JP2000329766A

JP2000329766A - 免疫学的測定方法および免疫学的測定用エレメント

Info

Publication number: JP2000329766A
Application number: JP11142868A
Authority: JP
Inventors: Yukio Goto; 幸雄後藤; Yuichi Nakajima; 祐一中島
Original assignee: Matsushita Electric Industrial Co Ltd
Current assignee: Panasonic Holdings Corp
Priority date: 1999-05-24
Filing date: 1999-05-24
Publication date: 2000-11-30

Abstract

(57)【要約】【課題】抗原または抗体の濃度を迅速簡便に低価格で
測定できる免疫学的測定方法を提供することを目的とす
る。【解決手段】本発明の免疫学的測定方法は、測定用エ
レメント３３を用意し、被検液７０を測定用エレメント
の一方端から負圧力または毛細管現象により含浸させ、
測定対象抗原９２と特異的に結合することができ標識物
質が結合された抗体を担持させた部位にまで測定用エレ
メント３３内の含浸をすすませて抗体を被検液７０に混
入し、さらに測定用エレメント３３の他方端側に位置し
標準抗原９３が固定化された部位にまで含浸がすすむ
と、標準抗原９３と測定対象抗原９２との間で抗体を抗
原抗体反応によりそれぞれの抗原濃度に応じて分配して
抗原抗体複合体を形成し、この抗原抗体複合体に含まれ
る標識物質の量の測定を行い、測定対象抗原９２の濃度
を標識物質の量より換算することを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、溶液中の抗原また
は抗体の濃度を測定する免疫学的測定方法および免疫学
的測定用エレメントに関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、抗原の一種であるアレルゲンが発
症原因物質とされる花粉症等のアレルギー性鼻炎、アレ
ルギー性気管支喘息、アトピー性皮膚炎等のいわゆるア
レルギー疾患が、先進諸国を中心に増加傾向にあり、ダ
ニ、花粉、動物の毛、カビ等の各種構成物質がその原因
物質であることが特定されてきている。これらのアレル
ギー症状は比較的軽度の場合もあるが、アレルギー性気
管支喘息のように死に至るほど重篤な場合もある。この
ため、感作、発症を抑制するための一つの手段として、
各個人に特有な発症原因物質であるアレルゲンを低レベ
ルに維持することが必要になってくる。しかし、現状で
はアレルゲンの測定は比較的難しい高度な技術とされ、
専門の測定技術者を必要とし、半日から１日かかる長い
測定時間を必要とし、かつ高価な測定装置が必要であ
る。ところで、環境中のアレルゲン濃度とアレルギー疾
患の感作・発症とは一般的に相関することが知られてい
る。環境中のアレルゲン濃度の測定をおこなえば、掃
除、洗濯等をどの程度おこなったり、どのくらいの頻度
おこなえばよいのかの指標となり、アレルギー疾患患者
やアレルギー疾患の感作の危険のある者にとって社会生
活上有用なものとなる。また、アレルギー疾患患者の血
液中のＩｇＥ抗体の濃度が即時型アレルギー反応のＩ型
アレルギーの感作程度の指標になることも一般に知られ
ており、血液中のＩｇＥ抗体濃度の測定が感作の程度ひ
いてはアレルギー疾患の程度を知るための指標としてき
わめて有用である。

【０００３】また、近年、病原性大腸菌Ｏ−１５７に代
表されるバクテリア等の微生物の感染、代謝物に起因す
る食中毒等の被害が問題になっているが、問題となる微
生物の検出は培養した後に種類の同定や定量することが
一般的であり、培養操作に時間が掛かることを主因とし
て検査結果が出るまで１〜７日間といった長時間を要
し、かつ専門の測定技術者を必要とする。特に生鮮食品
等への検査の必要が生じた場合には、測定時間が長いこ
とが問題となる。ところで、このような微生物と上記し
た抗原は無縁のものではない。すなわち、菌体例えば病
原性大腸菌Ｏ−１５７という名称は抗体の名前に由来し
ており、これは“抗Ｏ−１５７抗体が特異的に結合する
抗原決定基を菌体表面に発現した病原性を有する大腸
菌”の意味である。個々の微生物種はそれぞれ体表面に
固有の抗原決定基を有しており、微生物自体を抗原と捉
えることができる。以上のような理由で、微生物を抗原
として同定、定量することが可能であり、生鮮食品等の
検査にきわめて有用である。

【０００４】このような背景から、抗原あるいは抗体の
濃度をそれぞれ特異的、迅速、簡便さらに高感度に測定
する方法およびその方法を利用した安価な測定装置が求
められている。

【０００５】以下、従来の抗原の濃度の測定方法につい
て説明する。

【０００６】従来の抗原抗体反応を利用した抗原の測定
法は免疫学的測定法と総称され、非標識免疫学的測定法
と標識免疫学的測定法とに大別される。非標識免疫学的
測定法は抗体に酵素等の標識物質を結合せずに抗原抗体
反応による物理量等の変化を利用して抗原の量を測定す
る方法である。非標識免疫学的測定法にはＳＰＲ法（表
面プラズモン共鳴法）や水晶振動子を使った方法等があ
る。標識免疫学的測定法は抗体に酵素等の標識物質を結
合させたものを使用し、標識物質量を測定することで抗
原の量を測定する方法である。標識免疫学的測定法には
標識の種類によってラジオイムノアッセイ法（放射性同
位体標識）、酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法（例え
ば、石川英治ら：「酵素免疫測定法（第三版）」、ｐ３
１〜５４、医学書院（１９８７）を参照）等がある。

【０００７】これらの測定法のうち現在主として用いら
れている免疫学的測定法は、酵素免疫測定法の一種であ
るＥＬＩＳＡ法と呼称される方法である。なかでも特
に、サンドイッチ法（以下、「サンドイッチＥＬＩＳＡ
法」という）と呼ばれる方法が、測定感度が高いことと
比較的操作が簡易であることを主な理由に一般的に広く
用いられている。例えば、ダニアレルゲンの測定をする
場合を例にしてサンドイッチＥＬＩＳＡ法がどの様にお
こなわれるのかの概要を図１３〜図１５に基づいて説明
する。図１３は従来のサンドイッチＥＬＩＳＡ法の主要
工程を示す工程図であり、図１４は従来のサンドイッチ
ＥＬＩＳＡ法の反応工程の主要なステップを示すステッ
プ図、図１５（ａ）〜（ｇ）は測定用反応容器における
反応を示す反応説明図である。図１３、図１４におい
て、工程は大きな作業の流れを示し、ステップは工程の
中の比較的細かい作業の流れを示すものである。

【０００８】図１３において、６０は測定用反応容器作
製工程Ｂ−１、６１は反応工程Ｂ−２、６２は測定工程
Ｂ−３、６３は演算工程Ｂ−４である。

【０００９】また、図１４において、６４は固定化のス
テップＢ−２（ａ）、６５は洗浄のステップＢ−２
（ｂ）、６６は酵素標識抗体の反応のステップＢ−２
（ｃ）、６７は洗浄のステップＢ−２（ｄ）であり、図
１５において、１Ａは測定用反応容器、９１は抗体、９
２は抗原、９４は酵素標識抗体、９５は酵素である。

【００１０】この方法は、図１３に示すように、４段階
の工程（Ｂ−１．測定用反応容器作製工程６０）、（Ｂ
−２．反応工程６１）、（Ｂ−３．測定工程６２）およ
び（Ｂ−４．演算工程６３）から構成される。

【００１１】以下、この４段階の工程の各ステップにつ
いて説明する。

【００１２】まずＢ−１．測定用反応容器作製工程６０
について説明する。

【００１３】これは抗体を測定用反応容器１Ａに固定化
して安定化状態とする工程である。以下に示す（ａ）〜
（ｅ）のステップから構成される。

【００１４】Ｂ−１（ａ）は抗原に特異的に結合する抗
体９１を測定用反応容器１Ａに固定化するステップであ
る。非特異的な吸着が起こり易い測定用反応容器１Ａ
に、測定対象の抗原９２に特異的に結合する抗体９１の
溶液を注ぎ、測定用反応容器１Ａの固相に抗体９１を非
特異吸着させて固定化する。

【００１５】Ｂ−１（ｂ）は未反応の抗体９１を洗浄除
去するステップである。緩衝液等で３回以上測定用反応
容器１Ａを洗浄して、未反応であった抗体９１を除去す
る。

【００１６】Ｂ−１（ｃ）はブロッキング剤で測定用反
応容器１Ａの非特異吸着面を被覆するステップである。
測定用反応容器１Ａにブロッキング剤溶液を注ぎ、測定
用反応容器１Ａの表面に残存する非特異吸着面にブロッ
キング剤を非特異吸着させ、以後他の有機物等の測定用
反応容器１Ａへの非特異的吸着が極力おこらないように
する。

【００１７】Ｂ−１（ｄ）は未反応のブロッキング剤を
洗浄除去するステップである。緩衝液等で３回以上測定
用反応容器１Ａを洗浄して、未反応であったブロッキン
グ剤を除去する。

【００１８】Ｂ−１（ｅ）は測定用の測定用反応容器１
Ａを保存可能とする処理をするステップである。保存手
段として凍結乾燥法を用いて、測定用反応容器１Ａを長
期安定化した状態とする。

【００１９】次に、Ｂ−２．反応工程６１について説明
する。

【００２０】これは抗原量に比例した量の酵素標識抗体
を測定用反応容器１Ａに固定化させる工程である。以下
に示す（ａ）〜（ｄ）のステップから構成される。

【００２１】Ｂ−２（ａ）は抗原９２を測定用反応容器
１Ａに特異的に結合させるステップである。少なくとも
４つの測定用反応容器１Ａに、濃度が既知の標準抗原溶
液２種類、抗原９２を含有する被検液およびブランク液
をそれぞれ注ぎ、それぞれ同条件下で平行して標準抗原
または抗原９２を測定用反応容器１Ａ上の固定化抗体９
１を介して抗原抗体反応で特異的に結合させる。

【００２２】Ｂ−２（ｂ）は未反応の抗原９２を洗浄除
去するステップである。緩衝液等で３回以上測定用反応
容器１Ａを洗浄して、未反応であった抗原９２を除去す
る。

【００２３】Ｂ−２（ｃ）は酵素標識抗体９４を測定用
反応容器１Ａに特異的に結合させるステップである。測
定用反応容器１Ａに酵素標識抗体９４溶液を注ぎ、酵素
標識抗体９４を測定用反応容器１Ａ内の抗原抗体複合体
の抗原９２を介して抗原抗体反応で特異的に結合させ
る。

【００２４】Ｂ−２（ｄ）は未反応の酵素標識抗体９４
を洗浄除去するステップである。緩衝液等で３回以上測
定用反応容器１Ａを洗浄して、未反応であった酵素標識
抗体９４を除去する。

【００２５】以上、各ステップの反応の説明を図１５に
示す。抗体９１が固定化された測定用反応容器１Ａを図
１５（ａ）に示し、測定用反応容器１Ａへの抗原９２含
有溶液の添加を図１５（ｂ）に示し、時間経過による固
定化抗体９１と抗原９２の抗原抗体反応の進行を図１５
（ｃ）に示し、洗浄操作による未反応抗原９２の除去を
図１５（ｄ）に示し、測定用反応容器１Ａへの酵素標識
抗体９４の添加を図１５（ｅ）に示し、測定用反応容器
１Ａへの酵素標識抗体９４の抗原抗体反応の進行を図１
５（ｆ）に示し、洗浄操作による未反応酵素標識抗体９
４の除去を図１５（ｇ）に示す。

【００２６】次に、Ｂ−３．測定工程６２について説明
する。

【００２７】これは発色基質を添加して酵素反応で発色
させ、発色の度合いを測定する工程である。以下に示す
（ａ）〜（ｃ）のステップから構成される。

【００２８】Ｂ−３（ａ）は基質を酵素反応で発色させ
るステップである。基質溶液を測定用反応容器１Ａに添
加し、測定用反応容器１Ａ内の酵素標識抗体９４の酵素
９５に基質から酵素反応によって色素を生成させる。

【００２９】Ｂ−３（ｂ）は酵素反応を停止させるステ
ップである。反応停止液を測定用反応容器１Ａに添加し
て酵素反応を停止させる。

【００３０】Ｂ−３（ｃ）は発色波長における発色の度
合いの測定ステップである。分光光度計の所定の波長で
生じた色素を測定する。

【００３１】最後にＢ−４．演算工程６３について説明
する。

【００３２】これは標準抗原溶液の検量線より抗原濃度
の換算を行う工程である。以下に示す（ａ）のステップ
から構成される。

【００３３】Ｂ−４（ａ）は換算ステップである。測定
結果から標準抗原溶液の検量線を作成し、被検液の抗原
濃度の換算をおこない、被検液の抗原濃度の値を得るこ
とができる。

【００３４】尚、以上が従来の抗原濃度の測定について
の説明であるが、抗原と抗体を入れ替えて抗体を測定す
ることでもまったく同一である。したがって、特に断ら
ない限り、一方を説明したらもう一方も説明しているも
のである。特殊な場合にはある抗体の抗原決定基と特異
的に結合する抗体の組み合わせでも前者が広い意味での
抗原となっているとみなすことができる。必要に応じて
抗原（または抗体）あるいは抗体（または抗原）と明示
的に記載することとする。

【００３５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記し
た従来の免疫学的測定方法では、以下の問題点を有して
いた。

【００３６】（ａ）２ステップの抗原抗体反応｛上記Ｂ
−２（ａ）、Ｂ−２（ｃ）｝が必要で、反応全てが完全
に進行せねば正しい値が得られず、かつ全体で４〜２４
時間程度と測定に要する時間が長い。特に精度を向上さ
せるためには２４時間程度を要し、測定時間が長いとい
う問題点を有していた。

【００３７】（ｂ）１０種類程度の異なる試薬を必要と
し、また、２ステップの洗浄操作｛上記Ｂ−２（ｂ）、
Ｂ−２（ｄ）｝を行う必要があり、作業が煩雑で操作性
が悪く利便性に欠けるという問題点を有していた。

【００３８】（ｃ）試験を行うためには分注器、恒温
槽、冷蔵庫等が必要であり、測定コストが高いという問
題点を有していた。

【００３９】この免疫学的測定方法および免疫学的測定
用エレメントでは、抗原または抗体の濃度を迅速簡便に
低価格で測定できることが要求されている。

【００４０】本発明は、抗原または抗体の濃度を迅速簡
便に低価格で測定できる免疫学的測定方法および抗原ま
たは抗体の濃度を迅速簡便に低価格で測定するための免
疫学的測定用エレメントを提供することを目的とする。

【００４１】

【課題を解決するための手段】この課題を解決するため
に本発明の免疫学的測定方法は、測定用エレメントを用
意し、測定対象抗原を含有する被検液を測定用エレメン
トの一方端から負圧力または毛細管現象により含浸さ
せ、測定対象抗原と特異的に結合することができ標識物
質が結合された抗体を担持させた部位にまで測定用エレ
メント内の含浸をすすませて抗体を被検液に混入し、さ
らに測定用エレメントの他方端側に位置し標準抗原が固
定化された部位にまで含浸がすすむと、標準抗原と測定
対象抗原との間で抗体を抗原抗体反応によりそれぞれの
抗原濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成し、標
準抗原が固定化された部位の抗原抗体複合体に含まれる
標識物質の量の測定を行い、測定対象抗原の濃度を標識
物質の量より換算する構成を備えている。

【００４２】これにより、抗原または抗体の濃度を迅速
簡便に低価格で測定できる免疫学的測定方法が得られ
る。

【００４３】この課題を解決するために本発明の免疫学
的測定用エレメントは、測定対象抗原と同一種の標準抗
原を一定量固定化した脱着自在なフィルタと、フィルタ
に近接して配置された吸水パッドと、フィルタの吸水パ
ッドと逆側に近接するように配置された連絡用パッド
と、連絡用パッドのフィルタと逆側に近接するように配
置され、標準抗原と特異的に結合することができ標識物
質を結合した抗体を含有した放出用パッドと、放出用パ
ッドの連絡用パッドと逆側に近接するように配置された
導入用パッドと、全体を覆う気密性の測定用エレメント
支持体と、導入用パッドの放出用パッドと逆側に配置さ
れた導入口と、吸水パッドのフィルタと逆側に配置され
た通気孔とを有する構成を備えている。

【００４４】これにより、抗原または抗体の濃度を迅速
簡便に低価格で測定するための免疫学的測定用エレメン
トが得られる。

【００４５】

【発明の実施の形態】本発明の請求項１に記載の免疫学
的測定方法は、測定用エレメントを用意し、測定対象抗
原を含有する被検液を測定用エレメントの一方端から負
圧力または毛細管現象により含浸させ、測定対象抗原と
特異的に結合することができ標識物質が結合された抗体
を担持させた部位にまで測定用エレメント内の含浸をす
すませて抗体を被検液に混入し、さらに測定用エレメン
トの他方端側に位置し標準抗原が固定化された部位にま
で含浸がすすむと、標準抗原と測定対象抗原との間で抗
体を抗原抗体反応によりそれぞれの抗原濃度に応じて分
配して抗原抗体複合体を形成し、標準抗原が固定化され
た部位の抗原抗体複合体に含まれる標識物質の量の測定
を行い、測定対象抗原の濃度を標識物質の量より換算す
ることとしたものである。

【００４６】この構成により、操作を簡単なものとする
ことができるので、抗原または抗体の濃度を迅速簡便に
低価格で測定することができるという作用を有する。

【００４７】請求項２に記載の免疫学的測定方法は、測
定用エレメントを用意し、測定対象抗体を含有する被検
液を測定用エレメントの一方端から負圧力または毛細管
現象により含浸させ、測定対象抗体と特異的に結合する
ことができ標識物質が結合された抗原を担持させた部位
にまで測定用エレメント内の含浸をすすませて抗原を被
検液に混入し、さらに測定用エレメントの他方端側に位
置し標準抗体が固定化された部位にまで含浸がすすむ
と、標準抗体と測定対象抗体との間で抗原を抗原抗体反
応によりそれぞれの抗体濃度に応じて分配して抗原抗体
複合体を形成し、標準抗体が固定化された部位の抗原抗
体複合体に含まれる標識物質の量の測定を行い、測定対
象抗体の濃度を前記標識物質の量より換算することとし
たものである。

【００４８】この構成により、操作を簡単なものとする
ことができるので、抗原または抗体の濃度を迅速簡便に
低価格で測定することができるという作用を有する。

【００４９】請求項３に記載の免疫学的測定方法は、脱
着自在なフィルタに測定対象抗原と同一種の標準抗原を
一定量固定化し、多孔質で液体を吸収する第１の吸収体
と第２の吸収体とが接触した状態で前記フィルタを挟ん
で配置し、測定対象抗原と特異的に結合することができ
標識物質を結合した抗体を含有した第３の吸収体を第２
の吸収体に接触した状態で配置し、被検液を導入するた
めの第４の吸収体を第３の吸収体に接触した状態で配置
し、全体を気密性の密閉部材で覆い、密閉部材の第４の
吸収体側に導入口を配置し、密閉部材の第１の吸収体側
に通気口を配置した測定用エレメントを用意し、測定対
象抗原を含有する被検液を測定用エレメントの導入口に
接触させ、被検液を負圧または毛細管現象により第４の
吸収体から第１の吸収体まで移動させ、第３の吸収体か
ら抗体を被検液中に放出させ、フィルタに固定化された
標準抗原と測定対象抗原とで抗体を抗原抗体反応により
それぞれの抗原濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を
形成させた後、フィルタを測定用エレメントより分離
し、フィルタの標識物質量の測定をおこない、測定対象
抗原の濃度を標識物質量より換算することとしたもので
ある。

【００５０】この構成により、別途作製され保存された
上記測定用エレメントを用いることで測定を簡便・迅速
化することができ、また、抗原抗体反応は被検液と測定
用エレメントの接触を行うときの一回であるため短時間
のうちに、かつ複数回の反応であるならば各反応間に必
要となる洗浄を不要化することができ、測定用エレメン
トの脱着自在なフィルタに固定化された一定量の標準抗
原と測定対象抗原によって、被検液が測定用エレメント
を通過する際に、放出用パッドから標準抗原と特異的に
結合することができ標識物質を結合した抗体が被検液に
溶解し、溶解した上記抗体をそれぞれの抗原濃度に応じ
て所定の割合に分配させ、分配された抗体の量と標識物
質との間には所定の関係があるため、フィルタと結合し
た標識物質量を測定することによって、測定対象抗原の
濃度を算出することができるという作用を有する。ここ
で、標準抗原としては、濃度既知の抗原である菌体やア
レルゲンの溶液が用いられる。標準抗原溶液の濃度は、
アレルゲンの場合には０．０００１μｇ／ｍＬ〜１００
μｇ／ｍＬ、好ましくは０．００１μｇ／ｍＬ〜１０μ
ｇ／ｍＬが用いられる。標準抗原の濃度は、アレルゲン
の場合０．００１μｇ／ｍＬよりも少なくなるにつれ、
充分な抗原量をフィルタに固定化することが不可能とな
る傾向が認めら、また、アレルゲンの場合１０μｇ／ｍ
Ｌよりも多くなるにつれ、吸着量が飽和して未反応の抗
原が増加し、経済性が悪くなるという傾向が認められる
ので、いずれも好ましくない。標準抗原溶液の溶媒とし
ては、りん酸緩衝液、ホウ酸緩衝液が用いられる。他の
溶液でｐＨを一定に保持することができるものでもよ
い。上記緩衝液に塩類、例えば塩化ナトリウム、塩化カ
リウムを溶解して使用するのが好ましい。緩衝液のｐＨ
としてはｐＨ５〜ｐＨ９、好ましくはｐＨ６〜ｐＨ８が
用いられる。緩衝液のｐＨがｐＨ６より小さくなるにつ
れ、安定な抗原の非特異吸着を測定用反応容器に発生さ
せることができないという傾向が認められ、またｐＨ８
よりも大きくなるにつれても、安定な抗原の非特異吸着
を測定用反応容器に発生させることができないという傾
向が認められるので、いずれも好ましくない。

【００５１】請求項４に記載の免疫学的測定方法は、脱
着自在なフィルタに測定対象抗体と同一種の標準抗体を
一定量固定化し、多孔質で液体を吸収する第１の吸収体
と第２の吸収体とが接触した状態でフィルタを挟んで配
置し、測定対象抗体と特異的に結合することができ標識
物質を結合した抗原を含有した第３の吸収体を第２の吸
収体に接触した状態で配置し、被検液を導入するための
第４の吸収体を第３の吸収体に接触した状態で配置し、
全体を気密性の密閉部材で覆い、密閉部材の第４の吸収
体側に導入口を配置し、密閉部材の第１の吸収体側に通
気口を配置した測定用エレメントを用意し、測定対象抗
体を含有する被検液を測定用エレメントの導入口に接触
させ、被検液を負圧または毛細管現象により第４の吸収
体から第１の吸収体まで移動させ、第３の吸収体から抗
原を被検液中に放出させ、フィルタに固定化された標準
抗体と測定対象抗体との間で抗原を抗原抗体反応により
それぞれの抗体濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を
形成させた後、フィルタを測定用エレメントより分離
し、フィルタの標識物質量の測定をおこない、測定対象
抗体の濃度を標識物質量より換算することとしたもので
ある。

【００５２】この構成により、別途作製され保存された
上記測定用エレメントを用いることで測定を簡便・迅速
化することができ、また、抗原抗体反応は被検液と測定
用反応容器の接触を行うときの一回であるため短時間の
うちに、かつ複数回の反応であるならば各反応間に必要
となる洗浄を不要化することができ、測定用反応容器に
固定化された一定量の標準抗体と測定対象抗体によっ
て、被検液に添加した上記抗原をそれぞれの抗体濃度に
応じて所定の割合に分配させ、分配された抗原の量と標
識物質との間には所定の関係があるため、測定用反応容
器または被検液と結合した標識物質量を測定することに
よって、測定対象抗体の濃度を算出することができると
いう作用を有する。ここで、標準抗体としてはとしては
抗原である菌体またはアレルゲンに特異的な結合能を有
するモノクロナール（またはポリクロナール）抗体が用
いられる。標準抗体溶液の濃度は０．０００１μｇ／ｍ
Ｌ〜１００μｇ／ｍＬ、好ましくは０．００１μｇ／ｍ
Ｌ〜１０μｇ／ｍＬが用いられる。標準抗体の濃度が
０．００１μｇ／ｍＬよりも少なくなるにつれ、充分な
抗体量を測定用反応容器に接触し非特異吸着により固定
化することが不可能となる傾向が認めら、また、１０μ
ｇ／ｍＬよりも多くなるにつれ、吸着量が飽和して未反
応の抗体が増加し、経済性が悪くなる傾向が認められる
ので、いずれも好ましくない。

【００５３】請求項５に記載の免疫学的測定方法は、請
求項１乃至４のいずれか１に記載の免疫学的測定方法に
おいて、負圧力を発生する負圧発生手段を通気口に接続
して、被検液の移動を行うこととしたものである。

【００５４】この構成により、安定的な被検液の移動
や、速い被検液の移動、自由度の高い配置方向の提供を
行うことができるため、精度良く、迅速に、自由度高く
抗原または抗体を測定することができるという作用を有
する。

【００５５】請求項６に記載の免疫学的測定方法は、請
求項１乃至５のいずれか１に記載の免疫学的測定方法に
おいて、標識物質が酵素であって、標識物質量の測定を
吸光度を測定することにより行うこととしたものであ
る。

【００５６】この構成により、酵素を利用することで、
迅速に、容易に、安価に抗原または抗体を測定すること
ができるという作用を有する。ここで、酵素としては、
ペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、アルカリフォ
スファターゼが用いられる。

【００５７】請求項７に記載の免疫学的測定方法は、請
求項１乃至５のいずれか１に記載の免疫学的測定方法に
おいて、標識物質が蛍光物質であって、標識物質量の測
定を蛍光強度により行うこととしたものである。

【００５８】この構成により、蛍光物質を利用すること
で、迅速に、容易に抗原または抗体を測定することがで
きるという作用を有する。

【００５９】請求項８に記載の免疫学的測定方法は、請
求項６に記載の免疫学的測定方法において、標識物質の
酵素を第１の酵素としたとき、フィルタの固相には抗原
または抗体に加えて第２の酵素が固定化されていること
としたものである。

【００６０】この構成により、酵素を利用することで、
標識物質としての酵素の基質を第２の酵素により供給す
ることで測定用発色基質液の調整を簡便にできるという
作用を有する。ここで、標識物質としての酵素はペルオ
キシダーゼで、第２の酵素はグルコースオキシダーゼで
の組み合わせ等を用いることができる。

【００６１】請求項９に記載の免疫学的測定方法は、請
求項３乃至８のいずれか１に記載の免疫学的測定方法に
おいて、フィルタの形状が多孔質状、不織布状、網状の
いずれか１種類の形状または複数種類が複合した形状で
あることとしたものである。

【００６２】この構成により、抗原または抗体が吸着す
る単位体積当たりの表面積を大きくすることができ、抗
原抗体反応を短時間かつ容易に行うことができるという
作用を有する。

【００６３】請求項１０に記載の免疫学的測定方法は、
請求項３乃至９のいずれか１に記載の免疫学的測定方法
において、フィルタがニトロセルロース、ポリスチレ
ン、ガラスのいずれか１種類の材質または複数種類が複
合した材質であることとしたものである。

【００６４】この構成により、フィルタへの抗原または
抗体の単位面積当たりの吸着量を大きくすることがで
き、抗原抗体反応を短時間かつ容易に行うことができる
という作用を有する。

【００６５】請求項１１に記載の免疫学的測定方法は、
請求項３乃至１０のいずれか１に記載の免疫学的測定方
法において、フィルタの粒子保持能が０．１μｍ〜１０
０μｍであることとしたものである。

【００６６】この構成により、被検液が濁質を含有する
ために測定への影響がある場合、フィルターの最上流部
にて該濁質を捕捉し、抗原抗体反応をフィルタ内部にお
いて濁質の影響を排除して行え、濁質除去等の前処理を
必要としないため測定を簡便かつ短時間に行うことがで
きるという作用を有する。

【００６７】請求項１２に記載の免疫学的測定方法は、
請求項３乃至１１のいずれか１に記載の免疫学的測定方
法において、測定用エレメントを複数複合することとし
たものである。

【００６８】この構成により、複数の被検液を同時に測
定できるようになり、一検体当たりの測定を簡便かつ短
時間に行うことができるという作用を有する。

【００６９】請求項１３に記載の免疫学的測定方法は、
請求項１乃至１２のいずれか１に記載の免疫学的測定方
法において、免疫反応および酵素反応の温度を一定に保
持する温度保持装置を備えることとしたものである。

【００７０】この構成により、反応が最適化し、安定化
されるようになり、測定を短時間に安定して行うことが
できるという作用を有する。

【００７１】請求項１４に記載の免疫学的測定用エレメ
ントは、測定対象抗原と同一種の標準抗原を一定量固定
化した脱着自在なフィルタと、フィルタに近接して配置
された吸水パッドと、フィルタの前記吸水パッドと逆側
に近接するように配置された連絡用パッドと、連絡用パ
ッドのフィルタと逆側に近接するように配置され、測定
対象抗原と特異的に結合することができ標識物質を結合
した抗体を含有した放出用パッドと、放出用パッドの連
絡用パッドと逆側に近接するように配置された導入用パ
ッドと、全体を覆う気密性の測定用エレメント支持体
と、導入用パッドの放出用パッドと逆側に配置された導
入口と、吸水パッドのフィルタと逆側に配置された通気
口とを有することとしたものである。

【００７２】この構成により、測定対象抗原を含有する
被検液をサンプル容器に注ぎ、被検液と測定用エレメン
トの導入口を接触させ、被検液を負圧または毛細管現象
により上昇させ、放出用パッドから抗体を被検液中に放
出させ、フィルタに固定化された標準抗原と測定対象抗
原との間で抗体を抗原抗体反応によりそれぞれの抗原濃
度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成させた後、フ
ィルタを測定用エレメントより分離し、フィルタの標識
物質量の測定をおこない、測定対象抗原の濃度を該標識
物質量より換算することができるという作用を有する。
また、免疫学的測定用エレメントにより測定を簡便・迅
速化することができ、さらに、抗原抗体反応は被検液と
測定用反応容器の接触を行うときの一回であるため短時
間のうちに、かつ複数回の反応であるならば各反応間に
必要となる洗浄を不要化することができ、測定用反応容
器に固定化された一定量の標準抗原と測定対象抗原によ
って、被検液に添加した抗体をそれぞれの抗原濃度に応
じて所定の割合に分配させ、分配された抗体量と標識物
質には所定の関係があるため、測定用反応容器または被
検液と結合した標識物質量を測定することによって、測
定対象抗原の濃度を算出することができるという作用を
有する。

【００７３】請求項１５に記載の免疫学的測定用エレメ
ントは、測定対象抗体と同一種の標準抗体を一定量固定
化した脱着自在なフィルタと、フィルタに近接して配置
された吸水パッドと、フィルタの吸水パッドと逆側に近
接するように配置された連絡用パッドと、連絡用パッド
のフィルタと逆側に近接するように配置され、測定対象
抗体と特異的に結合することができ標識物質を結合した
抗原を含有した放出用パッドと、放出用パッドの連絡用
パッドと逆側に近接するように配置された導入用パッド
と、全体を覆う気密性の測定用エレメント支持体と、導
入用パッドの放出用パッドと逆側に配置された導入口
と、吸水パッドのフィルタと逆側に配置された通気口と
を有することとしたものである。

【００７４】この構成により、測定対象抗体を含有する
被検液をサンプル容器に注ぎ、被検液と測定用エレメン
トの導入口を接触させ、被検液を負圧力または毛細管現
象により上昇させ、放出用パッドから抗原を被検液中に
放出させ、フィルタに固定化された標準抗体と測定対象
抗体との間で抗原を抗原抗体反応によりそれぞれの抗体
濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成させた後、
フィルタを測定用エレメントより分離し、フィルタの標
識物質量の測定をおこない、測定対象抗体の濃度を該標
識物質量より換算することができるという作用を有す
る。また、免疫学的測定用エレメンにより測定を簡便・
迅速化することができ、さらに、抗原抗体反応は被検液
と測定用反応容器の接触を行うときの一回であるため短
時間のうちに、かつ複数回の反応であるならば各反応間
に必要となる洗浄を不要化することができ、測定用反応
容器に固定化された一定量の標準抗体と測定対象抗体に
よって、被検液に添加した抗原をそれぞれの抗体濃度に
応じて所定の割合に分配させ、分配された抗原量と標識
物質との間には所定の関係があるため、測定用反応容器
または被検液と結合した標識物質量を測定することによ
って、測定対象抗体の濃度を算出することができるとい
う作用を有する。

【００７５】以下、本発明の実施の形態について、図１
〜図１２を用いて説明する。

【００７６】（実施の形態１）本発明の実施の形態１で
は、抗体が特異的に結合する抗原決定基を有するアレル
ゲンを抗原とし、分離用固体を使用してアレルゲン濃度
を測定する免疫学的測定方法および免疫学的測定装置に
ついて説明する。以下抗原の測定について説明するが、
例えばアレルゲン（抗原）に対する血清中の抗体量を測
定する等、抗原と抗体を逆にすることも可能である。こ
うした理由から抗体の測定に関する説明は省略する。

【００７７】図１は本発明の実施の形態１による免疫学
的測定用エレメントの概略断面図であり、図４（ａ）、
（ｂ）は本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エ
レメントを使用した反応工程の接触のステップを説明す
るためのエレメント・サンプル容器の概略断面図、図５
（ａ）、（ｂ）は本発明の実施の形態１による免疫学的
測定用エレメントを使用した反応工程の洗浄のステップ
を説明するためのエレメント・サンプル容器の概略断面
図、図６（ａ）、（ｂ）は本発明の実施の形態１による
免疫学的測定用エレメントを使用した測定工程の発色の
ステップを説明するための測定容器の概略断面図、図１
０は本発明の実施の形態１における反応工程の発色ステ
ップでのフィルタと測定容器の部分拡大図、図１１は本
発明の実施の形態１による免疫学的測定用エレメントの
断面図である。

【００７８】図１、図４〜図６、図１０および図１１に
おいて、１は負圧力または毛細管現象により被検液を含
浸させることができる多孔質状、不織布状、網状等の形
状をもつ含浸体から構成された導入用パッド（第４の吸
収体）、２は同じく含浸体から構成された放出用パッド
（第３の吸収体）、３は同じく含浸体から構成された連
絡用パッド（第１の吸収体）、４は同じく含浸体から構
成され、後記する免疫学的測定用エレメントに着脱自在
のフィルタ、５はフィルタ４を物理的に支持するための
フィルタ支持枠、６はフィルタ操作用ハンドル、７は同
じく含浸体から構成された吸水パッド（第２の吸収
体）、２１は通気口、２２は導入口、３０は毛細管現象
を利用できるように周囲を覆う気密性の密閉部材である
測定用エレメント支持体、３３は免疫学的測定用エレメ
ント、３４は通気口２１が設けられた測定用エレメント
上部蓋、３５は通気口２１が設けられた測定用エレメン
ト下部蓋、３６はフィルタ支持枠５と測定用エレメント
支持体３０をシールするためにフィルタ支持枠５に設け
たＯリング、４０は被検液７０、洗浄液７１（後述）等
を保持し、免疫学的測定用エレメント３３の導入口２２
に被検液７０、洗浄液７１等を接触させるためのサンプ
ル容器、４１はフィルタ４への酵素標識抗体９４（後
述）の反応の程度を測定するための測定容器、７０は標
準液（または被検液）、７１は洗浄液、７２は基質溶
液、９２は測定対象抗原（被検液由来の抗原）、９３は
フィルタ４に固定化させた標準抗原、９４は酵素標識抗
体、９５は標識物質としての第１の酵素、９６は第２の
酵素である。

【００７９】また、図２は本発明の実施の形態１による
免疫学的測定用エレメントを使用した主要な工程を示す
工程図であり、図３は本発明の実施の形態１による免疫
学的測定用エレメントを使用した主要なステップを示す
ステップ図である。

【００８０】図２、図３において、５０はＡ−１．測定
用エレメント作製工程、５１はＡ−２．反応工程、５２
はＡ−３．測定工程、５３はＡ−４．演算工程、５４は
Ａ−２（ａ）接触のステップ、５５はＡ−２（ｂ）．洗
浄のステップ、５６はＡ−３（ｂ）．発色のステップで
ある。ここで、工程は大きな作業の流れを示し、ステッ
プは工程の中の比較的細かい作業の流れを示す。

【００８１】また、図７は本発明の実施の形態１におけ
るフィルタの斜視図であり、図８は本発明の実施の形態
１における免疫学的測定用エレメントの斜視図、図９は
本発明の実施の形態１における測定容器の斜視図であ
る。

【００８２】図７、図８および図９において、４は図１
等と同様のフィルタ、５は図１１と同様のフィルタ支持
枠、６は図１等と同様のフィルタ操作用ハンドル、２１
は図１等と同様の通気口、３０は図１等と同様の測定用
エレメント支持体、３１は測定用エレメント支持体３０
を連結するための測定用エレメント支持体連結枠、３２
は複数のフィルタひいてはフィルタ支持枠５を連結する
ためのフィルタ連結枠、３３は図１等と同様の免疫学的
測定用エレメント、４０は図４と同様のサンプル容器、
４１は図６と同様の測定容器、４２は容器、４３は容器
連結枠である。

【００８３】このように構成された免疫学的測定用エレ
メントについて、その機能、動作、使用法等を説明す
る。

【００８４】図１において、導入用パッド１は、測定用
エレメント支持体３０内部に被検液、洗浄液等を導き入
れ、さらに放出用パッド２へ液体を移動させるものであ
る。放出用パッド２は、その内部に酵素標識抗体９４が
含浸されており、導入用パッド１から導かれた液体へ酵
素標識抗体９４を放出し、連絡用パッド３へ液体を移動
させる。連絡用パッド３は放出用パッド２から導かれた
液体をフィルタ４へ移動させるものである。フィルタ４
には標準抗原９３（または抗体）が固定化されており、
標準抗原９３は連絡用パッド３から導かれた酵素標識抗
体９４と抗原抗体反応をおこない、汲水パッド７へ液体
を移動させる。フィルタ操作用ハンドル６はフィルタ４
を測定用エレメント支持体３０から分離するためにフィ
ルタ支持枠５の一端に設けたものである。吸水パッド７
はフィルタ４より導かれた液体を保持するためのもので
ある。

【００８５】また、通気口２１は、毛細管現象により被
検液、洗浄液等を上昇させるかまたは負圧力を発生させ
る機器と接続するために測定用エレメント支持体３０の
一端に設けた開口であり、導入口２２は、導入パッド１
に被検液、洗浄液等を導入するために測定用エレメント
支持体３０の他端に設けた開口である。測定用エレメン
ト支持体３０は、導入用パッド１、放出用パッド２、連
絡用パッド３、フィルタ４、吸水パッド７等を被覆し一
体化するためのものであり、液体が透過しない材質で構
成される。

【００８６】さらに、第１の酵素９５は酵素標識抗体９
４に結合させた標識物質としての酵素であり、第２の酵
素９６はフィルタ４に固定化させた酵素である。フィル
タ４に固定化させた酵素９６は標識物質としての酵素標
識抗体９４の基質が不安定な物質で要時調整を必要とす
る場合に用いるものであり、前記基質を比較的安定な水
溶性物質から生産するものを使用することができる。

【００８７】本実施の形態における免疫学的測定方法は
図２に示すように４段階の工程（Ａ−１．測定用エレメ
ント作製工程５０）、（Ａ−２．反応工程５１）、（Ａ
−３．測定工程５２）および（Ａ−４．演算工程５３）
から構成される。

【００８８】免疫学的測定用エレメント３３はＡ−１．
測定用エレメント作製工程５０によって作製し、ユーザ
が使用できるように用意される。このＡ−１．測定用エ
レメント作製工程５０について説明する。

【００８９】Ａ−１．測定用エレメント作製工程５０
は、標準抗原９３をフィルタ４に固定化し、酵素標識抗
体９４を放出用パッド２に保持し、導入用パッド１、連
絡用パッド３、吸水パッド７を測定用エレメント支持体
３０で密閉支持して免疫学的測定用エレメント３３を完
成させる工程である。以下に示す（ａ）〜（ｊ）のステ
ップから構成され、（ａ）〜（ｇ）が標準抗原９３をフ
ィルタ４に固定化するステップ、（ｈ）〜（ｉ）が酵素
標識抗体９４を放出用パッド２に保持させるステップ、
（ｊ）が免疫学的測定用エレメント３３を組み立てるス
テップである。

【００９０】Ａ−１（ａ）は標準抗原９３をフィルタ４
に固定化するステップである。フィルタ４に標準抗原９
３の溶液を接触させ、フィルタ４の表面および細孔内に
標準抗原９３を非特異的に固定化する。標準抗原９３は
測定対象となる抗原（測定対象抗原）で単一種のアレル
ゲンの溶液を使用する。

【００９１】フィルタ４は、多孔質状、不織布状、網
状、のいずれか一種類の形状または複数種類が複合した
形状で、ニトロセルロース、ポリスチレン、ガラス、等
のいずれか一種類の材質または複数種類が複合した材質
で、粒子保持能が０．１μｍ以上１００μｍ以下であ
り、独立した単一又は複数のフィルタの集合体でもよ
い。例えば、図７に示すようにフィルタ４をフィルタ操
作用ハンドル６と一体となったフィルタ支持枠５で支持
し、さらに８個のフィルタ操作用ハンドル６をフィルタ
連結枠３２で一体に構成したものが使用できる。

【００９２】標準抗原９３溶液としては、測定対象と同
一種の抗原であるアレルゲンの溶液が用いられる。ここ
でいう同一種とは抗体が結合する抗原決定基を有するこ
とである。標準抗原９３の濃度は溶液は０．０００１μ
ｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ、好ましくは０．００１μ
ｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬが用いられる。標準抗原９３
の濃度が０．００１μｇ／ｍＬよりも少なくなるにつ
れ、充分な抗原量をフィルタ４に固定化することが不可
能となる傾向が認めら、また、１０μｇ／ｍＬよりも多
くなるにつれ、吸着量が飽和して未反応の抗原が増加
し、経済性が悪くなるという傾向が認められるので、い
ずれも好ましくない。

【００９３】標準抗原９３溶液の溶媒としては、りん酸
緩衝液、ホウ酸緩衝液が用いられる。他の溶液でｐＨを
一定に保持することができるものでもよい。上記緩衝液
に塩類、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウムを溶解し
て使用するのが好ましい。緩衝液のｐＨとしてはｐＨ５
〜ｐＨ９、好ましくはｐＨ６〜ｐＨ８が用いられる。

【００９４】標準抗原９３溶液によるフィルタ４の処理
条件としてはｐＨ５〜ｐＨ９、処理時間１０分〜４８時
間、処理温度４℃〜４０℃、好ましくはｐＨ６〜ｐＨ
８、処理時間３０分〜２時間、処理温度４℃〜３０℃が
用いられる。この条件で浸漬処理することによりフィル
タ４に標準抗原９３であるアレルゲンを高密度で非特異
吸着させることが可能となる。

【００９５】Ａ−１（ｂ）は未反応の標準抗原９３を洗
浄除去するステップである。緩衝液で、フィルタ４を好
ましくは１回〜１０回、更に好ましくは２回〜５回洗浄
することで、未反応の標準抗原９３を効率的に除去する
ことができ、以降の測定の精度を向上させることができ
る。

【００９６】Ａ−１（ｃ）は第２の酵素９６をフィルタ
４に固定化するステップである。フィルタ４に酵素９６
を接触させ、フィルタ４の表面および細孔内に酵素９６
を非特異的に固定化する。このステップは測定用の発色
基質溶液調整が簡便となるように行うステップであり、
必要に応じて操作を行う。

【００９７】第２の酵素９６は測定に使用する酵素標識
抗体９４に結合した第１の酵素９５の基質を生成するも
のを使用する。例えば、酵素９５にペルオキシダーゼを
使用する場合、その基質である過酸化水素を生成させる
グルコースオキシダーゼを使用することができる。この
例の場合、液体の状態で供給する必要のある過酸化水素
ではなく固体の粉末状等の形態でグルコースを供給する
ことで過酸化水素を生成させ、生成した該過酸化水素を
基質としてペルオキシダーゼによる反応を起こさせるこ
とが可能となり、測定用の発色基質溶液調整が簡便とな
る。

【００９８】酵素９６溶液の濃度は０．０００１μｇ／
ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ、好ましくは０．００１μｇ／
ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬが用いられる。酵素９６の濃度が
０．００１μｇ／ｍＬよりも少なくなるにつれ、充分な
抗原量をフィルタ４に固定化することが不可能となる傾
向が認めら、また、１０μｇ／ｍＬよりも多くなるにつ
れ、吸着量が飽和して未反応の抗原が増加し、経済性が
悪くなるという傾向が認められるので、いずれも好まし
くない。

【００９９】酵素９６溶液の溶媒としては、りん酸緩衝
液、ホウ酸緩衝液が用いられる。他の溶液でｐＨを一定
に保持することができるものでもよい。上記緩衝液に塩
類、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウムを溶解して使
用するのが好ましい。緩衝液のｐＨとしてはｐＨ５〜ｐ
Ｈ９、好ましくはｐＨ６〜ｐＨ８が用いられる。酵素９
６溶液によるフィルタ４の処理条件としてはｐＨ５〜ｐ
Ｈ９、処理時間１０分〜４８時間、処理温度４℃〜４０
℃、好ましくはｐＨ６〜ｐＨ８、処理時間３０分〜２時
間、処理温度４℃〜３０℃が用いられる。この条件で浸
漬処理することによりフィルタ４に酵素９６を高密度で
非特異吸着させることが可能となる。

【０１００】Ａ−１（ｄ）は未反応の酵素９６溶液を洗
浄除去するステップである。このステップはＡ−１
（ｃ）と同様、測定用の発色基質溶液調整が簡便となる
ように行うステップであり、必要に応じて操作を行う。
緩衝液で、フィルタ４を好ましくは１回〜１０回、更に
好ましくは２回〜５回洗浄することで、未反応の酵素９
６を効率的に除去することができ、以降の測定の精度を
向上させることができる。

【０１０１】Ａ−１（ｅ）はブロッキング剤でフィルタ
４の非特異吸着面を被覆するステップである。フィルタ
４にブロッキング剤溶液を接触させ、フィルタ４の非特
異吸着面を被覆した。ブロッキング剤溶液によるフィル
タ４の処理条件としてはｐＨ５〜ｐＨ９、処理時間１０
分〜４８時間、処理温度４℃〜４０℃、好ましくはｐＨ
６〜ｐＨ８、処理時間３０分〜２時間、処理温度５℃〜
３０℃が用いられる。この条件で浸漬処理することによ
りフィルタ４に残存する非特異吸着を起こす表面にブロ
ッキング剤を非特異吸着させ、以後他の有機物の非特異
吸着が極力おこらないようになり、より精度の高い測定
が可能となる。

【０１０２】ブロッキング剤として、牛血清アルブミ
ン、牛乳由来カゼイン、ゼラチン等のタンパク質を含有
したブロッキング剤溶液を使用する。ブロッキング剤溶
液の溶媒としてはりん酸緩衝液、ホウ酸緩衝液が用いら
れる。他の溶液でｐＨを一定に保持することができるも
のでもよい。上記緩衝液に塩類、例えば塩化ナトリウ
ム、塩化カリウムを溶解して使用するのが好ましい。緩
衝液のｐＨとしてはｐＨ５〜ｐＨ９、好ましくはｐＨ６
〜ｐＨ８が用いられる。緩衝液のｐＨがｐＨ６より小さ
くなるにつれ、安定なブロッキング剤の非特異吸着を測
定用反応容器に発生させることができないという傾向が
認められ、またｐＨ８よりも大きくなるにつれても、安
定な抗ブロッキング剤の非特異吸着を測定用反応容器に
発生させることができないという傾向が認められるの
で、いずれも好ましくない。

【０１０３】Ａ−１（ｆ）は未反応のブロッキング剤を
洗浄除去するステップである。界面活性剤含有緩衝液
で、フィルタ４を１回〜１０回、好ましくは２回〜５回
洗浄することで、未反応のブロッキング剤を効率的に除
去することができ以降の測定の精度を向上させることが
できる。ここで、界面活性剤としてポリオキシエチレン
（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレ
ン（８０）ソルビタンモノラウレートを含有させて使用
するものである。界面活性剤の濃度は好ましくは０．０
０１Ｗ／Ｖ％〜１Ｗ／Ｖ％、好ましくは０．０１Ｗ／Ｖ
％〜０．２Ｗ／Ｖ％が用いられる。界面活性剤の濃度が
０．０１Ｗ／Ｖ％より少なくなるにつれ未反応のタンパ
ク質等を効率的に除去することができず以降の測定の精
度を低下させる傾向が認められ、また、０．２Ｗ／Ｖ％
より多くなるにつれ、発泡が著しく起こるため洗浄し難
くなるという傾向が認められるので、いずれも好ましく
ない。

【０１０４】Ａ−１（ｇ）はフィルタ４を保存可能とす
る処理を行うステップである。保存手段として凍結乾燥
法、風乾等を用いて、フィルタ４を長期安定化した状態
とする。

【０１０５】Ａ−１（ｈ）は酵素標識抗体９４を放出用
パッド２に含浸させるステップである。放出用パッド２
に、測定対象となる抗原（アレルゲン）に特異的に結合
する抗体９１（図１５参照）に酵素９５を結合させた酵
素標識抗体９４の溶液を接触させて含浸させる。

【０１０６】放出用パッド２は多孔質状、不織布状、網
状のいずれか一種類の形状または複数種類が複合した形
状でガラス、セルロース、ポリプロピレン、フッ素樹脂
等のいずれか一種類の材質または複数種類が複合した材
質で非特異的結合が極力起こらない様に例えばポリビニ
ルアルコール等で正面を親水化処理したもの等が使用で
きる。

【０１０７】酵素標識抗体９４溶液の濃度は０．０００
１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ、好ましくは０．００
１μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬが用いられる。酵素標識
抗体９４の濃度が０．００１μｇ／ｍＬよりも少なくな
るにつれ、充分な酵素標識抗体９４をフィルタ４に供給
することが不可能となる傾向が認めら、また、１０μｇ
／ｍＬよりも多くなるにつれ、フィルタ４に固定化した
標準抗原９３への酵素標識抗体９４の吸着量が飽和し、
未反応の酵素標識抗体９４が増加し、経済性が悪くなる
という傾向が認められるので、いずれも好ましくない。
酵素標識抗体９４溶液の溶媒としては、Ａ−１（ａ）に
示す標準抗原９３溶液と同様のものが使用できる。

【０１０８】Ａ−１（ｉ）は酵素標識抗体９４が含浸し
た放出用パッド２を保存可能とする処理を行うステップ
である。保存手段として凍結乾燥法、風乾等を用いて、
フィルタ４を長期安定化した状態とする。

【０１０９】Ａ−１（ｊ）は免疫学的測定測定用エレメ
ント３３を組み立てるステップである。フィルタ４、放
出用パッド２、導入用パッド１、連絡用パッド３、吸水
パッド７を組み合わせて測定用エレメント支持体３０で
密閉し、免疫学的測定用エレメント３３とする。

【０１１０】導入用パッド１と連絡用パッド３は多孔質
状、不織布状、網状のいずれか一種類の形状または複数
種類が複合した形状でガラス、セルロース、ポリプロピ
レン、フッ素樹脂等のいずれか一種類の材質または複数
種類が複合した材質で非特異的結合が極力起こらない様
に例えばポリビニルアルコール等で正面を親水化処理し
たもの等が使用できる。

【０１１１】吸水パッド７は多孔質状、不織布状、網状
のいずれか一種類の形状または複数種類が複合した形状
でガラス、セルロース、ポリプロピレン、フッ素樹脂等
のいずれか一種類の材質または複数種類が複合した材質
のもの等が使用できる。

【０１１２】組み上がった免疫学的測定エレメント３３
の概略断面図を図１に、その斜視図を図８に示す。

【０１１３】次に、Ａ−１．測定エレメント作製工程５
０で作製された免疫学的測定用エレメント３３を用い
て、アレルゲン濃度を測定する本発明の実施の形態１に
よる免疫学的測定方法の（Ａ−２．反応工程５１）、
（Ａ−３．測定工程５２）、（Ａ−４．演算工程５３）
について説明する。

【０１１４】まずＡ−２．反応工程５１について説明す
る。

【０１１５】これは抗原量に比例した量の酵素標識抗体
９４を免疫学的測定用エレメント３３のフィルタ４に固
定化された標準抗原９３と被検液等に含まれる抗原（測
定対象抗原）９２とに分配させ、分配させた酵素標識抗
体９４を分離する工程である。以下に示す（ａ）〜
（ｃ）のステップから構成される。

【０１１６】Ａ−２（ａ）は測定用エレメントと被検液
を接触させるステップ５４である（図３）。

【０１１７】図４（ａ）に示すように、サンプル容器４
０に標準液あるいは被検液７０を定量注ぎ、測定用エレ
メントの導入口２２を標準液あるいは被検液７０に接触
させる。標準液あるいは被検液７０は毛細管現象によっ
て上昇するが、必要があれば、測定用エレメント支持体
３０の通気口２１から負圧力を供給する。負圧力の供給
手段としてはシリンジを測定用エレメント支持体３０の
通気口２１に接続してシリンジの内筒を動かし、シリン
ジ外筒と内筒で構成される空間を大きくする方法や真空
ポンプのサクション側に測定用エレメント支持体３０の
通気口２１を接続して真空ポンプで発生する負圧力を供
給する方法等が考えられ、安定的な標準液あるいは被検
液７０の移動や、速い標準液あるいは被検液７０の移
動、自由度の高い測定用エレメント支持体３０の配置方
向の提供を行うことができるため精度良く、迅速に、自
由度高く抗原または抗体を測定することができる。標準
液により得られたデータを基に検量線を作成し、この検
量線を利用して被検液の濃度を算出する。

【０１１８】標準液あるいは被検液７０は毛細管現象ま
たは負圧力により測定用エレメント支持体３０を上昇
し、導入用パッド１を経由して連絡用パッド２に達す
る。連絡用パッド２において酵素標識抗体９４が標準液
あるいは被検液７０に溶解する。さらに標準液あるいは
被検液７０は上昇して連絡用パッド３を経由してフィル
タ４に達する。フィルタ４において、酵素標識抗体９４
は、フィルタ４に固定化された標準抗原９３の濃度と、
標準液あるいは被検液７０中の抗原（測定対象抗原）の
濃度とに応じて分配される。この後、図４（ｂ）に示す
ように、さらに標準液あるいは被検液７０は上昇して吸
水パッド７に到達する。

【０１１９】サンプル容器４０は、例えば図９に示すよ
うに容器４２を容器連結枠４３で一体に構成した形状の
もの等が使用できる。その材質としてはポリプロピレ
ン、ポリエチレン、フッ素樹脂等、タンパク質との非特
異吸着が起こりにくいものが使用できる。材質に関わら
ず、タンパク質との非特異吸着を低減させる処理を施し
て使用することもできる。

【０１２０】Ａ−２（ｂ）は免疫学的測定用エレメント
３３を洗浄するステップ５５である。

【０１２１】図５（ａ）に示すように、サンプル容器４
０に洗浄液７１を定量注ぎ、免疫学的測定用エレメント
３３の導入口２２を洗浄液７１に接触させる。必要があ
れば、測定用エレメント支持体３０の通気口２１から負
圧を供給する。洗浄液７１は毛細管現象または負圧によ
り測定用エレメント支持体３０内を導入用パッド１、連
絡用パッド２、連絡用パッド３、フィルタ４、吸水パッ
ド７まで上昇し、上昇する間に測定用エレメント支持体
３０内の特異吸着していない酵素標識抗体９４の大部分
を図５（ｂ）に示すように、吸水パッド７に移行させ
る。洗浄液７１としては例えば、Ａ−１（ｆ）ステップ
で示した界面活性剤含有緩衝液が使用できる。サンプル
容器４０はＡ−２（ａ）ステップで示したサンプル容器
４０と同じものが使用できる。

【０１２２】Ａ−２（ｃ）は免疫学的測定用エレメント
３３とフィルタ４とを分離するステップである。免疫学
的測定用エレメント３３からフィルタ４をフィルタ操作
用ハンドル６を利用して分離する。

【０１２３】次に、Ａ−３．測定工程５２について説明
する。

【０１２４】これは、フィルタ４に結合した酵素標識抗
体９４と発色基質を添加して酵素反応で発色させ、発色
の度合いを測定する工程である。以下に示す（ａ）〜
（ｃ）のステップから構成される。

【０１２５】Ａ−３（ａ）はフィルタ４と基質溶液７２
を接触させるステップである。図６（ａ）に示すよう
に、測定容器４１に基質溶液７２を一定量注ぎ、フィル
タ４を基質溶液７２に接触させる。例えば、図１０に示
すように複数個を同時に測定することもできる。基質溶
液７２は溶質として標識物質に応じた発色基質を含有
し、発色基質としては例えば標識物質が酵素９５でペル
オキシダーゼの場合はオルトフェニレンジアミン二塩酸
塩、３、３‘、５、５’−テトラメチルベンチジン、
２、２‘−アジノ−ビス、３−エチルベンゾチアゾリン
−６−スルホン酸二アンモニウム塩、５−アミノサリチ
ル酸等が使用でき、また、基質溶液７２は基質として過
酸化水素を含有し、溶媒としては緩衝液を使用し、ｐＨ
５．０±０．１の０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液等が
使用できる。また、過酸化水素を発生する酵素９６がフ
ィルタ４に固定化されている場合は、酵素９６の基質を
加えることで過酸化水素を要時調整することなく簡便に
基質溶液の調整ができる。例えば、酵素９５がペルオキ
シダーゼの場合、酵素９６としてグルコースオキシダー
ゼ、その基質としてグルコースを使用することができ
る。

【０１２６】測定容器４１としては、例えば、図９に示
すように容器４２を容器連結枠４３で一体に構成した形
状のもの等が使用できる。その材質としてはポリスチレ
ン、ポリエチレン、ポリカーボネート、アクリル樹脂等
の光学的に透明な合成樹脂を用いて形成されたものが使
用できる。

【０１２７】Ａ−３（ｂ）は基質溶液７２を発色させる
ステップ５６である。

【０１２８】図６（ｂ）に示すように、測定容器４１内
の基質溶液７２中の発色基質がフィルタ４上の酵素９５
によって発色する。フィルタ４と基質溶液７２の反応条
件としては、反応時間１分〜６０分、反応温度１０℃〜
４０℃、好ましくは反応時間２分〜２０分、反応温度１
５℃〜３０℃が用いられる。この条件で反応させること
によりフィルタ４に残留している標識物質が発色基質か
ら酵素反応によって色素を効率的に生成させることが可
能となる。反応時間が２分より短くなるにつれ十分な発
色が得られなくなるという傾向が認められ、また、２０
分より長くなるにつれ、測定感度が低下する傾向が認め
られるので、いずれも好ましくない。反応温度が１５℃
より低くなるにつれ、酵素の活性が低下するという傾向
が認められ、また、３０℃より高くなるにつれ、酵素の
活性が低下する傾向が認められるので、いずれも好まし
くない。

【０１２９】Ａ−３（ｃ）は酵素反応を停止させるステ
ップである。あらかじめ反応停止液を測定容器４１に適
量添加し、酵素反応を停止させる。反応停止液は溶質と
して標識物質に応じた反応停止剤を含有し、反応停止剤
として硫酸、塩酸、硝酸、リン酸、水酸化ナトリウム等
が用いられる。

【０１３０】Ａ−３（ｄ）は発色波長における発色の度
合いの測定ステップである。測定容器内で発色した色素
が特異的に吸収する波長の光を吸光度として吸光光度計
で測定する。

【０１３１】次に、Ａ−４．演算工程５３について説明
する。

【０１３２】これは標準抗原溶液の検量線より抗原濃度
の換算を行う工程である。以下に示す（ａ）のステップ
から構成される。

【０１３３】Ａ−４（ａ）は換算ステップである。Ａ−
１．工程５０〜Ａ−３．工程５２の操作により別途求め
た標準抗原溶液の検量線を使用して、被検液の吸光度よ
り被検液の濃度を演算し算出する。

【０１３４】なお、以上の説明では、抗原の測定につい
て説明したが、抗原と抗体を逆にして抗体の測定につい
ても同様に実施可能である。

【０１３５】以上のように本実施の形態によれば、供給
者側で反応済み免疫学的測定用エレメント３３を作製
し、免疫学的測定用エレメント３３と被検液とを反応さ
せることで、被検液の測定対象抗原９２の濃度に応じて
酵素標識抗体９４の分配をおこなはせ、免疫学的測定用
エレメント３３のフィルタ４に固定化した標準抗原９３
と結合した酵素標識抗体９４の標識物質の濃度を定量す
ることで被検液中の測定対象抗原の濃度を測定すること
が可能で、従来の測定方法、例えば、現在最も一般的に
利用されているサンドイッチＥＬＩＳＡ法と本実施の形
態における測定方法とを比較すると、サンドイッチＥＬ
ＩＳＡ法が２工程の抗原抗体反応工程、２工程の洗浄操
作を必要とするのに対して、本実施の形態における測定
方法は１工程の抗原抗体反応工程、洗浄操作は１工程で
簡易にでき、簡便、迅速、安価に抗原（または抗体）を
定量することができる特異的な免疫学的測定方法及び免
疫学的測定用エレメントを提供することができる。

【０１３６】

【実施例】本発明の実施例では、実施の形態１における
免疫学的測定方法及び実施の形態１による免疫学的測定
用エレメント３３を用いて、コナヒョウヒダニのアレル
ゲンであるｒＤｅｒｆＩＩの濃度の測定をおこなった。

【０１３７】図１２は本発明の実施例で作成したコナヒ
ョウヒダニのアレルゲンｒＤｅｒｆＩＩの検量線を示す
グラフである。実施の形態１における免疫学的測定方法
は、４段階の工程（Ａ−１．測定用エレメント作製工程
５０）、（Ａ−２．反応工程５１）、（Ａ−３．測定工
程５２）および（Ａ−４．演算工程５３）から構成され
る。

【０１３８】最初にＡ−１．測定用エレメント作製工程
５０について説明する。

【０１３９】工程５０のＡ−１（ａ）は標準抗原９３を
フィルタ４に固定化するステップである。

【０１４０】フィルタ４に標準抗原９３の溶液を接触さ
せ、フィルタ４の表面に標準抗原９３を非特異的に固定
化した。標準抗原９３としてコナヒョウヒダニの虫体由
来アレルゲンを大腸菌の遺伝子操作により生産させ精製
したｒＤｅｒｆＩＩを使用した。その希釈にはｐＨ７．
４±０．２のダルベッコりん酸緩衝生理食塩水（以下、
「ＰＢＳ」と記載する）を使用し、濃度は１μｇ／ｍＬ
に調整した。フィルタ４はニトロセルロ−ス製で、直径
５ｍｍで、粒子保持能が１０μｍのものを使用した。図
７に示すフィルタ４をフィルタ操作用ハンドル６と一体
となったフィルタ支持枠５で支持し、さらに８個のフィ
ルタ操作用ハンドル６をフィルタ連結枠３２で一体に構
成したものが使用した。標準抗原９３溶液によるフィル
タ４の処理条件はｐＨ７．４±０．２、処理時間２時
間、処理温度２５℃を用いた。

【０１４１】Ａ−１（ｂ）は未反応の標準抗原９３を洗
浄除去するステップである。緩衝液で、フィルタ４を３
回洗浄して、未反応の標準抗原９３を除去した。緩衝液
としてＰＢＳを用いた。

【０１４２】Ａ−１（ｃ）は第２の酵素９６をフィルタ
４に固定化するステップである。フィルタ４に酵素９６
を接触させ、フィルタ４の表面に酵素９６を非特異的に
固定化した。第１の酵素９５としてペルオキシダーゼを
使用したため、その基質である過酸化水素を生成させる
グルコースオキシダーゼを酵素９６として使用した。酵
素９６溶液の濃度は５μｇ／ｍＬ、溶媒としてＰＢＳを
用い、処理条件としてはｐＨ７．４±０．２、処理時間
２時間、処理温度２５℃で処理した。

【０１４３】Ａ−１（ｄ）は未反応の酵素９６溶液を洗
浄除去するステップである。緩衝液で、フィルタ４を３
回洗浄して、未反応の酵素９６を除去した。緩衝液とし
てＰＢＳを用いた。

【０１４４】Ａ−１（ｅ）はブロッキング剤でフィルタ
４の非特異吸着面を被覆するステップである。フィルタ
４にブロッキング剤溶液を接触させ、フィルタ４の非特
異吸着面を被覆した。ブロッキング剤溶液によるフィル
タ４の処理条件はｐＨ７．４±０．２、処理時間１時
間、処理温度２５℃を用いた。ブロッキング剤として、
１０ｇ／Ｌの牛血清アルブミンを混合したＰＢＳ溶液
（以下、「ＰＢＳ−Ｂ」と記載する）を使用した。

【０１４５】Ａ−１（ｆ）は未反応のブロッキング剤を
洗浄除去するステップである。界面活性剤含有緩衝液
で、フィルタ４を３回洗浄することで未反応のブロッキ
ング剤を除去した。界面活性剤含有緩衝液としてＰＢＳ
に０．０５ｗ／ｖ％ポリオキシエチレン（２０）ソルビ
タンモノラウレートを含有し、ｐＨ７．４±０．２の溶
液（以下、「ＰＢＳ−Ｔ」と記載する）を使用した。

【０１４６】Ａ−１（ｇ）はフィルタ４を保存可能とす
る処理を行うステップである。保存手段として風乾等を
用いて、フィルタ４を長期安定化した状態とした。

【０１４７】Ａ−１（ｈ）は酵素標識抗体９４を放出用
パッド２に含浸させるステップである。放出用パッド２
に酵素標識抗体９４として抗ＤｅｒｆＩＩマウスモノク
ロナールＩｇＧ抗体に西洋ワサビ由来のペルオキシダー
ゼを標識化した抗体（以下、「１３Ａ４ＰＯ」と記載す
る）を使用し、１μｇ／ｍＬの１３Ａ４ＰＯのＰＢＳ−
Ｔ溶液を接触させて含浸させた。放出用パッド２は不織
布状、表面をポリビニルアルコールで親水化処理したポ
リプロピレン製のものを使用した。

【０１４８】Ａ−１（ｉ）は酵素標識抗体９４が含浸し
た放出用パッド２を保存可能とする処理を行うステップ
である。保存手段として凍結乾燥法用いて、フィルタ４
を長期安定化した状態とした。

【０１４９】Ａ−１（ｊ）は免疫学的測定用エレメント
３３を組み立てるステップである。フィルタ４、放出用
パッド２、導入用パッド１、連絡用パッド３、吸水パッ
ド７を組み合わせて測定用エレメント支持体３０で密閉
し免疫学的測定用エレメント３３とした。詳細な免疫学
的測定用エレメント３３の構成と組み立て方法は後述す
る。導入用パッド１と連絡用パッド３は不織布状、表面
をポリビニルアルコールで親水化処理したポリプロピレ
ン製でＡ−１（ｈ）ステップで示した放出用パッド２と
同様のものを使用した。吸水パッド７は不織布状、ガラ
ス製のものを使用した。

【０１５０】次に、免疫学的測定用エレメント３３の構
成と組み立て方法を図１１に基づいて説明する。

【０１５１】フィルタ４は円形でリング状のフィルタ支
持体５に固定されており、フィルタ支持体５の上下には
それぞれＯリング３６が取り付けられ、フィルタ支持体
５の一端にはフィルタ操作用ハンドル６が取り付けられ
ている。測定用エレメント支持体３０はパイプ状の構造
をしており、中間部にフィルタ支持体５を挿入する開口
が１８０°の半円状に、フィルタ支持体５の上下のＯリ
ング３６で密着するように設けられており、上部には通
気口２１を設けた測定用エレメント上部蓋３４、下部に
は導入口２２を設けた測定用エレメント下部蓋３５を組
み合わせることが可能な構造となっている。測定用エレ
メント支持体３０にフィルタ支持体５を挿入後、測定用
エレメント支持体３０上部より吸水パッド７を挿入し、
測定用エレメント上部蓋３４を測定用エレメント支持体
３０に固定する。さらに、連絡用パッド３、放出用パッ
ド２、導入用パッド１をこの順番に測定用エレメント支
持体３０下部より挿入し、測定用エレメント下部蓋３５
を測定用エレメント支持体３０に固定する。

【０１５２】次にＡ−２．反応工程５１について説明す
る。

【０１５３】Ａ−２（ａ）は免疫学的測定用エレメント
３３と被検液を接触させるステップである。サンプル容
器４０として図９に示す８個の容器４０を容器連結枠４
３で一体に構成した形状で、あらかじめタンパク質との
非特異吸着が起こりにくいいようにＢＳＡでブロッキン
グ処理したポリスチレンのものを使用した。標準抗原ｒ
ＤｅｒｆＩＩを０．１μｇ／ｍＬより３倍に順次ＰＢＳ
−Ｔで希釈して７種の標準希釈列の溶液を調製し、７種
の標準希釈列の溶液とブランク液としてＰＢＳ−Ｔをサ
ンプル容器４０の８個の容器４２にそれぞれ２５０μＬ
注いだ。免疫学的測定用エレメント３３の８個を該サン
プル容器４０のそれぞれの容器４０に各１個ずつ、免疫
学的測定用エレメント３３の通気口２１が上になるよう
に挿入し、導入口２２と容器４０内の液体とを接触させ
た。

【０１５４】標準液あるいは被検液７０は毛細管現象ま
たは負圧力により測定用エレメント支持体３０を上昇
し、導入用パッド１を経由して連絡用パッド２に達す
る。連絡用パッド２において酵素標識抗体９４が標準液
あるいは被検液７０に溶解する。さらに標準液あるいは
被検液７０は上昇して連絡用パッド３を経由してフィル
タ４に達する。フィルタ４において酵素標識抗体９４
は、フィルタ４に固定化された標準抗原９３の濃度と標
準液あるいは被検液７０中の抗原９２（測定対象抗原）
の濃度に応じて分配される。この後、図４（ｂ）に示す
ように、さらに標準液あるいは被検液７０は上昇して吸
水パッド７に到達する。

【０１５５】Ａ−２（ｂ）は測定用エレメントを洗浄す
るステップである。新たなサンプル容器４０として図９
に示す８個の容器４２を容器連結枠４３で一体に構成し
た形状で、あらかじめタンパク質との非特異吸着が起こ
りにくいようにＢＳＡでブロッキング処理したポリスチ
レンのものを使用した。洗浄液７１としてＰＢＳ―Ｔを
サンプル容器４０の８個の容器４２にそれぞれ２５０μ
Ｌ注いだ。上記免疫学的測定用エレメント３３の８個を
該サンプル容器４０のそれぞれの容器４２に各１個ず
つ、免疫学的測定用エレメント３３の通気口２１が上に
なるように挿入し、導入口２２と容器４２内の液体とを
接触させた。洗浄液７１は毛細管現象または負圧により
測定用エレメント支持体３０内を導入用パッド１、連絡
用パッド２、連絡用パッド３、フィルタ４、吸水パッド
７まで上昇し、上昇する間に測定用エレメント支持体３
０内の特異吸着していない酵素標識抗体９４の大部分を
図５（ｂ）に示すように、吸水パッド７に移行させる。

【０１５６】Ａ−２（ｃ）は免疫学的測定用エレメント
３３とフィルタ４とを分離するステップである。上記免
疫学的測定用エレメント３３の測定用エレメント支持体
３０からフィルタ４をフィルタ操作用ハンドル６を利用
してそれぞれ分離する。

【０１５７】次に、Ａ−３．測定工程５２について説明
する。

【０１５８】Ａ−３（ａ）はフィルタ４と基質溶液７２
を接触させるステップである。基質溶液７２を測定容器
４１の８個の容器４２にそれぞれ１００μＬ注ぎ、前記
フィルタ４をそれぞれの容器４２に入れて１５分間、２
５℃で反応させ、フィルタ４に固定化した第２の酵素９
６であるグルコースオキシダーゼにより過酸化水素を生
成させ、ペルオキシダーゼの基質とした。測定容器４１
として図９に示す８個の容器４２を容器連結枠４３で一
体に構成した形状で、あらかじめタンパク質との非特異
吸着が起こりにくいようにＢＳＡでブロッキング処理し
たポリスチレンで光学的に透明なものを使用した。容器
４２は水平断面積約２４ｍｍ²（内径５．５ｍｍ）で、
深さ約１１．５ｍｍの円筒形のものを使用した。基質溶
液７２として１０ｍＬのｐＨ５．０±０．１の０．１ｍ
ｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（以下、「クエン酸緩衝液」と
記載する）に４ｍｇのオルトフェニレンジアミン二塩酸
塩（以下、「ＯＰＤ」と記載する）を溶解させ、グルコ
ースを１８ｍｇ／ｍＬ溶解させたものを調整して使用し
た。

【０１５９】Ａ−３（ｂ）は基質溶液７２を発色させる
ステップである。反応時間１５分、反応温度２５℃の条
件で反応させ、第１の酵素９５であるペルオキシダーゼ
にグルコースオキシダーゼにより生成した過酸化水素を
基質として、発色基質であるＯＰＤを発色物質へと変化
させることによって発色させた。

【０１６０】Ａ−３（ｃ）は酵素反応を停止させるステ
ップである。あらかじめ反応停止液として２Ｎの硫酸を
使用し、測定容器４１の８個の容器４２にそれぞれ５０
μＬ注ぎ、酵素反応を停止させた。

【０１６１】Ａ−３（ｄ）は発色波長における発色の度
合いの測定ステップである。測定容器４１内で発色した
色素が特異的に吸収する４９０ｎｍの光を吸光度光度計
で測定した。

【０１６２】次に、Ａ−４．演算工程５３について説明
する。

【０１６３】これは標準抗原溶液の検量線より抗原濃度
の換算を行う工程である。以下に示す（ａ）のステップ
から構成される。

【０１６４】Ａ−４（ａ）は換算ステップである。Ａ−
１．工程５０〜Ａ−３．工程５２の操作により求めた標
準抗原溶液の検量線を使用して、被検液の吸光度より被
検液の濃度を演算し算出する。ブランク液であるＰＢＳ
−Ｔ溶液の吸光度を各標準抗原溶液の吸光度より差し引
き検量線を作成すると、図１２のグラフが得られた。図
１２で縦軸は吸光度を示す。図１２の直線部より最小２
乗法で回帰直線を求めると次式（１）が得られた。

【０１６５】［吸光度（−）］＝０．２５２×ｌｎ［ｒＤｅｒｆＩＩ濃度（μｇ／ｍＬ）］＋１．８８０・・・・・・・・（１）図１２より明らかなように本実施例では０．００２μｇ
／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以下のｒＤｅｒｆＩＩ
が測定可能であることがわかる。ここでｒＤｅｒｆＩＩ
濃度と吸光度のこの範囲における相関係数は０．９９５
であり、危険率１％で優位に相関が認められた。任意の
被検液に対してこの検量線と同条件で吸光度測定をおこ
なえば、式（１）より被検液の濃度を算出することがで
きる。

【０１６６】従来の方法ではｒＤｅｒｆＩＩ濃度の測定
に２４時間と長い測定時間を必要とし、かつ高価な測定
装置が必要であるのに対して、本実施例はあらかじめ作
製した免疫学的測定用エレメント３３を利用することで
ユーザの測定操作は３０分で完了させることができた。

【０１６７】なお、本実施例以外にも抗原（または抗
体）を測定する免疫学的測定用エレメントは種々考える
ことが出来る。また、より自動化を推進した装置、検出
法が電気化学的、放射性同位体の検出を利用したものと
の組み合わせ等が考えられる。

【０１６８】

【発明の効果】以上説明したように本発明の請求項１に
記載の免疫学的測定方法によれば、測定用エレメントを
用意し、測定対象抗原を含有する被検液を測定用エレメ
ントの一方端から負圧力または毛細管現象により含浸さ
せ、測定対象抗原と特異的に結合することができ標識物
質が結合された抗体を担持させた部位にまで測定用エレ
メント内の含浸をすすませて抗体を被検液に混入し、さ
らに測定用エレメントの他方端側に位置し標準抗原が固
定化された部位にまで含浸がすすむと、標準抗原と測定
対象抗原との間で抗体を抗原抗体反応によりそれぞれの
抗原濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成し、標
準抗原が固定化された部位の抗原抗体複合体に含まれる
標識物質の量の測定を行い、測定対象抗原の濃度を標識
物質の量より換算することにより、操作を簡単なものと
することができるので、抗原または抗体の濃度を迅速簡
便に低価格で測定することができるという有利な効果が
得られる。

【０１６９】請求項２に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、測定用エレメントを用意し、測定対象抗体を含有す
る被検液を測定用エレメントの一方端から負圧力または
毛細管現象により含浸させ、測定対象抗体と特異的に結
合することができ標識物質が結合された抗原を担持させ
た部位にまで測定用エレメント内の含浸をすすませて抗
原を被検液に混入し、さらに測定用エレメントの他方端
側に位置し標準抗体が固定化された部位にまで含浸がす
すむと、標準抗体と測定対象抗体との間で抗原を抗原抗
体反応によりそれぞれの抗体濃度に応じて分配して抗原
抗体複合体を形成し、標準抗体が固定化された部位の抗
原抗体複合体に含まれる標識物質の量の測定を行い、測
定対象抗体の濃度を前記標識物質の量より換算すること
により、操作を簡単なものとすることができるので、抗
原または抗体の濃度を迅速簡便に低価格で測定すること
ができるという有利な効果が得られる。

【０１７０】請求項３に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、脱着自在なフィルタに測定対象抗原と同一種の標準
抗原を一定量固定化し、多孔質で液体を吸収する第１の
吸収体と第２の吸収体とが接触した状態で前記フィルタ
を挟んで配置し、測定対象抗原と特異的に結合すること
ができ標識物質を結合した抗体を含有した第３の吸収体
を第２の吸収体に接触した状態で配置し、被検液を導入
するための第４の吸収体を第３の吸収体に接触した状態
で配置し、全体を気密性の密閉部材で覆い、密閉部材の
第４の吸収体側に導入口を配置し、密閉部材の第１の吸
収体側に通気口を配置した測定用エレメントを用意し、
測定対象抗原を含有する被検液を測定用エレメントの導
入口に接触させ、被検液を負圧または毛細管現象により
第４の吸収体から第１の吸収体まで移動させ、第３の吸
収体から抗体を被検液中に放出させ、フィルタに固定化
された標準抗原と測定対象抗原とで抗体を抗原抗体反応
によりそれぞれの抗原濃度に応じて分配して抗原抗体複
合体を形成させた後、フィルタを測定用エレメントより
分離し、フィルタの標識物質量の測定をおこない、測定
対象抗原の濃度を標識物質量より換算することにより、
別途作製され保存された上記測定用エレメントを用いる
ことで測定を簡便・迅速化することができ、また、抗原
抗体反応は被検液と測定用エレメントの接触を行うとき
の一回であるため短時間のうちに、かつ複数回の反応で
あるならば各反応間に必要となる洗浄を不要化すること
ができ、測定用エレメントの脱着自在なフィルタに固定
化された一定量の標準抗原と測定対象抗原によって、被
検液が測定用エレメントを通過する際に、放出用パッド
から標準抗原と特異的に結合することができ標識物質を
結合した抗体が被検液に溶解し、溶解した上記抗体をそ
れぞれの抗原濃度に応じて所定の割合に分配させ、分配
された抗体の量と標識物質との間には所定の関係がある
ため、フィルタと結合した標識物質量を測定することに
よって、測定対象抗原の濃度を算出することができると
いう有利な効果が得られる。

【０１７１】請求項４に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、脱着自在なフィルタに測定対象抗体と同一種の標準
抗体を一定量固定化し、多孔質で液体を吸収する第１の
吸収体と第２の吸収体とが接触した状態でフィルタを挟
んで配置し、測定対象抗体と特異的に結合することがで
き標識物質を結合した抗原を含有した第３の吸収体を第
２の吸収体に接触した状態で配置し、被検液を導入する
ための第４の吸収体を第３の吸収体に接触した状態で配
置し、全体を気密性の密閉部材で覆い、密閉部材の第４
の吸収体側に導入口を配置し、密閉部材の第１の吸収体
側に通気口を配置した測定用エレメントを用意し、測定
対象抗体を含有する被検液を測定用エレメントの導入口
に接触させ、被検液を負圧または毛細管現象により第４
の吸収体から第１の吸収体まで移動させ、第３の吸収体
から抗原を被検液中に放出させ、フィルタに固定化され
た標準抗体と測定対象抗体との間で抗原を抗原抗体反応
によりそれぞれの抗体濃度に応じて分配して抗原抗体複
合体を形成させた後、フィルタを測定用エレメントより
分離し、フィルタの標識物質量の測定をおこない、測定
対象抗体の濃度を標識物質量より換算することにより、
別途作製され保存された上記測定用エレメントを用いる
ことで測定を簡便・迅速化することができ、また、抗原
抗体反応は被検液と測定用反応容器の接触を行うときの
一回であるため短時間のうちに、かつ複数回の反応であ
るならば各反応間に必要となる洗浄を不要化することが
でき、測定用反応容器に固定化された一定量の標準抗体
と測定対象抗体によって、被検液に添加した上記抗原を
それぞれの抗体濃度に応じて所定の割合に分配させ、分
配された抗原の量と標識物質との間には所定の関係があ
るため、測定用反応容器または被検液と結合した標識物
質量を測定することによって、測定対象抗体の濃度を算
出することができるという有利な効果が得られる。

【０１７２】請求項５に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、請求項１乃至４のいずれか１に記載の免疫学的測定
方法において、負圧力を発生する負圧発生手段を通気口
に接続して、被検液の移動を行うことにより、安定的な
被検液の移動や、速い被検液の移動、自由度の高い配置
方向の提供を行うことができるため、精度良く、迅速
に、自由度高く抗原または抗体を測定することができる
という有利な効果が得られる。

【０１７３】請求項６に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、請求項１乃至５のいずれか１に記載の免疫学的測定
方法において、標識物質が酵素であって、標識物質量の
測定を吸光度を測定することにより行うことにより、酵
素を利用することで、迅速に、容易に、安価に抗原また
は抗体を測定することができるという有利な効果が得ら
れる。

【０１７４】請求項７に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、請求項１乃至５のいずれか１に記載の免疫学的測定
方法において、標識物質が蛍光物質であって、標識物質
量の測定を蛍光強度により行うことにより、蛍光物質を
利用することで、迅速に、容易に抗原または抗体を測定
することができるという有利な効果が得られる。

【０１７５】請求項８に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、請求項６に記載の免疫学的測定方法において、標識
物質の酵素を第１の酵素としたとき、フィルタの固相に
は抗原または抗体に加えて第２の酵素が固定化されてい
ることにより、酵素を利用することで、標識物質として
の酵素の基質を第２の酵素により供給することで測定用
発色基質液の調整を簡便にできるという有利な効果が得
られる。

【０１７６】請求項９に記載の免疫学的測定方法によれ
ば、請求項３乃至８のいずれか１に記載の免疫学的測定
方法において、フィルタの形状が多孔質状、不織布状、
網状のいずれか１種類の形状または複数種類が複合した
形状であることにより、抗原または抗体が吸着する単位
体積当たりの表面積を大きくすることができ、抗原抗体
反応を短時間かつ容易に行うことができるという有利な
効果が得られる。

【０１７７】請求項１０に記載の免疫学的測定方法によ
れば、請求項３乃至９のいずれか１に記載の免疫学的測
定方法において、フィルタがニトロセルロース、ポリス
チレン、ガラスのいずれか１種類の材質または複数種類
が複合した材質であることにより、フィルタへの抗原ま
たは抗体の単位面積当たりの吸着量を大きくすることが
でき、抗原抗体反応を短時間かつ容易に行うことができ
るという有利な効果が得られる。

【０１７８】請求項１１に記載の免疫学的測定方法によ
れば、請求項３乃至１０のいずれか１に記載の免疫学的
測定方法において、フィルタの粒子保持能が０．１μｍ
〜１００μｍであることにより、被検液が濁質を含有す
るために測定への影響がある場合、フィルターの最上流
部にて該濁質を捕捉し、抗原抗体反応をフィルタ内部に
おいて濁質の影響を排除しておこなえ、濁質除去等の前
処理を必要としないため測定を簡便かつ短時間に行うこ
とができるという有利な効果が得られる。

【０１７９】請求項１２に記載の免疫学的測定方法によ
れば、請求項３乃至１１のいずれか１に記載の免疫学的
測定方法において、測定用エレメントを複数複合したこ
とにより、複数の被検液を同時に測定できるようにな
り、一検体当たりの測定を簡便かつ短時間に行うことが
できるという有利な効果が得られる。

【０１８０】請求項１３に記載の免疫学的測定方法によ
れば、請求項１乃至１２のいずれか１に記載の免疫学的
測定方法において、免疫反応および酵素反応の温度を一
定に保持する温度保持装置を備えたことにより、反応が
最適化し、安定化されるようになり、測定を短時間に安
定して行うことができるという有利な効果が得られる。

【０１８１】請求項１４に記載の免疫学的測定用エレメ
ントによれば、測定対象抗原と同一種の標準抗原を一定
量固定化した脱着自在なフィルタと、フィルタに近接し
て配置された吸水パッドと、フィルタの前記吸水パッド
と逆側に近接するように配置された連絡用パッドと、連
絡用パッドのフィルタと逆側に近接するように配置さ
れ、測定対象抗原と特異的に結合することができ標識物
質を結合した抗体を含有した放出用パッドと、放出用パ
ッドの連絡用パッドと逆側に近接するように配置された
導入用パッドと、全体を覆う気密性の測定用エレメント
支持体と、導入用パッドの放出用パッドと逆側に配置さ
れた導入口と、吸水パッドのフィルタと逆側に配置され
た通気口とを有することにより、測定対象抗原を含有す
る被検液をサンプル容器に注ぎ、被検液と測定用エレメ
ントの導入口を接触させ、被検液を負圧または毛細管現
象により上昇させ、放出用パッドから抗体を被検液中に
放出させ、フィルタに固定化された標準抗原と測定対象
抗原との間で抗体を抗原抗体反応によりそれぞれの抗原
濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成させた後、
フィルタを測定用エレメントより分離し、フィルタの標
識物質量の測定をおこない、測定対象抗原の濃度を該標
識物質量より換算することができるという有利な効果が
得られる。また、免疫学的測定用エレメントにより測定
を簡便・迅速化することができ、さらに、抗原抗体反応
は被検液と測定用反応容器の接触を行うときの一回であ
るため短時間のうちに、かつ複数回の反応であるならば
各反応間に必要となる洗浄を不要化することができ、測
定用反応容器に固定化された一定量の標準抗原と測定対
象抗原によって、被検液に添加した抗体をそれぞれの抗
原濃度に応じて所定の割合に分配させ、分配された抗体
量と標識物質には所定の関係があるため、測定用反応容
器または被検液と結合した標識物質量を測定することに
よって、測定対象抗原の濃度を算出することができると
いう有利な効果が得られる。

【０１８２】請求項１５に記載の免疫学的測定用エレメ
ントによれば、測定対象抗体と同一種の標準抗体を一定
量固定化した脱着自在なフィルタと、フィルタに近接し
て配置された吸水パッドと、フィルタの吸水パッドと逆
側に近接するように配置された連絡用パッドと、連絡用
パッドのフィルタと逆側に近接するように配置され、測
定対象抗体と特異的に結合することができ標識物質を結
合した抗原を含有した放出用パッドと、放出用パッドの
連絡用パッドと逆側に近接するように配置された導入用
パッドと、全体を覆う気密性の測定用エレメント支持体
と、導入用パッドの放出用パッドと逆側に配置された導
入口と、吸水パッドのフィルタと逆側に配置された通気
口とを有することにより、測定対象抗体を含有する被検
液をサンプル容器に注ぎ、被検液と測定用エレメントの
導入口を接触させ、被検液を負圧または毛細管現象によ
り上昇させ、放出用パッドから抗原を被検液中に放出さ
せ、フィルタに固定化された標準抗体と測定対象抗体と
の間で抗原を抗原抗体反応によりそれぞれの抗体濃度に
応じて分配して抗原抗体複合体を形成させた後、フィル
タを測定用エレメントより分離し、フィルタの標識物質
量の測定をおこない、測定対象抗体の濃度を該標識物質
量より換算することができるという有利な効果が得られ
る。また、免疫学的測定用エレメンにより測定を簡便・
迅速化することができ、さらに、抗原抗体反応は被検液
と測定用反応容器の接触を行うときの一回であるため短
時間のうちに、かつ複数回の反応であるならば各反応間
に必要となる洗浄を不要化することができ、測定用反応
容器に固定化された一定量の標準抗体と測定対象抗体に
よって、被検液に添加した抗原をそれぞれの抗体濃度に
応じて所定の割合に分配させ、分配された抗原量と標識
物質との間には所定の関係があるため、測定用反応容器
または被検液と結合した標識物質量を測定することによ
って、測定対象抗体の濃度を算出することができるとい
う有利な効果が得られる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エ
レメントの概略断面図

【図２】本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エ
レメントを使用した主要な工程を示す工程図

【図３】本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エ
レメントを使用した主要なステップを示すステップ図

【図４】（ａ）本発明の実施の形態１による免疫学的測
定用エレメントを使用した反応工程の接触のステップを
説明するためのエレメント・サンプル容器の概略断面図（ｂ）本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エレ
メントを使用した反応工程の接触のステップを説明する
ためのエレメント・サンプル容器の概略断面図

【図５】（ａ）本発明の実施の形態１による免疫学的測
定用エレメントを使用した反応工程の洗浄のステップを
説明するためのエレメント・サンプル容器の概略断面図（ｂ）本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エレ
メントを使用した反応工程の洗浄のステップを説明する
ためのエレメント・サンプル容器の概略断面図

【図６】（ａ）本発明の実施の形態１による免疫学的測
定用エレメントを使用した測定工程の発色のステップを
説明するための測定容器の概略断面図（ｂ）本発明の実施の形態１による免疫学的測定用エレ
メントを使用した測定工程の発色のステップを説明する
ための測定容器の概略断面図

【図７】本発明の実施の形態１におけるフィルタの斜視
図

【図８】本発明の実施の形態１における免疫学的測定用
エレメントの斜視図

【図９】本発明の実施の形態１における測定容器の斜視
図

【図１０】本発明の実施の形態１における反応工程の発
色ステップでのフィルタと測定容器の部分拡大図

【図１１】本発明の実施の形態１による免疫学的測定用
エレメントの断面図

【図１２】本発明の実施例で作成したコナヒョウヒダニ
のアレルゲンｒＤｅｒｆＩＩの検量線を示すグラフ

【図１３】従来のサンドイッチＥＬＩＳＡ法の主要工程
を示す工程図

【図１４】従来のサンドイッチＥＬＩＳＡ法の反応工程
の主要なステップを示すステップ図

【図１５】測定用反応容器における反応を示す反応説明
図

【符号の説明】

１導入用パッド２放出用パッド３連絡用パッド４フィルタ（部位）５フィルタ支持枠６フィルタ操作用ハンドル７吸水パッド２１通気口２２導入口３０測定用エレメント支持体３１測定用エレメント支持体連結枠３２フィルタ連結枠３３免疫学的測定用エレメント３４測定用エレメント上部蓋３５測定用エレメント下部蓋３６Ｏリング４０サンプル容器４１測定容器４２容器４３容器連結枠５０Ａ−１．測定用エレメント作製工程５１Ａ−２．反応工程５２Ａ−３．測定工程５３Ａ−４．換算工程５４Ａ−２（ａ）．接触のステップ５５Ａ−２（ｂ）．洗浄のステップ５６Ａ−３（ｂ）．発色のステップ７０標準液（被検液）７１洗浄液７２基質溶液９２測定対象抗原９３標準抗原９４酵素標識抗体９５第１の酵素（標識物質）９６第２の酵素

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】測定用エレメントを用意し、測定対象抗原
を含有する被検液を前記測定用エレメントの一方端から
負圧力または毛細管現象により含浸させ、前記測定対象
抗原と特異的に結合することができ標識物質が結合され
た抗体を担持させた部位にまで前記測定用エレメント内
の含浸をすすませて前記抗体を前記被検液に混入し、さ
らに前記測定用エレメントの他方端側に位置し標準抗原
が固定化された部位にまで含浸がすすむと、前記標準抗
原と前記測定対象抗原との間で前記抗体を抗原抗体反応
によりそれぞれの抗原濃度に応じて分配して抗原抗体複
合体を形成し、前記標準抗原が固定化された部位の抗原
抗体複合体に含まれる標識物質の量の測定を行い、前記
測定対象抗原の濃度を前記標識物質の量より換算するこ
とを特徴とする免疫学的測定方法。
【請求項２】測定用エレメントを用意し、測定対象抗体
を含有する被検液を前記測定用エレメントの一方端から
負圧力または毛細管現象により含浸させ、前記測定対象
抗体と特異的に結合することができ標識物質が結合され
た抗原を担持させた部位にまで前記測定用エレメント内
の含浸をすすませて前記抗原を前記被検液に混入し、さ
らに前記測定用エレメントの他方端側に位置し標準抗体
が固定化された部位にまで含浸がすすむと、前記標準抗
体と前記測定対象抗体との間で前記抗原を抗原抗体反応
によりそれぞれの抗体濃度に応じて分配して抗原抗体複
合体を形成し、前記標準抗体が固定化された部位の抗原
抗体複合体に含まれる標識物質の量の測定を行い、前記
測定対象抗体の濃度を前記標識物質の量より換算するこ
とを特徴とする免疫学的測定方法。
【請求項３】脱着自在なフィルタに測定対象抗原と同一
種の標準抗原を一定量固定化し、多孔質で液体を吸収す
る第１の吸収体と第２の吸収体とが接触した状態で前記
フィルタを挟んで配置し、前記測定対象抗原と特異的に
結合することができ標識物質を結合した抗体を含有した
第３の吸収体を前記第２の吸収体に接触した状態で配置
し、被検液を導入するための第４の吸収体を前記第３の
吸収体に接触した状態で配置し、全体を気密性の密閉部
材で覆い、前記密閉部材の前記第４の吸収体側に導入口
を配置し、前記密閉部材の前記第１の吸収体側に通気口
を配置した測定用エレメントを用意し、前記測定対象抗
原を含有する被検液を前記測定用エレメントの導入口に
接触させ、前記被検液を負圧または毛細管現象により前
記第４の吸収体から前記第１の吸収体まで移動させ、前
記第３の吸収体から前記抗体を前記被検液中に放出さ
せ、前記フィルタに固定化された前記標準抗原と前記測
定対象抗原とで前記抗体を抗原抗体反応によりそれぞれ
の抗原濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成させ
た後、前記フィルタを測定用エレメントより分離し、前
記フィルタの前記標識物質量の測定をおこない、前記測
定対象抗原の濃度を前記標識物質量より換算することを
特徴とする免疫学的測定方法。
【請求項４】脱着自在なフィルタに測定対象抗体と同一
種の標準抗体を一定量固定化し、多孔質で液体を吸収す
る第１の吸収体と第２の吸収体とが接触した状態で前記
フィルタを挟んで配置し、前記測定対象抗体と特異的に
結合することができ標識物質を結合した抗原を含有した
第３の吸収体を前記第２の吸収体に接触した状態で配置
し、被検液を導入するための第４の吸収体を前記第３の
吸収体に接触した状態で配置し、全体を気密性の密閉部
材で覆い、前記密閉部材の前記第４の吸収体側に導入口
を配置し、前記密閉部材の前記第１の吸収体側に通気口
を配置した測定用エレメントを用意し、前記測定対象抗
体を含有する被検液を前記測定用エレメントの導入口に
接触させ、前記被検液を負圧または毛細管現象により前
記第４の吸収体から前記第１の吸収体まで移動させ、前
記第３の吸収体から前記抗原を前記被検液中に放出さ
せ、前記フィルタに固定化された前記標準抗体と前記測
定対象抗体との間で前記抗原を抗原抗体反応によりそれ
ぞれの抗体濃度に応じて分配して抗原抗体複合体を形成
させた後、前記フィルタを測定用エレメントより分離
し、前記フィルタの前記標識物質量の測定をおこない、
前記測定対象抗体の濃度を前記標識物質量より換算する
ことを特徴とする免疫学的測定方法。
【請求項５】負圧力を発生する負圧発生手段を前記通気
口に接続して、前記被検液の移動を行うことを特徴とす
る請求項１乃至４のいずれか１に記載の免疫学的測定方
法。
【請求項６】前記標識物質が酵素であって、前記標識物
質量の測定を吸光度を測定することにより行うことを特
徴とする請求項１乃至５のいずれか１に記載の免疫学的
測定方法。
【請求項７】前記標識物質が蛍光物質であって、前記標
識物質量の測定を蛍光強度により行うことを特徴とする
請求項１乃至５のいずれか１に記載の免疫学的測定方
法。
【請求項８】前記標識物質の酵素を第１の酵素としたと
き、前記フィルタの固相には抗原または抗体に加えて第
２の酵素が固定化されていることを特徴とする請求項６
に記載の免疫学的測定方法。
【請求項９】前記フィルタの形状が多孔質状、不織布
状、網状のいずれか１種類の形状または複数種類が複合
した形状であることを特徴とする請求項３乃至８のいず
れか１に記載の免疫学的測定方法。
【請求項１０】前記フィルタがニトロセルロース、ポリ
スチレン、ガラスのいずれか１種類の材質または複数種
類が複合した材質であることを特徴とする請求項３乃至
９のいずれか１に記載の免疫学的測定方法。
【請求項１１】前記フィルタの粒子保持能が０．１μｍ
〜１００μｍであることを特徴とする請求項３乃至１０
のいずれか１に記載の免疫学的測定方法。
【請求項１２】前記測定用エレメントを複数複合したこ
とを特徴とする請求項３乃至１１のいずれか１に記載の
免疫学的測定方法。
【請求項１３】免疫反応および酵素反応の温度を一定に
保持する温度保持装置を備えたことを特徴とする請求項
１乃至１２のいずれか１に記載の免疫学的測定方法。
【請求項１４】測定対象抗原と同一種の標準抗原を一定
量固定化した脱着自在なフィルタと、前記フィルタに近
接して配置された吸水パッドと、前記フィルタの前記吸
水パッドと逆側に近接するように配置された連絡用パッ
ドと、前記連絡用パッドの前記フィルタと逆側に近接す
るように配置され、前記測定対象抗原と特異的に結合す
ることができ標識物質を結合した抗体を含有した放出用
パッドと、前記放出用パッドの前記連絡用パッドと逆側
に近接するように配置された導入用パッドと、全体を覆
う気密性の測定用エレメント支持体と、前記導入用パッ
ドの前記放出用パッドと逆側に配置された導入口と、前
記吸水パッドの前記フィルタと逆側に配置された通気口
とを有することを特徴とする免疫学的測定用エレメン
ト。
【請求項１５】測定対象抗体と同一種の標準抗体を一定
量固定化した脱着自在なフィルタと、前記フィルタに近
接して配置された吸水パッドと、前記フィルタの前記吸
水パッドと逆側に近接するように配置された連絡用パッ
ドと、前記連絡用パッドの前記フィルタと逆側に近接す
るように配置され、前記測定対象抗体と特異的に結合す
ることができ標識物質を結合した抗原を含有した放出用
パッドと、前記放出用パッドの前記連絡用パッドと逆側
に近接するように配置された導入用パッドと、全体を覆
う気密性の測定用エレメント支持体と、前記導入用パッ
ドの前記放出用パッドと逆側に配置された導入口と、前
記吸水パッドの前記フィルタと逆側に配置された通気口
とを有することを特徴とする免疫学的測定用エレメン
ト。