JP2001253829A - ２次胆汁酸産生抑制剤及び飲食品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 酵母を有効成分とする２次胆汁酸産生抑
制剤。 【効果】 胆汁酸の吸着及び大腸管腔内の酸性化等を介
して、２次胆汁酸の産生を強力に抑制し、大腸癌、肝
癌、胆石症等の予防及び治療に極めて有効である。長期
間服用しても安全性に問題なく、経口摂取する医薬の
他、食品に混合して日常的に摂取し健康増進に役立つ。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は大腸癌、肝癌、膵臓
癌、胆石症等の予防及び治療に有用な２次胆汁酸産生抑
制剤及びその飲食品への利用に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒトの肝臓においてコール酸及びケノデ
オキシコール酸等（１次胆汁酸）がコレステロールから
合成され、グリシン又はタウリンと抱合しグリシン又は
タウリン抱合型胆汁酸として胆管を通って消化管に分泌
される。胆汁酸は、その界面活性作用によって飲食品中
の脂質を乳化分散させ、膵液の酵素・リパーゼによる分
解と吸収を促進し、回腸から能動的に再吸収される。再
吸収された胆汁酸は、門脈を通って肝臓に戻り、再度、
消化管に分泌され腸肝循環を構成し、この循環を繰り返
す。

【０００３】回腸からの吸収を免れた胆汁酸は、腸内細
菌によって脱抱合や７α−脱水酸化、酸化、還元、エピ
マー化等の修飾を受けて２次胆汁酸へと変換される。こ
の過程で生じる主要な２次胆汁酸は、デオキシコール酸
とリトコール酸であり、それぞれ１次胆汁酸であるコー
ル酸とケノデオキシコール酸の７α−脱水酸化反応によ
って生じる。２次胆汁酸の一部は、大腸から受動的に吸
収されて肝臓に移行し１次胆汁酸と同様に腸肝循環を繰
り返すが、残りの胆汁酸は糞便中へと排泄される。

【０００４】近年、大腸管腔内の腸内細菌によって産生
されるデオキシコール酸やリトコール酸などの２次胆汁
酸は、大腸癌、肝癌、膵臓癌、胆管癌などの発症に深く
関与していることが明らかになっている。一般に、発癌
の過程は、化学発癌剤や放射線、ウィルスなどによって
遺伝子に突然変異が生じるイニシエーションと、その
後、プロモーターに長期間、暴露されることによって増
殖と分化に異常が生じるプロモーションの２段階から成
り立つと考えられている。これまでに、デオキシコール
酸やリトコール酸等の２次胆汁酸は、後者の過程におい
てプロモーターとして作用し、大腸癌、肝癌、膵臓癌、
胆管癌の発症を促進することが報告されている（Narisa
wa, T., et. al., J. Natl. Cancer Inst, 53, 1093-10
97, 1974、Tsuda, H., et. al., Gann, 75, 871-5, 198
4, Makino, T., et. al., J. Natl.Cancer Inst., 76,
967-75, 1986）。また、２次胆汁酸の発癌プロモーター
活性は、１次胆汁酸に比べてはるかに強いことも示され
ている（Narisawa, T., et. al., J. Natl. Cancer Ins
t., 53, 1093-1097, 1974、Reddy, BS., et. al.,Cance
r Res., 37, 3238-3242, 1977）。さらに、最近、デオ
キシコール酸に関しては、癌以外にも胆石症の発症に関
係し得ることが示されている（Marcus, SN.,Heaton, K
W., Gut, 29, 522-533, 1988）。

【０００５】このように、大腸管腔内において腸内細菌
によって産生されるデオキシコール酸やリトコール酸な
どの２次胆汁酸は、強力な発癌プロモーター活性を有す
ると同時に、胆石症の原因にもなり得ることから、２次
胆汁酸の産生を抑制することによって、大腸癌、肝癌、
膵臓癌、胆管癌、胆石症などの疾患を予防あるいは治療
することが可能である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】これまでに、ペニシリ
ン系の抗生物質であるアンピシリン（Low-Beer, TS., N
utter, S., Lancet, 2(8099), 1063-1065, 1978）、３
α，１２β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−Ｎ−
メチルアミン（Roda, A., et. al., J. Pharm. Sci., 8
1, 237-240, 1992）、オリゴ糖の一種であるラクツロー
ス（Magengast, FM., Eur. J. Clin. Invest., 18, 56-
61, 1988）あるいは小麦糠（Lampe, JW.,et. al., Gut,
34, 531-536, 1993）については、効果は弱いものの２
次胆汁酸の産生を抑制することが報告されている。

【０００７】アンピシリン及び３α，１２β−ジヒドロ
キシ−５β−コラン−２４−Ｎ−メチルアミンは、大腸
管腔内において７α−脱水酸化反応を触媒する細菌を排
除することによって２次胆汁酸の産生を抑制するが、長
期間服用した際には耐性菌の出現や副作用の発現が問題
となる。また、抗生物質を用いて、２次胆汁酸の産生に
関わる細菌のみを特異的に排除することは事実上不可能
であり、乳酸菌やビフィズス菌などのヒトの健康維持に
重要な役割を果たしている腸内細菌も同時に排除してし
まうといった重大な問題を生ずる欠点がある。

【０００８】一方、ラクツロースや小麦糠は、主に大腸
管腔内のｐＨを低下させることよって至適ｐＨが中性付
近である７α−脱水酸化酵素の活性を抑制し、２次胆汁
酸の産生量を低下させると考えられている。しかし、こ
れらの物質は、有効性の面で未だ十分ではなく、疾病の
予防及び治療に寄与し得る程の効果を示していない。

【０００９】従って、本発明は、大腸癌、肝癌、膵臓
癌、胆管癌、胆石症なとの疾患の予防あるいは治療に有
用な、有効性及び安全性の優れた２次胆汁酸産生抑制剤
を提供するものであり、また、それを利用した飲食品を
提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】斯かる実情に鑑み本発明
者は、鋭意研究を行った結果、酵母が１次胆汁酸の２次
胆汁酸への変換を抑制する作用を有することを見出し、
本発明を完成した。

【００１１】すなわち、本発明は、酵母を有効成分とす
る２次胆汁酸産生抑制剤及びこれを含有する飲食品を提
供するものである。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明において酵母には、酵母を
培養して得られる生菌体、加熱菌体及びそれらの構成物
が含まれる。

【００１３】本発明で使用する酵母が、コール酸等の７
α−水酸基を脱離する反応を阻害し、２次胆汁酸である
デオキシコール酸等の生成を阻害するということは今迄
報告されていない。本発明は、酵母の１次胆汁酸の２次
胆汁酸への変換を抑制阻害する作用を利用したもので、
特にコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、ケノ
デオキシコール酸等の１次胆汁酸吸着能、あるいは酢
酸、プロピオン酸、酪酸等の短鎖脂肪酸の腸内濃度上昇
能に優れた酵母は、７α−水酸基脱離反応を阻害する効
果が優れ好ましい。

【００１４】酵母のうち、好ましいものとしてはイサチ
ェンキア属、クルイベロマイセス属、ハンセニアスポラ
属、サッカロミセス属、ヒポピチア属、キャンジダ属、
トルラスポラ属、ピチア属及びチゴサッカロマイセス属
に属する酵母が挙げられ、これらは１種又は２種以上を
混合して用いることができる。

【００１５】具体的には、イサチェンキア・オリエンタ
リス、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベ
ロマイセス・ラクチス、クルイベロマイセス・サーモト
レランス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、サッカロミ
セス・セレビシエ、サッカロミセス・ダイレンシス、サ
ッカロミセス・エキシグース、サッカロミセス・ユニス
ポラス、サッカロミセス・バヤナス、ヒポピチア・ブル
トニ、キャンジダ・ケフィア、キャンジダ・エチェルシ
ー、キャンジダ・ゼイラノイデス、キャンジダ・ソラ
ニ、キャンジダ・マルトーサ、キャンジダ・トロピカリ
ス、キャンジダ・シリンドラシエ、キャンジダ・ユチリ
ス、トルラスポラ・デルブルエッキー、ピチア・アノマ
ラ、ピチア・ホルスチー及びチゴサッカロマイセス・ロ
キシーが好ましいものとして挙げられ、更にこれらのう
ち次の酵母が最適である。

【００１６】イサチェンキア オリエンタリス（Issatc
henkia orentalis）ＹＩＴ８２６６（生命工学工業技術
研究所菌寄託第１７４８１号）、クルイベロマイセス
マルキシアナス（Kluyveromyces marxianus）ＹＩＴ８
２９２（生命工学工業技術研究所菌寄託第１７４８３
号）、クルイベロマイセス ラクチス（Kluyveromycesl
actis）ＹＩＴ８２６３（生命工学工業技術研究所菌寄
託第１７４８２号）、クルイベロマイセス サーモトレ
ランス（Kluyveromyces thermotolerans）ＹＩＴ８２９
４（ＡＴＣＣ ２０３０９）、ハンセニアスポラ ウヴ
ァラム（Hanseniaspora uvarum）ＹＩＴ８１６４（生命
工学工業技術研究所菌寄託第１７４７８号）、サッカロ
ミセス セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＹＩ
Ｔ８１１６（ＡＴＣＣ ４８５５４）、サッカロミセス
ダイレンシス（Saccharomyces dairensis）ＹＩＴ８
１９１（ＣＢＳ ３００７）、サッカロミセス エキシ
グース（Saccharomyces exiguus）ＹＩＴ８１０９（Ｃ
ＢＳ ３０１９）、サッカロミセス ユニスポラス（Sa
ccharomyces unisporus）ＹＩＴ８２２６（生命工学工
業技術研究所菌寄託第１６１５１号）、サッカロミセス
バヤナス（Saccharomyces bayanus）ＹＩＴ８１２８
（ＣＢＳ ３８０）、ヒポピチア ブルトニ（Hyphopic
hia burtonii）ＹＩＴ８２９９（ＣＢＳ ２３５２）、
キャンジダ ケフィア（Candida kefyr）ＹＩＴ８２３
７（生命工学工業技術研究所菌寄託第１７４８０号）、
キャンジダ エチェルシー（Candida etchellsii）ＹＩ
Ｔ８２７８（ＡＴＣＣ ６０１１９）、キャンジダ ゼ
イラノイデス（Candida zeylanoides）ＹＩＴ８０１８
（ＩＦＯ ０７１９）、キャンジダ ソラニ（Candida
solani）ＹＩＴ８０２３（ＣＢＳ １９０８）、キャン
ジダ マルトーサ（Candidamaltosa）ＹＩＴ８２８３
（ＡＴＣＣ ２８１４０）、キャンジダ トロピカリス
（Candida tropicalis）ＹＩＴ８２８６（ＣＢＳ ９
４）、キャンジダ シリンドラシエ（Candida cylindra
cea）ＹＩＴ８２７６（ＡＴＣＣ １４８３０）、キャ
ンジダ ユチリス（Candida utilis）ＹＩＴ８２０４
（ＡＴＣＣ ９９５０）、トルラスポラ デルブルエッ
キー（Torulaspora delbrueckii）ＹＩＴ８３１３（Ｊ
ＣＭ ２２０４）及びＹＩＴ８１３３（ＩＦＯ １１７
２）、ピチアアノマラ（Pichia anomala）ＹＩＴ８２９
８（ＪＣＭ ３５８７）及びＹＩＴ８２９７（ＪＣＭ
３５８３）、ピチア ホルスチー（Pichia holstii）Ｙ
ＩＴ８０３８（ＡＴＣＣ ５８０４８）、及びチゴサッ
カロマイセス ロキシー（Zygosaccharomyces rouxii）
ＹＩＴ８１２９（ＣＢＳ ７３２）。

【００１７】なお、これらの酵母は古くから食品（ワイ
ン、チーズ）の製造に使用されており、人体に対して極
めて安全な微生物である。また、これらの菌体は、数ミ
クロンの粒子なので、食感に影響する２０ミクロン以上
の粒子に比べてはるかに服用し易いという特徴を有して
いる。上記酵母の性状として、イサチェンキア・オリエ
ンタリス（Issatchenkia orientalis）ＹＩＴ８２６６
（生命工学工業技術研究所菌寄託第１７４８１号）の性
状を具体的に示すと、表１の通りであって、「ザ イー
スト（The yeast）、第３版 N. J. W. Kreger-Van Rij,
Elsevier Science Publishers B. V., Amsterdam, 198
4」に記載の同種酵母の性状と同様である。

【００１８】

【表１】

【００１９】本発明で用いる酵母は、通常の方法、例え
ば酵母エキスやポリペプトンを含む複合培地又は無機塩
を主体とする合成培地で培養することによって製造する
ことができる。

【００２０】このようにして得られた酵母は、培養液を
そのまま使用してもよく、遠心分離、限外濾過等の手段
により回収した生菌もしくはその凍結乾燥物、又は加熱
処理等を施した死菌体、更にはそれらの菌体粉砕物やそ
の水溶性画分（菌体内容物）として使用することも可能
である。また、本発明に用いる酵母は、市販のものであ
ってもよい。

【００２１】これらは、２次胆汁酸の産生を効果的に抑
制するため、大腸癌、肝癌、膵臓癌、胆管癌等の癌疾患
や胆石症等の予防もしくは治療を目的とした医薬品又は
飲食品に用いることができる。

【００２２】上記酵母は、常法に従って薬学的に許容さ
れる担体とともに種々の剤型に医薬組成物とすることが
できる。例えば、経口用固形製剤を調製する場合には、
上記酵母に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢
剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により
錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造す
ることができる。そのような添加剤としては、当該分野
で一般的に使用されるものでよく、例えば、賦形剤とし
ては、乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、微結晶セルロ
ース、炭酸カルシウム、カオリン、塩化ナトリウム、硅
酸等を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノー
ル、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン
液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピル
セルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセル
ロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、リ
ン酸カルシウム等を、崩壊剤としては乾燥デンプン、ア
ルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラウリル硫酸ナトリ
ウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖、炭酸水素ナ
トリウム、炭酸カルシウム等を、滑沢剤としては、ステ
アリン酸塩、ポリエチレングリコール、精製タルク、ホ
ウ砂等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石
酸等が例示できる。

【００２３】経口用液体製剤を調製する場合は、上記酵
母に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法
により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造す
ることができる。この場合、矯味剤としては上記に挙げ
たもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等
が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラ
チン等が挙げられる。

【００２４】また、本発明の飲食品は、上記酵母を種々
の飲食品に添加せしめることにより製造することができ
る。ここで好ましい飲食品としては、発酵乳、果汁飲
料、スープ、せんべい、クッキー等が例示される。な
お、飲食品には動物の飼料も含まれる。

【００２５】上記の各製剤中に配合されるべき酵母の量
は、これを服用すべき患者の症状によりあるいはその剤
型等により一定ではないが、一般に製剤中１〜１００ｇ
重量％とするのが好ましい。また、上記製剤又は飲食品
の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性
別等によって異なり一概には決定できないが、酵母は乾
燥菌体として通常成人１日あたり約１０mg〜３０ｇ、好
ましくは約１〜５ｇとすれば良く、これを１日１回又は
２〜４回程度に分け投与するのが好ましい。

【００２６】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。
なお、「％」は「重量％」を示す。

【００２７】酵母の調製 ポテトデキストロース寒天スラントで保存している酵母
の１白金耳を、表２に示す培地１００mLを含む坂口フラ
スコ（５００mL）に植菌し、３０℃で振盪培養（１２０
spm）した。２日後に１０Ｌ発酵槽（実働容積７Ｌ）に
坂口フラスコ２本分を接種して３０℃にて、通気速度
０．５vvm、回転速度２５０rpm、ｐＨ６．０（５Ｎの水
酸化ナトリウムで自動制御）の条件下で２日間、通気攪
拌培養した。培養終了後、冷却遠心分離機を使用して菌
体と上清を分けたのち、菌体を蒸留水で２度洗浄した。
この洗浄菌体を２Ｌの三角フラスコに入れ、蒸留水１Ｌ
を加えた後、１１５℃にて１０分間オートクレーブで加
熱した。この加熱菌体をそのまま凍結乾燥した。

【００２８】

【表２】

【００２９】実施例１ 胆汁酸吸着能 試験方法；コール酸（ＣＡ）、タウロコール酸（ＴＣ
Ａ）、グリココール酸（ＧＣＡ）、ケイデオキシコール
酸（ＣＤＣＡ）、又はデオキシコール酸（ＤＣＡ）のナ
トリウム塩（シグマ社製）を、最終濃度が１mMとなるよ
うにｐＨ６．７の０．１Ｍリン酸緩衝液あるいはｐＨ
７．５の０．１Ｍリン酸緩衝液に溶かした。イサチェン
キア オリエンタリスＹＩＴ８２６６の凍結乾燥菌体、
１００mgを１５mLの遠心チューブに取り、そこに、上で
作製した胆汁酸溶液、３．５mLを加えて、３７℃で振盪
（１２０spm）した。１時間後に、酵母菌体を遠心分離
（１２，０００rpm、１０分間）によって沈殿させて、
上清を分取した。この上清中の胆汁酸を、エンザバイル
II（第一化学薬品社製）で定量し、下式から、胆汁酸吸
着率を求めた。胆汁酸吸着率とは、添加した全胆汁酸に
対する酵母に吸着した胆汁酸の割合（％）であり、酵母
と胆汁酸の吸着の強さを示す。

【００３０】胆汁酸吸着率（％）＝［｛添加した胆汁酸
(nmol)−上清中の胆汁酸(nmol)｝／添加した胆汁酸(nmo
l)］×１００

【００３１】表３に胆汁酸吸着率を示す。イサチェンキ
ア オリエンタリスＹＩＴ８２６６は、コール酸、タウ
ロコール酸、グリココール酸及びケノデオキシコール酸
を吸着し、優れた１次胆汁酸吸着能を示した。また、酵
母とコール酸の吸着率は、ｐＨ６．７とｐＨ７．２の反
応液においてほぼ同等の値であった。これらの結果か
ら、酵母は大腸管腔内において１次胆汁酸と強固に結合
し、腸内細菌による脱抱合や７α−脱水酸化反応を妨害
することによって２次胆汁酸の産生を阻害し得ることが
示された。また、２次胆汁酸であるデオキシコール酸と
も強固に結合した。このことから、酵母は、２次胆汁酸
の産生を抑制すると同時に、生じた２次胆汁酸を吸着、
非動化することによって、その毒性を軽減させる作用も
有する。

【００３２】

【表３】

【００３３】実施例２ 実施例１と同方法で種々の酵母の胆汁酸吸着率を測定し
た結果を表４に示す。いずれの酵母も胆汁酸、１次胆汁
酸のケノデオキシコール酸及び２次胆汁酸のデオキシコ
ール酸の良い吸着性を示した。

【００３４】

【表４】

【００３５】実施例３ イサチェンキア オリエンタリ
スＹＩＴ８２６６の凍結乾燥菌体による２次胆汁酸産生
抑制 予備試験 ５週齢のWistar系雄ラット（日本クレア製）を、オリエ
ンタル酵母社製Ｆ−２粉末飼料で７日間飼育した後、１
群８匹ずつ各群間で体重差が出ないよう群分けし、表５
の試験飼料を１４日間投与した。ラットは金属製ケージ
で個別飼いし、飼料及び水は自由に摂取させた。

【００３６】

【表５】

【００３７】１４日間飼育後の普通食群、高胆汁酸食群
の間では、摂取量及び体重増加量には有意な差は認めら
れなかった。

【００３８】胆汁酸量 ２５mgの１２〜１４日目の凍結乾燥糞便をスクリューキ
ャップ付試験管（１５mL）に量り取り、０．１５μmol
の内部標準物質（５−β−プレグナン−３α，１７α，
２０α−トリオール）と５mLのエタノールを加えて、７
０℃のブロックヒーターで２時間加熱した。不溶物を遠
心分離（３０００rpm、１５分間）によって沈殿させ
た。上清は別の試験管に移して、窒素ガス送風下で乾固
した。抽出物を０．５mLのメタノールに溶かした後、
０．４５μｍのフィルター（日本ミリポア社製）を通し
て不溶物を除いた。１０μＬのサンプルをＨＰＬＣシス
テム（ジャスコ社製）で以下の条件下で分離した。

【００３９】

【表６】

【００４０】分離カラムを通過した溶出液に、反応液
（０．３mM β−ニコチン酸アミドアデニンジヌクレオ
チド（β−ＮＡＤ⁺）、１mMエチレンジアミン四酢酸及
び０．０５％２−メルカプトエタノールを含む１０mMリ
ン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．８）を１．０mL／分の流
速で混合した。この混液を、３α−ヒドロキシステロイ
ドデヒドロゲナーゼを充填した酵素カラム、Enzymepak
（４．６mm i.d.×３５mm、ジャスコ社製）に送り、胆
汁酸の脱水酸化反応に伴って生じるＮＡＤＨ（β−ＮＡ
Ｄ⁺の還元型）を蛍光検出器でモニターした（励起波長
３４５nm、発光波長４７０nm）。各胆汁酸は、標準品の
保持時間から同定した。また、胆汁酸の濃度は、各ピー
クの面積から求めた。この際、内部標準物質のピーク面
積から回収率を補正した。

【００４１】測定結果を表７に示すが、コール酸を投与
することによって、大腸へ到達する１次胆汁酸の量が増
大し、２次胆汁酸の産生量が亢進することが明らかとな
り、２次胆汁酸産生抑制剤の効果を感度良く評価できる
ことが判明した。

【００４２】

【表７】

【００４３】イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８
２６６の凍結乾燥菌体による２次胆汁酸産生抑制 イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６の凍結
乾燥菌体を高胆汁酸食に添加して１４日間投与（５％混
餌投与）した（表８）。尚、この際、エネルギー価が同
等となるよに、カゼイン、蔗糖、脂質及びセルロース量
で調整した。酵母菌体の投与は、試験期間中の体重増加
量及び摂餌量にほとんど影響を与えなかった（表９）。

【００４４】

【表８】

【００４５】

【表９】

【００４６】表１０及び１１に示すように、イサチェン
キア オリエンタリスＹＩＴ８２６６を投与することに
よって、２次胆汁酸の糞便排泄量は約８２％、また糞中
の２次胆汁酸濃度は約８４％低下した。この傾向は、特
にデオキシコール酸とリトコール酸で顕著であった。一
方、１次胆汁酸の糞便排泄量及び糞中濃度は、当該菌体
の投与によって有意に上昇した。イサチェンキア オリ
エンタリスＹＩＴ８２６６は、１次胆汁酸から２次胆汁
酸への変換を強力に抑制する作用を有していた。

【００４７】

【表１０】

【００４８】

【表１１】

【００４９】イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８
２６６の凍結乾燥菌体による盲腸内ｐＨ低下 ０．５ｇの１４日目の盲腸内容物を４．５mLの精製水に
懸濁し、０．５mLの１０％過塩素酸水溶液を添加して４
℃で一晩保存した。この懸濁液を遠心分離（９，０００
rpm、１０分）して上清を分取した後、０．４５μｍの
フィルター（日本ミリポア社製）を通してから、ＨＰＬ
Ｃ分析に供した。短鎖脂肪酸は、東亜電波工業社製のＨ
ＰＬＣシステムを用いて以下の条件で解析した。なお、
ｐＨ緩衝溶液は、検出器の直前で溶離液に混合した。

【００５０】

【表１２】

【００５１】

【表１３】

【００５２】その結果、高胆汁酸食群はｐＨ６．６５、
全短鎖脂肪酸量５５．９mMであったのに対し、酵母イサ
チェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６添加高胆汁
酸食群は、ｐＨ６．４６（有意水準５％）、全短鎖脂肪
酸量は８５．６mM（有意水準１％）と盲腸内ｐＨの低下
が見られ、大腸管腔内を酸性化し腸内細菌の７α−脱水
酸化酵素の活性を低下させた。

【００５３】イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８
２６６の凍結乾燥菌体によるコレステロール代謝抑制 ２５mgの１４日目の糞便をスクリューキャップ付試験管
（１５mL）に量り取り、０．１μmolの内部標準物質
（５β−コレスタン）と１Ｎ水酸化ナトリウムを含む９
０％エタノール溶液、１mLを加えて、８０℃のブロック
ヒーターで加熱した。１時間後に、０．５mLの蒸留水を
加え、中性ステロールを２．５mLの石油エーテルで２回
抽出した。抽出液は、７．５mLの蒸留水で洗浄した後、
硫酸ナトリウムで脱水し、窒素ガス送風下で乾固した。
抽出した中性ステロールは、トリメチルシリル化した
後、ガスクロマトグラフィーを用いて表１４の条件で測
定した。

【００５４】

【表１４】

【００５５】イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８
２６６の投与によって、コレステロールの腸内代謝産物
であるコプロスタノールやコプロスタノンの糞便中の濃
度が有意に低下した（表１５）。これらのコレステロー
ルの腸内代謝産物については、大腸癌等の疾患の発症に
関係していることから（Suzuki, K.,et. al., CancerLe
tt., 33, 307-316, 1986）、イサチェンキア オリエン
タリスＹＩＴ８２６６は、コレステロール代謝産物の産
生を抑制し、種々の疾病を予防、治療し得る。

【００５６】

【表１５】

【００５７】実施例４ イサチェンキア オリエンタリ
スＹＩＴ８２６６の菌体内容物による２次胆汁酸産生抑
制菌体内容物の調製 イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６の凍結
乾燥菌体を０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ８．５）に懸
濁して、ダイノミル（シンマルエンタープライゼス社
製）を用いて機械的に破砕した。この際、０．４５mm径
のガラスビーズを磨砕剤として使用し、磨砕操作は、顕
微鏡観察により９５％以上の菌体が破砕されるまで繰り
返した。菌体破砕液を９，０００ｇで１５分間遠心分離
して、上清中に菌体内容物を分離した。この菌体内容物
を採集し、凍結乾燥した。

【００５８】イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８
２６６の菌体内容物による２次胆汁酸産生抑制 実施例３と同方法でイサチェンキア オリエンタリスＹ
ＩＴ８２６６から調製した菌体内容物の２次胆汁酸産生
抑制効果を検証した。本試験の飼料組成は、表１６に示
した。酵母菌体内容物の投与は、試験期間中の体重増加
量や摂取量にほとんど影響を与えなかった。（表１
７）。

【００５９】

【表１６】

【００６０】

【表１７】

【００６１】表１８及び表１９に示すように、イサチェ
ンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６の菌体内容物を
投与することによって、２次胆汁酸の糞便排泄量は約７
６％、また糞中の２次胆汁酸濃度は約７０％低下した。
イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６の菌体
内容物は、凍結乾燥菌体と同様に、１次胆汁酸から２次
胆汁酸への変換を強力に抑制する作用を有していた。

【００６２】

【表１８】

【００６３】

【表１９】

【００６４】盲腸内の全短鎖脂肪酸量及びｐＨは、高胆
汁酸食群が５４．０mM、ｐＨ６．６５であったのに対
し、酵母菌体内容物添加高胆汁酸食群では、６８．３mM
（有意水準５％）、ｐＨ６．４６（有意水準５％）であ
った。よって、酵母菌体内容物は、短鎖脂肪酸量を増大
させることによって大腸管腔内を酸性化し、腸内細菌の
７α−脱水酸化酵素の活性を低下させる作用を有してい
た。

【００６５】

【表２０】

【００６６】イサチェンキア オリエンタリスＹＩＴ８
２６６の菌体内容物の投与によって、コレステロールの
腸内代謝産物であるコプロスタノールやコプロスタノン
の糞便中濃度が有意に低下した。このことから、イサチ
ェンキア オリエンタリスＹＩＴ８２６６の菌体内容物
は、凍結乾燥菌体と同様、コレステロール代謝産物の産
生を抑制することによっても種々の疾病の予防や治癒に
寄与し得る。

【００６７】

【表２１】

【００６８】実施例５ 実施例１及び２で使用した各種酵母菌体を用いて、次の
組成の飲食品を製造した。 １）健康向け食品（錠剤） 次の添加物を含有する組成物を打錠し、錠剤とした。

【００６９】

【表２２】

【００７０】２）健康向け飲料 次の処方により健康飲料を製造した。

【００７１】

【表２３】

【００７２】３）果汁飲料 次の処方により果汁飲料を製造した。

【００７３】

【表２４】

【００７４】４）発酵乳 次の処方により加熱酵母菌体入り発酵乳を製造した。１
０％の脱脂粉乳と５％のグルコースを滅菌し、ラクトバ
チルス属細菌を植菌してヨーグルトを製造した。これに
実施例１で得た加熱酵母菌体を０．１〜２０％混合し、
発酵乳を製造した。

【００７５】５）乳酒 次の処方により乳酒を製造した。１０％の脱脂粉乳と５
％のグルコースを滅菌し、ラクトバチルス属細菌を植菌
すると同時に実施例１で得た酵母を植菌し、４８時間３
７℃で静置培養して乳酒を製造した。

【００７６】

【発明の効果】胆汁酸の吸着及び大腸管腔内の酸性化等
を介して、２次胆汁酸の産生を強力に抑制し、本発明の
２次胆汁酸産生抑制剤は、大腸癌、肝癌、膵臓癌、胆管
癌、胆石症などの予防及び治療に極めて有効なものであ
る。

【００７７】また、本発明に用いる酵母は、古くからチ
ーズや馬乳酒、ワイン製造等に使用されていることから
明らかなように病原性のない安全な菌株である。実際
に、酵母の本発明の２次胆汁酸産生抑制剤をラットに８
ｇ／kg／dayで投与しても死亡例は認められず、長期間
服用しても安全性には問題がない。

【００７８】従って、本発明の２次胆汁酸産生抑制剤
は、経口摂取する医薬として利用するほか、食品に混合
して日常的に摂取させ、大腸癌、肝癌、膵臓癌、胆管
癌、胆石症などの予防と健康増進に役立たせるのにも適
した極めて有効なものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/16 Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 Ｃ１２Ｇ 3/02 Ｃ１２Ｇ 3/02 Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ (72)発明者 和田 康江 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 大石 憲司 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 森 稚恵 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 伊藤 雅彦 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 渡辺 常一 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 Ｆターム(参考） 4B001 AC31 AC32 BC14 EC05 4B015 AG13 AG17 4B017 LC03 LG02 LK20 LK21 4B018 LB07 LB08 LE01 MD81 ME08 MF02 MF06 MF13 4C087 AA01 AA02 BC12 BC13 BC14 CA09 MA52 NA14 ZB26

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 酵母を有効成分とする２次胆汁酸産生抑
   制剤。
2. 【請求項２】 酵母がイサチェンキア属、クルイベロマ
   イセス属、ハンセニアスポラ属、サッカロミセス属、ヒ
   ポピチア属、キャンジダ属、トルラスポラ属、ピチア属
   及びチゴサッカロマイセス属から選ばれる１種又は２種
   以上の酵母であることを特徴とする請求項１記載の２次
   胆汁酸産生抑制剤。
3. 【請求項３】 酵母がイサチェンキア・オリエンタリ
   ス、クルイベロマイセス・マルキシアナス、クルイベロ
   マイセス・ラクチス、クルイベロマイセス・サーモトレ
   ランス、ハンセニアスポラ・ウヴァラム、サッカロミセ
   ス・セレビシエ、サッカロミセス・ダイレンシス、サッ
   カロミセス・エキシグース、サッカロミセス・ユニスポ
   ラス、サッカロミセス・バヤナス、ヒポピチア・ブルト
   ニ、キャンジダ・ケフィア、キャンジダ・エチェルシ
   ー、キャンジダ・ゼイラノイデス、キャンジダ・ソラ
   ニ、キャンジダ・マルトーサ、キャンジダ・トロピカリ
   ス、キャンジダ・シリンドラシエ、キャンジダ・ユチリ
   ス、トルラスポラ・デルブルエッキー、ピチア・アノマ
   ラ、ピチア・ホルスチー、パキチコスポラ・トランスバ
   ーレンシス及びチゴサッカロマイセス・ロキシーから選
   ばれる１種又は２種以上の酵母であることを特徴とする
   請求項１記載の２次胆汁酸産生抑制剤。
4. 【請求項４】 請求項１〜３いずれか１項記載の酵母を
   含有してなる２次胆汁酸産生抑制用飲食品。