JP2000505303A - ガラクタナーゼ活性を有する酵素 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.菌類から得られ、そして5.9を超える最適pH条件を有するガラクタナーゼ 。 2.糸状菌の株又は酵母の株から得られる請求の範囲第1項記載のガラクタナ ーゼ。 3.前記糸状菌の株がピレノマイセテス(Pyrenomycetes)の綱からの株である 請求の範囲第2項記載のガラクタナーゼ。 4.前記ピレノマイセテスの株が、ソルダリアレス目、たとえば属ヒューミコ ラ、マイセリオプソラ、スキタリジウム、カエトミウム、メラノスポラ、セルコ ポラ、ゼラシノスポラ、ニューロスポラ、ポドスポラ又はチエラビアの株、特に M.サーモフィラム又はH.インソレンスの株である請求の範囲第3項記載のガ ラクタナーゼ。 5.請求の範囲第1〜4のいづれか1項記載のガラクタナーゼをコードするDN A配列を含んで成るDNA構造体。 6.ガラクタナーゼ活性を示す酵素をコードするDNA構造体であって、そのDNA 配列が、ヒューミコラ インソレンス(DSM 1800)から単離されたDNA及び/又 はマイセリオプソラ サーモフィラ(CBS 117.65)から単離されたDNA、及び下 記対のPCRプライマー: センスプライマーとしての“5'-CTA TTC GGA TCC AG(C/T) GA(C/T) AC(A/C) TGG GC(G/C) GA(C/T) CC(G/T) GC(G/T) C-3’” (配列番号5)及びアンチセ ンスプライマーとしての“5'-CTA ATG TCT AGA (A/G)AT CCA (A/G/C/T)GC (A/G /C/T)GG (C/T)TC CCA (A/G)TA AAA-3’”(配列番号6)、 とのPCR反応の生成物であるプローブと、低い緊縮条件下でハイブリダイズする ことを特徴とするDNA構造体。 7.前記DNA配列が、下記部分アミノ酸配列: a)Ser(S)-Asp(D)-Thr(T)-Trp(W)-Ala(A)-Asp(D)-Pro(P)-Ala(A)-His(H)及び /又は b)Phe(F)-Tyr(Y)-Trp(W)-Glu(E)-Pro(P)-Ala(A)-Trp(W)-Ile(I)、 を含んで成る、ガラクタナーゼ活性を有する酵素をコードする請求の範囲第6項 記載のDNA構造体。 8.ガラクタナーゼ活性を示す酵素をコードするDNA配列を含んで成るDNA構造 体であって、前記DNA配列が、 (a)サッカロミセス セレビシアエDSM 9983に存在するプラスミドpYES 2.0 中にクローン化されたDNA配列のガラクタナーゼコード部分; (b)配列番号1に示される位置1−1050、又はより好ましくは、55−1050に 示されるDNA配列、又はその相補的鎖; (c)前記DNA配列と少なくとも70%相同である、(a)又は(b)に定義さ れるDNA配列の類似体; (d)配列番号1における位置1−1050に示されるDNA配列と低い緊縮性でハ イブリダイズするDNA配列; (e)遺伝子コードの縮重のために、(b)又は(d)の配列とハイブリダイ ズしないが、しかしそれらのDNA配列のいづれかによりコードされるポリペプチ ドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするDNA配列;又は (f)(a),(b),(c),(d)又は(e)に特定されるDNA配列の対 立遺伝子形又はフラグメントであるDNA配列を含んで成る、 ことを特徴とするDNA構造体。 9.ガラクタナーゼ活性を示す酵素をコードするDNA配列を含ん で成るDNA構造体であって、前記DNA配列が、 (a)サッカロミセス セレビシアエDSM 9976に存在するプラスミドpYES 2.0 中にクローン化されたDNA配列のガラクタナーゼコード部分; (b)配列番号3に示される位置1−1047、又はより好ましくは、58−1047に 示されるDNA配列、又はその相補的鎖; (c)前記DNA配列と少なくとも70%相同である、(a)又は(b)に定義さ れるDNA配列の類似体; (d)配列番号3における位置1−1047に示されるDNA配列と低い緊縮性でハ イブリダイズするDNA配列; (e)遺伝子コードの縮重のために、(b)又は(d)の配列とハイブリダイ ズしないが、しかしそれらのDNA配列のいづれかによりコードされるポリペプチ ドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするDNA配列;又は (a),(b),(c),(d)又は(e)に特定されるDNA配列の対立遺伝 子形又はフラグメントであるDNA配列を含んで成ることを特徴とするDNA構造体。 10.ガラクタナーゼ活性を示す酵素をコードするDNA配列が、微生物、好まし くは糸状菌、酵母又は細菌から得られる請求の範囲第6〜9のいづれか1項記載 のDNA構造体。 11.前記DNA配列が、アスペルギラスsp.(Aspergillus sp.)の株、特にA.ア キュレアタス(A.aculeatus)又はA.ニガー(A.niger)の株、ファイトプソ ラsp.(Phytophthora sp.)の株、特に、P.インフェスタンス(P.infestans) 、P.メガスペルマ(P.megasperma)、又はP.カクトラム(P.cactorum)の株、 タラロマイセスsp.(Talaromyces sp.)の株、特にT.バイソクラマイドイデス (T.byssochlamydoides)、又はT.エメルソニ(T.emerson ii)の株、サーモアスカスsp.(Thermoascus sp.)の株、特に、T.アウランチ アカス(T.aurantiacus)の株、スポロトリカムsp.(Sporotrichum sp.)の株、 特にS.セルフィラム(S.celluphilum)、又はぺニシリウムsp.(Penicillium sp.)の株、特にP.シトクナム(P.citrinum)、P.カメムベルチ(P.camembe rtii)又はP.ロクエホルチ(P.roquefortii)から得られる請求の範囲第10項 記載のDNA構造体。 12.前記DNA配列が、ソルダリアレス科の株、たとえばヒューミコラ、マイセ リオプソラ又はチエラビア属の株、特にH.インソレンス又はM.サーモフィラ ムの株から得られる請求の範囲第10項記載のDNA構造体。 13.前記DNA配列が、マイセリオプソラ サーモフィラCBS No.117.65株のDNA ライブラリー、又はヒューミコラ インソレンスDSM No.1800株のDNAライブラ リーから単離され、又はそれに基づいて生成される請求の範囲第12項記載のDNA 構造体。 14.前記DNA配列が、サッカロミセス セレビシアエDSM No.9983から単離さ れ、又はサッカロミセス セレビシアエDSM No.9976から単離される請求の範囲 第10項記載のDNA構造体。 15.請求の範囲第5〜14のいづれか1項記載のDNA構造体を含んで成る組換え発 現ベクター。 16.請求の範囲第5〜14のいづれか1項記載のDNA構造体又は請求の範囲第15 項記載の組換え発現ベクターを含んで成る宿主細胞。 17.真核細胞、特に菌類細胞、たとえば酵母細胞又は糸状菌細胞である請求の 範囲第16項記載の宿主細胞。 18.フサリウム又はアスペルギラス又はトリコダーマの株、特にフサリウム グラミネアラム、フサリウム セレアリス、アスペルギラス ニガー、アスペル ギラス オリザエ、トリコダーマ ハル ジアナム又はトリコダーマ レセイの株である請求の範囲第17項記載の細胞。 19.マイセリオプソラsp.又はヒューミコラsp.の株、特にマイセリオプソラ サーモフィラCBS No.117.65又はヒューミコラ インソレンスDSM No.1800で ある請求の範囲第17項記載の細胞。 20.ガラクタナーゼ活性を示す酵素を生成するための方法であって、請求の範 囲第16〜19のいづれか1項記載の細胞を、前記酵素の生成を可能にする条件下で 培養し、そして前記培養物から前記酵素を回収することを含んで成る方法。 21.ガラクタナーゼ活性を示す単離された酵素であって、(i)同種の不純物 を有さず、そして(ii)前記酵素が請求の範囲第20項記載の方法により、及び請 求の範囲第16〜18のいづれか1項記載の宿主細胞により生成されることを特徴と する酵素。 22.下記部分的アミノ酸配列: a)Ser(S)-Asp(D)-Thr(T)-Trp(W)-Ala(A)-Asp(D)-Pro(P)-Ala(A)-His(H)及び /又は b)Phe(F)-Tyr(Y)-Trp(W)-Glu(E)-Pro(P)-Ala(A)-Trp(W)-Ile(I) を含んで成る、ガラクタナーゼ活性を示す単離された酵素。 23.下記: (a)サッカロミセス セレビシアエDSM 9983に存在するプラスミドpYES 2.0 中にクローン化されたDNA配列のガラクタナーゼ酵素コード部分によりコードさ れるポリペプチド; (b)配列番号2の位置19−350に示されるようなアミノ酸配列を含んで成る ポリペプチド; (c)前記ポリペプチドと少なくとも70%相同である、(a)又は(b)に定 義されるポリペプチドの類似体;及び (d)(a),(b)又は(c)の対立遺伝子形又はフラグメント から成る群から選択されたガラクタナーゼ活性を示す単離された酵素。 24.下記: (a)サッカロミセス セレビシアエDSM 9976に存在するプラスミドpYES 2.0 中にクローン化されたDNA配列のガラクタナーゼ酵素コード部分によりコードさ れるポリペプチド; (b)配列番号4の位置19−349に示されるようなアミノ酸配列を含んで成る ポリペプチド; (c)前記ポリペプチドと少なくとも70%相同である、(a)又は(b)に定 義されるポリペプチドの類似体;及び (d)(a),(b)又は(c)の対立遺伝子形又はフラグメント から成る群から選択されたガラクタナーゼ活性を示す単離された酵素。 25.請求の範囲第1〜4,23及び24のいづれか1項記載の酵素を含んで成る組 成物。 26.請求の範囲第1〜4,23及び24のいづれか1項記載のガラクタナーゼ活性 を示す酵素に富んでいる酵素組成物。 27.α−アラビノシダーゼ、キシラナーゼ、β−ガラクトシダーゼ、α−グル クロニシダーゼ、β−キシロシダーゼ、キシラン アセチル エステラーゼ、ア ラビナナーゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ペクチン アセチル エステラーゼ、 ポリガラクツロナーゼ、ペクチン リアーゼ、フィターゼ、ペクテート リアー ゼ、グルカナーゼ、ペクチン メチルエステラーゼをさらに含んで成る請求の範 囲第24項記載の組成物。 28.飼料又は食品の調製への請求の範囲第1〜4,23及び24のいづれか1項記 載の酵素、又は請求の範囲第25〜27のいづれか1項記載の酵素組成物の使用。 29.植物壁由来の材料の粘度又は水結合能力を下げるためへの請求の範囲第1 〜4,23及び24のいづれか1項記載の酵素、又は請求の範囲第25〜27のいづれか 1項記載の酵素組成物の使用。 30.ワイン又はジュースの製造のためへの請求の範囲第1〜4,23及び24のい づれか1項記載の酵素、又は請求の範囲第25〜27のいづれか1項記載の酵素組成 物の使用。 31.寄託された菌株サッカロミセス セレビシアエDSM No.9983の実質的に純 粋な単離された生物学的培養物。 32.寄託された菌株サッカロミセス セレビシアエDSM No.9976の実質的に純 粋な単離された生物学的培養物。
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