JP2000283923A

JP2000283923A - 酸化剤測定用化学発光検出器、及びそれを用いた酸化剤の測定方法

Info

Publication number: JP2000283923A
Application number: JP11088288A
Authority: JP
Inventors: Osamu Nozaki; 修野崎; Hiroko Kawamoto; 裕子河本
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1999-03-30
Filing date: 1999-03-30
Publication date: 2000-10-13

Abstract

(57)【要約】【課題】化学発光試薬、触媒物質及びＨ₂Ｏ₂等の酸化剤
の混合により開始される化学発光反応によって放出され
る発光を効率的に検出することが可能な化学発光検出器
を提供すること。【解決手段】化学発光試薬、酸化剤、及びこれらと共存
した場合に化学発光試薬を化学発光放出可能な状態に励
起する触媒物質を共存させて化学発光試薬を励起し、励
起された化学発光試薬から放出される光の強度により酸
化剤を定量するための化学発光検出器であって、上記触
媒物質を固定化した充填剤をフローセル内に充填したフ
ローセルリアクターと該フローセルリアクター部位から
放出される発光を検出するための検出手段を具備してな
る化学発光検出器。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は化学発光試薬を用い
た酸化剤測定に使用する化学発光検出器とそれを用いた
化学発光測定方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ルミノール、ルシゲニン、ジオキシセタ
ン類、ロフィン等の化学発光試薬は、種々の触媒物質共
存で酸化反応により励起され、光を放出することが知ら
れている。この特性を生かし、化学発光試薬は、分析化
学の分野で酸化剤の定量等に広く利用されている。

【０００３】特に酸化剤の一種である過酸化水素（Ｈ₂
Ｏ₂）測定に関しては数多くの報告がされている。例え
ばペルオキシダーゼを触媒として、ルミノールを、Ｈ₂
Ｏ₂と反応させ、励起されたルミノールから放出される
化学発光（Ｍｅｔｈｏｄｉｎｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，
１３３，３３１（１９８６））によりＨ₂Ｏ₂を定量する
方法は、Ｈ₂Ｏ₂の高感度測定法の一つとして知られてい
る。

【０００４】Ｈ₂Ｏ₂測定を応用し、グルコース、コレス
テロール等の生体微量成分を被測定物質として、被測定
物質から酵素反応により被測定物質量に応じたＨ₂Ｏ₂を
生成させ、生成したＨ₂Ｏ₂を測定することにより、被測
定物質であるグルコース、コレステロール等を間接的に
定量する方法等も報告されている。例えばグルコースを
被測定物質とし、グルコースオキシダーゼを作用させる
ことによりＨ₂Ｏ₂を生成させ、ルミノールやペルオキシ
ダーゼを使用することで被測定物質であるグルコースを
間接的に定量する方法等が報告されている（Ｊ．Ｂｉｏ
ｌｕｍ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍ．，１０，２２９（１９９
５））。

【０００５】化学発光試薬を利用したこれらのＨ₂Ｏ₂、
グルコースの定量方法の多くでは、化学発光検出器を接
続した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）やフロ
ーインジェクション分析（ＦＩＡ）の測定システムが使
用されている（Ａｎａｌ．Ｌｅｔｔ．，２２，３０３
（１９８９）、「生物発光と化学発光」，１０４頁，１
０６頁，広川書店，昭和６４年）。図１及び図２は、こ
れまでに報告されているルミノール／ペルオキシダーゼ
系を利用した試料溶液中のＨ₂Ｏ₂測定用ＦＩＡシステム
の構成例である。

【０００６】図１の例では、ルミノール溶液（溶液タン
ク３に貯蔵されている）を送液するポンプ４、ペルオキ
シダーゼ溶液（溶液タンク５に貯蔵されている）を送液
するポンプ６、及び試料注入部７より導入されるＨ₂Ｏ₂
含有試料を移送するための溶液（溶液タンク１に貯蔵さ
れている）を送液するポンプ２を用意し、それぞれのポ
ンプにより送液された溶液を送液路中、混合用コイル８
で混合することによりルミノールを励起し、化学発光検
出器９へ導き、ルミノールの化学発光強度を測定するも
のである（１０は化学発光検出器からの信号を記録する
記録計、１１は廃液タンクである）。また図２の例で
は、ペルオキシダーゼを固定化した充填剤を充填したリ
アクター１７を化学発光検出器１８の流れ方向の前部に
設置し、ルミノール溶液（溶液タンク１４に貯蔵されて
いる）を送液するポンプ１５、及び試料注入部１６より
導入されるＨ₂Ｏ₂含有試料を移送するための溶液（溶液
タンク１３に貯蔵されている）を送液するポンプ１２を
用意し、それぞれのポンプにより送液された溶液を混合
し、その後リアクター１７、化学発光検出器１８の順で
通過させることにより励起されたルミノールの化学発光
強度を測定するものである（１９は化学発光検出器から
の信号を記録する記録計、２０は廃液タンクである）。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】図１や図２に示したよ
うな従来のＦＩＡ測定システムでは、いずれも化学発光
試薬、触媒物質、及びＨ₂Ｏ₂を流路中で混合した後に化
学発光検出器に導入しているため、前記混合による化学
発光反応の開始から検出までの間に時間的な遅れが生じ
るという課題がある。このため、励起された化学発光試
薬から放出される光の全てを化学発光検出器で捕らえる
ことができず、検出感度を向上することが困難であると
いう課題がある。

【０００８】そこで本願発明の目的は、化学発光試薬、
触媒物質及びＨ₂Ｏ₂等の酸化剤の混合により開始される
化学発光反応によって放出される発光を効率的に検出す
ることが可能な化学発光検出器を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本願発明は、化学発光検
出器にフローセルリアクターを包合し、フローセルリア
クター部位で発光を検出することで、化学発光反応の開
始時からの発光を効率的に捕捉するという構成により前
記目的を達成するものである。すなわち本願請求項１の
発明は、化学発光試薬、酸化剤、及びこれらと共存した
場合に化学発光試薬を化学発光放出可能な状態に励起す
る触媒物質を共存させて化学発光試薬を励起し、励起さ
れた化学発光試薬から放出される光の強度により酸化剤
を定量するための化学発光検出器であって、上記触媒物
質を固定化した充填剤をフローセル内に充填したフロー
セルリアクターと該フローセルリアクター部位から放出
される発光を検出するための検出手段を具備してなる化
学発光検出器である。

【００１０】そして本願請求項２の発明は、化学発光試
薬、酸化剤、及びこれらと共存した場合に化学発光試薬
を化学発光放出可能な状態に励起する触媒物質を共存さ
せて化学発光試薬を励起し、励起された化学発光試薬か
ら放出される光の強度により酸化剤を定量する化学発光
測定方法であって、上記触媒物質を固定化した充填剤を
フローセル内に充填したフローセルリアクターを用い、
該フローセルリアクター部位から放出される発光を検出
することを特徴とする化学発光測定方法である。以下、
図面を参照しつつ本願発明を説明する。

【００１１】本願発明で使用する化学発光試薬として
は、ルミノール、ルシゲニン、ジオキシセタン類そして
ロフィン等のような、それ自体が最終的に発光を放出す
る試薬を例示することができる。また更には、シュウ酸
誘導体と蛍光物質の組み合わせのように、２以上の試薬
が共存した場合に発光を放出し得る試薬の組み合わせで
あっても良い。本願発明で使用する触媒物質として
は、化学発光試薬及び酸化剤が存在した場合に化学発光
試薬を、化学発光を放出し得る状態に励起し得る活性を
有するものであれば制限はなく、例えば化学発光試薬が
ルミノールであればペルオキシダーゼ、ミクロペルオキ
シダーゼ、ヘモグロビン、イミダゾール、ヒスチジン等
を例示することができる。触媒物質は、充填剤に固定化
したうえでフローセルリアクターに充填して使用され
る。

【００１２】本願発明は、Ｈ₂Ｏ₂等を酸化剤として使用
し、その定量を行うものであるが、グルコース、コレス
テロール、コレステロールエステル、中性脂肪、リン脂
質、尿素、尿酸、カテコールアミン類等の生体試料中に
存在する微量成分を被測定物質として定量することもで
きる。これは、被測定物質に対し、被測定物質を基質と
してＨ₂Ｏ₂を生成する酵素等を作用させ、生成したＨ₂
Ｏ₂量を測定する、ことにより行えば良い。

【００１３】上記被測定物質の定量を行うために必要
な、被測定物質量に相関したＨ₂Ｏ₂を生成する物質とし
ては、例えば、被測定物質がグルコースであればグルコ
ース酸化酵素を、コレステロールであればコレステロー
ル酸化酵素を、コレステロールエステルであればコレス
テロールエステラーゼ等を例示できる。また例えばカテ
コールアミン類を被測定物質とする場合には、イミダゾ
ール、エチレン尿素、２−ニトロフラン、ピペラジン等
の酵素以外の化学試薬を用いてＨ₂Ｏ₂を生成させること
ができる。

【００１４】触媒物質の固定化に使用する充填剤は、固
定化後に触媒物質の触媒活性を保持し得るものであれば
制限はなく、市販の充填剤（例えば商品名キトパールＢ
ＣＷ−３００１（フジボー（株）製、粒径７４〜２１０
μｍ）、商品名ＴＳＫｇｅｌＡＦ−アミノトヨパール６
５０Ｍ（東ソー（株）製、粒径４０〜９０μｍ）等を使
用することができる。充填剤の種類等は、固定化しよう
とする触媒物質の量等に応じて適宜選択すれば良い。

【００１５】触媒物質の充填剤への固定化は、従来から
公知の方法により行うことができる。具体的に例えば、
吸着法（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１２３，６０
１（１９８２年））、グルタルアルデヒド法（化学の領
域，増刊１３，５５（１９８２年））、糖鎖酸化法
（Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．，２２，１０８４，（１９
７４年））等を例示することができる。より具体的に、
本願発明において触媒物質として使用し得るペルオキシ
ダーゼを、市販の充填剤（商品名キトパールＢＣＷ−３
００１）に、糖鎖酸化法により固定化する場合について
一例を示せば、（１）まずペルオキシダーゼ（例えば和
光純薬工業（株）製、１００Ｕ／ｍｇ以上、わさび製）
を０．１ｍｏｌ／ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）に溶解
して１．５ｍｇ／ｍｌとした溶液１ｍｌに過ヨウ素酸ナ
トリウム溶液（０．０６ｍｏｌ／ｌ）を１ｍｌ加える、
（２）室温で３０分間穏やかに振とうしてペルオキシダ
ーゼを酸化し、炭酸緩衝液（０．０１ｍｏｌ／ｌ、ｐＨ
９．５）に対して４℃で１２時間透析する、（３）リン
酸緩衝液（ｐＨ６．５）に２４時間以上浸し、平衡化し
た充填剤（およそ２００ｍｇ）を加えてペルオキシダー
ゼを固定化する、等という操作を例示できる。

【００１６】本願発明で使用するフローセルリアクタ
は、化学発光試薬及び酸化剤がその内部を通過しつつ充
填された充填剤に固定化された触媒物質と反応して発光
を生じるように構成された管状部であり、その内部で放
出された発光を外部に透過し得る材料で製造されたもの
でれば形状等に特別の制限はないが、発光が外部に効率
的に放出される形状等を呈していることが好ましい。ま
た、化学発光試薬の発光反応の開始から終了までがフロ
ーセルリアクタ内で生じるように、言い換えれば測定し
ようとする酸化剤の推定量の全てが発光反応で消費され
る程度されるように、流速との関係でその長さ等が調整
されていることが好ましい。

【００１７】前記の通り、化学発光試薬及び酸化剤はフ
ローセルリアクタを通過しつつ発光を放出する。従っ
て、流速との関係で充分な時間に渡って化学発光物質、
酸化剤及び触媒酵素が接触し得るような長さを有してい
ることが好ましいのであるが、流速が一定であれば、フ
ローセルリアクタの断面径を大きくして全長を短くする
か、あるいは断面径を小さくして全長を長くする等すれ
ば良い。断面径を大きくするに従って、その中心部で放
射された発光がフローセルリアクタの外部に到達する距
離が長くなるため、断面径は可能な限り小さくすること
が特に好ましい。

【００１８】特に好適なフローセルとして、市販のテフ
ロンチューブ（サンプラテック（株）製、５２５、Ｎｏ
１９、内径０．９６ｍｍ×外径１．５６ｍｍ、長さ２５
０ｍｍ）を例示することができる。

【００１９】このような、例えば前述したテフロンチュ
ーブ製のフローセルリアクタへ前記のようにして調製し
た充填剤を充填するには、（１）充填剤を水等の溶媒に
より懸濁状態にしておき、（２）テフロンチューブは片
端に石英ウールを詰め、充填剤が抜け出ない状態にし、
（３）テフロンチューブの石英ウールを詰めた側をアス
ピレーター等の吸引装置に接続し、（４）充填剤の懸濁
液をテフロンチューブ内へ吸引して導入し、（５）懸濁
液を導入した側に石英ウールを詰める、という手順に従
うことが例示できる。この手順により、懸濁液中の固体
分（充填剤）は石英ウールによりトラップされ、フロー
セルリアクター内に充填状態となる。なお、本願発明者
の知見によれば、前記（１）における懸濁液の濃度を３
０〜５０％程度とすることにより、充填をスムースに行
うことが可能である。

【００２０】充填の完了したフローセルリアクターを、
該リアクターから放出される発光を検出するための検出
手段と共に適当な筺体に収容して本願発明の化学発光検
出器を構成する。検出手段としては、適当なレンズやミ
ラー等の通常の集光素子と、フォトマルチプライヤーや
光センサー等の通常の光検出素子（装置）を組み合わせ
ることにより、容易に構成できる。なお、適当な筺体中
にフローセルリアクターと検出手段を収容するのは、外
部光により発光の測定が影響されないようにするためで
ある。もっとも、例えば光ファイバー等を用いて前記集
光素子と光検出素子を連結するようにすれば、光検出素
子とファイバーを近接して配置するのみで光検出素子は
隔離して配置することも可能である。

【００２１】フローセルリアクターと検出手段は、フロ
ーセルリアクター部位から放出される発光を検出し得る
ように配置すれば良い。例えばフローセルリアクターを
平面上に渦巻き状に展開したうえで検出手段を該渦巻き
に対向配置することが例示できる。また市販の化学発光
検出器を利用することも可能である。図３は、市販の化
学発光検出器（一例を述べれば相馬光学社製、モデルＳ
−３４００）を利用した本願発明の化学発光検出器の様
子を示す図であり、２１はフローセルの担持部、２２は
渦巻き状に展開配置したフローセルリアクター、２３は
フローセルの入口側、２４はフローセルの出口側を示し
ている。フォトマルを具備する検出手段は、この渦巻き
に対向するように配置される。なお図３ではフローセル
リアクターを渦巻き状に展開配置した例をしめしたが、
直線状又はジグザグ状等に配置することもできる。

【００２２】図４は、本願発明の化学発光検出装置を装
備する化学発光検出システムの概略を示す図である。図
中、装置は溶液タンク２５、２７、送液ポンプ２６、２
８、試料注入部２９、本願発明の化学発光検出器３０、
記録計３１、廃液タンク３２をそれぞれ示す。送液ポン
プ２８は化学発光試薬溶液の送液に用いられるが、送液
ポンプ２６により送液する溶液は被測定物質に応じて種
々選択される。酸化剤であるＨ₂Ｏ₂を測定する場合は、
試料注入部２９より注入される試料溶液（Ｈ２０２溶
液）を単に移送するための、例えば水等の溶液である
が、被測定物質がグルコースやコレステロール等である
場合には、被測定物質を基質としてＨ₂Ｏ₂を生成する酵
素の溶液等を送液ポンプ２６により送液する。すなわ
ち、被測定物質がグルコースであればグルコース酸化酵
素溶液を、被測定物質がコレステロールであればコレス
テロール酸化酵素溶液を送液すれば良い。

【００２３】送液ポンプ２６、２８の送液条件には、特
に限定はなく、測定の条件により異なるが、フローセル
リアクターで充分な化学発光反応が生じるように０．０
１ｍｌ／分〜２．０ｍｌ／分程度の範囲の流速が特に好
ましい。溶液タンク２５、２７は、それぞれ、送液ポン
プ２６、２８により送液される溶液を貯蔵するためのも
ので、必要な量の溶液を貯蔵できればその大きさや形状
は特に限定されない。材質も当該溶液を安定的に貯蔵で
きれば制限はなく、ガラスや高分子樹脂等を用いること
が例示できる。

【００２４】試料注入部２９は測定に用いる試料溶液の
量を任意に変えることができれば特に制限はないが、試
料注入作業を自動的に行い得るものが好ましい。記録計
３１としては検出器で得られた信号を記録するものであ
り、信号を記録紙に出力するのみならず、直接電子記録
媒体等へ記録したり、或いはディスプレイ装置に表示す
ることができるものであっても良い。

【００２５】

【発明の実施の形態】以下に本願発明をより詳細に説明
するために実施例を記載するが、これらは一実施形態で
あり、本願発明を限定するものではない。

【００２６】実施例１図４に示下構成の発光分析システムを使用し、触媒物質
としてペルオキシダーゼ、化学発光試薬としてルミノー
ルを選択して、Ｈ₂Ｏ₂濃度のフローインジェクション測
定を行った。なお使用した化学発光検出器は図３として
示した構成のものであり、フローセルリアクターの充填
剤充填部分の長さは６ｃｍである。

【００２７】溶液タンク２５に水を、溶液タンク２７に
０．０５ｍｏｌ／ｌトリシン緩衝液（ｐＨ９．２）を用
意し、それぞれを送液ポンプ２６、２８により０．１ｍ
ｌ／ｍｉｎの流速で３０分間送液して初期化を行い、続
いて、溶液タンク２の中身を０．５６ｍｍｏｌ／ｌルミ
ノール溶液に換え、送液ポンプにより０．１ｍｌ／ｍｉ
ｎの流速で送液し、ベースラインの安定化を確認した
後、試料注入部２９よりＨ₂Ｏ₂含有試料溶液を５０μｌ
注入した。なお種々のＨ₂Ｏ₂含有試料を連続測定する場
合には、試料を測定するごとに水を同量注入した。

【００２８】上記のようにして測定に供するルミノール
濃度の発光強度への影響を検討した。結果を図５に示
す。

【００２９】図５によれば、発光強度は被測定物質であ
るＨ₂Ｏ₂の濃度にかかわらず、ルミノール濃度約３．５
ｍｍｏｌ／ｌまでは増加し、それ以上の濃度ではほぼ一
定となる傾向が見られた。この結果と経済性等を考慮し
て、以下の測定ではルミノール濃度を０．５６ｍｍｏｌ
／ｌとした。

【００３０】実施例２同一濃度のＨ２０２溶液を試料溶液として、再現性を検
討した。４．８５μｍｏｌ／ｌのＨ２０２溶液を試料と
して、実施例１と同様の操作により２０回の連続測定を
行った。結果を図６に示す。

【００３１】図６によれば、２０回の連続測定において
も発光強度の低下は見られず、良好な再現性（変動係数
２．４０％、ｎ＝１１）が得られた。なお、ペルオキシ
ダーゼ固定化充填剤を固定化後リン酸緩衝液（ｐＨ６．
５）中、冷蔵庫保存で１年以上放置した場合であっても
発光強度の低下は認められなかった。

【００３２】実施例３実施例１と同様の操作により、Ｈ₂Ｏ₂濃度０〜９．７μ
ｍｏｌ／ｌの範囲で検量線を作成した。結果を図７に示
す。

【００３３】図７から、０〜９．７μｍｏｌ／ｌのＨ₂
Ｏ₂濃度範囲で作成した検量線はその回帰式がＹ＝５
８．８５＋３９４．００Ｘ＋２７．５２Ｘ２で、Ｈ₂Ｏ₂
の最少検出限界は１０ｐｍｏｌであった。実施例におい
て使用したルミノール濃度が０．５６ｍｍｏｌ／ｌと低
いこと、及び、実施例２に示したようにフローセルリア
クターは繰り返し使用できることから考えて、本願発明
の化学発光検出器を用いることでより高感度かつ経済性
の良い測定が可能となることが分かる。

【００３４】実施例４触媒物質としてペルオキシダーゼ、化学発光試薬として
ルミノールを選択し、グルコース濃度のフローインジェ
クション測定を行った。グルコース濃度の測定原理は、
ポンプ２６によりグルコースオキシダーゼ溶液、ポンプ
２８によりルミノール溶液の送液を行い、試料注入部２
９より注入されたグルコースは流れの中でグルコースオ
キシダーゼにより酸化され、同時にグルコース量に応じ
てＨ₂Ｏ₂が生成される。生成されたＨ₂Ｏ₂はルミノール
と混合され、化学発光検出器３０内のフローセルリアク
ターへ導入される。ペルオキシダーゼの共存下、ルミノ
ールはＨ₂Ｏ₂濃度に応じて化学発光を放出するため、こ
れを測定することにより、被検体中のグルコース濃度を
定量することができる。

【００３５】まず、溶液タンク２５にグルコースオキシ
ダーゼ溶液（和光純薬工業（株）製、Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓｎｉｇｅｒ、２０Ｕ／ｍｌ、ｐＨ７．４トリ
シン緩衝液）を、溶液タンク２７に０．０５ｍｏｌ／ｌ
トリシン緩衝液（ｐＨ９．２）を用意し、それぞれを送
液ポンプ２６、２８により０．１ｍｌ／ｍｉｎの流速で
３０分間送液して初期化を行った。次に溶液タンク２７
を０．５６ｍｍｏｌ／ｌルミノール溶液に換え、送液ポ
ンプ２８により０．１ｍｌ／ｍｉｎの流速で送液し、ベ
ースラインの安定化を確認した後、試料注入部よりグル
コース標準液（２．８、５．６、１１．１、１６．７ｍ
ｍｏｌ／ｌ）又は標準血清（日水製薬（株）製、スイト
コールＮ、表示値５ｍｍｏｌ／ｌ）を水で１００倍に希
釈した試料を５０μｌ注入した。

【００３６】図８は、グルコース標準液についての測定
結果から作成した検量線である。その回帰式はＹ＝１４
８４−３５１Ｘ＋１６７Ｘ２であった。標準血清の測定
値は４．８ｍｍｏｌ／ｌとなり、表示値とほぼ一致し
た。測定再現性を調べたところ、変動係数はグルコース
標準液（２．７ｍｍｏｌ／ｌ、５．４ｍｍｏｌ／ｌ）で
それぞれ２．７９％（ｎ＝５）、４．５８％（ｎ＝
５）、標準血清で５．７０％（ｎ＝９）と良好であっ
た。

【００３７】

【発明の効果】本発明によれば、化学発光試薬によるＨ
₂Ｏ₂測定において、励起された化学発光試薬から放出さ
れる化学発光を効率的に捕らえることが可能である。こ
の結果、より低濃度のＨ２０２の測定を可能し、更には
使用する試薬濃度を低減することを可能とする、高感度
かつ経済性に優れたＨ₂Ｏ₂定量が可能となる。

【００３８】また本願発明の化学発光検出器では、フロ
ーセルリアクターの長さ等を調整することにより、化学
発光試薬から放出された発光のほぼ全量を捕捉すること
が可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ルミノールを化学発光試薬として用いた従来技
術のＨ₂Ｏ₂測定用化学発光フローインジェクション分析
システム装置の一例の概略図である。

【図２】ルミノールを化学発光試薬とし、ペルオキシダ
ーゼ固定化リアクターを用いた従来技術のＨ₂Ｏ₂測定用
化学発光フローインジェクション分析システム装置の他
の一例の概略図である。

【図３】本願発明の化学発光検出器を示す図である。

【図４】本願発明の化学発光検出器を装備したフローセ
ルインジェクション分析システムの一例の概略図であ
る。

【図５】実施例１におけるルミノール濃度と発光強度の
関係を示した図である。図において、横軸はルミノール
濃度（ｍｍｏｌ／ｌ）を示し、縦軸は発光強度を示す。

【図６】実施例２において、Ｈ₂Ｏ₂溶液（４．８５μｍ
ｏｌ／ｌ）を連続測定した場合の発光強度の再現性を示
した図である。図において、横軸は測定回数を示し、縦
軸は発光強度を示す。

【図７】実施例３における検量線である。図において、
横軸はＨ₂Ｏ₂濃度（μｍｏｌ／ｌ）を示し、縦軸は発光
強度を示す。

【図８】実施例４における検量線である。図において、
横軸はグルコース濃度（μｍｏｌ／ｌ）を示し、縦軸は
発光強度を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】化学発光試薬、酸化剤、及びこれらと共存
した場合に化学発光試薬を化学発光放出可能な状態に励
起する触媒物質を共存させて化学発光試薬を励起し、励
起された化学発光試薬から放出される光の強度により酸
化剤を定量するための化学発光検出器であって、上記触
媒物質を固定化した充填剤をフローセル内に充填したフ
ローセルリアクターと該フローセルリアクター部位から
放出される発光を検出するための検出手段を具備してな
る化学発光検出器。
【請求項２】化学発光試薬、酸化剤、及びこれらと共存
した場合に化学発光試薬を化学発光放出可能な状態に励
起する触媒物質を共存させて化学発光試薬を励起し、励
起された化学発光試薬から放出される光の強度により酸
化剤を定量する化学発光測定方法であって、上記触媒物
質を固定化した充填剤をフローセル内に充填したフロー
セルリアクターを用い、該フローセルリアクター部位か
ら放出される発光を検出することを特徴とする化学発光
測定方法。