WO2004040008A1 - β−ラクタマーゼ検出試薬組成物、検出キット及び検出方法 - Google Patents

β−ラクタマーゼ検出試薬組成物、検出キット及び検出方法 Download PDF

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WO2004040008A1
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lactamase
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group
detection
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Atsushi Murata
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Showa Yakuhin Kako Co.,Ltd.
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)

Definitions

  • the present invention relates to a reagent composition for detecting lactase, a kit for detecting lactase, and / or a method for detecting lactase.
  • ⁇ I-lactamase is a group of enzymes that hydrolyze the intramolecular /?-Lactam ring of ⁇ -lactam antibacterials. Based on the homology of the amino acid sequences of the enzyme proteins, class A, Classified as B, C and D.
  • Extended-substrate / ⁇ -lactamase (ESBL) is an enzyme that has a wider range of substrates (? -Lactam antibacterials) that degrade than conventional class A ⁇ -lactamases.
  • ESBL Extended-substrate / ⁇ -lactamase
  • These lactobacillus mases deactivate the antibacterial activity of lactobacillus antibacterial agents, and ESBL in particular has been regarded as a causative agent of hospital-acquired infection.
  • Administering ⁇ -larutam antibiotics to bacteria that are resistant to lactam antibacterial agents not only has no therapeutic effect, but also causes the spread of new resistant bacteria. Therefore, it is necessary to
  • the chromogenic cephalosporin method is a method using cephalosporin, which changes color when the ring is cleaved by lactone, and has a high detection sensitivity because the reagent itself changes color.
  • products that have been commercially available using the chromogenic cephalosporin method have been used as a detection substrate for ditrocephine (3- [2,4-dinitrostyryl] -7- (2-phenylacetate). Amide) -3-cef-4-carboxylic acid (JP-A-48-50787). This product could be detected with a short detection time of about 30 minutes, but it was impossible to determine the class by reacting with all the classes of? -Lactamase.
  • there is no known product using the chromogenic cephalosporin method which uses nitrocefin in combination with a 5-lactamase inhibitor.
  • the present invention provides a method for detecting lactamase, a formula I drug, a composition, a kit for detecting 3-lactase and / or a method for detecting lactase, which can rapidly identify lactase. It is for this purpose.
  • the present inventors have found that, by using a specific ⁇ -lactamase detection substrate and a 5-lactamase inhibitor in combination, particularly, two or three specific It has been found that the above problems can be solved by combining types.
  • the present invention relates to a reagent composition
  • a reagent composition comprising a ⁇ -lactamase detecting substrate for use in the chromogenic cephalosporin method and a lactamase inhibitor.
  • I will provide a.
  • the present invention also provides a kit for detecting lactase comprising at least one detection reagent composition selected from the group consisting of the following (a) to (e):
  • a detection reagent composition containing a combination of aztreonam and ethylenediaminetetraacetic acid as a ⁇ -lactamase inhibitor
  • a detection reagent composition containing a combination of clavranic acid and ethylenediaminetetraacetic acid as a ⁇ -lauminase inhibitor
  • a detection reagent composition containing aztreonam and clavulanic acid as ⁇ -larase inhibitor
  • the present invention also provides a kit for detecting 5-lactamase, which comprises at least one selected from the group consisting of: (g), (g), (h) and (i):
  • a detection reagent composition comprising clavulanic acid as a ⁇ -larminase inhibitor
  • a detection reagent composition containing aztreonam as a ⁇ -larminase inhibitor
  • a detection reagent composition comprising a combination of aztreonam and clavulanic acid as an inhibitor of lactose.
  • the present invention also provides a method for detecting ⁇ -lactamase, which comprises contacting a sample solution containing an analyte with the reagent composition for detecting lactamase.
  • the present invention also includes contacting a sample liquid containing an analyte with the above-described lactose mase detection reagent composition held in the sample holding portion of the lactase mase detection kit.
  • the present invention provides a method for detecting evening sun.
  • the present invention also includes contacting a sample solution containing an analyte with a ⁇ -lactamase detection reagent composition held on the sample holding portion of the kit for detecting lactase.
  • ⁇ ⁇ Provide a simple and easy detection method.
  • FIG. 1 is a schematic perspective view of an example of the kit for detecting lactamase of the present invention.
  • the present invention is based on the chromogenic cephalosporin method.
  • Examples of the substrate for detection of lactase which can be used in the present invention include a compound represented by the following general formula (1) disclosed in JP-A-48-50787 or a physiologically acceptable compound. Or a salt thereof, or a compound represented by the following general formula (2) or a carboxylate derivative thereof disclosed in WO 02/24707. The contents of these specifications are all included in this specification.
  • Ru is a phenyl, phenyl or naphthyl group
  • A is a phenyl group substituted at the 2-, 4- or 2,4-position by a cyano group or a nitro group. Yes; and X! Is —S— or — SO—.
  • R 2 may be the same or different and each represent a hydrogen atom, a nitro group or a cyano group; and R 3 is Ci—C 6 which may be substituted with a carboxyl group.
  • R 4 represents a hydrogen atom or an amino group; and X 2 represents —S— or —SO—, provided that and R 2 are not hydrogen atoms at the same time. .
  • -Lactamase detection substrate is 3- [2,4-dinitrostyryl] -7- (2-chenilacetamide) -3-cefem-4 -Carboxylic acids or physiologically acceptable salts thereof are preferred.
  • Examples of the compound represented by the general formula (2) include a compound in which X 2 is —S—, and a propyl in which R 3 is substituted with a methyl group or a carboxyl group which may be substituted with a carboxyl group.
  • R 4 is an amino group
  • Compounds which are a propyl group and R 4 is an amino group are preferred.
  • the /?-Lactamase inhibitor that can be used in the present invention is not particularly limited as long as it is a compound having a -lactamase-inhibiting activity.
  • Inhibitors that can be preferably used are selected from the group consisting of clavulanic acid or a compound having an equivalent effect thereto, aztreonam, cloxacillin, a chelating agent capable of chelating zinc ions, sulbactam, evening zobactam, chenamycin and carmonam. There is at least one.
  • chelating agents capable of chelating with zinc ions include ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), cyclohexanediaminetetraacetic acid, and mercapto compounds.
  • mercapto compound for example, compounds disclosed in JP-A-2000-224998 and JP-A-2001-299388 can be used. it can. Specifically, mercaptoacetic acid, mercaptopropionic acid, especially 2-mercaptopropionic acid, and their sodium, potassium, calcium, barium or quaternary ammonium salts, and mercaptophenols. And sulfur-containing compounds such as organic thiol compounds. Zincion and sharp
  • EDTA is particularly preferred as a chelating agent that can be used.
  • an inhibitor of clavulanic acid; aztreonam; a combination of aztreona A and ethylenediaminetetraacetic acid; clavulanic acid and ethylenediamine It is preferably selected from the group consisting of a combination with tetraacetic acid; a combination of aztreonam and clavulanic acid; and a combination of aztreonam, clavulanic acid and ethylenediaminetetraacetic acid.
  • Examples of the combination of the /?-Lactamase detection substrate and the /?-Lactamase inhibitor which can be preferably used in the present invention include the following:
  • the lactamase detection substrate is a compound represented by the above general formula (1) or a physiologically acceptable salt thereof, and the laccase inhibitor is clavulanic acid, aztreonam, ethylenediamine
  • a detection reagent composition which is at least one member selected from the group consisting of acetic acid and cupacillin;
  • the lactamase detection substrate is a compound represented by the general formula (2) or a lipoxylate derivative thereof, and the lactamase inhibitor comprises clavulanic acid, aztreonam, ethylenediaminetetraacetic acid and cloxacillin.
  • a detection reagent composition which is at least one member selected from the group.
  • detection reagent compositions comprising group (c) above and one or more selected from the group consisting of the following (f) to (i):
  • a detection reagent composition containing aztreonam as a ⁇ -larase inhibitor containing aztreonam as a ⁇ -larase inhibitor
  • ?-A detection reagent composition comprising a combination of aztreonam and clavranic acid as a lactamase inhibitor.
  • the detection reagent composition of the present invention comprises a / 5-lactamase detection substrate and a ??-lactamase inhibitor in a weight ratio of 1:10 to 100: 1. It is preferably used in the range of 1: 1 to 50: 1, and more preferably in the range of 1: 1 to 1:10.
  • the detection reagent composition of the present invention comprises: a ⁇ ⁇ -lactone detection substrate and a? -Lactamase inhibitor; water, a phosphate buffer, dimethyl sulfoxide, and a mixture thereof. Can be used after being dissolved in a solvent such as Of these, a mixture of dimethyl sulfoxide and a phosphate buffer is particularly preferred.
  • the mixing ratio is not particularly limited.
  • the concentration of the substrate for detecting lactose is preferably 0.025 mg / mL to 62.5 mg / mL, more preferably 1.25 mg / mL to 12.5 mg / mL, and the concentration of the lactase inhibitor is By dissolving in a solvent so as to have a concentration of 0.0125 mg / mL or more; l2.5 mg / mL, more preferably 1.25 mg / mL; A solution can be prepared.
  • the detection reagent composition of the present invention is preferably used after being adjusted to have a pH of 6.0 to 8.0.
  • the pH is preferably adjusted from 5.5 to 8.5.
  • a compound represented by the above general formula (2) is used as a substrate for detecting laccase, it is preferable to adjust ⁇ 6.0 to 8.0.
  • the solution containing the detection reagent composition prepared in this manner may further contain a polymer such as polyvinyl alcohol, hydroxymethylcellulose, polyvinyl chloride, or a copolymer of methacrylate within a range that does not impair the effects of the present invention. It can be added in an amount of By adding these polymers and the like, a solution containing the detection reagent composition of the present invention is prepared. Is preferred because the stability of the polymer is improved. Of these, methacrylic acid copolymers are particularly preferred.
  • the specimen used in the present invention can be collected, for example, from the pharynx or nasal cavity of a patient using a cotton swab or the like. It can also be used for urine, sputum, pus, etc.
  • the sample solution can be prepared by dissolving in a solvent such as water, a phosphate buffer, or a physiological saline solution.
  • the sample liquid is preferably prepared so that the concentration of bacteria contained in the liquid is 10 1 () CFU / mL.
  • Oligosaccharides, surfactants, dextrins, and the like can be further added to the sample solution prepared in this manner in amounts not to impair the effects of the present invention.
  • the form of the ⁇ -lactamase detection kit of the present invention is not particularly limited as long as it contains the above-described detection reagent composition, such as a disk type, a combination type of a disk and a mount, a plate type, and a strip type. .
  • a plate type is preferably used.
  • the kit of the present invention may contain a positive control solution comprising a solution containing 3-lactamase and the detection reagent composition of the present invention, and a negative solution comprising a solution containing a substrate for detecting laquinase, if necessary.
  • a control solution may be included.
  • FIG. 1 shows a schematic perspective view of a kit for detecting lactase of the present invention, but the present invention is not limited to this.
  • the detection kit of the present invention will be described with reference to FIG. 1.
  • the detection kit of the present invention includes a sample container 1 and a base 3 having a plurality of sample holding portions 2 housed therein.
  • the sample holding section 2 has an opening through which the prepared sample (sample liquid or control liquid) is dropped.
  • the materials forming the sample container, the substrate, and the sample holding portion constituting the detection kit of the present invention are not particularly limited. Also, their size and shape are not particularly limited.
  • the kit of the present invention essentially contains the detection reagent composition of the above-mentioned group (c), and further comprises one or more detection reagent compositions of the above-mentioned groups (a), (b), (d) or (e). Including It is more preferred to have
  • It contains the detection reagent composition of the above group (d) as essential and further contains one or more detection reagent compositions of the above groups (a), (b), (c) or (e).
  • a laccase detection kit is also preferred.
  • a detection kit containing all the detection reagent compositions of the above groups (a) to (e) is preferred.
  • the kit of the present invention also preferably contains at least one detection reagent composition selected from the group consisting of (c) and (f) to (i).
  • the kit of the present invention also contains the detection reagent composition of the above group (c) as an essential component, and further comprises at least one detection reagent composition of the above group (f), (g), (h) or (i). It is more preferable to contain a substance.
  • It contains the detection reagent composition of the above-mentioned group (h) as essential, and further contains the detection reagent composition of one or more of the above-mentioned groups (c), (f), (g) or (i). Evening maze detection kits are also preferred.
  • a detection kit containing all the detection reagent compositions of the above groups (c) and (f) to (i) is preferable.
  • the detection kit of the present invention includes the detection reagent compositions of the present invention in the above groups (a) to (i), wherein 3- [2,4-dinitrostyryl] -7- (2-Chenylacetamide) -3-cef-4-carboxylic acid or 7- [2- (2-Aminothiazol-4-yl) -2- (1-carboxy-1-methylethoxyimino) ) Acetoamide] -3- (2,4-dinitrostyryl) -3-cef-4-carboxylic acid (hereinafter, referred to as HMR Z compound) is particularly preferable.
  • kits of the present invention the classes A, B, C, D and ESBL of luciferase can be quickly and quickly determined.
  • the present invention also includes the step of adding a sample solution containing an analyte to any of the aforementioned solutions containing the reagent composition for detecting laccase mase, and / or the detection of lactamase. About the method.
  • the method of the present invention includes adding a sample solution containing an analyte to the detection reagent composition-containing liquid prepared as described above.
  • a predetermined temperature for example, at room temperature
  • a predetermined time for example, about 30 minutes
  • the activity can also be quantified by measuring the change in color tone at a specific wavelength.
  • Nitrocefin is 3- [2,4-dinitrostyryl] -7- (2- phenylacetamide) -3-cef-4-carboxylic acid,
  • the HMRZ compound is 7- [2- (2-Aminothiazol-4-yl) -2- (1-carboxy-1-methylethyloximino) acetamide] -3- (2,4-dinitrostyryl) -3- Cef-4-force rubonic acid,
  • AZT stands for aztreonam
  • EDTA stands for ethylenediaminetetraacetic acid
  • CVA stands for clavulanic acid.
  • the bacteria listed in Table 2 below are used as non-mase-producing bacteria, class A-producing bacteria, class B-producing bacteria, class C-producing bacteria, and ESBL-producing bacteria. inoculated to prepare a sample solution of each 1 0 8 CFU / mL to. Table 2
  • the plate prepared above was inoculated with 50 ⁇ L of the sample solution per 1 ⁇ l of the microplate.
  • the reactivity to ⁇ -lactamase was examined by observing the change in color tone 30 minutes after inoculation.

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Abstract

　　本発明は、β−ラクタマーゼ検出基質として、3-[2,4-ジニトロスチリル]-7-(2-チエニルアセトアミド)-3-セフェム-4-カルボン酸又は7-[2-(2-アミノチアゾール-4-イル)-2-(1-カルボキシ-1-メチルエトキシイミノ)アセトアミド]-3-(2,4-ジニトロスチリル)-3-セフェム-4-カルボン酸を含有し、β−ラクタマーゼ阻害剤として、クラブラン酸、アズトレオナム、エチレンジアミン四酢酸及びクロキサシリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有し、迅速かつ容易に、高感度でβ−ラクタマーゼを判別できる、β−ラクタマーゼ検出試薬組成物を提供する。本発明はまた、該検出試薬組成物を含む検出キットを提供する。本発明はまた、分析対象物を含有する検体液を、該組成物に接触させることを含む、β−ラクタマーゼ検出方法を提供する。

Description

?—ラク夕マ一ゼ検出試薬組成物、 検出キット及び検出方法 技術分野
本発明は、 ーラク夕マーゼ検出試薬組成物、 ラク夕マーゼ検出キット及 び/?—ラク夕マ一ゼ検出方法に関する。 背景技術
^一ラク夕マーゼは、 β—ラりタム系抗菌剤の分子内/?一ラク夕ム環を加水分 解する一群の酵素であり、 酵素タンパクのアミノ酸配列の相同性を基にクラス A 、 B、 C及び Dに分類されている。 基質拡張型/?ーラクタマ一ゼ （E S B L ) は 、 従来のクラス A ^—ラクタマーゼよりも分解する基質 （ ?ーラクタム系抗菌 剤） の範囲が拡張された酵素である。 これらの/?—ラク夕マーゼは、 ?—ラク夕 ム系抗菌剤の抗菌力を失活させ、 なかでも E S B Lは院内感染の原因菌として問 題視されている。 ラりタム系抗菌剤に耐性を示す細菌に β—ラりタム系抗菌 剤を投与しても、 治療効果が得られないばかりか、 新たな耐性菌を蔓延させる原 因ともなる。 従って、 正確な治療方針を定める上で、 ?—ラクタマ一ゼを迅速か つ正確に検出する必要がある。
現在用いられている ?—ラク夕マ一ゼ検出法は、 1) クロモジエニックセファ ロスポリン法、 2) ァシドメトリー法、 3) ョ一ドメトリ一法、 及び 4) UV法の 4つに大別されており、 その他、 M I Cを比較する培養法があげられる。 これま でに市販されている主な/?—ラク夕マーゼ検出製品としては、 クロモジエニック セファロスポリン法を利用して 5—ラク夕マ一ゼの有無を判別するもの、 ァシド メトリー法を利用して/?—ラク夕マ一ゼ クラス A並びにクラス Cを検出するも の、 培養法を利用して/?ーラクタ.マーゼ クラス B又は E S B Lを検出するもの 等があげられる。
クロモジエニックセファロスポリン法は、 ラク夕マ一ゼによって^ーラク 夕ム環が開裂すると変色するセファロスポリンを用いる方法であって、 試薬自体 が変色するため、 検出感度がよいことを特徴とするが、 これまでに市販されてい. るクロモジエニックセファロスポリン法を利用した製品は、 検出基質として二卜 ロセフイン （3- [2，4-ジニトロスチリル] -7- (2-チェニルァセトアミド）- 3-セフエ ム- 4-カルボン酸、 特開昭 4 8— 5 0 7 8 7号公報） を使用するものである。 こ の製品は 3 0分程度の短い検出時間で判別可能である一方、 ?—ラクタマーゼの 全てのクラスに反応してクラスを判別することが不可能であるものであった。 さ らに、 クロモジエニックセファロスポリン法を利用する製品で、 ニトロセフィン と 5—ラク夕マ一ゼ阻害剤とを併用することを特徴とする検出製品はこれまで知 られていない。
他方、 国際公開第 0 2 / 2 4 7 0 7号パンフレヅトにほ、 クロモジエニックセ ファロスポリン法を利用して E S B Lを検出することができる新規化合物が開示 されている。 しかしながら、 当該国際公開パンフレットには、 特定の 5—ラク夕 マ一ゼ阻害剤との併用については開示されておらず、 E S B L以外の他の β—ラ クタマ一ゼのクラスを検出できる可能性も示唆されていない。 発明の開示
本発明は、 一ラク夕マ一ゼを迅速に判別できる^—ラクタマ一ゼ検出 I式薬,組 成物、 3—ラク夕マ一ゼ検出キヅト及び/?一ラク夕マーゼ検出方法を提供するこ とを目的とする。
本発明者らは、 特定の β—ラりタマ一ゼ検出基質と 5—ラク夕マーゼ阻害剤と を併用することにより、 特に、 ?一ラク夕マーゼ阻害剤として特定の 2又は 3種 類を組合せることにより、 上記課題を解決できることを見出した。
すなわち、 本発明は、 クロモジエニックセファロスポリン法において使用する ための^—ラク夕マーゼ検出基質と、 ?一ラク夕マ一ゼ阻害剤とを含有する/?— ラク夕マーゼ検出試薬組成物を提供する。
本発明はまた、 以下の （a) 〜 （e) からなる群から選ばれる 1以上の検出試薬 組成物を含む/?一ラク夕マ一ゼ検出キットを提供する ：
(a) ?—ラク夕マ一ゼ検出基質として下記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
β—ラクタマーゼ阻害剤としてァズトレオナムとェチレンジアミン四酢酸との 組合せを含有する検出試薬組成物；
(b) ^—ラクタマーゼ検出基質として下記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
β—ラウ夕マーゼ阻害剤としてクラプラン酸とエチレンジァミン四酢酸との組 合せを含有する検出試薬組成物； ,
(c) —ラク夕マーゼ検出基質として下記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
β—ラり夕マ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラブラン酸を含有する検出 試薬組成物；
(d) ?—ラク夕マ一ゼ検出基質として下記一般式 （2 ) で表される化合物又は そのカルボキシレ一ト誘導体、 及び
ラク夕マ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムとエチレンジァミン四酢酸との 組合せを含有する検出試薬組成物；及び
(e) ?—ラク夕マ一ゼ検出基質として下記一般式 （2 ) で表される化合物又は そのカルボキシレート誘導体、 及び
^一ラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラプラン酸とエチレンジァ ミン四酢酸との組合せを含有する検出試薬組成物。
本発明はまた、 以下の ） 、 (g) 、 (h) 及び （i ) からなる群から選ばれる 1以上を含む; 5—ラク夕マーゼ検出キットを提供する：
(f) ラク夕マ一ゼ検出基質として下記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
^一ラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムを含有する検出試薬組成物；
(g) 3—ラク夕マーゼ検出基質として下記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
β -ラり夕マーゼ阻害剤としてクラブラン酸を含有する検出試薬組成物；
(h) 3—ラク夕マーゼ検出基質として下記一般式 （2 ) で表される化合物又は そのカルボキシレート誘導体、 及び
β -ラり夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムを含有する検出試薬組成物；
( i) ^—ラクタマ一ゼ検出基質として下記一般式 （2 ) で表される化合物又は そのカルボキシレート誘導体、 及び
?一ラク夕マ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラブラン酸との組合せを含 有する検出試薬組成物。
本発明はまた、 分析対象物を含有する検体液を、 上記/?—ラク夕マ一ゼ検出試 薬組成物に接触させることを含む、 ^—ラクタマ一ゼ検出方法を提供する。 本発明はまた、 分析対象物を含有する検体液を、 ?—ラク夕マーゼ検出キヅ卜 の試料保持部分に保持された上記 一ラク夕マーゼ検出試薬組成物と接触させる ことを含む、 ?—ラク夕マ一ゼ検出方法を提供する。
本発明はまた、 分析対象物を含有する検体液を、 上記/?一ラク夕マ一ゼ検出キ ヅトの試料保持部分に保持された^—ラクタマーゼ検出試薬組成物と接触させる ことを含む、 ?一ラク夕マ一ゼ検出方法を提供する。 図面の簡単な説明
図 1は、 本発明の ?—ラクタマーゼ検出キットの一例の概略斜視図である。 発明を実施するための最良の形態
本発明は、 クロモジエニックセファロスポリン法に基づくものである。
本発明で用いることのできる/?一ラク夕マ一ゼ検出基質としては、 特開昭 48 - 50787号公報に開示されている下記一般式 （ 1 ) で表される化合物又は生 理的に許容されるその塩、 又は国際公開第 02/24707号パンフレツトに閧 示されている下記一般式 （2) で表される化合物又はそのカルボキシレート誘導 体があげられる。 なお、 これらの明細書の内容は全て本明細書に含まれるものと する。
Figure imgf000007_0001
(—般式 （1) において、 Rは、 ホルムアミド基或いは式 IT CH2 CONH、 R uOCH2 CONHs RuC0NH、 RUCH (NH2) CONH又は RUC ( = NO H) CONH (式中、 Ruはチェニル、 フエニル又はナフチル基である） で表さ れる基であり ； A は、 2-位、 4-位又は 2， 4-位においてシァノ基又はニトロ基 により置換されたフエニル基であり ；及び X！は、 —S—又は— SO—である。 )
Figure imgf000008_0001
(一般式 （2 ) において、 及び R2は、 同一でも異なってもよく、 それぞれ水 素原子、 ニトロ基又はシァノ基を表し； R3は、 カルボキシル基で置換されてい てもよい Ci— C6アルキル基を表し； R4は、 水素原子又はアミノ基を表し；及 び X2は、 —S—又は—S O—を表す。 但し、 及び R2が同時に水素原子であ ることはない。 ） 。
一般式 （1 ) で表される化合物としては、 ?—ラク夕マ一ゼ検出基質が、 3- [2 ，4-ジニトロスチリル]- 7- (2-チェ二ルァセトアミド）- 3-セフエム- 4-カルボン酸 又は生理的に許容されるその塩が好ましい。
一般式 （2 ) で表される化合物としては、 式中 X2が—S—である化合物、 式 中 R 3がカルボキシル基で置換されていてもよいメチル基又は力ルボキシル基で 置換されたプロピル基である化合物、 式中 R4がァミノ基である化合物、 又は式 中 X2が— S—であり、 R3がカルボキシル基で置換されていてもよいメチル基又 はカルボキシル基で置換されたプロピル基であり、 R4がアミノ基である化合物 が好ましい。
中でも、 以下の化合物：
7-[2 - (2-ァミノチアゾ一ル- 4 -ィル） - 2 -（1-カルボキシ -1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミ ド] -3- (2，4-ジニ 1、ロスチリル） -3 -セフエム -4-カルボン酸；
7-[2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2- -カルボキシ- 1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミ ド]- 3-(2，6-ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2-(2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2- ( 1-カルボキシ -1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミ ド]- 3- (4-ニトロスチリル) -3-セフエム -4-カルボン酸；
7 - [2- (2 -ァミノチアゾール -4-ィル） -2 - -カルボキシ- 1-メチルェトキシィミ ノ）ァセトアミ ド] -3-(2,4-ジシァノスチリル） -3-セフエム -4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2 - -カルボキシ- 1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミ ド]- 3-(4-シァノスチリル)- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾール -4-ィル) -2- (1-カルボキシ -1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミ ド]- 3-(2-シァノスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2- (1-カルボキシ- 1-メチルエトキシィミノ ) -2 -（チアゾ一ル -4 -ィル）ァセト アミ ド]- 3- (2, 4-ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7-[2- (2-ァミノチアゾール -4-ィル) -2- (1-カルボキシ -1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミ ド] -3- (2，4-ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸-； L-ォキ シド ；
7- [2- (2 -ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-メ トキシイミノアセトアミド]- 3- (4-二 トロスチリル） -3-セフヱム- 4-カルボン酸；
7-[2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) - 2-メ トキシイミノアセトアミド] -3- (2,4 - ジシァノスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2-(2-ァミノチアゾール - 4-ィル) - 2-メ トキシイミノアセトアミド]- 3- (2,6 - ジシァノスチリル）- 3 -セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-メ トキシイミノアセトアミド]- 3-(2 -シ ァノスチリル）- 3-セフエム -4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド]- 3-(2，4-ジニトロスチリル) -3-セフエム- 4-カルボン酸；
7-[2- (2-ァミノチアゾール -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド] - 3- (2，6-ジニトロスチリル） -3-セフエム -4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2-カルボキシメトキシイミノアセトアミ ド] -3- (4-ニトロスチリル) -3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2-(2-ァミノチアゾール -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド] -3-(2-ニトロスチリル） -3-セフエム -4-カルボン酸；
7-[2-(2-ァミノチアゾ一ル - 4-ィル) - 2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド] -3- (2，4-ジシァノスチリル)- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-カルボキシメトキシイミノアセトアミ ド]- 4- (4-シァノスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾール -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド] - 4- ( 2-シァノスチリル） -3-セフエム -4-カルボン酸；
7-[2-カルボキシメトキシィミノ- 2- (チアゾ一ル -4-ィル）ァセトアミド]- 3- (2, 4 -ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸、 又は
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド]- 3-(2,4-ジニトロスチリル)- 3-セフエム -4-カルボン酸- 1-ォキシド； 又はそのカルボキシレート誘導体が好ましい。
特に、 以下の化合物：
7- [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-(1-カルボキシ -1-メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミド]- 3- (2，4-ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7-[2 - (2-ァミノチアゾ一ル -4 -ィル） -2 -（1-カルボキシ-卜メチルエトキシィミ ノ）ァセトアミド]- 3- (4-ニトロスチリル）- 3-セフエム -4-カルボン酸；
7 - [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2- ( 1-カルボキシ -1-メチルェトキシィミ ノ）ァセトアミ ド] -3-(4-シァノスチリル）- 3-セフエム -4-カルボン酸；
7- [2- (2-ァミノチアゾール -4-ィル) -2-メトキシイミノアセトアミド] -3-(4 -二 トロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；
7- [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド]- 3-(2,4-ジニトロスチリル) -3-セフエム- 4-カルボン酸；又は 7 - [2-(2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2-カルボキシメトキシイミノアセトアミ ド] -3-(4-ニトロスチリル) -3-セフエム- 4-カルボン酸；
又はそのカルボキシレ一ト誘導体が好ましい。
さらに特に、 以下の化合物：
7 - [2 - (2 -ァミノチアゾール -4-ィル） -2- (卜カルボキシ- 1-メチルェトキシィミ ノ）ァセトアミ ド]- 3- (2，4-ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4-カルボン酸；又は
7-[2-(2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル） -2-カルボキシメトキシィミノァセトアミ ド]- 3- (2,4-ジニトロスチリル）- 3-セフヱム- 4-カルボン酸；
が好ましい。
本発明で用いることのできる/?—ラク夕マ一ゼ阻害剤としては、 —ラク夕マ —ゼ阻害活性を有する化合物であれば特に限定されない。 好ましく使用できる阻 害剤としては、 クラブラン酸又はそれと同等の作用をする化合物、 ァズトレォナ ム、 クロキサシリン、 亜鉛イオンとキレート可能なキレート剤、 スルバクタム、 夕ゾバクタム、 チェナマイシン及びカルモナムからなる群から選ばれる少なくと も 1種があげられる。 亜鉛イオンとキレート可能なキレート剤としては、 ェチレ ンジァミン四酢酸 （E D T A) 、 シクロへキサンジァミン四酢酸及びメルカプト 化合物等があげられる。 メルカプト化合物としては、 例えば、 特開 2 0 0 0— 2 2 4 9 9 8号公報及び特開 2 0 0 1— 2 9 9 3 8 8号公報に開示されている化合 物を使用することができる。 具体的には、 メルカプト酢酸、 メルカプトプロピオ ン酸、 特に 2-メルカプトプロピオン酸、 及びこれらのナトリウム塩、 カリウム塩 、 カルシウム塩、 バリウム塩又は第 4級アンモニゥム塩、 及びメルカプトェ夕ノ —ル等の有機チオール化合物等の含硫黄化合物があげられる。 亜鉛ィオンとキレ
—ト可能なキレ一ト剤としては、 E D T Aが特に好ましい。
特に、 ^一ラク夕マ一ゼ阻害剤が、 クラブラン酸；ァズトレオナム；ァズトレ ォナ Aとエチレンジアミン四酢酸との組合せ；クラブラン酸とエチレンジァミン 四酢酸との組合せ；ァズトレオナムとクラブラン酸との組合せ；及びァズトレオ ナムとクラブラン酸とエチレンジアミン四酢酸との組合せとからなる群から選ば れるのが好ましい。
本発明において好ましく使用できる/?一ラク夕マ一ゼ検出基質と/?—ラク夕マ ーゼ阻害剤との I且合せとしては、 以下のものがあげられる ：
ラク夕マーゼ検出基質が、 上記一般式 （1 ) で表される化合物又は生理的 に許容されるその塩であり、 ?—ラク夕マ一ゼ阻害剤が、 クラブラン酸、 ァズト レオナム、 エチレンジアミン四酢酸及びク口キサシリンからなる群から選ばれる 少なくとも 1種である検出試薬組成物；及び
ーラク夕マ一ゼ検出基質が、 上記一般式 （2 ) で表される化合物又はその力 ルポキシレート誘導体であり、 ーラクタマ一ゼ阻害剤が、 クラブラン酸、 ァズ トレオナム、 エチレンジァミン四酢酸及びクロキサシリンからなる群から選ばれ る少なくとも 1種である検出試薬組成物。
上記 （c) 群及び以下の （f) 〜 （i) からなる群から選ばれる 1以上を含む検 出試薬組成物もまた好ましい：
(f) ラク夕マ一ゼ検出基質として上記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
β -ラり夕マ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムを含有する検出試薬組成物；
(g) 一ラク夕マ一ゼ検出基質として上記一般式 （1 ) で表される化合物又は 生理的に許容されるその塩、 及び
β—ラり夕マ一ゼ阻害剤としてクラブラン酸を含有する検出試薬組成物；
(h) ラク夕マーゼ検出基質として上記一般式 （2 ) で表される化合物又は そのカルボキシレート誘導体、 及び
?一ラク夕マ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムを含有する検出試薬組成物；
(i) ?—ラク夕マ一ゼ検出基質として上記一般式 （2 ) で表される化合物又は そのカルボキシレート誘導体、 及び
?—ラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラプラン酸との組合せを含 有する検出試薬組成物。
本発明の検出試薬組成物は、 /5—ラク夕マ一ゼ検出基質と/?—ラク夕マ一ゼ阻 害剤とを、 質量比にして 1 ： 1 0〜1 0 0 ： 1の範囲で使用するのが好ましく、 1 ： 1〜5 0 ： 1の範囲で使用するのがより好ましく、 1 ： 1〜1 ： 1 0の範囲 で使用するのが更に好ましい。
本発明の検出試薬組成物は、 ?—ラク夕マ一ゼ検出基質と/?—ラク夕マ一ゼ阻 害剤とを、 水、 リン酸塩緩衝液、 ジメチルスルホォキサイ ド及びこれらの混合物 等の溶媒に溶解させて使用することができる。 このうち、 ジメチルスルホォキサ ィ ドとリン酸塩緩衝液との混合物が特に好ましい。 混合比は特に限定されない。 具体的には、 ^一ラク夕マ一ゼ検出基質の濃度が好ましくは 0.025mg/mL〜62.5mg /mL、 より好ましくは 1.25mg/mL〜12.5mg/mL、 ラク夕マーゼ阻害剤の濃度が 好ましくは 0.0125mg/mL〜； l2.5mg/mL、 より好ましくは 1.25mg/mL〜； l2.5mg/mLにな るように溶媒に溶解させることにより、 ^—ラクタマ一ゼ検出試薬組成物含有溶 液を調製することができる。
本発明の検出試薬組成物は、 p H6.0〜8.0となるように調整して使用するのが 好ましい。 特に、 ?—ラク夕マ一ゼ検出基質として上記一般式 （1 ) で表される 化合物を使用する場合には、 ' p H 5 . 5から 8 . 5程度に調整するのが好ましい 。 ラク夕マ一ゼ検出基質として上記一般式 （2 ) で表される化合物を使用す る場合には、 ρ Η6.0〜8· 0程度に調整するのが好ましい。
このようにして調製した検出試薬組成物含有溶液には、 さらに、 ポリビニルビ 口リ ドン、 ヒドロキシメチルセルロース、 ポリ塩化ビニル、 メタアクリル酸コポ リマ—等の高分子等を、 本発明の効果を妨げない範囲の量で添加することができ る。 これらの高分子等を添加することにより、 本発明の検出試薬組成物含有溶液 の安定性が向上するので好ましい。 このうち、 メ夕クリル酸コポリマーが特に好 ましい。
本発明において使用する検体は、 例えば患者の咽頭や鼻腔から綿棒等を使用し て採取することができる。 尿、 喀痰、 膿汁等についても使用することができる。 検体液は、 水、 リン酸塩緩衝液、 生理食塩液等の溶媒に溶解させて調製すること ができる。検体液は、 該液に含まれる細菌の濃度が 〜 101 () CFU/mLとなるよう に調製するのが好ましい。
このようにして調製した検体液には、 さらに、 オリゴ糖、 界面活性剤、 デキス トリン等を、 本発明の効果を妨げない範囲の量で添加することができる。
本発明の^—ラク夕マーゼ検出キットは、 上述の検出試薬組成物を含有するも のであれば、 ディスク型、 ディスクと台紙との併用型、 プレート型、 短冊型等、 その形態は特に制限されない。好ましく使用できる形態としてプレート型があげ られる。
また、 本発明のキットは、 必要に応じ、 3—ラク夕マ一ゼ及び本発明の検出試 薬組成物を含む溶液からなる陽性コントロール液、 ラク夕マ一ゼ検出基質を 含む溶液からなる陰性コントロール液を含んでいてもよい。
図 1に、 本発明の ?—ラク夕マーゼ検出キットの概略斜視図を示すが、 特にこ れに限定されるものではない。 図 1により本発明の検出キットを説明すると、 本 発明の検出キットは、 試料容器 1と、 その中に収納された、 複数の試料保持部分 2を有する基体 3とを含む。 試料保持部分 2は、 調製した試料 （検体液又はコン トロール液） を滴下する開口部を有する。 なお、 本発明の検出キットを構成する 試料容器、 基体及び試料保持部分を形成する材料は特に限定されない。 また、 こ れらの大きさや形状も特に限定されない。
本発明のキヅトは、 上記 （c) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さら に上記 （a) 、 (b) 、 (d) 又は （e) 群のいずれか 1以上の検出試薬組成物を含 有するのがより好ましい。
上記 （d) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さらに上記 （a)、 (b) 、 (c) 又は （e) 群のいずれか 1以上の検出試薬組成物を含有する/?—ラク夕マ ーゼ検出キットもまた好ましい。
特に、 上記 （a) 〜 （e) 群の検出試薬組成物を全て含有する/?一ラク夕マーゼ 検出キヅ卜が好ましい。
本発明のキヅトはまた、 上記 （c) 及び （f) 〜 （i) からなる群から選ばれる 1以上の検出試薬組成物を含むのも好ましい。
本発明のキヅトはまた、 上記 （c) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さらに上記 （f) 、 (g) 、 (h) 又は （i) 群のいずれか 1以上の検出試薬組成物 を含有するのがより好ましい。
上記 （h) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さらに上記 （c)、 (f) 、 (g) 又は （i) 群のいずれか 1以上の検出試薬組成物を含有する^—ラク夕マ ーゼ検出キットもまた好ましい。
特に、 上記 （c) 及び （f) 〜 （i) 群の検出試薬組成物を全て含有する/?—ラ クタマーゼ検出キヅトが好ましい。
本発明の検出キットとしては、 上記 （a) 〜 （i) 群の本発明の検出試薬組成物 において、 ?一ラク夕マ一ゼ検出基質として 3- [2，4-ジニトロスチリル]- 7-(2-チ ェニルァセトアミド）- 3-セフエム- 4-カルボン酸又は 7- [2- (2-ァミノチアゾ一ル- 4 -ィル) -2- (1-カルボキシ -1-メチルェトキシィミノ）ァセトアミ ド] -3- (2，4-ジニ トロスチリル）- 3-セフエム -4-カルボン酸 （以下、 HMR Z化合物と称する） を 含有するものが特に好ましい。
これらの本発明のキットによれば、 一ラク夕マ一ゼのクラス A、 B、 C、 D 及び E S B Lを一時に迅速に判別することができる。 その結果、 本発明のキット を使用すれば、 適切な抗菌剤を選択してより高い治療効果をあげることができる 本発明はまた、 分析対象物を含有する検体液を、 既述のいずれかの/?—ラク夕 マーゼ検出試薬組成物を含む溶液に添加することを含む/?—ラク夕マ一ゼの検出 方法に関する。
本発明の方法は、 既述のようにして調製した検出試薬組成物含有液体に、 分析 対象物を含有する検体液を添加することを含む。所定温度において、 例えば室温 において、 添加して所定時間、 例えば 3 0分程度経過したのち、 色調が黄色から 赤色に変ィ匕するか否かで陽性か陰性かの判別を行うことができる。 また、 特定波 長において色調変化を測定することにより、 活性を定量することもできる。 本発明の方法を使用することにより、 例えば、 ?一ラク夕マーゼ産生微生物に より引き起こされる疾患、 例えば尿道感染及び肺炎、 肺炎桿菌や大腸菌により引 き起こされる院内感染症に罹った患者の尿及び喀痰中の/?—ラクタマ一ゼを迅速 に判別することができる。 実施例
1 . /5—ラクタマーゼ検出試薬組成物を含む溶液の調製
以下の表 1に示した/?—ラク夕マ一ゼ検出基質 1.25m及び/?—ラクタマ一ゼ阻 害剤各 1.25mgを、 O. lmLジメチルスルホォキサイドと 0.9m Lリン酸塩緩衝液と の混合溶媒に溶解させ、 ?—ラク夕マ一ゼ検出試薬組成物を含む溶液を調製した
表 1
Figure imgf000017_0001
表中、
ニトロセフィンは、 3-[2，4-ジニトロスチリル]- 7- (2-チェニルァセトアミ ド） - 3 -セフエム- 4-カルボン酸、
HMRZ化合物は、 7- [2- (2-ァミノチアゾ一ル -4-ィル) -2- (1-カルボキシ -1-メチ ルェトキシィミノ）ァセトアミド] -3-(2，4-ジニトロスチリル）- 3-セフエム- 4 -力 ルボン酸、
AZTはァズトレオナム、 EDTAはエチレンジァミン四酢酸、 CVAはクラブラン酸を 表す。
5 2 . プレートの作製
調製した 3—ラク夕マ一ゼ検出試薬組成物含有溶液を、 マイクロプレート 1ゥ エルあたりの/?ーラク夕マーゼ検出基質及び/?—ラク夕マ一ゼ阻害剤の量がそれ それ 12.5 gとなるように塗布した。
3 . 分析対象物を含有する検体液の調製
?一ラク夕マ一ゼ非産生菌、 クラス A産生菌、 クラス B産生菌、 クラス C産生 菌及び E S B L産生菌として、 以下の表 2に記載した細菌を使用し、 これらをリ ン酸緩衝液に接種して各々 1 08 C F U/mLの検体液を調製した。 表 2
Figure imgf000018_0001
4 . 一ラク夕マ一ゼに対する反応性
上で調製したプレートに、 マイクロプレート 1ゥエルあたり 5 0〃Lずつ検体 液を接種した。 接種して 3 0分経過後の色調の変ィ匕を観察することにより、 β— ラクタマーゼに対する反応性を検討した。
6 β—ラクタマ一ゼに対する反応性
Figure imgf000019_0001
+ ;陽性 黄色から赤へ変色した。
一； P食性 黄色のまま変化しなかった。
士； 若干変色を認めた。 本発明によれば、 迅速かつ容易に、 しかも高感度で^—ラク夕マ一ゼを検出す ることができる。 しかも、 本発明は特定の検出試薬組成物と特定の阻害剤を併用 することから、 ?一ラク夕マーゼのクラスまで判別可能であり、 検出誤差も小さ い。 特に、 迅速なクラス判別により、 適切な抗菌薬を選択でき、 高い治療効果を 発揮することができる。

Claims

請求の範囲
1. クロモジエニックセファロスポリン法において使用するための ?—ラク夕 マーゼ検出基質と、 ?一ラク夕マ一ゼ阻害剤とを含有する/?—ラク夕マーゼ検出 試薬組成物。
2. ?—ラク夕マ一ゼ検出基質が、 下記一般式 （1) で表される化合物又は生 理的に許容されるその塩、 又は下記一般式 （2)で表される化合物又はそのカル ボキシレート誘導体である請求項 1記載の ラクタマ一ゼ検出試薬組成物：
Figure imgf000020_0001
(一般式 （1.) において、 Rは、 ホルムアミ ド基或いは式 Ru CH2 CONH、 R uOCH2CONH、 RuCONH、 RUCH (NH2) CONH又は RUC ( = N0 H) CONH (式中、 ITはチェニル、 フエニル又はナフチル基である） で表さ れる基であり ； Arは、 2-位、 4-位又は 2, 4-位においてシァノ基又はニトロ基 により置換されたフエニル基であり ；及び は、 — S—又は一 S〇一である。 )
Figure imgf000020_0002
(一般式 （2) において、 及び R2は、 同一でも異なってもよく、 それぞれ水 素原子、 ニトロ基又はシァノ基を表し； R3は、 カルボキシル基で置換されてい てもよい — アルキル基を表し； R4は、 水素原子又はアミノ基を表し；及 び X2は、 一 S—又は— S O—を表す。 但し、 及び R2が同時に水素原子であ ることはない。 ） 。
3 . ?—ラク夕マーゼ阻害剤が、 クラブラン酸又はそれと同等の作用をする化 合物、 ァズトレオナム、 クロキサシリン、 亜鉛イオンとキレート可能なキレート 剤、 スルバクタム、 夕ゾバク夕ム、 チェナマイシン及びカルモナムからなる群か ら選ばれる少なくとも 1種である、 請求項 1又は 2記載の検出試薬組成物。
4 . ^—ラクタマーゼ阻害剤が、 クラブラン酸；ァズトレオナム；ァズトレオ ナムとエチレンジァミン四酢酸との組合せ；クラブラン酸とエチレンジァミン四 酢酸との組合せ；ァズトレオナムとクラブラン酸との組合せ；及びァズトレォナ ムとクラブラン酸とエチレンジァミン四酢酸との組合せ、 からなる群から選ばれ る、 請求項 3記載の検出試薬組成物。
5 . 以下の （a) 〜 （e) からなる群から選ばれる 1以上の検出試薬組成物を含 む/?—ラク夕マ一ゼ検出キヅト ：
(a) 一ラク夕マーゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （ 1 ) で表される 化合物又は生理的に許容されるその塩、 及び
ーラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムとエチレンジァミン四酢酸との 組合せを含有する検出試薬組成物；
(b) ラク夕マ一ゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （1 ) で表される 化合物又は生理的に許容されるその塩、 及び
—ラク夕マ一ゼ阻害剤としてクラプラン酸とエチレンジアミン四酢酸との組 合せを含有する検出試薬組成物；
(c) ラク夕マ一ゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （1 ) で表される 化合物又は生理的に許容されるその塩、 及び β—ラりタマ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラブラン酸を含有する検出 試薬組成物；
(d) ?—ラク夕マーゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （2 ) で表される 化合物又はそのカルボキシレート誘導体、 及び
?ーラクタマーゼ阻害剤としてァズトレオナムとエチレンジァミン四酢酸との 組合せを含有する検出試薬組成物；及び
(e) ?—ラク夕マ一ゼ検出基質として請求項' 2記載の一般式 （2.) で表される 化合物又はそのカルボキシレート誘導体、 及び
3—ラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラプラン酸とエチレンジァ ミン四酢酸との組合せを含有する検出試薬組成物。
6 . 請求項 5記載の （c) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さらに請求 項 5記載の （a)、 (b)、 (d) 又は （e) 群のいずれか 1以上の検出試薬組成物 を含む請求項 5記載の ?—ラク夕マ一ゼ検出キヅト。
7 . 請求項 5記載の （d) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さらに請求 項 5記載の （a)、 (b)、 (c) 又は （e) 群のいずれか 1以上の検出試薬組成物 を含む請求項 5記載の/?—ラク夕マ一ゼ検出キット。
8 . 請求項 5記載の （a) 〜（e) 群の検出試薬組成物を全て含有する請求項 5 記載の^一ラク夕マーゼ検出キヅト。
9 . 以下の （f)、 (g)、 (h) 及び （i) からなる群から選ばれる 1以上を含 む/?—ラク夕マ一ゼ検出キヅト ：
(f) ラク夕マ一ゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （1 ) で表される 化合物又は生理的に許容されるその塩、 及び
?一ラク夕マ一ゼ阻害剤としてァズトレオナムを含有する検出試薬組成物；
(g) ^ーラクタマ一ゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （1 ) で表される 化合物又は生理的に許容されるその塩、 及び &ーラり夕マーゼ阻害剤としてクラブラン酸を含有する検出試薬組成物；
(h) 3—ラク夕マ一ゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （2 ) で表される 化合物又はそのカルボキシレート誘導体、 及び
?—ラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムを含有する検出試薬組成物；
(i) ^—ラクタマ一ゼ検出基質として請求項 2記載の一般式 （2 ) で表される 化合物又はそのカルボキシレート誘導体、 及び
?一ラク夕マーゼ阻害剤としてァズトレオナムとクラブラン酸との組合せを含 有する検出試薬組成物。
1 0 . さらに請求項 5記載の （c) 群の検出試薬組成物を含有する、 請求項 9記 載の/?—ラク夕マーゼ検出キット。
1 1 . 請求項 9記載の （h) 群の検出試薬組成物を必須として含有し、 さらに請 求項 9記載の （f) 、 (g) 又は （i)群のいずれか 1以上を含む請求項 9記載の 一ラク夕マーゼ検出キヅト。
1 2 . 請求項 9記載の （f) 〜 （i) 群を全て含有する請求項 1 0記載の ^—ラ クタマ一ゼ検出キヅト。
1 3 . 分析対象物を含有する検体液を、 請求項 1〜 4のいずれか 1項記載の^ —ラク夕マ一ゼ検出試薬組成物に接触させることを含む、 ?—ラクタマーゼ検出 方法。
1 4 . 分析対象物を含有する検体液を、 ?—ラク夕マーゼ検出キットの試料保 持部分に保持された請求項 1〜 4のいずれか 1項記載の/?一ラク夕マ一ゼ検出試 藥組成物と接触させることを含む、 3—ラク夕マーゼ検出方法。
1 5 . 分析対象物を含有する検体液を、 請求項 5〜： L 2のいずれか 1項記載の ?—ラク夕マ一ゼ検出キヅトの試料保持部分に保持された —ラクタマ一ゼ検出 試薬組成物と接触させることを含む、 ? _ラク夕マ一ゼ検出方法。
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