JP2000224998A

JP2000224998A - メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法

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Publication number: JP2000224998A
Application number: JP2689799A
Authority: JP
Inventors: Yoshichika Arakawa; 宜親荒川; Masabumi Goto; 正文後藤
Original assignee: KOKURITSU KANSENSHIYOU KENKYUS; KOKURITSU KANSENSHIYOU KENKYUSHO
Current assignee: KOKURITSU KANSENSHIYOU KENKYUS; KOKURITSU KANSENSHIYOU KENKYUSHO
Priority date: 1999-02-04
Filing date: 1999-02-04
Publication date: 2000-08-15
Anticipated expiration: 2019-02-04
Also published as: JP3754993B2

Abstract

(57)【要約】【課題】メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌を判別する
方法であって、病院の検査室においても実施することが
可能な程に簡便な方法及びこの方法を利用するキットの
提供。【解決手段】検出対象である菌が塗布された固体培地
の表面に、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を点在さ
せ、さらに、この阻害剤からの距離が異なる2箇所にβ
−ラクタム薬を点在させ、上記固体培地を培養し、培養
後、上記2箇所のβ−ラクタム薬の周囲に形成される阻
止円の違いにより、検出対象である菌がメタロ−β−ラ
クタマーゼ産生菌か否かを判別する方法。この判別方法
に使用するキット。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、メタロ−β−ラク
タマーゼ産生菌の判別方法に関する。さらに詳しくは、
本発明は、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤と組あわせ
て用いたβ−ラクタム薬により形成される阻止円によ
り、簡便にメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌か否かを判
別できる方法に関する。さらに本発明は、本発明の方法
に用いるキット及びこのキットを用いたメタロ−β−ラ
クタマーゼ産生菌の判別方法に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決すべき課題】メタロ−β−
ラクタマーゼを産生することにより、ペニシリンからセ
フェム、セファマイシン、カルバペネムに至るまでの幅
広い範囲のβ−ラクタム薬に耐性を獲得した緑膿菌やセ
ラチアなどのグラム陰性桿菌が各地の医療設備から分離
され問題となっている。メタロ−β−ラクタマーゼをプ
ラスミド性に産生する菌は、これまでわが国でのみ分離
されてきたが、最近、英国においても分離され、海外の
専門家の間でも関心が高まりつつある。

【０００３】メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌は、セフ
ァロスポリナーゼ過剰産生株などと類似の薬剤耐性パタ
ーンを示すが、後者がカルバペネムに感受性を示すのに
対し、前者は、当初カルバペネム薬に感受性を示してい
る株も、カルバペネム薬の存在下で酵素の産生が誘導さ
れ、やがてカルバペネム薬に耐性を示すようになる。従
って、有効かつ適正な化学療法を実施する上で、両者を
早期に識別できる検査方法の確立が必要となっていた。

【０００４】メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌は、第３
世代セフェム、セファマイシンに高度耐性を示し、カル
バペネムにも低度〜高度耐性を示す。しかし、同様に第
３世代セフェムに高度耐性を示すセファロスポリナーゼ
過剰産生株などとメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌を病
院の検査室において日常的に実施されている薬剤感受性
試験や酵素学的な検査方法（βチェックなど）により識
別することはこれまでは不可能であった。ＰＣＲ法によ
るメタロ−β−ラクタマーゼ遺伝子を検出する方法以外
に確実にメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌を判別する方
法はなかった。

【０００５】そこで本発明の目的は、メタロ−β−ラク
タマーゼ産生菌を判別する方法であって、病院の検査室
においても実施することが可能な程簡便な方法を提供す
ることにある。さらに本発明は、上記方法を利用して、
より簡便にメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌を判別する
方法を実施できるキット及びこのキットを用いたメタロ
−β−ラクタマーゼ産生菌を判別する方法を提供するこ
とにある。

【０００６】

【課題を解決すべき手段】本発明は、検出対象である菌
が塗布された固体培地の表面に、メタロ−β−ラクタマ
ーゼ阻害剤を点在させ、さらに、この阻害剤からの距離
が異なる2箇所にβ−ラクタム薬を点在させ、上記固体
培地を培養し、培養後、上記2箇所のβ−ラクタム薬の
周囲に形成される阻止円の違いにより、検出対象である
菌がメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌か否かを判別する
方法に関する。さらに本発明は、β−ラクタム薬を含有
する２つのディスク及びメタロ−β−ラクタマーゼ阻害
剤を含有させるための１つのディスクを、ストリップ状
の基体に1列に配置し、かつ上記メタロ−β−ラクタマ
ーゼ阻害剤を含有させるためのディスクが列の一端にな
るようにしたことを特徴とするメタロ−β−ラクタマー
ゼ産生菌判別用キットに関する。加えて本発明は、上記
本発明のキットのメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含
有させるためのディスクに、メタロ−β−ラクタマーゼ
阻害剤を含有させ、このキットを検出対象である菌が塗
布された固体培地の表面に置き、培養を行い、培養後、
2つあるβ−ラクタム薬のディスクの周囲に形成される
阻止円の違いにより、検出対象である菌がメタロ−β−
ラクタマーゼ産生菌か否かを判別する方法に関する。

【０００７】

【発明の実施の形態】本発明の方法は、固体培地を用
い、形成された阻止円により、検出対象である菌がメタ
ロ−β−ラクタマーゼ産生菌か否かを判別する方法であ
る。本発明に用いられる固体培地は、通常の薬剤耐性試
験等に汎用されている固体培地でよい。固体培地は、例
えば、炭素源、窒素源等の栄養分を含む寒天培地である
ことができる。そのような固体培地としては、例えばミ
ュラーヒントン寒天培地（Ｄｉｆｃｏ社）等を挙げるこ
とができる。

【０００８】上記固体培地の表面に検出対象である菌を
塗布する。固体培地表面への菌の塗布方法や条件等は、
薬剤耐性試験等で採用されているものをそのまま使用で
きる。例えば、日本化学療法学会標準法またはＮＣＣＬ
Ｓで定められた寒天平板希釈法で指定されている方法を
用い、ミュラーヒントン寒天培地に菌を塗布することが
できる。

【０００９】次いで、検出対象である菌が塗布された固
体培地の表面に、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤(1箇
所)とβ−ラクタム薬(2箇所)とを点在させる。各薬剤の
点在には、具体的には、β−ラクタム薬を含有するディ
スクとメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有するディ
スクを用いることが適当である。β−ラクタム薬を含有
するディスクは、市販品があり、これを用いることがで
きる。また、β−ラクタム薬は、治療薬として市販され
ているものから適宜選択することが出来、例えば、第３
世代セェフェム薬、セファマイン薬、カルバペネム薬等
であることができる。また、第３世代セェフェム薬、セ
ファマイン薬、カルバペネム薬としては、例えば、セフ
タジジム、セフピロム、ラタモキセフ、セフメノキシ
ム、イミペネム等を挙げることができる。但し、これら
の薬剤に限定される意図ではない。β−ラクタム薬であ
ればいずれでも良い。尚、ディスクとして市販品がない
場合でも、適当な寸法及び形状の濾紙にβ−ラクタム薬
を、必要により、溶媒を用いて含浸させることで作成す
ることができる。

【００１０】メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有す
るディスクは、適当な寸法及び形状の濾紙にメタロ−β
−ラクタマーゼ阻害剤を含浸させることで作成すること
ができる。メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤は、メタロ
−β−ラクタマーゼに対して阻害効果を有する薬剤から
適宜選択することができる。メタロ−β−ラクタマーゼ
に対して阻害効果を有する薬剤としては、例えば、有機
チオール化合物等の含硫黄化合物、亜鉛（メタロ−β−
ラクタマーゼが活性部位に有する金属）に対するキレー
ト剤（例えば、ＥＤＴＡ等）、や金属化合物（例えば、
HgCl₂、FeCl₂、CuCl₂、Fe(OH)₃等の塩）を挙げること
ができる。但し、固体培地表面での拡散性や培地の成分
に対して不活性であることから、有機チオール化合物で
あることが好ましい。有機チオール化合物としては、例
えばメルカプト酢酸やメルカプトフロピオン酸等を挙げ
ることができる。但し、これら以外の有機チオール化合
物等の含硫黄化合物からも、固体培地表面での拡散性や
培地の成分に対して不活性であることを考慮して、適当
な化合物を適宜選択することができる。

【００１１】β−ラクタム薬及びメタロ−β−ラクタマ
ーゼ阻害剤の点在量は、各薬剤の固体培地表面での拡散
性や培養時間(拡散時間)、さらにはメタロ−β−ラクタ
マーゼに対する阻害効果の強度等を考慮して適宜決定で
きる。例えば、β−ラクタム薬の場合、セフタジジムで
は点在量を30〜50μgの範囲とすることが適当であり、
またメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤の場合、メルカプ
ト酢酸やメルカプトフロピオン酸では、原液を2〜5μg
の範囲とすることが適当である。但し、これらはあくま
でも目安であり、検査対象とする菌の種類に応じて、β
−ラクタム薬の周囲に形成される阻止円の形状や大きさ
等を考慮して適宜変化させることができる。

【００１２】β−ラクタム薬の2箇所の点在位置は、メ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤からの距離が異なるよう
にする。より具体的には、メタロ−β−ラクタマーゼ阻
害剤に近い方のβ−ラクタム薬は、このβ−ラクタム薬
が培養期間中に拡散する範囲とメタロ−β−ラクタマー
ゼ阻害剤が拡散する範囲とが重複する位置に置かれ、メ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤から遠い方のβ−ラクタ
ム薬は、このβ−ラクタム薬が培養期間中に拡散する範
囲とメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤が拡散する範囲と
が重複しない位置に置かれる。好ましくは、メタロ−β
−ラクタマーゼ阻害剤に近い方のβ−ラクタム薬を、メ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤の拡散範囲内に置く。

【００１３】β−ラクタム薬及びメタロ−β−ラクタマ
ーゼ阻害剤の拡散範囲は、各薬剤の種類と点在量、及び
培養条件(主に時間)により変化するので、使用する薬剤
の種類と点在量及び培養条件から予め求めておくことが
できる。例えば、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤に近
い方のβ−ラクタム薬とメタロ−β−ラクタマーゼ阻害
剤との距離は、例えば、0.5〜2cm程度とし、メタロ−β
−ラクタマーゼ阻害剤から遠い方のβ−ラクタム薬とメ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤との距離は、固体培地を
収納する容器(例えば、シャーレー)の大きさにもよる
が、開口径が9cmのシャーレーの場合例えば、3〜6cm程
度とすることができる。

【００１４】メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤及びβ−
ラクタム薬を表面に置いた固体培地は、培養される。培
養条件は、例えば、35〜37℃、１２〜３６時間の範囲と
することができる。但し、培養条件、特に時間は、上記
薬剤の拡散範囲との兼ね合いを考慮して適宜決定する。

【００１５】上記培養により、固体培地表面に置かれた
β−ラクタム薬及びメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤
は、固体培地表面及び内部を拡散する。対象とする菌が
メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌である場合、この菌
は、メタロ−β−ラクタマーゼを産生することによりβ
−ラクタム薬に耐性を示す。従って、固体培地表面にβ
−ラクタム薬だけを置いたのでは、阻止円は観察されな
いか、観察されても、ディスクに近接した小さな阻止円
が形成されるだけである。即ち、β−ラクタム薬とメタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤との拡散範囲が重複しない
位置にあるβ−ラクタム薬の周囲には、検査対象がメタ
ロ−β−ラクタマーゼ産生菌である場合には、阻止円は
観察されないか、観察されても、ディスクに近接した小
さな阻止円が形成されるだけである。これは、メタロ−
β−ラクタマーゼ産生菌が産生するメタロ−β−ラクタ
マーゼの作用により、β−ラクタム薬だけでは菌の生育
がほとんどまたは全く妨げられないためである。ところ
が、β−ラクタム薬とメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤
との拡散範囲が重複する位置にあるβ−ラクタム薬の周
囲には、対象とする菌がメタロ−β−ラクタマーゼ産生
菌であっても大きな阻止帯が観察される。これは、メタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤により、メタロ−β−ラク
タマーゼの活性が阻害され、その結果、β−ラクタム薬
が菌の生育を妨げることができるようになったためであ
る。ここで観察される阻止帯の形状は、β−ラクタム薬
の拡散範囲とメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤の拡散範
囲との重複の程度により変化する。重複範囲が広い場合
には、円形になる場合（後述の図１中の（３））がある
が、そうでない場合には、歪んだ形（後述の図１の
（１）及び（２））になる。しかし、いずれの場合に
も、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤の拡散範囲と重複
しない位置にあるβ−ラクタム薬の周囲に形成される
（形成されない場合もあるが）阻止円とは大きさの違い
から明確に区別できる。

【００１６】一方、検査対象がメタロ−β−ラクタマー
ゼ産生菌でない場合には、2つの場合がある。β−ラク
タム薬が菌の生育を妨げ、大きめの阻止円を形成する菌
(例えば、ペニシリナーゼ産生菌等の菌)である場合とメ
タロ−β−ラクタマーゼ産生菌ではないが、β−ラクタ
ム薬によっては菌の生育が妨げられず阻止円が形成され
ない場合(例えば、クラスCβ−ラクタマーゼ産生菌、Ｅ
ＳＢＬ産生菌等の菌の場合)である。前者は、メタロ−
β−ラクタマーゼ産生菌でないので、β−ラクタム薬の
みの薬剤耐性試験で判別できる。即ち、メタロ−β−ラ
クタマーゼ阻害剤を併用しないβ−ラクタム薬の周囲に
大きな阻止円が形成され、判別できる。しかし、後者
は、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を併用せずにβ−
ラクタム薬のみを使用した薬剤耐性試験ではメタロ−β
−ラクタマーゼ産生菌であるのか否かは判別できない。
それに対して本発明の方法では、この判別が可能とな
る。

【００１７】この点を図１に示す図面に代わる写真を用
いてさらに説明する。図中の左側の３つは、検査対象と
なる菌がメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌（上から、
（１）IMP-1(プラスミド性メタロ−β−ラクタマーゼ)
産生セラチア・マルセセンス(S.marcescens)、（２）IM
P-1産生クレブシエラ・ニューモニアエ(K.pneumoniae)
（肺炎桿菌）、（３）IMP-1産生緑膿菌）である。一
方、右側の３つは、検査対象となる菌が上から（４）Am
pC過剰産生セラチア・マルセセンス(S.marcescens)、
（５）SHV-5a産生クレブシエラ・ニューモニアエ(K.pne
umoniae)、（６）AmpC過剰産生緑膿菌である。また、固
体培地を敷きつめたシャーレー上の上方左側にあるディ
スクはメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤含有ディスクで
ある。シャーレー上の下方と上方右側にあるディスク
は、β−ラクタム薬含有ディスクであり、下方のディス
クは、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤の拡散範囲外に
あり、かつβ−ラクタム薬の拡散範囲とも重複しない。
上方右側にあるβ−ラクタム薬含有ディスクは、メタロ
−β−ラクタマーゼ阻害剤の拡散範囲内にある。

【００１８】メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌である
（１）〜（３）では、シャーレー上の下方のβ−ラクタ
ム薬含有ディスク周辺に阻止円は形成されていない。そ
れに対して上方のメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤含有
ディスクと隣接して置かれたβ−ラクタム薬含有ディス
クには阻止帯が観察され、メタロ−β−ラクタマーゼ阻
害剤含有ディスクに阻止円が現れている。このように、
β−ラクタム薬の拡散範囲とメタロ−β−ラクタマーゼ
阻害剤の拡散範囲とが重複する位置に置かれたβ−ラク
タム薬(上方のディスク)の周囲に阻止帯が観察され、β
−ラクタム薬の拡散範囲とメタロ−β−ラクタマーゼ阻
害剤の拡散範囲とが重複しない位置に置かれたβ−ラク
タム薬(下方のディスク)の周囲に阻止円が観察されない
場合、検査対象の菌はメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
である。

【００１９】それに対して、メタロ−β−ラクタマーゼ
産生菌でないが、β−ラクタム薬が効かないAmpC過剰産
生セラチア・マルセセンス(S.marcescens)を塗布した
（4）の場合、シャーレー上のいずれのβ−ラクタム薬
含有ディスク周辺にも阻止円は形成されていない。メタ
ロ−β−ラクタマーゼ産生菌でないが、β−ラクタム薬
が効かないSHV-5a産生クレブシエラ・ニューモニアエ
(K.pneumoniae)及びAmpC過剰産生緑膿菌を塗布した
（5）及び(6)の場合、いずれのβ−ラクタム薬含有ディ
スクにも小さな同様の形状の阻止円が観察される。この
ように、検査対象がメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌で
ある場合と検査対象がメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
でない場合とで、得られる阻止円のパターンが異なり、
両者を判別することが可能になる。

【００２０】本発明のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
判別用キットは、β−ラクタム薬を含有する２つのディ
スク及びメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させる
ための１つのディスクを、ストリップ状の基体に1列に
配置し、かつ上記メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含
有させるためのディスクが列の一端になるようにしたこ
とを特徴とする。本発明のキットは、上記本発明の方法
を簡便に実践することを目的として考案されたものであ
る。本発明のキットに使用するβ−ラクタム薬を含有す
る２つのディスクは上記本発明の方法で説明したものと
同様のディスクを使用できる。また、メタロ−β−ラク
タマーゼ阻害剤を含有させるための１つのディスクは、
濾紙等のメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させる
ことができるものであれば良い。これらのディスクをス
トリップ状の基体に一列に、かつ上記メタロ−β−ラク
タマーゼ阻害剤を含有させるためのディスクが列の一端
になるよう配置する。これにより、β−ラクタム薬を含
有する２つのディスクの一方は、このディスクに含有さ
れるβ−ラクタム薬が培養期間中に拡散する範囲とメタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤が拡散する範囲とが重複す
る位置とし、他方のディスクは、このディスクに含有さ
れるβ−ラクタム薬が培養期間中に拡散する範囲とメタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤が拡散する範囲とが重複し
ない位置とすることができる。

【００２１】本発明のキットの一例を図２に示す。図２
の上図は、ディスクを配列した側の基体であり、下図は
ディスクを配列した基体の側面である。ストリップ状の
基体に3つのディスクを1列に配置してある。ストリップ
状の基体の形状や寸法には特に制限はない。このキット
を使用する固体培地の大きさ等を考慮して適宜決定でき
る。尚、ストリップ状の基体は、阻止円の判読を容易に
するため、透明性の高い素材で形成することもできる。
各ディスクの間隔やβ−ラクタム薬のディスク中の含有
量等は、上記本発明の方法において説明したと同様の点
を考慮して適宜決定できる。尚、図中に記載してある薬
剤名や寸法は例示として記載したものであり、本発明の
キットはこれに限定されるものではない。また、本発明
のキットを培地上に置いた後に、メタロ−β−ラクタマ
ーゼ阻害剤を含有させるための１つのディスクに、メタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を添加することができるよ
うに、ストリップ状の基体のメタロ−β−ラクタマーゼ
阻害剤を含有させるための１つのディスクに通じる部分
に小孔を設けることもできる。この小孔を介して、ディ
スクにメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を添加すること
ができる。例えば、この小孔を介して、ディスクに液状
のメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を滴下することがで
きる。

【００２２】上記本発明のキットを用いる判別するメタ
ロ−β−ラクタマーゼ産生菌の方法は、このキットのメ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させるためのディ
スクに、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させ、
このキットを検出対象である菌が塗布された固体培地の
表面に置き（図３の上図参照）、培養を行い、培養後、
2箇所あるβ−ラクタム薬のディスクの周囲に形成され
る阻止円の違いにより、検出対象である菌がメタロ−β
−ラクタマーゼ産生菌か否かを判別することからなる。
上記キットを用いること以外は、上記本発明の方法をそ
のまま用いることができる。例えば、図３の左下に示す
ように、培養後、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含
有させたディスクに隣接するβ−ラクタム薬のディスク
の周囲には阻止円が形成され、メタロ−β−ラクタマー
ゼ阻害剤を含有させたディスクと反対側の端にあるβ−
ラクタム薬のディスクの周囲には阻止円が形成されない
か、形成されても、ディスクに近接した小さな阻止円で
ある場合、検査対象の菌は、メタロ−β−ラクタマーゼ
産生菌であると判別できる。また、図３の右下に示すよ
うに、検査対象の菌がメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
でない場合、培養後、いずれのβ−ラクタム薬含有ディ
スクの周囲にも阻止円が形成されないか、または形成さ
れても、ディスクに近接した小さな阻止円である。

【００２３】メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤は、固体
培地表面及びその内部での拡散性を考慮すると、比較的
低分子量かつ低沸点の化合物から選ばれることがある。
そのため、本発明のキットでは、メタロ−β−ラクタマ
ーゼ阻害剤を含有させるためのディスクには、使用直前
にメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させることと
した。しかし、ディスクに予め不揮発性のメタロ−β−
ラクタマーゼ阻害剤を含有させ、このディスクを密封し
ておくことで、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤の散逸
を防止したキットとすることもできる。

【００２４】

【実施例】以下、本発明の試験方法を実施例によりさら
に説明する。検査対象となる菌として、メタロ−β−ラ
クタマーゼ産生菌として（１）IMP-1(プラスミド性メタ
ロ−β−ラクタマーゼ)産生セラチア・マルセセンス(S.
marcescens)、（２）IMP-1産生クレブシエラ・ニューモ
ニアエ(K.pneumoniae)、及び（３）IMP-1産生緑膿
菌）、並びにメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌ではない
菌として（４）AmpC過剰産生セラチア・マルセセンス
(S.marcescens)、（５）SHV-5a産生クレブシエラ・ニュ
ーモニアエ(K.pneumoniae)、及び（６）AmpC過剰産生緑
膿菌を選び、以下の試験を行った。日本化学療法学会標
準法に従い、ミューラーヒントン液体培地でMacFarland
0.5に調整した被検菌の菌液を、感受性試験用の綿棒で
取り、試験管の管壁に押し当てて絞った後、２回、薬剤
感受性試験用の寒天培地（ミューラーヒントン寒天培
地）に塗布し、短時間表面を軽く乾燥させる。セフタジ
ジム(CAZ)など、市販の第３世代セフェム薬の感受性デ
ィスクと抗菌薬を含まない「ろ紙（厚みが0.5 〜1.0 m
m, 直径が約6.3 mm）」を、約20 mm間隔をあけて置く。
その中央より直角方向に40 mm隔てたところに、同様の
３世代セフェム薬の感受性ディスクを置く。寒天培地上
に置いた、抗菌薬を含まない「ろ紙」に、阻害薬（メル
カプトプロピオン酸、メルカプト酢酸などのチオール化
合物や含硫化合物の原液、重金属塩溶液、金属キレート
剤等）を、3 μl、マイクロピペット等を用いて吸収さ
せる。37℃で一夜、培養し、感受性ディスクの周囲の、
発育阻止円の形状の差を観察し、メタロ-β-ラクタマー
ゼを産生する菌か否かを判定する。結果を図1に示す。
２つの第３世代セフェム薬の感受性ディスクの周囲の阻
止円の形状を比較し、ａ．阻止円の形状に差が見られる場合〔（１）〜（３）
の菌〕は、メタロ-β-ラクタマーゼ産生株ｂ．阻止円の形状に差が見られない場合〔（４）〜
（６）の菌〕は、メタロ-β-ラクタマーゼ非産生株と判定される。

【００２５】

【発明の効果】本発明のによれば、メタロ−β−ラクタ
マーゼ産生菌を、ＰＣＲ法など特殊な方法を用いること
なく、病院の検査室においても実施することが可能な程
簡便な方法で判別することができる。さらに本発明によ
れば、より簡便にメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌を判
別する方法を実施できるキット及びこのキットを用いた
メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌を判別する方法を提供
することがある。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例で得られた固体培地上の阻止円の状態
を示す図面に代わる写真。

【図２】本発明のキットの説明図。

【図３】本発明のキットを用いた方法の説明図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:43） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:22） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:43） (72)発明者後藤正文熊本県熊本市大江本町５−１国立熊本大学内Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QQ06 QR47 QR57 QR75 QS36 4B065 AA29X AA48X AC10 BB11 BB37 BC36 CA46

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】検出対象である菌が塗布された固体培地
の表面に、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を点在さ
せ、さらに、この阻害剤からの距離が異なる2箇所にβ
−ラクタム薬を点在させ、上記固体培地を培養し、培養
後、上記2箇所のβ−ラクタム薬の周囲に形成される阻
止円の違いにより、検出対象である菌がメタロ−β−ラ
クタマーゼ産生菌か否かを判別する方法。
【請求項２】一方のβ−ラクタム薬は、このβ−ラク
タム薬が培養期間中に拡散する範囲とメタロ−β−ラク
タマーゼ阻害剤が拡散する範囲とが重複する位置に置か
れ、他方のβ−ラクタム薬は、このβ−ラクタム薬が培
養期間中に拡散する範囲とメタロ−β−ラクタマーゼ阻
害剤が拡散する範囲とが重複しない位置に置かれる請求
項１に記載の方法。
【請求項３】メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有
するディスク及びβ−ラクタム薬を含有するディスクを
用いて、メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤及びβ−ラク
タム薬をそれぞれ点在させる請求項１または２に記載の
方法。
【請求項４】メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤が有機チ
オール化合物である請求項１〜３のいずれか１項に記載
の方法。
【請求項５】有機チオール化合物がメルカプト酢酸また
はメルカプトプロピオン酸である請求項４に記載の方
法。
【請求項６】β−ラクタム薬が第３世代セェフェム薬で
ある請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】第３世代セェフェム薬がセフタジジムであ
る請求項６に記載の方法。
【請求項８】β−ラクタム薬を含有する２つのディスク
及びメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させるため
の１つのディスクを、ストリップ状の基体に1列に配置
し、かつ上記メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有さ
せるためのディスクが列の一端になるようにしたことを
特徴とするメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌判別用キッ
ト。
【請求項９】請求項８に記載のキットのメタロ−β−ラ
クタマーゼ阻害剤を含有させるためのディスクに、メタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤を含有させ、このキットを
検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に置き、
培養を行い、培養後、2つあるβ−ラクタム薬のディス
クの周囲に形成される阻止円の違いにより、検出対象で
ある菌がメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌か否かを判別
する方法。