JP2000217591A - ５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法 - Google Patents
５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法Info
- Publication number
- JP2000217591A JP2000217591A JP2102099A JP2102099A JP2000217591A JP 2000217591 A JP2000217591 A JP 2000217591A JP 2102099 A JP2102099 A JP 2102099A JP 2102099 A JP2102099 A JP 2102099A JP 2000217591 A JP2000217591 A JP 2000217591A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydroxy
- acid derivative
- pyrazinedicarboxylic acid
- pyrazinedicarboxylic
- derivative
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から直
接５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体を製造する方法を提供する。 【解決手段】 ２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体か
ら５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体を生成する能力を有する微生物を用いて、生物変換に
より５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘
導体を得る。 【効果】 常温、常圧の条件下で、微生物を用いて反応
を行うため、安全且つ単純な装置で５−ヒドロキシ−
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製造することが
できる。
接５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体を製造する方法を提供する。 【解決手段】 ２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体か
ら５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体を生成する能力を有する微生物を用いて、生物変換に
より５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘
導体を得る。 【効果】 常温、常圧の条件下で、微生物を用いて反応
を行うため、安全且つ単純な装置で５−ヒドロキシ−
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製造することが
できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物を利用して
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から５−ヒドロキ
シ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製造する方
法に関する。５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカル
ボン酸誘導体は医農薬中間体、合成樹脂原料等として用
いられ、産業上有用な化合物である。
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から５−ヒドロキ
シ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製造する方
法に関する。５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカル
ボン酸誘導体は医農薬中間体、合成樹脂原料等として用
いられ、産業上有用な化合物である。
【０００２】
【従来の技術】５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体の生産に関連した技術としては、式３
（化２）に示すように、１，６−ジヒドロ−６−オキソ
−２，３−ピラジンジジカルボニトリルから化学合成に
より複雑な工程を得て構造異性体である１，６−ジヒド
ロ−６−オキソ−２，３−ピラジンジカルボン酸を合成
する方法が知られているに過ぎない（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａ
ｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｖｏｌ．２８（１０），ｐ．３０５
７−３０６３，（１９８０））。
ルボン酸誘導体の生産に関連した技術としては、式３
（化２）に示すように、１，６−ジヒドロ−６−オキソ
−２，３−ピラジンジジカルボニトリルから化学合成に
より複雑な工程を得て構造異性体である１，６−ジヒド
ロ−６−オキソ−２，３−ピラジンジカルボン酸を合成
する方法が知られているに過ぎない（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａ
ｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｖｏｌ．２８（１０），ｐ．３０５
７−３０６３，（１９８０））。
【０００３】
【化２】 微生物培養環境においては、構造異性体である１，６−
ジヒドロ−６−オキソ−２，３−ピラジンジカルボン酸
も含め、５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸を製造したという報告は見当たらない。特に、２，３
−ピラジンジカルボン酸誘導体から微生物を用いて直接
水酸化することにより、５−ヒドロキシ−２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体を生成したという報告は見当た
らない。
ジヒドロ−６−オキソ−２，３−ピラジンジカルボン酸
も含め、５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸を製造したという報告は見当たらない。特に、２，３
−ピラジンジカルボン酸誘導体から微生物を用いて直接
水酸化することにより、５−ヒドロキシ−２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体を生成したという報告は見当た
らない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、常
温、常圧の条件下で実施でき、安全かつ単純な工程で、
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から直接５−ヒド
ロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製造す
る方法を提供することにある。本発明の目的は、２，３
−ピラジンジカルボン酸誘導体から５−ヒドロキシ−
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を生成する能力を
有する微生物を用いて上記課題を解決することにある。
温、常圧の条件下で実施でき、安全かつ単純な工程で、
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から直接５−ヒド
ロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製造す
る方法を提供することにある。本発明の目的は、２，３
−ピラジンジカルボン酸誘導体から５−ヒドロキシ−
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を生成する能力を
有する微生物を用いて上記課題を解決することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するべく検討を重ねた結果、アルカリゲネス属に属
する微生物の中に、２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体から直接５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボ
ン酸誘導体を生成する能力を有する微生物を見出し、生
産物の生産性を高めるため培養条件、反応条件を鋭意検
討した結果、安全で単純な方法で２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体から直接５−ヒドロキシ−２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体を著量製造できる方法を見出
し、本発明を完成するに至った。
解決するべく検討を重ねた結果、アルカリゲネス属に属
する微生物の中に、２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体から直接５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボ
ン酸誘導体を生成する能力を有する微生物を見出し、生
産物の生産性を高めるため培養条件、反応条件を鋭意検
討した結果、安全で単純な方法で２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体から直接５−ヒドロキシ−２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体を著量製造できる方法を見出
し、本発明を完成するに至った。
【０００６】則ち、本発明は、下記の式１（化３）で表
される２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から下記の
式２（化３）で表される５−ヒドロキシ−２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体を生成する能力を有する微生物
を液体培地中で培養し、得られた菌体および／または該
菌体処理物を水性溶媒中で２，３−ピラジンジカルボン
酸誘導体に接触させ、該溶媒中に５−ヒドロキシ−２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体を蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とする５−ヒドロキシ−２，３−ピ
ラジンジカルボン酸誘導体の製造方法である。
される２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から下記の
式２（化３）で表される５−ヒドロキシ−２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体を生成する能力を有する微生物
を液体培地中で培養し、得られた菌体および／または該
菌体処理物を水性溶媒中で２，３−ピラジンジカルボン
酸誘導体に接触させ、該溶媒中に５−ヒドロキシ−２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体を蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とする５−ヒドロキシ−２，３−ピ
ラジンジカルボン酸誘導体の製造方法である。
【０００７】
【化３】 （式中Ｒ’、Ｒ”は水素または炭素数が１〜５のアルキ
ル基を示す。）
ル基を示す。）
【０００８】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
本発明において用いることのできる２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体には、２，３−ピラジンジカルボン酸
の他、２，３−ピラジンジカルボン酸のモノエステル
類、ジエステル類等が含まれる。
本発明において用いることのできる２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体には、２，３−ピラジンジカルボン酸
の他、２，３−ピラジンジカルボン酸のモノエステル
類、ジエステル類等が含まれる。
【０００９】本発明において使用される微生物は細菌及
び放線菌に属する微生物であって、２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体から直接５−ヒドロキシ−２，３−ピ
ラジンジカルボン酸誘導体を生成する能力のある微生物
である。その中でも、本発明において使用される微生物
として、アルカリゲネス ｓｐ．ＵＫ２１を例示するこ
とができる。アルカリゲネスｓｐ．ＵＫ２１は平成１０
年８月２１日より通商産業省工業技術院生命工学工業技
術研究所に受託番号、ＦＥＲＭ Ｐ−１６９５０として
寄託されている。
び放線菌に属する微生物であって、２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体から直接５−ヒドロキシ−２，３−ピ
ラジンジカルボン酸誘導体を生成する能力のある微生物
である。その中でも、本発明において使用される微生物
として、アルカリゲネス ｓｐ．ＵＫ２１を例示するこ
とができる。アルカリゲネスｓｐ．ＵＫ２１は平成１０
年８月２１日より通商産業省工業技術院生命工学工業技
術研究所に受託番号、ＦＥＲＭ Ｐ−１６９５０として
寄託されている。
【００１０】本発明の方法に用いられる微生物として
は、同菌株に突然変異処理を施し、２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体から５−ヒドロキシ−２，３−ピラジ
ンジカルボン酸誘導体への生産性が増大したものを選択
して用いて何ら差し支えない。このような突然変異体と
しては、例えば、２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体
および／または５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体に対する耐性の向上した変異株、５−ヒ
ドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を分解
しなくなった変異株、２，３−ピラジンジカルボン酸誘
導体から５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸誘導体生成に関与する酵素類の生産性の高い変異株な
どが挙げられる。
は、同菌株に突然変異処理を施し、２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体から５−ヒドロキシ−２，３−ピラジ
ンジカルボン酸誘導体への生産性が増大したものを選択
して用いて何ら差し支えない。このような突然変異体と
しては、例えば、２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体
および／または５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体に対する耐性の向上した変異株、５−ヒ
ドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を分解
しなくなった変異株、２，３−ピラジンジカルボン酸誘
導体から５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸誘導体生成に関与する酵素類の生産性の高い変異株な
どが挙げられる。
【００１１】次に微生物の培養方法について説明する。
微生物を増殖させる液体培地としては通常、これらの微
生物が生育し得る液体培地であれば良い。炭素源として
は、本発明に係わる微生物が資化し生育できる炭素化合
物であればいずれでも使用可能である。窒素源として
は、例えば、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝
酸アンモニウム等の無機窒素源、酵母エキス、ペプト
ン、肉エキスなどの有機窒素源を使用することができ
る。液体培地にはこれらの他に、必要に応じて、無機塩
類、金属塩、ビタミン類などを添加することもできる。
微生物を増殖させる液体培地としては通常、これらの微
生物が生育し得る液体培地であれば良い。炭素源として
は、本発明に係わる微生物が資化し生育できる炭素化合
物であればいずれでも使用可能である。窒素源として
は、例えば、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝
酸アンモニウム等の無機窒素源、酵母エキス、ペプト
ン、肉エキスなどの有機窒素源を使用することができ
る。液体培地にはこれらの他に、必要に応じて、無機塩
類、金属塩、ビタミン類などを添加することもできる。
【００１２】培養に際しての培養温度は、通常１５〜４
５℃、好ましくは２５〜３５℃である。培養の際のｐＨ
は、通常ｐＨ４〜１０であり、好ましくはｐＨ６〜８付
近である。培養は、微生物の種類により嫌気下でも好気
下でもいずれも行うことができるが、増殖速度が速いこ
とから好気下での振盪培養が好ましく、また常圧下で行
いうる。但し、培養条件は、用いる微生物や培地組成な
どに応じて５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボ
ン酸の生産量が最大になるように設定することが重要で
あることは当然である。
５℃、好ましくは２５〜３５℃である。培養の際のｐＨ
は、通常ｐＨ４〜１０であり、好ましくはｐＨ６〜８付
近である。培養は、微生物の種類により嫌気下でも好気
下でもいずれも行うことができるが、増殖速度が速いこ
とから好気下での振盪培養が好ましく、また常圧下で行
いうる。但し、培養条件は、用いる微生物や培地組成な
どに応じて５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボ
ン酸の生産量が最大になるように設定することが重要で
あることは当然である。
【００１３】また、本発明微生物が含有する、２，３−
ピラジンジカルボン酸誘導体から５−ヒドロキシ−２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体の生産に関与する酵素
類を多量に生産させるために、類似化合物である６−ヒ
ドロキシピコリン酸を液体培地に添加することもでき
る。６−ヒドロキシピコリン酸の添加量は液体培地に対
して０．０１〜１．０ｗ／ｗ％、好ましくは０．１〜
０．５ｗ／ｗ％になるよう添加することができる。
ピラジンジカルボン酸誘導体から５−ヒドロキシ−２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体の生産に関与する酵素
類を多量に生産させるために、類似化合物である６−ヒ
ドロキシピコリン酸を液体培地に添加することもでき
る。６−ヒドロキシピコリン酸の添加量は液体培地に対
して０．０１〜１．０ｗ／ｗ％、好ましくは０．１〜
０．５ｗ／ｗ％になるよう添加することができる。
【００１４】本発明に係る微生物を用いて２，３−ピラ
ジンジカルボン酸誘導体から直接５−ヒドロキシ−２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体を生産する工程は、バ
ッチ式でも、バイオリアクターを用いた連続式でも可能
である。
ジンジカルボン酸誘導体から直接５−ヒドロキシ−２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体を生産する工程は、バ
ッチ式でも、バイオリアクターを用いた連続式でも可能
である。
【００１５】培養終了後、上記の方法で増殖させた菌体
をろ過または遠心分離により回収する。得られた菌体は
そのまま生理食塩水等に懸濁して２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体との反応に供してもよいし、破砕菌体、
菌体培養液、粗酵素、精製酵素等の菌体処理物としてか
ら反応に供してもよい。培養菌体または該菌体処理物
は、２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を含む水系溶
媒に懸濁させるか、または公知の固定化法で固定化し、
固定化物を２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を含む
水系溶媒と接触させることによって５−ヒドロキシ２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体を液中に蓄積せしめ、
これを採取する。水性溶媒としては、例えば、蒸留水、
トリス−ＨＣｌ緩衝液等の緩衝能を有する水性媒体を用
いることができる。
をろ過または遠心分離により回収する。得られた菌体は
そのまま生理食塩水等に懸濁して２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体との反応に供してもよいし、破砕菌体、
菌体培養液、粗酵素、精製酵素等の菌体処理物としてか
ら反応に供してもよい。培養菌体または該菌体処理物
は、２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を含む水系溶
媒に懸濁させるか、または公知の固定化法で固定化し、
固定化物を２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を含む
水系溶媒と接触させることによって５−ヒドロキシ２，
３−ピラジンジカルボン酸誘導体を液中に蓄積せしめ、
これを採取する。水性溶媒としては、例えば、蒸留水、
トリス−ＨＣｌ緩衝液等の緩衝能を有する水性媒体を用
いることができる。
【００１６】２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から
５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体
を生成するための反応に用いる２，３−ピラジンジカル
ボン酸誘導体は、５０〜５０００ｍＭ、好ましくは５０
〜１０００ｍＭの濃度で供給する。原料基質の供給は１
度に添加しても良いが、基質による阻害性が見られるよ
うな場合には少量ずつ数回に分けて添加することもでき
る。反応時の菌体濃度は乾物重ベースで１〜１００ｇ／
ｌの範囲で行われる。
５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体
を生成するための反応に用いる２，３−ピラジンジカル
ボン酸誘導体は、５０〜５０００ｍＭ、好ましくは５０
〜１０００ｍＭの濃度で供給する。原料基質の供給は１
度に添加しても良いが、基質による阻害性が見られるよ
うな場合には少量ずつ数回に分けて添加することもでき
る。反応時の菌体濃度は乾物重ベースで１〜１００ｇ／
ｌの範囲で行われる。
【００１７】反応終了後、反応液中の５−ヒドロキシ−
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体は常法に従い回収
すれば良い。すなわち、反応液をろ過、遠心分離等によ
り処理した後、溶剤抽出等の方法により回収する。また
溶液に塩酸や硫酸等の酸溶液を加えて酸性化することに
より、５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸
誘導体を回収することも可能であり、必要によりクロマ
トグラフィー等公知の精製方法を適宜併用することがで
きる。
２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体は常法に従い回収
すれば良い。すなわち、反応液をろ過、遠心分離等によ
り処理した後、溶剤抽出等の方法により回収する。また
溶液に塩酸や硫酸等の酸溶液を加えて酸性化することに
より、５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸
誘導体を回収することも可能であり、必要によりクロマ
トグラフィー等公知の精製方法を適宜併用することがで
きる。
【００１８】尚、本発明の製造法においては５−ヒドロ
キシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の検出及び
定量は、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）によって行われる。則ち、オクタデシル基を有した
シリカゲルパックドカラムなどを固定相に用い、リン酸
水溶液とアセトニトリルの混合物を移動相とする一般的
な逆相クロマトグラフィーによって分析が可能である。
検出は紫外部分光検出器によって波長２３０ｎm付近で
行う。
キシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の検出及び
定量は、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）によって行われる。則ち、オクタデシル基を有した
シリカゲルパックドカラムなどを固定相に用い、リン酸
水溶液とアセトニトリルの混合物を移動相とする一般的
な逆相クロマトグラフィーによって分析が可能である。
検出は紫外部分光検出器によって波長２３０ｎm付近で
行う。
【００１９】
【実施例】以下に代表的な実施例を示し本発明の具体的
な説明を行うが、これらの実施例は本発明の範囲を限定
するものではない。 〔実施例１〕培地Ａ１０ｍｌを１００ｍｌ容の培養フラ
スコに入れ、１２１℃、１．２気圧にて１５分間オート
クレーブ滅菌を行った。
な説明を行うが、これらの実施例は本発明の範囲を限定
するものではない。 〔実施例１〕培地Ａ１０ｍｌを１００ｍｌ容の培養フラ
スコに入れ、１２１℃、１．２気圧にて１５分間オート
クレーブ滅菌を行った。
【００２０】培地Ａ ────────────────────── Ｐｅｐｔｏｎ ０．５ ｇ Ｍｅａｔ ｅｘｔｒａｃｔ ０．５ ｇ Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ０．０５ｇ ＮａＣｌ ０．２ ｇ ──────────────────────── Ｔａｐ ｗａｔｅｒ ｐＨ７．０ １００ ｍｌ
【００２１】上記の培地Ａ５ｍｌに、同培地Ａに寒天
１．５％を加えた個体培地で増殖させた菌体（アルカリ
ゲネスｓｐ．ＵＫ２１）を１白金耳接種した。２８℃の
恒温室にて１日間振盪培養後、培地Ｂ１００ｍｌに移植
し、更に３日間２８℃で振盪培養した。
１．５％を加えた個体培地で増殖させた菌体（アルカリ
ゲネスｓｐ．ＵＫ２１）を１白金耳接種した。２８℃の
恒温室にて１日間振盪培養後、培地Ｂ１００ｍｌに移植
し、更に３日間２８℃で振盪培養した。
【００２２】培地Ｂ ──────────────────────── キノリン酸 ０．２５ｇ ＫＨ2ＰＯ4 ０．１ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．３ Ｇａｌａｃｔｏｓｅ １．０ Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ １．０ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５ Ｍｅｔａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ （＊） １．０ ｍｌ ─────────────────────────
─ Ｔａｐ Ｗａｔｅｒ ｐＨ７．０ １００ ｍｌ
─ Ｔａｐ Ｗａｔｅｒ ｐＨ７．０ １００ ｍｌ
【００２３】＊）Ｍｅｔａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ────────────────────── ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ４００ｍｇ Ｈ3ＢＯ3 ３００ｍｇ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ４０ｍｇ ＫＩ １００ｍｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ２００ｍｇ ＭｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４００ｍｇ Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ ２００ｍｇ ｃｏｎｃ．ＨＣｌ １０ｍｌ ─────────────────────── Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ １０００ｍｌ
【００２４】菌体は遠心分離（８，５００ｒｐｍ ２０
ｍｉｎ．４．０℃ ）して集菌し、生理食塩水（ ０．８
５％ ＮａＣｌ ）に懸濁して休止菌体を調製した。休止
菌体による２，３−ピラジンジカルボン酸の変換反応
は、以下の組成の反応系を調製し、２，３−ピラジンジ
カルボン酸を逐次添加することにより反応生成物を蓄積
させた。
ｍｉｎ．４．０℃ ）して集菌し、生理食塩水（ ０．８
５％ ＮａＣｌ ）に懸濁して休止菌体を調製した。休止
菌体による２，３−ピラジンジカルボン酸の変換反応
は、以下の組成の反応系を調製し、２，３−ピラジンジ
カルボン酸を逐次添加することにより反応生成物を蓄積
させた。
【００２５】 ───────────────────────────────── ２，３−ピラジンジカルボン酸 ６．０ｍｌ 菌体懸濁液（乾燥菌体重量として６０ｍｇ） １０．０ｍｌ 蒸留水 ４．０ｍｌ ───────────────────────────────── Ｔｏｔａｌ ｖｏｌｕｍｅ ２０．０ｍｌ
【００２６】反応は菌体の添加で開始した。反応経過に
伴い３〜６時間毎に１００ｍＭずつ５回に分けて２，３
−ピラジンジカルボン酸を追加添加した（計６００ｍ
Ｍ)。３６時間後にＭｅＯＨの添加により反応を停止し
た。得られた反応生成物を同定するため、反応終了後、
菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）で除去
し、上清をＤｏｗｅｘ−１(ＯＨ ｆｏｒｍ １×２−２
００：ダウケミカル社製)を詰めたカラム （１５×１５
０ｍｍ）にかけ、不純物を除いた。反応生成物は素通り
してきたので、これをｐＨ７．５に調製しながら減圧濃
縮を行い、白色固体を得た。得られた固形物を蒸留水に
溶かし、エタノ−ルを添加して反応生成物を結晶化させ
た。これをデシケ−タで乾燥させた。生成物をＧＣ／Ｍ
Ｓ、ＮＭＲ、ＩＲで分析した結果、生成物はの５−ヒド
ロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸と同定された。
得られた反応生成物はＨＰＬＣで定量分析したところ５
−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸１０１ｇ
／ｌ（５４６ｍＭ）に相当し、モル収率は９１．０％で
あった。
伴い３〜６時間毎に１００ｍＭずつ５回に分けて２，３
−ピラジンジカルボン酸を追加添加した（計６００ｍ
Ｍ)。３６時間後にＭｅＯＨの添加により反応を停止し
た。得られた反応生成物を同定するため、反応終了後、
菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）で除去
し、上清をＤｏｗｅｘ−１(ＯＨ ｆｏｒｍ １×２−２
００：ダウケミカル社製)を詰めたカラム （１５×１５
０ｍｍ）にかけ、不純物を除いた。反応生成物は素通り
してきたので、これをｐＨ７．５に調製しながら減圧濃
縮を行い、白色固体を得た。得られた固形物を蒸留水に
溶かし、エタノ−ルを添加して反応生成物を結晶化させ
た。これをデシケ−タで乾燥させた。生成物をＧＣ／Ｍ
Ｓ、ＮＭＲ、ＩＲで分析した結果、生成物はの５−ヒド
ロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸と同定された。
得られた反応生成物はＨＰＬＣで定量分析したところ５
−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸１０１ｇ
／ｌ（５４６ｍＭ）に相当し、モル収率は９１．０％で
あった。
【００２７】ＨＰＬＣ分析条件 カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ５Ｃ１８−ＨＧ（４．６
×１５０ｍｍ） 溶媒：１０ｍＭＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ２．５）／ＣＨ3ＣＮ
＝９９／１（Ｖ／Ｖ） 流量：１．０ｍｌ／ｍiｎ． 検出波長：２３０nｍ
×１５０ｍｍ） 溶媒：１０ｍＭＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ２．５）／ＣＨ3ＣＮ
＝９９／１（Ｖ／Ｖ） 流量：１．０ｍｌ／ｍiｎ． 検出波長：２３０nｍ
【００２８】〔実施例２〕培地Ｂ１００ｍｌに６−ヒド
ロキシピコリン酸０．２ｇを添加した、培地Ｃを用いた
以外は実施例１と同様の方法で休止菌体を作成した。こ
の菌体６０mg（乾燥重）を用いて、２，３−ピラジンジ
カルボン酸１００ｍＭを含む蒸留水２０ｍｌで２，３−
ピラジンジカルボン酸の変換反応を行ったところ、反応
５時間で５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸１６．８ｇ／ｌ（９１ｍＭ）の蓄積を認めた。
ロキシピコリン酸０．２ｇを添加した、培地Ｃを用いた
以外は実施例１と同様の方法で休止菌体を作成した。こ
の菌体６０mg（乾燥重）を用いて、２，３−ピラジンジ
カルボン酸１００ｍＭを含む蒸留水２０ｍｌで２，３−
ピラジンジカルボン酸の変換反応を行ったところ、反応
５時間で５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸１６．８ｇ／ｌ（９１ｍＭ）の蓄積を認めた。
【００２９】
【発明の効果】本発明によれば、高温、高圧に調節する
機能を具備しない簡便な装置を用い、常温、常圧の条件
下で実施できる微生物の培養を利用して、安全かつ単純
な工程で２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から５−
ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製
造できる。
機能を具備しない簡便な装置を用い、常温、常圧の条件
下で実施できる微生物の培養を利用して、安全かつ単純
な工程で２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体から５−
ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体を製
造できる。
Claims (5)
- 【請求項１】 下記の式１（化１）で表される２，３−
ピラジンジカルボン酸誘導体から下記の式２（化１）で
表される５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン
酸誘導体を生成する能力を有する微生物を液体培地中で
培養し、得られた菌体および／または該菌体処理物を水
性溶媒中で２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体に接触
させ、該溶媒中に５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジ
カルボン酸誘導体を蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とする５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボ
ン酸誘導体の製造方法。 【化１】 （式中Ｒ’、Ｒ”は水素または炭素数が１〜５のアルキ
ル基を示す。） - 【請求項２】 微生物がアルカリゲネス属に属する微生
物である請求項１に記載の５−ヒドロキシ−２，３−ピ
ラジンジカルボン酸誘導体の製造方法。 - 【請求項３】 アルカリゲネス属に属する微生物がアル
カリゲネス ｓｐ．ＵＫ２１（ＦＥＲＭＰ−１６９５
０）である請求項２に記載の５−ヒドロキシ−２，３−
ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法。 - 【請求項４】 ５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカ
ルボン酸誘導体が、５−ヒドロキシ−２，３−ピラジン
ジカルボン酸、または、カルボキシル基がエステル化し
た化合物を含有する５−ヒドロキシ−２，３−ピラジン
ジカルボン酸誘導体である請求項１〜３の何れか１項に
記載の５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸
誘導体の製造方法。 - 【請求項５】 ２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体か
ら５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導
体を生成する能力を有する微生物を培養する際に、液体
培地中に６−ヒドロキシピコリン酸を添加することを特
徴とする請求項１〜４の何れか１項に記載の５−ヒドロ
キシ−２，３−ピラジンジカルボン酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2102099A JP2000217591A (ja) | 1999-01-29 | 1999-01-29 | ５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2102099A JP2000217591A (ja) | 1999-01-29 | 1999-01-29 | ５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000217591A true JP2000217591A (ja) | 2000-08-08 |
Family
ID=12043367
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2102099A Pending JP2000217591A (ja) | 1999-01-29 | 1999-01-29 | ５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000217591A (ja) |
-
1999
- 1999-01-29 JP JP2102099A patent/JP2000217591A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0928390A (ja) | グリコール酸の微生物学的製造法 | |
| JP3981597B2 (ja) | シロ−イノソースの製造法及びシロ−イノシトールの製造法 | |
| US5441888A (en) | Process for producing D-mandelic acid from benzoylformic acid | |
| JP3525190B2 (ja) | ε−ポリ−Ｌ−リジンを著量に生産する菌株及びそれを用いたε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 | |
| JP2000217591A (ja) | ５−ヒドロキシ−２，３−ピラジンジカルボン酸誘導体の製造方法 | |
| JP4380913B2 (ja) | 新規ｆｔ−０５５４物質及びその製造法 | |
| JPH04218385A (ja) | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 | |
| JP3078597B2 (ja) | Ｌ−スレオ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体の製造法 | |
| JP3055711B2 (ja) | 光学活性（ｓ）−３−フェニル−１，３−プロパンジオールの製造法 | |
| JP3789234B2 (ja) | ６−ヒドロキシピコリン酸の製造方法 | |
| JP2008022844A (ja) | 光学活性なｄ−ホモセリン及びｄ−ホモセリンラクトンの製造法 | |
| JP2002281993A (ja) | シキミ酸の製造方法 | |
| JP2003180391A (ja) | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 | |
| JP3873512B2 (ja) | Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 | |
| JP2579588B2 (ja) | 新規微生物及び該微生物を用いた２，６−ナフタレンジカルボン酸の製造法 | |
| JP4042557B2 (ja) | 光学活性テトラヒドロフラン−２−カルボン酸及びそのエステルの製法 | |
| JPH1042883A (ja) | イノシトールの製造方法および６−ハロゲノ−６−デオキシグルコース耐性株の取得法 | |
| JP2001046093A (ja) | 多価アルコール芳香族カルボン酸の製造方法 | |
| JP3580875B2 (ja) | Ｆｏ−４２５９物質およびその製造法 | |
| JP2001231559A (ja) | ６−ヒドロキシルチジン酸の製造方法 | |
| JPH0728750B2 (ja) | 微生物によるピラジン酸の水酸化物の製造方法 | |
| JP2519980B2 (ja) | （ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸の製造方法 | |
| JP3474601B2 (ja) | Ｆｏ−１６１１ａ、ｂおよび／またはｆｏ−１６１１ｃ物質並びにその製造法 | |
| JPH06165695A (ja) | 光学活性２−ヒドロキシアリール酢酸およびその誘導体の製造方法 | |
| JPS6312598B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060530 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20061010 |