JPH07330800A - ビタミンｄ受容体に対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、従来の抗体とは特異性が異な
り、ビタミンＤの作用機構の解明に有用な抗ＶＤＲ抗体
を提供することを目的とする。 【構成】 下記の（１）〜（３）の特徴を有するビタ
ミンＤ受容体に対して結合性を有するモノクローナル抗
体に関する。 （１）ビタミンＤ受容体のＣ端付近アミノ酸配列を認識
する。 （２）ビタミンＤが結合していないビタミンＤ受容体を
強く認識する。 （３）核膜上および細胞質に存在するビタミンＤ受容体
も強く認識する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ビタミンＤ受容体に対
する新規なモノクローナル抗体に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来の研究から、ビタミンＤの作用は主
に核内に存在するビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）を介して
発現すると考えられている。ヒトＶＤＲのクローニング
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85,3294-3298(1988)）以
来、ＶＤＲと遺伝子制御機構の解析を含むＶＤＲのＤＮ
Ａ結合ドメインの解析は飛躍的な進歩を遂げている。し
かし、細胞質内にあるビタミンＤとＶＤＲの動態、ビタ
ミンＤの核外作用（non-genomic action）などのビタミ
ンＤの作用機構にはまだまだ不明な点が多い。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】抗ＶＤＲ抗体は、ビタ
ミンＤの作用機構を解明するための道具（ツール）とし
て重要である。従来、抗ＶＤＲ抗体としては、Pike の
グループが取得した Chicken Intestinal ＶＤＲに対す
るモノクローナル抗体（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,79,77
19-7723(1982)）と Deluca のグループが取得した Porc
ine Intestinal ＶＤＲに対するモノクローナル抗体（B
iochemistry,25,4523-4534(1986)）が知られている。し
かしながら、従来取得されている抗ＶＤＲ抗体はＶＤＲ
のＮ端側のＤＮＡ結合ドメインを認識するものであり、
その他の部位を認識するものは取得されていない。した
がって、本発明は、従来の抗体とは特異性が異なり、ビ
タミンＤの作用機構の解明に有用な抗ＶＤＲ抗体を提供
することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するため鋭意研究を重ねた結果、ヒトＶＤＲの３
３８〜３５２番目のアミノ酸配列に相当する１４アミノ
酸残基からなるペプチドを抗原として用いることによ
り、目的とする新規な抗体を取得することに成功し、本
発明を完成させた。したがって、本発明は、ＶＤＲに対
して結合性を有し、新規な特徴を有するモノクローナル
抗体に関するものである。以下、本発明について説明す
る。

【０００５】１．本発明抗体の特性 本発明のモノクローナル抗体は、下記の（１）〜（３）
の特徴を有するＶＤＲに対して結合性を有するモノクロ
ーナル抗体であって、その他の特性は何ら制限されるも
のではない。 （１）ＶＤＲのＣ端付近アミノ酸配列を認識する。ＶＤ
ＲのＣ端付近アミノ酸配列としては、ヒトＶＤＲのＣ端
側のビタミンＤ結合ドメインと考えられている部位、具
体的にはヒトＶＤＲの３３８〜３５２番目のアミノ酸配
列を例示することができる。 （２）ビタミンＤが結合していないＶＤＲを強く認識す
る。 （３）核膜上および細胞質に存在するＶＤＲも強く認識
する。

【０００６】２．本発明抗体の製造法 上述の本発明のモノクローナル抗体は公知の方法を適宜
応用することにより製造することができる。使用する免
疫原は、ＶＤＲ自体、またはＶＤＲのＣ末端部またはそ
の付近のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含有す
るペプチドである。具体的にはヒトＶＤＲの３３８〜３
５２番目のアミノ酸配列の一部または全部に相当するア
ミノ酸残基を有するペプチドを例示することができる。
また、合成したペプチドの抗原性が乏しい場合には、ウ
シ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン
などのハプテン抗原の抗体製造に常用されている高分子
担体との複合体を免疫原として用いるのが好ましい。

【０００７】免疫原を投与する動物としては、ウシ、ウ
マ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、イ
ヌ、ブタ、ウサギ、サル、ハト、ニワトリなどいずれで
あってもよく、特にマウス、ラット、モルモット、ウサ
ギ、ヤギなどが使用上好都合である。このような動物へ
の免疫原の投与は常法に従って行えばよく、たとえば、
完全フロインドアジュバンド、不完全フロインドアジュ
バンド、ミョウバンアジュバンド、水酸化アルミニウム
アジュバンド、百日咳菌アジュバンドなどの各種アジュ
バンドと上述の免疫源とのエマルジョンを調製し、これ
を上記動物の静脈内、腹腔内、皮下または皮内に投与す
ればよい。

【０００８】投与量は、動物としてウサギ、モルモット
を使用する場合には蛋白量として０．０１〜１０ｍｇ／
匹、またはマウス、ラットを使用する場合には、０．０
０１〜１ｍｇ／匹程度が好適である。初回投与後、１〜
４週間おきに１〜５回程度の上記と同様の追加免疫を行
うことにより、動物体内で免疫原に対する抗体の産生を
誘導する。次に、抗体の産生を誘導した動物から脾細
胞、リンパ節細胞、末梢血リンパ球などの抗体産生細胞
を常法により取得する。

【０００９】抗体産生細胞と融合させるミエローマ細胞
としては、マウス、ラット、ヒトなどの種々の動物に由
来し、当業者が一般に入手可能な株化細胞を使用する。
使用する細胞株としては、薬剤抵抗性を有し、未融合の
状態では選択培地で生存できず、抗体産生細胞と融合し
た状態でのみ生存できる性質を有するものが好ましい。
通常、８−アザグアニン耐性株が用いられ、この細胞株
はヒポキサンチン−グアニンホスフォリボシルトランス
フェラ−ゼ（hypoxanthine guanine phosphoribosyl tr
ansferase）を欠損し、ヒポキサンチン・アミノプテリ
ン・チミジン（ＨＡＴ）培地に生育できない。また細胞
の性質として免疫グロブリンを分泌しない、いわゆる非
分泌型の細胞株であることが好ましい。

【００１０】ミエローマ細胞株の具体例としては、Ｐ３
ｘ６３Ａｇ８（ＡＴＣＣ ＴＩＢ−９）（Nature, 256,
495-497 (1975)）、Ｐ３ｘ６３Ａｇ８Ｕ．１（Ｐ３Ｕ
１）（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５９７）（Current Topics
in Microbiology and Immunology, 81, 1-7 (197
8)）、Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−
１５８０）（J.Immunology, 123, 1548-1550 (197
9)）、Ｐ２／ＮＳＩ／１−Ａｇ４−１（ＡＴＣＣ ＴＩ
Ｂ−１８）（Europian J. Immunology, 6, 511-519 (19
76)）、Ｓｐ２／Ｏ−Ａｇ１４（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１
５８１）（Nature, 276,269-270 (1978)）などのマウス
ミエローマ細胞株、２１０．ＲＣＹ．Ａｇ１．２．３
（Ｙ３−Ａｇ１．２．３）（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６３
１）（Nature, 277,131-133 (1979)）などのラットミエ
ローマ細胞株、Ｕ−２６６−ＡＲ１（Proc.Natl. Acad.
Sci. U.S.A., 77, 5429(1980)）、ＧＭ１５００（Natu
re, 288, 488 (1980)）、ＫＲ−４（Proc. Natl. Acad.
Sci. U.S.A.,79, 6651 (1982)）などのヒトミエローマ
細胞株を例示することができる。

【００１１】細胞融合にあたっては、抗体産生細胞に適
合したミエローマ細胞を選定する。細胞融合は、イーグ
ルの最少必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ変法イーグル
培地（ＤＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０培地などの動物
細胞培養用培地中で１０⁶〜１０⁸細胞／ｍｌのミエロー
マ細胞と抗体産生細胞を混合比１：４〜１０に混合し、
３７℃で１〜１０分間細胞同士を接触させることにより
効率よく融合を行うことができる。細胞融合を促進させ
るため、平均分子量１，０００〜６，０００のポリエチ
レングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニールアルコール、
センダイウイルスなどの融合促進剤を使用することがで
きる。また、電気パルスを利用した市販の細胞融合装置
を用いて抗体産生細胞とミエローマ細胞を融合させるこ
ともできる。

【００１２】細胞融合処理後の細胞から目的とするハイ
ブリドーマを選別する手段としては、選択的培地におけ
る細胞の選択的増殖を利用する方法を用いることができ
る。たとえば、細胞懸濁液を１５％ウシ胎児血清（ＦＣ
Ｓ）含有ＲＰＭＩ−１６４０培地などで適当に希釈後、
マイクロプレート上に１０³〜１０⁶細胞／ウェル程度ま
き、各ウェルに選択培地（たとえば、ＨＡＴ培地など）
を加え、以後適当に選択培地を交換して培養を行う。ミ
エローマ細胞として８−アザグアニン耐性株、選択培地
としてＨＡＴ培地を用いた場合は、未融合のミエローマ
細胞は培養１０日目ぐらいまでに死滅し、正常細胞であ
る抗体産生細胞もインビトロ（in vitro）では長期間生
育できないので、培養１０〜１４日目から生育してくる
細胞をハイブリドーマとして得ることができる。

【００１３】ＶＤＲに対して結合性を有するモノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマの検索は、酵素免疫
測定法（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ
（ＲＩＡ）などによって行うことができる。たとえば、
免疫源として使用したＶＤＲまたはそのペプチド（高分
子担体との複合体をも含む）を抗原として吸着させた９
６ウェルＥＬＩＳＡ用マイクロプレートにモノクローナ
ル抗体を含む培養上清を添加して抗原と反応させ、次い
で結合した特異抗体に酵素標識抗免疫グロブリン抗体を
反応させるか、あるいはビオチン標識抗免疫グロブリン
抗体を反応させたのちアビジンＤ−酵素標識体を反応さ
せ、次いでいずれの場合とも各ウェルに酵素基質を加え
て発色させる。免疫源として使用したＶＤＲまたはその
ペプチド（高分子担体との複合体をも含む）を固定化し
たウェルのみで発色する培養上清を選別することによ
り、ＶＤＲに対して結合性を有する抗体を産生するハイ
ブリドーマを検索することができる。

【００１４】ハイブリドーマのクローニングは、限界希
釈法、軟寒天法、フィブリンゲル法、蛍光励起セルソー
ター法などにより行うことができる。このようにして取
得したハイブリドーマからモノクローナル抗体を産生す
る方法としては、通常の細胞培養法や腹水形成法などが
採用されうる。細胞培養法においては、ハイブリドーマ
を１０〜１５％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ−１６４０培地、無
血清培地などの動物細胞培養用培地中で通常の方法で培
養し、その培養上清液から抗体を取得することができ
る。腹水から回収する方法では、ハイブリドーマと腫瘍
組織適合性が一致する動物に、プリスタン（２，６，１
０，１４−テトラメチルペンタデカン）などの鉱物油を
腹腔内に投与した後、たとえばマウスの場合にはハイブ
リドーマを約１０⁶細胞／匹腹腔内投与する。ハイブリ
ドーマは１０〜１８日ほどで腹水腫瘍を形成し、血清お
よび腹水中に高濃度に抗体を生産する。

【００１５】抗体の精製が必要とされる場合には、硫安
塩析法、ＤＥＡＥセルロースなどの陰イオン交換体を利
用するイオン交換クロマトグラフィー、プロテインＡ−
セファロースなどを用いるアフィニティークロマトグラ
フィー、分子ふるいクロマトグラフィーなどの公知の方
法を適宜に選択し、組み合わせることにより精製するこ
とができる。

【００１６】２．本発明抗体の利用可能性 本発明の抗体は、ヒトを含む動物由来の細胞組織中のＶ
ＤＲの検出に使用することができる。このような検出に
本発明のモノクローナル抗体を使用する場合、抗体の標
識方法及び標識化した抗体を使用した検出方法は免疫組
織診断法において常用されている方法をそのまま適用す
ることができる。すなわち、使用する抗体は抗体そのも
のであってもよいが、非特異的な吸着を防止する意味か
ら抗体の活性フラグメントを使用するのが好ましい。抗
体の活性フラグメントは、抗体の特徴を保持するもの
（たとえば、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどの
各種フラグメント）であればいずれのものであってもよ
い。これら活性フラグメントの調製は、精製抗体をパパ
イン、ペプシン、トリプシンなどのプロテアーゼを用い
て限定分解する方法など公知の方法を適用して行うこと
ができる（たとえば「免疫生化学研究法（続生化学実験
講座５）」、日本生化学会編、８９頁（１９８６年）参
照）。

【００１７】抗体に結合させる標識剤としては、放射性
同位体（たとえば³²Ｐ、³Ｈ、¹⁴Ｃ、¹²⁵Ｉなど）、酵素
（たとえばβ−ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ、
アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒ
ドロゲナーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼ、
乳酸オキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、モノアミ
ンオキシダーゼなど）、補酵素・補欠分子族（たとえ
ば、ＦＡＤ、ＦＭＮ、ＡＴＰ、ビオチン、ヘムなど）、
フルオレセイン誘導体（たとえば、フルオレセインイソ
チオシアネート、フルオレセインチオフルバミルな
ど）、ローダミン誘導体（たとえば、テトラメチルロー
ダミンＢイソチオシアネートなど）、ウムベリフェロン
および１−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸などの
蛍光色素、ルミノ−ル誘導体（たとえば、ルミノール、
イソルミノール、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−エ
チルイソルミノールなど）などを用いることができる。

【００１８】抗体またはその活性フラグメントと標識剤
との結合は、成書〔たとえば、「続生化学実験講座５免
疫生化学研究法」（株）東京化学同人、（１９８６年発
行）第１０２〜１１２頁〕に記載されているような公知
の方法から適宜選択して実施すればよい。このようにし
て調製した標識化抗体を常法にしたがって組織標本に作
用させ、抗体に結合させた標識剤を視覚化することによ
り組織中のＶＤＲを検出することができる。

【００１９】上記検出法において標識剤として酵素を用
いた場合、キットとしては下記の構成試薬をとりうる。 酵素標識化抗体 基質溶液 また、上記キットの変形としてビオチンーアビジン法を
採用すれば、キットは下記の試薬から構成される。 ビオチン化抗体 アビジン化酵素 基質溶液 なお、上記のキットにおいて、「抗体」とは本発明のモ
ノクローナル抗体であることはいうまでもない。

【００２０】

【発明の効果】本発明のモノクローナル抗体は、前述し
たような従来取得されている抗体とは異なる特異性を有
し、今後のＶＤＲ研究の重要なツールとなり得る。ま
た、ＶＤＲを測定する際の抗体試薬としても有用であ
る。

【００２１】

【実施例】

実施例１ （１）ペプチドの調製 ベーカー（Baker）らの報告（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,
85,3294-3298(1988)）をもとに、通常の固相法により図
１に示すペプチドを合成した。 （２）免疫原の調製 上記で合成したペプチド抗原１．５ｍｇとウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）２ｍｇを１．５ｍｌの０．２Ｍリン酸
緩衝液ｐＨ７．０に溶解させた後、最終濃度０．２％の
グルタルアルデヒドを加え、室温３時間反応させた。反
応後、生理食塩水に対し４℃、２日間透析した。また、
アッセイ用にはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の代わり
に、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を使って合成し
た。

【００２２】（３）モノクローナル抗体の調製 上記ペプチドーＢＳＡ複合体５０μｇを５０μｌの生理
食塩水に溶解させたものと完全フロイントアジュバント
を１：１で混合してエマルジョンとし、Balb/cマウスの
腹腔内に投与して初回免疫とした。初回免疫後、１ヶ月
おきに数回、同様の方法で免疫した後、最終免疫として
１０μｇを尾静脈に投与した。最終免疫から３日後にマ
ウスの脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ−１６４０培地で洗浄し
て脾細胞浮遊液を調製した。同時にマウスミエローマＰ
３ｘ６３Ａｇ８Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−
１５９７）をＲＰＭＩ−１６４０培地で洗浄し、脾細胞
とＰ３Ｕ１を１０：１で混合した後、遠心分離して得た
ペレットに５０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）１
０００含有ＲＰＭＩ−１６４０培地溶液１ｍｌを徐々に
加えて細胞融合を行った。さらに、ＲＰＭＩ−１６４０
培地溶液を加えて１０ｍｌとし、遠心分離して得たペレ
ットを１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）含有ＲＰＭＩ−１
６４０培地にＰ３Ｕ１として３ｘ１０⁴細胞／０．１ｍ
ｌとなるように懸濁させ、９６ウェルマイクロタイター
プレートに各ウェル０．１ｍｌずつ分注した。

【００２３】翌日、ヒポキサンチンーチミジンーアミノ
プテリン含有ＲＰＭＩ−１６４０培地（ＨＡＴ培地）を
０．１ｍｌ添加し、その後３〜４日ごとに培地の半分量
を新しいＨＡＴ培地で交換した。融合から１４日目にハ
イブリドーマのスクリーニングをした。すなわち、あら
かじめ前記ペプチドーＭＳＡ複合体（１μｇ／ｍｌ）を
コートし、３％ゼラチンＰＢＳでブロックした９６ウェ
ルマイクロプレートに上記の培養上清液を５０μｌずつ
添加した。次にビオチン化ウマ抗マウスＩｇＧ抗体（ベ
クター社製）を加えた後、アビジンＤーホースラディッ
シュペルオキシダーゼ（ベクター社製）、過酸化水素お
よび４ーアミノアンチピリンーフェノールを用いたＥＬ
ＩＳＡ法により陽性ウェルを選択した。次に、限界希釈
法によりハイブリドーマのクローニングを行い、本発明
のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ９Ｆ１
−２を確立した。このようにして得られた樹立株細胞９
Ｆ１−２の培養上清よりＩｇＧ画分を常法により精製
し、これを抗体として以下の試験に供した。

【００２４】（４）本発明抗体の特異性 本発明抗体の特異性の検討は、ウエスタンブロッティン
グにより行った。すなわち、ウシ乳腺由来ＶＤＲ（ヤマ
サ醤油株式会社製）およびリコンビナントヒトＶＤＲ
（Dr.J.W.Pikeから供与）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分
画し、ニトロセルロース膜に転写後、本発明抗体（９Ｆ
１−２）および公知の抗ＶＤＲ抗体（９Ａ７）［Dr.J.
W.Pike らが作製した Chicken Intestinal VDR に対す
るモノクローナル抗体（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,79,77
19-7723(1982)）：Affinity BioReagents 社製］を反応
させ、次にビオチン化抗体（二次抗体）を反応させ、反
応後ＡＢＣ法により染色した。その結果、図２に示すよ
うにウシ乳腺由来ＶＤＲを用いた場合、９Ａ７は５２Ｋ
ｄ付近のタンパク質（Whole VDR）を認識するのに対
し、本発明の９Ｆ１−２はその近傍に明瞭なバンドを示
さなかった。一方、図３に示すようにリコンビナントヒ
トＶＤＲを用いた場合、９Ａ７および９Ｆ１−２とも５
２Ｋｄ付近のタンパク質（Whole VDR）を認識した。ま
た、Human promyelocytic leukemic cells（ＨＬ−６
０）、ヒト骨肉腫細胞（ＭＧ−６３）およびマウス腸管
上皮から常法により調製した各ＶＤＲに対しても、本発
明抗体（９Ｆ１−２）の反応性はウシ乳腺由来ＶＤＲの
場合と同様であった。

【００２５】（５）ビタミンＤ結合能に対する本発明抗
体の影響 本発明抗体（９Ｆ１−２）の存在下または非存在下、ウ
シ乳腺由来ＶＤＲまたはリコンビナントヒトＶＤＲと一
定量の［³Ｈ］１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃とを一晩インキュ
ベートした後、ＤＤＣまたはハイドロキシアパタイト
（ＨＡＰ）を用いてＢ／Ｆ分離し、ＶＤＲと［³Ｈ］
１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃との結合における抗体の影響を検
討した。また、一定量の［³Ｈ］１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃
と過剰量の１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃（コールド）を用い、
上記各ＶＤＲへの競合反応における本発明抗体の影響も
検討した。その結果、図４に示されているようにウシ乳
腺由来ＶＤＲの場合、本発明抗体（１μｇ／ｍｌ）はい
ずれの場合でも影響を与えなかった。また、図５に示さ
れているようにリコンビナントヒトＶＤＲの場合、本発
明抗体（１μｇ／ｍｌ）はＶＤＲと［³Ｈ］１，２５
（ＯＨ）₂Ｄ₃との結合を５０％以下の阻害したが、［³
Ｈ］１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃と過剰量の１，２５（ＯＨ）
₂Ｄ₃（コールド）を用いたＶＤＲへの競合反応には何等
影響を与えなかった。なお、公知の抗体である９Ａ７
は、上記各ＶＤＲと［³Ｈ］１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃との
結合を強く阻害した。

【００２６】（６）細胞内局在の検討 チャンバースライド上で１０％ＦＣＳ添加αＭＥＭまた
は無添加αＭＥＭで培養したＭＧ−６３（ヒト骨肉腫細
胞）をBerger らの方法（J.Clin.Endocrinol.& Metab.,
67,607(1984)）に準じて固定化し、固定化細胞と各抗体
（９Ａ７および９Ｆ１−２）とを反応させ、以下、前述
のウエスタンブロッティングと同様の手法にて染色し
た。その結果、９Ａ７を用いた場合、培養条件に係わら
ず核内に発色（免疫反応）が認められることから、９Ａ
７は核内のＶＤＲを認識することが確認された。また、
９Ｆ１−２を用いた場合、１０％ＦＣＳ添加αＭＥＭで
培養した細胞は全般に発色が弱いものの核膜上に発色が
認められた。さらに、ＦＣＳ無添加αＭＥＭで培養した
細胞は細胞質に発色が認められた。なお、インジケータ
ーとしてグルコースオキシダーゼを用いた時の核膜上の
発色の様子を図６に示す。

【００２７】（７）考察 上記の試験結果から、本発明抗体はビタミンＤが結合し
ていないＶＤＲ（unoccupied VDR）に高い親和性を持つ
ものと考えられ、今後のＶＤＲ研究の重要なツールとな
り得る。

【００２８】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ヒトＶＤＲの構造と抗原として用いた
ペプチドを説明したものである。

【図２】図２は、ウシ乳腺由来ＶＤＲに対する本発明抗
体の反応性をウエスタンブロッティングにより検討した
結果を示したものである。

【図３】図３は、リコンビナントヒトＶＤＲに対する本
発明抗体の反応性をウエスタンブロッティングにより検
討した結果を示したものである。

【図４】図４は、ウシ乳腺由来ＶＤＲのビタミンＤ結合
能に対する本発明抗体の影響を検討した結果を示したも
のである。

【図５】図５は、リコンビナントヒトＶＤＲのビタミン
Ｄ結合能に対する本発明抗体の影響を検討した結果を示
したものである。

【図６】図６は、１０％ＦＣＳ添加αＭＥＭで培養した
ヒト骨肉腫細胞ＭＧ−６３におけるＶＤＲの細胞内局在
を示したものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の（１）〜（３）の特徴を有するビ
   タミンＤ受容体に対して結合性を有するモノクローナル
   抗体。 （１）ビタミンＤ受容体のＣ端付近アミノ酸配列を認識
   する。 （２）ビタミンＤが結合していないビタミンＤ受容体を
   強く認識する。 （３）核膜上および細胞質に存在するビタミンＤ受容体
   も強く認識する。
2. 【請求項２】 Ｃ端付近アミノ酸配列が３３８〜３５２
   番目に存在する配列である、請求項１記載のモノクロー
   ナル抗体。
3. 【請求項３】 ビタミンＤ受容体がヒト由来のものであ
   る、請求項１記載のモノクローナル抗体。