ITRM960790A1

ITRM960790A1 - Uso di sostanze che attivano il recettore del cntf ( fattore neurotro fico ciliare) per la preparazione di farmaci per la terapia della

Info

Publication number: ITRM960790A1
Application number: IT96RM000790A
Authority: IT
Inventors: Ralph Laufer; Isabelle Glouguen; Patrizia Costa; Marco Annalise Di; Anna Demartis; Domenico Lazzaro; Giacomo Paonessa; Gennaro Ciliberto; Riccardo Cortese
Original assignee: Angeletti P Ist Richerche Bio
Priority date: 1996-11-19
Filing date: 1996-11-19
Publication date: 1998-05-19
Also published as: DE69717308D1; JP2000511561A; EP0946189A1; CN101703761A; IL129968A; ATE228003T1; ES2187830T3; ITRM960790A0; US20030176346A1; CN102145163B; US6960558B2; US6565869B1; WO1998022128A1; CA2271781A1; DK0946189T3; CN101703761B; DE69717308T2; JP4067127B2; EP0946189B1; AU5134498A

Description

DESCRIZIONE dell'invenzione industriale dal titolo: "USO DI SOSTANZE CHE ATTIVANO IL RECETTORE DEL CNTF (FATTORE NEUROTROFICO CILIARE) PER LA PREPARAZIONE DI FARMACI PER LA TERAPIA DELL'OBESITÀ' E DELLE MALATTIE AD ESSA ASSOCIATE"

DESCRIZIONE

Oggetto della presente invenzione è l'uso di molecole che attivano i recettori del CNTF (fattore neurotrofico ciliare) - quali hCNTF o varianti di hCNTF - come principi attivi nella formulazione di composizioni farmaceutiche idonee alla terapia dell'obesità e delle malattie ad essa associate. Per variante di hCNTF si intende una sequenza amminoacidica che può essere fatta derivare teoricamente da hCNTF per costituzione di uno o più amminoacidi .

Come è noto, soffre di obesità più del 30% della popolazione adulta del mondo industriale. Questa malattia rappresenta uno dei più importanti problemi di salute pubblica, dato che è associata con diabete di tipo II, ipertensione, iperlipidemia e con un crescente tasso di mortalità. L'obesità è il risultato di un bilancio energetico positivo per effetto di un incremento del rapporto assunzione di calorie/consumo di energia. La cura non ha di solito successo a causa di meccanismi che rigenerano la massa adiposa dopo variazioni intenzionali o meno di peso (1). Secondo la teoria della lipostasi la dimensione del deposito di grasso è regolata da un ciclo di retroazione costituito da molecole circolanti derivate da adipociti che agiscono sull'ipotalamo per far diminuire l'appetito e per aumentare il consumo di energia (2).

La proteina del plasma leptina, di 16 Kilodalton, identificata di recente (3), soddisfa molte delle caratteristiche che dovrebbe avere un tale ormone lipostatico. Questa proteina è espressa in tessuto adiposo, e i suoi livelli nel plasma sono correlati con l'indice di massa corporea nei roditori e negli umani (4). L'assenza di leptina in topi mutanti obesi (ob) porta ad un massiccio incremento di grasso corporeo, fenomeno questo che può essere invertito mediante somministrazione sistemica della proteina ricombinante (5)(6)(7). Tuttavia, sembra che l'obesità umana non sia dovuta ad una insufficiente espressione di leptina, dato che si è dimostrato che l'mRNA di leptina e i livelli di proteina nel plasma risultano più elevati nei soggetti obesi che nei soggetti normali (4). Così, gli umani obesi possono essere insensibili all'effetto lipostatico della leptina, probabilmente a causa di un difetto a livello di meccanismi dei trasporto di leptina, di attività del recettore di leptina, oppure di segnali postrecettoriali (8).

Pertanto, esiste nello specifico settore l'esigenza di nuovi agenti farmacologici che possano correggere l'obesità nelle persone con resistenza alla leptina.

La resistenza alla leptina è una caratteristica proprietà del topo mutante diabetico (db), che esprime una forma troncata del recettore della leptina privo della maggior parte del dominio intracitoplasmico (9). Il modello animale che rappresenta meglio l'obesità umana è quello dei topi resi obesi dalla assunzione di una dieta ad alto contenuto di grassi (topi DIO, Diet Induced Obesity). A somiglianza di soggetti obesi umani, i topi DIO hanno elevati livelli di leptina nel plasma (4). Pertanto essi sono relativamente insensibili agli effetti dell'ormone sulla riduzione di peso.

La presente invenzione si propone di mettere a disposizione composizioni anti-obesità biologicamente attive che possono ridurre l'obesità, come pure 1'iperglicemia e 1'iperinsulinemia associate ad essa, in vari modelli animali di obesità e di diabete mellito non insulina-dipendente, quali topi ob, db e DIO.

E' pertanto oggetto della presente invenzione l'uso di sostanze che attivano il recettore del CNTF per la preparazione di farmaci per la terapia dell'obesità e_ delle malattie ad essa associate. Queste sostanze possono essere hCNTF stesso (fattore neurotrofico ciliare umano) oppure suoi varianti. Buoni risultati si sono ottenuti con il variante di CNTF che, dalla posizione 159 alla 178, esibisce la seguente sequenza amminoacidica (riportata come SEQ XD NO:5 nella domanda di brevetto italiano RM9500380):

Leu Lys Val Leu Gin Giu Leu Asp His Trp Thr Val Arg Ser Ile His Asp Leu Arg Phe

[per ragioni di semplicità, si farà riferimento nel seguito a questo variante di hCNTF con le sigle DH-CNTF oppure (Ser 166 Asp/Gln 167 His) hCNTF].

Ulteriore oggetto dell'invenzione è l'uso di DNA che codifica per hCNTF o suoi varianti per la preparazione di composizioni per la terapia di obesità e malattie ad essa associate.

La presente invenzione ha anche come oggetto un farmaco, per la cura dell'obesità e la riduzione del peso corporeo, contenente, come almeno uno dei principi attivi, hCNTF o un suo variante, e comprendente un veicolo farmaceuticamente accettabile. Per veicolo farmaceuticamente accettabile si intende un veicolo che non sia pericoloso per il paziente, che non degradi o disattivi il principio attivo oppure che non interferisca con i suoi effetti. Il veicolo preferito è una soluzione salina fisiologica, ma possono essere usati altri veicoli farmaceuticamente accettabili che l'esperto del ramo può facilmente individuare in base alla sua competenza ed esperienza. In una forma di realizzazione che ha dato buoni risultati hCNTF oppure suoi varianti possono essere usati in combinazione con leptina.

La somministrazione del farmaco può essere fatta in dosi comprese fra 1 e 10.000 M.g/k:q corporeo. Una dose preferita è compresa fra 10 e 1000 μυ/kg corporeo . Una dose giornaliera tipica per un adulto è compresa fra 1 e 100 mg. La quantità necessaria del principio attivo, secondo l'invenzione, può essere somministrata in una dose giornaliera singola oppure in dosi multiple giornaliere. Il regime terapeutico può richiedere una somministrazione per tempi prolungati. L'entità della dose somministrata deve essere determinata dal medico e dipende da fattori quali natura e gravità della malattia, età e stato di salute del paziente e tolleranza del paziente nei confronti del farmaco .

In una forma di realizzazione specifica, CNTF o un suo variante, possono essere usati per la cura di soggetti obesi mediante somministrazione giornaliera per un breve periodo (1-2 settimane), al fine di ottenere una rapida e significativa riduzione del peso corporeo (5-10%), che può essere mantenuta con una dieta appropriata e/oppure esercizio fisico.

Le molecole proteiche attive possono essere formulate per somministrazioni parenterali, nasali, bronchiali oppure transdermiche. La composizione farmaceutica secondo la presente invenzione viene preferibilmente somministrata per via parenterale mediante iniezione. Nella forma di realizzazione preferita la somministrazione parenterale e sottocutanea o intramuscolare. Altri efficaci modi di somministrazione sono iniezione endovenosa, formulazioni parenterali a lento rilascio, e preparati da inalare, oppure supposte. Nella formulazione a lento rilascio, il solvente primario può essere sia di natura acquosa che non acquosa. Inoltre, il veicolo può contenere altri eccipienti farmacologicamente accettabili per modificare o mantenere il pH, la viscosità, la chiarezza, il colore, la sterilità, la stabilità, la velocità di dissoluzione oppure l'odore della formulazione. Allo stesso modo, il veicolo può anche contenere altri eccipienti farmacologicamente accettabili per modificare o mantenere la stabilità, la velocità di dissoluzione, il rilascio, o l'assorbimento del principio attivo. Questi eccipienti sono sostanze impiegate usualmente per formulare dosaggi per somministrazioni parenterale .sia sotto forma di dose unica che di dose multipla.

Come già detto, la somministrazione preferita per via parenterale della formulazione secondo l'invenzione è per via sottocutanea o intramuscolare. La somministrazione parenterale più preferita in assoluto è per via sottocutanea. Per ottenere la dose desiderata di principio attivo, si può ricorrere ad iniezioni sottocutanee o intramuscolari singole o ripetute. In una forma di realizzazione preferita dell'invenzione, la dose di principio attivo è compresa fra 1 e 1000 mg/kg/giorno. Per curare l'obesità, può essere desiderabile somministrare il principio attivo periodicamente. Le somministrazioni periodiche possono essere fatte mensilmente, bisettimanalmente, settimanalmente, giornalmente oppure di ora in ora. La frequenza di somministrazione richiesta sarà chiaramente determinabile da coloro che hanno in cura il paziente sulla base di tecniche di osservazione standard.

Si può anche prendere in considerazione la possibilità che le formulazioni farmaceutiche secondo l'invenzione siano somministrate oralmente. In questo caso, di preferenza, il principio attivo somministrato in questo, odo è incapsulato. Il principio attivo incapsulato può essere formulato con o senza quei veicoli usualmente utilizzati nella preparazione di forme di dosaggio solide. Di preferenza, la capsula viene fatta in modo che la porzione attiva della formulazione venga rilasciata nel tratto gastrointestinale al momento in cui la biodisponibilità è massima e la degradazione presistemica è minima. Possono essere inclusi nella formulazione ulteriori eccipienti finalizzati a facilitare l'assorbimento del principio attivo. Possono anche essere impiegati diluenti, aromatizzanti, cere a basso punto di fusione, oli vegetali, lubrificanti, agenti di sospensione, agenti di disintegrazione delle compresse e leganti.

Indipendentemente dal modo di somministrazione, la dose specifica viene calcolata secondo il peso corporeo approssimativo del paziente. Ulteriori affinazioni dei calcoli necessari per determinare il dosaggio appropriato per la terapia è fatto in modo ordinario dalle persone esperte dell'arte che possono conseguire questi risultati senza ricorrere ad indebita sperimentazione, specialmente alla luce dei saggi e delle informazioni di dosaggio qui descritte.

Secondo la presente invenzione, per curare l'obesità di un paziente, gli viene somministrata una quantità terapeuticamente efficace di principio attivo. Come già detto in precedenza, il dosaggio necessario e sufficiente per rilasciare una quantità terapeuticamente efficace di principio attivo può essere determinato dalle persone esperte del settore senza indebita sperimentazione. Una "quantità terapeuticamente efficace" può essere definita come la quantità di principio attivo sufficiente causare una perdita di peso adeguata con conseguente normalizzazione di parametri metabolici, quale il livello di glucosio nel sangue del paziente obeso.

Si è data finora della presente invenzione una descrizione di carattere generale. Con l'aiuto dei seguenti esempi verrà ora fornita una descrizione più particolareggiata di specifiche forme di

realizzazione finalizzate a far meglio comprendere scopi, caratteristiche, vantaggi e modalità operative dell'invenzione.

La figura 1 rappresenta gli effetti antiobesità di CNTF e leptina sul peso corporeo (diagrammi di sinistra) e sull'assunzione di mangime (diagrammi di destra) in topi geneticamente obesi e in topi con obesità indotta dalla dieta (DIO).

La figura 2 mostra, in comparazione con somministrazioni singole di due componenti, l'effetto sinergico di una bassa dose di CNTF, somministrata con leptina, sulla perdita in peso di topi DIO obesi.

La figura 3 mostra l'espressione dei recettori di CNTF e di leptina nell'ipotalamo di topo determinata per ibridazione in situ.

ESEMPIO 1

Effetti_ anti-obesità del_ CNTF e_ dal_ suo variante DH-CNTF

Il fattore neurotrofico ciliare umano (hCNTF), il suo variante DH-DNTF (12) (Serl66Asp/Glnl67His/hCNTF; un variante di hCNTF con affinità per CNTFRa 40 volte superiore) e leptina umana sono stati prodotti in E. Coli, e purificati mediante HPLC (10) al fine di rimuovere i lipo-polisaccaridi batterici. Le proteine sono state testate per quanto riguarda l'attività biologica in topi geneticamente obesi, come pure in topi con obesità indotta dalla dieta (DIO). Questi modelli di obesità e diabete sono generalmente accettati nello stato dell'arte come indicativi della condizione di obesità. Le proteine che manifestano effetti in questi modelli, dimostreranno attività simile in altri mammiferi, in particolare negli esseri umani.

Come si vedrà meglio in seguito, i composti del titolo sono attivi in tutti i test biologici sopra menzionati e risultano essere agenti antiobesità. Inoltre, sono attivi nell'invertire 1'iperglicemia e 1'iperinsulinemia associate con l'obesità. Si presume quindi che questi composti debbano anche essere utili nella cura della iperglicemia nel diabete mellito umano.

In accordo con precedenti esperimenti e risultati (13) , si è trovato che la somministrazione sistemica di leptina a topi mutanti oh, i quali non esprimono leptina funzionale, inverte l'obesità e l'iperfagia associata con la deficienza di leptina (vedi nel seguito) . La somministrazione giornaliera intraperitoneale di CNTF (da 2 a 50 μg/topo; corrispondente a 40-1000 μg/kg) a topi oh produce anche un decremento di peso corporeo progressivo e dose -dipendente (FIG la), come pure una rapida riduzione nell'assunzione di cibo (FIG lb). Alla più elevata dose testata (50 μg,· 1000 μg/kg), CNTF provoca un decremento del 16% di peso corporeo dopo 7 giorni (in confronto all'incremento del 5% nei controllo trattati con il veicolo), e un decremento di 5 volte nell'assunzione di cibo. Questi effetti sono comparabili come ordine di grandezza a quelli della leptina (100 μg; 2000 Mg/kg) . Il superagonista DH-CNTF di CNTF, produce riduzioni similari di peso corporeo e di assunzione di cibo a dosi inferiori di circa 5 volte a quelle di CNTF. Che gli effetti di CNTF sono mediati dal suo specifico recettore è supportato anche dalla mancanza di attività dei varianti di CNTF con capacità di segnale compromesso (dati non mostrati) (14).

Il topo db mutante non risponde alla leptina (13), a causa di una mutazione nel gene che codificante per OB-R che ha per effetto la produzione di un variante di recettore con un dominio intracitoplasmico tronco (9) (15). Al contrario, il trattamento di topi db con hCNTF porta ad una perdita di peso dose e tempodipendente (FIG le) e all'inibizione di assunzione di cibo (FIG ld). Il superagonista DH-CNTF è 5 volte più potente di CNTF nella riduzione di peso corporeo e di assunzione di cibo. I risultati ottenuti nei topi ob e db dimostrano che CNTF non agisce mediante stimolazione del rilascio di leptina oppure mediante attivazione diretta dei recettori di leptina.

Come già riferito (7), si è trovato che la somministrazione giornaliera di leptina umana (100 μg; 2500 μg/kg) a topi resi obesi per effetto di Lina dieta ad alto contenuto di grassi (topi DIO) riduce il peso corporeo (fig. le) e l'assunzione dì cibo (FIG lf), sebbene con un'efficienza minore che nel caso dei topi ob. Così, un trattamento per 5 giorni di topi DIO con leptina porta ad un decremento di peso corporeo del 7 ± 1% (p < 0,05 nei confronti del veicolo) ed a un decremento di assunzione di cibo del 31 ± 2% (non significativa, dal punto di vista statistico, nei confronti del veicolo). CNTF (50 μg; 1250 μg/kg) e di h-CNTF (10 μg,- 250 μg/kg) suscitano riduzioni più potenti di peso corporeo (19 ± 1% e 24 ± 1% rispettivamente; p < 0,0001) e di assunzione di cibo (76 ± 4%, e 73 ± 7%, rispettivamente,· p < 0,0005). La scoperta che CNTF può invertire l'obesità di topi sia db che DIO ha implicazioni sullo sviluppo di strategie farmacologiche per la cura della obesità umana, che si è postulata essere associata con la resistenza alla leptina (4) (17) (18).

NTF porta anche ad una transitoria riduzione di cambio di peso corporeo e di assunzione di cibo in topi normali (19)(però questo non è mai stato provato su animali obesi). E' pertanto importante determinare se i suoi effetti su topi obesi sono soggetti a desensitizzazione. Come mostrato in FIG lg, un trattamento per 25 giorni di topi db con DH-CNTF (10 μg; 250 μg/kg) porta ad un decremento progressivo e stazionario di peso corporeo, che al 15° giorno (20% di riduzione di peso) raggiunge un livello corrispondente a quello di topi normali. DH-CNTF suscita anche un decremento di circa il 50% di assunzione di cibo, che persiste durante tutto il trattamento (Fig Ih). L'analisi post-mortem rivela l'eliminazione praticamente totale di grasso sottocutaneo e addominale. Una riduzione persistente di cambio di peso corporeo ed assunzione di cibo è stata anche osservata in topi ob trattati per 17 giorni con CNTF (dati non mostrati). All'interruzione del trattamento con CNTF, il peso corporeo e l'assunzione di cibo aumentano rapidamente e ritornano a livelli pretrattamento dopo qualche giorno, sia nel caso di topi db (fig 1 g, h,) che di topi ob (dati non mostrati).

Sono stati condotti gli esperimenti usando gruppi di topi C57BL/6J ob/ob maschi, di 10 settimane di età(a, b), topi C57BL/KS db/db di 10 settimane di età (c, d, g, h), e topi AKR/J di 19 settimane di età (e, f) resi obesi con una dieta ad elevato contenuto di grassi (20) a partire dalla dodicesima settimana di vita, a-f: i topi, tenuti in gabbie individuali, sono stati abituati ad iniezioni intraperitoneali giornaliere (9 del mattino) di veicolo (0,9% di sale, 0,2 mg/ml di albumina di siero bovino esente da endotossine) per 2 giorni prima dell'inizio del trattamento (giorno 0) con i composti indicati (quantità in μg/topo < 5 ng di endotossina/mg di proteina). Gli animali sono stati posati dopo l'iniezione e si è determinata l'assunzione di cibo registrando la quantità di avanzi rimasti nei contenitori di cibo. Il peso corporeo viene espresso come percentuale del peso originario al giorno 2 e rappresenta la media ± s.e.m. (n = 3 per i topi ob e db, n = 5 per i topi DIO). I pesi iniziali per ciascun gruppo di animali trattati col veicolo è (in g): ob, 49,3 ± 0,3; db, 39,1 ± 2,5; DIO, 42,6 ± 0,8. g, h: effetti cronici di DH-CNTF in topi db. Topi C57BL/KS db/db maschi di undici settimane di età (simboli chiusi nella figura 1), tenuti in un gruppo di 5, hanno ricevuto iniezioni intraperitoneali giornaliere di DH-CNTF (10 μg/topo) per 25 giorni. Dal giorno 26, i topi sono stati trattati col veicolo. A fini comparativi, sono anche mostrati in figura 1 i pesi di topi C57BL/KS normali, trattati col veicolo (simboli aperti). L'assunzione di cibo è il numero di grammi consumati per gruppo diviso per 5.

Come si è visto, ai topi obesi sono state somministrate giornalmente iniezioni intraperitoneali di CNTF oppure del variante DH-CNTF in dosaggi da 2 a 50 μg, corrispondenti a 50-1000 ug/kg di peso corporeo. Alla dose più elevata, i composti suscitano una riduzione superiore al 10% di riduzione di peso corporeo dopo 5 giorni di trattamento. Pertanto, ai pazienti che soffrono di obesità vengono somministrate dosi di CNTF oppure di DH-CNTF inferiori a 1000 mg/kg e preferibilmente circa 100 μg/kg, al fine di indurre una rapida riduzione di peso corporeo (5-10%). Inoltre, in questa forma di realizzazione preferita, CNTF oppure DH-CNTF viene somministrato una volta al giorno ed il trattamento viene continuato per qualche giorno, finché si ottiene la riduzione desiderata di peso corporeo.

ESEMPIO 2

Potenziamento dell'effetto anti-obesità della leptina dovuto a] sinergismo con CNTF nel topo DIO Topi obesi DIO vengono sottoposti a iniezioni intraperitoneali di leptina (100 μ9; corrispondenti a 2500 μg/kg) insieme a una piccola dose (2 μ9, corrispondenti a 50 μg/kg) di CNTF. Nessuna delle due molècole di per sè produce una significativa perdita di peso. Questo trattameto ha per effetto una riduzione forte, sinergica di peso corporeo (fig. 2). Questo risultato dimostra che piccole dosi di CNTF si possono usare per potenziare in modo significativo l'effetto della leptina in un modello di obesità associato con la resistenza alla leptina .

In figura 3 viene mostrata l'espressione di recettori del CNTF e della leptina nell'ipotalamo di topo determinata per ibridazione in situ. Sezioni seriali coronali di ipotalamo di topo vengono preparate nella regione contenente i nuclei arcuato (ARC) e paraventricolare (PVN). Viene eseguita ibridazione in situ su sezioni gelate usando sonde di cRNA marcato con 35S specifiche per OB-R, CNTFRa e LIFR murini, secondo procedure descritte in precedenza (24). La sonda del recettore di leptina contiene i nucleotidi 780-1408 della sequenza che codifica per OB-R di topo, corrispondente alla parte del dominio extracellulare comune a tutte le forme variabili del recettore di leptina (9)(15). E' stato dimostrato che l'uso di una sonda comune produce un pattern di ibridazione in PVN e ARC. simile a quello di una sonda OB-Rb-specifica (22). La sonda per CNTFRa è stata ottenuta mediante amplificazione con RT-PCR di RNA di cervello murino usando primers derivati da CNTFRa umano, e corrispondenti ai nucleotidi 246-856 della sequenza codificante umana. La sonda per LIFR comprende i nucleotidi 2620-3217 della sequenza codificante.

ESEMPIO 3.

Effetto antidiabetico di CNTF in topi ob/db obesi Oltre a mimare l'azione regolatrice del peso e dell'appetito della leptina, il CNTF riproduce anche i suoi effetti antidiabetici (5)(6)(13), come mostrato sinotticamente nella tabella 1.

TABELLA 1: Effetti della leptina e del CNTF sul cambio di peso corporeo e su insulina e glucosio nel siero di topi obesi:

I topi hanno ricevuto iniezioni intraperitoneali giornaliere di veicolo, di leptina (100 pg), di CNTF (50 μ9> oppure di DH-CNTF (10 pg) . Il sangue è stato ottenuto dal sinus retroorbitale, tranne che nell'esperimento 3, in cui il sangue è stato prelevato mediante una puntura cardiaca. I campioni di sangue sono stati prelevati 24 ore dopo l'ultima iniezione (9 del mattino; esperimenti 1 e 4), oppure 7 ore dopo l'ultima iniezione e la rimozione di cibo (4 pomeridiane,· esperimenti 2 e 3). Il glucosio nel siero è stato determinato mediante il metodo della glucosio ossidasi, mentre l'insulina nel siero è stata determinata mediante saggio radioimmunologico (Amersham), usando insulina di ratto come standard. I dati rappresentano i valori medi ± s.e.m. da 3 a 6 animali per gruppo, [nd, non determinato.

* P< 0,o5 * P < 0,001 nei confronti del veicolo mediante t-test.

L'iperglicemia (ma non l'iperinsulinemia grave) è una proprietà caratteristica dei topi C57BL/KS/db (21). Come riportato in precedenza (5) (6) (13) la leptina non è capace di invertire 1'iperglicemia in topi db. Al contrario, CNTF e DH-CNTF portano a riduzioni di 2-3 volte nei livelli di glucosio del siero dopo 7 oppure 22 giorni di trattamento, senza pregiudicare l'insulina (tabella 1). Il mutante C57BL/6 ob che non è tipicamente diabetico, esibisce una forte iperinsulinemia (21). Il trattamento di topi ob per 4 o 7 giorni con CNTF (50. μg; 1000 μg/kg), DH-CNTF (10 μg; 200 μg(kg), oppure leptina (100 μg, 2000 μg/kg) porta all'annullamento della iperinsulinemia (tabella 1).Si deve puntualizzare che gli effetti sul glucosio e sull'insulina nel sangue vengono osservati indipendentemente dal fatto che i campioni di sangue vengano prelevati da animali dopo il pasto oppure dopo 7 ore di digiuno, mostrando così che non è possibile che detti effetti rappresentino una conseguenza acuta della riduzione di assunzione di cibo.

Una spiegazione possibile della sovrapposizione di attività della ìeptina e del CNTF potrebbe essere che queste citochine stimolano itinerari effettori comuni nelle aree ipotalamiche coinvolte nella regione di acquisizione e di consumo di energia. E' stato dimostrato che la forma lunga di processamento del recettore di Ìeptina (OB-Rb) viene espressa in queste regioni, inclusi i nuclei arcuato, ventromediale e paraventricolare (22). Per determinare se questi siti potrebbero anche essere bersaglio della attività di CNTF, è stata usata ibridizzazione in situ confrontando l'espressione del recettore di Ìeptina con quella delle subunità CNTFRa e LIFR del recettore di CNTF. Come viene mostrato in figura 3, i nuclei arcuato e paraventricolare dell'ipotalamo di topo esprimono mRNA per tutte e tre le subunità del ricettore. La presenza di CNTFRa immunoreattivo nel nucleo ipotalamico paraventricolare di ratto è stato già riportato in precedenza (23). I risultati preliminari indicano l'espressione di CNTFRa e LIFR in ulteriori regioni ipotalamiche, incluso il nucleo ventromediale.

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Uso di sostanze che attivano il recettore del CNTF (fattore neurotrofico ciliare) per la preparazione di composizioni farmaceutiche per la terapia di obesità e malattie ad essa associate.
2. Uso di sostanze che attivano il recettore del CNTF come da rivendicazione 1, in cui le sostanze che attivano il recettore del CNTF sono hCNTF (fattore neurotrofico ciliare umano) o un suo variante.
3. Uso di sostanze che attivano il recettore del CNTF come da rivendicazione precedente, in cui il variante di hCNTF è una muteina (DH-CNTF) che, dalla posizione 159 alla posizione 178, ha la seguente sequenza amminoacidica: Leu Lys Val Leu Gin Giu Leu Asp His Trp Thr Val Arg Ser Ile His Asp Leu Arg Phe.
4. Uso di DNA che codifica per hCNTF o suoi varianti per la preparazione di composizioni per la terapia di obesità e malattie ad essa associate.
5. Composizione farmaceutica per la cura dell'obesità e delle malattie ad essa associate, comprendente un veicolo farmaceuticamente accettabile, caratterizzata dal fatto di contenere come almeno uno dei principi attivi hCNTF oppure almeno uno dei suoi varianti.
6 Composizione farmaceutica come da rivendicazione 5, in cui i principi attivi sono hCNTF, oppure uno dei suoi varianti, e leptina.
7. Composizioni farmaceutiche, come da rivendicazione 5 oppure 6, formulate per somministrazioni parenterali, nasali, bronchiali, transdermali, oppure rettali.
8. Metodo di somministrazione delle composizioni farmaceutiche secondo le rivendicazioni da 5 a 7, caratterizzato dal fatto che il principio attivo è somministrato a dosi giornaliere comprese fra 1 e 10.000 pg/kg corporeo.
9. Metodo di somministrazione come da rivendicazione 8, in cui le dosi giornaliere sono preferibilmente comprese fra 10 e 1000 pg/kg corporeo .