JPWO2006030906A1 - ヌクレオシド類似体またはその塩 - Google Patents

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Abstract

化学的、生物的安定性および二本鎖形成能の２つの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体を製造可能にするヌクレオシド類似体およびそのヌクレオシド類似体を含むオリゴヌクレオチド類似体の提供を目的とする。
下記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩により、解決される。
前記式（Ｉ）中、Ｒ１は、下記式（１）の基、下記式（２）の基、下記式（３）の基、下記式（４）の基、下記式（５）の基、下記式（６）の基、下記式（７）の基、下記式（８）の基、および官能基が保護基で保護されたそれらの基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
Figure 2006030906

Description

本発明は、ヌクレオシド類似体またはその塩に関するものである。
近年、遺伝情報そのものを治療の対象としてとらえるという方法論が普及しつつある。この方法論の一つに、オリゴヌクレオチドを用いたアンチセンス法がある。アンチセンス法とは、化学合成したオリゴヌクレオチド類似体（例えば、１５〜２０の塩基対から成る一本鎖ＤＮＡ）を細胞に加え、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）とＤＮＡ等／ｍＲＮＡ二本鎖核酸を形成させることにより、標的遺伝子の発現を塩基配列特異的に抑制し、ｍＲＮＡからタンパク質への翻訳過程を阻害する方法である。アンチセンス法では、病因となるウイルスまたは遺伝子の塩基配列が既知の場合、アンチセンス分子を理論的に設計し、それを合成するのが可能であることから、これまで治癒が困難と考えられてきた様々なウイルスを原因とする疾患および遺伝子疾患に対する有効な治療方法の一つとして期待されている。
また、ごく最近、オリゴヌクレオチドを用いた遺伝子発現抑制法として、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ ｉｎｔｅｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡ干渉）を利用した方法に、注目が集まっている。このＲＮＡｉとは、二本鎖ＲＮＡを細胞に導入することにより、同じ塩基配列を有する細胞の染色体由来のＲＮＡが分解され、切断される現象を指す。このＲＮＡｉの機構は、現在のところ、次のように考えられている。先ず、長鎖二本鎖ＲＮＡが、酵素（Ｄｉｃｅｒと呼ばれる）により３’−ＵＵ型のダングリングエンド構造を持つ２１塩基程度の長さの二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）と呼ばれる）に加水分解される。そのｓｉＲＮＡが、標的ｍＲＮＡとＲＮＡ／ｍＲＮＡ二本鎖核酸を形成し、この二本鎖核酸を認識する細胞内タンパク質（ＲＩＳＣ（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ Ｃｏｍｐｌｅｘ）と呼ばれる）と、この二本鎖核酸とが結合し、この結合体により、標的ｍＲＮＡが切断されるというものである。このＲＮＡｉを利用する方法によると、多くの場合、アンチセンス法と比較して１／１００程度の濃度のＲＮＡを用いて同等の効果が得られている。従って、ＲＮＡｉを利用する方法も、これまで治癒が困難と考えられてきた様々なウイルスを原因とする疾患および遺伝子疾患に対する有効な治療方法の一つとして期待が高まっている。
アンチセンス法、ＲＮＡｉを利用する方法等に用いるのには、天然型オリゴヌクレオチドに含まれるリボース環を含むオリゴヌクレオチド類似体は、化学的、生物学的に非常に不安定であるという問題があった（例えば、非特許文献１参照）。一方、アンチセンス法、ＲＮＡｉを利用する方法等で用いられるためには、天然型オリゴヌクレオチドとの二本鎖形成能力も要求されるが、化学的、生物学的に安定なオリゴヌクレオチド類似体は、通常、この二本鎖形成能力が低いという問題があった（例えば、非特許文献２参照）。このように、化学的、生物学的に安定という特性と、優れた二本鎖形成能力という特性は、両立するのが困難であるという問題があった。しかし、ＤＮＡチップ、遺伝子診断薬等にオリゴヌクレオチド類似体を用いる場合、安定した診断結果を得るためにも、これらの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体の提供が望まれていた。
Ｅｕｇｅｎ Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ａｎｕｓｃｈ Ｐｅｙｍａｎ，″Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ａ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ″，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９０年、第９０巻、ｐ．５４３． Ｊｉｎ ｙａｎ Ｔａｎｇ，Ｊａｍａｌ Ｔｅｍｓａｍａｎｉ ａｎｄ Ｓｕｄｈｉｒ Ａｇｒａｗａｌ，″Ｓｅｌｆ−ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｓ：ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉ−ＨＩＶ ａｃｔｉｖｉｔｙ″，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９３年、第２１巻、ｐ．２７２９．
そこで、本発明は、化学的、生物的安定性および二本鎖形成能の２つの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体を製造可能にするヌクレオシド類似体およびそのヌクレオシド類似体を含むオリゴヌクレオチド類似体の提供を目的とする。
本発明は、下記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩である。
Figure 2006030906
前記式（Ｉ）中、Ｒ１は、下記式（１）の基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）の基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）の基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）の基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）の基、下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（６）の基、下記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（７）の基、下記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（８）の基、および下記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
Ｒ２は、Ｈまたは保護基であり、
Ｒ３は、Ｈまたは保護基であり、
Ｒ４は、Ｈまたは固相合成用活性化リン酸基であり、
ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
Figure 2006030906
本発明は、従来にはない新規な化学構造を設計し、かつその化学構造を有するヌクレオシド類似体の製造に成功したことに基づき、完成したものである。本発明は、このヌクレオシド類似体により、ヌクレアーゼ耐性および二本鎖形成能の２つの特性が優れたオリゴヌクレオチド類似体を提供することができる。
図１は、本発明のオリゴヌクレオチド類似体の一例と、比較例のオリゴヌクレオチドの一例のヌクレアーゼ耐性を示す図である。Ｌａｎｅ １：天然型０ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ２：天然型５ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ３：天然型１０ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ４：天然型１５ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ５：天然型３０ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ６：修飾型０ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ７：修飾型５ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ８：修飾型１０ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ ９：修飾型１５ ｍｉｎ，Ｌａｎｅ １０：修飾型３０ ｍｉｎ。
本発明において、「オリゴヌクレオチド」は、例えばヌクレオシドサブユニットのポリマーをいい、そのサブユニット数は特に限定されないが、例えば、３から１００個である。中でも、本発明のヌクレオチド類似体がＤＮＡである場合には、それらのサブユニット数は、３〜１００個が好ましく、３〜３０個がより好ましく、ＲＮＡである場合には、３〜５０個が好ましく、３〜３０個がより好ましい。なお、本発明における「オリゴヌクレオチド類似体」は、ヌクレオシドが、本発明のヌクレオシド類似体で置き換えられていること以外は、特に限定されない。例えば、本発明のヌクレオシド類似体以外のヌクレオシドについては、糖部および塩基部分は、当業者に公知な類似体であってもよい。
本発明において、Ｒ１について、官能基が保護されている保護基とは、核酸化学において公知な保護基から選択される。例えば、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（Ｐａｃ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン、アセチル（Ａｃ）等が、その保護基として用いられうる。
本発明において、Ｒ２およびＲ３について前記保護基とは、従来公知の１級アルコールの保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］等が、挙げられる。
本発明において、前記Ｒ１、Ｒ２およびＲ３について前記保護基とは、本発明のヌクレオシド類似体を用いて、最終的にオリゴヌクレオチド類似体を製造するための条件を考慮して、適宜選択することができる。例えば、前記オリゴヌクレオチド類似体を製造する際、最終的な保護基の除去の条件に応じて、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３を、適宜、選択したヌクレオシド類似体を用いてもよい。
本発明において、Ｒ４について、前記固相合成用活性化リン酸基としては、固相合成において従来公知のリン酸基を用いることができ、例えば、ホスホロアミダイト、ホスホナート、チオホスファイト等を形成するリン酸基が挙げられる。ホスホロアミダイトを形成する、固相合成用活性化リン酸基としては、例えば、下記式（１０）で表される基が挙げられる。
Figure 2006030906
本発明において、その塩とは、例えば無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩等などが挙げられる。無機塩基との塩の例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩の例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。無機酸との塩の例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩の例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。本発明において、その塩とは、薬理学的に許容される塩が好ましい。
本発明において、ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して１〜１０の整数であり、好ましくは１〜６の整数である。ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、同一または異なっていてもよい。
本発明の式（Ｉ）で表わされるヌクレオシド類似体またはその塩は、Ｒ２が、Ｈ、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）または（９−フェニル）キサンテン−９−イルであり、
Ｒ３が、Ｈ、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）または（９−フェニル）キサンテン−９−イルであり、
Ｒ４が、Ｈまたは下記式（１０）で表される基であるのが好ましい。
Figure 2006030906
また、本発明の式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩は、前記式（Ｉ）において、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（２）の基、前記式（３）の基、前記式（４）の基、前記式（５）の基、前記式（６）の基、前記式（７）の基および前記式（８）の基からなる群から選択されるいずれかの基であり、ｋ、ｌ、ｍおよびｎが、１であるのが好ましい。
また、本発明の式（Ｉ）で表わされるヌクレオシド類似体またはその塩は、
Ｒ１が前記式（１）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
Ｒ１が前記式（２）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
Ｒ１が前記式（３）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
Ｒ１が前記式（４）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
Ｒ１が前記式（５）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
Ｒ１が前記式（６）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
Ｒ１が前記式（７）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、または
Ｒ１が前記式（７）の基において、その官能基がベンゾイルで保護された基であり、Ｒ２が４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）であり、Ｒ３が、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）であり、Ｒ４が、下記式（１０）で表される基である前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体が、より好ましい。
Figure 2006030906
なお、本発明のヌクレオシド類似体またはその塩は、本発明のオリゴヌクレオチド類似体の製造用に限定されず、他の用途にも適用可能である。
本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、オリゴヌクレオチドを構成する１以上のヌクレオシドが、ヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体であって、前記ヌクレオシド類似体が、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（２）の基、前記式（３）の基、前記式（４）の基、前記式（５）の基、前記式（６）の基、前記式（７）の基および前記式（８）の基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである本発明のヌクレオシド類似体である。例えば、オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオシドの全てが、前記ヌクレオシド類似体で置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体は、以下の式で表される。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ５１およびＲ５２は、互いに独立して、前記式（１）の基、前記式（２）の基、前記式（３）の基、前記式（４）の基、前記式（５）の基、前記式（６）の基、前記式（７）の基および前記式（８）の基からなる群から選択されるいずれかの基であり、ｋ１、ｋ２、ｌ１、ｌ２、ｍ１、ｍ２、ｎ１およびｎ２は、互いに独立して、１〜１０の整数である。
本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、一本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチド等であってもよい。オリゴヌクレオチド類似体が、二本鎖である場合、前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一方または両方の一本鎖オリゴヌクレオチドを構成する１以上のヌクレオシドが、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（２）の基、前記式（３）の基、前記式（４）の基、前記式（５）の基、前記式（６）の基、前記式（７）の基および前記式（８）の基からなる群から選択されるいずれかの基でああり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨであるヌクレオシド類似体であってもよい。
オリゴヌクレオチド類似体が一本鎖である場合、本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、二本鎖形成能を有するのが好ましい。本発明のオリゴヌクレオチド類似体が、天然型オリゴヌクレオチドと二本鎖形成能を有すれば、アンチセンス、遺伝子検出等のため用いることができるからである。
本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、ヌクレアーゼ耐性であるのが好ましい。本発明のオリゴヌクレオチド類似体が、細胞内に取り込まれた際、ヌクレアーゼで分解されるのを防ぐことができ、その結果、オリゴヌクレオチド類似体の細胞内での活性を、持続させることが可能だからである。
本発明の遺伝子発現抑制剤は、本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含む。このような遺伝子発現抑制剤は、オリゴヌクレオチド類似体が、例えば、ｓｉＲＮＡやアンチセンスとして作用し、標的遺伝子のｍＲＮＡを切断したり、標的遺伝子のｍＲＮＡと二本鎖を形成等して、その結果、遺伝子発現を抑制することができる。
本発明の医薬組成物は、遺伝子発現に伴う疾患を治療するためであり、前記遺伝子発現抑制剤を含むものである。遺伝子発現に伴う疾患、例えば、あるタンパク質が発現されることにより疾患が引き起こされる場合、この医薬組成物により、その遺伝子発現を抑制し、その遺伝子発現に伴う疾患を治療するのに用いることが可能である。
本発明の検査キットは、本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含み、前記オリゴヌクレオチド類似体が、検体中の遺伝子とハイブリッド形成することにより、前記遺伝子が検査されるキットである。このようなキットとしては、例えば、ＤＮＡチップ、ＤＮＡマイクロアレイ等が挙げられる。このキットには、本発明のオリゴヌクレオチド類似体の他に、ウエルとオリゴヌクレオチド類似体等とが固定されたプレート、ファイバー、バイオチップ等の固定化担体等が挙げられる。このようなキットには、前記オリゴヌクレオチド類似体等のほかに、例えば、薬物、反応して発色する発色試薬、検出を容易にする検出試薬等を含んでもよい。
ＤＮＡチップとしては、一般に、ガラス基板上に既知遺伝子配列を用いた本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含む溶液をスポットして固定化したものや、ガラス基板上で本発明のオリゴヌクレオチド類似体を合成することによって固定化したもの等がある。前記ＤＮＡチップは、例えば、検体中の遺伝子を、前記オリゴヌクレオチド類似体を固定化した分析部にアプライし、前記遺伝子と基板上のオリゴヌクレオチド類似体とのハイブリッド形成を、例えば、蛍光色素等により検出することによって、目的遺伝子の発現の有無を検出できる。このようなＤＮＡチップによれば、例えば、少量の試料でも有効に分析が可能であり、また、多種のＤＮＡプローブを一つの基板に固定化できるため、一つのＤＮＡチップにおいて同一検体につき、多項目の分析を行うことができる。
本発明の遺伝子発現抑制方法は、オリゴヌクレオチド類似体を用いて、遺伝子の発現を抑制する方法である。この方法では、オリゴヌクレオチド類似体が、例えば、ｓｉＲＮＡやアンチセンスとして作用し、標的遺伝子のｍＲＮＡを切断したり、標的遺伝子のｍＲＮＡと二本鎖を形成等して、その結果、遺伝子発現を抑制することができる。
次に、本発明のヌクレオシド類似体を製造するための製造方法について、例を挙げて説明する。このような製造方法により、従来にはない化学構造を有する、本発明のヌクレオシド類似体の製造が可能になった。
まず、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（２）の基、前記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（３）の基、前記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（４）の基、前記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（６）の基、前記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（７）の基、前記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（８）の基、および前記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨであり、下記式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩の製造方法の一例を説明する。
Figure 2006030906
前記式（ＩＩ）中、Ｒ５は、前記式（１）の基、前記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（２）の基、前記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（３）の基、前記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（４）の基、前記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（６）の基、前記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（７）の基、前記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（８）の基、および前記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
Figure 2006030906
その製造方法を、例えば、以下のスキーム１に示す。その製造方法によれば、例えば、下記式（ＶＩＩ）で表される化合物と、下記式（ＶＩＩＩ）で表される化合物とを反応させ、下記式（ＩＸ）で表される化合物を得、
前記式（ＩＸ）で表される化合物と、下記式（Ｘ）で表される化合物とを、塩基存在下に縮合させ、下記式（ＸＩ）で表される化合物を得、
前記式（ＸＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去することにより、式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩を得ることができる。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ５は、下記式（１）の基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）の基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）の基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）の基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（６）の基、下記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（７）の基、下記式（７）の基、下記式（８）の基、および下記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
Figure 2006030906
Ｒ１１は、保護基であり、
Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
Ｒ１４は、式−ＳＯ２−Ｒ１７で表される基であり、
前記Ｒ１７は、低級アルキルで置換されていてもよいアリール基であり、
Ｘ２は、ハロゲン原子であり、
ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
本発明において、Ｒ１１について前記保護基とは、従来公知の１級アルコールの保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）等が、挙げられる。
また、本発明において、Ｒ５について、官能基が保護されている保護基とは、核酸化学において公知な保護基から選択される。例えば、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（Ｐａｃ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン、アセチル（Ａｃ）等が、その保護基として用いられうる。
本発明において、Ｒ１５およびＲ１６について前記低級アルキル基とは、直鎖状または分岐状のアルキル基であり、例えば１〜６の炭素原子を含むものである。前記低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル２−エチルブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられる。
本発明において、Ｒ１５およびＲ１６について前記低級アルコキシル基とは、直鎖状または分岐状のアルコキシル基であり、例えば１〜６の炭素原子を含むものである。前記低級アルコキシル基の例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ｎ−ブチル２−エチルブチルオキシ、イソブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ等が挙げられる。
本発明において、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基としては、例えば、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ（ＯＣＨ３）−等が挙げられる。
本発明において、Ｒ１７について前記アリール基とは、芳香族炭化水素残基であり、例えば、６〜３０の炭素原子を含むものである。前記アリール基の例としては、単環式アリール基、例えば、フェニル等および、縮合多環式アリール基、例えば、ナフチル、インデニル、フルオレニル等が挙げられる。
本発明において、Ｒ１７について、低級アルキルで置換されていてもよいアリール基としては、例えば、前記低級アルキルの１〜５で置換されているアリール基が挙げられる。その具体例としては、例えば、ｐ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル等である。
本発明において、Ｘ２について、前記ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等である。
前記スキーム１において、まず、前記式（ＶＩＩ）で表される化合物と、前記式（ＶＩＩＩ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ＤＡＢＣＯ等）存在下に反応させ、前記式（ＩＸ）で表される化合物を得ることができる。なお、前記式（ＶＩＩＩ）で表される化合物は、公知文献を参考に自家製造してもよいし、市販で入手してもよい。
次に、前記式（ＩＸ）で表される化合物と、前記式（Ｘ）で表される化合物とを、塩基（例えば、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸ルビジウム、炭酸リチウム、炭酸セシウム等）および任意にクラウンエーテル（１８−クラウン−６−エーテル、２１−クラウン−７−エーテル、１５−クラウン−５−エーテル、１２−クラウン−４−エーテル等）存在下に縮合させ、下記式（ＸＩ）で表される化合物を得ることができる。なお、前記式（Ｘ）で表される化合物は、公知文献を参考に自家製造してもよいし、市販で入手してもよい。
最後に、前記式（ＸＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去することにより、式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩を得ることができる。前記式（ＸＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去するには、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３それぞれの基に応じて、公知の除去方法を選択することができる。例えば、Ｒ１１がｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）等のシリル基である場合、トリブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）、塩化アンモニウム等で処理することにより、Ｒ１１を除去することが可能である。また、例えば、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である場合、酸（例えば、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢酸等）で処理することにより、Ｒ１２およびＲ１３を同時に除去することが可能である。
前記式（ＶＩＩ）で表される化合物は、例えば、以下のスキーム２に示すようにして製造してもよい。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ１１は、保護基であり、
Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
Ｘ１は、ハロゲン原子であり、
ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
本発明において、Ｘ１について、前記ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等である。
前記スキーム２において、例えば、前記式（ＩＶ）で表される化合物と、前記式（Ｖ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、イミダゾール、ＤＡＢＣＯ（１，４−Ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［２．２．２］ｏｃｔａｎｅ）、トリエチルアミン等）存在下に反応させ、前記式（ＶＩ）で表される化合物を得ることができる。なお、前記式（ＩＶ）で表される化合物および前記式（Ｖ）で表される化合物は、公知文献を参考に自家製造してもよいし、市販で入手してもよい。
次に、前記式（ＶＩ）で表される化合物の３つの水酸基のうち２つを、Ｒ１２およびＲ１３で保護して、前記式（ＶＩＩ）で表される化合物を得ることができる。Ｒ１２およびＲ１３で保護する方法としては、保護基であるＲ１２およびＲ１３の種類に応じて公知の保護方法を選択することができる。例えば、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である場合、前記式（ＶＩ）で表される化合物を、アセトン、酸触媒（例えば、パラトルエン安息香酸等）存在下に加熱することにより、前記式（ＶＩＩ）中、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である化合物を得ることができる。
また、前記式（ＶＩＩ）中、ｋが２であり、ｌ、ｍおよびｎが１である式（ＶＩＩ−２）で表される化合物は、例えば、以下のスキーム３に示すようにして製造してもよい。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ１１は、保護基であり、
Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
Ｒは、低級アルキル基である。
本発明において、Ｒについて前記低級アルキル基とは、直鎖状または分岐状のアルキル基であり、例えば１〜６の炭素原子を含むものである。前記低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル２−エチルブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられる。
前記スキーム３において、まず、前記式（ＶＩＩ−１）で表される化合物を酸化して、前記式（ＸＶ）で表される化合物を得ることができる。酸化剤としては、例えば、ＢａＭｎＯ４、Ｃｏｌｌｉｎｓ試薬［ＣｒＯ３（Ｃ５Ｈ５Ｎ）２］、ＰＣＣ（ピリジニウムクロロクロマート）（Ｃ５Ｈ５Ｎ＋ＨＣｒＯ３Ｃｌ−）、ＤＣＣ−ＤＭＳＯ（ジシクロヘキシルカルボジイミド−ジメチルスルホキシド）等が挙げられる。なお、前記式（ＶＩＩ−１）で表される化合物は、例えば、前記スキーム２中、前記式（ＶＩＩ）中、ｋ、ｌ、ｍおよびｎが１である式（ＶＩＩ）の化合物であってもよい。その場合、前記式（ＩＶ）中ｋ、ｌ、ｍおよびｎが１である式（ＩＶ）の化合物、例えばペンタエリスリトールを出発原料として、前記スキーム２に記載の製造方法に従い、前記式（ＶＩＩ）中、ｋ、ｌ、ｍおよびｎが１である式（ＶＩＩ）の化合物を製造してもよい。
次に、前記式（ＸＶ）で表される化合物に、イリド化合物（ＸＶＩ）を反応させ、式（ＸＶＩＩ）で表される化合物を得ることができる。このイリド化合物（ＸＶＩ）は、当業者に公知のＷｉｔｔｉｇ反応、Ｈｏｒｎｅｒ−Ｅｍｍｏｎｓ反応等において調製されるイリド化合物製造方法に従い、製造することができる。
次に、前記式（ＸＶＩＩ）で表される化合物を接触還元し、次いでエステル（−ＣＯＯＲ）部分を還元することにより、前記式（ＶＩＩ−２）で表される化合物を得ることができる。接触還元は、例えば、遷移金属触媒の存在下、水素ガスにより行うことができる。前記遷移金属触媒としては、例えば、白金、パラジウム（例えば、Ｐｄ−Ｃ等）、ロジウム（例えば、Ｒｈ２Ｏ３等）、ルテニウム、ニッケル触媒等を用いることができる。前記エステル部分の還元は、例えば、水素化リチルムアルミニウム（ＬｉＡｌＨ４）等を用いることができる。
なお、前記式（ＶＩＩ−２）で表される化合物の製造は、例えば、公知文献を参考にして行ってもよい。その公知文献としては、例えば、Ｓａｔｏｓｈｉ Ｓｈｕｔｏ，Ｓａｔｏｓｈｉ Ｎｉｉｚｕｍａ ａｎｄ Ａｋｉｒａ Ｍａｔｓｕｄａ，″Ｏｎｅ−ｐｏｔ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ａ，ｂ−ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ａｌｃｏｈｏｌｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｃａｒｂｏｎ−ｅｌｏｎｇａｔｅｄ ｄｉｅｎｅｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｔａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｙｌｉｄｅ−ＢａＭｎＯ４ ｓｙｓｔｅｍ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ６’−ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ Ｎｅｐｌａｎｏｃｉｎ Ａ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ．Ｎｅｗ Ｎｅｐｌａｎｏｃｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅｓ １１．″，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８年，第６３巻、ｐ．４４８９等が挙げられる。
また、前記式（ＶＩＩ）中、ｍが２であり、ｋ、ｌおよびｎが１である式（ＶＩＩ−３）で表される化合物は、例えば、以下のスキーム４に示すようにして製造してもよい。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ１１は、保護基であり、
Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
Ｘ１およびＸ４は、互いに独立して、ハロゲン原子であり、
Ｒは、低級アルキル基であり、
Ｒ５０は保護基である。
前記Ｒ５０について前記保護基とは、従来公知の１級アルコールの保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４，４´−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）等が、挙げられる。
本発明において、前記Ｘ４について、前記ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等である。
前記スキーム４において、まず、前記式（ＶＩＩ−１）で表される化合物に、式（ＸＸ）で表される化合物とを、任意に塩基（例えば、イミダゾール、ＤＡＢＣＯ、トリエチルアミン等）存在下に反応させ、前記式（ＸＸＩ）で表される化合物を得ることができる。なお、前記式（ＸＸ）で表される化合物は、公知文献を参考に自家製造してもよいし、市販で入手してもよい。
次に、前記式（ＸＸＩ）で表される化合物を、酸化して、前記式（ＸＸＩＩ）で表される化合物を得ることができる。酸化は、前記スキーム３において前記式（ＶＩＩ−１）で表される化合物を酸化するのと同様の条件を用いて行うことできる。
次に、前記式（ＸＸＩＩ）で表される化合物に、イリド化合物（ＸＶＩ）を反応させ、式（ＸＸＩＩＩ）で表される化合物を得ることができる。このイリド化合物（ＸＶＩ）は、前記スキーム３におけるイリド化合物（ＸＶＩ）と同様のものを用いることができる。
次に、前記式（ＸＸＩＩＩ）で表される化合物を接触還元し、次いでエステル（−ＣＯＯＲ）部分を還元することにより、前記式（ＸＸＩＶ）で表される化合物を得ることができることができる。接触還元およびエステル部分の還元は、前記スキーム３における前記式（ＸＶＩＩ）で表される化合物の接触還元およびエステル還元と同様の条件を用いて行うことができる。
次に、式（ＸＸＩＶ）で表される化合物に、前記式（Ｖ）で表される化合物とを反応させ、その後、基Ｒ５０を除去して前記式（ＶＩＩ−３）で表される化合物を得ることができる。この式（Ｖ）の化合物との反応条件は、前記スキーム２における前記式（ＩＶ）で表される化合物と、前記式（Ｖ）で表される化合物との反応条件と同様の条件を用いて行うことができる。また、前記基Ｒ５０の除去は、Ｒ５０の基に応じて、公知の除去方法を選択することができる。
このように、ｋ、ｍ、ｌおよびｎが１〜１０の整数である前記式（ＶＩＩ）で表される化合物は、従来公知な技術、すなわち、保護および脱保護と、イリド化合物を用いた増炭反応を組み合わせることにより、製造することができる。
また、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（５）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨであり、下記式（ＩＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩の製造方法の一例を説明する。
Figure 2006030906
前記式中、ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
その製造方法を、例えば、以下のスキーム５に示す。この製造方法によれば、例えば、前記式（ＸＩＩＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去すること、および加水分解により、式（ＩＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩を得ることができる。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ１１は、保護基であり、
Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
Ｘ３は、ハロゲン原子であり、
ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
本発明において、Ｘ３について、前記ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等である。
前記式（ＸＩＩＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去するには、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３それぞれの基に応じて、公知の除去方法を選択することができる。例えば、Ｒ１１がｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）等のシリル基である場合、トリブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）、塩化アンモニウム等で処理することにより、Ｒ１１を除去することが可能である。また、例えば、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である場合、酸（例えば、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢酸等）で処理することにより、Ｒ１２およびＲ１３を同時に除去することが可能である。
前記式（ＸＩＩ）で表される化合物の加水分解は、公知の除去方法を選択することができる。例えば、酸（例えば、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢酸等）で処理することにより、この加水分解を行うことが可能である。この酸処理により、例えば、前記式（ＸＩＩＩ）中、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である場合、加水分解とＲ１２およびＲ１３の除去とを同時に行うことができる。
なお、前記式（ＸＩＩＩ）で表される化合物は、公知文献を参考に自家製造してもよいし、前記スキーム１において、式（ＸＩ）中、Ｒ５が前記式（８）の基であるヌクレオシド類似体の製造方法を参考に自家製造してもよい。
次に、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（２）の基、前記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（３）の基、前記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（４）の基、前記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（６）の基、前記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（７）の基、前記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（８）の基、および前記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ２が保護基であり、Ｒ３が保護基であり、Ｒ４が固相合成用活性化リン酸基であり、下記式（ＸＸＸＩＶ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩の製造方法の一例を説明する。
Figure 2006030906
前記式（ＸＸＸＩＶ）において、Ｒ５は、前記式（１）の基、前記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（２）の基、前記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（３）の基、前記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（４）の基、前記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（６）の基、前記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（７）の基、前記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（８）の基、および前記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ１１は、保護基であり、Ｒ２２は、保護基であり、Ｒ２３は、固相合成用活性化リン酸基である。
本発明において、Ｒ２２について前記保護基とは、従来公知の１級アルコールの保護基を用いることができる。そのような保護基としては、例えば、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、ＴＢＤＰＳ、（９−フェニル）キサンテン−９−イル［ピキシル（ｐｉｘｙｌ）］等が、挙げられる。
本発明において、Ｒ２３について前記固相合成用活性化リン酸基としては、固相合成において従来公知のリン酸基を用いることができ、例えば、ホスホロアミダイト、ホスホナート、チオホスファイト等を形成するリン酸基が挙げられる。ホスホロアミダイトを形成する、固相合成用活性化リン酸基としては、例えば、下記式（１０）で表される基が挙げられる。
Figure 2006030906
その製造方法を、例えば、以下のスキーム６に示す。
Figure 2006030906
前記式において、Ｒ５は、前記式（１）の基、前記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（２）の基、前記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（３）の基、前記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（４）の基、前記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（６）の基、前記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（７）の基、前記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（８）の基、および前記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ１１は、保護基であり、Ｒ２２は、保護基であり、Ｒ２３は、固相合成用活性化リン酸基であり、Ｘ５およびＸ６はハロゲン原子である。
本発明において、Ｘ５およびＸ６について前記ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等である。
その製造方法によれば、例えば、前記式（ＸＩ）で表される化合物の、Ｒ１２およびＲ１３を除去して、式（ＸＸＸ）で表される化合物を得ることができる。前記式（ＸＩ）で表される化合物の、Ｒ１２およびＲ１３を除去するには、Ｒ１２およびＲ１３それぞれの基に応じて、公知の除去方法を選択することができる。例えば、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である場合、酸（例えば、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢酸等）で処理することにより、Ｒ１２およびＲ１３を同時に除去することが可能である。
次いで、例えば、前記式（ＸＸＸ）で表される化合物を、式（ＸＸＸＩ）で表される化合物と、任意に塩基（例えば、ピリジン等）、触媒（例えば、ジメチルアミノピリジン等）等の存在下に、反応させ、式（ＸＸＸＩＩ）で表される化合物を得ることができる。式（ＸＸＸＩ）で表される化合物は、市販で入手してもよいし、公知文献を利用して自家製造してもよい。
そして、例えば、前記式（ＸＸＸＩＩ）で表される化合物に、式（ＸＸＸＩＩＩ）で表される化合物を、任意に塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン等）等の存在下に縮合させ、前記式（ＸＸＸＩＶ）で表される化合物を得ることができる。
また、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（５）の基であり、Ｒ２が保護基であり、Ｒ３が保護基であり、Ｒ４が固相合成用活性化リン酸基であり、下記式（ＸＸＸＶＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩の製造方法の一例を説明する。
Figure 2006030906
前記式（ＸＸＸＶＩＩ）中、Ｒ１１は、保護基であり、Ｒ２２は、保護基であり、Ｒ２３は、固相合成用活性化リン酸基であり、Ｘ３は、ハロゲン原子であり、ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
その製造方法を、例えば、以下のスキーム７に示す。
Figure 2006030906
前記式中、Ｒ１１は、保護基であり、Ｒ２２は、保護基であり、Ｒ２３は、固相合成用活性化リン酸基であり、Ｘ３、Ｘ５およびＸ６は、ハロゲン原子であり、ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
その製造方法によれば、例えば、前記式（ＸＩＩＩ）で表される化合物の、Ｒ１２およびＲ１３を除去して、式（ＸＸＸＶ）で表される化合物を得ることができる。前記式（ＸＩＩＩ）で表される化合物の、Ｒ１２およびＲ１３を除去するには、Ｒ１２およびＲ１３それぞれの基に応じて、公知の除去方法を選択することができる。例えば、Ｒ１２およびＲ１３が、一緒になって、式−Ｃ（ＣＨ３）２−で表される基である場合、酸（例えば、トリフルオロ酢酸、塩酸、酢酸等）で処理することにより、Ｒ１２およびＲ１３を同時に除去することが可能である。
次いで、例えば、前記式（ＸＸＸＶ）で表される化合物を、式（ＸＸＸＩ）で表される化合物と、任意に塩基（例えば、ピリジン等）、触媒（例えば、ジメチルアミノピリジン等）等の存在下に、反応させ、式（ＸＸＸＶＩ）で表される化合物を得ることができる。式（ＸＸＸＩ）で表される化合物は、市販で入手してもよいし、公知文献を利用して自家製造してもよい。
そして、例えば、前記式（ＸＸＸＶＩ）で表される化合物に、式（ＸＸＸＩＩＩ）で表される化合物を、任意に塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン等）等の存在下に縮合させ、前記式（ＸＸＸＶＩＩ）で表される化合物を得ることができる。
つぎに、本発明のオリゴヌクレオチド類似体の製造方法の一例について説明する。まず、例えば、本発明のヌクレオシド類似体の３つの水酸基の内１つを、固相合成用活性化リン酸基で活性化させ、残りの２つの水酸基を保護した化合物を用意する。その化合物としては、例えば、前記式（ＸＸＸＩＶ）で表わされる化合物または前記式（ＸＸＸＶＩＩ）で表わされる化合物を用いることができる。その固相合成用活性化リン酸基としては、固相合成において従来公知のリン酸基を用いることができ、例えば、ホスホロアミダイト、ホスホナート、チオホスファイト等を形成するリン酸基が挙げられる。そして、本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、例えば、この活性化化合物を、オリゴヌクレオチド合成分野で従来公知の技術を用いて、オリゴヌクレオチド類似体の配列に従い、ヌクレオシドを順次固相上でカップリングさせて行うことができる。
なお、ヌクレオシド、カップリング試薬、脱保護試薬、洗浄試薬等は、通常核酸固相合成に用いられるものを用いる。得られた固相担体上のオリゴヌクレオチド類似体は、必要であればオリゴヌクレオチド側鎖の脱保護を行った後、固相担体から切り出して、粗オリゴヌクレオチド類似体を得る。切り出しに用いる試薬は、固相担体およびリンカー（固相担体とオリゴヌクレオチド類似体を接続する部分）構造等に応じて、従来公知の試薬から、適宜選択することができる。この粗オリゴヌクレオチド類似体は、必要であれば、ＨＰＬＣ等で精製してもよい。
次に、オリゴヌクレオチド類似体が二本鎖である場合の製造について例を挙げて説明する。例えば前記のような方法に従い、一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体をまず製造する。そのオリゴヌクレオチド類似体と相補的な配列を有する、一本鎖の天然オリゴヌクレオチドも別途、従来公知の方法に従い、製造する。次いで、得られた一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体をアニーリング用緩衝液中に溶解させたものと、一本鎖の天然オリゴヌクレオチドをアニーリング用緩衝液中に溶解させたものとを、例えば混合し、加熱処理し、その後、徐々に室温まで冷却させて、二本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を得ることができる。この二本鎖のオリゴヌクレオチド類似体は、必要に応じて、フェノール／クロロホルム抽出、エタノール沈殿等をさらに行って、単離精製することができる。
なお、スキーム１〜７の各工程において、必要であれば、各官能基に保護基を導入したり、保護基を脱保護したり、保護基を変更してもよい。なお、官能基の種類に応じた保護基の選択、保護基の導入および保護基の除去は、当該分野で公知の方法に従い、行うことができ、例えば、「有機合成における保護基（″Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ″），Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅら著、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．出版」等を参照することができる。
本明細書の記載において、以下の略語を使用する。
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン（４−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）
ＴＢＡＦ：トリブチルアンモニウムフルオライド（ｔｒｉｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｆｌｕｏｒｉｄｅ）
ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロライド（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）
Ａｒ：アルゴン（Ａｒｇｏｎ）
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）
ＴＥＡＡ：酢酸トリエチルアンモニウム塩（Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｍｏｉｕｍ Ａｃｅｔａｔｅ）
（実施例１）
９−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）アデニンの製造
（１）１−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシ−２，２−ジヒドロキシメチル−３−プロパノール（１−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ−２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｐｒｏｐａｎｏｌ）の製造
ペンタエリスリトール（３．００ｇ、２２．０２ｍｍｏｌ）とイミダゾール（３．３０ｇ、４４．０４ｍｍｏｌ）を乾燥させ、アルゴン雰囲気下においてＤＭＦ（２８．５ｍｌ）に溶解させた。その溶液に、ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ（２．２２ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下して加え、その混合物を室温にて５時間撹拌した。混合物から溶媒を留去後、得られた残渣を、酢酸エチルと水から抽出した。抽出した酢酸エチル溶液を、飽和ＮａＣｌａｑで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。その酢酸エチル溶液から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：０〜２０：１）で精製して、無色透明オイル状の表題化合物を得た。（収量５．１７ｇ、１３．８２ｍｍｏｌ、収率６２％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；７．５６（４Ｈ，ｓ，フェニル），７．３２（６Ｈ，ｓ，フェニル），３．５７（８Ｈ，ｄ，Ｊ＝３０．８，ＣＨ２−１，２，２，３），２．９０（３Ｈ，ｍ，ＯＨ），０．９８（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル）．
（２）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
１−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシ−２，２−ジヒドロキシメチル−３−プロパノール（３．５０ｇ、９．３５ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエン安息香酸・一水和物（２．１８ｇ、１１．２２ｍｍｏｌ）とを、アセトン（１００ｍｌ）中で溶解した。その溶液に、ｏ−ギ酸エチル（２０ｍｌ）を加え、その混合物を室温で２時間攪拌した。その混合物を希アンモニア水で中和して反応を停止した後、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１〜５：１）で精製して、黄色オイル状の表題化合物を得た。（収量３．７６ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、収率９６％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；７．６７（５Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，フェニル），７．４０（５Ｈ，ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，フェニル），３．７４（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２−４，５，５，６），１．４０（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，ＣＨ３−２，２），１．０６２（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル）．
（３）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−ｔｏｌｕｅｎｅｓｌｕｆｏｎｙｌｍｅｔｈｙｌ−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（１．６６ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中溶液に、ＤＭＡＰ（１．４７ｇ、１２．０３ｍｍｏｌ）を加え、さらに氷冷下にて５−トルエンスルホニルメチルクロライド（２．２９ｇ、１２．０３ｍｍｏｌ）を加えて、その混合物を約５時間攪拌した。その混合物を、ＣＨ３Ｃｌおよび飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出および洗浄した。得られた有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、有機溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量１．７７８７ｇ、３．１２ｍｍｏｌ、収率７８％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；７．６６（５Ｈ，ｍ，フェニル），７．３５（９Ｈ，ｍ，フェニル），３．８２（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２−４，６），３．７４（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２−５，５），１．３８（６Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２，２），１．０５（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル），１．０５（３Ｈ，ｓ，Ｔｓ−Ｍｅ）．
（４）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−（アデニン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（ａｄｅｎｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（３．４８ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）に、アデニン（１．６５ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．２７ｇ、９．１７ｍｍｏｌ）、１８−クラウン−６−エーテル（１．９４ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）を加え、一晩乾燥させた。その混合物にＤＭＦ（１５０ｍｌ）を加え、得られた混合物を５５℃オイルバスで４８時間加熱した。その混合物に、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔｏＡｃ＝１：１）および水を加えて、抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜３０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量２．４９ｇ、４．６９ｍｍｏｌ、収率７６．６％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；８．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，ＣＨ−アデニン−２），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＣＨ−アデニン−８），７．６１（４Ｈ，ｍ，フェニル），７．４０（６Ｈ，ｍ，フェニル），５．８５（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−アデニン−６），２．５８（８Ｈ，ｓ，ＣＨ２−４，５，５，６），１．４４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．３５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．１０（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル）；
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：５３２．２６６６（Ｍ＋）５１６，４７４，４１６，３８６，３６６．
（５）９−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチルプロピル）アデニン（９−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−（アデニン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（１．２３ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）中溶液に、ＴＢＡＦ（５ｍｌ）を加えて、その混合物を室温で３時間撹拌した。その混合物から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜１０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量０．７８ｇ、１．５９ｍｍｏｌ、収率９５％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；８．０４（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−アデニン−２），７．８７（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−アデニン−８），７．５７（４Ｈ，ｍ，フェニル），７．５７（６Ｈ，ｍ，フェニル），７．１８（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−アデニン−６），５．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，５−ＯＨ），３．２０（８Ｈ，ｓ，ＣＨ２−４，５，５，６），１．２１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．１７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），０．８４（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル）；
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２９３．１４８８（Ｍ＋）２７８，２３５，２０６，１８８，１４８；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ１９Ｎ５Ｏ３・１／４ ＥｔＯＨ：Ｃ，５３．１９；Ｈ，６．７８；Ｎ，２２．９７．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５３．０３；Ｈ，６．５９；Ｎ，２２．９４．
（６）９−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）アデニン（９−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
９−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチルプロピル）アデニン（３０．２ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を加えて、その混合物を２時間撹拌した。その混合物に、水およびメタノールを加え、その後、混合物から溶媒を除去して減圧乾固した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝３０：１〜１０：１）で精製して、表題化合物を得た。（収量１８ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ、収率６９％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；８．３０（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−アデニン−２），８．２０（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−アデニン−８），７．５６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−アデニン−６），４．０８（３Ｈ，ｓ，ＯＨ−２，２，３），３．２４（８Ｈ，ｍ，，ＣＨ２−１，２，２，３）；
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２５３．１１７５（Ｍ＋）２５３，２４２，２２２，２０４，１８８；
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１５Ｏ３Ｎ５ ２５３．１１７５ Ｆｏｕｎｄ ２５３．１１７２．
（実施例２）
９−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）グアニンの製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（２−ａｍｉｎｏ−６−ｃｈｒｏｌｏｐｕｒｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（５．８８ｇ、１０．３４ｍｍｏｌ）、２−アミノ−６−クロロ−プリン（３．５１ｇ、１２．４１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．１４ｇ、１５．５１ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６−エーテル（３．２８ｇ、１２．４１ｍｍｏｌ）をそれぞれ一晩真空乾燥させた。それらを、ＤＭＦ（１７０ｍｌ）に溶解させ、その溶液を５５℃で３６時間加熱した。反応混合物から溶媒を留去し、得られた残渣にｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔｏＡｃ＝１：１）および水を加え、抽出した。得られた有機層を、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量２．２４ｇ、５．２７ｍｍｏｌ、収率５１％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；８．０２（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−プリン−２），７．７８（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−プリン−８），７．６１（４Ｈ，ｍ，フェニル），７．４０（６Ｈ，ｍ，フェニル），６．６１（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−プリン−２），２．１２（３Ｈ，ｓ，ＯＨ−３’，４’，５’），３．８７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）３．２２（６Ｈ，ｓ，ＣＨ２）；
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：５６５．２２７６（Ｍ＋）５５０，５０８，４５０，４３０，４２０；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２９Ｈ３６ＣｌＮ５Ｏ３Ｓｉ：Ｃ，６１．５２；Ｈ，６．４１；Ｎ，１２．３７．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６１．５８；Ｈ，６．４４；Ｎ，１２．２４．
（２）２，２−ジメチル−５−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−（２−ａｍｉｎｏ−６−ｃｈｒｏｌｏｐｕｒｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（４２６ｍｇ、０．７８３ｍｍｏｌ）に、Ａｒ置換下、ＴＨＦ（約１ｍｌ）を加えて溶解させた。その溶液にＴＢＡＦ（１ｍｌ）を加え、その混合物を約２時間攪拌した。その混合物から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量２１６ｍｇ、０．７０４ｍｍｏｌ、収率９０％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；７．８０（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−２−アミノ−６−クロロプリン−８），５．１６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−２−アミノ−６−クロロプリン−２），４．４３（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ＣＨ２），３．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，ＣＨ２），１．５９１（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），１．５９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），１．５１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）．
（３）９−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）グアニン（９−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｇｕａｎｉｎｅ）の製造
２，２−ジメチル−５−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（５８ｍｇ、０．１８７ｍｍｏｌ）に５０％ＴＦＡ（７．８４ｍｌ）を加え、その混合物を約２時間攪拌した。その混合物に水およびメタノールを加え、その後、混合物から溶媒を除去して減圧乾固した。得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝３０：１〜１０：１）で精製して、表題化合物を得た。（収量３１ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ、収率６３％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；１０．６６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１），７．６２（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−８），６．６１（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−２），２．１２（３Ｈ，ｓ，ＯＨ−３’，４’，５’），３．８７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）３．２２（６Ｈ，ｓ，ＣＨ２）；
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２６９．１１２４（Ｍ＋）２６９，２３８，２２０，１９１，１６５；
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２６９．１１２４ Ｆｏｕｎｄ ２６９．１１１８．
（実施例３）
１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）ウラシルの製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（ウラシル−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（ｕｒａｃｉｌ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（３．６５ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）、ウラシル（１．４３ｇ、１２．８３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．０６ｇ、７．７０ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６−エーテル（２．０４ｇ、７．７０ｍｍｏｌ）をそれぞれ一晩真空乾燥させた。それらをＤＭＦ（７０ｍｌ）およびＤＭＳＯ（３０ｍｌ）に溶解させ、その溶液を５５℃で３６時間加熱した。反応混合物から溶媒を留去し、得られた残渣にｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔｏＡｃ＝１：１）および水を加え、抽出した。得られた有機層を、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜５０：１）で精製した。得られた無色透明のオイル状化合物を、ジエチルエーテルにて結晶化し、白色結晶の表題化合物を得た。（収量１．６２ｇ、３．１９ｍｍｏｌ、収率５０％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１１．２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．６３（４Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），７．４４（７Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ，ＣＨ−ウラシル−６），５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，ＣＨ−ウラシル−５），３．０９（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２−４，５，５，６），１．３１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．２０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．００（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル）；
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ＋）ｍ／ｚ：５０８．２３９４（Ｍ＋＋Ｈ），４５１，３０７，２８９，１５４，１０７；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２８Ｈ３６Ｎ３Ｏ５Ｓｉ：Ｃ，６６．１１；Ｈ，７．１３；Ｎ，５．５１．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６６．０８；Ｈ，７．０３；Ｎ，５．３７．
（２）２，２−ジメチル−５−（ウラシル−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−（ｕｒａｃｉｌ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（ウラシル−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）に、Ａｒ置換下、ＴＨＦ（１０ｍｌ）加えて溶解させた。その溶液にＴＢＡＦ（３ｍｌ）を加え、その混合物を一晩攪拌した。その混合物から溶媒を留去し、得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量９４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、収率８９％）
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２７０．１２１６（Ｍ＋）２５５，２１３，１９４，１８１，１６６；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１２Ｈ１８Ｎ２Ｏ５・１／６ Ｈ２Ｏ：Ｃ，５２．７４；Ｈ，６．７６；Ｎ，１０．２５．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５２．５５；Ｈ，６．４３；Ｎ，１０．１８．
（３）１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）ウラシル（１−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｕｒａｃｉｌ）の製造
２，２−ジメチル−５−（ウラシル−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（３４ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）に３０％ＴＦＡ（１０ｍｌ）を加え、その混合物を約２時間攪拌した。その混合物に水およびメタノールを加え、その後、混合物から溶媒を除去して減圧乾固した。得られた残渣を、ｎ−ヘキサンおよびエーテルの混合物（ｎ−ヘキサン：Ｅｔ２Ｏ＝１：１）から結晶化させ、白色結晶の表題化合物を得た（収量２０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、収率７０％）。
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２３０．０９０３（Ｍ＋）２１２，２００，１８２，１６６，１５２；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ２０Ｎ２Ｏ５：Ｃ，４６．９５；Ｈ，６．１３；Ｎ，１２．１７．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４６．８２；Ｈ，５．９７；Ｎ，１１．９７．
（実施例４）
１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）シトシンの製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（シトシン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（２．８０ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）、シトシン（１．０９ｇ、９．８４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．８２ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６−エーテル（１．５６ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）をそれぞれ一晩真空乾燥させた。それらを、ＤＭＦ（３０ｍｌ）およびＤＭＳＯ（１０ｍｌ）に溶解させ、その溶液を６０℃で４日間加熱した。反応混合物から溶媒を留去し、得られた残渣にｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔｏＡｃ＝１：１）および水を加え、抽出した。得られた有機層を、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量１．２０ｇ、２．３７ｍｍｏｌ、収率４８％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；７．６５（４Ｈ，ｍ，フェニル），７．４０（６Ｈ，ｍ，フェニル），７．２６（１Ｈ，ｓ，２−ＣＨ），５．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ ３−ＣＨ），３．７８（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．６５（２Ｈ，ｓ，４−ＮＨ２），１．４３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．３４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．１１（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル）；
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：５０７．２５５３（Ｍ＋）４９２，４５０，３９２，３６２，２９２；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２８Ｈ３７Ｎ３Ｏ４Ｓｉ・１／６ Ｈｅｘ：Ｃ，６６．７２；Ｈ，７．５９；Ｎ，８．０５．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６６．６８；Ｈ，７．５３；Ｎ，７．８５．
（２）２，２−ジメチル−５−（シトシン−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−（ｃｙｔｏｓｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（シトシン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）に、Ａｒ置換下、ＴＨＦ（１０ｍｌ）を加えて溶解させた。その溶液にＴＢＡＦ（１ｍｌ）を加え、その混合物を約２時間攪拌した。その混合物から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量９５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、収率９１％）
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２６９．１３７６（Ｍ＋）２５４，２１１，２０１，１８２，１６４．
（３）１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）シトシン（１−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
２，２−ジメチル−５−（シトシン−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（３４ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）に３０％ＴＦＡ（１０ｍｌ）を加え、その混合物を約２時間攪拌した。その混合物に水およびメタノールを加え、その後、混合物から溶媒を除去して減圧乾固した。得られた残渣を、ｎ−ヘキサンおよびエーテルの混合物（ｎ−ヘキサン：Ｅｔ２Ｏ＝１：１）から結晶化させ、白色結晶の表題化合物を得た（収量２０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、収率６９％）。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ；７．６６（１Ｈ，ｓ，６−ＣＨ），５．８５（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−５），４．６３（３Ｈ，ｓ，ＯＨ−２，２，３），３．６９（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２−２），３．２４（８Ｈ，ｓ，ＣＨ２−１，２，２，３）．
（実施例５）
１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）チミンの製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（チミン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（ｔｈｙｍｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（２．８０ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）、チミン（１．２４ｇ、９．８４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．８２ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６−エーテル（１．５６ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）をそれぞれ一晩真空乾燥させた。それらを、ＤＭＦ（３０ｍｌ）およびＤＭＳＯ（１０ｍｌ）に溶解させ、その溶液を６０℃で４日間加熱した。反応混合物から溶媒を留去し、得られた残渣にｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔｏＡｃ＝１：１）および水を加え、抽出した。得られた有機層を、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量１．２５ｇ、２．４１ｍｍｏｌ、収率４９％）
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ；８．１６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−３），７．６２（４Ｈ，ｍ，フェニル），７．４２（６Ｈ，ｍ，フェニル），７．１３（１Ｈ，ｓ，６−ＣＨ），３．６９（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．７２（３Ｈ，ｓ，５−Ｍｅ），１．４３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．３２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２），１．１２（９Ｈ，ｓ，ｔｅｒ−ブチル）；
Ｍａｓｓ（ＦＡＢ＋）ｍ／ｚ：５２２．２５５０（Ｍ＋＋Ｈ），４６５，３０７，１５４；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２９Ｈ３８Ｎ２Ｏ５Ｓｉ：Ｃ，６６．６４；Ｈ，７．３３；Ｎ，５．３６．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６６．５０；Ｈ，７．２０；Ｎ，５．２９．
（２）２，２−ジメチル−５−（チミン−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−（ｔｈｙｍｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルオキシルメチル−５−（チミン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）に、Ａｒ置換下、ＴＨＦ（１０ｍｌ）を加えて溶解させた。その溶液にＴＢＡＦ（３ｍｌ）を加え、その混合物を一晩攪拌した。その混合物から溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（収量１０１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、収率９４％）
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２８４．１３７２（Ｍ＋）２６９，２３３，２０８，１９５，１８０；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ２ＯＮ２Ｏ５・１／５ Ｈ２Ｏ：Ｃ，５４．２３；Ｈ，７．１４；Ｎ，９．７３．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５４．３０；Ｈ，６．９０；Ｎ，９．６５．
（３）１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）チミン（１−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｔｈｙｍｉｎｅ）の製造
２，２−ジメチル−５−（チミン−９−イル−メチル）５−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキサン（４８ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）に３０％ＴＦＡ（１０ｍｌ）を加え、その混合物を約２時間攪拌した。その混合物に水およびメタノールを加え、その後、混合物から溶媒を除去して減圧乾固した。得られた残渣を、ｎ−ヘキサンおよびエーテルの混合物（ｎ−ヘキサン：Ｅｔ２Ｏ＝１：１）から結晶化させ、白色結晶の表題化合物を得た（収量２８ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ、収率６７％）。
Ｍａｓｓ（ＥＩ）ｍ／ｚ：２４４．１０５９（Ｍ＋），１９５，１８０，１５２，１２６，９６；
Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ２０Ｎ２Ｏ５・１／５Ｈ２Ｏ：Ｃ，４８．４６；Ｈ，６．６７；Ｎ，１１．３０．ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４８．０４；Ｈ，６．２７；Ｎ，１１．３６．
（実施例６）
１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロウラシルの製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−５−（５−フルオロウラシル−１−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ−１−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（２．２３ｇ、３．９２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液を、予め真空乾燥させておいた５−フルオロウラシル（０．７６５ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）、６０％ ＮａＨ（０．２３５ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６−エーテル（１．０６ｇ、３．９９ｍｍｏｌ）の混合物にゆっくり滴下した。得られた混合物を、Ａｒ雰囲気下、約８５℃で２４時間攪拌した。その混合物にｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）ならびに水を加えて、抽出した。得られた有機層を、飽和ＮａＣｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で順次洗浄し、乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１〜０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（１５６ｍｇ，０．２９６ｍｍｏｌ，８％）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ：１１．８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＣＨ−ウラシル−６），７．６６（４Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），７．４４（６Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），３．６７（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２−４，５，５，６），１．３１（４Ｈ，ｍ，ＣＨ３−２），１．１８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ３−２），１．００（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル）．
（２）１−（２−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−２−ヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロウラシル（１−（２−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｍｅｔｈｙｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−５−（５−フルオロウラシル−１−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（１５１ｍｇ、０．２８７ｍｍｏｌ）に３０％酢酸を４０ｍｌ加え、その混合物を約７０℃で３時間加熱した。その混合物から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝５０：１〜３０：１）で精製して、無色透明オイル状の表題化合物を得た。（４１．６ｍｇ、０．０８５５ｍｍｏｌ、３０％）
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．６４（５Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ，ＣＨ−ウラシル−６），７．４４（６Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），３．９２（２Ｈ，ｓ，ＯＨ−２，３），３．５６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２−２），３．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，ＣＨ２−１），３．３２（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ２−２，３），１．１２（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル）．
（３）１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロウラシル（１−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）の合成
１−（２−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−２−ヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロウラシル（４１．６ｍｇ、０．０８５５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液へ、ＴＢＡＦ（０．１５ｍｌ）を加え、その溶液を２時間攪拌した。その溶液から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝５０：１〜１０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（１４．２ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ、６７％）
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．６４（５Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ，ＣＨ−ウラシル−６），７．４４（６Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），３．９２（２Ｈ，ｓ，ＯＨ−２，３），３．５６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２−２），３．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，ＣＨ２−１），３．３２（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ２−２，３）．
（実施例７）
１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロシトシンの製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−（５−Ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ−１−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−トルエンスルホニルメチル−１，３−ジオキサン（１．６７ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５ｍｌ）溶液を、予め真空乾燥させておいた５−フルオロシトシン（０．５６８ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）、６０％ ＮａＨ（０．１７６ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６−エーテル（０．７９０ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）の混合物にゆっくり滴下した。得られた混合物を、Ａｒ雰囲気下、約７５℃で４８時間攪拌した。その混合物に、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）ならびに水を加えて、抽出した。得られた有機層を、飽和ＮａＣｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で順次洗浄し、乾燥させた。その有機層から溶媒を減圧留去した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜０：１）で精製して、白色結晶の表題化合物を得た。（３５２ｍｇ、０．６６９ｍｍｏｌ、２３％）
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．６４（５Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ，ＣＨ−ウラシル−６），７．４４（６Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），３．９２（２Ｈ，ｓ，ＯＨ−２，３），３．５６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２−２），３．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，ＣＨ２−１），３．３２（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ２−２，３），１．１２（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル）．
（２）１−（２−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−２−ヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロシトシン（１−（２−ｔ−Ｂｕｔｈｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｍｅｔｈｙｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（３５２ｍｇ、０．６６９ｍｍｏｌ）に３０％酢酸（５０ｍｌ）を加え、その混合物を約７０℃で４時間加熱した。この混合物から溶媒を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝５０：１〜３０：１）で精製して、無色透明オイル状の化合物を得た。その化合物に、ｎ−ヘキサンとジエチルエーテルを加えて結晶を析出させ，白色結晶の表題化合物を得た。（１７１ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ、５２％）
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．６４（５Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ，ＣＨ−ウラシル−６），７．４４（６Ｈ，ｍ，Ｐｈｅ），３．９２（２Ｈ，ｓ，ＯＨ−２，３），３．５６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２−２），３．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，ＣＨ２−１），３．３２（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ２−２，３），１．１２（９Ｈ，ｓ，ｔ−ブチル）．
（３）１−（２，２−ジヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロシトシン（１−（２，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）の製造
１−（２−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルメチル−２−ヒドロキシメチル−３−ヒドロキシプロピル）５−フルオロシトシン（１７１ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液へ、ＴＢＡＦ（０．７０ｍｌ）を加えて、その混合物を２時間攪拌した。その混合物から溶媒を減圧留去し、得られた残渣へエタノールを加えて結晶を析出させて、白色結晶の表題化合物を得た。（３２．０ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ、３７％）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ：１１．３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．４０（１Ｈ，ｓ，ＣＨ−ウラシル−６），３．６２（３Ｈ，ｂｒ，ＯＨ−２，２，３），３．２７（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２−４，５，５，６），１．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−チミン）．
（実施例８）
９−［２−（２−ジアミノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフェイニルオキシメチル−２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）プロピル］−Ｎ６−ベンゾイル−アデニン（９−［２−（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｏｘｙ−Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏｐｈｏｓｐｈｉｍｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）−３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ］−Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌａｄｅｎｉｎｅ）の製造
（１）２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシメチル−５−（Ｎ６−ベンゾイルアデニン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２，２−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−５−（Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌａｄｅｎｉｎｅ−９−ｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｄｉｏｘａｎ）の製造
実施例１（４）で得られた２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシルメチル−５−（アデニン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（２１３０ｍｇ、４．０１ｍｍｏｌ）をピリジン（４０ｍｌ）に溶解させ、その溶液へ、氷冷下にてベンゾイルクロリド（５６０μｌ、４．８１ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で１６時間撹拌した後、その混合物にメタノールを加えて過剰の試薬を分解した。得られた残渣にトルエンを共存させ、減圧濃縮してピリジンを除去した。得られたシロップにクロロホルムを加え、クロロホルム層を２Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、飽和食塩水にて順次洗浄した。硫酸ナトリウムにより乾燥した後、そのクロロホルム層を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）で精製して、白色粉末の標題化合物を得た（収量１５３０ｍｇ、２．４１ｍｍｏｌ、収率６０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１１．１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．６６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２），８．０５−７．４１（ｍ，１５Ｈ，Ｐｈ−ＣＯ，２Ｐｈ−Ｓｉ），４．３７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｎ）３．７６（２ｄ，４Ｈ，２ＣＨ２−Ｏ−Ｃ），１．２５，１．２１（２ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３−Ｃ）０．９７（ｓ，９Ｈ，ｔｅｒｔ−ブチル）．
（２）９−（２，２−ヒドロキシメチル−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシプロピル）−Ｎ６−ベンゾイル−アデニン（９−（２，２−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）−Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌ−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
２，２−ジメチル−５−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシメチル−５−（Ｎ６−ベンゾイルアデニン−９−イル−メチル）−１，３−ジオキサン（１６００ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶解に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を加えて、その混合物を室温にて４８時間撹拌した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール＝１０：１）により、前記混合物中の原料の消失を確認後、前記混合物にトリエチルアミンを加えて中和した。前記混合物を減圧下にて濃縮して得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝６０：１）で精製して、白色粉末の標題化合物を得た（８９０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、収率５９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ９．１２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．７５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），８．０９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２），８．０５−７．４１（ｍ，１５Ｈ，Ｐｈ−ＣＯ，２Ｐｈ−Ｓｉ），４．４８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｎ）３．６１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ），３．４５，３．２６（２ｂｒｄ，４Ｈ，２ＣＨ２−ＯＨ），１．１４（ｓ，９Ｈ，ｔｅｒｔ−ブチル）．
（３）９−［２−ヒドロキシメチル−２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシル）−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシプロピル］−Ｎ６−ベンゾイル−アデニン（９−［２−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙｌ）−３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙｐｒｏｐｙｌ］−Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌ−ａｄｅｎｉｎｅ）の製造
９−（２，２−ヒドロキシメチル−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシプロピル）−Ｎ６−ベンゾイル−アデニン（８００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍｌ）溶液に、ジメトキシトリチルクロリド（１３６０ｍｇ，４．０２ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（４９１ｍｇ，４．０２ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温にて１８時間撹拌した。ＴＬＣにて前記混合物中の原料の消失を確認後、前記混合物にメタノールを加えて過剰の試薬を分解した。得られた残渣にトルエンを共存させ、減圧濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに溶解させ、前記酢酸エチル溶液を蒸留水で洗浄した。硫酸ナトリウムにより乾燥した後、前記酢酸エチル層を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２００：１→１００：１）で精製して、白色粉末の標題化合物を得た（６８０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ、収率５７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），８．０４−６．７６（ｍ，３０Ｈ，２Ｐｈ−ＯＭｅ，Ｐｈ−Ｃ，Ｐｈ−ＣＯ ２Ｐｈ−Ｓｉ，Ｈ−２，ＮＨ），４．３９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．７１−３．６９（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ，２ＭｅＯ），３．４５−３．３７（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２−Ｏ−ＤＭＴｒ，ＣＨ２ＯＨ），０．９０（ｓ，９Ｈ，ｔｅｒｔ−ブチル）．
（４）９−［２−（２−ジアミノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフェイニルオキシメチル−２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）プロピル］−Ｎ６−ベンゾイル−アデニン（９−［２−（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｏｘｙ−Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏｐｈｏｓｐｈｉｍｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌｏｘｙ）−３−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ］−Ｎ６−ｂｅｎｚｏｙｌａｄｅｎｉｎｅ）の製造
９−［２−ヒドロキシメチル−２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシｌ）−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシプロピル］−Ｎ６−ベンゾイル−アデニン（６６．１ｍｇ，７３．６μｍｏｌ）のジクロロメタン（０．３７ｍｌ）溶液に、Ｈｕｎｉｇ’ｓ ｂａｓｅ（７６μｌ，０．４４ｍｍｏｌ）および亜リン酸化試薬（３３μｌ，０．１４８ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより反応の完結を確認した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を前記混合物に添加して反応を停止させた。前記混合物を、クロロホルムと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液により分液した。得られた有機層を減圧濃縮し、その残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）で精製し、標題化合物を得た（４４．４ｍｇ，４４μｍｏｌ、収率６０％）。
３１ＰＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ［ｐｐｍ］：１４７．４７ｐｐｍ．
（実施例９）
塩基配列の中央部に、ヌクレオシド類似体を１つ導入した配列番号１（下記に示す塩基配列参照）（ただし、ヌクレオシド類似体は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基を有する）からなる一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体の製造
Figure 2006030906
配列番号１の塩基配列に従い、核酸自動合成機およびＣＰＧ樹脂を用いるホスホロアミダイト法によりオリゴヌクレオチド類似体（ＤＮＡタイプ）を製造した。塩基配列中、Ａ ＊ で示す配列には、実施例８で製造した９−［２−（２−ジアミノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフェイニルオキシメチル−２−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）−３−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）プロピル］−Ｎ６−ベンゾイル−アデニンをヌクレオシドモノマーとして用いて導入した。他の配列には、デオキシリボースタイプのヌクレオシドを用いて導入した。１μｍｏｌの固相合成用ＣＰＧ樹脂を使用し、各縮合時間は、１分とした。
前記ＣＰＧ樹脂に結合した配列番号１のオリゴヌクレオチド類似体は、ベンゾイル基および１−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基で保護された状態で核酸自動合成機による合成を終了した。
前記ＣＰＧ樹脂に結合したオリゴヌクレオチドは、２８％アンモニア水溶液（１．５ｍＬ）中で５５℃で１２時間反応させた。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた濃縮物に、ＴＢＡＦ溶液（１ｍＬ）を加え、その混合物を１２時間室温で攪拌して、前記シリル基を脱保護した。その後、得られた混合物を、０．１Ｍ ＴＥＡＡ暖衝液（３０ｍＬ）で希釈した。この混合物をＣ−１８逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）（溶出液：水中、５０％ＣＨ３ＣＮ（２ｍＬ））により精製して、目的とする一本鎖のオリゴヌクレオチド類似体を得た。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ 計算値：５５９８．９６、実測値：５５９４．０３。
前記実施例９において用いた、０．１ＭのＴＥＡＡ緩衝液は、以下のようにして調製した。まず、２Ｎの酢酸（１１４．３８ｍＬ）およびトリエチルアミン（２７７．６ｍＬ）の混合物に、水を加えて１Ｌにした。その溶液に酢酸を加えて、ｐＨを７．０に調整し、次いでその溶液を２０倍に希釈することにより調製した。
（参考例１）
配列番号１の代わりに配列番号２（下記に示す塩基配列参照）の塩基配列に従い、実施例９と同様にして一本鎖オリゴヌクレオチドを得た。
Figure 2006030906
（実施例１０）
実施例９で製造した配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体（０．８ｎｍｍｏｌ）を、アニーリングバッファー（１０ｍＭのリン酸ナトリウム塩（ｐＨ７．０）および１ＭのＮａＣｌ）中に溶解させた。その溶液を９０℃で１分間、次いで３７℃で１時間の間、インキュベートして、下記に示す塩基配列のような、配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体と配列番号２からなるオリゴヌクレオチドとからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。
Figure 2006030906
（比較例１）
配列番号１の代わりに配列番号３（下記に示す塩基配列参照）の塩基配列に従い、実施例９と同様にして、一本鎖のオリゴヌクレオチドを製造した。
Figure 2006030906
（比較例２）
実施例９で製造した配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体の代わりに、比較例１で製造した配列番号３からなるオリゴヌクレオチドを用いて、実施例１０と同様にして、下記に示すような、配列番号３からなるオリゴヌクレオチドと、配列番号２からなるオリゴヌクレオチドをからなる、二本鎖オリゴヌクレオチド類似体を得た。
Figure 2006030906
（二本鎖の安定性）
実施例１０で製造した二本鎖オリゴヌクレオチド類似体および比較例２で製造した二本鎖オリゴヌクレオチドについて、測定したそれぞれのＴｍ値を、以下の表１に示す。
Figure 2006030906
前記表１に示すように、本発明のヌクレオシド類似体で１箇所の塩基が置き換えられたオリゴヌクレオチド類似体（ただし、ヌクレオシド類似体は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基を有する）が二本鎖の形成能を有することを、確認できた。
（実施例１１）
実施例９で製造した配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体（１００ｐｍｏｌ）を、１０×ＰＮＫ緩衝液（２μＬ）、６ｕｎｉｔ／μＬのＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｅ．Ｃｏｌｉ Ａ１９）（１μＬ）、γ−３２Ｐ ＡＴＰ（１μＬ）および滅菌水（１６μＬ）の混合液中で、氷冷下に、混合し、その後、３７℃で３０分間攪拌した。その後、スピンカラムを用いて前記混合物から夾雑物を除去して、５’末端が３２Ｐ同位体で標識された、配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体を得た。
（比較例３）
実施例９で製造した配列番号１からなるオリゴヌクレオチド類似体の代わりに、比較例１で製造した配列番号３からなるオリゴヌクレオチドを用いた以外は、実施例１１と同様にして、５’末端が３２Ｐ同位体で標識された、配列番号３からなるオリゴヌクレオチドを得た。
（ヌクレーゼ耐性）
一本鎖オリゴヌクレオチド類似体のエキソヌクレアーゼ耐性の評価
実施例１１で得られた配列番号１からなる一本鎖オリゴヌクレオチド類似体、比較例３で得られた配列番号３からなる天然型の一本鎖オリゴヌクレオチドの、エキソヌクレアーゼ耐性を評価した。エキソヌクレアーゼとしては、ヘビ毒ホスホロジエステラーゼ（ＳＶＰ）を使用した。ＳＶＰは、リン酸ジエステル結合を選択的に切断しオリゴヌクレオチドを５’−モノリン酸ヌクレオチドに分解する。なお、１０μＭの一本鎖オリゴヌクレオチド類似体溶液は、実施例１１で製造した配列番号１からなる一本鎖オリゴヌクレオチド類似体（１００ｐｍｏｌ）に、未標識の実施例９で製造した配列番号１からなる一本鎖オリゴヌクレオチド類似体（４００ｐｍｏｌ）を加え、滅菌水を用いて、１０μＭに調整して製造した。１０μＭの一本鎖オリゴヌクレオチド溶液も、前記と同様にして製造した。
以下に示す組成の反応溶液から、１、５、１０、１５、３０分後に、ローディング溶液（７Ｍ ｕｒｅａ ＸＣ ＢＰＢ；５μＬ）を含む各エッペンドルフチューブに、反応液（５μｌ）をサンプリングして反応を停止させた。なお、０分後のサンプルは、ＳＶＰ水溶液を加えていないものである。得られた各時間におけるサンプルを、２０％ウレア入りＰＡＧＥにより電気泳動させて、ゲル中で分離した。前記ゲルを、イメージングプレートと接触させて、前記ゲル中の分離されたイメージを転写した。このイメージをバイオイメージングアナライザー（商品名：ＢＡＳ２０００、富士写真フィルム株式会社製）を用いて取り込み、ＲＩイメージ解析ソフトにより画像処理した。その結果を図１に示す。
一本鎖オリゴヌクレオチド類似体（実施例１１）の反応溶液の組成
Figure 2006030906
Figure 2006030906
一本鎖オリゴヌクレオチド（比較例３）の反応溶液の組成
Figure 2006030906
前記図１に示すように、一本鎖オリゴヌクレオチド類似体（ただし、ヌクレオシド類似体は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基を有する）は、天然型一本鎖オリゴヌクレオチドと比較して、エキソヌクレアーゼ耐性が向上していることが確認された。また、前記図１に示すように、前記一本鎖オリゴヌクレオチド類似体は、サイト１のみならず、サイト２においても、ヌクレアーゼ耐性を示することが確認された。このサイト１は、前記ヌクレオシド類似体と、天然のヌクレオシドとの間の結合部位である。サイト２は、天然のヌクレオシド間の結合部位であるが、一方の天然のヌクレオシド結合部位は、前記ヌクレオシド類似体と結合している。そのため、本発明のヌクレオシド類似体は、その隣接するヌクレオシドとの結合部位のみならず、離れた位置にあるヌクレオシド間の結合部位のヌクレアーゼ耐性も向上させることが、確認された。
本発明のヌクレオシド類似体は、例えば、検査キット用オリゴヌクレオチドを製造するためのヌクレオシドとして有用である。
配列番号１ オリゴヌクレオチド類似体
配列番号２ オリゴヌクレオチド
配列番号３ オリゴヌクレオチド

Claims (14)

  1. 下記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩。
    Figure 2006030906
    前記式（Ｉ）中、Ｒ１は、下記式（１）の基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）の基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）の基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）の基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（５）の基、下記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（６）の基、下記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（７）の基、下記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（８）の基、および下記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
    Ｒ２は、Ｈまたは保護基であり、
    Ｒ３は、Ｈまたは保護基であり、
    Ｒ４は、Ｈまたは固相合成用活性化リン酸基であり、
    ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
    Figure 2006030906
  2. Ｒ２が、Ｈ、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）または（９−フェニル）キサンテン−９−イルであり、
    Ｒ３が、Ｈ、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、４−モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）または（９−フェニル）キサンテン−９−イルであり、
    Ｒ４が、Ｈまたは下記式（１０）で表される基である請求項１に記載のヌクレオシド類似体またはその塩。
    Figure 2006030906
  3. 前記式（Ｉ）において、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（２）の基、前記式（３）の基、前記式（４）の基、前記式（５）の基、前記式（６）の基、前記式（７）の基および前記式（８）の基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
    ｋ、ｌ、ｍおよびｎが、１である請求項１に記載のヌクレオシド類似体またはその塩。
  4. Ｒ１が前記式（１）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
    Ｒ１が前記式（２）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
    Ｒ１が前記式（３）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
    Ｒ１が前記式（４）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
    Ｒ１が前記式（５）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
    Ｒ１が前記式（６）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、
    Ｒ１が前記式（７）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体、および
    Ｒ１が前記式（７）の基において、その官能基がベンゾイルで保護された基であり、Ｒ２が４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）であり、Ｒ３が、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）であり、Ｒ４が、下記式（１０）で表される基である前記式（Ｉ）で表されるヌクレオシド類似体からなる群から選択される請求項１に記載のヌクレオシド類似体。
    Figure 2006030906
  5. オリゴヌクレオチドを構成する１以上のヌクレオシドが、ヌクレオシド類似体でそれぞれ置き換えられているオリゴヌクレオチド類似体であって、
    前記ヌクレオシド類似体が、前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（２）の基、前記式（３）の基、前記式（４）の基、前記式（５）の基、前記式（６）の基、前記式（７）の基および前記式（８）の基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである請求項１に記載のヌクレオシド類似体であるオリゴヌクレオチド類似体。
  6. 前記オリゴヌクレオチド類似体が、一本鎖オリゴヌクレオチドである請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
  7. 前記オリゴヌクレオチド類似体が、二本鎖形成能を有する請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
  8. 前記オリゴヌクレオチド類似体が、ヌクレアーゼ耐性である請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体。
  9. オリゴヌクレオチドを含む遺伝子発現抑制剤であって、前記オリゴヌクレオチドが、請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体である遺伝子発現抑制剤。
  10. 遺伝子発現に伴う疾患を治療するための医薬組成物であって、
    前記医薬組成物が、請求項９に記載の遺伝子発現抑制剤を含む医薬組成物。
  11. 請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体を含む検査キットであって、
    前記オリゴヌクレオチド類似体が、検体中の遺伝子とハイブリッド形成することにより、前記遺伝子が検査されるキット。
  12. オリゴヌクレオチドを用いて遺伝子発現を抑制する方法であって、前記オリゴヌクレオチドが、請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体である方法。
  13. 前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（１）の基、前記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（２）の基、前記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（３）の基、前記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（４）の基、前記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（６）の基、前記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（７）の基、前記式（７）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（８）の基、および前記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨであり、下記式（ＩＩ）で表される請求項１に記載のヌクレオシド類似体またはその塩の製造方法であって、
    Figure 2006030906
    下記式（ＶＩＩ）で表される化合物と、下記式（ＶＩＩＩ）で表される化合物とを反応させ、下記式（ＩＸ）で表される化合物を得、
    Figure 2006030906
    前記式（ＩＸ）で表される化合物と、下記式（Ｘ）で表される化合物とを、塩基存在下に縮合させ、下記式（ＸＩ）で表される化合物を得、
    Figure 2006030906
    前記式（ＸＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去することにより、式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩を得る製造方法。
    前記式中、Ｒ５は、下記式（１）の基、下記式（１）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（２）の基、下記式（２）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（３）の基、下記式（３）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（４）の基、下記式（４）の基において、その官能基が保護基で保護された基、前記式（５）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（６）の基、下記式（６）の基において、その官能基が保護基で保護された基、下記式（７）の基、下記式（７）の基、下記式（８）の基、および下記式（８）の基において、その官能基が保護基で保護された基からなる群から選択されるいずれかの基であり、
    Figure 2006030906
    Ｒ１１は、保護基であり、
    Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
    前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
    Ｒ１４は、式−ＳＯ２−Ｒ１７で表される基であり、
    前記Ｒ１７は、低級アルキルで置換されていてもよいアリール基であり、
    Ｘ２は、互いに独立して、ハロゲン原子であり、
    ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
  14. 前記式（Ｉ）中、Ｒ１が、前記式（５）の基であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨであり、下記式（ＩＩＩ）で表される請求項１に記載のヌクレオシド類似体またはその塩の製造方法であって、
    Figure 2006030906
    前記式（ＸＩＩＩ）で表される化合物の、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３を除去すること、および加水分解により、式（ＩＩＩ）で表されるヌクレオシド類似体またはその塩を得る製造方法。
    前記式中、Ｒ１１は、保護基であり、
    Ｒ１２およびＲ１３は、一緒になって、式−ＣＲ１５Ｒ１６−で表される基であり、
    前記Ｒ１５およびＲ１６は、互いに独立して、水素原子、低級アルキル基および低級アルコキシル基からなる群から選択されるいずれかであり、
    Ｘ３は、ハロゲン原子であり、
    ｋ、ｌ、ｍおよびｎは、互いに独立して、１〜１０の整数である。
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