮＫ−１を得た。このようにして得た抗
ＮＫ細胞抗体産生ハイブリドーマのクローンＪＮＫ−１
を工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭＰ−
１７８１３として寄託した。

【００２７】ＪＮＫ−１を少量培養した後、マウス腹腔
中にこれを投与し、１４日後に腹水を採取した。このマ
ウスの腹水液からアフィニティークロマトグラフィーを
用いて精製した。

【００２８】

【実施例２：抗体の性質】ハイブリドーマＪＮＫ−１が
産生するモノクローナル抗体であるＪＮＫ−１抗体のサ
ブクラスを、オクタローニー法を用いて検定した結果、
ＩｇＧ１であり、Ｌ鎖の可変領域はκ鎖であった。また
この点は、ハイブリドーマＪＮＫ−１の培養上清を用
い、マウスモノクローナルタイピングキット（The Bind
ing Site社製）にてマウス免疫グロブリンのクラス、サ
ブクラスの同定を行った結果からも、ＩｇＧ１であるこ
とが確認された。

【００２９】

【実施例３：ヒト末梢血リンパ球との反応性（１）】Ｊ
ＮＫ−１抗体がヒト抹消血リンパ球のどのような集団を
認識しているのか詳細に調べるために、フローサイトメ
トリーにて２重染色の解析を行った（Ａ）。試験は、既
存のＣＤ５７抗体についても同様に行い（Ｂ）、ＣＤ３
陽性細胞群及びＣＤ３陰性細胞群において両者は同様の
反応性を示した（図１）。また、既存のＣＤ５７抗体で
あるＨＮＫ−１抗体とＪＮＫ−１との２重染色を行った
ところ（Ｃ）、両者は同じ細胞群を認識していることが
明らかとなった（図２）。

【００３０】

【実施例４：ヒト末梢血リンパ球との反応性（２）】さ
らに詳細にＪＮＫ−１抗体とＣＤ５７抗体との反応性の
比較を行うため、ヒト末梢血リンパ球においてＣＤ３、
ＣＤ５７、ＪＮＫ−１の３重染色の解析をフローサイト
メトリーにて行った。図３に示すとおり、ＣＤ３陰性Ｃ
Ｄ５７陽性細胞（Ａ）、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陽性細胞
（Ｂ）、ＣＤ３陽性ＣＤ５７陰性細胞（Ｃ）、ＣＤ３陰
性ＣＤ５７陰性細胞（Ｄ）の４分画におけるＪＮＫ−１
抗体の反応性は、陽性（Ａ）、陰性（Ｂ）、陰性
（Ｃ）、陽性（Ｄ）であり、ＣＤ５７抗体の反応性と完
全に一致した。

【００３１】

【実施例５：結合阻害試験】さらにＪＮＫ−１抗体が既
存のＣＤ５７抗体と同じエピトープを認識するのかを確
認するためにヒト白血病細胞株ＳＵＰＴ−１及びヒト末
梢血リンパ球（ＰＢＬ）を用いて結合阻害試験を行っ
た。まず、各細胞を高濃度の未標識抗体と反応させた
後、蛍光標識したＪＮＫ−１抗体あるいは既存のＣＤ５
７抗体２クローン（ＤＤ５７／ＨＮＫ−１、ＣＤ５７／
ＮＣ１：いずれもサブクラスはＩｇＭである。）を反応
させた後、フローサイトメトリーにて解析を行った（図
４）。

【００３２】蛍光標識化は常法にしたがい次のようにし
て行った。抗体溶液を０．０５Ｍ炭酸バッファー（ｐＨ
９．５）に交換し、１ｍｇ／ｍｌに調製後、ＦＩＴＣ
（ベクトンディッキンソン、Fluorescein Isothiocya
nate Isomer）をＤＭＳＯに溶解（１〜２ｍｇ／ｍｌ）
し、抗体溶液をゆるやかに撹拌しながら添加した。４℃
で１晩撹拌（遮光下）した後、反応液をＳｅｐｈａｄｅ
ｘＧ−２５カラムにかけて未反応ＦＩＴＣを除去し
て、ＦＩＴＣ標識抗体をそれぞれ得た。

【００３３】得られた結果を図４に示したが、図４に示
すとおり、ＳＵＰＴ−１細胞（Ａ）、末梢血リンパ球
（Ｂ）においていずれも既存の２種類のＣＤ５７抗体は
ＪＮＫ−１抗体の反応を阻害した。この結果から、ＪＮ
Ｋ−１抗体はＣＤ５７抗体と同じ分子を認識することが
明らかとなった。

【００３４】

【実施例６：ウエスタンブロット】ＪＮＫ−１抗体の認
識する分子の分子量を測定するためにウエスタンブロッ
トを行った。ＣＤ５７陽性ヒト白血病細胞株ＳＵＰＴ−
１およびＣＤ５７陰性ヒト白血病細胞株ＳＵＰＴ−１３
の細胞可溶化液を常法に従ってＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、メ
ンブレンに転写し、ＪＮＫ−１抗体およびＣＤ５７抗体
で検出した。図５に示すように、ＳＵＰＴ−１細胞にお
いてＪＮＫ−１抗体（３）、ＣＤ５７抗体（４）ともに
１１０ｋＤａの位置にバンドを検出した。この結果から
ＪＮＫ−１抗体の認識する分子はＣＤ５７と同じ１１０
ｋＤａの分子であることが明らかとなった。図５（写
真）から明らかなように、ＳＵＰＴ−１３細胞において
は、ＪＮＫ−１抗体（１）、ＣＤ５７抗体（２）ともに
１１０ｋＤａの位置にバンドは検出されていない。

【００３５】

【実施例７：免疫沈降】ＳＵＰＴ−１細胞（陽性細胞）
及びネガティブコントロールとしてのＳＵＰＴ−１３細
胞（陰性細胞）を、マウスＩｇＧ１抗体、ＪＮＫ−１抗
体で免疫沈降し、ＣＤ５７／ＨＮＫ−１抗体で検出し
た。

【００３６】すなわち、ＳＵＰＴ−１細胞（陽性細胞）
及びＳＵＰＴ−１３細胞（陰性細胞）の細胞可溶化液を
マウスＩｇＧ１抗体あるいは、ＪＮＫ−１抗体と反応さ
せた。Protein G-Sepharose （ファルマシア）にて添加
した抗体及びそれと反応している分子を沈降させた。こ
れを、SDS−PAGEに供した後、常法に従って、メンブレ
ンに転写した。

【００３７】メンブレンをCD５７／HNK−１抗体と反応
後、0.05％Ｔween-20を含むPBS溶液（食塩を含むリン酸
緩衝液）にて数回洗浄後、ぺルオキシダーゼ標識した抗
マウスＩｇＭ抗体及び発色系としてＥＣＬ化学発光シス
テム（ファルマシア）を用いて可視化し、得られた結果
を図６（写真）に示した。

【００３８】図中、各レーンはそれぞれ次のものを示
す。レーン（１）：ＳＵＰＴ−１細胞のCrude membrane
protein。レーン（２）：ＳＵＰＴ１３細胞のCrude me
mbraneprotein。レーン（３）、（４）：マウスＩｇＧ
１抗体で免疫沈降したＳＵＰＴ−１細胞及びＳＵＰＴ−
１３細胞のmembrane protein。レーン（５）、（６）：
ＪＮＫ−１抗体で免疫沈降したＳＵＰＴ−１細胞及びＳ
ＵＰＴ−１３細胞のmembrane protein。図面から明らか
なように、ＪＮＫ−１抗体で免疫沈降したレーン（５）
に、レーン（１）と同じ１１０ｋＤａのバンドが検出さ
れた。

【００３９】以上のように、ＪＮＫ−１抗体が免疫沈降
法に使用できるかを調べた。図６に示すようにＪＮＫ−
１抗体によってＳＵＰＴ−１細胞の可溶化液から免疫沈
降された１１０ｋＤａの分子は、ウエスタンブロットに
より既存のＣＤ５７抗体によって検出することができ
た。この結果から、ＪＮＫ−１抗体は免疫沈降が可能な
新たなＣＤ５７抗体であることが明らかとなった。

【００４０】

【実施例８：各種細胞との反応性】さらに、ＪＮＫ−１
抗体が既存のＣＤ５７抗体と同様にフローサイトメトリ
ーにおいて各種の細胞におけるＣＤ５７分子の発現を検
出できるかを調べた。図７に示すように各種の細胞にお
いてＪＮＫ−１抗体（Ａ）は既存のＣＤ５７抗体（Ｂ）
と同様の反応性を示した。

【００４１】

【発明の効果】本発明によってはじめて、イムノグロブ
リンのクラスがＩｇＧであるＣＤ５７抗体が作製され
た。本抗体は既存のＣＤ５７抗体と同じ分子を認識し
て、フローサイトメトリーなどで同様に使用できるばか
りでなく、イムノグロブリンのクラスがＩｇＧである特
徴から、ウエスタンブロットや免疫沈降を容易に行うこ
とが可能である。その結果、細胞レベルでのＣＤ５７分
子あるいはＮＫ細胞の解析をより効果的に行うことがで
きるようになった。本抗体は、既存のＣＤ５７抗体に替
わってより広い分野の研究あるいは白血病その他の疾病
の診断に使用することが可能であり、ＮＫ細胞を用いた
新たな癌治療方法などの開発において有用なものである
と期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒト末梢血とＪＮＫ−１抗体の反応性を示した
図面である。

【図２】ヒト末梢血をＪＮＫ−１抗体と既存のＣＤ５７
抗体で２重染色した後、フローサイトメトリーを用いて
解析した図面である。

【図３】ヒト末梢血をＪＮＫ−１抗体と既存のＣＤ５７
抗体及びＣＤ３抗体で３重染色した後、フローサイトメ
トリーを用いて解析した図面である。

【図４】ヒト末梢血およびＳＵＰＴ−１細胞を用いて、
既存のＣＤ５７抗体２クローンとＪＮＫ−１抗体の間で
結合阻害試験を行い、フローサイトメトリーを用いて解
析した図面である。

【図５】白血病細胞株を用いて、ＪＮＫ−１抗体の認識
する分子をウエスタンブロットにより解析した図面代用
写真である。

【図６】ＪＮＫ−１抗体を使った免疫沈降反応の後、ウ
エスタンブロットにより解析した図面代用写真である。

【図７】各種細胞とＪＮＫ−１抗体との反応性を既存の
ＣＤ５７抗体と比較して表わした図面である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｃ１２Ｒ 1:91） //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＣＣ１２Ｒ 1:91） 5/00 Ｂ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒトＣＤ５７抗原と特異的に結合し、ク
ラスがＩｇＧであることを特徴とするモノクローナル抗
体。
【請求項２】サブクラスがＩｇＧ１であることを特徴
とする請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】請求項１又は２に記載のモノクローナル
抗体を産生することができるハイブリドーマ。
【請求項４】ハイブリドーマＪＮＫ−１。
【請求項５】請求項１又は２に記載のモノクローナル
抗体を使用することを特徴とするヒトＣＤ５７の測定方
法。
【請求項６】請求項１又は２に記載のモノクローナル
抗体を使用することを特徴とするＮＫ細胞由来のヒトＣ
Ｄ５７の測定方法。
【請求項７】請求項１又は２に記載のモノクローナル
抗体を含有することを特徴とするヒトＣＤ５７測定用キ
ット。