JP2001302700A

JP2001302700A - Ｎｋ細胞に対する新規抗体

Info

Publication number: JP2001302700A
Application number: JP2000120125A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Wakasugi; 尋若杉
Original assignee: Nichirei Corp
Current assignee: Nichirei Corp
Priority date: 2000-04-20
Filing date: 2000-04-20
Publication date: 2001-10-31

Abstract

(57)【要約】【解決手段】ヒトＮＫ細胞あるいは細胞傷害活性を有
する細胞群を認識する新規モノクローナル抗体、該抗体
を産生するハイブリドーマ、該抗体を用いる上記細胞の
測定システムが提供される。【効果】本抗体は、単独で、上記細胞を特異的に認識
することができ、また、細胞傷害活性を有する細胞群を
濃縮することも可能であり、癌治療などへの応用も期待
される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトＮＫ細胞（Na
tural Killer Cell）を認識する新しいモノクローナル
抗体及びその利用に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ＮＫ細胞は、Ｔ細胞・Ｂ細胞などと同じ
くリンパ球のサブセットである。ＮＫ細胞はおもに骨髄
中で造血幹細胞から成熟・分化すると考えられている。
ＮＫ細胞は抗原特異的受容体を発現してはいないが、防
御的免疫機能において重要な役割を担っている。例え
ば、ＮＫ細胞は免疫的な刺激を受けると、ＩＦＮ−γな
どのある種のサイトカインを分泌して細胞傷害活性を示
す。特に、特定にウイルス、細胞内細胞菌類、寄生虫、
種々の腫瘍細胞に対してこのような活性を有している。
ＮＫ細胞は形態学的には、アズール顆粒が多数見られる
ことから大顆粒リンパ球（Large granular lymphocyte,
LGL）と呼ばれる特徴を示す。これらの顆粒内には細胞
傷害を担うパーフォリンやグランザイムといった分子が
含まれていて傷害時に放出される。

【０００３】これまで、ＮＫ細胞のマーカーとしては、
ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７などが、単独あるいは組
み合わせて用いられてきたが、そのいずれもが、ＮＫ細
胞を包含的あるいは特異的に認識しているとはいえない
ものである。また、例えばＣＤ５７抗体は、１９８１年
に安保らによって初めて作製されて以来、いくつかのモ
ノクローナル抗体が報告されている。しかしながら、そ
のいずれも、イムノグロブリンのサブクラスがＩｇＭで
あるため、ＩｇＧとは異なり、分子量も大きくて取扱い
にくく、免疫沈降やウエスタンブロットなどに使用する
ことは不適である。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記のように、従来は
単独でしかもＮＫ細胞のみを特異的に認識し得る抗体が
開発されていないため、各種のマーカーを組み合わせな
ければＮＫ細胞の正確な検出、測定を行うことができな
いという技術の現状に鑑み、本発明者らは、単独でＮＫ
細胞を認識することができ、クラスがＩｇＧである、Ｎ
Ｋ細胞に特異的な新しい抗体を作製することにより、Ｎ
Ｋ細胞の研究及びＮＫ細胞の関与すると考えられる各種
疾患の診断・治療の発展に多大な寄与ができるものと考
えるに至った。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、鋭意研究の結果、
新規のＮＫ細胞を認識する抗体を創製するに至り、本発
明の完成に至ったものである。以下、本発明について詳
述する。

【０００６】目的とするモノクローナル抗体を産生する
ための融合細胞（以下、ハイブリドーマということもあ
る）を創製するため、本発明においては、免疫原として
ヒトの末梢血中のＮＫ細胞分画を用いることとする。す
なわち、自動細胞分離装置（FACS Vantageセルソータ
ー）より、ＣＤ３陽性ＣＤ５６陽性細胞及びＣＤ３陽性
ＣＤ５７陽性細胞を分離した後、それらを混合して免疫
原とする。

【０００７】免疫に使用する動物については、ヤギ、ヒ
ツジ、ウマ、ウサギ、ラット、マウス等の動物が挙けら
れるが、モノクローナル抗体を作製するためには融合に
用いる骨髄腫細胞との相性の問題により、通常、マウス
かラットが使用できる。免疫に際しては、免疫応答を促
進するために免疫原を各種アジュバントと混合して使用
してもよい。免疫はある間隔で、マウスの腹腔、皮下、
あるいは静脈に、血清中の抗体価の上昇が明らかに認め
られるまで続け、最終免疫の数日後に、細胞融合のため
に脾臓を無菌的に摘出する。

【０００８】モノクローナル抗体を産生するハイブリド
ーマの作製は、（Koehler, G. andMilstein, C., Natur
e 256, 495(1975)）に準じて実施することができる。す
なわち、免疫動物から摘出した脾臓細胞、リンパ節細胞
又はＢリンパ球から選ばれる抗体産生細胞と骨髄腫細胞
を混合し、細胞融合促進剤の存在下で融合する。細胞融
合に用いる骨髄腫細胞はＰ３−Ａｇ８−γ、ｐ３−Ｘ６
３−Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−ＡＧ８−Ｕ１、ＮＳＩ−Ａ
ｇ４／１、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５．３、ＳＰ２／０−
Ａｇ１４、ＭＰＣＩＩ−４５．６ＴＧ１．７、Ｓ１９４
／５ＸＸ０．ＢＵ．１等が用いられる。好ましい細胞融
合促進剤としては、例えば平均分子量が１０００〜６０
００のポリエチレングリコールなどが挙げられる。ま
た、電気パルスによる融合も可能である。

【０００９】次いで、ハイブリドーマの選択を次のよう
にして行う。細胞融合に使用する骨髄腫細胞は、８−ア
ザグアニン耐性株でヌクレオチド生合成のサルページ経
路に必要なヒポキサンチン−グアニン−ホスホリポシル
トランスフェラーゼを欠くため、ＨＡＴ培地（ヒポキサ
ンチン、アミノブテリン、チミジンを含む培地）中では
ヌクレオチドの合成ができず、生き残れない。よって細
胞融合を行った後、ＨＡＴ培地にて１０〜１４日間培養
することにより、脾細胞と骨髄腫が融合したハイブリド
ーマのみを選択することができる。

【００１０】このようにして得たハイブリドーマの中か
ら、目的とする抗ＮＫ細胞抗体産生ハイブリドーマをス
クリーニングするため、ヒト末梢血中のＣＤ３陽性細胞
の約１０〜３０％程度と特異的に結合する抗体を産生す
るクローンを選択する。このクローンを用いることによ
って、モノクローナル抗体を得る事ができる。さらに、
これらのモノクローナル抗体のうちで既存のＮＫ細胞マ
ーカー、例えば、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ
１６１などとは、反応性の異なるものを選択する。

【００１１】このようにして新規な抗ＮＫ細胞抗体を安
定的に産生できるハイブリドーマを得た。このようにし
て得たハイブリドーマは、９Ｆ９−１と命名し、これを
工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託した（ＦＥＲ
ＭＰ−１７８１２）

【００１２】モノクローナル抗体の製造は、ハイブリド
ーマを血清添加培地ならびに無血清培地にて培養するイ
ン・ビトロ法、あるいはハイブリドーマをマウス腹腔に
移植して、腹水を採取する、イン・ビボ法にて行い、硫
安塩析、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交
換カラムクロマトグラフィー、分子篩カラムクロマトグ
ラフィー、プロテインＡカラムクロマトグラフィー、抗
原固定化カラムクロマトグラフィー等によって精製でき
る。得られたモノクローナル抗体は、免疫沈降法等によ
って、ヒトＮＫ細胞に反応し、分子量１３０ｋＤａの分
子を認識する抗体であることが確認された。

【００１３】このようにして作製した抗体は、ヒトＮＫ
細胞に対する特異性がきわめて高く、ＮＫ細胞を特異
的、選択的に認識して反応し、これと結合する特質を有
するため、本抗体を利用して各種方法によってヒトＮＫ
細胞のイムノアッセイを行うことができる。したがっ
て、本抗体を利用することによって、他の抗体等を組み
合わせて使用することなく、本抗体単独で、ＮＫ細胞の
イムノアッセイを迅速、簡便、的確に行うことが可能と
なる。また、本抗体は、細胞傷害活性を有する細胞群
（換言すれば、ＮＫ細胞の大部分）を認識することも可
能であるので、該細胞群のイムノアッセイはもちろんの
こと、該細胞群の濃縮、分離、除去、精製等が可能とな
り、癌治療などへの応用が可能である。

【００１４】イムノアッセイとしては、既述したよう
に、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩ
Ａ）、蛍光免疫測定法、化学発光免疫測定法、免疫組織
化学染色法、免疫沈降法その他が例示され、本抗体を第
一抗体及び／又は酵素標識した第二抗体として使用すれ
ばよい。

【００１５】標識物質としては、酵素、蛍光物質、発光
物質、放射性物質などがあげられる。また、本発明に係
るイムノアッセイにおいて、酵素標識抗体を使用するほ
か、アビジン−ビオチン系を利用して、酵素標識抗体に
かえてビオチン標識した抗体を用い、そして酵素として
アビジン標識酵素を用いてアッセイ系を組み立ててもよ
い。アビジンとしては、卵白由来のアビジン、微生物由
来のアビジン（例えばストレプトアビジン）等がいずれ
も使用可能である。

【００１６】標識酵素としては、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼ（ＨＲＰ）、ウシ小腸アルカリフォスファター
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオ
キシダーゼ等の酵素免疫分析法（ＥＩＡ）に常用される
酵素が適宜使用され、これらの酵素に適合しＥＩＡで常
用される発色基質が適宜使用される。発色基質として
は、例えばＨＲＰの場合は、３，３′，５，５′−テト
ラメチルベンジジン（ＴＭＢＺ）、ＴＭＢＺ・ＨＣｌ、
ＴＭＢＺ・ＰＳ、ＡＢＴＳ、ｏ−フェニレンジアミン、
ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸等が使用され、アルカリフ
ォスファターゼの場合は、ｐ−ニトロフェニルフォスフ
ェート、４−メチルウンベリフェリルフォスフェート等
が使用され、β−ガラクトシダーゼの場合は、ｏ−ニト
ロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、４−メチル
ウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等が使
用される。

【００１７】蛍光物質としては、フルオレッセインイソ
チオシアネート、テトラメチルローダミンイソシオアネ
ートなど、発光物質としては、ルミナール、アクリジニ
ウムエステル、ルシフェリンなど、また、放射性物質と
しては、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、¹⁴Ｃ、³Ｈ、³⁵Ｓなどを使用す
ることができるが、これら例示したものに限らず、免疫
測定法に使用しうるものであれば、他の物質も使用する
ことができる。なお、イムノアッセイには、検出、固
定、定性分析、定量分析、その他の測定が含まれる。

【００１８】また本発明は、ヒトＮＫ細胞に発現する分
子量約１３０ｋＤａの分子と特異的に結合するクラスが
ＩｇＧである新規モノクローナル抗体、ヒト末梢血中に
含まれる高い細胞傷害活性をもつ細胞群を認識できる新
規モノクローナル抗体、それを利用するヒトＮＫ細胞の
検出、測定方法を新たに提供するものである。そして、
前者の抗体は抗ＮＫ細胞抗体ということができ、後者の
抗体は該細胞群濃縮用抗体ということもできる。

【００１９】したがって本発明は、前者の抗体にあって
は、該新規抗ＮＫ細胞抗体、その標識化物、酵素基質、
発色試薬、緩衝液、その他必要な物質を含有する該１３
０ｋＤａ分子（又はそれを産生する細胞、例えばＮＫ細
胞）測定用キットも提供するものである。

【００２０】更に、ヒト末梢血中に含まれる高い細胞傷
害活性を有する細胞群は、とりもなおさず、ＮＫ細胞の
大部分であるから、上記したＮＫ細胞を特異的に認識す
るモノクローナル抗体は、ほぼ、該細胞群を認識するモ
ノクローナル抗体ということができる。したがって、こ
の抗体は、インビボ及びインビトロにおいて、単独で該
細胞群を濃縮することが可能となり、その結果、該細胞
群の分離、除去、あるいは正常細胞の精製も可能とな
る。

【００２１】上記のように、本抗体は、単独では該細胞
群を濃縮できるという特徴も有するため、癌治療などに
応用することができる。その場合は、本抗体を有効成分
とし、該細胞濃縮剤、その他医薬組成物として製剤化し
てもよい。

【００２２】なお、製剤化にあたり、担体としては、固
形、半固形、又は液状の希釈剤、充填剤、各種助剤等が
用いられる。医薬組成物は、常法にしたがい、投与単位
形態で投与することが好ましく、経口投与、組織内投
与、局所投与（経皮投与等）、又は経直腸的に投与する
ことができ、外用剤としても使用できる。

【００２３】以下、本発明の実施例について述べる。

【００２４】

【実施例１：モノクローナル抗体の作製】ヒトＮＫ細胞
に反応し、分子量１３０ｋＤａの分子を認識する、イム
ノグロブリンのクラスがＩｇＧであるモノクローナル抗
体を以下により作製した。

【００２５】（１）免疫原の作製自動細胞分離装置（FACS Vantageセルソーター)を用い
てヒト末梢血より、ＣＤ３陽性ＣＤ５６陽性細胞及びＣ
Ｄ３陽性ＣＤ５７陽性細胞を分離した後、それらを混合
し免疫原とした。

【００２６】（２）ハイブリドーマの作製ハイブリドーマ（融合細胞）の作製は次のようにして行
った。

【００２７】ａ）免疫および細胞融合Ｂａｌｂ／ｃマウスに上記の細胞を数回投与した後、免
疫されたマウスの脾細胞とマウス骨髄腫由来細胞株（Ｐ
３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ１；Ｐ３Ｕ１）を、細胞融合促
進剤としてポリエチレングリコールを用い、常法にした
がって細胞融合した。次いで、ＨＡＴ培地（１×１０^-4
Ｍヒポキサンチン、４×１０^-7Ｍアミノプテリン、
１．６×１０^-3Ｍチミジン含有）にて培養し、生育し
たクローンを脾細胞と骨髄腫細胞が融合したハイブリド
ーマとして選択した。

【００２８】ｂ）抗ＮＫ細胞抗体産生ハイブリドーマの
スクリーニング上記で得たハイブリドーマの中から、抗ＮＫ細胞抗体産
生ハイブリドーマのスクリーニングとして、ヒト末梢血
中のＣＤ３陽性細胞の約１０〜３０％程度と特異的に結
合する抗体を産生するクローンを選択した。さらに、こ
れらのモノクローナル抗体の内で既存のＮＫ細胞マーカ
ー、例えばＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ１６１
などとは、反応性の異なるものを選択した。その結果、
クローン９Ｆ９−１を得た。このようにして得た抗ＮＫ
細胞抗体産生ハイブリドーマのクローン９Ｆ９−１を工
業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭＰ−１７
８１２として寄託した。

【００２９】ｃ）モノクローナル抗体の精製９Ｆ９−１を少量培養した後、マウス腹腔中にこれを投
与し、１４日後に腹水を採取した。このマウスの腹水液
からアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製し
た。

【００３０】

【実施例２：抗体の性質】ハイブリドーマ９Ｆ９−１が
産生するモノクローナル抗体である９Ｆ９−１抗体のサ
ブクラスを、オクタローニー法を用いて検定した結果、
ＩｇＧ１であり、Ｌ鎖の可変領域はκ鎖であった。また
この点は、ハイブリドーマ９Ｆ９−１の培養上清を用
い、マウスモノクローナルタイピングキット（The Bind
ing Site社製）にてマウス免疫グロブリンのクラス、サ
ブクラスの同定を行った結果からもＩｇＧ１であること
が確認された。

【００３１】

【実施例３：ヒト末梢血との反応性】９Ｆ９−１抗体が
ヒト末梢血中のどのような細胞集団と反応するのかを詳
細に調べるため、フローサイトメトリーによる解析を行
った。すなわち、８〜２０人の末梢血リンパ球を５×１
０⁵個に調整し、それぞれのＮＫ細胞マーカーのモノク
ローナル抗体で染色後、フローサイトメーターで解析し
た。その結果、図１に示すように、８〜２０人の末梢血
リンパ球の内、９Ｆ９−１抗体は１８〜５２％程度の細
胞群と反応した。

【００３２】次に末梢血リンパ球３検体について、９Ｆ
９−１抗体と既存のＮＫ細胞マーカーとの反応性の比較
を行った。すなわち（Ａ）３人の末梢血リンパ球をＦＩ
ＴＣ標識抗ヒトＣＤ３抗体とＰＥ標識抗ヒトＣＤ５６、
ＣＤ５７、ＣＤ１６抗体の混合液により染色し、（Ｂ）
同じ３人の末梢血リンパ球をＦＩＴＣ認識抗ヒトＣＤ３
抗体とＰＥ標識抗マウスＩｇＧ抗体を標識させた９Ｆ９
−１抗体により染色し、フローサイトメーターで解析し
た。その結果、図２（Ａ）に示すように、これら３検体
の既存ＮＫ細胞マーカーであるＣＤ１６、ＣＤ５６、Ｃ
Ｄ５７混合抗体との反応性は、ＣＤ３陽性細胞において
は１５〜２３％、ＣＤ３陰性細胞においては１０〜２５
％であったのに対して、９Ｆ９−１抗体は、ＣＤ３陽性
細胞においては１２〜２０％、ＣＤ３陰性細胞において
は８〜１９％の細胞と反応した（図２（Ｂ））。

【００３３】

【実施例４：ヒト末梢血の既存マーカーとの２重染色】
さらに詳細に９Ｆ９−１抗体の反応する細胞群を調べる
ため、９Ｆ９−１抗体と既存のＮＫ細胞マーカーとの２
重染色をフローサイトメトリーにて解析した。すなわ
ち、末梢血リンパ球をＦＩＴＣ標識９Ｆ９−１抗体と、
（Ａ）ＰＥ標識抗ヒトＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ１６抗
体の混合液、（Ｂ）ＰＥ標識抗ヒトＣＤ５６抗体、
（Ｃ）ＰＥ標識抗ヒトＣＤ５７抗体、（Ｄ）ＰＥ標識抗
ヒトＣＤ１６抗体、（Ｅ）ＰＥ標識抗ヒトＣＤ１６１抗
体、により染色し、フローサイトメーターで解析した。

【００３４】得られた結果を図３に示す。その結果から
明らかなように、９Ｆ９−１抗体の反応する細胞群は、
ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７のいずれかに陽性である
細胞群の約７０％にあたるが（図３（Ａ））、そのいず
れとも完全に一致するものではなかった（図３（Ｂ）、
（ｃ）、（Ｄ））。また、ＣＤ１６１陽性細胞の約５０
％と反応することがわかった（図３（Ｅ））。

【００３５】

【実施例５：各種細胞との反応性】ヒト末梢血以外の正
常細胞及び腫瘍細胞と９Ｆ９−１抗体の反応性につい
て、ヒト末梢血において比較的類似した反応性を示した
ＣＤ５７抗体と比較して調べた。すなわち、９Ｆ９−１
抗原及びＣＤ５７／ＨＮＫ−１抗原の正常細胞、または
腫瘍細胞での発現を調べた。

【００３６】得られた結果を図４に示す。図中、（Ａ）
９Ｆ９−１抗原の発現、（Ｂ）ＣＤ５７／ＨＮＫ−１抗
原の発現を示すが、図４の結果から明らかなように、ほ
とんどの細胞において両者は同様の反応性を示したが、
一部のＢ細胞系列の腫瘍細胞株において９Ｆ９−１抗体
は特徴的な反応性を示した。

【００３７】

【実施例６：９Ｆ９−１陽性細胞の細胞傷害活性】９Ｆ
９−１抗体が真に細胞傷害活性、ＮＫ活性をもつ細胞株
を認識しているかを調べるためにセルソーターを用いて
９Ｆ９−１陽性細胞を分離して試験を行った。試験は、
９Ｆ９−１陽性細胞の他、対象として末梢血リンパ球、
ＰＢＬ、９Ｆ９−１陰性細胞をエフェクター細胞とし、
ＮＫ細胞による細胞傷害に感受性であるヒト慢性骨髄性
赤白血病由来細胞株Ｋ５６２をターゲット細胞として行
った。Ｋ５６２細胞は１×１０⁶個に調製し、牛胎児血
清１００μＬに懸濁した後、⁵ ¹Ｃｒ標識クロム酸ナトリ
ウムを１００μＬ加え、３７℃・５％ＣＯ₂条件下で１
時間培養した。洗浄後、１０牛胎児血清添加ＲＰＭＩ１
６４０培地１０ｍＬに懸濁し、エフェクター細胞（１×
１０⁴個／ウエル）の入ったプレート中に１００μＬず
つ添加し、３７℃・５％ＣＯ₂条件下で４時間培養した
後、上清を回収し、⁵¹Ｃｒ放出量をガンマーカウンター
で測定した。測定により得られたデータの解析は次の式
に基づいて行った。

【００３８】細胞傷害活性（％）＝Ｑ×１００Ｑ＝（Ｅ−Ｎ）／（Ｔ−Ｎ）

【００３９】（式中、Ｅはエフェクター細胞に⁵¹Ｃｒ標
識ターゲット細胞を添加したウエルの ⁵¹Ｃｒの放出量、
Ｎは⁵¹Ｃｒ標識ターゲット細胞だけを培養したウエルの
⁵¹Ｃｒの放出量、Ｔは⁵¹Ｃｒ標識ターゲット細胞に１０
％塩酸を１００μＬ添加し、全細胞を破壊したウエルの
⁵¹Ｃｒの放出量を示している）

【００４０】図５に示すように、９Ｆ９−１陽性細胞
は、Ｋ５６２細胞に対し強い細胞傷害活性を示した。ま
た、９Ｆ９−１陰性細胞は末梢血リンパ球と比較しても
細胞活性が低く、ほとんど活性を示さなかった。このこ
とは、９Ｆ９−１抗体が細胞傷害活性をもつ細胞群、言
い換えればＮＫ細胞の大部分を認識することを示してい
る。

【００４１】

【実施例７：免疫沈降】ヒト白血病細胞株ＳＵＰＴ−１
（陽性細胞）及びネガティブコントロールとしてのＳＵ
ＰＴ−１３（陰性細胞）、それぞれ３×１０⁷個をNHS-s
ulfo-Biotinと反応させた後、可溶化し、９Ｆ９−１抗
体と反応させた。Protein G Sepharose（ファルマシ
ア）にて添加した抗体およびそれと反応している分子を
沈降させた。これをＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、ペルオキ
シダーゼ標識のストレプトアビジン及び発色系としてＥ
ＣＬ化学発光システム（ファルマシア）を用いて可視化
し、得られた結果を図６（写真）に示した。

【００４２】図中、各レーンはそれぞれ次のものを示
す。レーン（１）、（２）：マウスＩｇＧ１抗体で免疫
沈降したＳＵＰＴ−１細胞及びＳＵＰＴ−１３細胞のme
mbraneprotein。レーン（３）、（４）：９Ｆ９−１抗
体で免疫沈降したＳＵＰＴ−１細胞及びＳＵＰＴ−１３
細胞のmembrane protein。図面から明らかなように、９
Ｆ９−１抗体で免疫沈降したレーン（３）に１３０ｋＤ
ａのバンドが検出された。

【００４３】

【発明の効果】本発明によってＮＫ細胞あるいは、細胞
傷害活性を有する細胞群を認識する新たなモノクローナ
ル抗体を産生するハイブリドーマが作製された。本抗体
は既知のＮＫ細胞マーカーとは異なる反応性を示し、本
抗体単独でヒト末梢血リンパ球中の高い細胞傷害活性を
示す細胞群を濃縮することが可能であり、癌治療などに
応用されることが期待される。また、本抗体単独でＮＫ
細胞の大部分を認識することができるため、既知のＮＫ
細胞マーカーに替わって診断目的に汎用される可能性が
高い。

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒト末梢血と９Ｆ９−１抗体の反応性を示した
図面である。

【図２】ヒト末梢血と９Ｆ９−１の反応性をフローサイ
トメトリーを用いて解析し、既知のＮＫ細胞マーカーと
比較した図面である。

【図３】ヒト末梢血を９Ｆ９−１抗体と既知のＮＫ細胞
マーカーで２重染色した後、フローサイトメトリーで解
析した図面である。

【図４】各種細胞と９Ｆ９−１抗体との反応性をＣＤ５
７抗体と比較して表わした図面である。

【図５】９Ｆ９−１陽性細胞の細胞傷害活性を測定した
結果を示す図面である。

【図６】９Ｆ９−１抗体を使った免疫沈降反応の後、Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥにて解析した図面代用写真である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｒ 1:91）Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/08 15/00 ＣＣ１２Ｒ 1:91）Ｃ１２Ｒ 1:91）Ｆターム(参考） 4B024 AA12 AA15 BA46 DA02 FA10 GA05 HA15 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA13 DA14 4B065 AA92X AA93Y AB05 BA08 CA25 CA46 4H045 AA11 BA10 CA42 DA76 EA50 EA51 FA72

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒトＮＫ細胞に発現する分子量約１３０
ｋＤａの分子と特異的に結合するモノクローナル抗体。
【請求項２】細胞傷害活性を有する細胞群を濃縮でき
るものであることを特徴とするモノクローナル抗体。
【請求項３】クラスがＩｇＧである請求項１又は２に
記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】サブクラスがＩｇＧ１である請求項３に
記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】請求項１〜４のいずれか１項に記載のモ
ノクローナル抗体を産生することができるハイブリドー
マ。
【請求項６】ハイブリドーマ９Ｆ９−１。
【請求項７】請求項１〜４のいずれか１項に記載のモ
ノクローナル抗体からなるＮＫ細胞マーカー。
【請求項８】請求項１〜４のいずれか１項に記載のモ
ノクローナル抗体を使用することを特徴とするＮＫ細胞
の測定方法。
【請求項９】請求項１〜４のいずれか１項に記載のモ
ノクローナル抗体を含有することを特徴とする細胞傷害
活性を有する細胞群の濃縮剤。
【請求項１０】請求項１〜４のいずれか１項に記載の
モノクローナル抗体を含有することを特徴とするＮＫ細
胞測定用キット。