JP2000514404A - 光不安定保護基を有するヌクレオシド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、一般式（Ｉ）の光不安定保護基を有するヌクレオシド誘導体に関する。式中、Ｒ¹は、Ｈ，ＮＯ₂，ＣＮ，ＯＣＨ₃，ハロゲン、または炭素数１ないし４のアルキルまたはアルコキシアルキルを、Ｒ²は、ＨまたはＯＣＨ₃を、Ｒ³は、Ｈ，Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，ＮＯ₂，または炭素数２ないし５の脂肪族アシル基を、Ｒ⁴は、Ｈ，ハロゲン、ＯＣＨ₃，炭素数１ないし４のアルキル基、または置換基を有していてもよいアリール基を、Ｒ⁵は、Ｈまたはオリゴヌクレオチドを創生するための通常の官能基を、Ｒ⁶は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲンまたはＸＲ⁸を、ここでＸがＯもしくはＳの場合、Ｒ⁸はヌクレオチド化学において通常の保護基を表し、Ｂは、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、２，６−ジアミノプリン−９−イル、ヒポキサンチン−９−イル、５−メチルシトシン−１−イル、５−アミノ−４−イミダゾールカルボン酸アミド−１−イルまたは５−アミノ−４−イミダゾールカルボン酸アミド−３−イルであり、ここでＢがアデニン、シトシンもしくはグアニンの場合、一級アミノ官能基が、所望により恒久保護基を有していてよい。これらの誘導体は、ＤＮＡチップ上のオリゴヌクレオチドの光制御合成に使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】 光不安定保護基を有するヌクレオシド誘導体詳細な説明 本発明の主題は、光不安定保護基を有するヌクレオシド誘導体およびその製造 方法に関する。 ヌクレオシドおよびヌクレオチドのヒドロキシおよびホスフェート官能基のた めの光不安定保護基が、例えば固体担体上でオリゴヌクレオチドの光制御並行合 成（S.P.A．Fordor et al．Science 1991,251,p.767 et seq.）に好適であるの で、特に該保護基に関するものである。 該保護基が、迅速なＤＮＡ配列分析のための分子生物学に必要とされている、 いわゆるＤＮＡチップ（表面に多数の異なったオリゴヌクレオチドが配列されて いる）の製造を可能とする。該保護基は、先行技術では、これまで主として０− ニトロベンジル基およびその誘導体が、ヌクレオシドおよびヌクレオチド化学（ V.N.R.Pillai,Org.Photochem.1987,9,P.225 et seq．およびJ.W.Walker et al., J.Am.Chem.Soc.1988,110,p.7170et seq.）における光不安定保護基として使用さ れてきた。対応するヌクレオシドおよびヌクレオチド誘導体の遅くかつ部分的に 不完全な脱保護が、これらの保護基の特別な欠点であった。その上、０−ニトロ ベンジル化合物の分解の間に、有害なニトロソフェニル化合物の形の望ましくな い副生物がある程度生成する。 「Biophosphates and Their Analogues−Synthesis，Structure，Metaboli sm and Activity」，Elsevier Science Publishers B.V.（Amsterdam）1987,P .133 et seq.におけるW.Pfleiderer et al．によると、もっぱら塩基部における 、特にグ アノシンのＯ⁶位における保護基として導入されている、２−(ｏ−ニトロフェニ ル)エチルが、ヌクレオシドのための他の光不安定保護基として推奨されていた 。同刊行物では、またｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル（ＮＰＥＯＣ）基 および２、４−ジニトロフェニルエトキシカルボニル（ＤＮＰＥＯＣ）基がとも に、基の脱離はもっぱら塩基触媒β−脱離によって行われていたが、糖部のアミ ノ官能基およびヒドロキシル官能基のための保護基として記載されている。 それ故、本発明は、先行技術が持つ目だった欠点を示さないで、比較的速く、 定量的に、かつ望ましくない副生物の生成なしに脱保護できる、糖部の５'―Ｏ Ｈ官能基のための光不安定保護基を有するヌクレオシド誘導体を開発することを 目的とする。 この目的は、本発明によって、請求項１に記載の一般式（Ｉ）のヌクレオシド 誘導体によって達成された。驚くべきことに、本発明による保護基が、例えばＯ −ニトロベンジル基よりもずっと速くかつ完全に脱離することが認められた。こ れまで脱保護の際の大量の望ましくない副生物は発見できなかったし、このこと は予測もできないことであった。 本発明のヌクレオシド誘導体は、下記一般式（Ｉ）を有する： 式中、フェニル環のＲ¹，Ｒ²，Ｒ³基は、下記の意味を有する。 Ｒ¹＝Ｈ，ＮＯ₂，ＣＮ，ＯＣＨ₃，ハロゲン、または炭素数１ないし４のアルキ ルまたはアルコキシアルキル、 Ｒ²＝Ｈ，ＯＣＨ₃， Ｒ³＝Ｈ，Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，ＮＯ₂，または炭素数２ないし５の脂肪族アシル基（ 例えばアセチルなど）。 Ｏ−ニトロフェニルエーテル基のＣ₂原子に位置する基Ｒ⁴は、Ｈ，ハロゲン、 ＯＣＨ₃，炭素数１ないし４のアルキル基または所望により置換基を有していて もよいアリール基であってよい。アルキル基は、直鎖状でも分岐状でも、置換（ 特に１またはそれ以上のハロゲン原子で）されていても非置換でも、また飽和で も不飽和でもよい。同じことが、Ｒ¹のアルキルおよびアルコキシアルキル基に も適用される。Ｒ⁴は好ましくはメチル基である。アリール基は、好ましくはア ルキル(炭素数１ないし４)、アルコキシ（例えばメトキシ）もしくはジアルキル アミノ（例えばジメチルアミノ）および／またはＦ，Ｃｌ，Ｂｒ，ＮＯ₂もしく はＣＮで置換されていてよいフェニル基である。Ｒ⁴≠Ｈの場合、フェニル環の Ｒ¹，Ｒ²およびＲ³は、好ましくは水素残基である。 本発明で、ハロゲンとは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ，Ｉを意味し、好ましくはＦ、Ｃｌ もしくはＢｒ，である。 本発明における上記化合物のヌクレオシド部は、通常のＤ−リボフラノースま たは２’−デオキシリボフラノース単位およびピリミジン（Ｂ＝シトシン、チミ ン、ウラシル）もしくはプリン塩基（Ｂ＝アデニン、グアニン）よりなっている 。２，６−ジアミノプリン−９−イル、ハイポキサンチン−９−イル、５−メチ ルシトシン−１−イル、５−アミノ−４−イミダゾールカン酸アミド−１−イル または５−アミノ−４−イミダゾールカルボン酸アミド−３−イル残基も塩基と して使用することができる。 リボフラノシドもしくは２’−デオキシリボフラノース部におけるＯＨ基は、 必要に応じて、フリーの形でも、保護されていてもよい。これに関して、 のような公知のホスファイトアミド基が、３’位を保護するのに有効であった。 式中Ｒ⁷基は、同一でも異なっていてもよく、直鎖状または分基状の炭素数１な いし４のアルキル基を意味し、好ましくは、エチルもしくはイソプロピル基であ る。 リボフラノシド部（Ｒ⁶位）の２’位において、フリーのまたは保護されたＯ Ｈ基が水素もしくはハロゲン原子（特にＦ，Ｃｌ，Ｂｒ）と同様に存在していて もよい、この場合、ヌクレオチド化学で周知のいかなる保護基（Ｒ⁸）も使用で きる。酸素原子（Ｘ＝Ｏ）のために、従来公知のアルキル、アルケニル、アセチ ルもしくはシリルエーテル保護基を採用することができる。Ｒ⁶が、Ｓ−アルキ ル基（Ｘ＝Ｓ，Ｒ⁸＝アルキル）を表してもよい。好ましい例としては、Ｏ−ア ルキル保護基は、Ｏ−メチルもしくはＯ−エチル基であり、Ｏ−アルケニル保護 基は、Ｏ−アリル基であり、Ｏ−アセチル保護基は、Ｏ−テトラヒドロピラニル 基もしくはＯ−メチルテトラヒドロピラニル基であり、Ｏ−シリルエーテル保護 基は、Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル基である。 好ましい態様によれば、一級アミノ官能基を有するピリミジンもしくはプリン 塩基（例えばアデニン、シトシンおよびグアニン）は、カルボニルベースの恒久 保護基を含んでいてもよい。これについて、フェノキシアセチルもしくはジメチ ルフォルムアミジノ基が、上記に示した三つの塩基すべてに使えるので好ましい 。また、ある塩基の場合にだけ導入される特別な保護基もある。例えば、アデニ ンの場合、ベンゾイルもしくはｐ−ニ トロフェニルエトキシカルボニル(ｐ−ＮＰＥＯＣ)基がある。ｐ−ＮＰＥＯＣ基 に加えて、グアニンには、イソブチロイルまたはｐ−ニトロフェニルエチル（ｐ −ＮＰＥ）保護基も導入することができる。最後に、シトシンには、ｐ−ＮＰＥ ＯＣ基のほかにベンゾイル保護基が好適である。 本発明のヌクレオシド誘導体の製造は、三つの工程で行うことができる。第一 の工程ａ）は、下記一般式（ＩＩ）のアルコールを、 （式中、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³およびＲ⁴は、上記と同一の意味を有している） チオニルクロライドと、好ましくは５０から１２０℃の間で非極性有機溶媒中で 、最も望ましくは塩基の存在下で、反応させる。 該アルコール成分は、ほんどの場合公知であるか、または公知の方法と同様に して製造することができる。工程ａ）では、トルエンを非極性有機溶媒として使 用するのが好ましく、ピリジンを塩基として、使用するトルエンに対して２ない し１０容量％で使用するのが好ましい。反応成分は、ほぼ化学量論的比で反応さ せることができるが、チオニルクロライドは、好ましくはアルコール成分に対し て過剰に、例えば２ないし５倍モル過剰で使用される。アルコール成分の濃度は 、広い範囲で変えることができるが、１０ｍｌ溶媒当たり１．０ないし２０．０ ｍｍｏｌの濃度に設定するのが特に有利であることが判った。 下記一般式（ＩＩＩ）に相当するフェニルアルキルクロライ ドが、 この反応（約１ないし３時間の反応）で、高純度で、高収率（＞８５％）で得ら れる。 得られた生成物の処理は、好ましくは、まず反応溶液を氷水で、さらに所望に よりクロロホルムもしくはジクロロメタンで数回処理し、有機相を中和（例えば 重炭酸塩で）し、所望により乾燥し、溶媒を除去し、その後生成物を、所望によ り蒸留もしくは結晶化により、精製する。 次の工程ｂ）では、一般式（ＩＩＩ）のフェニルアルキルクロライドが、まず チオ硫酸ナトリウムと反応して対応するエステルとなり、その後塩素と反応して 下記一般式（ＩＶ）のフェニルアルキルスルホニルクロライドとなる。 チオ硫酸ナトリウムとの反応は、アルコールと水よりなる混合溶媒中で、５０ から１００℃の温度で、特にフェニルアルキルの濃度を、アルコール／水の混合 物１０ｍｌ当り１０ないし１００ｍｍｏｌに設定して行うのが好ましい。とりわ けメタノールとエタノールは、アルコールとして最良であることが証明された。 水に対するアルコールの量比は、広く変えることができるが、水に対するアルコ ールの比をほぼ１：１に調整するのが有利であることが確認されている。 チオ硫酸ナトリウムに対するフェニルアルキルクロライドの量比は、少なくと も１：１であるが、好ましい態様によれば、特にフェニルアルキルクロライド１ ｍｍｏｌ当り１．５ないし２．５ｍｍｏｌというチオ硫酸ナトリウムの明らかな 過剰条件で行われる。反応終了後、通常１０ないし２０時間後に終了するが、溶 媒は、すべてもしくはかなり、通常の方法によって除去され、精製したエステル は、さらに分離ないしは処理することなく、塩素と反応してフェニルアルキルス ルホニルクロライドとなる。この塩素化は、水中で、水／酢酸混合物（好ましい 量比は４：１から２：１）もしくは水／ジクロロメタン混合物（好ましい量比は ２：１から１：１）温度０ないし１０℃で、大過剰の塩素を用いて行われるのが 好ましい。この工程では、フェニルアルキルクロライドの濃度は、溶媒１００ｍ ｌ当り５ないし３０ｍｍｏｌであることが好ましい。 塩素処理（約１０ないし３０分）の後、沈殿物を分離し、粗生成物を結晶化も しくはカラムクロマトグラフィなどの公知の方法で精製する。この際、対応する フェニルアルキルスルホニルクロライドは、固体状か、油状かによって大きく異 なった収率となる。 フェニルアルキルスルホニルクロライドは、最後に工程ｃ）で一般式（Ｖ）の ヌクレオシドと反応する。 式中、Ｒ⁵，Ｒ⁶およびＢは前記と同じ意味を持つ。 同反応は、ジクロロメタンとピリジンよりなる混合溶媒中で、−６０ないし０ ℃の温度で行うのが好ましい。ピリジンに対するジクロロメタンの混合比は、そ れほど厳密ではないが、ピリ ジン１容量部当りジクロロメタン１ないし３容量部が好ましい。 本発明の好ましい態様によれば、それぞれの反応温度で、ピリジンに溶解した ヌクレオシド（Ｖ）が装入され、フェニルアルキルスルホニルクロライドのジク ロロメタン溶液が滴下添加される。フェニルアルキルスルホニルクロライドに対 するヌクレオシドのモル比は、化学量論によりほぼ１：１に調整することができ る。しかしながら、フェニルアルキルスルホニルクロライドを過剰に使用するの が好ましく、フェニルアルキルスルホニルクロライドに対するヌクレオシドのモ ル比は、１：１ないし１：２である。最後に、混合溶媒中のヌクレオシドの濃度 は、広い限界範囲の中で変えることができるが、溶媒１０ｍｌ当り０．１ないし ３．０ｍｍｏｌに設定するのが好ましい。 反応が完了（反応時間は約１ないし１０時間）すると、本発明のヌクレオシド 誘導体を、ジクロロメタンによる希釈、水洗による塩の除去、有機相の乾燥、溶 液の濃縮もしくは結晶化、およびその後のカラムクロマトフラフィなどの公知の 方法で、単離もしくは精製することができる。このような方法で得られるヌクレ オシド誘導体は、高純度および高収率（３０ないし６５％）で得られる。 好ましい態様によれば、反応工程ｂ）によって、下記ホスファイトアミド基を 公知の方法によって、Ｒ⁵＝Ｈであるヌクレオシド誘導体の３’位に導入するこ とができる。この相当するホスフィンとの反応は、通常ジクロロメタンとアセト ニトリルからなる混合溶媒中で、０ないし２５℃の温度で、活性化剤として１Ｈ テトラゾ ールの存在下で行う。ホスフィンは、１Ｈ テトラゾールに対するホスフィンの モル比を、３：約１．０に設定するような、２倍ないし３倍モル過剰で使用する ことが好ましい。アセトニトリルに対するジクロロメタンの量比は、さほど厳密 ではなく、１：１ないし４：１が好ましい。反応終了（約１０ないし２０時間） 後、生成するヌクレオシドを、上記したように工程ｃ）で反応させることができ る。 波長＞289nmを有する多色光を用いた照射実験が示しているように、本発明の ヌクレオシドは、非常に速く（ｔ_0.5＝１ないし４０分）かつ大規模に（収率up to ９７％）脱保護されうるので、保護基の不安定さが優れたレベルであるとい う特別の要求を満たすことができる。 これらの特別な性質を持っているので、本発明のヌクレオシドは、光制御方式 で保護基の分解によって、特に固体担体上で、オリゴヌクレオチドを製造するの に特に適している。 以下の実施例は、さらに詳しく本発明を例証するためのものである。実施例 共通事項： 溶媒と試薬 溶媒は、蒸留または通常の方法で乾燥した。蒸留した溶媒のみをクロマトグラ フィに使用した。合成に使用したすべての化学品は、p.a.品質のものを使用した 。クロマトグラフィ 薄層クロマトグラフィ分析は、蛍光ラベル（シリカゲル ６０、Ｆ₂₅₄）を施 したメルク社の既成フィルム上で行った。Baker ッシュクロマトグラフィ用に使用された。操作は、０．２５ないし０．３５ｂａ ｒの加圧下で行った。ＵＶ／ＶＩＳ吸収スペクトル ＵＶスペクトルは、Perkin-Elmer社のスペクトロメーター、Model Lambda 5を 用いて、メタノール（Uvasol，メルク社）中で測定した。合成詳細には、λ[nm] および(lgε)がそれぞれ記載されている。ショルダーは、カッコ[]の中に示した 。 ¹ Ｈ-ＮＭＲスペクトル Bruker社の250MHz−FT−Spectrometer，Model AC 250、を¹Ｈ-ＮＭＲスペクトル をとるのに使用した。スペクトルは、溶媒（CDCl₃：７．２４、Ｄ6-ＤＭＳＯ:２ ．４９）のプロトンシグナルで較正した。略号 ＬＭ＝溶媒 ＥＥ＝酢酸エチルエーテル ＰＥ＝石油エーテル ＴＯＬ＝トルエン ＮＰＥ＝２−（４−ニトロフェニル）エチル− ＮＰＥＳ＝２−（２−ニトロフェニル）エチルスルフォニル− ＮＰＰＳ＝２−（２−ニトロフェニル）エチルプロピルスルフォニル−フェニルアルキルクロライドの製造 実施例１ ２−（２−ニトロフェニル）エチルクロライド 精製ピリジン２．１ｍｌとチオニルクロライド２１．６２ｇ（１３．３ｍｌ、０ ．１８ｍｏｌ）を、精製トルエン３６ｍｌ中の２−（２−ニトロフェニル）エタ ノール１０．１３ｇ（６０ｍ ｍｏｌ）に添加する。２時間還流した後、冷却し、氷上に流下する。該氷水を５ ０ｍｌのクロロホルムと混合し、５０ｍｌのクロロホルムで２度抽出する。混合 有機相を１００ｍｌの飽和重炭酸塩溶液で２度中和する。Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し た後、ろ過し、回転蒸発させた。高真空下で蒸留した後、９．７ｇ（５０ｍｍｏ ｌ、８７％）の２−（２−ニトロフェニル）エチルクロライドが、沸点６６ない し６７℃（０．００１ｍｂａｒ）の黄色油として得られる。 ＴＬＣ(シリカゲル)：Rf＝0.39(ＰＥ/ＥＥ 9:1) 実施例２ ２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エチルクロライド トルエン１０ｍｌ中の１５．６０ｇのチオニルクロライド（１３０ｍｍｏｌ）を 、精製トルエン１００ｍｌ中の２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エタノ ール８．８ｇ（４４ｍｍｏｌ）に素早く滴下添加する。反応溶液を還流下で１時 間加熱する。冷却した後、氷上に流下し、５０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、Ｈ₂ Ｏ相を５０ｍｌＣＨ₂Ｃｌ₂で２度抽出する。混合有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し た後、回転蒸発させる。９．０８ｇの２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル） エチルクロライド （４１ｍｍｏｌ、９４％）が、褐色油として得られるが、これは冷蔵庫で数日保 存すると結晶化する。 ＴＬＣ(Silica gel)：Rf＝0.71(ＰＥ/ＥＥ 7:3） ＭＰ.：<25℃ 元素分析：Ｃ₈Ｈ₇Ｃｌ₂ＮＯ₂（２２０．１ｇ／ｍｏｌ） 実施例３ ２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド トルエン１０ｍｌ中のチオニルクロライド１２ｇ（７．４ｍｌ、１００ｍｍｏｌ ）を、精製トルエン１００ｍｌとピリジン２．５ｍｌ中の２−（４−クロロ−２ −ニトロフェニル）エタノール６．７８ｇに素早く適下添加する。還流下に２時 間加熱し、冷却して、１００ｇの氷上に流下し、１００ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂と混合 する。水相を５０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で２度抽出する。混合有機相を８０ｍｌの飽 和重炭酸塩溶液で２度中和し、Ｎａ₂Ｓ Ｏ₄上で乾燥した後、ろ過し、回転蒸発させる。２−（４−クロロ−２−ニトロ フェニル）エチルクロライド７．１２ｇ（３２ｍｍｏｌ、９８％）が褐色油とし て得られるが、これは冷蔵庫で数日置くと褐色固体として固化する。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.54(ＰＥ/ＥＥ 9:1) ＭＰ.：<25℃ 元素分析：Ｃ₈Ｈ₇Ｃｌ₂ＮＯ₂（２２０．１ｇ／ｍｏｌ） 実施例４ ２−（２，４−ジニトロフェニル）エチルクロライド ２−（２，４−ジニトロフェニル）エタノール２０ｇ（９４ｍｍｏｌ）を、１２ ０ｍｌの精製トルエンおよび４ｍｌのピリジンに溶解する。精製トルエン２０ｍ ｌ中のチオニルクロライド３４ｇ（２１ｍｌ、２８２ｍｍｏｌ）を、素早く適下 添加する。２時間還流した後、冷却して、氷上に流下する。これを、１００ｍｌ のＣＨ₂Ｃｌ₂と混合し、水相を５０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で ２度抽出する。混合有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥した後、ろ過し、回転蒸発させ る。２−（２、４−ジニトロフェニル）エチルクロライド２１．５１ｇ（９３ｍ ｍｏｌ、９８％）が褐色油として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.62(ＰＥ/ＥＥ 7:3) 実施例５ ２−（２−ニトロフェニル）プロピルクロライド トルエン（精製）１０ｍｌ中のチオニルクロライド１２．１６ｇ（７．５ｍｌ、 １０２ｍｍｏｌ）を、精製トルエン９０ｍｌとピリジン２ｍｌ中の２−（２−ニ トロフェニル）プロパノール６．２ｇ（３４ｍｍｏｌ）に素早く適下する。反応 溶液を、還流下に１時間加熱する。冷却後、１００ｇの１００ｇの氷上に流下し 、８０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂と混合する。水相を８０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で２度抽出す る。混合有機相を１２０ｍｌの飽和重炭酸塩溶液で２度中和し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で 乾燥した後、回転蒸発させる。２−（２−ニトロフェニル）プロピルクロライド ６．６２ｇ（３３ｍｍｏｌ、９８％）が褐色油として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.75(ＰＥ/ＥＥ 7:3)元素分析：Ｃ₉Ｈ₁₀ＣｌＮＯ₂（１９９．６ｇ／ｍｏｌ） フェニルアルキルスルホニルクロライドの製造 実施例６ ２−（２−ニトロフェニル）エチルスルホニルクロライド ２−（２−ニトロフェニル）エチルクロライド３．７ｇ（２０ｍｍｏｌ）を、５ ０％メタノール水溶液９５ｍｌ中のチオ硫酸ナトリウム五水和物７．８ｇ（３１ ｍｍｏｌ）に溶解させ、還流下で１６時間加熱する。溶液を冷却後ろ過し、沈殿 が析出するまで回転蒸発させる。これを５００ｍｌ三つ口フラスコ中にデカンテ ーションで移し、１０℃に冷やして１００ｇの氷と混ぜる。強い塩素気流を１０ 分間溶液中に流す。温度は１０℃を超えないようにする。これを室温でさらに半 時間攪拌して、過剰の塩素を追い出す。沈殿をガラスフィルターで分離し、デシ ケーター中で乾燥する。精製のため、沈殿をクロロホルムに溶解し、少量の石油 エーテルで沈殿させる。２−（２−ニトロフ ェニル）エチルスルフォニルクロライド３．２ｇ（１３ｍｍｏｌ、６５％）が、 結晶として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.65(ＰＥ/ＥＥ 7:3) ＭＰ.：76〜77℃(Lit.:74〜75°) 実施例７ ２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エチルスルホニルクロライド ２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エチルクロライド１．３ｇ（６ｍｍｏ ｌ）とチオ硫酸ナトリウム五水和物３．７ｇ（１５ｍｍｏｌ）を、エタノール／ 水（１：１）５０ｍｌ中で、還流下で３日間加熱する。反応溶液を熱間ろ過し、 乾燥するまで回転蒸発させる。残渣を水に溶解し、未反応物を除去するため、Ｃ Ｈ₂Ｃｌ₂で２度抽出する。塩素を３℃に冷却した水相に通す。そのとき、温度が １０℃を超えないように注意する。これを過剰の塩素を追い出すために、３０分 間さらに攪拌する。沈殿を分離する（粘着性なので扱い難い）。フラッシュクロ マトグラフィで精製するため、粗生成物が石油エーテルには完全には溶けないの で、それを少量のＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解してカラム（36gsilica gel、3x10cm、LM.： PE/EE、cond.9:1、gradient：200ml PE/EE 9:1,80ml 7:1,140ml 6:1,120ml 5:1, 100ml 4:1）に入 れる。２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エチルスルホニルクロライド４ ００ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ、２５％）が、黄色固体として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.19(ＰＥ/ＥＥ 9:1) ＭＰ.：75〜76℃元素分析：Ｃ₈Ｈ₇Ｃｌ₂ＮＯ₄Ｓ（２６８．１ｇ／ｍｏｌ） 実施例８ ２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル）エチルスルホニルクロライド ２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド５．０２ｇ（２２ｍ ｍｏｌ）とチオ硫酸ナトリウム五水和物８．８９ｇ（３６ｍｍｏｌ）を、５０％ メタノール水溶液８０ｍｌに溶解させ、還流下で１５時間加熱する。冷却後、ろ 過し、溶液を５０ｍｌになるまで回転蒸発させる。これを、５００ｍｌの三つ口 スラスコにデカンテーションで移し、１０℃に冷やして、 ２５ｍｌの氷酢酸および１００ｇの氷と混合する。１０分間塩素ガスを供給（温 度を１０℃を超えないようにする）した後、さらに室温で半時間過剰の塩素を追 い出すため攪拌する。得られた粘着性の沈殿を分離し、大量の水で洗浄し、デシ ケータ中のＮａＯＨ上で、一夜乾燥する。フラスコ中の残存物質をＣＨ₂Ｃｌ₂に 溶解しＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、回転蒸発させる。乾燥した沈殿物もＣＨ₂Ｃｌ₂で 取り出し、他の沈殿と一緒にして、回転蒸発させる。粗生成物（５．６３６ｇ） をシリカゲルと接触させ、フラッシュクロマトグラフィ(150g silica gel、5x11 cm、LM.：PE/EE、cond.15:1、gradient：250ml 15:1,330ml 10:1，340ml 7.5:1, 360ml 5:1)で精製する。２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル）エチルスルホ ニルクロライド３．３８ｇ（１２ｍｍｏｌ，５５％）を黄色固体として得る。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.65(ＰＥ/ＥＥ 7:3) ＭＰ.：59〜61℃ 元素分析：Ｃ₈Ｈ₇Ｃｌ₂ＮＯ₄Ｓ（２８４．１ｇ／ｍｏｌ） 実施例９ ２−（２、４−ジニトロフェニル）エチルスルホニルクロライド ２−（２、４−ジニトロフェニル）エチルクロライド９．２２ｇ（４０ｍｍｏｌ ）とチオ硫酸ナトリウム五水和物１４．８９ｇ（６０ｍｍｏｌ）を、５０％メタ ノール水溶液１８０ｍｌに溶解させ、還流下で１６時間加熱する。冷却後、ろ過 し、溶液を容量が半分になるまで回転蒸発させる。これを、５００ｍｌの三つ口 スラスコにデカンテーションで移し、１０℃に冷やして、５０ｍｌの氷酢酸およ び１５０ｇの氷と混合する。１０分間塩素ガスを供給（温度を１０℃を超えない ようにする）した後、さらに室温で半時間過剰の塩素を追い出すため攪拌する。 得られた粘着性の沈殿を分離し、大量の水で洗浄する。分離した沈殿と共に、フ ラスコ中の残存物質をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、回転蒸発さ せる。７．３４ｇの褐色油（２５ｍｍｏｌ、６２％）が得られるが、なお不純物 を含む。粗生成物を半分ずつ、さらに精製するため、シリカゲルと接触させ、フ ラッシュクロマトグラフィ(70g silica gel、4x11cm、LM.：PE/EE、cond.15:1、 gradient：200ml 15:1,330ml 10:1，340ml 7.5:1,350ml 6:1,360ml 5:1)で精製 する。合計で４．３７ｇ（１５ｍｍｏｌ、３７％）の２−（２、４−ジニトロフ ェニル）エチルスルホニルクロライドが、黄色固体として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.42(ＰＥ/ＥＥ 7:3) ＭＰ.：79〜80℃ 元素分析：Ｃ₈Ｈ₇ＣｌＮ₂Ｏ₆Ｓ（２９４．７ｇ／ｍｏｌ） 実施例１０ ２−（２−ニトロフェニル）プロピルスルホニルクロライド ２−（２−ニトロフェニル）プロピルクロライド２ｇ（１０ｍｍｏｌ）とチオ硫 酸ナトリウム五水和物３．７５ｇ（１５ｍｍｏｌ）を、５０％メタノール水溶液 ５０ｍｌに溶解させ、還流下で１５時間加熱する。冷却後、ろ過し、溶液を回転 蒸発させて油を得る。得られた油を、２５０ｍｌの三つ口スラスコ中にデカンテ ーションで移し、１０℃に冷やして、５０ｍｌの水、２５ｍ１の氷酢酸および５ ０ｇの氷と混合する。１０分間塩素ガスを供給（温度を１０℃を超えないように する）した後、さらに室温で半時間過剰の塩素を追い出すため攪拌する。反応溶 液を２００ｍｌのエーテルで１回、７５ｍｌで２回抽出する。エーテル相を合わ せて、５％亜硫酸水素ナトリウム溶液および水それぞれ１００ｍｌで洗浄し、Ｎ ａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、回転蒸発させる。粗生成物（１．０３ｇ）をシリカゲルと 接触させ、フラッシュクロマトグラフィ(34g silica gel、3x10cm、LM.：PE/EE 、cond.15:1、gradient：250ml 15:1,165ml 10:1,170ml 7.5:1,180ml 5:1)で精 製する。２−（２−ニトロフェニル）プ ロピルクロライドの遊離体４５８ｍｇと、２−（２−ニトロフェニル）プロピル スルホニルクロライド４２３ｍｇが、赤味を帯びた油として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.51(ＰＥ/ＥＥ 7:3) ＭＰ.：79〜80℃ 元素分析：Ｃ₉Ｈ₁₀Ｃｌ₂ＮＯ₄Ｓ（２６３．７ｇ／ｍｏｌ） ヌクレオシド誘導体の製造 実施例１１ Ｎ⁶−ＮＰＥＯＣ−５’−Ｏ−[２−（２−ニトロフェニル）エチルスルホニル] −２’−デオキシアデノシン −４５℃で、精製ＣＨ₂Ｃｌ₂３．５ｍｌ中の２−（２−ニトロフェニル）エチル スルホニルクロライド３０４ｇ（１．２ｍｏｌ）を、精製ピリジン３．５ｍｌ中 のＮ⁶−ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシアデノシン４３８ｇ（１ｍｍｏｌ、精製ピ リジン４ｍｌ と３度共沸させたもの）に、２０分以内に滴下する。−４０ないし−２０℃で、 ４時間攪拌した後、温度を２時間かけて−１５ないし−５℃に上昇させてから、 さらに１時間半かけて０℃になるまで上昇させる。合計７時間半後、溶液を水１ ５ｍｌおよびＣＨ₂Ｃｌ₂１５ｍｌと混合する。水相を２０ｍｌのＣＨ₂Ｃ１₂で２ 度抽出して、有機相を合わせてＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥させる。これをろ過し、回転 蒸発させて、トルエンで３回、メタノールで１回共沸させる。得られた粗生成物 をフラッシュクロマトグラフィ(37g silica gel、4x10cm、LM.：CH₂Cl₂/MeOH、c ond.100:1、gradient：80ml 100:1,100ml 100:2,100:3,100:4 and 100:5)で精製 する。Ｎ⁶−ＮＰＥＯＣ−３'、５’−ジ−Ｏ−[２−（２−ニトロフェニル）エ チルスルホニル]−２’−デオキシアデノシン１７４ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、２ ０％）と、Ｎ⁶−ＮＰＥＯＣ−５’−Ｏ−[２−（２−ニトロフェニル）エチルス ルホニル]−２’−デオキシアデノシン２１９ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ、３５％ ）が無色の泡として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.33(Tol/EE/MeOH 5:4:1） 元素分析：Ｃ₂₇Ｈ₂₇Ｎ₇Ｏ₁₁Ｓ ｘ 1/2 Ｈ₂Ｏ（６６６．６ｇ／ｍｏｌ） 実施例１２ ５’−Ｏ−[２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エチルスルホニル]−Ｎ⁶ −ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシアデノシン −４５℃で、精製ＣＨ₂Ｃｌ₂４ｍｌ中の２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル ）エチルスルホニルクロライド２９０ｍｇ（１．０２ｍｍｏｌ）を、精製ピリジ ン４ｍｌ中のＮ⁶−ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシアデノシン３５５ｍｇ（０．８ ｍｍｏｌ、精製ピリジン各４ｍｌと３度共沸させたもの）に、２０分以内に滴下 添加する。−４０ないし−３０℃で、４時間攪拌した後、温度を２時間半かけて ０℃になるまで上昇させる。合計６時間半後、溶液を水１５ｍｌおよびＣＨ₂Ｃ ｌ₂１５ｍｌと混合する。水相を１５ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で３度抽出して、有機相 を合わせてＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥させる。これをろ過し、回転蒸発させて、トルエ ンで３回、メタノールで１回共沸させる。得られた粗生成物をフラッシュクロマ トグラフィ(32g silica gel、3x10cm、LM.：CH₂Cl₂/MeOH、cond.100:1、gradient :100ml 100:1,each 100ml 100:2,100:3,100:4 and 100:5)で精製する。５’−Ｏ −[２−（２−クロロ−６−ニトロフェニル）エチルスルホニル]−Ｎ⁶−ＮＰＥ ＯＣ−２’−デオキシアデノシン２１４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、３９％）が無色 の泡として得られる。 ＴＬＣ(silica gel):Rf＝0.36(Tol/EE/MeOH5:4:1) 元素分析：Ｃ₂₇Ｈ₂₆ＣｌＮ₇Ｏ₁₁Ｓ ｘ 1/2 Ｈ₂Ｏ（７０１．１ｇ／ｍｏｌ） 実施例１３ ５’−Ｏ−[２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル）エチルスルホニル]−Ｎ⁴ −ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシシチジン ０℃で、精製ＣＨ₂Ｃｌ₂２．５ｍｌ中の２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル ）エチルスルホニルクロライド２５３ｍｇ（０．８９ｍｍｏｌ）を、精製ピリジ ン２．５ｍｌ中のＮ⁴−ＮＰＥＯＣ −２’−デオキシシチジン２５０ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ、精製ピリジン各４ｍ ｌと３度共沸させたもの）に、４５分以内に滴下添加する。０℃で、３時間４５ 分攪拌した後、溶液を水１０ｍｌおよびＣＨ₂Ｃｌ₂１５ｍｌと混合する。水相を １５ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で１回抽出して、混合有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥させ、 ろ過し、回転蒸発させて、トルエンで３回、メタノールで２回共沸させる。得ら れた粗生成物（９４２ｍｇ）をフラッシュクロマトグラフィ(37g silica gel、3 x10cm、LM.：CH₂Cl₂/MeOH、cond.CH₂Cl₂,gradient：100ml CH₂CH₂,each 200ml 1 00:1,100:2,100:3 and 100:4)で精製する。５’−Ｏ−[２−（４−クロロ−２− ニトロフェニル）エチルスルホニル]−Ｎ⁴−ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシシチジ ン２１４ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ、３４％）が無色の泡として得られる。得られ た混合留分をもう一度クロマトグラフィ(5g silica gel、1x12cm、LM.：CH₂Cl₂/ MeOH、cond.CH₂Cl₂,gradient：70ml CH₂Cl₂,each 100ml 100:5,100:1,and 50ml 100:2)にかける。３’−Ｏ−[２−（４−クロロ−２−ニトロフェニル）エチル スルホニル]−Ｎ⁴−ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシシチジン１４７ｍｌ（０．１６ ｍｍｏｌ、２７％）および３’，５’−ジ−Ｏ−[２−（４−クロロ−２−ニト ロフェニル）エチルスルホニル］−Ｎ⁴−ＮＰＥＯＣ−２’−デオキシシチジン ２４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、６％）も無色の泡として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.43(Tol/EE/MeOH 5:4:1) 元素分析：Ｃ₂₆Ｈ₂₆ＣｌＮ₅Ｏ₁₂Ｓ（６６８．０ｇ／ｍｏｌ） 実施例１４ ５’−Ｏ−[２−（２、４−ジニトロフェニル）エチルスルホニル］−Ｎ²−ＮＰ ＥＯＣ−Ｏ⁶−ＮＰＥ−２’−デオキシグアノシン -５０℃で、精製ＣＨ₂Ｃｌ₂３ｍｌ中の２−（２、４−ジニトロフェニル）エチ ルスルホニルクロライド３８１ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）を、精製ピリジン３ｍｌ 中のＮ²−ＮＰＥＯＣ−Ｏ⁶−ＮＰＥ−２’−デオキシグアノシン３９１ｍｇ（０ ．６５ｍｍｏｌ、精製ピリジン各８ｍｌと３度共沸させたもの）に、４０分以内 に滴下添加する。−５０ないし−３０℃で、４時間と、−３０ないし−１５℃で ２時間半攪拌した後、溶液を水１５ｍｌおよびＣＨ₂Ｃｌ₂１５ｍｌと混合する。 水相を２０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で１回抽出して、混合有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥 させ、ろ過し、回転蒸発させて、トルエンで３回、メタノールで１回共沸させる 。得られた粗生成物（７３０ｍｇ）をフラッシュク ロマトグラフィ(33g silica gel、3x9cm、LM.：CH₂Cl₂/MeOH、cond.CH₂Cl₂,grad ient：100ml CH₂Cl₂，each 200ml 100:0.7，100:1.4,100:2,100:3 and 100:4)で 精製する。わずかに不純な３’、５’−ジ−Ｏ−[２−（２、４−ジニトロフェ ニル）エチルスルホニル]−Ｎ²−ＮＰＥＯＣ−Ｏ⁶−ＮＰＥ−２’−デオキシグ アノシンおよび５’−Ｏ−[２−（２、４−ジニトロフェニル）エチルスルホニ ル]−Ｎ²−ＮＰＥＯＣ−Ｏ⁶−ＮＰＥ−２’−デオキシグアノシン３３９ｍｇ（ ０．３９ｍｍｏｌ、６０％）が薄黄色の泡として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.46(Tol/EE/MeOH 5:4:1) 元素分析：Ｃ₃₅Ｈ₃₃Ｎ₉Ｏ₁₆Ｓ x 1/2Ｈ₂Ｏ（８７６．８ｇ／ｍｏｌ） 実施例１５ ５’−Ｏ−[２−（２−ニトロフェニル）プロピルスルホニル]−チミジン チミジン２４２ｍｇ（１ｍｍｏｌ、精製ピリジン５ｍｌで３回共沸させたもの） を、精製ピリジン２．５ｍｌに溶解させ−６０℃に冷やす。これに精製Ｃｈ₂Ｃ ｌ₂２．５ｍｌ中の２−（２−ニトロフェニル）プロピルスルホニルクロライド ３９６ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を、１０分以内に滴下する。−６０ないし−３０ ℃で、４時間攪拌した後、温度を−１５℃まで上昇させる。合計６時間１５分後 、溶液を１５ｍｌの水およびＣＨ₂Ｃｌ₂と混合する。水相を１５ｍｌのＣＨ₂Ｃ ｌ₂で４度抽出する。有機相を合わせてＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥させ、ろ過し、回転 蒸発させる。トルエンで３回、メタノールで１回共沸させる。得られた粗生成物 （６００ｍｇ）をフラッシュクロマトグラフィ(39gsilica gel、3x11cm、LM.：C H₂Cl₂/MeOH、cond.CH₂Cl₂、gradient：100ml CH₂Cl₂，each 150ml 100:1,100:2, 100:3 and 100:4)で精製する。５’−Ｏ−[２−（２−ニトロフェニル）プロピ ルスルホニル]−チミジン２９０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ、６２％）が無色の泡 として得られる。得られた混合留分を、さらにカラム(4.5g silica gel、1x11cm 、LM.：CH₂Cl₂/MeOH、cond.CH₂Cl₂、gradient：100ml CH₂Cl₂，each 50ml 100:0 .5，100:1 and 100:2)で精製する。３’、５’−ジ−Ｏ−［２−（２−ニトロフ ェニル）−プロピルスルホニル］−チミジン１２８ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ，１ ８％）を無色の泡として、また３’−Ｏ−［２−（２−ニトロフェニル）−プロ ピルスルホニル］−チミジン２６ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ，６％）が薄赤色の泡 として得られる。 ＴＬＣ(silica gel)：Rf＝0.39(Tol/EE/MeOH 5:4:1） 元素分析(Mol.Wt.)：Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₃Ｏ₉Ｓ（４６９．５ｇ／ｍｏｌ） 照射実験 １．実施方法 対応する保護されたヌクレオシド誘導体を、Hg超高圧ランプ(２００Ｗ)、IRフ ィルター(水)、シャッター(照射時間を正確に調節するための自動シャッター)、 波長365nm付近の狭い領域をもつ標準干渉フィルター(フィルター１)、集光レン ズおよびサーモスタットでほぼ１７℃に保ったキュベットホルダーよりなる装置 によって光照射した。フィルター１の加熱を避けるため、広領域スペクトルフィ ルターＵＧ１（フィルター２）を、シャッターとフィルター１の間に装着した。 本照射実験で は、保護基だけが励起され、ヘテロ環塩基が励起されないように、波長365nmの 光を使用した。各３ｍｌの溶液（開始時濃度は０．１および／または０．００２ ５ｍｍｏｌ）を入れた水晶キュベット容器内で照射された。照射終了後、二つの サンプルをキュベット容器から取り出し、ＨＰＬＣシステムによって分析した。 Merk-Hitachi社のＨＰＬＣシステムは、以下の装置からなっている； ポンプ Ｌ-7000，自動サンプラー Ｌ-7200，ＵＶ/ＶＩＳ−検出器Ｌ-7420（検 出波長は２６０ｎｍ）およびInterface Ｄ-7000。自動制御は、ＨＳＭ Manager を備えたCompaq computerにより行った。 クロマトグラフィには、次のグラディエント（gradient）を使用した。（表１ 参照） 遊離体（Edukt）（５’−Ｏ−保護ヌクレオシド）の減少と生成物（Produkt） （（５’−Ｏ−脱保護ヌクレオシド）の増加は、得られたクロマトグラムにおい て追跡できる。分析は個々のピークの領域について行った。照射するヌクレオシ ド溶液は、参考として時間０分（即ち照射前）に注入し、その得られるピーク領 域を遊離体１００％とみなした。生成物も同様に行って、０．１および／または ０．０２５ｍｍｏｌ溶液の領域を測定し、生成物１００％とした。この参考値を 、他の時間点の生成物と遊離体のそれぞれの領域に適用した。 以下の値は、この方法で得た曲線（時間に対してプロットした濃度％）から読 み取った値である。 ｔ_H：半減期における生成物の濃度 ｔ_end：実験の最終時における生成物の濃度 この最終時は、遊離体が検出されなくなった時点に設定した。 照射実験の結果を、表２にまとめた。 表２から分かるように、半減期は、ヌクレオシドによって変わっている。５’ −Ｏ−フェニルプロピルフェニルスホニル−チミジン誘導体の場合（実施例１５ ）４９秒という最短の半減期であるが、５’−Ｏ−［２−（２−クロロ−６−ニ トロフェニル）エチルスルホニル］−保護−２’−デオキシアデノシンの場合（ 実施例１２）４２分である。 保護ヌクレオシドの収率に関しては、表２から他のヌクレオシド誘導体は約５ ０から８０％の間であるのに、５’−Ｏ−［２−（２−クロロ−６−ニトロフェ ニル］エチルスルホニル］−保護−２’−デオキシアデノシン（実施例１１）は 、最高値９７％であることが分かる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下記一般式（Ｉ）の光不安定保護基を有するヌクレオシド誘導体。 式中、 Ｒ¹＝Ｈ，ＮＯ₂，ＣＮ，ＯＣＨ₃，ハロゲン、または炭素数１ないし４のアルキ ルまたはアルコキシアルキル、 Ｒ²＝Ｈ，ＯＣＨ₃， Ｒ³＝Ｈ，Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，ＮＯ₂，または炭素数２ないし５の脂肪族アシル基、 Ｒ⁴＝Ｈ，ハロゲン、ＯＣＨ₃，炭素数１ないし４のアルキル基、または所望によ り置換基を有していてもよいアリール基Ｒ⁵＝Ｈまたはオリゴヌクレオチドを創 生するための通常の官能基 Ｒ⁶＝Ｈ，ＯＨ，ハロゲンまたはＸＲ⁸であり、ここでＸ＝ＯもしくはＳの場合、 Ｒ⁸はヌクレオチド化学において通常の保護基を表す。 Ｂ＝アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、２，６−ジアミノプリ ン−９−イル、ヒポキサンチン−９−イル、５−メチルシトシン−１−イル、５ −アミノ−４−イミダゾールカルボン酸アミド−１−イルまたは５−アミノ−４ −イミダゾールカルボン酸アミド−３−イル、ここでＢ＝アデニン、シトシンも しくはグアニンの場合、一級アミノ官能基は、所望により恒久保護基を有してい てもよい。 ２．Ｒ⁴≠Ｈの場合、Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｒ³＝Ｈである請求項１記載のヌクレオシド誘導 体。 ３．Ｒ⁴がメチル基であることを特徴とする請求項１および２に記載のヌクレオ シド誘導体。 ４．Ｒ⁵が下記一般式のホスファイトアミドであることを特徴とする請求項１か ら３に記載のヌクレオシド誘導体。 （式中、Ｒ⁷は同一でも、異なっていてもよい、炭素数１ないし４の直鎖状ま たは分岐状のアルキル基である。） ５．Ｒ⁷がエチル基またはイソプロピル基であることを特徴とする請求項４に記 載のヌクレオシド誘導体。 ６．Ｒ⁶がＸＲ⁸であり、ＸがＯのときは、Ｒ⁸がアルキル、アルケニル、アセタ ールもしくはシリルエーテル保護基を表し、ＸがＳのときは、アルキル保護基を 表すことを特徴とする請求項１ないし５に記載のヌクレオシド誘導体。 ７．Ｒ⁶としてＯ−メチルもしくはＯ−エチル基、Ｏ−アリル基、Ｏ−テトラヒ ドロピラニルもしくはＯ−メチルテトラヒドロピラニル基、またはＯ−ｔ−ブチ ルジメチルシリル基が用いられることを特徴とする、請求項６に記載のヌクレオ シド誘導体。 ８．Ｂ＝アデニン、シトシンもしくはグアニンであるとき、恒久保護基として、 フェノキシアセチルもしくはジメチルホルムアミジノ基が用いられることを特徴 とする、請求項１ないし７に記載のヌクレオシド誘導体。 ９．Ｂ＝アデニンであるとき、恒久保護基として、ベンゾイルもしくはｐ−ニト ロフェニルエトキシカルボニル（ｐ− ＮＰＥＯＣ）基が用いられることを特徴とする、請求項１ないし７に記載のヌク レオシド誘導体。 １０．Ｂ＝グアニンであるとき、該恒久保護基として、イソブチロイル、ｐ−ニ トロフェニルエチル（ｐ−ＮＰＥ）もしくはｐ−ＮＰＥＯＣ基が用いられること を特徴とする、請求項１ないし７に記載のヌクレオシド誘導体。 １１．Ｂ＝シトシンであるとき、恒久保護基として、ベンゾイルもしくはｐ−Ｎ ＰＥＯＣ基を用いることを特徴とする、請求項１ないし７に記載のヌクレオシド 誘導体。 １２．Ｒ¹またはＲ⁶におけるハロゲン原子が、フッ素、塩素または臭素であるこ とを特徴とする請求項１ないし１１に記載のヌクレオシド誘導体。 １３．下記工程の少なくとも３工程よりなる請求項１ないし１２に記載のヌクレ オシド誘導体を製造する方法。 ａ）下記一般式（ＩＩ）のアルコール （式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴は前記と同じ意味をもつ。）がチオニルクロライ ドと反応し、それから、 ｂ）工程ａ）で生成する下記一般式（ＩＩＩ）のフェニルアルキルクロライド が、 まずチオ硫酸ナトリウムで、それに続いて塩素で、下記一般 式（ＩＶ）のフェニルアルキルスルホニルクロライドに変換され、 それから ｃ）工程ｂ）で生成したフェニルアルキルスルホニルクロライドが、下記一般 式（Ｖ）のヌクレオシドと反応させられ、 （式中、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＢは、前記と同じ意味を持つ。）さらに所望により、 ｄ）Ｒ⁵＝Ｈであるヌクレオシドの３’位に公知の方法によって、下記のホス ファイトアミドが導入される。 １４．上記工程ａ）が、塩基の存在下で、５０ないし１２０℃の温度で、非極性 有機溶媒中で行われることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。 １５．工程ａ）において、チオニルクロライドが、アルコール成分に対して２倍 ないし５倍過剰量使用することを特徴とする、請求項１３および１４に記載の方 法。 １６．工程ａ）における非極性有機溶媒としてトルエンを使用 することを特徴とする、請求項１３ないし１５に記載の方法。 １７．工程ａ）における塩基としてピリジンを使用することを特徴とする、請求 項１３ないし１６に記載の方法。 １８．ピリジンを、トルエンに対して２ないし１０Vol％の量で使用することを 特徴とする、請求項１７に記載の方法。 １９．上記工程ａ）において、アルコール成分の濃度が溶媒１０ｍｌ当り１．０ ないし２０．０ｍｍｏｌであることを特徴とする、請求項１３ないし１８に記載 の方法。 ２０．工程ｂ）において、チオ硫酸ナトリウムとの反応が、アルコールと水の混 合溶媒中で、５０ないし１００℃の温度で行われることを特徴とする、請求項１ ３ないし１９記載の方法。 ２１．アルコールとして、メタノールまたはエタノールを使用することを特徴と する、請求項２０に記載の方法。 ２２．工程ｂ）において、チオ硫酸ナトリウムを、フェニルアルキルスルホニル クロライド１ｍｍｏｌ当り、１．５ないし２．５ｍｍｏｌ使用することを特徴と する、請求項１３ないし２１に記載の方法。 ２３．工程ｂ）において、塩素化を、０ないし＋２５℃の温度で、水、水／酢酸 または水／ジクロロメタン中で行うことを特徴とする、請求項１３ないし２２に 記載の方法。 ２４．工程ｃ）による反応において、ジクロロメタンとピリジンの混合溶媒を、 −６０℃ないし０℃の温度で使用することを特徴とする、請求項１３ないし２３ に記載の方法。 ２５．フェニルアルキルスルホニルクロライドに対するヌクレオシドのモル比が 、１：１ないし１：２であることを特徴とする請求項１３ないし２４に記載の方 法。 ２６．工程ｂ）において、ピリジンに溶解したヌクレオシドを装入し、フェニル アルキルスルホニルクロライドのジクロロ メタン溶液を、それぞれの反応温度で滴下添加することを特徴とする請求項１３ ないし２５に記載の方法。 ２７．工程ｃ）における上記混合溶媒中のヌクレオシドの濃度が、溶媒１０ｍｌ 当り０．１ないし３．０ｍｍｏｌであることを特徴とする、請求項１３ないし２ ６に記載の方法。 ２８．ホスファイトアミド基の導入(工程ｄ)）を、ジクロロメタンとアセトニト リルの混合溶媒中で、活性化剤として１Ｈテトラゾールの存在下で、０ないし２ ５℃の温度で、上記ヌクレオシドと、相当するホスフィンを反応させることによ って行うことを特徴とする、請求項１３ないし２７に記載の方法。 ２９．請求項１記載のヌクレオシド誘導体の、オリゴヌクレオチドの光制御合成 への使用。 ３０．上記オリゴヌクレオチドの光制御合成が、固体担体物質上で行われること を特徴とする、請求項２９記載の使用。