JP2000506392A

JP2000506392A - 新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプター

Info

Publication number: JP2000506392A
Application number: JP9540300A
Authority: JP
Inventors: ストーマン，トーマス・エム; シミン，レイチェル・ティー; ハマーランド，ランス・ジー; フラー，フォレスト・エイチ
Original assignee: NPS Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Shire NPS Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1996-02-21
Filing date: 1997-02-20
Publication date: 2000-05-30
Also published as: WO1997048724A2; ATE369385T1; AU719841B2; ES2292193T3; AU3715697A; EP0882065A2; CA2246751A1; US6051688A; WO1997048724A3; IL125711A0; EP0882065B1; DE69737990D1; US6084084A; US6077675A; DE69737990T2; IL125711A

Abstract

(57)【要約】新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプター（ｍＧｌｕＲ）蛋白質が同定され、配列決定され、およびクローニングされた。このレセプターは、ｍＧｌｕＲの活性を調節する化合物のスクリーニングにおいて用いることができる。組換えｍＧｌｕＲならびにｍＧｌｕＲ活性を調節する化合物は、神経学的疾患および疾病の診断および治療において用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプター発明の分野本発明は、新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプター（metabotropic glu tamate receptor，ｍＧｌｕＲ）をコードする核酸配列に関する。この新規なヒトレセプターを宿主細胞において発現させ、これを利用して、新規なヒトｍＧｌｕＲに作用するアゴニスト、アンタゴニスト、および調節分子をスクリーニングすることができる。新規なヒトｍＧｌｕＲに作用するこれらの分子を利用して、神経障害および神経疾患を処置するために新規なヒトレセプターの活性を調節することができる。本発明はまた、それらのレセプターをコードする核酸；それらの核酸を含む、遺伝的に変更された細胞、組織および動物；それらのレセプターに対する抗体；ならびに以上のすべてに関連する方法に関する。発明の背景以下の記載は、本発明に関連する情報の概要を示す。ここに記載するいずれの情報も本発明に対する先行技術であるとは認められず、詳述した刊行物またはそれに含まれる刊行物も、いずれも本発明に対する先行技術であるとは認められない。グルタミン酸は哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における主要な興奮性神経伝達物質である。グルタミン酸は、細胞表面レセプターへの結合およびこれによるレセプター活性化により、中枢ニューロンに対するその作用を生じる。これらのレセプターは、レセプター蛋白質の構造上の特色、レセプターが細胞内へ信号を伝達する手段、および薬理学的プロフィルに基づいて、イオンチャンネル内蔵型グルタミン酸レセプター（ionotropic glutamate receptor）と代謝指向型グルタミン酸レセプターの主要な２クラスに副分類されている。イオンチャンネル内蔵型グルタミン酸レセプター（ｉＧｌｕＲ）は、グルタミン酸を結合すると開いて特定の一価および二価のカチオンを選択的に流入させ、これにより細胞膜を脱分極させる、リガンド依存性イオンチャンネルである。さらに、比較的高いカルシウム透過性をもつ特定のｉＧｌｕＲは、多様なカルシウム依存性の細胞内プロセスを活性化することができる。これらのレセプターは多サブユニット蛋白質複合体であり、ホモマー性またはへテロマー性のいずれもありうる。種々のｉＧｌｕＲサブユニットは、すべて共通の構造モチーフをもつ。これは、比較的大きなアミノ末端細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、これに続く２つの膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）、第２の、より小さな細胞外ドメイン、および第３のＴＭＤを含み、次いで細胞内カルボキシ末端ドメインで終わる。歴史的にｉＧＩｕＲは、アゴニストであるα−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチルイソオキサゾール−４−プロピオン酸（ＡＭＰＡ）、カイニン酸（ＫＡ）、およびＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）で優先的に活性化されることに基づいて、最初は薬理学的に３クラスに副分類された。その後、さらに薬理学的研究と組み合わせた分子クローニング研究で、哺乳動物ＣＮＳでは多数のサブタイプのＡＭＰＡ、ＫＡおよびＮＭＤＡレセプターが発現するので、より多様なｉＧｌｕＲのあることが明らかになった（Hollman and Heinemann，Ann．Rev．Neurosci.17： 31，1994）。代謝指向型グルタミン酸レセプター（ｍＧｌｕＲ）は、グルタミン酸の結合に続いて多様な細胞内第２メッセンジャー系を活性化しうるＧ蛋白質結合レセプターである。無傷の哺乳動物ニューロンのｍＧｌｕＲｓを活性化すると、以下の１またはそれ以上の応答を引き出すことができる：ホスホリパーゼＣの活性化、ホスホイノシチド（ＰＩ）加水分解の増大、細胞内カルシウム放出、ホスホリパーゼＤの活性化、アデニリルシクラーゼの活性化または阻害、サイクリックアデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）形成の増減、グアニリルシクラーゼの活性化、サイクリックグアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）形成の増加、ホスホリパーゼＡ₂の活性化、アラキドン酸放出の増加、およびイオンチャンネル（たとえば電位依存性およびリガンド依存性イオンチャンネル）の活性の増減（Schoepp and Conn,Trend s Pharmacol．Sci．14：13，1993；Schoepp，Neurochem．Int．24：439，1994； Pin and Duvoisin，Neuropharmacology 34：1，1995）。これまで、８種類の異なるｍＧｌｕＲが分子クローニングにより単離され、それらが発見された順序に従ってｍＧｌｕＲ１〜ｍＧｌｕＲ８と命名された（Nakanishi，Neuron 13：1031，1994；Pin and Duvoisin，Neuropharmacology3 4：1，1995；Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417，1995）。特定のｍＧｌｕＲサブタイプがオータナティブスプライシングされた形態の発現により、さらに多様性が起きる（Pin et al.，PNAS89：10331，1992；Minakami et al.，BBRC 199:1136，1994；Joly et al.，J．Neurosci．15：3970，1995）。すべてのｍＧｌｕＲは、大きなアミノ末端ＥＣＤ、続いて７つの推定ＴＭＤ、および長さの異なる細胞内カルボキシ末端ドメインをもつ単一サブユニット型の膜蛋白質であるという点で、構造的に類似する。これら８種類のｍＧｌｕＲは、アミノ酸配列の相同性、それらが利用する第２メッセンジャー系、および薬理学的特性に基づいて、３グループに小区分されている（Nakanishi，Neuron 13：1031，1994；Pin and Duvoisin， Neuropharmacology 34：1，1995；Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417，1 995）。特定のグループ内のｍＧｌｕＲ間のアミノ酸相同性は約７０％であるが、異なるグループのｍＧｌｕＲ間では約４０％に低下する。同一グループ内のｍＧｌｕＲについては、この関連性は信号伝達機構や薬理学的特性の類似性とほぼ平行している。グループＩのｍＧｌｕＲは、ｍＧｌｕＲ１、ｍＧｌｕＲ５およびそれらのオータナティブスプライシングされた変異体を含む。これらのレセプターにアゴニストが結合すると、ホスホリパーゼＣが活性化され、次いで細胞内カルシウムの移動が起きる。たとえば、組換えｍＧｌｕＲ１レセプターを発現するアフリカツメガエル（Xenopus）卵母細胞を利用して、電気生理学的手段で間接的にこの作用が証明された（Masu et al.，Nature 349：760，1991；Pin et al.，PNAS 89：1 0331，1992）。組換えｍＧｌｕＲ５レセプターを発現する卵母細胞を用いて、同様な結果が得られた(Abe et al.，J．Biol．Chem．267：13361，1992；Minakami et al.，BBRC 199：1136，1994；Joly et al.，J．Neurosci．15：3970，1995 ）。あるいは、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）で発現した組換えｍＧｌｕＲ１レセプターをアゴニスト活性化すると、標準的な生化学的アッセイ法で測定したＰＩ加水分解、ｃＡＭＰ形成、およびアラキドン酸放出が刺激された（Ar amori and Nakanishi，Neuron 8：757，1992）。これに対比して、ＣＨＯ細胞で発現したｍＧ１ｕＲ５レセプターを活性化すると、ＰＩ加水分解、次いで細胞内カルシウム移動が剌激されたが、ｃＡＭＰ形成またはアラキドン酸放出の刺激はみられなかった（Abe et al.，J．Biol．Chem．267：13361，1992）。しかし、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞で発現したｍＧｌｕＲ５レセプターを活性化すると、ＰＩ加水分解のほか、ｃＡＭＰ形成も増加した（Joly et al.，J．Neurosci． 15：3970，1995）。グループＩのｍＧｌｕＲに対するアゴニスト効カプロフィルは、キスカル酸＞グルタミン酸＝イボテン酸＞（２Ｓ，１’Ｓ，２’Ｓ）−２− カルボキシシクロプロピル）グリシン（Ｌ−ＣＣＧ−Ｉ）＞（ＩＳ，３Ｒ）−１ −アミノシクロペンタン−１，３−ジカルボン酸（ＡＣＰＤ）である。キスカル酸は、グループＩＩおよびグループＩＩＩのｍＧｌｕＲと対比してグループＩレセプターに比較的選択性であるが、イオンチャンネル内蔵型ＡＭＰＡレセプターを同様に有効に活性化する（Pin and Duvoisin，Neuropharmacology 34：1，Kno pfel et al.，J．Med．Chem．38：1417，1995）。グループＩＩのｍＧｌｕＲには、ｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３が含まれる。ＣＨＯ細胞で発現したこれらのレセプターを活性化すると、阻害性Ｇ蛋白質Ｇ₁₉ を介して百日咳毒素感受性様式でアデニリルシクラーゼ活性が阻害される（Tanabe et al.，Neuron 8：169，1992；Tanabe et al.，J．Neurosci．13：1 372，1993)。グループＩＩレセプターに対するアゴニスト効カプロフィルは、Ｌ −ＣＣＧ−Ｉ＞グルタミン酸＞ＡＣＰＤ＞イボテン酸＞キスカル酸である。予備試験で、Ｌ−ＣＣＧ−Ｉおよび（２Ｓ，１’Ｒ，２’Ｒ，３’Ｒ）−２−（２，３−ジカルボキシシクロプロピル）グリシン（ＤＣＧ−ＩＶ）は両方とも、他のｍＧＩｕＲと対比してグループＩＩレセプターに比較的選択性のアゴニストであることが示唆された（Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417，1995）が、ＤＣＧ−ＩＶはｉＧｌｕＲにもアゴニスト活性を示す（Ishida et al.，Br．J．Ph armacol．109：1169，1993）。グループＩＩＩのｍＧｌｕＲには、ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６、ｍＧｌｕＲ７およびmＧｌｕＲ８が含まれる。グループＩＩレセプターと同様に、これらのｍＧｌｕＲをＣＨＯ細胞で発現させると、アデニリルシクラーゼと負に連携して、百日咳毒素感受性様式で細胞内ｃＡＭＰ蓄積を阻害する（Tanabe et al.,J. Neurosci．13：1372，1993；Nakajima et al.，J．Biol．Chem．268：11868,199 3；Okamoto et al.，J．Biol．Chem．269：1231，1994；Duvoisin et al.，J．N eurosci．15：3075，1995）。グループとして、それらのアゴニスト効カプロフィルは、（Ｓ）−２−アミノ−４−ホスホノ酪酸（Ｌ−ＡＰ４）＞グルタミン酸＞ＡＣＰＤ＞キスカル酸であるが、ｍＧｌｕＲ８はわずかに異なり、Ｌ−ＡＰ４よりグルタミン酸の方が有効である（Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417 ，1995；Duvoisin et al.，J．Neurosci．15：3075，1995）。Ｌ−ＡＰ４および（Ｓ）−セリン−Ｏ−ホスフェート（Ｌ−ＳＯＰ）は両方とも、グループＩＩＩレセプターに比較的選択的なアゴニストである。最後に、これら８種類のｍＧｌｕＲサブタイプは、哺乳動物ＣＮＳ内に、多くの場合重複した特異な発現パターンをもつ（Masu et al.，Nature 349：760，19 91；Martin et al.，Neuron 9：259，1992；Ohishi et al.，Neurosci．53：100 9，1993；Tanabe et al.，J．Neurosci．13：1372，1992；Ohishi et al.，Neur on 13：55，1994；Abe et al.，J．Biol．Chem．267：13361，1992；Nakajima e t al.，J．Biol．Chem．268：11868，1993；Okamoto et al.，J．Biol．Chem．2 69：1231，1994；Duvoisin et al.,J．Neurosci．15：3075，1995）。その結果、あるニューロンは１つの特定のｍＧｌｕＲサブタイプのみを発現し、一方、他のニューロンはその細胞の類似および／または異なる位置（すなわちシナプス前軸索末端に対して、シナプス後樹状突起および／または細胞体）に局在する多数のサブタイプを発現するという可能性がある。したがって、特定のニューロンにおけるｍＧｌｕＲ活性化の機能上の結果は、発現する個々のｍＧｌｕＲ、グルタミン酸に対するレセプターの親和性および細胞が暴露されるグルタミン酸の濃度、レセプターにより活性化される信号伝達経路、ならびに細胞上のレセプターの位置に依存するであろう。特定の脳領域におけるｍＧｌｕＲ発現ニューロン間の多数の相互作用により、さらにいっそうの複雑さが導入される可能性がある。これらの複雑さ、ならびにサブタイプ特異的ｍＧｌｕＲアゴニストおよびアンタゴニストがないことの結果として、ニューロンの機能に影響を及ぼす生理学的および病態生理学的プロセスにおける個々のｍＧｌｕＲの役割は十分には決定されていない。それでもなお、入手できるアゴニストおよびアンタゴニストを用いた研究で、グループＩＩおよびグループＩＩＩのｍＧｌｕＲと比較してグループＩのｍＧｌｕＲについては、若干の全般的見通しが得られた。グループＩのｍＧｌｕＲの生理学的役割を推定する試みにより、これらのレセプターの活性化がニューロンの興奮を引き起こすことが示唆された。ＡＣＰＤを海馬、大脳皮質、小脳、および視床、ならびに他の脳領域のニューロンに付与するとシナプス後興奮を生じうることは、種々の研究で証明された。この興奮がシナプス後ｍＧｌｕＲの直接活性化によることは証拠が示しているが、これがシナプス前ｍＧｌｕＲの活性化により仲介され、その結果、神経伝達物質の放出が増加することも示唆された(Baskys，Trends Pharmacol．Sci．15：92，1992；Scho epp，Neurochem.Int．24：439，1994；Pin and Duvoisin， Neuropharmacology 34:1)。薬理実験では、グループＩのｍＧｌｕＲがこの興奮の仲介物質として関係のあることが示される。ＡＣＰＤの作用は、ｉＧｌｕＲアンタゴニストの存在下で低濃度のキスカル酸により再生でき（Hu and Storm，Br ain Res．568：339，1991；Greene et al.，Eur．J．Pharmacol．226：279，199 2）、ｍＧｌｕＲを活性化することが知られている２種類のフェニルグリシン化合物、（Ｓ）−３−ヒドロキシフェニルグリシン（（Ｓ）−３ＨＰＧ）および（Ｓ）−３，５−ジヒドロキシフェニルグリシン（（Ｓ）−ＤＨＰＧ）も、興奮を生じる（Watkins and Collingridge，Trends Pharmacol．Sci．15：333，1994）。さらにこの興奮は、（Ｓ）−４−カルボキシフェニルグリシン（（Ｓ）−４ＣＰＧ）、（Ｓ）−４−カルボキシ−３−ヒドロキシフェニルグリシン（（Ｓ）− ４Ｃ３ＨＰＧ）、および（＋）−α−メチル−４−カルボキシフェニルグリシン（（＋）−ＭＣＰＧ）など、ｍＧｌｕＲアンタゴニストであることが知られている化合物により遮断できる（Eaton et al.，Eur．J．Pharmacol．244：195，199 3；Watkins and Collingridge，Trends Pharmacol．Sci．15：333，1994）。ｍＧｌｕＲの生理学的役割を調べる他の研究で、シナプス前ｍＧｌｕＲを活性化すると、神経伝達物質の放出を抑制することにより興奮性および抑制性のシナプス伝達を両方とも阻害しうることが示された（Pin and Duvoisin， Neuropharmacology 34：1）。ＡＣＰＤによる興奮性シナプス伝達遮断は、視覚皮質、小脳、海馬、線条および扁桃のニューロンにおいてみられた（Pin et al. ， Curr．Drugs：Neurodegenerative Disorders 1：111，1993）が、同様な抑制性シナプス伝達遮断は、線条および臭球においても証明された（Calabresi et al. ，Neurosci．Lett．139：41，1992；Hayashietal.，Nature 366：687，1993）。多数の証拠が、グループＩＩのｍＧｌｕＲがこのシナプス前抑制を仲介することを示唆している。グループＩＩのｍＧｌｕＲは、他のニューロンでシナプス前の神経伝達物質放出抑制を仲介することが知られているα２−アドレナリンレセプターおよび５ＨＴ_1A−セロトニンレセプターのように、アデニリルシクラーゼの阻害に密接に関連している。ＡＣＰＤがもつ阻害作用は、グループＩＩのｍＧｌｕＲにおける選択的アゴニストであるＬ−ＣＣＧ−ＩおよびＤＣＧ−ＩＶによっても模倣できる（Hayashi et al.，Nature 366：687，1993；Janeetal.，Br．J ．Pharmacol．112:809，1994）。さらに、ｍＧｌｕＲ２を活性化すると、このレセプターが交感神経ニューロンに発現する場合はシナプス前Ｎ−タイプカルシウムチャンネル活性が強く阻害されることが証明された（Ikeda et al.，Neuron14 ：1029，1995）。これらのチャンネルを遮断すると神経伝達物質の放出が阻害されることは知られている。最後に、Ｌ−ＣＣＧ−Ｉは、グループＩＩのｍＧｌｕＲに選択的な濃度で、脱分極により誘発されるラット線条切片からの³Ｈ−アスパラギン酸放出を阻害することが認められた(Lombardi et al.，Br.J. Pharmacol．110：1407，1993)。グループＩＩのｍＧｌｕＲをシナプス後レベルで活性化することの生理学的作用についての証拠は、限られている。しかしある研究は、培養中脳ニューロンにおいて、Ｌ−ＣＣＧ−Ｉのシナプス後作用によりＮＭＤＡレセプター活性化を阻害しうることを示唆している(Ambrosini et al. ，Mol．Pharmacol．47：1057，1995)。生理学的研究により、Ｌ−ＡＰ４が皮質、海馬、扁桃、臭球および脊髄を含めた多様なＣＮＳニューロンの興奮性シナプス伝達を阻害しうることも証明された (Koermer and Johnson，Excitetory Amino Acid Receptors：Design of Agonist s and Antagonists，p.308,1992；Pin et al.，Curr．Drugs：Neurodegenerativ e Disorders 1：111，1993）。蓄積した証拠から、阻害はシナプス前ｍＧｌｕＲの活性化により仲介されることが示される。Ｌ−ＡＰ４の作用はＬ−ＳＯＰにより模倣でき、かつこれら２アゴニストはグループＩＩＩのｍＧｌｕＲに選択的であるので、このグループの員子がシナプス前阻害の仲介物質として関係するとされている（Schoepp，Neurochem．Int．24：439，1994；Pin and Duvoisin，Neur opharmacology 34：1）。臭球ニューロンにおいて、ｍＧｌｕＲのＬ−ＡＰ４活性化によりシナプス前カルシウム流が阻害することが証明された（Trombley and Westbrook，J．Neurosci．12：2043，1992）。したがって、グループＩＩＩのｍＧｌｕＲの活性化により生じるシナプス前阻害の機構は、グループＩＩのｍＧｌｕＲの機構、すなわち電位依存性カルシウムチャンネルの遮断および神経伝達物質放出の阻害と類似するらしい。Ｌ−ＡＰ４は、網膜ではシナプス後に作用してＯＮ両極細胞を過分極させる作用を示すことも知られている。この作用は、これらの細胞でｍＧｌｕＲが活性化され、これにｃＧＭＰホスホジエステラーゼが連携するためであるとが示唆された（Schoepp，Neurochem．Int ．24：439，1994；Pin and Duvoisin，Neuropharmacology 34：1）。代謝指向型グルタミン酸レセプターは、哺乳動物ＣＮＳで多数の正常なプロセスにおいて役割を果たしていることが示された。ｍＧｌｕＲの活性化は、海馬の長期増強および小脳の長期抑制を誘発する要件であることが証明された（Bashir et al.，Nature 363：347，1993；Bortolotto et al.，Nature 368：740，1994 ；Aiba et al.，Cell 79：365，1994；Aiba et al.，Cell 79：377，1994）。侵害受容および痛覚脱失におけるｍＧｌｕＲ活性化の役割も証明された(Meller et al.，Neuroreport 4：879，1993）。さらに、ｍＧｌｕＲ活性化は、下記を含めた多様な他の正常なプロセスにおいて調節の役割を果たすことが示唆された：シナプス伝達、ニューロンの発達、ニューロンの死、シナプスの形成性（plastici ty）、空間学習、臭覚記憶、心臓活動の中枢制御、歩行、運動制御、および前庭眼反射の制御(概説についてはNakanishi，Neuron 13：1031，1994；Pin and Duv oisin，Neuropharmacology 34：1；Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417， 1995)。本明細書に述べた文献はいずれも、本発明の先行技術とは認められない。発明の概要本発明は、（１）新規に確認された代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質およびそのフラグメントをコードする核酸；（２）この代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質およびそのフラグメント；（３）この新規な代謝指向型グルタミン酸レセプターに由来する１またはそれ以上のドメインおよび異なるレセプターに由来する１またはそれ以上のドメインを有する、キメラレセプター分子；（４）この代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質およびそのフラグメントを発現する細胞系；（５）この代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質、蛋白質フラグメントおよびペプチドを標的とする、抗体およびそのフラグメント；（６）このような分子、核酸、蛋白質、細胞系および抗体の使用；（７）この代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合するかまたはその活性を調節する化合物のスクリーニング方法；ならびに（８）この代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節し、およびこの代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合する化合物および方法に関する。このような化合物は、好ましくは代謝指向型グルタミン酸レセプター活性のうち１もしくはそれ以上のアゴニスト、アンタゴニスト、またはアロステリックモジュレーターとして作用する。代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節することにより、抗けいれん作用、神経保護作用、鎮痛作用および認識増強作用のような種々の作用を得ることができる。代謝指向型グルタミン酸レセプターは、ＣＮＳに作用する多様な病態生理学的プロセスや疾病状態において役割を果たすことが示唆されている。これらには、発作、頭部傷害、低酸素性および虚血性の損傷、低血糖症、てんかん、および神経変性性疾患、たとえばアルツハイマー病が含まれる（Schoepp and Conn， Trends Pharmacol．Sci．14：13，1993；Cunningham et al.，Life Sci．54： 135，1994；Hollman and Heinemann，Ann．Rev．Neurosci.17：31，1994； Pin and Duvoisin，Neuropharmacology 34：1；Knopfel et al.，J．Med．Chem ．38：1417，1995）。これらの状態の病理の多くは、ＣＮＳニューロンの過度のグルタミン酸誘発性興奮によるものと考えられる。グループＩのｍＧｌｕＲは、シナプス後機構を介したグルタミン酸仲介ニューロン興奮およびシナプス前グルタミン酸放出を高めると思われ、それらの活性化は病理に貢献するであろう。したがってこれらのレセプターの選択的アンタゴニストは、特に神経保護薬または抗けいれん薬として、療法上有益となるであろう。これに対し、グループＩＩおよびグループＩＩＩのｍＧｌｕＲを活性化すると、シナプス前グルタミン酸放出およびそれに続く興奮性の神経伝達が阻害され、これらのレセプターの選択的アゴニストが療法上同様な有用性を示すであろう。このように、種々のｍＧｌｕＲサブタイプがＣＮＳ薬開発の新たな目標となりうる。入手できるｍＧｌｕＲアゴニストおよびアンタゴニストを用いた療法効力を評価するこれまでの研究では、表面的には相反する結果が得られている。たとえば、ＡＣＰＤを海馬ニューロンに適用すると、発作およびニューロン損傷が起きたと報告されている（Sacaan and Schoepp，Neurosci．Lett．139：77，1992；Lip parti et al.，Life Sci．52：85，1993）。しかし他の研究は、ＡＣＰＤがてんかん様活性を阻害しうること（Taschenberger et al.，Neuroreport 3： 629,1992;Sheardown，Neuroreport 3：916，1992）、および神経保護性も示しうること（Koh et al.，Pro．Natl．Acad．Sci.USA88：9431，1991；Chiamulera et al.,Eur．J．Pharmacol．216：335，1992；Siliprandi et al.，Eur．J．Ph armacol．219：173，1992；Pizzi et al.，J．Neurochem．61：683，1993）を示す。これらの相反する結果は、ＡＣＰＤが選択的をもたず、種々のｍＧｌｕＲサブタイプを活性化することによると思われる。これらの結果に対する妥当な説明は、前者の試験ではグループＩのｍＧｌｕＲが活性化されて興奮性の神経伝達が増強され、一方、後者の作用はグループＩＩおよび／またはグループＩＩＩのｍＧｌｕＲの活性化により仲介されて、シナプス前グルタミン酸放出が阻害され、興奮性の神経伝達が低減したというものである。グループＩのｍＧｌｕＲのアンタゴニストであり、かつグループＩＩのｍＧｌｕＲのアゴニストである（Ｓ）− ４３Ｃ３ＨＰＧは、ＤＢＡ／２マウスにおいて聴性発作に対し保護し（Thomsen et al.，J．Neurochem．62：2492，1994）；一方、グループＩＩのｍＧｌｕＲの選択的アゴニストであるＤＣＧ−ＩＶおよびＬ−ＣＣＧ−ＩはニューロンをＮＭＤＡ誘発性およびＫＡ誘発性の毒性に対し保護する(Bruno et al.，Eur．J．Pha rmacol．256：109，1994；Pizzi et al.，J．Neurochem．61：683，1993）という所見も、この説明と一致する。現在入手できるｍＧｌｕＲアゴニストおよびアンタゴニストは効力および選択性が不足し、その結果、研究の道具としても有効な療法薬としても用途に限界があるのは明らかである。さらに、これらの化合物は大部分がアミノ酸またはアミノ酸誘導体であるので、生物学的利用能が限られ、これがｍＧｌｕＲの生理、薬理および療法効力を評価するインビボ試験を妨げている。したがって、哺乳動物のＣＮＳの生理学的および病態生理学的プロセスにおける種々のｍＧｌｕＲの役割をさらに理解するには、個々のｍＧｌｕＲサブタイプにつき高い効力および選択性をもつアゴニストおよびアンタゴニストを確認することが、最も重要な要件である。個々のクローン化されたｍＧｌｕＲで安定に形質転換された細胞を用いて、化合物ライブラリーを高い処理量でスクリーニングできれば、個々のレセプターサブタイプに有効な新規なリード化合物を確実に得ることができるであろう（Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417，1995）。これらのリード化合物は、効力、ｍＧｌｕＲサブタイプの選択性、および生理学的利用能のような重要な療法特性をさらに改良するために、広範な化学修飾に用いる基準として役立つであろう。この情報を考慮すると、新規ｍＧｌｕＲが他のｍＧｌｕＲサブタイプと比較して哺乳動物ＣＮＳにおいて特異な発現パターンをもつことは明らかである。新規ｍＧｌｕＲは、他のｍＧｌｕＲサブタイプと比較して種々のアゴニスト、アンタゴニストおよび調節分子に対する特異な薬理学的プロフィルを示すと期待される。これらの要素のため、本発明の対象である新規ｍＧｌｕＲに有効かつ選択的に作用する化合物は、哺乳動物ＣＮＳに対し、他のｍＧｌｕＲサブタイプに作用する化合物と異なる作用を示すであろう。したがって、本発明の新規ｍＧｌｕＲに選択的な化合物は、ＣＮＳの種々の病態生理学的状態および疾病状態の処置に関して、特異な用途および利点をもつと考えられる。本発明のレセプターおよび方法の好ましい用途は、新規な代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節する化合物をスクリーニングすること、およびそれらの化合物を神経疾患または神経傷害の処置の補助として利用することである。しかし診断および治療を含めた他の用途も考えられる。それらの用途は、本発明において同定された新規な代謝指向型グルタミン酸レセプターに基づく。その配列を配列番号：１に、ＤＮＡコード配列を配列番号：５（配列番号：２中の読み取り枠(ＯＲＦ)、ヌクレオチド１〜２７２４を表す）に示す。したがって第１態様において本発明は、少なくとも１５ヌクレオチド長さの精製または単離された核酸分子を提供する。この核酸は、配列番号：１に示したアミノ酸配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質のユニーク部分、配列番号：１の連続部分である代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質、またはこれらのアミノ酸配列の機能性均等物の、少なくとも５個の連続アミノ酸残基をコードする。好ましくは、代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質はヒト蛋白質である。具体的態様において、核酸分子は、ゲノムＤＮＡ配列、ｃＤＮＡ配列、またはＲＮＡ配列を含む。末端配列の存否のみにおいて異なる２種類の新規な代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質が証明されたので、好ましい態様において、グルタミン酸レセプター蛋白質は、配列番号：１、または配列番号：１の残基１〜８９３またはこれらの配列の機能性均等物を含む。特に重要なものは、本質的に、新規な代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質の全長をコードする核酸分子である。したがって好ましい態様において、核酸分子は、配列番号：１、もしくは配列番号：１のアミノ酸残基１〜８９３、またはこれらの配列の機能性均等物のアミノ酸配列をコードする。遺伝子コードの重複のため、多数の、ただし有限数の、異なる核酸配列が同一アミノ酸配列をコードするであろうということは自明である。このような代替コード配列も、上記観点の本発明の範囲に含まれる。好ましい態様において、配列番号：１をコードする核酸分子は、配列番号：５の核酸配列をもつ。同様に好ましい態様において、核酸分子は、配列番号：５の核酸配列またはそれに実質的に相補的な配列の、少なくとも１５または５０個の連続ヌクレオチドを含む。具体的態様において、核酸分子は、配列番号：５のヌクレオチド２６７８〜２７２４に示される核酸配列の、少なくとも３個、または少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む。同様に好ましい態様において、核酸分子は、少なくとも５個の連続アミノ酸残基をコードし、そのうち少なくとも１個は配列番号：１の残基８９４〜９０８のうちの１つ、好ましくはアミノ酸残基８９４〜９０８のすべてである。特定の用途においては修飾された代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質の使用が有利であるので、好ましい態様において本発明は、配列番号：１のアミノ酸配列の一部である細胞外ドメインを含むアミノ酸配列をコードする、単離または精製された核酸分予をも提供する。この態様において、コードされるアミノ酸配列は、配列番号：１のアミノ酸配列に含まれる膜貫通ドメイン部分および細胞内ドメイン部分を実質的に含まない。同様に他の具体的態様において、本発明は、配列番号:１のアミノ酸配列の一部であるが、少なくとも１つのそのようなドメインを含まない、１またはそれ以上のドメインをコードする、他の単離または精製された核酸分子をも提供する。したがって本発明は、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインを含まない細胞内ドメイン、または細胞内ドメインおよび細胞外ドメインを含まない膜貫通ドメイン、または代謝指向型グルタミン酸レセプターの膜貫通ドメインを実質的に含まない、代謝指向型グルタミン酸レセプターの細胞外ドメイン、または細胞内ドメインを実質的に含まない細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインをコードする核酸分子を提供する。同様に具体的態様において、核酸分子は、少なくとも１つの膜貫通ドメイン部分を実質的に含まない代謝指向型グルタミン酸レセプター、または代謝指向型グルタミン酸レセプターの細胞外ドメインを実質的に含まない代謝指向型グルタミン酸レセプター、または介在する細胞内ドメインおよび細胞外ドメインを含むが、配列番号１のＮ末端細胞外ドメインもしくはＣ末端細胞内ドメインを実質的に含まない、連続した多重膜貫通ドメイン（たとえば７回膜貫通ドメイン）をコードする。さらに好ましい態様において、核酸分子は、代謝指向型グルタミン酸レセプターではない（すなわち非−代謝指向型グルタミン酸レセプター）蛋白質の膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインをコードする第２の核酸分子に転写的に結合した（transcriptionally coupled）配列番号：１の細胞外ドメインをコードする；精製された核酸は、配列番号：１の７回膜貫通ドメインと連続したＮ末端細胞外ドメインからなる融合蛋白質をコードし、非−代謝指向型グルタミン酸レセプターのＣ末端細胞内ドメインをコードする核酸に転写的に結合している；精製された核酸は、配列番号：１の７回膜貫通ドメインと連続したＮ末端細胞外ドメインからなる融合蛋白質をコードし、非−代謝指向型グルタミン酸レセプターの多重細胞内ドメインをコードする核酸に転写的に結合している。特定の用途においては、相補的またはアンチコードＤＮＡ鎖を用いるのが有利であるので、本発明は上記観点の核酸分子の配列に対し実質的に相補的な配列を有する単離または精製された核酸分子をも提供する。本発明に関して、“精製された”という用語は、特定の核酸分子またはポリペプチドが、それと共に調製物中に存在する核酸またはポリペプチド全体の実質的画分を形成する状態で見出される他の核酸分子またはポリペプチドそれぞれから分離されていることを意味する。好ましくは、その特定の分子は、調製物中に存在するその種類の分子（核酸またはポリペプチド）の少なくとも１、５、１０、５０、７５、８５もしくは９５％またはそれ以上を構成する。本発明の核酸、ポリペプチドその他の生体分子に関して“単離された”とは、その分子が天然に見出される以外の形態（すなわちそれと他の分子との会合）で存在することを意味する。たとえば、単離されたレセプター核酸は、同一染色体上に存在する１またはそれ以上の核酸から分離されており、単離されたポリペプチドは、天然に普通はそれと共に見出される他のポリペプチドの実質的画分から分離されている。好ましくは、単離された核酸またはポリペプチドは、同一染色体上に存在する他の核酸または同一細胞中に普通は見出される他のポリペプチドの少なくとも９０％から分離されている。単離された核酸の一例は、組換え核酸である。本出願において、単離された核酸という用語は、クローンのライブラリー中に存在するクローンとは異なる。それは、表示した物質をコードする特定のクローンであって、他のそのようなクローンから単離されたものを意味する。それは標準的組換え法により、試験管内または希望する細胞もしくは生物内に存在するように、作り出することができる。それは、標準べクター内にクローン化した唯一の核酸であることが好ましく、天然にそれと会合して存在する制御配列を含んでもよく、含まなくてもよい。たとえばそれには、その天然の環境から単離され、かつ存在すべきであると請求範囲に示した配列を有する核酸が含まれる。それは、他の細胞成分および他の核酸から分離された核酸の均質な調製物であることが好ましい。本発明の核酸およびポリペプチドに関して、“ユニーク”という用語は、本発明の核酸分子と対応する他のレセプター蛋白質（他の代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質を含む）の配列との配列の相異を意味する。したがってこれらの配列は、少なくとも１個、好ましくは複数のヌクレオチドまたはアミノ酸残基が異なる。 “実質的に相補的”とは、精製された核酸が特異的核酸中の相補配列領域にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズしうることを意味する。そのような核酸配列は、特定のレセプターをコードする核酸の存在を検出するためのハイブリダイゼーション検出プローブとして、特に有用である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下では、相補性の高い核酸配列のみがハイブリダイズする。好ましくは、そのような条件では、２０個の連続ヌクレオチドのうち４個以上のミスマッチ、より好ましくは２０個の連続ヌクレオチドのうち２個以上のミスマッチ、最も好ましくは２０個の連続ヌクレオチドのうち１個以上のミスマッチを有する核酸のハイブリダイゼーションが阻止される。好ましくは、核酸は特定の配列（たとえば配列番号：２中の）の少なくとも１５、２０、２７または４５個の連続ヌクレオチドに対し、実質的に相補的である。新規なレセプターおよびフラグメントに関して、“機能性均等物”という用語は、そのレセプターまたはレセプターフラグメントの１またはそれ以上の活性と置換しうる活性をもつポリペプチドを意味する。これについては後記の詳細な記述に、より詳細に説明する。代謝指向型グルタミン酸レセプターの種々のドメインに関して、“実質的に含まない”という用語は、そのドメインが少なくとも大部分は存在せず、好ましくはその結果そのドメインに特異的な関連活性が本質的にまったく残存しないことを意味する。たとえばそのドメイン配列の短い部分（１またはそれ以上）が残存してもよいが、無傷のそのドメインが普通に与える実質的な特定の活性を与えることはない。 “含む”とは、“含む”の前にあるものがいずれも含まれるが、それらに限定されないことを意味する。したがってこの用語は、列記した要素が必要であるが、他の要素は任意であり、存在してもよく、存在しなくてもよいことを表す。“ 本質的に・・・・からなる”とは、列記した要素が必要であるが、他の要素は任意であり、それらが列記した要素の活性または作用に影響を及ぼすか否かに応じて、存在してもよく、存在しなくてもよいことを意味する。前記観点の核酸分子に対応する単離または精製されたポリペプチドも、本発明により提供される。したがって他の観点において、本発明は、配列番号：１に示したアミノ酸配列のうち少なくとも６個の連続アミノ酸を有する精製ポリペプチドである。好ましい態様において、精製ポリペプチドは、配列番号：１の少なくとも１２、１８または５４個の連続アミノ酸を有する。さらに好ましい態様において、精製ポリペプチドは、配列番号：１の残基８９４〜９０８に示される配列の少なくとも１個のアミノ酸を、他の連続アミノ酸に連続して含む。他の好ましい態様において、精製ポリペプチドは、配列番号：１の残基８９４〜９０８に示される少なくとも３、６、９、１２または１５個のアミノ酸を含む。他の観点において、精製ポリペプチドは、配列番号：１の残基１〜８９３に示されるアミノ酸配列を含む。好ましい態様において、ポリペプチドはさらに、マウスｍＧｌｕＲ８のカルボキシ末端の１５個のアミノ酸配列に相同な１５個のアミノ酸配列を含む。他の好ましいレセプターフラグメントには、細胞外部分、膜貫通部分、細胞内部分、および／または多重膜貫通部分（たとえば７回膜貫通部分）のみを有するものが含まれる。特に好ましい態様において、ポリペプチドは、配列番号：１のアミノ酸配列を含む。代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはレセプターフラグメントをコードする組換え核酸を発現させることは、前記のポリペプチドなどを製造するのに有用な方法である。したがって他の観点において、本発明は、発現ベクター中ヘクローン化された、前記の第１観点に記載した代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはレセプターフラグメントをコードする、組換え核酸（すなわち配列番号：１のアミノ酸配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質、またはその機能性均等物（すなわち、その蛋白質に付随する１またはそれ以上の活性を有するが、重要でない領域にそのような活性に影響を及ぼさない数個（１〜１０）のアミノ酸の変更を伴うもの）をコードするもの）を提供する。発現ベクターは、ポリペプチドを生成するクローン化核酸配列を発現するのに必要な要素を含有する。“発現ベクター”は、プロモーター領域（ＲＮＡ転写の開始を指令する）、およびRＮＡに転写されたとき合成開始のシグナルを発するＤＮＡ配列を含有する。”発現ベクター”には、それに含有されるＤＮＡ配列を発現しうるベクターが含まれる。すなわち、コード配列は、それらの発現を行わせうる他の配列に作動的に結合している。必ずしも常に明記してはいないが、これらの発現ベクターは宿主生物内で、エピソームとして、または生色体ＤＮＡの一体部分として、複製できなければならない。複製できない場合、それらが有効に作動しないのは明らかである。有効な発現ベクターの有用な（必要ではないが）要素は、マーカーコード配列、すなわちその蛋白質を含有する細胞を容易に識別できる、細胞の表現型特性（たとえばテトラサイクリン耐性）を生じる蛋白質をコードする配列である。すなわち“発現ベクター”には機能的定義がなされ、含有される特定の配列に適用した場合にそのＤＮＡコードを発現させうるＤＮＡ配列は、いずれもこの用語に含まれる。現在、そのようなベクターはプラスミドの形であることが多いので、“プラスミド”と“発現ベクター”という用語はしばしば互換性をもって用いられる。しかし本発明は、ウイルスベクターを含めて、同等な機能をもち、当技術分野で将来知られるようになる可能性のある他の形の発現ベクターを含めるものとする。レセプター蛋白質に関して、“生物学的に機能性である”および“機能性レセプター”とは、そのレセプター分子または部分が、その通常の細胞環境での正常なレセプターに特徴的な、目的プロセスに関連する正常な生物学的活性をもつことを示す。そのようなプロセスは、たとえば結合アッセイまたは複雑な細胞応答である。好ましくは、機能性レセプターは正常な細胞応答反応に関与することができる。発現ベクターに関して、“生物学的に機能性である”とは、関連の細胞または発現系においてその発現ベクターを転写し、かつ転写生成物を翻訳するのが可能であることを意味する。 “形質転換した”および“トランスフェクションした”という用語は、外来の遺伝子材料を原核細胞または真核細胞に挿入したことを意味する。そのような挿入は、一般にプラスミドベクターまたはウイルスベクターなどのベクターを用いて行われるが、当業者に既知の他の方法も含まれる。組換え核酸は、代謝指向型グルタミン酸レセプター、レセプターフラグメント、または代謝指向型グルタミン酸レセプター誘導体を、そのゲノムに由来する制御要素による制御下に、または外因性プロモーターを含めた外因性制御要素による制御下にコードする核酸を含有してもよい。“外因性”とは、代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする配列にインビボで普通は転写的に結合していないプロモーターを意味する。発現ベクターは本発明の他の観点において、原核性または真核性の宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションするために使用できる。したがって本発明の他の観点は、組換え細胞または組織である。組換え細胞または組織は、前記第１観点の組換え核酸配列、およびその核酸を発現しうる細胞からなる。組換え細胞は、組換え核酸によりコードされるポリペプチドを製造するための生物工場として作用させること、および機能性の代謝指向型グルタミン酸レセプターを含有する細胞を産生することを含めた、多様な用途をもつ。機能性の代謝指向型グルタミン酸レセプターを含有する細胞は、たとえばｍＧｌｕＲのアゴニスト、アンタゴニスト、またはアロステリックモジュレーターとして使用できる。好ましい態様において、機能性の代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする組換え核酸を含有する細胞または組織は、中枢神経系細胞、末梢神経系細胞、下垂体細胞および視床下部細胞よりなる群から選択され；組換え核酸は配列番号：１の少なくとも１２、１８または５４個の連続アミノ酸をコードする。本発明の具体的態様において、宿主細胞は卵母細胞、たとえばアフリカツメガエル卵母細胞である。他の好ましい態様において、宿主細胞はＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＧＩ１５、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ７のいずれかである。本発明の他の観点には、配列番号：１のアミノ酸配列もしくはその配列の一部を有する代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質または機能性均等物をコードする核酸分子を有する発現ベクターで形質転換またはトランスフェクションした原核細胞または真核細胞を、適した栄養条件下で増殖させることを含む、ポリペプチド生成物の製造方法が記載される。宿主細胞を、そのポリペプチド生成物が発現しうる様式で増殖させる。本発明の好ましい観点において、本方法はさらにポリペプチド生成物の単離を含む。“適した栄養条件下”は、細胞が正常な代謝機能を行い、および／または増殖しうる条件である。個々の細胞系または株に適した条件は一般に異なるであろうが、そのような細胞タイプそれぞれに適切な条件は当業者に既知であるか、または既知の方法で判定できる。本発明の他の観点には、本質的に配列番号：２の配列またはその配列のフラグメントからなる核酸を、非ヒト哺乳動物の細胞に導入することにより、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を形成する方法を記載する。関連する観点において、本発明は、新規な代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードするトランスジーンまたはそのレセプターを発現する遺伝子を保有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物、および新規な代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードするトランスジーンを保有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物の形成方法を提供する。好ましくは、これらの態様にはヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターを使用する。好ましい態様において、トランスジーンは、代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードし；代謝指向型グルタミン酸レセプターの発現を変化させ；代謝指向型グルタミン酸レセプターの発現を不活性化し；また代謝指向型グルタミン酸レセプターの発現をアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションする。 “トランスジェニック”という用語は、その動物の細胞の染色体に外来遺伝子を取り込んだ動物（植物にも適用できる）について言う。多くの場合、外来遺伝子は異なる種に由来するが、遺伝子がその動物に普通にみられる遺伝子の誘導体であって、その染色体に挿入されたものであってもよい。トランスジーンは染色体に取り込まれているので、その染色体の残りの部分と一緒に複製されるであろう。本発明の他の態様は、配列番号：１を有する代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合するか、またはその活性を調節する化合物のスクリーニング方法である。この方法は、代謝指向型グルタミン酸レセプターおよび被験化合物を許容しうる媒質に装入し、物理的に検出できる手段で結合または調節を監視し、これにより、代謝指向型グルタミン酸レセプターと相互作用するか、またはその活性を調節する化合物を同定することを含む。このような化合物は、代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節する療法用分子として、または異常な代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を特色とする疾患に罹患している患者を診断する診断薬として有用である。好ましい態様において、ｍＧｌｕＲは、配列番号：１のアミノ酸配列に含有される細胞外ドメイン、および異なるレセプターの細胞内ドメインを有する、キメラレセプターである。このようなキメラレセプターは、本明細書に記載する新規なｍＧｌｕＲによって普通は活性化されない細胞経路を活性化できる。同様に好ましい態様において、代謝指向型グルタミン酸レセプターを細胞により発現させ、化合物がこの細胞に及ぼす影響を監視することにより化合物をスクリーニングする。より好ましくは、この細胞は真核細胞である。たとえば本方法は、代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする組換え核酸を含有する細胞を上記物質と接触させ、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性の変化を検出することを伴ってもよい。他の好ましい態様において、本方法は、標識した既知の結合性物質との競合結合アッセイを伴う。好ましくは、本方法を利用して代謝指向型グルタミン酸レセプターの調節薬を同定する。本明細書において“物理的に検出できる手段”という用語は、モジュレーターまたは結合性化合物と新規な代謝指向型グルタミン酸レセプター分子との相互作用を検出するための手段を意味する。そのような手段には、たとえば分光測光法（たとえばＣａ²⁺の蛍光測定法）、電気生理学的アッセイ法、および生化学的アッセイ法（たとえば特異的酵素活性）を含めることができる。このような生化学的アッセイ法には、他の種々のアッセイ法のほか、新規なｍＧｌｕＲによって普通は活性化されない、キメラレセプターによる細胞経路の活性化の検出を含むことができる。それぞれの手段で、物理的特性やパラメーターが検出される。 “キメラレセプター”は、２以上の異なる蛋白質に由来する配列の融合物または結合物であるアミノ酸配列をもつレセプターであり、それらの蛋白質の少なくとも１つはレセプター蛋白質である。一般に本発明においてキメラレセプターは、２以上の異なるレセプター蛋白質に由来するドメイン（たとえば細胞外、膜貫通、および細胞内）を構成するアミノ酸配列をもち、それらの蛋白質の少なくとも１つは本発明の新規なｍＧｌｕＲ８である。代謝指向型グルタミン酸レセプターの調節薬の同定は、ハイスループットスクリーニングシステムの使用によって促進される。ハイスループットスクリーニングによって、多数の分子を試験することができる。たとえば、多数の分子を高速自動化法で個々に、または分子のコンビナトリアルライブラリーの利用と組み合わせて、試験することができる。コンビナトリアルライブラリー中に存在する、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節しうる個々の化合物は、コンビナトリアルライブラリーの画分を精製して再試験することにより得ることができる。こうして数千ないし数百万の分子を短期間でスクリーニングできる。活性分子をモデルとして用いて、同等または増強した活性をもつ他の分子を設計することができる。そのような分子は一般に、１０，０００以下、好ましくは１，０００未満の分子量をもつであろう。それらはNemethらが国際特許出願US94/12117（WO75 111221）（本明細書に参考として含まれる）に記載したように、カルシウムレセプターにおける３種類の活性分子から選択できる。本発明の他の観点には、配列番号：１のアミノ酸配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはその一部もしくは機能性均等物の活性を調節する方法であって、このレセプターを、代謝指向型グルタミン酸レセプターの１またはそれ以上の活性を調節する化合物と接触させて、一般にレセプターを活性化するか、または活性化を阻害する工程を含む方法を記載する。代謝指向型グルタミン酸レセプターを、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性の調節に十分な量の化合物と接触させる。代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節すると、後記の詳細な説明に記載するように、代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性化に際して起きる細胞応答が増大または低減する。典型的には、この化合物は、代謝指向型グルタミン酸レセプターにおけるグルタミン酸の１またはそれ以上の作用を模倣し、または代謝指向型グルタミン酸レセプターにおけるグルタミン酸の１またはそれ以上の作用を遮断する（または両方の可能性もある）。本方法は、インビトロまたはインビボで行うことができる。 “模倣する”という用語は、その化合物が、レセプターとグルタミン酸の接触に応答して示されるものと類似の作用を起させることを意味する。“遮断する” とは、その化合物の存在により、レセプターとグルタミン酸の接触による正常な作用のうち１またはそれ以上が阻害されることを意味する。本発明に関して、“インビトロ”とは、そのプロセスが生細胞内で、または生細胞により行われないことを意味する。ただしそのプロセスには、細胞膜その他の細胞部分、または完全ではあるが生存していない細胞すら使用できる。“インビボ”とは、そのプロセスが生細胞内で、または生細胞により行われることを意味し、したがって哺乳動物のような複雑な生物内で、または複雑な生物により行われるプロセスが含まれる。本発明の他の観点は、本発明の新規なｍＧｌｕＲおよび／またはこのｍＧｌｕＲの活性の調節に関連するか、またはそれらにより影響を及ぼすことができる疾患または状態を伴っている患者の処置方法である。一般にこれらの方法は、化合物または組成物を患者に投与することにより、ｍＧｌｕＲの１またはそれ以上の活性を変更または調節することを伴う。これらの方法は、これらの疾患、状態または障害を伴っている患者に、代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節するか、レセプターの発現を阻害するか、または機能性レセプターを提供する化合物を、療法上有効な量投与することを伴う。そのような化合物には、たとえば小型の分子、および核酸のような高分子が含まれる。多様な疾患または状態を処置することができ、これには、好ましくは神経変性性疾患、グルタミン酸興奮毒性、全体性および病巣性の虚血性および出血性発作、頭部外傷、脊髄傷害、低酸素誘発性の神経細胞損傷、ならびにてんかんよりなる群から選択される、神経疾患または神経障害が含まれる。好ましい態様において、神経変性性疾患はアルツハイマー病、パーキンソン病、またはハンチントン病である。したがって１つの観点において、処置方法は、配列番号：１の配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節する化合物（すなわち代謝指向型グルタミン酸レセプター調節薬）を、患者に療法上有効な量投与することを伴う（したがってこの薬剤は、機能性均等物の活性も調節しうる）。前記のように、好ましい態様において、患者は神経疾患または神経障害をもつ。同様に好ましい態様において、この化合物は生理学的活性または病態生理学的活性に影響を及ぼす。例示であって限定ではないが、これにはけいれん、神経保護、ニューロンの死、ニューロンの発達、心臓活動の中枢制御、覚醒、運動制御、および前庭眼反射を含めることができる。関連の観点において、処置方法は、配列番号：１の配列の機能性代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはその機能性均等物をコードする核酸を、患者に療法上有効な量投与することを伴う。この核酸は、レトロウイルスベクターおよびリポソームの使用など、標準法で投与できる。関連する他の観点において、処置方法は、代謝指向型グルタミン酸レセプター、好ましくは本質的に配列番号：１の配列からなるレセプターの発現を阻害する核酸を、患者に療法上有効な量投与することを伴う。代謝指向型グルタミン酸レセプターの発現を阻害しうる核酸には、このレセプターをコードする内因性遺伝子と相同的組換えにより結合しうるアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよび核酸が含まれる。阻害性核酸の標的部位には、プロモーター、プロモーターに作用する他の制御物質、ｍＲＮＡ、プロセシング前ｍＲＮＡ、およびゲノムＤＮＡが含まれる。投与は、その方法が目的とする用途に応じて、この物質をコードするトランスジーンを供給することにより、または他のいずれか適した方法で、行うことができる。好ましくは、前記観点の核酸を投与することにより処置すべき疾患や障害は、以下の１またはそれ以上を特色とする：（１）その産生または分泌が代謝指向型グルタミン酸レセプター活性により影響されるメッセンジャーの異常な量；および（２）その機能が代謝指向型グルタミン酸レセプター活性により影響されるメッセンジャーの異常な量または活性。 “患者”とは、代謝指向型グルタミン酸レセプターの調節が有益な効果をもつ哺乳動物を意味する。代謝指向型グルタミン酸レセプターの調節を伴う処置を必要とする患者は、医療専門家に既知の標準法で確認できる。好ましくは、患者は以下の１またはそれ以上を特色とする疾患または障害をもつヒトである：（１）異常な代謝指向型グルタミン酸レセプター活性；（２）その産生または分泌が代謝指向型グルタミン酸レセプター活性により影響されるメッセンジャーの異常な量；および（３）その機能が代謝指向型グルタミン酸レセプター活性により影響されるメッセンジャーの異常な量または活性。 “療法上有効な量”とは、患者の疾患または障害の１またはそれ以上の症状をある程度軽減し；あるいはその疾患に付随するか、またはその原因である、１またはそれ以上の生理学的または生化学的パラメーターを部分的または完全に正常に戻す薬剤量を意味する。代謝指向型グルタミン酸レセプターに関して、“機能する”または“機能性” とは、そのレセプターが正常な生物学的状態（正常な細胞状態での正常なレセプター）でもつ関連の生物学的活性の少なくとも若干、好ましくはそのような活性の実質的にすべてを、レセプターがもつことを示す。これらには、たとえば特異的結合特性および特異的酵素活性（特に）を含めることができる。関連する本発明の観点には、配列番号：１のアミノ酸配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはその一部もしくは機能性均等物に結合しうる薬剤（たとえば化合物および医薬組成物）を記載する。好ましくは、この薬剤は代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節することができる。本発明の１観点は、代謝指向型グルタミン酸レセプター調節薬および生理学的に許容しうる担体から調製される医薬組成物である。それらの薬剤は、代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節することにより患者を処置するのに使用できる。薬剤または医薬組成物とは、哺乳動物、好ましくはヒトに投与するのに適した形態の薬剤または組成物を意味する。投与に適した形態に関する考慮事項は当技術分野で知られており、毒性、溶解度、投与経路、および活性の持続が含まれる。たとえば血流に注入する薬剤または組成物は、可溶性でなければならない。医薬組成物は、薬剤学的に許容しうる塩類（たとえば酸付加塩）およびその複合体として配合することもできる。そのような塩類の調製は、薬剤が生理学的作用を発揮するのを阻害せずにその物理的特性を変化させることにより、薬剤の薬理学的使用を容易にすることができる。本発明の他の観点によれば、配列番号：１のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合しうる代謝指向型グルタミン酸レセプター結合薬が提供される。好ましい態様において、結合薬は特異的ポリペプチドに優先的に結合する。これは、限られた薬剤および同数の利用可能なポリペプチドという条件下で、他のポリペプチドより多数（多い画分）の特異的ポリペプチドが薬剤を結合させるであろうということを意味する。好ましい態様において、結合薬は、配列番号：１のアミノ酸配列を有するポリペプチド上にあるエピトープを認識する精製抗体である。さらに好ましい態様において、結合薬は毒素に結合した抗体である。毒素に結合した結合薬を利用して、特異的レセプターを含む細胞へ毒素を送達することができる。たとえば、異常なレセプターを特色とする癌細胞に指向性である毒素に結合する抗体は、癌細胞を選択的に殺すことができる。代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合する抗体は種々の用途をもち、たとえば代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節する療法薬として；グルタミン酸関連疾患を診断するために、代謝指向型グルタミン酸レセプターの数および／または位置および／または機能の統合性を測定するための診断の道具として；ならびにレセプターの合成、構造および機能を調べるための研究の道具として用いられる。代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的とする抗体は、たとえばレセプターのどの部分が天然リガンドのような特異的分子を結合するかを解明するのに有用である。他の観点において、本発明は、新規な代謝指向型グルタミン酸レセプターの異常な数または代謝指向型グルタミン酸レセプターの変化を特色とする患者の疾患または障害を診断する方法である。そのような変化には、たとえば配列の変化、活性の変化、および位置の変化が含まれる。本方法は、１またはそれ以上の代謝指向型グルタミン酸レセプター、たとえば配列番号：１のアミノ酸配列を有するレセプター、またはその一部もしくは機能性均等物の、数および／または位置および／または機能の統合性を確認することを伴う。この数および／または位置および／または機能の統合性を、正常または病的であると解明された患者にみられたものと比較して、その疾患または障害の存在の指標とする。代謝指向型グルタミン酸レセプター結合薬を用いて診断を行うことができる。たとえば代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合する代謝指向型グルタミン酸レセプター調節薬、および代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合する抗体を、診断に使用できる。好ましくは、検出可能な部分、たとえば放射性同位体、酵素（たとえばアルカリホスファターゼ）、蛍光標識、重元素、もしくは当技術分野で知られているこのような他の標識で、または検出可能な部分をもつ他の分子に結合するタグ（たとえばビオチン／アビジン）で、結合薬を標識する。変化したレセプターはそのレセプターが正常な個体においてもつものと異なる構造をもち、代謝指向型グルタミン酸レセプターに関連する疾患または障害に付随する。そのような変化はレセプターの機能に影響を及ぼす可能性があり、変化したレセプターと正常なレセプターの構造の相異を調べることにより検出できる。変化したレセプターには結合するが、正常なレセプターには結合しない結合薬を用いて、変化したレセプターの存在を判定することができる。さらに、正常なレセプターには結合しうるが、特定の変化したレセプターには結合しない結合薬も、特定の変化したレセプターの存在を判定するのに使用できる。同様に、検査すべきレセプターに結合する薬剤を用いて、レセプターの数を判定することができる。このようなアッセイ法は一般に、標識した結合薬の使用を伴い、競合アッセイ、非競合アッセイ、均一アッセイ、および不均一アッセイなどの標準形式を用いて実施できる。他の好ましい態様において、本方法は、代謝指向型グルタミン酸レセプターに対する抗体を用いて、代謝指向型グルタミン酸レセプターの数および／または位置および／または機能の統合性を確認する、免疫アッセイ法であり；代謝指向型グルタミン酸レセプターの数または変化を測定することにより、癌、たとえば中枢神経系または末梢神経系の異所性腫瘍の存在を調べる。本発明の他の特色および利点は、以下の本発明の好ましい態様の記載および請求の範囲から明らかになるであろう。図面の簡単な説明図１（配列番号：１）は、新規なヒトｍＧｌｕＲ８蛋白質の全アミノ酸配列を、アミノ酸の１文字略号で示す。図２（配列番号：２）は、新規なヒトｍＧｌｕＲ８蛋白質をコードする読み取り枠（ヌクレオチド１〜２７２４）を含むＣＣＸ−１ｃＤＮＡのコード鎖の５ ’−３’ヌクレオチド配列を示す。４種類のデオキシヌクレオチドトリホスフェートにつき、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣの標準１文字略号を用いる。図３（配列番号：３）は、ＰＣＲフラグメントＦＦ６.１７５のコード鎖の部分５’−３’ヌクレオチド配列を示す。このヌクレオチド配列は、ＣＣＸ−１ヌクレオチド配列のヌクレオチド２１５４〜２３１９に相当する。図４（配列番号：４）は、ＰＣＲフラグメントＸ１２０.１５のコード鎖の５ ’−３’ヌクレオチド配列を示す。このヌクレオチド配列は、ＣＣＸ−１ヌクレオチド配列のヌクレオチド２１６３〜２２８３；およびＦＦ６.１７５ヌクレオチド配列のヌクレオチド１０〜１３０に相当する。図５（配列番号：５）は、ＣＣＸ−１ｃＤＮＡ（配列番号：２）中の読み取り枠の５’−３’ヌクレオチド配列、ヌクレオチド１〜２７２４を示す。この配列は前記アミノ酸配列（配列番号：１）をコードする。図６Ａは、実施例２に記載したスプライス−変異実験に関するＰＣＲプライマー設計法を示す。推定スプライス−変異領域に隣接するプライマーの設計のために、マウスｍＧｌｕＲ−８配列とヒトｍＧｌｕＲ−８配列のグラフを比較する。図６Ｂは、実施例２に記載したスプライス−変異実験の結果を示す。図７は、実施例４に記載した機能活性化実験の結果を示す。詳細な説明ラットまたはマウスから得た８種類の代謝指向型グルタミン酸レセプターサブタイプのクローニングについては、科学文献に報告されている。これらには以下のものが含まれる：ラットｍＧｌｕＲ１(Masu et al.，Nature 349：760，1991 ；Houamed et al.，Science 252：1318，1991；Pin et al.，PNAS89：10331，19 92)、ラットｍＧｌｕＲ２（Tanabe et al.，Neuron 8：169，1992）、ラットｍＧｌｕＲ３（Tanabe et al.，Neuron 8：169,1992）、ラットｍＧｌｕＲ４（Tan abe et al.，Neuron 8：169，1992）、ラットｍＧｌｕＲ５（Abe et al.，J．Bi ol．Chem．267：13361，1992）、ラットｍＧｌｕＲ６（Nakajima et al.，J．Bi ol．Chem．268：11868，1993）、ラットｍＧｌｕＲ７（Okamoto et al.，J．Bio l．Chem.269：1231，1994；Saugstad et al.，Mol．Pharmacol．45：367，1994 ）およびマウスｍＧｌｕＲ８(Duvoisin et al.，J．Neuroscience 15：3075，19 95)。ヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターサブタイプｍＧｌｕＲ１（Lin et al.，Soc．Neurosci．Abstr．20：468，1994）、ｍＧｌｕＲ２（Flor et al.，E ur．J．Neurosci．印刷中；Knopfel et al.，J．Med．Chem．38：1417，1995）、ｍＧｌｕＲ４（Flor et al.，Neuropharmacol．34：149，1994）、ｍＧｌｕＲ５（Minakami et al.，Biochem．Biophys．Res．Commun．199：1136，1994）、およびｍＧｌｕＲ７（Flor et al.，Soc．Neurosci．Abstr．20：468，1994）のクローニングも報告されている。国際特許出願US91/09422（1991年12月12日出願）は、ラットから単離してクローン化したＧ蛋白質結合グルタミン酸レセプターを提供する。欧州特許出願第93 303520.6号（1993年５月６日出願）は、本出願人らがヒトｍＧｌｕＲ１と記載するヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターおよび関連ＤＮＡ化合物を提供する。本発明の対象は、新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターである。本発明の新規なレセプターは、グループＩＩＩの代謝指向型グルタミン酸レセプターに関連するヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターであり、これにはｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６、ｍＧｌｕＲ７およびｍＧｌｕＲ８が含まれる。本出願人が初めて本発明の新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターを証明し、かつ初めてその核酸配列を決定した。以下に、本明細書中で用いる用語を若干挙げる。これらの用語は本明細書に提示される開示内容全体を考慮して解釈すべきである。 “鎮痛薬”とは、意識を喪失させる麻酔作用を生じることなく、侵害受容刺激の認知を変化させることにより痛みを除くことができる化合物を意味する。 “鎮痛活性”とは、普通は痛みを伴うであろう剌激に応答した痛みを軽減する効力を意味する。 “抗けいれん活性”とは、単純な部分発作、複雑な部分発作、てんかん状態、および外傷により誘発される発作、たとえば頭部外科処置を含めた頭部損傷に伴って起きる発作により生じるようなけいれんを低減させる効力を意味する。 “結合薬”とは、レセプターに結合し、そのレセプターの活性を調節するか、または調節しない、小型の分子、リガンド、抗体、または毒素のような分子を意味する。 “認識増強活性”とは、記憶の獲得または学習した作業の遂行を改善する効力を意味する。“認識増強活性”は、正常な論理的思考プロセスおよび理論付けを改善する効力をも意味する。 “認識増強薬”とは、学習および記憶を改善しうる化合物を意味する。 “効力”とは、選ばれた化合物につき、統計学的に有意水準の目的活性を検出できることを意味する。“有意”とは、ｐ＜０．０５の水準の統計学的有意性を意味する。 “痛覚過敏”とは、普通は痛みを伴う剌激に対する応答が増大しいてることを意味する。 “最小の副作用”とは、その薬物のいかなる副作用も平均的個体が耐容でき、したがってその薬物を標的疾患または障害の療法に使用できることを意味する。このような副作用は当技術分野で周知である。好ましくは、最小の副作用は、標的疾患または障害に関する薬物承認につき耐容できるとＦＤＡがみなしたものである。 “調節する”とは、細胞性レセプターの活性を増大または低下させることを意味する。 “筋肉弛緩薬”とは、筋肉の緊張を低下させる化合物を意味する。 “神経痛”とは、神経分布における痛みを意味する。 “神経障害または神経疾患”とは、神経系の障害または疾患を意味する。神経障害および神経疾患の例には、全般性および限局性の虚血性および出血性発作、頭部外傷、脊髄傷害、低酸素誘発性の神経細胞損傷（心停止または新生児窮迫におけるような）、てんかん、ならびに神経変性性疾患が含まれる。 “神経変性性疾患”とは、中枢神経系の細胞に影響を及ぼし、その結果、神経系の細胞が適正に機能する能力が次第に低下する神経疾患を意味する。神経変性性疾患の例には、アルツハイマー病、パーキンソン病またはハンチントン病が含まれる。 “神経保護活性”とは、たとえば神経障害または神経疾患により起きるニューロン細胞の死を阻止する効力を意味する。 “有効”とは、代謝指向型グルタミン酸レセプターにおいて、１またはそれ以上のレセプター活性に関して、その化合物が１０μＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満、さらに好ましくは１ｎＭ未満のＥＣ₅₀値（最大活性の半分を生じる濃度）、またはＩＣ₅₀値（最大阻害の半分を生じる濃度）、またはＫ_d（最大結合の半分を生じる濃度）をもつことを意味する。 “選択的”とは、その化合物がイオンチャンネル内蔵型グルタミン酸レセプター、より好ましくは異なる分類グループの他の代謝指向型グルタミン酸レセプターサブタイプ、さらに好ましくは同一分類グループの他の代謝指向型グルタミン酸レセプターサブタイプを活性化し、阻害し、および／またはそれらに結合するより低い濃度で、特定の代謝指向型グルタミン酸レセプターサブタイプを活性化し、阻害し、および／またはそれらに結合することを意味する。好ましくはこの濃度差は１０倍、より好ましくは５０倍、さらに好ましくは１００倍である。 “療法上有効な量”とは、患者において目的とする療法効果を生じる化合物量を意味する。たとえば疾患または障害に関して、これはその疾患または障害の１またはそれ以上の症状をある程度軽減し、またその疾患または障害に付随するか、またはその原因である、１またはそれ以上の生理学的または生化学的パラメーターを部分的または完全に正常に戻す量である。患者を処置するのに用いる場合、それは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５０ｍg／ｋｇ未満、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ未満の量であると考えられる。好ましくはこの量は、代謝指向型グルタミン酸レセプターに約１ｎＭ〜１μＭの有効濃度の化合物を供給する。化合物の量は、そのＥＣ₅₀（アンタゴニストの場合はＩＣ₅₀）、ならびにその患者の年齢、体格、および付随する疾患に依存する。１．方法Ａ．新規なｍＧｌｕＲの核酸配列本発明は、代謝指向型グルタミン酸レセプターおよびレセプターフラグメントをコードする核酸配列である。この核酸配列は、原核細胞または真核細胞においてそのレセプター配列を発現しうるように工学的に処理されてもよい。たとえばコード配列全体またはそのフラグメントを、適切な発現ベクター中で、このような発現が可能となるように以下の１またはそれ以上と組み合わせることができる：（１）外因性プロモータ一配列、（２）リボソーム結合部位、（３）ポリアデニル化シグナル、（４）分泌シグナル。５’側非翻訳配列において、原核細胞または真核細胞中での発現を改善するように修飾することができる。あるいはコドンを、それらが同一アミノ酸をコードするが、選ばれた発現系においてそのコドンが好ましいコドンであるように、修飾することができる。このような好ましいコドンの使用については、たとえばGrantham et al.，Nuc ．Acids Res.，9：43- 74（1981）、およびLathe，J ．Mol．Biol.，183：1-12（1985）に記載されており、これらが参考として本明細書に含まれるものとする。本発明の好ましい態様において、核酸配列は、新規なヒト代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする配列番号：２の配列である。さらに好ましい態様において、核酸配列は配列番号：５の配列である。さらに、特定のレセプターをコードする核酸配列は、たとえば核酸ハイブリダイゼーションアッセイプローブを提供することにより、他の関連レセプターを得るための道具をさらに提供する。さらに、異なるが関連のある２以上のレセプターをコードする核酸配列を分析して、配列保存の局在領域を決定することができる。これらの保存核酸領域は、ハイブリダイゼーションプローブとして有用であり；あるいはハイブリダイゼーションプローブの設計および合成に寄与し；これらを用いてレセプタースーパーファミリーの他の構成員子をコードするクローン化核酸を得ることができる。保存配列は、配列番号：２の全核酸配列の分析、およびその配列と他のｍＧｌｕＲをコードするヌクレオチド配列との比較により推定できる。 “保存核酸領域”とは、代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする２以上の核酸内の領域であって、特定の相補的核酸が比較的ストリンジェンシーの低い条件下でそれにハイブリダイズしうる領域を意味する。代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする核酸のスクリーニングに適する比較的ストリンジェンシーの低い条件の例は、後記の実施例およびAbe et al.，J．Biol．Chem．19：1 3361（1992）（参考として本明細書に含まれるものとする）に示される。好ましくは、保存核酸領域はヌクレオチド２０個のうち７個より多く異なることはない。クローン化されたレセプターまたはレセプターフラグメントをコードする核酸の用途には、以下の１またはそれ以上が含まれる：（１）たとえば、構造を決定するために、レセプターに対する分子の活性をアッセイするために、およびレセプターに結合する抗体を得るために使用できる、レセプター蛋白質を製造する；（２）配列決定してレセプターのヌクレオチド配列を判定し、これを、たとえば他のレセプターと比較する基礎として利用して、保存領域を決定し、正常なレセプターおよび変化したレセプターに対するユニークヌクレオチド配列を決定し、またアンチセンス核酸、リボザイム、ハイブリダイゼーション検出プローブまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅プライマーの標的部位として使用できるヌクレオチドを決定することができる；（３）試料中の天然レセプターおよび／または関連レセプターの存在を検出するためのハイブリダイゼーション検出プローブとして；（４）特定の核酸配列領域を形成するための、たとえばハイブリダイゼーション検出プローブにより探査すべき領域を形成するための、ＰＣＲプライマーとして。一般に本発明の核酸分子は、本発明に有用な全長代謝指向型グルタミン酸レセプター、代謝指向型グルタミン酸レセプターフラグメント、全長代謝指向型グルタミン酸レセプターの誘導体、代謝指向型グルタミン酸レセプターフラグメントの誘導体をコードする核酸配列をもつ。これらには、配列番号：２、配列番号：５に示される配列、もしくは配列番号：１に示される蛋白質配列をコードする配列、またはそれらの相補鎖を含む核酸配列；ストリンジェントな条件下で配列番号：２もしくは配列番号：５の核酸配列に、またはそのフラグメントにハイブリダイズする核酸配列；遺伝子コードの縮重がなければ配列番号：２もしくは配列番号：５の核酸配列にハイブリダイズするであろう核酸配列が含まれる。好ましくは核酸は、配列番号：２に示される配列のうち少なくとも１５、１８、２７、最も好ましくは少なくとも４５個の連続核酸を含有する。より長い核酸の利点には、以下の点が含まれる：たとえば抗体の産生に使用できる代謝指向型グルタミン酸レセプターの配列をもつ、より長い蛋白質フラグメントが生成する；よりストリンジェンシーの高いハイブリダイゼーションアッセイ条件下での核酸プローブの特異性が増す；およびよりストリンジェンシーの低いハイブリダイゼーションアッセイ条件下で、関連の代謝指向型グルタミン酸レセプター核酸に対し、より特異的である。前記の概要に記載したように、本発明はまた、配列番号：５の配列領域に対し実質上相補的な、少なくとも１５、２５、３５、または好ましくは５５個の連続ヌクレオチドの核酸配列領域を含む、精製核酸である。好ましい態様において、核酸配列領域には、配列番号：５のヌクレオチド２６７８〜２７２４に示される核酸配列のうち、少なくとも３、９、１５、より好ましくは少なくとも２５個の連続ヌクレオチドが含まれる。本発明はまた、配列番号：１に示される少なくとも５個の連続アミノ酸をコードする核酸配列を含む、代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはそのフラグメントをコードする核酸である。好ましくは、この核酸は、配列番号：１のうち少なくとも１２、１８、３０または５４個の連続アミノ酸をコードする。特定の態様において、この核酸は配列番号：１の残基８９４〜９０８に示される少なくとも１個の連続アミノ酸、より好ましくは少なくとも３、６、９、１２または１５個の連続アミノ酸をコードする。他の態様において、この核酸は、配列番号：１の残基１〜８９３を含むアミノ酸配列をコードする。あるいはこの核酸は、さらにマウスｍＧｌｕＲのカルボキシ末端の１５アミノ酸配列に相同なアミノ酸配列をコードする。さらに、この核酸は、細胞外結合ドメイン部分、膜貫通ドメイン部分または細胞内ドメイン部分のいずれかをコードする核酸配列に相補的であってもよい。このようなドメインをコードする核酸は、非−代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質に由来する第２の核酸配列に転写的に結合していてもよい。たとえば、本明細書に開示する新規なレセプターに由来する細胞外ドメインをコードする核酸が、非−代謝指向型グルタミン酸レセプターの膜貫通および細胞内コードドメインをコードする第２の核酸に転写的に結合していてもよい。あるいは細胞外結合ドメインが、配列番号：１の配列をもつレセプター以外の異なるクラスまたはサブクラスのｍＧｌｕＲの員子である代謝指向型グルタミン酸レセプターの膜貫通および細胞内コードドメインをコードする第２の核酸に転写的に結合していてもよい。レセプターフラグメントおよびキメラレセプターをコードするこのような核酸は、たとえば出願中の米国特許出願第60/001,526号に記載されており、その全体が本明細書に参考として含まれる。遺伝子コードの縮重のため、異なる組合わせのヌクレオチドが同一ポリペプチドをコードすることができる。したがって、同一アミノ酸配列をもつ多数の代謝指向型グルタミン酸レセプターおよびレセプターフラグメントを、異なる核酸配列によりコードすることができる。１．ハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーを用いるクローニング現在のところ、ｍＧｌｕＲ核酸を単離する好ましい方法は、ハイブリダイゼーションスクリーニングを基本としている。核酸配列（配列番号：２）のような代謝指向型（metabotropic）グルタミン酸レセプターをコードする核酸またはアミノ酸配列（配列番号：１）をコードする核酸から誘導された領域-特異的プライマーまたはプローブは、既知の方法（例えば、Ｉｎｎｉｓら、ＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ、１９９０；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭoｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８９）を用いて、ＤＮＡ合成およびＰＣＲ増幅を開始するために、ならびに、ｍＧｌｕＲ族の一員をコードするクローン化ＤＮＡを含む細菌のコロニーまたはファージプラークを同定するために用いることができる。ａ．ＰＣＲクローニングｍＧｌｕＲをコードする核酸を標的とするプライマーハイブリダイゼーション特異性は、ハイブリダイゼーション条件を変えることによって、調整することができる。５０−６０℃のストリンジェンシーのより高い条件でハイブリダイゼーションを行う場合、プライマーとの相同性が約７６％より大きい配列が増幅されるであろう。ハイブリダイゼーシヨンを３５−３７℃で行うことによって、ストリンジェンシーのより低い条件を用いる場合、プライマーとの相同性が約４０− ５０％より大きい配列が増幅されるであろう。代謝指向型グルタミン酸レセプターの分析は、それらが７つの保存された推定のトランスメンブレンドメインを持つＧ蛋白質が複合(couple)したレセプターであることを示唆している。特に有効な研究方法の一つは、保存された推定のトランスメンブレンドメインと相同な縮重プライマーを用いること、およびポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）を用いてこれらの配列をコードするＤＮＡ領域を増幅させることである。例えば、そのようなオリゴヌクレオチドプライマーを、ゲノムＤＮＡまたは選択された組織から単離されたＲＮＡから調製されたｃＤＮＡと混合し、ＰＣＲを実行する。新規のＧ蛋白質−複合レセプター配列は、既知のＧ蛋白質−複合レセプターと必ずしも同一ではないので、ある実験では、選択された組織からの新規のＧ蛋白質−複合レセプター配列を特異的に増幅する必要があるが、当業者らはこのことを良く理解している。例えば、Ｂｕｃｋ，Ｌ．およびＡｘｅｌ，Ｒ．、１９９１、Ｃｅｌｌ，６５：１７５−１８７を参照のこと。ｂ．ハイブリダイゼーションアッセイプローブハイブリダイゼーションアッセイプローブは、本発明の目的である新規のｍＧｌｕＲのようなレセプターをコードするクローン化ｍＧｌｕＲｓおよびアミノ酸配列から得られた配列情報を基にして、設計することができる。ハイブリダイゼーションアッセイプローブは、プローブと完璧に相補的な具体的核酸標的配列の存在を検出するように、そして、ハィブリダイゼーション条件およびプローブ設計を変えることによってより相補性の小さい標的配列の存在を検出するように設計することができる。代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的とするＤＮＡプローブを設計し、異なる条件下で用いると、標的配列とのハイブリダイゼーションに必要な特異性の程度を調節することができる。長さ、ＧＣ含量、可能な自己相補性、および洗浄条件のような、プローブ設計に影響する因子は、この技術分野で既知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８９、を参照のこと、本文献はここに参照として採用する）。また、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、は、ポリペプチドの配列情報を基にした縮重プローブの設計および使用についても考察している。一般的なガイドラインとしては、高いストリンジェンシー条件（５０−６５℃ 、５ＸＳＳＰＣ、５０％ホルムアミドでハイブリダイゼーション、５０−６５℃ 、０．５ＸＳＳＰＣで洗浄）を用いると、相補性が約９０％より大きい領域を持つ核酸配列間のハイブリダイゼーションを得ることができる。低いストリンジェンシー条件（３５−３７℃、５ＸＳＳＰＣ、４０−４５％ホルムアミドでのハイブリダイゼーション、４２℃、２ＸＳＳＰＣでの洗浄）を用いると、その結果、相補性が３５−４５％より大きい領域を持つ配列がプローブにハイブリダイズするであろう。ゲノムＤＮＡ源として、例えば、胎盤または末梢血液の白血球を含む多くの組織または細胞を用いることができる。しかしながら、ＲＮＡに関しては、より好ましい起源は、所望の代謝指向型グルタミン酸レセプター族構成員をより高いレベルで発現する組織または細胞型である。Ｂ．新規の代謝指向型グルタミン酸レセプター核酸誘導体本発明の単離された核酸配列は、また、実質的に有用な修飾された核酸の作成もまた提供する。核酸配列をインビトロまたはインビボで突然変異にさせると、例えば、（１）コード領域内で変異を作りそれによって代謝指向型グルタミン酸レセプター変異体または誘導体を生成するか；（２）新しく制限エンドヌクレアーゼ部位を形成するか、または前から存在するそれを破壊して、さらにインビトロでの修飾を容易にするか；または（３）新しいスプライス部位を形成してｍＧｌｕＲスプライス変異体を作り出す：ことができる。インビトロでの部位特異的突然変異誘発（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５３：６５５１、１９７８；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１５章、上記）のような、突然変異誘発のための標準的な組換え技術、ＴＡＢ^Rリンカー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用、およびＰＣＲ−特異的突然変異誘発を用いて、そのような突然変異を作り出すこともできる。さらに、本発明の核酸配列を、他のレセプターをコードする核酸と遺伝子工学で結合させると、キメラレセプターをコードする核酸を形成させることができる。そのようなキメラレセプターをｋーどする核酸は、例えば、係属出願Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／００１．５２６に記載されており、その全体をここに参照として採用する。好ましいレセプターフラグメントは、レセプターの機能活性、結合部位、抗体の認識にかかわるエピトープ（典型的には、少なくとも６アミノ酸）、および／または代謝指向型グルタミン酸レセプターアゴニストまたはアンタゴニストを結合する部位を持つそれらを含む。その他の好ましいレセプターフラグメントは、細胞外部分、トランスメンブレン部分、細胞内部分、および／または複数のトランスメンブレン部分（例えば、７つのトランスメンブレン部分）のみを持つそれらを含む。そのようなレセプターフラグメントは、特定の領域への抗体を得るために用いられる、および他のレセプターのフラグメントとのキメラレセプターを形成させて、ユニークな性質を持つ新しいレセプターを作り出すために用いられると言ったような、様々な用途を持つ。そのような精製されたレセプターフラグメントおよびキメラレセプターは、例えば、係属出願Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／００１．５２に、記載されており、ここにその全体を参照として採用する。それ故、上記の要約に記載したように、本発明は、全長の代謝指向型グルタミン酸レセプターあるいはフラグメントと同一または実質的に同じ活性を持つ全長の代謝指向型グルタミン酸レセプターの誘導体およびそのフラグメントを特徴とする。そのような誘導体は、誘導レセプターが親レセプターの一つまたはそれより多くの活性の遂行を妨げないような、レセプターへのアミノ酸の付加、置換、および欠損を含む。機能的に均等な代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質は、限定する訳ではないが、そのような誘導体を含む。Ｃ．アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムは、代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする核酸を標的化し、標的化された核酸からの蛋白質発現を阻害することができる。数多くのメカニズムが、アンチセンス核酸の影響を説明するために、提案されている。例えば、Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．およびＴｏｕｌｍｅ，Ｊ．，ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ，１０４９：９９、１９９０、ならびに、Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．，ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ，９０：５４３、１９９０、を参照のこと。提案されたメカニズムは、成熟前転写終止の原因となり、且つｐｒｅ−ｍＲＮＡイントロン／エキソン結合部にハイブリダイズすることによってｍＲＮＡプロセシングを妨害する、未成熟ｍＲＮＡへのアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドによって核酸活性が妨害されるという、これらおよびいくつかの提案されたその他のメカニズムは、アンチセンス核酸が標的核酸配列とハイブリダイズする能力を基にしている。好ましくは、アンチセンス核酸は、長さが１５から３０の塩基である。リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒する能力を持つ酵素に似たＲＮＡ分子である。リボザイムの作用には、相補的標的ＲＮＡへのリボザイムの配列特異的相互作用、それに続いて起こるエンドヌクレアーゼ分解切断（endonucleolyti ccleavage）が含まれる。代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする特定のＲＮＡ配列のエンドヌクレアーゼ分解切断を特異的且つ効果的に触媒するために、ハンマーヘッドのような異なるリボザイム切断モチーフを遺伝子工学で作成することができる。具体的なリボザイム切断部位には、ＧＵＡ、ＧＵＵおよびＧＵＣが含まれる。ひとたび、切断部位が同定されると、切断部位を含む標的ＲＮＡ領域を標的とする１５と２０の間のヌクレオチドからなる短いＲＮＡ配列の予想される構造特徴を評価し、リボザイム適合性を決定することができる。標的候補の適合性は、また、相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションでのそれらの近付きやすさをリボヌクレアーゼ保護アッセイを用いて試験することによって、評価することもできる。Ｄｒａｐｅｒ、ＰＣＴＷＯ９３／２３５６９（ここに参照として採用する）を参照のこと。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムは、ＲＮＡおよびＤＮＡ分子の合成に関するこの技術分野で既知の方法によって、調製することができる。核酸の化学合成に関する標準技術には、固相ホスホルアミダイト化学合成が含まれる。また、特定の核酸は、所望の核酸をコードするプラスミドで形質転換された宿主を用いて酵素的に作り出すこともできる。核酸に様々な修飾を導入して、細胞内安定性および半減期を増加させることもできる。可能な修飾には、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネート結合を用いるようなホスホジエステル骨格の修飾が含まれる。本発明の好まし実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムは、配列番号：１のアミノ酸配列をコードする核酸を標的とする。より好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムは、配列番号：２の核酸フラグメントを標的とする。Ｄ．遺伝子およびオリゴヌクレオチド療法遺伝子およびオリゴヌクレオチド療法には、機能化代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする核酸の使用、および阻害性オリゴヌクレオチドの使用が含まれる。阻害性オリゴヌクレオチドには、アンチセンス核酸およびリボザイムが含まれる。遺伝子およびオリゴヌクレオチド療法は、後に患者に移植される細胞にエキソビボで行われるか、または患者の体内に核酸または核酸−蛋白質複合体を直接投与することによって行うことができる。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムは、覆いのない核酸、核酸組成物（例えば、リボソームによってカプセル化する）によって、およびレトロウイルスベクターによってのように、異なる技術を用いて患者に投与することができる（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３５７，４５５−４６０、ここに参照として採用する）。また、アンチセンス核酸またはリボザイムをコードする核酸を用いて、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムを、細胞内に導入することもできる。遺伝子治療は、レセプターをコードする遺伝子、好ましくは代謝指向型グルタミン酸レセプターを、レセプター蛋白質の発現を可能にする様式で、患者の体内にトランスファーすることによって、成し遂げることができる。レセプター蛋白質配列をコードする組換え核酸分子は、インビボでまたはエキソビボで、細胞内に導入することができる。インビボでのトランスフェクション技術には、リポソームおよびレトロウイルスベクターの使用が含まれる（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３５７，４５５−４６０、ここに参照として採用する）。エキソビボでのトランスフェクションでは、可能なトランスフエクションの技術の数は増加するが、患者体内の細胞の除去および続いて行う挿入によるさらなる合併症が加わる。本発明の好ましい実施態様では、遺伝子治療に用いられる核酸は、配列番号：１、より好ましくは配列番号：２、またはその部分をコードする遺伝子である、および／または、オリゴヌクレオチド治療に用いられるオリゴヌクレオチドは、配列番号：１、より好ましくは配列番号：２をコードする核酸を標的とする。Ｅ．トランスフェクトされた細胞系機能化代謝指向型レセプターを発現する核酸を用いて、特定の代謝指向型グルタミン酸レセプターを機能的に発現するトランスフェクトされた細胞系を作り出すことができる。そのような細胞系は、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節することのできる分子の高いスロープットスクリーニングに用いられ；さらに、代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合するアッセイおよび代謝指向型グルタミン酸レセプターペプチドの生産に用いられる；ように、様々な用途を持つ。様々な細胞系は、内因性の機能応答と外因性発現レセプターをカップリングすることができる。数多くのこのような細胞系（例えば、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＧ１１５、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ7）を試験すると、それらは内因性の代謝指向型グルタミン酸レセプターが欠損けていることが確認できる。外部グルタミン酸への応答を欠くそれらの細胞系を用いると、クローン化された代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現する安定なトランスフェクトされた細胞系を確立することができる。このような安定なトランスフェクタントの作成は、代謝指向型グルタミン酸レセプターｃＤＮＡのコード配列が複数のクローニング部位にクローン化された、ｐＣＥ４のような、真核生物発現ベクターでの適当な細胞系をトランスフェクションすることによって、成し遂げられる。これらの発現ベクターは、様々な哺乳動物細胞内でｃＤＮＡを高レベルで転写する、ヒトのシトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ）のような、プロモーター領域を含む。さらに、これらのベクターには、興味あるｃＤＮＡを安定に発現する細胞選択用遺伝子が含まれる。ｐＣＥＰ４ベクター内の選択可能マーカーは、ヒグロマイシン（非トランスフェクト細胞を死滅させるために培地に加えられた代謝阻害剤）に耐性を授ける酵素をコードする。様々な発現ベクターおよび選択スキームを評価して、高スロープットスクリーニングアッセイに用いるための代謝指向型グルタミン酸レセプター−発現細胞系の生成に最適な条件を決定する。プラスミドＤＮＡでの真核細胞系のトランスフェクションに最も効果的な方法は、与えられた細胞型で変化する。代謝指向型グルタミン酸レセプター発現構築物は、適当な技術（リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション、リポフェクションまたはエレクトロポレーションのいずれか）によって、培養細胞内に導入されるであろう。トランスフェクトされたＤＮＡを安定に取り込んだ細胞は、上記のように、選択培地に対するそれらの耐性によって同定され、クローン細胞系は、耐性コロニーの拡大によって作り出されるであろう。これらの細胞系による代謝指向型グルタミン酸レセプターｃＤＮＡの発現は、溶液ハイブリダイゼーションおよびノーザンブロット分析によって評価されるであろう。レセプター蛋白質の機能的発現は、アデニルシクラーゼ活性の阻害とそれに続く代謝指向型グルタミン酸レセプターアゴニストの外部適用に応答して起こるｃＡＭＰ蓄積の減少を測定することによって；または、代謝指向型グルタミン酸レセプターアゴニストの外部適用に応答して起こる細胞内カルシウムの運動性を測定することによって、定量することができるであろう。本発明の好ましい実施態様では、安定なトランスフェクトされた細胞系を作り出すために用いられる核酸は配列番号：１をコードし、より好ましくは、配列番号：２によって表される核酸、および／または、（１）レセプター変異体をコードする誘導体、（２）キメラレセプターをコードする誘導体、あるいは（３）レセプターフラグメントをコードする誘導体；を含む、様々に修飾されたその誘導体である。Ｆ．トランスジェニック動物トランスジェニック動物および形質転換した細胞を用いると、レセプターの過剰または涸渇状態の細胞機能への影響について研究することができる。実験モデルシステムを用いると、細胞あるいは組織培養内、動物全体内、または動物全体あるいは組織培養システム内の特定の細胞あるいは組織内での影響について研究することもできる。影響を、特定の時間間隔（胚形成期を含む）で研究することができる。トランスジェニック哺乳動物（非人間）は、代謝指向型グルタミン酸レセプターの導入効果を研究する；代謝指向型グルタミン酸レセプター発現を調節する（即ち、さらなる遺伝子、アンチセンス核酸またはリボザイムの導入による）、および、代謝指向型グルタミン酸レセプター上のグルタミン酸の影響を模倣あるいは阻止する分子の影響を研究する：ためのインビボでの試験システムとして、特に有用である。本発明は、代謝指向型グルタミン酸レセプターの生理学的役割を研究する実験モデルシステムを提供する。レセプター発現の程度を変化させるモデルシステムを作り出すことができる。例えば、遺伝子がより高いレベルで発現されるようなレセプターを天然で発現する細胞内に、レセプターをコードする核酸を、挿入することもできる。代わりの方法として、組換え遺伝子を用いて、相同組換えによって、内因性遺伝子を不活性化し、そうすることによって代謝指向型グルタミン酸レセプター欠失細胞、組織または動物を作り出すこともできる。遺伝子の不活性化は、例えば、挿入変異（例えば、ｎｅｏ遺伝予）を含むように組み換えた組換え遺伝子を用いることによって、起こすことができる。組換え遺伝子は、宿主細胞のゲノム、組織または動物内に挿入され、そして、レセプタ一の転写を不活性化する。そのような構築物を、トランスフェクション、トランスダクションおよびインジェクションのような技術によって、胎芽幹細胞のような細胞内に導入することができる。完全にレセプター配列の欠損した幹細胞は、レセプターの欠乏したトランスジェニック動物を作り出すことができる。好ましい試験モデルは、トランスジェニック動物である。トランスジェニック動物は、細胞内に人工的に挿入されたＤＮＡおよび細胞からの動物のゲノム内に挿入されたＤＮＡを含む細胞を持つ。好ましいトランスジェニック動物は、霊長類、マウス、ラット、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌおよびネコである。トランスジェニック動物を生成するために、様々な方法が可能である。例えば、ＤＮＡを、オスおよび雌の前核の融合前に、受精卵の前核内にインジェクトすることができ、または、胎芽細胞の核（例えば、二細胞胎芽期の核）内に導入し、次いで細胞分裂を開始させることもできる（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２，４４３８−４４４２，１９８５）。その他の例としては、胎芽を、代謝指向型グルタミン酸レセプタヌクレオチド配列を持つように修飾した、ウイルス、特にレトロウイルスに感染させることもできる。胎芽の内部細胞集団から誘導され培地内で安定化された多能性幹細胞は、培地内で操作して、本発明のヌクレオチド配列を取り込ませることができる。トランスジェニック動物は、養母内に移植して受け入れられる未分化胎芽細胞内への移植を通して、そのような幹細胞から作り出すことができる。トランスジェニック実験に適当な動物は、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ）、およびＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）のような標準的市販品から得ることができる。胎芽幹（ＥＳ）細胞を培養し、続いてエレクロトポレーション、リン酸カルシウム／ＤＮＡ沈殿および直接インジェクションのような方法を用いて、ＥＳ細胞内にＤＮＡを導入することによってトランスジェニック動物を作り出す方法もまた、当業者らに周知である。例えば、ＴｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓａｎｄＥｍｂｒｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ．ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬＰｒｅｓｓ，１９８７、を参照のこと。胎芽操作法は、この技術分野では良く知られている。げっ歯動物の胎芽の操作法および接合子の前核内へのＤＮＡのミクロインジェクション法は、当業者に周知である（Ｈｏｇａｎら、上記）。魚類、両生類の卵および鳥類へのミクロインジェクション法は、ＨｏｕｄｅｂｉｎｅおよびＣｈｏｕｒｒｏｕｔ，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ，４７，８９７−９０５、１９９１、に詳細に記載されている。動物組織内へＤＮＡを導入するその他の方法は、米国特許第４，９４５，０５０号（Ｓａｎｄｆｏｒｄら、１９９０年７月３０日）に記載されている。所望クローンのトランスフェクションおよび単離は、標準的技術を用いて行うことができる（例えば、Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ、上記）。例えば、ランダムな遺伝子組込みは、抗生物質耐性をコードする遺伝子と核酸をコトランスフェクトすることによって行うことができる。代わりの方法としては、例えば、抗生物質耐性をコードする遺伝子を、代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする核酸配列に物理的に結合させる。ＥＳ細胞内に導入されたＤＮＡ分子もまた、相同組換え法を通して染色体内に組込むことができる（Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４，１２８８− １２９２，１９８９）。組換え結果の陽性選択法（例えば、ネオマイシン耐性）および陽性−陰性選択法（例えば、ネオマイシン耐性およびガングシクロビア耐性）さらにそれに続くＰＣＲによる所望クローンの同定法は、Ｃａｐｃｃｈｉ、上記、およびＪｏｙｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３８，１５３−１５６，１９８９、に記載されており、その教えはここに採用される。方法の最終段階は、標的ＥＳ細胞を胎盤胞内に注射し、擬妊娠の雌に胎盤胞をトランスファーすることである。得られたキメラ動物を育て、子孫をサザンブロッティングによって分析して、トランス遺伝子を持つ個体を同定する。トランスジェニックマウスの調製について記載した例は、以下の通りである。雌のマウスを過剰排卵させ、雄と共にする。交尾した雌はＣＯ₂窒息または頚部脱臼によって屠殺し、胎芽を摘出した卵管から回収する。周辺の卵丘(cumulus) 細胞を取り除く。次いで、前核胎芽を洗浄し、注射時まで保管する。精管切除した雄とつがいになったランダム周期の成熟した雌のマウスは、移植胎芽の宿主として供される。宿主の雌は、ドナーの雌として同時につがわせ、外科手術によって胎芽を宿主の雌にトランスファーする。トランスジェニックラットを作り出す方法は、マウスのそれと類似している。Ｈａｍｍｅｒら、Ｃｅｌｌ，６３，１０９９−１１１２、１９９０、を参照のこと。トランスジェニックしたげっ歯動物以外の哺乳動物およびその他の動物の作成方法は、この技術分野で既知である。例えば、ＨｏｕｄｅｂｉｎｅおよびＣｈｏｕｒｒｏｕｔ、上記；Ｐｕｒｓｅｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４，１２８１− １２８８、１９８９；および、Ｓｉｍｍｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６，１７９−１８３、１９８８、を参照のこと。本発明の好ましい実施態様では、形質転換細胞またはヒト以外のトランスジェニック動物の作成に用いられる核酸は、配列番号：２の核酸またはその部分である。Ｇ．新規の代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質、誘導体およびフラグメント１．代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質組換え代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質は、ヒト組織および細胞型を含む様々な組織および細胞型内で発現させることができる。これらの組換え代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質を、当業者らは、様々な目的のために利用することができる。組換えレセプター蛋白質を、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む代謝指向型グルタミン酸レセプターに対する抗体を作成するための抗原源として用いることもできる。さらに、組換え代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質を、当業者らに既知の方法を用いて薬品開発目的のために用いることもできる。組換えレセプター蛋白質を用いて、代謝指向型グルタミン酸レセプターと結合する分子を（高いスロープットスクリーニングを含む）スクリーニングすること、ならびにアゴニスト、アンタゴニストまたはアロステリックモジュレーターとして作用することによって代謝指向型グルタミン酸レセプターを修飾することのできる分子をスクリーニングすることができる。結局、組換え代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質は、代謝指向型グルタミン酸レセプターと小分子薬剤の相互作用；代謝指向型グルタミン酸レセプターと抗体の相互作用；または、代謝指向型グルタミン酸レセプターとのその他のペプチドおよび蛋白質の相互作用の構造研究に用いることができる。代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質のこれらの用途は制限を意味するものではない。本発明の好ましい実施態様では、組換え代謝指向型レセプター蛋白質は、ヒトの代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質であり、より具体的には、配列番号：１で表されるアミノ酸配列あるいはその配列の生理学的に活性な部分を持つ組換え代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質、または機能性均等物である。２．代謝指向型グルタミン酸レセプター誘導体特定のレセプターの誘導体は、そのレセプターと機能的に均等であり、類似のアミノ酸配列を持ち、ある程度まで関連レセプターの一つまたはそれより多くの活性を保持している。「機能性均等物」（”functional equivalent”）とは、特定のレセプターまたはレセプターフラグメントの一つまたはそれより多くの活性に置換することのできる活性を持つ蛋白質を意味する。好ましい機能性均等物は、特定のレセプターまたはレセプターフラグメントの全ての活性を保持しているが、しかしながら、機能性均等物は、例えば、ここに開示したアッセイのような標準的レセプターアッセイで測定したように、定量的に測定した場合に、関連したレセプターよりより強いまたは弱い活性を持つであろう。好ましい機能性均等物は、関連レセプターの活性の１％から１０．０００％、より好ましくは１０％と１０００％の間、より好ましくは５０％と５００％の間、の活性を持つ。機能性均等物には、例えば、リガンド結合活性を含むレセプター領域内の修飾またはアミノ酸変化を含む、例えば、誘導体を含むであろう。そのようなアミノ酸変化は、レセプターと特定の結合剤との結合活性を増加させるか、または減少させるかのいずれかであろう。また、機能性均等物には、例えば、レセプター活性化への細胞応答を増加または減少させることによって、例えばレセプターの活性を増加または減少させることのできるレセプターの細胞内ドメイン部分内の修飾またはアミノ酸変化を含む、例えば、誘導体が含まれる。誘導体は、関連レセプターと、少なくとも１５％の配列類似性、好ましくは７０％、より好ましくは９０％、さらにより好ましくは、９５％の配列類似性を持つ。「配列類似性」とは、ポリペプチドの起源にかかわらず、２つの異なるポリペプチド内のアミノ酸配列の間に認められる「相同性」をさす。いくらかの活性を保持している誘導体の能力は、ここに記載の枝術を用いて、測定することができる。誘導体は、例えば、リン酸化、グリコシル化、架橋化、アシル化、蛋白質分解切断、抗体分子、膜分子またはその他のリガンドとの結合による、翻訳時または後に起こる修飾を含む。Ｆｅｒｇｕｓｏｎら、１９８８、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５７，２８５−３２０を参照のこと。また、誘導体の具体的な型は、欠失、置換、付加、およびアミノ酸修飾のようなアミノ酸変化を含む。「欠失」とは、関連ポリペプチド内の一つまたはそれより多くのアミノ酸残基の欠如をさす。「付加」とは、関連ポリペプチド内の一つまたはそれより多くのアミノ酸残基の存在をさす。ポリペプチドの付加および欠失は、アミノ末端、カルボキシ末端および/または内部で起こりうる。アミノ酸「修飾」とは、天然発生アミノ酸が変化し、天然では発生しないアミノ酸が生成されることをさす。「置換」とは、もう一つのアミノ酸残基によってポリペプチド内の一つまたはそれより多くのアミノ酸残基が置き換えられることをさす。誘導体は、一つより多くの変化および異なる型の変化を含む異なる組み合わせの変化を含むこともできる。アミノ酸の変換の影響は、リン酸化、グリコシル化、鎖内結合、三次構造、および活性部位または可能なアロステリック部位内のアミノ酸の役割のような因子に依存して変化するが、一般的には、置換されるアミノ酸は、置き換えられるアミノ酸と同一グループからであることが好ましい。ある程度まで、交換可能なアミノ酸には、以下のグループ：塩基性アミノ酸であるリジン、アルギニンおよびヒスチジン；酸性アミノ酸であるアスパラギン酸およびグルタミン酸；中性の極性アミノ酸であるセリン、スレオニン、システイン、グルタミン、アスパラギン、およびより少ない範囲ではメチオニン；非極性脂肪族アミノ酸であるグリシン、アラニン、バリン、イソロイシンおよびロイシン（しかしながら、大きさゆえに、グリシンとアラニンは、より密接な関係にあり、さらにバリン、イソロイシンおよびロイシンもより密接に関係している）；および芳香族アミノ酸であるフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン：が含まれる。さらに、異なる範疇に分類されるが、アラニン、グリシンおよびセリンもある程度まで交換可能であるを考えられ、そしてシステインもさらにこのグループに適合するか、あるいは極性中性アミノ酸に分類することができる。プロリンは、非極性の中性アミノ酸であるが、その置換は、そのコンフォメーションの影響ゆえに、困難さを示している。それ故、プロリンの代用または置換は、同一または類似のコンフォーメーション結果が得られる場合を除いて、好ましくない。プロリン残基の性質を授けるコンフォメーションは、これらの一つまたはそれより多くがヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）で置換されるならば、得ることができる。修飾されたアミノ酸の例には、以下の物:式Ｈ₂Ｎ（ＣＨ₂）_nＣＯＯＨ（式中、ｎは２−６である）のアミノ酸、サルコシン（Ｓａｒ）、ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡｌａ）、ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧｌｙ）、Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ−Ｍｅｌｌｅ）およびノルロイシン（Ｎｌｅｕ）のような変化した中性の非極性アミノ酸；フェニルグリシン、のような変化した中性芳香族アミノ酸；シトルリン（ｃｉｔ）およびメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）のような変化した極性であるが中性のアミノ酸；シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）のような変化した中性の非極性アミノ酸；システイン酸（Ｃｙｓ）のような変化した酸性アミノ酸；およびオルニチン（Ｏｒｎ）のような変化した塩基性アミノ酸：が含まれる。好ましい誘導体は、関連レセプター蛋白質のレセプター活性に有意に影響を与えない一つまたはそれより多くのアミノ酸変化を持つ。代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質の内レセプター活性に必須でない領域では、アミノ酸は、活性に影響する危険性が少なく、欠失、付加または置換することができる。レセプター活性に必要な領域では、アミノ酸の変換は、レセプター活性に影響する危険が大きいので、あまり好ましくない。そのような変換は、保守的変換であるべきである。例えば、配列内での一つまたはそれより多くのアミノ酸残基は、機能性均等物として作用する類似の極性のもう一つのアミノ酸によって置換することができる。保存領域は、非保存領域より蛋白質活性により重要である傾向にある。標準的方法は、インビトロでの突然変異技術または欠失分析を用いて本開示に記載の方法に従ってレセプター活性を測定すると、レセプター活性に重要な保存および非保存領域を決定するために用いることができる。誘導体は、標準的化学技術および組換え核酸技術を用いて作成することができる。部位特異的突然変異誘発および固相合成中のアミノ酸置換のように、特定のポリペプチドの修飾をあらかじめ考えることができ、また、ポリペプチドを生成する宿主の突然変異を通してのように偶然であることもある。誘導体を含むポリペプチドは、セクションＩ．Ｇ．２、上記、およびＳａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣ１ｏｎｉｎｇ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８９、に記載されたそれのような、標準的技術を用いて得ることができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋの第１５章は、クローン化ＤＮＡの部位特異的突然変異誘発法について、記載している。本発明の好ましい実施態様では、修飾されるポリペプチドは、ヒトの代謝指向型グルタミン酸レセプターのそれであり、より具体的には、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を持つポリペプチドである。３．代謝指向型グルタミン酸レセプターフラグメントレセプターフラグメントは、代謝指向型グルタミン酸レセプターの部分である。レセプターフラグメントは、好ましくは、全長のレセプターと結合する一つまたはそれより多くの結合剤と結合する。結合剤には、レセプターと結合する、グルタミン酸、キスカレート、アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリックモジュレーター、および抗体、のようなリガンドが含まれる。フラグメントは、レセプターと結合する能力を持つその他の分子を選択すると言ったような、異なる用途を持つ。フラグメントは、レセプターＤＮＡのクローン化された部分配列の発現、およびレセプター蛋白質の蛋白質分解切断と言ったような、標準的技術を用いて作り出すことができる。蛋白質は、トリプシン、キモトリプシンまたはペプシンと言ったような、蛋白質分解酵素によって特異的に切断される。これらの酵素は、それぞれ、攻撃するペプチド結合の型に特異的である。トリプシンは、カルボニル基が塩基性アミノ酸（通常、アルギニンまたはリジン）であるペプチド結合の加水分解を触媒する。ペプシンおよびキモトリプシンは、芳香族アミノ酸、特にトリプトファン、チロシンおよびフェニルアラニンからのペプチド結合の加水分解を触媒する。分解された蛋白質フラグメントのその他のセットは、蛋白質分解酵素を受けやすい部位の切断を妨げることによって作成される。例えば、穏和な塩基性溶液中でのエチルトリフルオロチオアセテートとリジンのε−アミノ基を反応させると、隣接するペプチド結合がもはやトリプシンによって加水分解を受けないようなブロックされたアミノ酸残基が得られる（Ｇｏｌｄｂｅｒｇｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１，４０１、１９６２）。そのようにトリプシンでポリペプチドを処理すると、その結果、アルギニル残基のみが切断される。また、ポリペプチドを修飾して、蛋白質分解酵素−触媒加水分解を受けやすいペプチド結合を作り出すこともできる。例えば、β−ハロエチルアミンでシステイン残基をアルキル化すると、トリプシンで加水分解されるペプチド結合が得られる（Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ，１７８，６４７、１９５６）。さらに、特異的な残基でポリペプチド鎖を切断する化学試薬を用いることもできる（Ｗｉｔｃｏｐ，Ａｄｖ．ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅｍ．，１６，２２１、１９６１）。例えば、臭化シアンは、メチオニン残基でポリペプチドを切断する（Ｇｒｏｓｓ＆Ｗｉｔｋｉｐ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８３、１５１０、１９６１）。このように、代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはそのフラグメントを、修飾因子、蛋白質分解酵素および／または化学試薬の様々な組み合わせで処理することによって、大きさの異なる数多くの別個のオーバーラップするペプチドが作り出される。これらのペプチドフラグメントは、クロマトグラフィー法によってそのような消化物から単離し精製することができる。代わりの方法として、適当な固相合成法を用いて、フラグメントを合成することもできる。所望の生理活性を持つフラグメントを選択することもできる。例えば、フラグメントは、ちようどリガンド結合部位を含むことができる。当業者らは、フラグメントとの特異的結合を検出する日常的方法を用いて、そのようなフラグメントを容易に同定する。例えば、代謝指向型グルタミン酸レセプターの場合、レセプターフラグメントをコードする核酸を発現させ、次いで適当な連合条件下でレセプターリガンドと接触するポリペプチドフラグメントを作り出し、リガンドがフラグメントと結合するか否かを決定することができる。そのようなフラグメントは、グルタミン酸のアゴニストおよびアンタゴニストのスクリーニングアッセイに有用である。その他の有用なフラグメントには、レセプターの細胞外部分、膜貫通部分、または細胞内部分のみを持つフラグメントが含まれる。これらの部分は、レセプターのアミノ酸配列を既知のレセプターのアミノ酸配列と比較することによって、またはその他の標準的方法論によって、容易に同定される。これらのフラグメントは、その細胞内で所望の機能を達成する細胞内部分、およびその細胞がグルタミン酸またはここに記載したそれらのアゴニストあるいはアンタゴニストの存在に応答する原因となる細胞外部分、を持つレセプターを作り出す、他のレセプターのフラグメントとのキメラレセプターの形成に有用である。例えば、細胞内ドメインが、比色、放射線測定、発光測定、分光測定または蛍光測定アッセイによって容易に検出できる、所望の酵素プロセスと結びつき、そしてその天然のリガンド（例えば、グルタミン酸）または本発明のアゴニストおよび／またはアンタゴニストと細胞外部分との相互作用によって活性化されるような、キメラレセプターを構築することができる。そのようなキメラレセプターを発現する細胞を用いると、代謝指向型グルタミン酸レセプタアゴニストおよびアンタゴニストのスクリーニングを容易にすることができる。本発明の好ましい実施態様では、ポリペプチドフラグメントは、ヒトの代謝指向型グルタミン酸レセプターであり、より具体的には、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を持つポリペプチドのフラグメントである。Ｈ．代謝指向型グルタミン酸レセプターに対する抗体代謝指向型グルタミン酸レセプター、誘導体および抗原決定基を保持しているそのフラグメントを用いて、代謝指向型グルタミン酸レセプターを認識する抗体を作り出すことができる。代謝指向型グルタミン酸レセプターを認識するポリクローナル抗体は、単離された代謝指向型グルタミン酸レセプターポリペプチドを用いてウサギまたはその他の動物を免疫化することによって得られる。免疫化に用いられたポリペプチドは、レセプターポリペプチド全体またはそのフラグメントを含むことができる。代わりに、単離された代謝指向型グルタミン酸レセプターポリペプチドで適当なマウス株を免疫化することによって、代謝指向型グルタミン酸レセプターを認識するモノクローナル抗体を得ることもできる。ここでも、免疫化に用いられたポリペプチドは、レセプターポリペプチド全体またはそのフラグメントを含むが、また、代謝指向型グルタミン酸レセプターポリペプチドを発現する細胞全体を用いることもできる。抗体生成に用いられた代謝指向型グルタミン酸レセプターポリペプチドは、えり抜きの代謝指向型グルタミン酸レセプターを正常に発現する組織または細胞から、またはそのようなポリペプチドの組み換え体を発現する目的で構築された細胞から、単離するか、または、慣用の固相化学法によって合成することができる。これらのポリペプチドに対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体は、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８、に記載の方法のような、当業者に既知の標準的技術を用いて、作り出すことができる。ポリクローナル抗体は、例えば、ｍＧｌｕＲ１を認識するポリクローナル抗体について記載している、Ｓｈｉｇｅｍｏｔｏら、Ｎａｔｕｒｅ，１２，１２４５−１２５５、１９９４（ここに参照として採用する）に記載の方法に従って作り出すことができる。ｍＧｌｕＲｓを認識するモノクローナル抗体を、当業者らは容易に作り出すことができる。ハイブリドーマによってモノクローナル抗体を作る一般的方法論は、今ではこの技術分野で良く知られている。例えば、Ｍ．Ｓｈｒｅｉｅｒら、ＨｙｂｒｉｄｏｍａＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ.ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８０；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＴ−ｃｅｌｌＨｙｂｒｉｄｏｍａｓ，ＥｌｓｅｖｉｅｒＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＰｒｅｓｓ、１９８１；Ｋｅｎｎｅｔｔら、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ、１９８０（ここに参照として採用する）を参照のこと。また、オンコジーンＤＮＡまたはＥＢＶでのＢ −リンパ球を直接形質転換すると言ったような、融合以外の技術によって、不滅の抗体分泌細胞系を作り出すこともできる。所望であれば、いくつかの抗原源を用いて、後に不死細胞系に変換される正常なＢ−リンパ球集団と免疫反応させることもできる。本発明の好まし実施態様では、抗体作成に用いられたポリペプチドは、ヒトの代謝指向型グルタミン酸レセプターからの物であって、より具体的には、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を持つポリペプチドまたはそのフラグメントである。Ｉ．毒素と抱合させたｍＧｌｕＲ結合剤さらに、本発明は、組換え融合蛋白質のような毒素部分と抱合させるか、または一緒に発現することのできる、抗体および／またはそのフラグメントを含むレセプター結合薬剤を提供する。毒素部分は、結合剤と関連する標的細胞の表面レセプターとの相互作用を用いて、標的細胞に結合し侵入であろう。毒素部分は、結果として標的化された細胞に死をもたらす。従って、癌のような病気または疾病に特有な代謝指向型グルタミン酸レセプターを持つ細胞を、本発明は標的とすることができる。結合剤と結合する適当な毒素部分には、アメリカやまごぼうの抗ウイルス蛋白質、アブリン、ジフテリア外毒素、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素；のような蛋白質；レシンおよびコバルト−５０のような高エネルギーを放射する放射核種が、含まれる。毒素部分として可能なその他の例は、この技術分野で知られている。例えば、”ＣｏｎｊｕｇａｔｅＶａｃｃｉｎｅｓ”、ＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｔｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅおよびＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．編、ＣａｒｇｅｒＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ、１９８９、を参照のこと。選択された毒素部分は、薬学的に許容されるものでなければならない。もう一つの部分（例えば、細菌毒素）への結合剤の抱合は、両分子がそれらのそれぞれの活性を保持している限りにおいて、標準的技術を用いて、２つの分子を結合することによって成し遂げることができる。可能な結合は、異なる化学的機構、例えば、共有結合、アフィニティー結合、インターカレーション、配位結合および複合体化によって、得ることができる。好ましくは、共有結合が用いられる。共有結合は、存在する側鎖の直接縮合によってか、または外部架橋分子の取り込みによってかのいずれかで達成することができる。数多くの二価または多価の結合剤は、抗体のような蛋白質分子とその他の分子との結合（カップリング）に有用である。典型的カップリング剤には、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミンのような有機化合物が含まれる。ＫｉｌｌｅｎおよびＬｉｎｄｓｔｒｏｍ、１９８４、「毒素−アセチルコリンレセプター複合による実験的自己免疫重症筋無力症の原因となるリンパ球の特異的殺傷」("Specific killing of lymphocytes that cause experimen tal autoimmune myasthenia gravis by toxin-acetylcholine receptor conjuga tes.")、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３，１３３５−２５４９；Ｊａｎｓｅｎら、１９８２、「免疫毒素：特異性が高く且つ強力な細胞毒性を合わせ持つハイブリッド分子("immunotoxins:Hybrid molecules combining high specificity and potent cytotoxicity")、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖ．，６２，１８５−２１６、および、Ｖｉｔｅｔｔａら、上記を参照のこと。Ｊ．新規の代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的化する化合物化学文献に記載されたｍＧｌｕＲアゴニストおよびアンタゴニスト化合物は、内因性アゴニスト、グルタミン酸と関係する。レビューとして、Ｃｏｃｋｃｒｏｆｉｔら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．，２３，５８３−５９４、１９９３；ＳｃｈｏｅｐｐおよびＣｏｎｎ，ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１４，１３−２０、１９９３；ＨｏｌｌｍａｎｎおよびＨｅｉｎｅｍａｎｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１７，３１−１０８、１９９４；ＷａｔｋｉｎｓおよびＣｏｌｌｉｎｒｉｄｇｅ，ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１５，３３３、１９９４；Ｋｎｏｐｆｅｌら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３８：１４１７、１９９５：を参照のこと。そのようなアゴニストおよびアンタゴニスト化合物は酸性部分、通常はカルボン酸を持つが、時としてリン酸を持つこともある。おそらく、その後、そのような化合物は、アミノ酸（グルタミン酸）として、同一部位でｍＧｌｕＲと結合する。このことは、グルタミン酸の競合アゴニストであることが示された、メチルカルボキシフェニルグリシンで確認される（Ｅａｔｏｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，−Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｅｃｔ．，２４４，１９５−１９７、１９９３）。これらの化合物は、大部分に於いて、アミノ酸またはアミノ酸誘導体であるので、それらは、ｍＧｌｕＲの生理学、薬理学および治療の可能性を評価するインビボでの研究を妨げる生物入手可能性を制限する。さらに、現在入手できるｍＧｌｕＲアゴニストおよびアンタゴニストは、それらの可能性および選択性が欠如している結果として、研究道具として、および可能な治療薬としての両方で、使用が制限される。個々のｍＧｌｕＲのサブタイプに程度の高い可能性および選択性を持つアゴニストおよびアンタゴニストの同定は、それ故、哺乳動物ＣＮＳ内の生理的および病理生理学的プロセスでの様々なｍＧｌｕＲの役割の理解を増加させるための、最も重要な必要条件である。本発明の新規のｍＧｌｕＲをコードする核酸の単離は、トランスフェクトされた細胞系内でのレセプターの発現を可能にし、そして、これらの細胞は、新規のｍＧｌｕＲと結合し、その活性を修飾する能力を持つ新規の化合物を選択するために、用いられることができる。これらの化合物は、グルタミン酸として同一部位に結合することができるか、または、代わりにｍＧｌｕＲ蛋白質上の新規の結合部位で結合することができた。そのようなスクリーニングは、新規のｍＧｌｕＲに関して改良された選択性および選択性を持つ化合物を同定することができる。また、これらの化合物は、生物的入手可能性が改良されると言ったようなその他の有益な特徴を持つことができる。そのような化合物は、新規のｍＧｌｕＲの生理学的および病理生理学的役割を推論するための研究道具を改良すると言ったような有用性、および可能性のある治療剤としての有用性を持つであろう。新規の代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的とする化合物は、治療用途および診断用途を含む様々な用途を持つことができる。ｍＧｌｕＲと結合しそれらの活性を修飾することのできる化合物の合成は、Ｎｅｍｅｔｈら、「カルシウムレセプター活性分子」("Calcium Receptor Active Molecules")と称する、国際特許出願ＷＯ９３／０４３７３、およびＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／４８５，０３８、１９９５年６月７日出願、に記載されており、ここに参照としてその全体を取り入れる。可能性のあるｍＧｌｕＲ活性化合物は、これらの化合物に制限されるわけではない。代謝指向型グルタミン酸レセプターと結合するそれらの化合物および代謝指向型レセプターグルタミン酸活性の修飾に有効なそれらの化合物は、ここに記載の方法を用いて、同定することができる。代謝指向型グルタミン酸レセプターと選択的に結合することのできるそれらの化合物は、治療用に、または代わりに、その他のグルタミン酸レセプターに対する代謝指向型グルタミン酸レセプターウイルスの存在を定量するために、診断用として用いることができる。Ｋ．代謝指向型グルタミン酸レセプター活性の修飾代謝指向型グルタミン酸レセプター活性の修飾を用いて、抗けいれん薬効果、神経防護薬効果、鎮痛薬効果、認識−増強効果、および筋肉−弛緩効果のような、異なる効果を作り出すことができる。これらの効果はそれぞれ治療適用できる。治療に用いられた化合物は、治療上有効な投与量で、その副作用は最少であるべきである。代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を修飾することは、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性化時に起こる細胞応答を増加または減少させる原因となる。代謝指向型グルタミン酸レセプター活性化への細胞応答は、活性化された代謝指向型グルタミン酸レセプターの型に依存して変わる。一般的には、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性化は、一つまたはそれより多くの以下の活性：（１）ホスホリパーゼＣの活性化、（２）ホスホイノシチド（ＰＩ）加水分解の増加、（３）細胞内カルシウム放出、（４）ホスホリパーゼＤの活性化、（５）アデニルシクラーゼの活性化または阻害、（６）サイクリックアデノシンモノホスフェート（ｃＡＭＰ）の形成の増加または減少、（７）グアニリルシクラーゼの活性化、（８）サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）の形成の増加、（９）ホスホリパーゼＡ２の活性化、（１０）アラキドン酸放出の増加、（１１）イオンチャンネル、例えば、電圧−およびリガンド−ゲートイオンチャンネル、の活性の増加または減少：の原因となる。代謝指向型グルタミン酸レセプター活性化の阻害は、一つまたはそれより多くのこれらの活性を阻害する。特定の代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性化とは、例えば、（１）ホスホリパーゼＣの活性化、（２）ホスホイノシチド（ＰＩ）加水分解の増加、（３）細胞内カルシウム放出、（４）アデニリルシクラーゼの活性化、（５）サイクリックアデノシンモノホスフェート（ｃＡＭＰ）の形成の増加、（６）ホスホリパーゼＡ₂の活性化、（７）アラキドン酸放出の増加、（８）イオンチャンネル活性の増加または減少；を活性化するレセプターの型と関連する一つまたはそれより多くの活性が作り出されることをさす。代謝指向型グルタミン酸活性を調節する化合物の能力は、一つまたはそれより多くの代謝指向型グルタミン酸の活性を測定する電気生理学的および生物化学的アッセイを用いてモニターすることができる。そのようなアッセイの例としては、クローン化された代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現するアメリカツメガエルの卵母細胞内での代謝指向型グルタミン酸レセプター機能の電気生理学的評価、クローン化された代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現するトランスフェクトされた細胞系（例えば、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３等）内での代謝指向型グルタミン酸レセプター機能の電気生理学的評価、クローン化された代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現するトランスフェクトされた細胞系内のＰＩ加水分解およびｃＡＭＰ蓄積の生物化学的評価、ラットの脳（例えば、海馬、皮質、線条体、等）薄片、内のＰＩ加水分解およびｃＡＭＰ蓄積の生物化学的評価、ならびに培養されたラット小脳の顆粒細胞内のサイトゾルＣａ²⁺の蛍光測定、ならびに、クローン化された代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現するトランスフェクトされた細胞内のサイトゾルＣａ²⁺の蛍光測定、が含まれる。ヒトでの治療に用いる前に、化合物を動物モデルを用いてインビボで試験することが好ましい。異なる病気または疾病を治療するか、または、鎮痛効果、認識 −増強効果、あるいは筋肉−弛緩効果、のような効果を発揮する、化合物の効果を評価するための動物の研究は、標準的技術を用いて実施することができる。Ｌ．神経学的病気(neurological diseases)および疾病ならびにその他の健康状態の治療代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節することによって治療することのできる病気または疾病には、以下の型：（１）異常な代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を特徴とする型；（２）生成が代謝指向型グルタミン酸レセプター活性によって影響を受ける異常量の細胞外または細胞内メッセンジャーによって特徴づけられる型；（３）それ自身代謝指向型グルタミン酸レセプター活性によって改善することのできる細胞内または細胞外メッセンジャーへの異常な影響（例えば、種類または大きさへの異なる影響）を特徴とする型；および（４）代謝指向型グルタミン酸レセプター活性の調節が有益な効果を発揮するであろうその他の病気および疾病、例えば、レセプター活性によって剌激された細胞内または細胞外メッセンジャーの生成が、異常量の別のメッセンジャーを償うような病気または疾病：の一つまたはそれより多くが含まれる。その分泌および／または効果が代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節することによって影響を受ける細胞外メッセンジャーの例として、無機イオン、ホルモン、神経伝達物質、成長因子、およびケモキンが含まれる。細胞内メッセンジャーの例としては、細胞内カルシウム、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、ＩＰ₃、およびジアシルグリセロールが含まれる。化合物および方法を、また、鎮痛薬効果、認識−増強効果および筋肉弛緩効果のような、その他の効果を作り出すために用いることもできる。本発明の化合物および方法の好ましい用途は、神経学的病気および疾病の治療の内にある。神経学的病気または疾病を患っている患者は、標準的臨床方法論によって診断することができる。神経学的病気または疾病には、神経変性疾病、グルタミン酸毒性刺激性、全身性および病巣性の虚血性および出血性発作、頭部損傷、脊髄損傷、低酸素誘導神経細胞損傷、ならびにてんかんが含まれる。これらの異なる病気または疾病を、さらに医学的に特徴付けることもできる。例えば、神経変性疾病には、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病が含まれる。本発明のもう一つの好ましい用途は、鎮痛薬効果、認識−増強効果、または筋肉−弛緩効果のような、その他の医療効果を作り出すことにある。本発明は、好ましくは、それらの治療の必要な患者に、一つまたはそれより多くのこれらの効果を作り出すために用いられる。そのような治療の必要な患者は、標準的医療技術によって同定することができる。例えば、以下のもの：先制の手術前沈痛；真性糖尿病および多発性硬化症のような末梢神経障害；幻想肢痛；カウザルギー；帯状庖疹で起こる神経痛；脊髄損傷で認められるような中枢痛；痛覚過敏；ならびに異痛症：を含む急性および慢性の痛みの臨床状態に苦しむ患者を治療するために用いることができる。Ｍ．インビトロ診断本発明の異なった分子は代謝指向型グルタミン酸レセプター関連疾患の診断を容易にすることに使用できる。診断はインビトロまたはインビボで実施できる。例えば、本発明の分子は代謝指向型グルタミン酸レセプターの欠陥をアッセイするために使用できる。核酸プローブは遺伝子レベルで起こっている代謝指向型グルタミン酸レセプターの欠陥を同定するために使用できる。例えば、レセプターをコードしている核酸に相補的なハイブリダイゼーションプローブはレセプターをクローン化するために使用できる。クローン化レセプターは卵母細胞のような細胞に挿入でき、ｍＧｌｕＲリガンドへのその応答性が決定される。欠陥を検出するハイブリダイゼーションアッセイプローブの別の例としては、特定の疾患に付随するｍＲＮＡまたは核酸配列の存在を検出するプローブの使用が含まれる。減少したｍＲＮＡレベルは発現されたレセプターの量の減少と一致するであろう。代謝指向型グルタミン酸レセプター抗原を認識できる抗体およびその断片はレセプター数、完全性、構造の決定を補助するために、および体内において代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現している細胞を局在化するのに使用できる。例えば、代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的とする抗体は細胞上のレセプター数を決定するために使用できる；正常レセプターから欠陥のあるものを区別できる抗体は欠陥レセプターの存在を決定するために使用できる；代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的とする抗体は、疾患または手術過程により代謝指向型グルタミン酸レセプターを発現している正常または異常細胞の広がりが生じたかどうかを決定するために使用できる；および代謝指向型グルタミン酸レセプターを標的とする抗体は続いての処置に関して異常な代謝指向型グルタミン酸レセプター数または構造を持っている細胞を局在化するのに使用できる。Ｎ．処方および投与本発明により説明されている異なった分子は、代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節することにより異なった疾患または障害を処置するために使用できる。本発明の分子は全身および局所または局在化した投与を含む種々の様式の投与のために処方できる。技術および処方は一般的にはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにみることができる。本出願の化合物の患者への至適な処方および投与様式は、特定の疾患または障害、望まれる効果および患者の型などのような本分野では既知の因子に依存している。本化合物は典型的にはヒト患者を処置するために使用されるであろうが、他の霊長類のような別の脊椎動物、ブタ、ウシおよび飼鳥類のような農場動物、およびウマ、イヌおよびヌコのようなスポーツ用動物およびペットにおける類似のまたは同一の疾患を処置するために使用してもよい。好適には、治療的に有効量が医薬組成物として提供される。医薬用薬剤または組成物とはヒトのような多細胞生物体へ投与するのに適した形の薬剤または組成物を意味している。適した形とは、ある程度、利用法または入り込むルート（例えば、経口、経皮または注射により）に依存している。そのような形は、標的細胞が多細胞宿主に存在するにせよ、それとも培養液に存在するにせよ薬剤または組成物が標的細胞に到達することを可能にしなければならない。例えば、血流中に注射された医薬用薬剤または組成物は可溶性でなければならない。他の因子が本分野で知られており、毒性および薬剤または組成物の効果を働かせることを妨げる形についての考慮が含まれる。特許請求された組成物は医薬として受容可能な塩（例えば、酸付加塩）および／またはその複合体としても処方できる。医薬として受容可能な塩とはそれが投与される濃度では無毒な塩である。そのような塩の製造により、化合物の生理学的効果を働かせることを妨げることなく化合物の物理学的−化学的特性を変化させることにより薬学的使用を容易にできる。物理的特性の有用な変化の例としては、経粘膜投与を容易にする融点の低下、および薬剤のより高濃度投与を容易にする溶解性の増加が含まれる。医薬として受容可能な塩には硫酸塩、塩酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩およびキナ酸塩を含むもののような酸付加塩が含まれる（例えば、上記ＰＣＴ／ＵＳ９２／０３７３６を参照されたい）。医薬として受容可能な塩は硫酸、塩酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸およびキナ酸のような酸から得ることができる。医薬として受容可能な塩は標準的技術により製造できる。例えば、化合物の遊離塩基形を適当な酸を含んでいる水性または水性−アルコール性溶液のような適した溶媒に溶解させ、続いて溶液を蒸発させることにより単離する。別の例では、有機溶媒中で遊離塩基と酸を反応させることにより塩が合成される。担体または賦形剤も本化合物の投与を容易にするために使用できる。担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、ラクトース、グルコースまたはスクロースのような種々の糖、またはデンプンの種々の型、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコールおよび生理学的に一致する溶剤が含まれる。組成物または医薬組成物は、静脈内、腹腔内、皮下および筋肉内、経口、局所または経粘膜を含む異なった経路により投与できる。本発明の化合物は全身および局所または局在化した投与を含む種々の様式の投与のために処方できる。技術および処方は一般的にはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにみることができる。全身的投与には経口投与が好適である。経口投与のためには、化合物はカプセル、錠剤およびトニックのような通常の経口剤形に処方される。もしくは、注射が使用されるであろう、例えば、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮下、髄腔内または脳室内。注射のためには、本発明の化合物は液体溶液に処方される（好適には、ハンクス溶液またはリンガー溶液のような生理学的に一致した緩衝液）。もしくは、本発明の化合物はＵＳＰ基準により定義されているように安全と一般に受け入れられている一つまたはそれ以上の賦形剤（例えば、プロピレングリコール）に処方される。さらに、本化合物は固形剤に処方され、使用直前に再溶解または懸濁される。凍結乾燥形もまた含まれる。全身投与は経粘膜または経皮的手段でも行え、または分子は経口的にも投与できる。経粘膜または経皮投与には、浸透されるべき障壁に適切な浸透剤が処方に使用される。そのような浸透剤は本分野では一般的に知られており、例えば、経粘膜投与のための胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が含まれる。さらに、浸透を容易にするために界面活性剤を使用してもよい。経粘膜投与は、例えば、鼻内噴霧または座剤を使用するものであろう。経口投与には、本分子はカプセル、錠剤および液剤のような通常の経口投与剤形に処方される。局所投与には、本発明の化合物は本分野で一般的に知られているような軟膏剤、膏薬、ゲル剤またはクリーム剤内へ処方される。本明細書で提供された実施例で示されるように、投与されるべき本発明の種々の化合物の量は常法により決定できる。一般的に、治療的に有効な量はそのＥＣ₅₀ またはＩＣ₅₀、および患者の年齢および大きさおよび患者の疾患または障害に依存して、分子の約１ナノモルから３マイクロモルの間、好適には約０．１ナノモルから１マイクロモルの間である。一般に、処置される動物のｋｇ当たり約０．１から５０ｍｇ、好適には０．０１から２０ｍｇの量である。以下の実施例は本発明を例示しているが、その範囲を制限しているわけではない。II ．実施例本発明の異なった特色および態様を例示するために以下に実施例が提供される。これらの実施例は幾分も開示された発明を制限することを意図されてはいない。むしろ、実施例は本発明の新規ｍＧｌｕＲが単離され、真核生物系で発現され、および機能上の活性が評価されるであろう方法論を例示している。実施例はまた新規ｍＧｌｕＲへ結合するまたはその活性を調節するものを同定するために化合物がスクリーニングされるであろう方法論も例示している。実施例１：縮重プライマーＰＣＲの使用による無機イオンレセプターおよび代謝指向型グルタミン酸レセプターのクローニングウシおよびヒト副甲状腺からのおよびラット腎臓および脳からのカルシウムレセプターがクローン化されている（Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６６：５７５，１９９３；Ｇａｒｒｅｔｔｅｔａｌ.，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１２９１９，１９９５；Ｒｉｃｃａｒｄｉｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：１３１，１９９５，Ｒｕａ t ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：３１６１，１９９５）。配列データベース比較によるカルシウムレセプター配列の分析（ウシ、ヒトおよびラット）から、カルシウムレセプター配列は独特であるが、代謝指向型グルタミン酸レセプター（ｍＧｌｕＲ）と弱いけれども有意な相同性（２０−３０％のアミノ酸同一性）が存在することが示された。この結果はカルシウムレセプターはｍＧｌｕＲと構造的に関連しており、多分共通の祖先遺伝子から進化したことを示している。この構造的相関にも関わらず、カルシウムレセプターはｍＧｌｕＲ、およびウシ副甲状腺細胞またはアフリカツメガエル卵母細胞異所性発現カルシウムレセプターとの実験で薬理学的に異なっており、ｍＧｌｕＲアゴニストであるグルタミン酸、トランスＡＣＰＤおよびキスカル酸への応答は観察されなかった。カルシウムレセプター配列の発見は、カルシウムレセプターおよびｍＧｌｕＲ間の高い配列保存領域の決定を可能にした。そのような領域は、レセプターのこの拡張されたファミリーの別のメンバーをコードしているｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ配列を検出および単離するのに使用可能できたハイブリダイゼーションおよびＰＣＲプローブの製造を先導するのに有用であった。カルシウムレセプターおよびｍＧｌｕＲのアミノ酸配列の分析は、推定のＮ− 末端細胞外ドメインの一部、推定の７つの膜貫通ドメイン領域および推定の細胞内ループ１および３を含むいくつかの限られた領域において配列相同性が最も高かったことを示した。膜貫通ドメイン２および５、および細胞内ループドメイン１および３に基づいて、ＰＣＲに使用するための４つの縮重オリゴヌクレオチドが合成された。これらのオリゴヌクレオチドは増幅生成物のサブクローニングを容易にするために、５’末端内にＸｈｏｌまたはＥｃｏＲＩ制限部位を含んでいた。これらは：ＴＭ２：ＣＣＴＧＣＴＣＧＡＧＡＣＩＡ（Ａ，Ｇ）（Ｃ，Ｔ）ＣＧＧＧＡ（Ａ，Ｇ）ＣＴ（Ｃ，Ｔ）Ｔ（Ｃ，Ｇ）ＣＴＡ（Ｃ，Ｔ）（Ｃ，Ａ）Ｔ；ＴＭ５：ＣＧＧＡＡＴＴＣＣＧＴＴＩＣＧＧＧ（Ａ，Ｔ）（Ｃ，Ｔ）ＴＴＧＡＡ（Ｃ，Ｇ）ＧＣ（Ａ，Ｇ）（Ａ，Ｔ）Ａ（Ｇ，Ｃ）；ＣＬ１：ＣＣＴＧＣＴＣＧＡＧＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＧ（Ａ，Ｇ）（Ａ，Ｇ）Ｉ（Ｃ，Ａ）Ｇ（Ｇ，Ａ，Ｃ，Ｔ）ＧＡ（Ｇ，Ａ）（Ｃ，Ｔ）Ｔ；およびＣＬ３：ＣＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＴＴＧＧＣＴＴＣＧＴＴＧＡＡＩ（Ｔ，Ｇ）Ｔ（Ａ，Ｇ，Ｃ，Ｔ）（Ｇ，Ｔ）Ｃ（Ｇ，Ａ，Ｔ，Ｃ）ＣＧであった。新規イオンレセプターおよび代謝指向型グルタミン酸レセプタークローンを得る試みにおいて、４つの異なったプライマーの組み合わせが使用された：ＴＭ２＋ＴＭ５、ＴＭ２＋ＣＬ３、ＣＬ１＋ＴＭ５およびＣＬ１＋ＣＬ３。ＰＣＲ反応は３７℃から５５℃の間のアニーリング温度を用い、前に説明した条件（Ａｂｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９：１３３６１，１９９２）で実施された。ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡからの増幅に使用された場合、各々のプライマーの組み合わせは約５００ｂｐの大きさの生成物を与えた。そのようなＰＣＲ生成物のライブラリーは増幅後、プラスミドベクター内への生成物のサブクローニングにより製造された。生成物の分析で、カルシウムレセプター配列、５つのｍＧｌｕＲ配列および別の配列が検出され、それらは特性付けされている。本明細書で説明された他の実施例と同じように、この実施例は制限的であることを意味してはいない。種々の他の高度に保存された配列領域が同様の様式で同定できおよび利用できる。そのような進展は、カルシウムレセプターおよびｍＧｌｕＲ間で最も高度に保存されている配列の同定、およびこれらの配列相同性に基づいた縮重ＰＣＲプライマーの設計を可能にするカルシウムレセプター配列の発見により可能である。縮重ＰＣＲは次に関連ＤＮＡ断片をクローン化するのに利用できる。本明細書に記載されたようなクローン化ＰＣＲ生成物は次に、完全ゲノムクローンおよび完全長ｃＤＮＡクローンを単離するためのハイブリダイゼーションプローブとして利用できる。このレセプターファミリーの追加のメンバーが発見され、およびそれらの決定されるにつれて、この方法の改善が可能になるであろう。従って、反復的過程により本発明はこのレセプターファミリーの他のメンバーの発見を可能にする。実施例２：新規ヒトｍＧｌｕＲ配列のクローニング鋳型としてのヒトゲノムＤＮＡおよび縮重プライマーおよび上記実施例で示した反応条件（Ａｂｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９：１３３６１，１９９２）を用いてＰＣＲが実施された。増幅生成物はアガロースゲル電気泳動にかけられ、ＸｈｏＩおよびＥｃｏＲＩ制限エンドヌクレアーゼで分解した後で約５００ｂｐのサイズに対応するものをサブクローン化した。ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０（ＵＳＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いた二本鎖ＤＮＡシークエンシングによるサブクローンのＤＮＡ配列分析でヒトカルシウムレセプターおよび種々のヒトｍＧｌｕＲ配列のための配列が同定された。後者のほとんどは容易に既知のラットｍＧｌｕＲのヒト同族体と同定された。しかしながら、ＣＬ１＋ＣＬ３増幅反応から発生されたものの中から一つのサブクローンが見い出され、それは独特であると思われた。クローンＦＦ６．１７５の部分配列分析（配列ＩＤ番号：３を参照されたい）は、それがラットｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６およびｍＧｌｕＲ７ヌクレオチド配列と強い相同性を持っていることを示した。ＦＦ６．１７５のヌクレオチド配列の翻訳により、アミノ酸配列はラットｍＧｌｕＲ４、６および７と同族であるが、独特のアミノ酸変異を示すことが明らかにされた。このことは、ＦＦ６．１７５はｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６またはｍＧｌｕＲ７のヒト同族体をコードしていず；しかしそのかわり、このサブファミリーのメンバーであるらしい新規ｍＧｌｕＲをコードしていた。マウスｍＧｌｕＲ８核酸およびアミノ酸配列の続いての報告（Ｄｕｖｏｉｓｉｎｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１５：３０７５，１９９５）はこの仮説を確認した。ＦＦ６．１７５の部分核酸配列（配列ＩＤ番号：３）はマウスｍＧｌｕＲ８核酸配列の対応する領域と９２.２％の配列同一性を示した。さらに、ＦＦ６．１７５の部分核酸配列によりコードされているアミノ酸配列はマウスｍＧｌｕＲ８の対応するアミノ酸配列と９６．４％の同一性を示した。これらの関係は、ヒトｍＧｌｕＲ８をコードしているらしい、ヒトゲノムＤＮＡ由来のＰＣＲ断片としてのＦＦ６．１７５を暗示した。ＦＦ６．１７５の部分核酸配列に基づいた特異的ＰＣＲプライマー（ＦＦ６．１７５ＲＴＳ：５’−ＣＴＡＣＡＴＴＧＡＣＴＡＴＧＧＡＧＡＧＣＡＧＣＧ−３',ＦＦ６.１７５.ＲＴＳ３：５'−ＧＡＣＣＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＴＡＣＴＧＴＡＴＣＣ−３'）が商業的に合成された（ＭｉｄｌａｎｄＣｅｒｔｉｆｉｅｄＲｅａｇｅｎｔＣｏｍｐａｎｙ）。ＰＣＲは１００ｎｇのヒトゲノムＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、０．１μＭの各々のプライマー、１ＸＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＰＣＲ緩衝液、０．２ｍＭｄＮＴＰおよび１．２５単位のＡｍｐｌｉＴａｑ酵素を用い、５０μｌの反応容量で実施された。２５サイクルのＰＣＲを実施するためにＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲシステム９６００が用いられた：９４℃で１５秒、５０℃で１５秒および７２℃で１５秒、続いて７２℃で１０分の伸長。生じた１２１ｂｐ生成物はｐＴ７Ｂｌｕｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ）内へサブクローン化され、ｐＸ１２０．１５と名付けられた。クローン化ＰＣＲ生成物はＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２.０(ＵＳ Bｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ)を用いた二本鎖ＤＮＡシークエンシングによるＤＮＡ配列分析にかけられ、Ｘ１２０．１５が本来のＦＦ６．１７５ＰＣＲ生成物の１２１ｂｐ副断片(ヌクレオチド１０から１３０)に対応することが確かめられた。このクローンの配列は配列ＩＤ番号：４に与えられている。ｐＸ１２０．１５はＥｃｏＲＩで直線状にされ、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ( Ａｍｂｉｏｎ)によるアンチセンス³²Ｐ標識リボプローブを合成するための鋳型として使用された。４００ｍＭＮａＰＯ₄、ｐＨ７．２、１ｍＭＥＤＴＡ、５％ＳＤＳ、１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、１００μｇ／超音波処理サケ精子ＤＮＡ、５０％ホルムアミドおよび１ｘ１０⁶ｃｐｍ／ｍｌリボプローブ中で、ＨｕｍａｎＭｕｌｔｉｐｌｅＴｉｓｓｕｅノーザンブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が６０℃で１８時間ハイブリダイズされた。膜は４回、２ＸＳＳＣ、０．０５％ＳＤＳを用いて室温で各々１０分間、続いて２回、０．１ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにより６５℃にて３０分間洗浄された。膜は次にオートラジオグラフィーにかけられた。高ストリンジェンシー条件下でＸ１２０．１５リボプローブにハイブリダイズする約３．８ＫｂｍＲＮＡはヒト脳の至る所に広く発現され（試験された１６領域の内の１６）、視床下核および大脳皮質で最も高いレベルでの発現があることをノーザンブロット分析は明らかにした。このｍＲＮＡに対応する完全長ｃＤＮＡクローンを得るため、ファージベクターラムダＤＲ２（カタログ番号ＨＬ１１４３Ｘ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリーがＸ１２０．１５をプローブとして用いてスクリーニングされた。Ｘ１２０．１５はＤｅｃａｐｒｉｍｅIIキットを使用し、製造元のプロトコール（Ａｍｂｉｏｎ）に従ったランダムプライミングにより³²Ｐ標識された。約９ｘ１０⁵ファージプラークがＨｙｂｏｎｄ−Ｎ膜上に二重に移された。これらのフィルターは４００ｍＭＮａＰＯ₄、ｐＨ７．２、１ｍＭＥＤＴＡ、５％ＳＤＳ、１ｍg／ｍｌＢＳＡ、１００μｇ／超音波処理サケ精子ＤＮＡ、５０％ホルムアミドおよび３ｘ１０⁵ ｃｐｍ／ｍｌプローブ中、４２℃で１８時間ハイブリダイズされた。膜は２回、２ＸＳＳＣ、１％ＳＤＳを用いて室温で１５分間、続いて１回、０．１ＸＳＳＣ、１％ＳＤＳにより５５℃で３０分間洗浄され、オートラジオグラフィーにかけられた。単一のハイブリダイズしたクローン（ＣＣＸ−１）が単離され、ｃｒｅ−ｌｏｘＰ変換によりプラスミドｐＤＲ２内へ保全された。このクローンはｐＣＣＸ−１と名付けられ、ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２.０（ＵＳＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いた二本鎖ＤＮＡシークエンシングによるＤＮＡ配列分析にかけられた。ｐＣＣＸ−１に繋がれたｃＤＮＡ挿入物のヌクレオチド配列は配列ＩＤ番号：２に示されている。ＣＣＸ−１ｃＤＮＡは約３８５０ｂｐ長であり、５１５ｂｐの５’−非翻訳領域；２７２４ｂｐの読み取り枠；および約６１０ｂｐの３’ −非翻訳領域を含んでいる。３’−非翻訳領域の長さの曖昧さはポリＡ尾部中のヌクレオチドの正確な数を確立するのが困難なためである。２７２４ｂｐ読み取り枠（ヌクレオチド１から２７２４、配列ＩＤ番号：５）はマウスｍＧｌｕＲ８ヌクレオチド配列（Ｄｕｖｏｉｓｉｎｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１５：３０７５，１９９５）のヌクレオチド１から２６７７と９１．８％同一である。しかしながら、ＣＣＸ−１ｃＤＮＡのヌクレオチド２７３３から始まりヌクレオチド２６７７までの５５ヌクレオチドはマウスｍＧｌｕＲ８ｃＤＮＡには存在しない。ＣＣＸ−１ｃＤＮＡの２７３３から２７７９までのヌクレオチド配列はまた、マウスｍＧｌｕＲ８ｃＤＮＡのＴＧＡコドンに先立つ４７ヌクレオチドと強い相同性を示している（８９．４％の同一性）。ＣＣＸ−１ｃＤＮＡの２７２４ｂｐ読み取り枠はマウスｍＧｌｕＲ８蛋白質とちょうど同じサイズの９０８アミノ酸の蛋白質（配列ＩＤ番号：１）をコードしている。新規ヒトｍＧｌｕＲのアミノ酸配列は残基８９２までのマウスｍＧｌｕＲ８アミノ酸配列（Ｄｕｖｏｉｓｉｎｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１５：３０７５，１９９５）と９７．５％同一である。この配列同一性のため、新規ヒトｍＧｌｕＲは本明細書ではヒトｍＧｌｕＲ８と称される。しかしながら、ヌクレオチド２７２４から２７３０に２つの枠停止コドン（ＴＡＡＴＡＧ）を含む５５ヌクレオチド挿入の結果として、ＣＣＸ−１ｃＤＮＡによりコードされているＣ−末端１５アミノ酸はマウスｍＧｌｕＲ８蛋白質ｎＣ−末端の対応する１５のアミノ酸とは完全にはずれている。ＣＣＸ−１ｃＤＮＡの３’−非翻訳領域中のヌクレオチド２７３５−２７７９が１５アミノ酸（その１４は対応するマウスｍＧｌｕＲ８のＣ−末端の１５アミノ酸と同一である）をコードするであろうという事実は、別のスプライシングが第二のヒトｍＧｌｕＲ８ｍＲＮＡを生成するであろうことを強く示唆している。５５ヌクレオチド挿入物が欠けているこのｍＲＮＡスプライス変異体はマウスｍＧｌｕＲ８蛋白質のＣ−末端アミノ酸配列とほとんど同一のＣ−末端配列を持つヒトｍＧｌｕＲ８蛋白質をコードしているであろう。ＣＣＸ−１ｃＤＮＡ中の５５ヌクレオチド挿入物が２つの異なったＣ−末端アミノ酸配列をコードしている２つのヒトｍＧｌｕＲ８ｍＲＮＡを生成する別々のスプライシングを反映しているがどうかを決定するため、ＰＣＲに基づいた実験が実施された。特異的ＰＣＲプライマー（ＣＣＸ．２：５’−ＧＡＴＧＴＡＣＡＴＣＣＡＧＡＣＡＡＣＡＡＣＡＣ−３’、ＣＣＸ−１のヌクレオチド２４３０から２４５２）および（ＣＣＸ．１４；５’−ＣＡＧＡＴＴＧＴＧＣＣＡＴＴＴＣＣＣＴＧＴＴＴＣ−３’、ＣＣＸ−１のヌクレオチド２７８１から２８０４）が推定Ｃ−末端スプライス部位（ＭｉｄｌａｎｄＣｅｒｔｉｆｉｅｄＲｅａｇｅｎｔＣｏｍｐａｎｙ,Ｍｉｄｌａｎｄ，ＴＸにより商業的に合成された）に隣接するように設計された。これらのプライマーは、Ｘ１２０．１５ＰＣＲ生成物増幅のために前に説明した反応条件を用いて、各々１０ｎｇのヒト視床下核、大脳皮質および網膜ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）からの増幅に使用された。約２０ｎｇのｐＣＣＸ１プラスミドＤＮＡからの増幅が陽性対照として使用された。得られたＰＣＲ生成物は２％アガロースゲル（Ｎｕｓｉｅｖｅ^RＧＴＧ^R，ＦＭＣ，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＭＥ）を通して電気泳動し、続いてキャピラリー移送によりナイロン膜（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ，Ａｍｅｒｓｈａｍ）上にブロットした。膜は５ＸＳＳＣ、２５ｍＭＮａＰＯ₄、ｐＨ７．５、５Ｘデンハルト、５ｍＭＥＤＴＡ、０．１％ピロリン酸、１％ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、１００μｇ／ｍｌ超音波処理サケ精子ＤＮＡ中、オリゴヌクレオチドプローブ（ＣＣＸ．１７：５’ −ＧＧＡＡＡＴＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＡＴＧＧＡＧＡＧ−３’、ＣＣＸ−１のヌクレオチド２６１７から２６４０）と３７℃にて１８時間ハイブリダイズさせた。ＣＣＸ．１７はＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ．Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を用いて³²Ｐ標識し、ＴＥ−１０カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）で精製して全反応物がハイブリダイゼーションに使用された。膜は４回、各々２ＸＳＳＣ，０．１％ＳＤＳを用いて室温で５分間、および２回、各々０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにより４５℃で３０分間洗浄された。膜はオートラジオグラフィーにかけられた。この実験の結果は図６に示されている。標識ＣＣＸ．１７オリゴヌクレオチドとハイブリダイズする３７５ヌクレオチドＰＣＲ生成物は視床下核、大脳皮質および網膜ｃＤＮＡから増幅された。この生成物は，ｐＣＣＸ−１プラスミドＤＮＡが鋳型として用いられた場合に得られたものとサイズが同じであり、ＣＣＸ− １ｃＤＮＡ（ｈｍＧｌｕＲ３７５）に対応するｍＲＮＡ種がこれらの３つの組織すべてで発現されていることを示している。しかしながら、標識ＣＣＸ．１７オリゴヌクレオチドとハイブリダイズする約３２０ヌクレオチドの別のＰＣＲ生成物（ｈｍＧＬｕＲ３２０）もまた３つの組織から増幅された。これらの結果は２つの異なったｍＧｌｕＲ８ｍＲＮＡ種が別個のスプライシングにより生じ；両方ともヒト網膜および試験された２つのヒト脳領域で発現されていることを示している。この結果は、図６の３２０ヌクレオチドＰＣＲ生成物（ｈｍＧｌｕＲ３２０）を生じるもとになるｍＲＮＡ種は、スプライシングの間に５５ヌクレオチドセグメントが脱離されているヒトｍＧｌｕＲ８ｍＲＮＡを意味しているという結論と一致している。このセグメントの脱離が、Ｃ−末端の１５のアミノ酸の１４がマウスｍＧｌｕＲ８蛋白質のＣ−末端と同一であるヒトｍＧｌｕＲ８蛋白質をコードしているｍＲＮＡを生じるもとになることはかなりありそうなことである。対照的に、図６の３７５ヌクレオチドＰＣＲ生成物( ｈｍＧｌｕＲ３７５)を生じるもとになる第二のｍＲＮＡ種は、ＣＣＸ−１ｃＤＮＡに対応するヒトｍＧｌｕＲ８ｍＲＮＡを意味している。スプライシングの間、５５ヌクレオチドセグメントはこのｍＲＮＡに維持されており、Ｃ−末端に異なった１５アミノ酸配列（配列ＩＤ番号：１）（それはマウスｍＧｌｕＲ８のＣ−末端の１５アミノ酸配列から完全にはずれている）を持つ第二のヒトｍＧｌｕＲ８レセプター蛋白質を生じる。実施例３：ｐＨｍＧＲ８ｂの構築ｐＣＣＸ−１ＤＮＡをＸｈｏＩおよびＸｂａＩで分解して、ＣＣＸ−１ＤＮＡ中のヌクレオチド８２５からポリＡ尾部の末端までの断片を放出させた。この断片（〜２．５Ｋｂ）を哺乳類発現ベクター、ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＸｈｏＩおよびＸｂａＩ部位へサブクローン化し、生じるクローンをｐＨｍＧＲ８−３’と命名した。ＰＣＲプライマー（ＣＣＸ．６ｂ：５ ’−ＣＡＴＧＧＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＣＣＡＧＡＡＧＧＴＧ−３’、ＣＣＸ．９：５’−ＧＡＴＧＡＡＴＣＣＣＧＡＧＣＡＡＴＴＣＧＣＴＣＣ−３’）は商業的に合成され（ＭｉｄｌａｎｄＣｅｒｔｉｆｉｅｄＲｅａｇｅｎｔＣｏｍｐａｎｙ）、前にＸ１２０．１５ＰＣＲ生成物増幅で説明したＰＣＲ条件下、約２０ｎｇのｐＣＣＸ−１から、新規ヒトｍＧｌｕＲのヌクレオチド−１０８から１１８４を含むＰＣＲ生成物を増幅するために使用された。得られた１．３ｋｂＰＣＲ生成物はＨｉｎｄIII およびＥｃｏＲＩで分解し、ｐＨｍＧＲ８−３’の対応する部位内へサブクローン化して完全長新規ヒトｍＧｌｕＲ発現構築物を発生させた。得られた発現プラスミド（ｐＨｍＧＲ８ｂ）は、サブクローン化ＨｉｎｄIII−ＥｃｏＲＩ断片がＰＣＲ誘導突然変異を含んでいないことを確かめるためにＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０（ＵＳＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いた二本鎖ＤＮＡシークエンシングによるＤＮＡ配列分析にかけられた。実施例４：アフリカツメガエル卵母細胞で発現された新規代謝指向型グルタミン酸レセプターの機能的活性化この実施例はアフリカツメガエル卵母細胞発現アッセイを用いた新規ｍＧｌｕＲの活性化を記載している。ｐＨｍＧＲ８ｂＤＮＡを制限酵素分解して直線状化し、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ転写によりキャップ形成されたセンス鎖ｃＲＮＡが合成された。インビトロで転写されたＲＮＡはエタノール沈澱により濃縮し、ＲＮＡのサイズおよび完全性が変性アガロースゲルで評価された。ラットＧ蛋白質ｃＲＮＡ結合内向き整流カリウムチャンネル（ＧＩＲＫ）サブユニット（Ｋｕｂｏｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６４：８０２，１９９３）および心内向き整流（ＣＩＲ）カリウムチャンネルサブユニット（Ａｓｈｆｏｒｄｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３７０：４５６、１９９４；Ｋｒａｐｖｉｎｓｋｙｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３７４：１３５、１９９５）は同様に合成された。アフリカツメガエル卵母細胞は標準プロトコールに従って単離された。個々の卵母細胞に５ｎｇＨｍＧＲ８ｂ、１．５ｎｇＧＩＲＫおよび１．５ｎｇＣＩＲを含むｃＲＮＡの混合物；または１．５ｎｇＧＩＲＫおよび１．５ｎｇＣＩＲのみを含む第二の対照混合物を注入した。４日間インキュベーションした後、卵母細胞は標準二電極電位固定技術を用いて−９０ｍＶの保持電位で電位固定した。卵母細胞に２５ｍＭＫＣｌ、７５ｍＭＮａＣｌ、０．５ｍＭＣａＣｌ₂、１ｍＭＭｇＣｌ₂、５ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５を含む塩溶液を潅流した。２５ｍＭＫＣｌの存在はカリウムイオンの平衡電位（Ｅ_K）をより正の電位へ移行させ（約−４０ｍＶ）、このことは約−４０ｍＶの負電位でのＧＩＲＫ／ＣＩＲによる電流の検出を可能にする。対照条件下およびＬ−グルタミン酸存在下、−１３０ｍＶから＋２０ｍＶの電位範囲での電流強度を決定するために電圧勾配（１秒の持続時間）が使用された。２５ｍＭＫＣｌを含む塩溶液において、ＧＩＲＫ／ＣＩＲｃＲＮA混合物またはＨｍＧＲ８ｂ／ＧＩＲＫ／ＣＩＲｃＲＮＡ混合物が注入された卵母細胞では、−１３０ｍＶから＋２０ｍＶの電圧勾配は−４０ｍＶ未満の電位で内向き整流電流を生み出す（図７、対照を参照されたい）。この内向き電流はＧＩＲＫ／ＣＩＲを発現している卵母細胞に典型的であり、ＧＩＲＫ／ＣＩＲ活性化の基礎的レベルを示している。ＨｍＧＲ８ｂ／ＧＩＲＫ／ＣＩＲｃＲＮＡ混合物が注入された卵母細胞において、内向き電流は１００−３００μＭのＬ−グルタミン酸を加えることによりさらに増加し、電流の全体の増加は−１３０ｍＶの膜電位で典型的には１０００ｎＡを超える（図７、３００μＭＬ−グルタミン酸を参照されたい）。−４０ｍＶ以上では電流強度の変化は観察されなかった。このＬ−グルタミン酸を加えた効果はＧＩＲＫ／ＣＩＲｃＲＮＡ混合物のみを注入した卵母細胞では観察されなかった。これらのデータはアフリカツメガエル卵母細胞におけるＨｍＧＲ８ｂおよびＧＩＲＫ／ＣＩＲｃＲＮＡの同時発現は、Ｌ−グルタミン酸による機能的ヒトｍＧｌｕＲ８レセプターの活性化を経たＧＩＲＫ／ＣＩＲカリウムチャンネル複合体の強い活性化を生み出したことを示している。実施例５：ｐＣＥＰ４−ＨｍＧＲ８ｂの構築ｐＨｍＧＲ８ｂプラスミドＤＮＡをＨｉｎｄIIIで分解し、標準条件を用いて( Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔ．ａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９８９）切断されたＨｉｎｄIII末端をＤＮＡポリメラーゼＩのクレノー断片（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）で平滑端化した。ＤＮＡは次にＸｂａｌで分解し、ｐｃＤＮＡＩＡｍｐベクターＤＮＡから電気泳動的に分離した後、低融点アガロースでヒトｍＧｌｕＲ８をコードしている３．４Ｋｂ断片が単離された。３．４Ｋｂ断片は市販品として購入可能なエピソーム哺乳類発現ベクターｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内へサブクローン化した。このことを達成するため、ｐＣＥＰ４プラスミドＤＮＡは最初にＰｖｕII、続いてＮｈｅＩで分解された。ヒトｍＧｌｕＲ８をコードしている３．４Ｋｂ平滑端−ＸｂａＩ断片は次にｐＣＥＰ４のＰｖｕIIおよびＮｈｅＩ部位内へ結合された。得られたプラスミドはｐＣＥＰ４−ＨｍＧＲ８ｂと名付けられ、その完全性は制限地図作製およびＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０（ＵＳＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いた二本鎖ＤＮＡシークエンシングにより確認した。実施例６：哺乳類細胞での新規ｍＧｌｕＲのトランスフェクションおよび安定な発現この実施例は新規ヒトｍＧｌｕＲを発現している安定にトランスフェクトされた哺乳類細胞株産生のための方法を提供するが、制限的であるわけではない。ヒト胎児腎臓細胞（２９３，ＡＴＣＣ，ＣＲＬ１５７３）は通常の様式で増殖させる。細胞は一夜のインキュベーション後に約７０％コンフルエントになるように、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および１Ｘペニシリン−ストレプトマイシン（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むダルベッコ改良イーグル培地（Ｄ −ＭＥＭ）を含む１０ｃｍ細胞培養プレートに播種される。トランスフェクションのためのＤＮＡを調製するため、ｐＣＥＰ４−ＨｍＧＲ８ｂをエタノールで沈澱させ、洗浄した後、１μｇ／μｌの濃度で滅菌水に再懸濁する。１４マイクログラムプラスミドのＤＮＡを１．７ｍｌの無血清Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、リポソーム処方ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ^TM （ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と２０分インキュベートする。室温でのインキュベーション後、６．９ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭをトランスフェクション混合物に加える。２回、５ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭで洗浄された細胞にこの溶液を加える。細胞およびトランスフェクション混合物は３７℃で５時間インキュベートした後、８．５ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ／２０％ＦＢＳを加えてＦＢＳ濃度を１０％にする。一夜インキュベーション後、培地を１０％ＦＢＳ、１Ｘペニシリン−ストレプトマイシンおよび２ｍＭグルタミンを含むＤ−ＭＥＭに戻す。さらに２４時間インキュベーション後、トリプシンで細胞を剥し、２００μｇ／ｍｌのヒグロマイシン（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）を含む培地へ再播種する。増殖する細胞はヒグロマイシン耐性遺伝子をコードしているｐＣＥＰ４−ＨｍＧＲ８ｂを含んでいなければならない。個々のクローン細胞株を回収し、標準組織培養技術を用いて繁殖させる。個々のクローン細胞株および多くのそのような細胞株のプールの継代培養物は、新鮮な組織培養培地に解離させおよび細胞を１:１０の分割比で新鮮な培養培地へ播種することにより調製できる。クローン細胞株における本発明の新規ヒトｍＧｌｕＲｍＲＮＡの発現はノザンブロット分析により評価でき、高レベルのｍＲＮＡ発現を示す細胞株が同定される。実施例７：哺乳類細胞において発現される新規ｍＧｌｕＲの機能的活性化新規ヒトｍＧｌｕＲはラットおよびヒトｍＧ１ｕＲ４（Ｔａｎａｂｅｅｔ．ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ８：１６９，１９９２；Ｆｌｏｒｅｔ．ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．３４：１４９，１９９４）、ラットｍＧｌｕＲ６（Ｎａｋａｊｉｍａｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１１８６８，１９９３）、ラットおよびヒトｍＧｌｕＲ７（Ｏｋａｍｏｔｏｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１２３１，１９９４Ｆｌｏｒｅｔ．ａｌ．，Ｓｏｃ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ａｂｓｔｒ．２０：４６８，１９９４）およびマウスｍＧｌｕＲ８（Ｄｕｖｏｉｓｉｎｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１５：３０７５，１９９５）を含むグループIII ｍＧｌｕＲサブファミリーの一員であるようである。これらの他のグループIII ｍＧｌｕＲ同様に、新規ヒトｍＧｌｕＲはＧ_i−結合レセプター（アデニルシクラーゼに阻害的に結合する）をコードしていることが期待される。ｐＣＥＰ４−ＨｍＧＲ８ｂ発現構築物で安定にトランスフェクトされている哺乳類細胞株は、ヒトｍＧｌｕＲ８の活性化により仲介されるアデニルシクラーゼのグルタミン酸誘導阻害を試験するために利用できる。アデニルシクラーゼ活性は以前に報告されているように（Ｔａｎａｂｅｅｔ．ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ８：１６９，１９９２；Ｎａｋａｊｉｍａｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２４３７，１９９２）、グルタミン酸または他のｍＧｌｕＲアゴニスト存在下または不在下でトランスフェクトされた細胞をフォルスコリンへ暴露した後にｃＡＭＰ蓄積を測定することにより評価できる。簡単に記すと、クローン細胞をウェル当たり１．５ｘ１０⁵細胞の密度で１２ウェルプレートに播種し、３日間増殖させる。１ｍＭ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中、３７℃で２０分間前インキュベーションした後、細胞を１０μＭフォルスコリン、１ｍＭＩＢＭＸおよび試験薬剤を含む新しいＰＢＳと１０分間インキュベートする。培地を吸引し、エタノールで反応を停止させる。ｃＡＭＰレベルはキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いてラジオイムノアッセイにより測定する。百日咳毒素（ＰＴＸ）処理のため、細胞は種々の濃度のＰＴＸと３７℃にて１１時間、前インキュベートする。実施例８：組換え体レセプター結合アッセイ以下は新規ヒトｍＧｌｕＲのグルタミン酸結合部位へ結合する化合物を得るための迅速スクリーニングアッセイの例である。スクリーニングアッセイは安定にトランスフェクトされた哺乳類細胞で発現された組換え体ｍＧｌｕＲへの化合物の結合を測定する（Ｏ’Ｈａｒａｅｔ．ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ１１：４１，１９９３）。ｐＣＥＰ４−ＨｍＧＲ８ｂ発現構築物で安定にトランスフェクトされた細胞はコンフルエントになるまで増殖させ、２回ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中でかきとることにより採取する。採取した細胞は４℃にて５分間、１０００ｒｐｍで遠心分離してペレット化し、−７０℃で凍結する。細胞膜はペレットを２回、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭＥＤＴＡ、０．１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、０。１ｍＭＤ，Ｌ−ベンジルコハク酸、１０μｇ／ｍｌ七面鳥卵白トリプシンインヒビターでホモゲナイズし；４℃にて１０分間３０，０００ｘｇで遠心分離し；次にＤＮａｓｅで処理して遠心分離して集めることにより調製する。膜懸濁液は２回洗浄し、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、２．５ｍＭＣａＣｌ₂（トリス／Ｃａ）に再懸濁し、総蛋白質濃度を４５０−６７５μｇ／ｍｌに調節する。結合アッセイにために、非標識拮抗剤（１０ｍＭグルタミン酸）存在下または不在下、２５μｌの２００ｎＭ［³Ｈ］グルタミン酸（ＤｕｐｏｎｔＮＥＮ）を２２５μｌの膜懸濁液に加え、氷上で１時間インキュベートする。４ｍｌの氷冷トリス／Ｃａ緩衝液をすばやく加えてアッセイを停止させ、すぐに減圧濾過によりＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃフィルタ一上に膜を集める。１０ｍｌのＯｐｔｉｆｌｕｏｒ（Ｐａｃｋａｒｄ）をシンチレーションバイアル中のフィルターに加え、結合された放射活性をシンチレーション計数により定量する。上記の実施例は制限的であることを意味してはいない。より一般的に関連して、ヒトｍＧｌｕＲ上のグルタミン酸結合部位または他の部位へ結合する他の放射性リガンドを利用する類似の結合アッセイを当業者は開発できるであろう。そのようなアッセイは組換え的に発現されたレセプターまたはレセプター断片への化合物の結合を測定するために利用できる。新規ヒトｍＧｌｕＲへ結合する化合物は、このｍＧｌｕＲの一つまたはそれ以上の機能的活性を調節するその能力が続いて試験されるであろう。実施例９：アフリカツメガエル卵母細胞を用いた分子スクリーニング実施例４に記載したＨｍＧＲ８ｂ／ＧＩＲＫ／ＣＩＲｃＲＮＡ混合物が注入された卵母細胞は、内向き整流カリウムチャンネル活性を測定することにより新規化合物の作用を評価するためのシステムを提供する。グルタミン酸または他の既知のｍＧｌｕＲアゴニスト不在下でのヒトｍＧｌｕＲ８の機能的活性化（アゴニスト活性）；グルタミン酸または他の既知のｍＧｌｕＲアゴニストによるヒトｍＧｌｕＲ８活性の冗進（正のアロステリック調節）；またはグルタミン酸または他の既知のｍＧｌｕＲアゴニストによるヒトｍＧｌｕＲ８活性の遮断（アンタゴニスト活性）で化合物が評価できる。実施例１０：安定にトランスフェクトされた細胞株で発現された組換え体ｍＧｌｕＲを用いた分子スクリーニング実施例６に記載したような新規ヒトｍＧｌｕＲ発現構築物で安定にトランスフェクトされた細胞株は、実施例８に記載したような結合アッセイを利用することにより新規ヒトｍＧｌｕＲ上の化合物の親和性を評価するのに利用できる。さらに、実施例６に記載したような新規ヒトｍＧｌｕＲ発現構築物で安定にトランスフェクトされた細胞株は、実施例７に記載したようなフォルスコリン刺激ｃＡＭＰ産生を測定することにより新規ヒトｍＧｌｕＲ８上の化合物の作用を評価するのに利用できる。ヒトｍＧｌｕＲ８の機能的活性化は、そのような細胞株におけるフォルスコリン剌激ｃＡＭＰ産生を阻害するであろう。もしくは、ラットＧＩＰＫおよびＣＩＲカリウムチャンネルサブユニットと組み合わせてヒトｍＧｌｕＲ８を同時発現している細胞株は新規ｍＧｌｕＲ８上の化合物の作用を評価するのに利用できる。アフリカツメガエル卵母細胞の場合のように（実施例４）、ヒトｍＧｌｕＲ８の機能的活性化は、ヒトｍＧｌｕＲ８、ＧＩＲＫおよびＣＩＲを同時発現している細胞株においてＧＩＰＫ／ＣＩＲカリウムチャンネル活性の活性化を導くべきである。グルタミン酸または他の既知のｍＧｌｕＲアゴニスト不在下でのヒトｍＧｌｕＲ８の機能的活性化（アゴニスト活性）；グルタミン酸または他の既知のｍＧｌｕＲアゴニストによるヒトｍＧｌｕＲ８活性の冗進(正のアロステリック調節)；またはグルタミン酸または他の既知のｍＧｌｕＲアゴニストによるヒトｍＧｌｕＲ８活性の遮断（アンタゴニスト活性）で化合物が評価できる。他の態様は以下の請求の範囲に含まれている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 25/28 Ａ６１Ｋ 31/00 ６２６Ｂ 25/16 ６２６Ｎ 25/14 ６２６ＦＡ６１Ｋ 31/711 ６２６Ｅ 38/00 31/70 ６２５ 48/00 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 19/00 19/00 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＧ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｔ 33/50 Ｐ 33/566 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＡ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者シミン，レイチェル・ティーアメリカ合衆国ユタ州84105，ソルト・レイク・シティ，イースト・レドンド・アベニュー 1520 (72)発明者ハマーランド，ランス・ジーアメリカ合衆国ユタ州84010，ボーンティフル，サウス・400・イースト 3201 (72)発明者フラー，フォレスト・エイチアメリカ合衆国カリフォルニア州92037, ラ・ホーラ，テリーヒル・ドライブ 6130

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号１のアミノ酸配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質のユニーク部分の少なくとも５個の連続アミノ酸残基をコードし、前記ユニーク部分をコードしない他の核酸分子から分離された、少なくとも１５ヌクレオチドの長さの精製されたまたは単離された核酸分子。２．代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質がヒト蛋白質である、請求項１記載の核酸分子。３．ゲノムＤＮＡ配列、ｃＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列を含む、請求項１記載の核酸分子。４．前記代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質が配列番号１の残基１−８９３のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の核酸分子。５．前記部分が配列番号１の残基１−８９３のアミノ酸配列を含む、請求項１または４に記載の核酸分子。６．前記核酸分子が配列番号１の残基１−８９３のアミノ酸配列を含む代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質をコードする、請求項１記載の核酸分子。７．前記核酸分子が、配列番号１のアミノ酸配列を含む代謝指向型グルタミン酸レセプター蛋白質をコードする、請求項１記載の核酸分子。８．配列番号５の配列を含む、請求項７記載の核酸分子。９．配列番号５の核酸配列またはこれに実質的に相補的な配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む、請求項１記載の核酸分子。１０．配列番号５の核酸配列またはこれに実質的に相補的な配列の少なくとも５０個の連続ヌクレオチドを含む、請求項９記載の精製された核酸分子。１１．前記核酸がさらに、配列番号５のヌクレオチド２６７８−２７２４に与えられる核酸配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含む、請求項９記載の核酸分子。１２．配列番号５に与えられる核酸配列の少なくとも１５個の連続ヌクレオチドを含み、ここで、前記ヌクレオチド配列がさらに配列番号５のヌクレオチド２６７８−２７２４に与えられる配列の少なくとも３個の連続ヌクレオチドを含む、請求項９記載の核酸分子。１３．前記５個の連続アミノ酸残基の少なくとも１つが、配列番号１の残基８９４−９０８の１つである、請求項１記載の核酸分子。１４．前記核酸分子が、配列番号１のアミノ酸残基８９４−９０８を含むアミノ酸配列をコードする、請求項１３記載の核酸分子。１５．配列番号１のアミノ酸配列に含まれる細胞外ドメインを含むアミノ酸配列をコードし、ここでコードされるアミノ酸配列は膜貫通ドメインおよび細胞内ドメイン部分を実質的に含まない請求項１記載の核酸分子、またはこれに実質的に相補的な配列を有する核酸分子。１６．前記核酸分子が非代謝指向型グルタミン酸レセプターの膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインをコードする第２の核酸分子と転写的に結合している請求項１５記載の核酸分子、またはこれに実質的に相補的な配列を有する核酸分子。１７．配列番号１のアミノ酸配列に含まれる細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含むアミノ酸配列をコードしており、ここで、コードされるアミノ酸配列は細胞内ドメイン部分を実質的に含まない請求項１記載の核酸分子、またはこれに実質的に相補的な配列を有する核酸分子。１８．請求項１、６または７のいずれかに記載の核酸分子に実質的に相補的な核酸配列を有する、単離されたまたは精製された核酸分子。１９．配列番号１に与えられるアミノ酸配列の少なくとも６個の連続アミノ酸を含む、精製されたポリペプチド。２０．前記アミノ酸配列の少なくとも１８個の連続アミノ酸を含む、請求項１９記載の精製されたポリペプチド。２１．さらに、配列番号１の残基８９４−９０８に与えられる配列の少なくとも１個の連続アミノ酸を含む、請求項１９記載の精製されたポリペプチド。２２．配列番号１の残基８９４−９０８に与えられるアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の精製されたポリペプチド。２３．請求項１、６または７のいずれかに記載の核酸分子を含む、生物学的に機能性の発現ベクター。２４．請求項２３記載の発現ベクターによりトランスフォームまたはトランスフェクトされた、原核生物または真核生物宿主細胞。２５．前記宿主細胞が脊椎動物細胞である、請求項２４記載の宿主細胞。２６．ポリペプチド生成物を製造する方法であって、請求項７記載の発現ベクターでトランスフォームまたはトランスフェクトされた原核生物または真核生物宿主細胞を、適した栄養条件下で、前記発現ベクターに挿入された前記核酸分子によりコードされるポリペプチド生成物の発現を可能とする様式で増殖させることを含む方法。２７．さらに、前記ポリペプチド生成物の単離を含む、請求項２６記載の方法。２８．トランスジェニック哺乳動物を作成する方法であって、配列番号１のアミノ酸配列を有する蛋白質またはその生物学的に活性な部分をコードする核酸配列から本質的になる核酸分子を非ヒト哺乳動物に挿入する工程を含む方法。２９．配列番号１またはその生物学的に活性な部分から本質的になる代謝指向型グルタミン酸レセプターに結合するかまたはその活性を調節する化合物をスクリーニングする方法であって、前記代謝指向型グルタミン酸レセプターおよび可能性のある化合物を許容しうる媒質に導入し、そして物理学的に検出可能な手段により結合または調節を監視し、このことにより、前記代謝指向型グルタミン酸レセプターと相互作用するかまたはその活性を調節する化合物を同定する、ことを含む方法。３０．前記代謝指向型グルタミン酸レセプターが、配列番号１に含まれるアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン、および配列番号１のアミノ酸配列を有するレセプターとは異なるレセプターの細胞内ドメインを有するキメラレセプターである、請求項２９記載の方法。３１．標識した既知の結合剤による競合結合アッセイを含む、請求項２９記載の方法。３２．代謝指向型グルタミン酸レセプターが細胞により発現され、前記化合物の前記細胞に及ぼす影響を監視することをさらに含む、請求項２９記載の方法。３３．細胞が真核生物細胞である、請求項３２記載の方法。３４．真核生物細胞において発現される、配列番号１の配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節する方法であって、前記レセプターを、前記レセプターのアゴニスト、アンタゴニスト、またはアロステリック調節剤として作用する化合物と接触させる工程を含む方法。３５．代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節する方法であって、配列番号１の配列から本質的になる代謝指向型グルタミン酸レセプターを含む細胞に、前記代謝指向型グルタミン酸レセプターにおけるグルタミン酸の１つまたはそれ以上の効果を模倣するか、または前記代謝指向型グルタミン酸レセプターにおけるグルタミン酸の１つまたはそれ以上の効果を遮断するのに十分な量の代謝指向型グルタミン酸レセプター調節分子を与える工程を含み、ここで前記分子は代謝指向型グルタミン酸レセプター活性を調節し、および前記方法はインビトロまたはインビボで実施されることを特徴とする方法。３６．前記化合物が、ホスホイノシチド加水分解の増加、ホスホリパーゼＣの活性化、サイトゾルカルシウム（Ｃａ²⁺）濃度の増加、アデニリルシクラーゼの活性化、アデニリルシクラーゼの阻害、ｃＡＭＰ形成の増加、ｃＡＭＰ形成の減少、およびアラキドン酸形成の増加、グアニリルシクラーゼの活性化、環状ＧＭＰ形成の増加、内向き整流カリウムチャネルの活性化、電圧依存性カルシウムチャネルの阻害からなる群より選択される１つまたはそれ以上の活性を生成する、請求項３５記載の方法。３７．患者を治療する方法であって、療法上有効な量の、配列番号１の配列から本質的になる機能性代謝指向型グルタミン酸レセプターをコードする核酸を前記患者に投与する工程を含む方法。３８．患者を治療する方法であって、療法上有効な量の、配列番号１の配列から本質的になる代謝指向型グルタミン酸レセプターの発現を特異的に阻害する核酸を前記患者に投与することを含む方法。３９．患者を治療する方法であって、療法上有効な量の、配列番号１の配列を有する代謝指向型グルタミン酸レセプターの活性を調節する化合物を前記患者に投与することを含む方法。４０．前記患者が、グルタミン酸興奮毒性、全体性および病巣性虚血性および出血性発作、頭部外傷、脊髄損傷、低酸素症誘導性神経細胞損傷、てんかん、またはアルツハイマー病、パーキンソン病、またはハンチントン病などの神経変性性疾病からなる群より選択される神経学的疾病または疾患を有する、請求項３９記載の方法。４１．前記化合物が、痙攣、神経防御、ニューロン死、ニューロン発達、心臓活動の中枢制御、覚醒、運動制御および前庭眼反射の制御からなる群より選択される生理学的活性に影響を有する、請求項３９記載の方法。４２．ａ）配列番号１の配列から本質的になる代謝指向型グルタミン酸レセプターまたはその機能的均等物に結合するかまたはその活性を調節する化合物、およびｂ）生理学的に許容しうる担体を含む医薬組成物。４３．配列番号１または配列番号１の残基１−８９３に与えられるアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合しうる分子、および薬学的に許容しうる緩衝液を含む、代謝指向型グルタミン酸レセプター結合剤。４４．前記結合剤が精製された抗体である、請求項４３記載の結合剤。４５．前記抗体が毒素と結合されている、請求項４４記載の結合剤。４６．前記結合剤が前記ポリペプチドに優先的に結合する、請求項４３記載の結合剤。４７．患者における疾病の診断の方法であって、ａ）前記患者における、配列番号１の配列から本質的になる１つまたはそれ以上の代謝指向型グルタミン酸レセプターの数または位置を同定し；そしてｂ）前記数または位置を、正常患者または前記疾病もしくは状態を有することが知られている患者において見いだされる数または位置と比較する、の各工程を含む方法。