JP2001139981A

JP2001139981A - 高度不飽和脂肪酸誘導体の製造方法及び高純度エイコサペンタエン酸誘導体

Info

Publication number: JP2001139981A
Application number: JP32815699A
Authority: JP
Inventors: Tomohiro Imase; 智浩今瀬; Kazuhiro Akama; 和博赤間; Masato Mori; 真人森; Tsuneo Tokumori; 恒雄徳森
Original assignee: Chlorine Engineers Corp Ltd; NOF Corp
Current assignee: NOF Corp; ThyssenKrupp Uhde Chlorine Engineers Japan Ltd
Priority date: 1999-11-18
Filing date: 1999-11-18
Publication date: 2001-05-22
Anticipated expiration: 2019-11-18
Also published as: JP4170542B2

Abstract

(57)【要約】【課題】特に、熱異性化物の生成を抑制して、高純度状
態で得られる高度不飽和脂肪酸誘導体の製造方法及び拮
抗作用の少ない高純度エイコサペンタエン酸誘導体を提
供すること。【解決手段】移動相として超臨界二酸化炭素、固定相と
してシリカゲルを用いた超臨界クロマトグラフィーによ
って分離精製し、高度不飽和脂肪酸誘導体を製造する方
法であって、(ａ)原料として、炭素数が同一で二重結合
数が異なる高度不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステル
を含む混合物を用い、(ｂ)シリカゲルが、粒径4.0〜25.
0μｍ、細孔径0.005〜0.015μｍ、細孔容積0.65〜1.10
ｍｌ／ｇ、且つ比表面積250〜650ｍ²／ｇであり、(ｃ)
運転条件が、圧力100〜130ｋｇ／ｃｍ²、温度30〜60
℃、線速度10〜70ｃｍ／分である製造方法及びこの方法
で得られる高純度エイコサペンタエン酸誘導体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、炭素数が同一で二
重結合数が異なる高度不飽和脂肪酸又はそのアルキルエ
ステルを含む混合物を原料として用い、移動相に超臨界
二酸化炭素、固定相にシリカゲルを用いた超臨界クロマ
トグラフィーによる分離精製を効率良く行うことができ
る、高度不飽和脂肪酸誘導体の製造方法及びこの方法に
より得られる高純度エイコサペンタエン酸誘導体に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】近年、エイコサペンタエン酸誘導体の各
種の生理活性が検討されている。この際、炭素数が同一
で二重結合数が異なるアラキドン酸誘導体が共存する
と、拮抗作用することが知られており、エイコサペンタ
エン酸誘導体の効果を発揮させる際にはアラキドン酸誘
導体が少ない高純度のエイコサペンタエン酸誘導体が求
められている。

【０００３】一方、従来より、通常のガスクロマトグラ
フィーや高速液体クロマトグラフィーなどでは炭素数が
同一で二重結合数の異なる不飽和脂肪酸又はそのアルキ
ルエステルが分離し難いことが知られている。不飽和脂
肪酸又はそのアルキルエステルの超臨界クロマトグラフ
ィーによる分離技術としては、以下に示す(1)〜(6)等が
知られている。 (1)特開平６−２５６９４号公報には、アミノプロピル
基あるいはシアノプロピル基をコートしたシリカゲルを
固定相として用い、不飽和脂肪酸又はそのアルキルエス
テルの分離を行う技術が開示されている。この方法で
は、予めシリカゲル担体を被覆する処理が必要となり費
用面あるいは工程付加面で不利である。また、この方法
により製造された製品を食品や医薬関係に使用する場合
には被覆剤の剥離による混入の可能性があり好ましくな
い。更に、不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステルを含
んだ混合物をヘキサンで希釈して導入することが必要で
あり、工業生産においてコストの上昇を招く。更にま
た、炭素数が同一で二重結合数のみ異なるアラキドン酸
エステルとエイコサペンタエン酸エステルとの分離に関
しては具体的な例示がなく、不純成分の除去に関しても
充分な検討がなされていない。 (2)J.Chromatography 第648巻 451〜457頁（1993年）に
は、固定相にシリカゲルとアミノプロピル基で被覆され
たシリカゲルとを用いて、魚油由来の高度不飽和脂肪酸
のメチルエステルを分離する方法が報告されている。し
かし、この報告においては、アラキドン酸メチルとエイ
コサペンタエン酸メチルとの分離は示されておらず、同
一炭素数で二重結合数の異なる試料の分離に関して具体
的な技術を開示していない。更に、運転圧力が２００ｋ
ｇ／ｃｍ²と高圧であり、工業的生産には不向きであ
る。 (3)「化学工業」(284〜290頁、1995年、4月号)には、固
定相にシリカゲルを用いた、魚油由来の不飽和脂肪酸の
メチルエステルを分離する方法が報告されている。しか
し、この方法では、シリカゲルを用いた超臨界クロマト
グラフィーによる分離精製の後に、アミノプロピル基で
コートしたシリカゲルカラムでの超臨界クロマトグラフ
ィーを再度行い高純度を達成する方法であるため、安定
的に高純度のエイコサペンタエン酸メチルを得ることは
できていない。また、炭素数が同一で二重結合数が異な
るアラキドン酸メチルとエイコサペンタエン酸メチルの
分離について何も言及されておらず、微量不純物の除去
に関して具体的な検討が行なわれていない。 (4)Meeting Info．：922頁,5037：PREP 92−9th Intern
ational Symposium onPreparative and Industrial Chr
omatography(9225037).Nancy(France)には、固定相にシ
リカゲルを用いて魚油由来の不飽和脂肪酸エチルエステ
ルの分離方法が報告されている。しかし、この分離方法
で得られるエイコサペンタエン酸エチルの純度は、９
５．８％以下と低く、更には炭素数が同一で二重結合数
が異なるアラキドン酸エチルとエイコサペンタエン酸エ
チルとの分離は示されていない。 (5)特公昭６３−１１２５３６号公報には、リノレン酸
の高純度化に関して超臨界クロマトグラフィーを用いる
方法が開示されている。しかし、この方法は、アルキル
基などの修飾シリカゲルを用いる技術であり、工業的に
は不向きである。 (6)ＬＣ−ＧＣ vol.７,Num 6、p502−507(1989年)に
は、動植物油由来の種々の不飽和脂肪酸誘導体を、超臨
界クロマトグラフィーにより精製する方法が報告されて
いる。しかし、この文献には、工業的に使用できる方法
については記載されていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の第１の目的
は、従来は製造が困難であった、炭素数が同一で二重結
合数の異なる高度不飽和脂肪酸誘導体を効率よく、特
に、熱異性化物の生成を抑制して、高純度の高度不飽和
脂肪酸誘導体を工業的に得ることが可能な高度不飽和脂
肪酸誘導体の製造方法を提供することにある。本発明の
第２の目的は、天然に存在しない、熱異性化物を実質的
に含有せず、炭素数が同一で二重結合数が異なるアラキ
ドン酸又はそのアルキルエステルも実質的に含有しな
い、医薬品又は食品等として、拮抗作用の少ない高純度
エイコサペンタエン酸誘導体を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前述の課
題に鑑み、鋭意検討した結果、特定なシリカゲルを使用
し、特定な運転条件で超臨界クロマトグラフィーを運転
することにより、シリカゲルに化学修飾等をすることな
しに、高度不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステルを効
率よく分離精製して製造することができることを見出
し、本発明を完成した。また、このような方法を利用す
ることにより、従来得られていない、熱異性化物を実質
的に含有せず、炭素数が同一で二重結合数が異なるアラ
キドン酸又はそのアルキルエステルも実質的に含有しな
い、高純度エイコサペンタエン酸誘導体が得られること
を見出し、本発明を完成した。即ち、本発明によれば、
移動相として超臨界二酸化炭素、固定相としてシリカゲ
ルを用いた超臨界クロマトグラフィーによって分離精製
し、高度不飽和脂肪酸誘導体を製造する方法であって、
(ａ)超臨界クロマトグラフィーに供する原料として、炭
素数が同一で二重結合数が異なる高度不飽和脂肪酸又は
そのアルキルエステルを含む混合物を用い、(ｂ)固定相
としてのシリカゲルが、粒径４．０〜２５．０μｍ、細
孔径０．００５〜０．０１５μｍ、細孔容積０．６５〜
１．１０ｍｌ／ｇ、且つ比表面積２５０〜６５０ｍ²／
ｇであり、(ｃ)超臨界クロマトグラフィーの運転条件
が、圧力１００〜１３０ｋｇ／ｃｍ²、温度３０〜６０
℃、線速度１０〜７０ｃｍ／分であることを特徴とする
高度不飽和脂肪酸誘導体の製造方法が提供される。また
本発明によれば、上記方法で得られた、ガスクロマトグ
ラフィーの純度が９７．０質量％以上、かつアラキドン
酸／エイコサペンタエン酸の比が０．０１０５以下であ
る高純度エイコサペンタエン酸誘導体が提供される。

【０００６】

【発明の実施の形態】本発明の製造方法に用いる原料
は、(ａ)炭素数が同一で二重結合数が異なる高度不飽和
脂肪酸又はそのアルキルエステルを含む混合物である。
炭素数が同一で二重結合数が異なる高度不飽和脂肪酸と
しては、例えば、(■)エイコサペンタエン酸−アラキド
ン酸、(■)ステアリン酸−オレイン酸−リノール酸−リ
ノレン酸、(■)ドコサペンタエン酸−ドコサヘキサエン
酸等が挙げられる。これらのアルキルエステルも同様に
使用でき、このようなアルキルエステルとしては、例え
ば、脂肪酸炭素数１〜８のアルコールエステル、グリセ
リンエステル等が挙げられる。より好ましくは、炭素数
１のメチルエステル、炭素数２のエチルエステルが挙げ
られる。原料の純度は特に限定されず、例えば、エイコ
サペンタエン酸又はそのアルキルエステルと、アラキド
ン酸又はそのアルキルエステルとを含む混合物として
は、マイワシ油、アンチョビー油、サンマ油、タラ油等
の魚油に代表される海産動物油；植物プランクトンから
得られる海産植物油等の海産動植物由来のものを挙げる
ことができる。

【０００７】本発明において高度不飽和脂肪酸誘導体を
高純度で得るためには、海産動植物油のケン化物又はそ
のエステル化物、あるいは海産動植物油をアルコリシス
して得られる脂肪酸エステルを用いることが好ましく、
魚油脂肪酸のエステルを用いることが特に好ましい。本
発明においては、原料とする高度不飽和脂肪酸誘導体を
含有する混合物において、高度不飽和脂肪酸誘導体の量
は１０質量％以上含有するものが好ましい。本発明に用
いる上記原料である、高度不飽和脂肪酸誘導体を含む混
合物は、溶剤で希釈しなくても良好な分離が可能であ
る。しかし、必要であれば、ヘキサン、クロロホルム等
により高度不飽和脂肪酸誘導体を含む混合物を希釈して
原料に供しても良い。

【０００８】本発明に用いる超臨界クロマトグラフィー
における固定相のシリカゲルは、(ｂ)粒径が４．０〜２
５．０μｍであり、細孔径が０．００５〜０．０１５μ
ｍ、好ましくは０．００７〜０．０１０μｍであり、細
孔容積が０．６５〜１．１０ｍｌ／ｇ、好ましくは０．
８０〜１．００ｍｌ／ｇであり、細孔径と細孔容積から
求まる比表面積が２５０〜６５０ｍ²／ｇ、好ましくは
４００〜６００ｍ²／ｇである。シリカゲルの細孔径が
０．００５μｍ未満の場合、高度不飽和脂肪酸誘導体を
含む混合物とシリカゲルの相互作用が強固となり溶出せ
ず、０．０１５μｍを超える場合には分離が不十分とな
る。また、シリカゲルの比表面積が２５０ｍ²／ｇ未満
の場合、分離が不十分となり、６５０ｍ²／ｇを超える
場合には高度不飽和脂肪酸誘導体を含む混合物とシリカ
ゲルとの相互作用が強固となり溶出しない。更に、細孔
容積が０．６５ｍｌ／ｇ未満の場合、分離が不十分とな
り、１．１０ｍｌ／ｇを超える場合、シリカゲルの機械
強度が低下し破損する恐れがある。シリカゲルの粒径が
４．０μｍ未満の場合、超臨界クロマトグラフィーを運
転する上でカラムの圧損が大きくなり、２５０μｍを超
える場合には分離が不十分となる。このようなシリカゲ
ルは、例えば、次の製造法等により得ることができる。
まず、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カリウム、ケイ酸リチ
ウム等のケイ酸アルカリ金属塩水溶液を、硫酸、塩酸、
硝酸等の鉱酸と反応させるか、あるいはテトラメトキシ
シラン、テトラエトキシシラン等のテトラアルコキシシ
ランを加水分解することによりシリカゾルを生成させ
る。次に、該シリカゾルを疎水性有機溶媒中に界面活性
剤と共に乳化分散後ゲル化させるか、あるいは熱気流中
に噴霧することにより球状シリカゲルが得られる。また
前記シリカゾルをいったんゲル化させヒドロゲルスラリ
ーとした後に湿式粉砕し、噴霧乾燥することによっても
球状シリカゲルを得ることができる。このような方法に
おいて、比表面積、細孔容積、平均細孔径は任意にコン
トロールすることが可能であるが、特にゲル化時あるい
はゲル化後の熟成時のｐＨを制御することにより所望の
物性値のシリカゲルを得ることが可能である。粒子径に
ついては乳化分散による場合、界面活性剤の種類、乳化
時の撹拌速度等により制御できる。また、噴霧乾燥法に
よる場合は、ディスク回転数やノズル圧等により制御で
きる。本発明に使用するシリカゲルは上記方法等により
得ることができるが、特にこの方法に限定されない。最
終的に上記所望の比表面積、細孔容積、平均細孔径、平
均粒子径を有するシリカゲルであれば良い。

【０００９】本発明の製造方法において、超臨界クロマ
トグラフィーによる条件は、(ｃ)圧力１００〜１３０ｋ
ｇ／ｃｍ²、好ましくは１１０〜１３０ｋｇ／ｃｍ²であ
り、カラム温度３０〜６０℃、好ましくは４０〜５０℃
であり、線速度１０〜７０ｃｍ／分、好ましくは１５〜
３５ｃｍ／分である。圧力が１００ｋｇ／ｃｍ²未満の
場合、高度不飽和脂肪酸誘導体を含む混合物とシリカゲ
ルとの相互作用が強固となり溶出せず、１３０ｋｇ／ｃ
ｍ²を超える場合には分離が不十分となる。カラム温度
が３０℃未満の場合、移動相の二酸化炭素が超臨界流体
とならず、６０℃を超えると高度不飽和脂肪酸誘導体を
含む混合物とシリカゲルとの相互作用が強固となり溶出
しない。線速度が１０ｃｍ／分未満の場合、分離に要す
る時間が長くなり、７０ｃｍ／分を超える場合には分離
が不十分となる。

【００１０】本発明の製造方法において、超臨界クロマ
トグラフィーに用いる移動相は、超臨界二酸化炭素であ
り、例えば、液化炭酸ガスが用いられる。ガスボンベ等
から分離用機器へ液化炭酸ガスを導入することによって
分離精製ができる。好ましくは超臨界二酸化炭素の純度
は９９．９％以上である。必要であれば、二酸化炭素に
添加溶剤を加えても良い。添加溶剤としては、水、メタ
ノール、エタノール等の低級アルコールや、アセトニト
リル等が挙げられる。前記添加溶媒の添加割合は、炭酸
ガスに対して０．１〜１００質量％程度が望ましい。

【００１１】本発明の製造方法により得られる、高度不
飽和脂肪酸誘導体は、特に熱異性化物の生成が抑制され
ており、高純度の高度不飽和脂肪酸誘導体が工業的に効
率よく得ることができる。特に、原料が、エイコサペン
タエン酸又はそのアルキルエステルと、アラキドン酸又
はそのアルキルエステルとの混合物である場合、エイコ
サペンタエン酸又はそのアルキルエステルのガスクロマ
トグラフィーの純度が、９７．０質量％以上であり、ア
ラキドン酸／エイコサペンタエン酸の比が０．０１０５
以下である、従来製造ができなかった、高純度のエイコ
サペンタエン酸誘導体を得ることができる。

【００１２】

【発明の効果】本発明の製造方法では、特定の原料を用
い、超臨界クロマトグラフィーに用いる移動相及び固定
相を限定し、且つ特定の運転条件を設定するので、炭素
数が同一で二重結合数が異なる従来は分離が困難であっ
た高度不飽和脂肪酸誘導体を効率よく、分離精製し、製
造することができる。特に、熱異性化物の生成を防止若
しくは抑制でき、高純度の高度不飽和脂肪酸誘導体を工
業的に大量に製造することが可能である。更に、炭素数
が同一で二重結合数が異なる高度不飽和脂肪酸誘導体
が、エイコサペンタエン酸又はそのアルキルエステルを
含有する混合物を原料とした場合、その原料から、熱異
性化物を生成することなく、純度９７．０質量％以上の
高純度のエイコサペンタエン酸又はそのアルキルエステ
ルを効率よく製造することが可能である。そして、この
ような製造方法により得られるエイコサペンタエン酸又
はそのアルキルエステルは、天然に存在しない熱異性化
物を含有せず、炭素数が同一で二重結合数が異なるアラ
キドン酸又はそのアルキルエステルも含有しないため、
医薬品又は食品として、拮抗作用の少ない高い有用性を
有する。

【００１３】

【実施例】以下、実施例に基づいて本発明を更に詳細に
説明する。なお、用いたガスクロマトグラフィーの条
件、超臨界クロマトグラフィーの運転条件および評価方
法を以下に示す。 1．＜ガスクロマトグラフィーによる脂肪酸誘導体の測
定条件＞ガスクロマトグラフ本体；Hewlett Packard社製、ＨＰ
６８９０、キャリアガス及び流量；ヘリウム、１ｍｌ／分、サンプル濃度；８ｍｇ／ｍｌ、ヘキサン溶液、試料注入量；1μｌ、試料注入方法；スプリット法（スプリット比１００：
１）、インジェクション温度；２５０℃、検出器温度；２５０℃、カラム温度；１４０℃から２１０℃まで昇温、昇温速度；５℃／分、検出器；ＦＩＤ（水素炎イオン化検出器）、カラム；ＤＢ−ＷＡＸ(Ｊ＆Ｗ社製)30×0.25ｍｍ×0.25
μｍフィルム熱異性化物の含有率はガスクロマトグラムの、エイコサ
ペンタエン酸とヘンエイコサペンタエン酸(Ｃ２１：
Ｆ；５)のピークの間にある、天然には認められないピ
ークを熱異性化物とした。

【００１４】2．＜超臨界クロマトグラフィーの運転条
件１＞；実施例１〜３、比較例１〜６ポンプ日本分光社製型式８８０−ＰＵ検出器日本分光社製型式８７５−ＵＶ背圧調整弁日本分光社製型式８８０−８１カラムオーブンＧＬサイエンス社製型式ＭＯＤ
ＥＬ５５６カラムサイズ４．６ｍｍ(内径)×１５ｃｍ運転圧力１３０ｋｇ／ｃｍ² カラム温度４０℃ 線速度３０．１ｃｍ／分試料原料１試料量１０μｌ＜超臨界クロマトグラフィーの運転条件２＞；実施例４装置一式ＮＯＶＡ社製超臨界クロマトグラフ
ィー装置カラムサイズ２５ｍｍ(内径)×１００ｃｍ検出器日本分光社製型式９７５−ＵＶ運転圧力１３０ｋｇ／ｃｍ² カラム温度４０℃ 線速度３９．１ｃｍ／分試料原料２試料量５００μｌ＜超臨界クロマトグラフィーの運転条件３＞；実施例５装置一式ＮＯＶＡ社製超臨界クロマトグラフ
ィー装置カラムサイズ１２５ｍｍ(内径)×１００ｃｍ検出器日本分光社製型式９７５−ＵＶ運転圧力１３０ｋｇ／ｃｍ² カラム温度４０℃ 線速度１９．４ｃｍ／分試料原料２試料量４０ｍｌ

【００１５】3．分離係数および分離度の測定と算出方
法本発明の超臨界二酸化炭素を用いたクロマトグラフィー
により得られたクロマトグラムから必要な数値を求め、
第１３改正日本薬局方の液体クロマトグラフ法に準じて
分離係数、分離度を算出した。

【００１６】4．シリカゲルの物性測定：本発明の実施
例及び比較例に用いたシリカゲルの各物性値はメーカー
が求めた値を採用した。なお測定法としては、（株）地
人書館、触媒工学講座第４巻、触媒基礎測定法、第５８
〜８３頁(昭和３９年発行)参照。

【００１７】＜原料１＞；実施例１〜３、比較例１〜６
では、市販のアラキドン酸エチル(フナコシ（株）、ア
ラキドン酸−エチル純度９９％以上）、エイコサペンタ
エン酸エチル(フナコシ（株）、エイコサペンタエン酸
(ＥＰＡ)−エチル純度９５％以上）を等量混合した基準
試料２質量％ヘキサン溶液を原料１として用いた。＜原料２＞；実施例４及び５では、市販の魚油由来のエ
チルエステル(ＥＰＡ７５．５７％、アラキドン酸エチ
ル２．９５％、(Ｃ２０：Ｆ４／ＥＰＡ)比＝０．０３
９）を原料２として用いた。

【００１８】実施例１平均粒径４．７μｍ、平均細孔径０．００７μｍ、細孔
容積１．０１ｍｌ／ｇ、比表面積５８２ｍ²／ｇからな
るシリカゲルを固定相に用いて超臨界二酸化炭素を移動
相とした超臨界クロマトグラフィーを前述の運転条件１
の条件で運転し、原料１の分離を行った。得られたクロ
マトグラムからアラキドン酸エチルとエイコサペンタエ
ン酸エチルの分離係数及び分離度を求めた。その結果を
表１に示す。併せて、シリカゲルの物性及び運転条件を
表１に示す。

【００１９】実施例２固定相のシリカゲルを、平均粒径４．４μｍ、平均細孔
径０．００５６μｍ、細孔容積０．６５ｍｌ／ｇ、比表
面積４６４ｍ²／ｇのシリカゲルに変更した以外は実施
例１と同様に、超臨界二酸化炭素を移動相とした超臨界
クロマトグラフィーを前述の運転条件１に従って運転
し、原料１の分離を行った。得られたクロマトグラムか
らアラキドン酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの
分離係数及び分離度を求めた。その結果を表１に示す。
併せて、シリカゲルの物性及び運転条件を表１に示す。

【００２０】実施例３固定相のシリカゲルを、平均粒径２１．４μｍ、平均細
孔径０．００７７μｍ、細孔容積０．９９ｍｌ／ｇ、比
表面積５１４ｍ²／ｇに変更した以外は実施例１と同様
に、超臨界二酸化炭素を移動相とした超臨界クロマトグ
ラフィーを前述の運転条件１に従って運転し、原料１の
分離を行った。得られたクロマトグラムからアラキドン
酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの分離係数及び
分離度を求めた。その結果を表１に示す。併せて、シリ
カゲルの物性及び運転条件を表１に示す。

【００２１】比較例１固定相のシリカゲルを、アミノプロピルシリル基によリ
コートされたシリカゲルに変更した以外は実施例１と同
様に、超臨界二酸化炭素を移動相とした超臨界クロマト
グラフィーを前述の運転条件１に従って運転し、原料１
の分離を行った。得られたクロマトグラムからアラキド
ン酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの分離係数及
び分離度を求めた。その結果を表１に示す。併せて、シ
リカゲルの物性及び運転条件を表１に示す。

【００２２】比較例２固定相のシリカゲルを、オクタデシルシリル基によリコ
ートされたシリカゲルに変更した以外は実施例１と同様
に、超臨界二酸化炭素を移動相とした超臨界クロマトグ
ラフィーを前述の運転条件１に従って運転し、原料１の
分離を行った。得られたクロマトグラムからアラキドン
酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの分離係数及び
分離度を求めた。しかし、アラキドン酸エチルとエイコ
サペンタエン酸エチルとの分離が悪く、分離係数及び分
離度を求めることができなかった。シリカゲルの物性及
び運転条件を表１に示す。

【００２３】比較例３固定相のシリカゲルを、トリメチルシリル基によリコー
トされたシリカゲルに変更した以外は実施例１と同様
に、超臨界二酸化炭素を移動相とした超臨界クロマトグ
ラフィーを前述の運転条件１の条件で運転し、原料１の
分離を行った。得られたクロマトグラムからアラキドン
酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの分離係数及び
分離度を求めた。しかし、アラキドン酸エチルとエイコ
サペンタエン酸エルとの分離が悪く分離係数及び分離度
を求めることはできなかった。その結果を表１に示す。
併せて、シリカゲルの物性及び運転条件を表１に示す。

【００２４】比較例４固定相のシリカゲルを、平均粒径４．２μｍ、平均細孔
径０．０２４７μｍ、細孔容積１．０８ｍｌ／ｇ、比表
面積１７５ｍ²／ｇのシリカゲルに変更した以外は実施
例１と同様に、超臨界二酸化炭素を移動相とした超臨界
クロマトグラフィーを前述の運転条件１に従って運転
し、原料１の分離を行った。得られたクロマトグラムか
らアラキドン酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの
分離係数及び分離度を求めた。その結果を表１に示す。
併せて、シリカゲルの物性及び運転条件を表１に示す。

【００２５】比較例５実施例１で用いた運転条件において、圧力を９０ｋｇ／
ｃｍ²に変更した以外は実施例１と同様に、超臨界二酸
化炭素を移動相とした超臨界クロマトグラフィーを運転
し、原料１の分離を行った。得られたクロマトグラムか
らアラキドン酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの
分離係数及び分離度を求めた。しかし、アラキドン酸エ
チルとエイコサペンタエン酸エチルは溶出せず分離係数
及び分離度を求めることは不可能であった。シリカゲル
の物性及び運転条件を表１に示す。

【００２６】比較例６実施例１で用いた運転条件において、カラム温度を８０
℃に変更した以外は実施例１と同様に、超臨界二酸化炭
素を移動相とした超臨界クロマトグラフィーを運転し、
原料１の分離を行った。得られたクロマトグラムからア
ラキドン酸エチルとエイコサペンタエン酸エチルの分離
係数及び分離度を求めた。その結果を表１に示す。併せ
て、シリカゲルの物性及び運転条件を表１に示す。

【００２７】

【表１】

【００２８】実施例４実施例３で用いたシリカゲルを充填したカラムを用いた
超臨界クロマトグラフィーを、前述の運転条件２に従っ
て運転し、原料２の分離を行った。試料注入後、９１分
経過後から１２９分経過後までの画分を分取し、純度９
７．８０質量％、Ｃ２０：４／ＥＰＡ比＝０．００４７
でエイコサペンタエン酸エチル１９８ｍｇ(エイコサペ
ンタエン酸エチル回収率５６．３１％)を得た。このエ
チルエステルのガスクロマトグラフィーによる分析で
は、熱異性体に相当するピークは認められなかった。精
製後の脂肪酸組成を表２示す。

【００２９】実施例５実施例３で用いたシリカゲルを充填したカラムを用いた
超臨界クロマトグラフィーを、前述の運転条件３に従っ
て運転し、原料２の分離を行った。試料注入後、１５０
分経過後から２１０分経過後までの画分を分取し、純度
９７．４３質量％、Ｃ２０：４／ＥＰＡ比＝０．００７
５でエイコサペンタエン酸エチル２００．５ｇ(エイコ
サペンタエン酸エチル回収率７４．８１％)を得た。こ
のエチルエステルのガスクロマトグラフィーによる分析
では、熱異性体に相当するピークは認められなかった。
精製後の脂肪酸組成を表２に示す。

【００３０】

【表２】

【００３１】以上の結果から、特定のシリカゲルを用
い、特定の条件で超臨界クロマトグラフィーを運転する
本発明の実施例１〜５は、比較例１〜６に比べて、エイ
コサペンタエン酸エチルエステルの分離精製の効率がよ
く、工業的に分離精製ができることが分かる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１１Ｂ 3/10 Ｃ１１Ｂ 3/10 (72)発明者森真人茨城県つくば市春日２−17−14 (72)発明者徳森恒雄岡山県玉野市東高崎24−６クロリンエンジニアズ株式会社岡山事業所内Ｆターム(参考） 4H006 AA01 AA02 AD17 BC51 BC52 4H059 AA06 AA11 BA26 BA30 BB03 BB05 BB07 CA14 CA24 CA72 CA73 DA16 EA21

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】移動相として超臨界二酸化炭素、固定相
としてシリカゲルを用いた超臨界クロマトグラフィーに
よって分離精製し、高度不飽和脂肪酸誘導体を製造する
方法であって、(ａ)超臨界クロマトグラフィーに供する
原料として、炭素数が同一で二重結合数が異なる高度不
飽和脂肪酸又はそのアルキルエステルを含む混合物を用
い、(ｂ)固定相としてのシリカゲルが、粒径４．０〜２
５．０μｍ、細孔径０．００５〜０．０１５μｍ、細孔
容積０．６５〜１．１０ｍｌ／ｇ、且つ比表面積２５０
〜６５０ｍ²／ｇであり、(ｃ)超臨界クロマトグラフィ
ーの運転条件が、圧力１００〜１３０ｋｇ／ｃｍ²、温
度３０〜６０℃、線速度１０〜７０ｃｍ／分である、こ
とを特徴とする高度不飽和脂肪酸誘導体の製造方法。
【請求項２】炭素数が同一で二重結合数が異なる高度
不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステルを含む混合物の
原料が、エイコサペンタエン酸又はそのアルキルエステ
ルと、アラキドン酸又はそのアルキルエステルとの混合
物であることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】分離精製されたエイコサペンタエン酸又
はそのアルキルエステルのガスクロマトグラフィーの純
度が、９７．０質量％以上であり、アラキドン酸／エイ
コサペンタエン酸の比が０．０１０５以下であることを
特徴とする請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】請求項３に記載の方法で得られた、ガス
クロマトグラフィーの純度が９７．０質量％以上、かつ
アラキドン酸／エイコサペンタエン酸の比が０．０１０
５以下である高純度エイコサペンタエン酸誘導体。