HUT77123A

HUT77123A - 4H-Tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on-származékok, eljárás előállításukra és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Info

Publication number: HUT77123A
Application number: HU9701822A
Authority: HU
Inventors: Richard Lewis Jarvest; Martin John Parratt; Halina Teresa Serafinowska
Original assignee: Smithkline Beecham Plc.
Priority date: 1994-12-22
Filing date: 1995-12-20
Publication date: 1998-03-02
Also published as: NO972905L; WO1996019482A1; CZ195897A3; FI972585A; JPH11500710A; EP0799230A1; FI972585A0; ZA9510823B; NO972905D0; GB9426021D0; CA2208458A1; MX9704737A; AU4347596A; PL320889A1; CN1175258A; BR9510418A

Description

A találmány tárgyalsz (I)f4H^tieno[ 2,3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on- ₍

Λ.Τ- fcl«sAt|{.{-4sitÍ£:r«i Srxx>(^A(A <jjÁr*fs a Ra-íJ jijojjJíer

-származék jlAerpes-vírus—prntpa? ínhÍhUnrnii^aTnpiwpl·; ~2-helyzetben}

Az. Cl) alfcol*Kűi belple-tk)g.n e

X (Y) NH-CHRx—sz-ubszt-bt ue nst—tartalmazna-k-;—abei IX jelentése hidro- * génatom vagy védőcsoport;IY jelentése {kívánt—°^L'npn _ J exAott fcJtébo. ÁiutSY-ilÁKA üt fttfeíftio arnTnosasy'^JR! jelentése hidrogénatom vagy |»ninooav -eldallán^

A találmány szerinti vegyületek herpes-vírusok által okozott „ , ^rc 1, fertőzések kezelesebon· alkalmazhatók^ps—gyógyszeriparban

vírusos {haozná-lják okot 'C. ·£ *4ott ix-ubiv^-hje tt M~, λ l koké— <*4ld.it “’hb-ca^'C’rty acCo-ft -ixublvú'-ú-nJ. út _

-karfaX-, ^feSvkhUítCUHLVUCOa<9^>ort.

pXfdiciX ¹

• · · ···· ···· • ·

S.íi.G. & K.

, Nemzetközi

64-16 6/ DE Szabadalmi Iroda

H-1062 Budapest, Andrássy ut 113, Telefon: 34-24-950, Fax; 34-24r323 közzétételi példány

ΜΗ -TcekoDj --G DikJ5- ok -SiAi-maitfcok, e-lj« Ίί tioa II iLJíkLc^

-tűrtél |C4tfZ--ó j/írussllanes szerként alkalmazható tiGnoxazinon-származókok-/

SMITHKLINE BEECHAM PLC, BRENTFORD, Middlesex, GB

Feltalálók:

JARVEST Richard, Lewis, EPSOM, GB

PARRATT	Martin, John, EPSOM,	GB
SERAFINOWSKA Halina, Teresa,	EPSOM, GB
A bejelentés	napj a: 1995. 12.	20 .
Elsőbbsége:	1994. 12.	22 .	(9426021.3), GB

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP95/05154

A nemzetközi közzététel száma: WO 96/19482 • · · • · · · · • · · · · · • ·· ··· ··· ··· ····· · · · ♦ * * ··· '·· · *

A találmány vírusellenes szerként alkalmazható vegyületekre vonatkozik.

Kísérleteink során felismertük, hogy a tienoxazinon-származékok potenciálisan alkalmasak herpes vírusok, különösen herpes simplex vírus 1 és 2 (HSV-1) és (HSV-2) citomegalo vírusellenes és varicella-zoster vírusellenes hatás kifejtésére.

A találmány tárgya herpes vírus proteáz inhibitor 4H-tieno[ 2,3-d][ 1,3] oxazin-4-on származékok, amelyek 2-helyzetben X(Y)NH-CHR₄- szubsztituenst tartalmaznak, ahol X jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport, Y jelentése adott esetben jelenlévő aminosav-csoport, R_x jelentése hidrogénatom vagy aminosav e-ldallánc-csoport. Ezeket a származékokat a leírásban (I) általános képletű vegyületként jellemezzük.

Az (I) általános képletű vegyületek 4H-tieno[ 2,3-d] [ l,3]oxazin-4-on gyűrűrendszere az (I) általános képlet szerint számozott .

A gyűrűrendszer az 5- és 6-helyzetben (R₃ és R₂) , továbbá a 2-helyzetben is tartalmazhat szubsztituenst. A szubsztituensek lehetnek halogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, 1-6 szénatomos alkoxicsoport, 1-6 szénatomos alkiltio-csoport, aminocsoport, amely kívánt esetben egy vagy két 1-6 szénatomos alkilcsoporttal vagy benzilcsoporttal szubsztituált lehet. Ezen túlmenően lehetnek hidroxi-alkil-csoport, alkil-karbonilcsoport, alkoxi-karbonil-csoport, amelyek kívánt esetben fenilcsoporttal vagy R₄ZCONH- általános képletű csoporttal szubsztituáltak, ahol Z jelentése egy kötés, oxigénatom, NH-csoport vagy NCOCH₃- csoport és R₄CO jelentése acilcsoport, ahol R₄ jelentése arilcsoport, alkilcsoport vagy aralkilcsoport vagy

R₃ és R₂ jelentése együttesen lehet C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₇ vagy C₈ szénatomszárrá polimetilén-csoport.

Az alkil vagy alkiltartalmú csoportok lehetnek C₃, C₂, C₃,

C₄, C₅, C₆ szénatomos egyenes vagy elágazó szénláncú vagy ciklusos alkilcsoportok. Az 1-4 szénatomos alkilcsoportok lehetnek például metilcsoport, etilcsoport, n- és izopropil-csoport, η-, izo-, szék- és terc-butil-csoport. A ciklusos alkilcsoportok lehetnek ciklopropilcsoport, ciklobutilcsoport, ciklopentilcsoport, ciklohexilcsoport.

Az arilcsoport lehet fenilcsoport és naftilcsoport, amely kívánt esetben egy vagy több szubsztituenst tartalmazhat, ahol a szubsztituensek lehetnek halogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, 1-6 szénatomos alkoxicsoport és 1-6 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport.

A halogénatom lehet fluoratom, klóratom, brómatom és jódatom.

Az X csoportok lehetnek olyan csoportok, amelyek a peptidkémiában a szakirodalomban ismertek. Különösen előnyös ilyen csoportok az arilcsoport, az alkanoilcsoport, az aril-alkoxi-karbonil-csoport, az aril-alkil-amino-karbonil-csoport, az aroilcsoport vagy az aril-szulfonil-csoport. Előnyös X csoportok lehetnek a benziloxi-karbonil-csoport, a terc-butoxi-karbonil-csoport és a kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport.

Az aminosav-oldallánc csoport lehet egy vagy több aminosavcsoport. Alkalmas aminosavak lehetnek a szintetikus peptidekben alkalmazott, szakirodalomból ismert csoportok. Az aminosavak lehetnek D- vagy L-izomerek, előnyösen L-izomer formájúak. Az Y csoport esetében az aminosav lehet például alanin, aszparagin, • · · · • · · · · · · ·

- 4 valin vagy hasonló aminosavak. Különösen előnyös aminosav egységek a -NH-CHRx-CO- csoportok, amelyek az (I) általános képletű vegyületben NH-CHR]_- csoportot képeznek és ezek lehetnek alanin (R_x = CH₃) , aszparagin, metionin, fenil-alanin, szerin (R_x =

CH₂OH) , valin és α-amino-butánsav (R_r = CH₂CH₃) .

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sói is beleértendők a találmány tárgykörébe .

Az (I) általános képletű vegyületek és ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói szolvátokat, mint például hidrátokat is képezhetnek és ezeket is beleértjük a találmány tárgykörébe, Függetlenül attól, hogy az (I) általános képletű vegyületről vagy ennek sójáról beszélünk.

A találmány szerinti vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy az Rí tartalmú aminosavat vagy dipeptidet szokásos peptidkémiai eljárásokkal aktiváljuk:

i) aktivált észtert képzünk valamely karbodiimid vegyület segítségével vagy más kapcsoló reagenssel, például 1-hidroxi-benzotriazollal vagy ii) vegyes anhidridet képzünk, például izobutil-klór-formiáttal és ezt 2-amino-tiofén-3-karbonsavval vagy észterrel reagáltatj uk.

A közbenső termék amid vegyületet izolálhatjuk vagy a nyers reakcióterméket közvetlenül ciklizálhatjuk. A ciklizációs reakcióban a tiofén-savszármazékok esetében alkalmazhatunk kapcsoló reagenseket vagy dehidratáló reagenseket, mint például karbodiimideket, ecetsav-anhidridet vagy szulfonil-kloridokat. A tio5 fén-észterszármazékok ciklizálásában alkalmazott reagensek lehetnek például trifenil-foszfin/szén-tetraklorid. Amennyiben az aminosav funkciós csoportot tartalmazó oldalláncot tartalmaz, ezt védőcsoporttal látjuk el, majd a szintézis utolsó lépésben a védőcsoportot eltávolítjuk, például egy savra érzékeny csoport eltávolítását trifluor-ecetsavval végezhetjük. A szakember felismeri, hogy az 5- és 6-szubsztituensek típusától függően a kívánt termékben a ciklizációt az adott szubsztituensek vagy szubsztituens bevezetése vagy módosítása előtt vagy után is végezhetjük.

A gyógyszerészetileg elfogadható sóformákat szokásos eljárásokkal állíthatjuk elő, például a savaddíciós sók esetében a megfelelő szerves vagy szervetlen savval végzünk reakciót.

A találmány szerinti vegyületek potenciálisan alkalmazhatók herpes vírusok, mint például herpes simplex 1 és 2 típusú vírus, varicella-zoster vírus, Epstein-Barr vírus és citomegalovírus által okozott fertőzések kezelésében, valamint az egyéb herpes vírusok is, például a herpes-vírus-6.

A találmány szerinti vegyületekből gyógyszerészeti készítményt állíthatunk elő. Ennek következtében a találmány tárgya továbbá gyógyszerkészítmény, amely azzal jellemezhető, hogy az (I) általános képletű vegyületet vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját tartalmazza, továbbá gyógyszerészetileg elfogadható hordozó- vagy kiszerelőanyagot tartalmaz.

A humán betegek esetében orális úton adagolható készítmény lehet szirup, tabletta vagy kapszula forma. Amennyiben a készítmény tabletta forma, bármely ilyen szilárd forma előállítására alkalmas gyógyszerészeti hordozóanyag alkalmazható. Ez lehet például magnézium-sztearát, keményítő, laktóz, glukóz, rizs, liszt és kréta. A készítmény lehet továbbá ehető kapszula forma, például zselatin kapszula, amely a vegyületet tartalmazza, vagy lehet szirup forma, tovább oldat vagy szuszpenzió forma is. Alkalmas folyékony gyógyszerészeti hordozóanyagok ezekben a készítményekben lehetnek etanol, glicerin, fiziológiás sóoldat és víz, amelyek továbbá 'ízesítő- vagy színezőanyagokat tartalmazhatnak (például a szirupkészítés során). A találmány szerinti vegyületek továbbá injektálás céljára steril folyadék formában is előáll!thatók.

A találmány szerinti készítmény továbbá lehet helyi alkalmazású, amelyet a bőrre vagy a szemre alkalmazunk.

A bőrre történő helyi alkalmazás esetében a készítmény lehet krém, lemosó oldat vagy kenőcs forma. Ezeket a készítményeket szokásos szakirodalmi módon állíthatjuk elő, mint például a Harry Cosmeticology, Leonard Hill Books és British Pharmaceopaeia közleményben gyógyszerészeti készítmények és kozmetikumok esetében leírt forma.

A találmány szerinti készítmény, amelyet szemre alkalmazunk, szokásos szemcsepp forma, amely szakirodalomban ismert, vagy lehet kenőcs forma.

Előnyösen a találmány szerinti készítmény egységdózis forma, illetve valamely olyan forma, amelyet egyetlen dózisban adagolhatunk. Az alkalmas dózisegység forma 50 mg - 1 g, például 100-500 mg aktív hatóanyagot tartalmazhat.

Az ilyen dózisokat 1-4 alkalommal adagolhatjuk, naponta általában 2-3 alkalommal. A találmány szerinti készítmény hatásos dózisa általában 1,0-20 mg/kg testtömeg/nap vagy általánosabban

2,0-10 mg/kg/nap érték.

A fenti dózisszintek esetében nem tapasztaltunk elfogadhatatlan toxikológiai hatást.

A találmány tárgya továbbá eljárás emlősökben - beleértve az embert is - vírusos fertőzések kezelésére, melyre jellemző, hogy az emlősnek az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyszerészetileg elfogadható sója nem toxikus, terápiásán hatásos menynyiségét adagoljuk.

A találmány tárgya továbbá az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyszerészetileg elfogadható sójának alkalmazása aktív terápiás szerként, különösen vírusos fertőzések kezelésében-r

Az alábbi példákon a találmány szerinti vegyületet és eljárást bemutatjuk. A szokásos rövidítéseket alkalmazzuk az aminosavak megnevezésére, melyeket az 1. reakcióvázlat szemléltet, ahol i) EtjN, metanol; ii) NaOH/H₂O; iii) N-metil-morfolin, izobutil-klór-formiát, THF, DMF, Cbz-L-alanin; iv) DEC, DMF.

1. példa (1. reakciólépés)

Nátrium-2-amino-tiofén-3-karboxilát

2,5 g (0,016 mól) metil-2-amino-tiofén-3-karboxilát (K.

Gewad, Chem. Bér. 1965, 98:3571-7) 20 ml dioxánban készült oldatához 0,64 g (7,5 ml, 2,13 M oldat, 0,016 mól) nátriumhidroxidot adagolunk, majd az elegyet 6 órán át 60°C hőmérsékleten keverjük és 1,5 órán át visszafolyatás melletti forráshőmérsékletre melegítjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a maradékot vízben oldjuk és az el nem reagált kiindulási anyagot 3x50 ml diklór-metán alkalmazásával extraháljuk. A termékből a vizet eltávolítjuk, majd a terméket foszfor-pentoxid fölött 60°C hőmérsékleten szárítjuk (1,56 g, 59 % kitermelés). ¹H-NMR-spektrum [ (CD₃)₂SO] , δ:

5,95 (1H, d, J = 5,5 Hz, tiofén-proton), 6,75 (3H, m, tiof én-proton és NH₂) .

1. példa (2, reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]4-H-tieno[2,3-d][1,3]-oxazin-4-on

1,68 g (7,51 mmól) N-benzil-oxi-karbonil-L-alanin 50 ml tetrahidrofuránban készült oldatához -10°C hőmérsékleten 0,82 ml (0,76 g, 7,51 mmól) N-metil-morfolint és 0,974 ml (1,025 g, 7,51 mmól) izobutil-klór-formiátot adagolunk. Az elegyet 0,5 órán át keverjük, majd 1,25 g (7,51 mmól) nátrium-2-amino-tiofén-3-karboxilát 30 ml N,N-dimetil-formamidban készült oldatát adagoljuk hozzá. Az adagolást csepegtetéssel végezzük és a reakcióelegyet 18 órán át keverjük. Ezt követően az oldószerfelesleget vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot oszlopkromatográfia segítségével 10 % metanol/diklór-metán/0,5 % ecetsav eluens alkalmazásával tisztit j uk . 1,77 g 2-[ (N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil] -tiofén-3-karbonsavat nyerünk. A nyert anyag 50 ml dimetil-formamidban készült oldatához 0°C hőmérsékleten 0,979 g (5,07 mmól) 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adagolunk, és a reakcióelegyet 2,5 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a felesleg oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot oszlopkromatográfia segítségével 5 % etil-acetát/diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. A kapott szennye9 zett terméket újra tisztítjuk, ebben az esetben 10 % izopropanol/hexán eluens alkalmazunk. (S)-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1.3] oxazin-4-on terméket nyerünk (23 mg) .

Op.: 140-144°C.

IR-spektrum v_max (KBr) : 3286, 1758 és 1686 cm'¹.

¹H-NMR-spektrum [ (CD₃)₂SO] , δ:

1,44 (3H, d,	J =	7 Hz	, CH₃)	, 4,6 (1H, m, CH) , 5,05	(2H,
m, CH₂), 7,3	(5H,	m) ,	c₆h₅) ,	7,45 (1H, d, J = 5 Hz,	tio-
fén-proton),	7,7	(1H,	d, J	- 5 Hz, tiofén-proton),	és
8,04 (1H, d,	J =	7 Hz	, NH) .

Elemanalízis a C₁₆H₁₄N₁O₄S képlet alapján:

számított: C: 58,17, H: 4,27, N: 8,48 %;

mért: C: 57,84, H: 4,47, N: 8,57 %.

2. és 3. példa (1. reakciólépés általános eljárása)

2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-tiofén-3-karboxilátok előállítása mmól N-(benzil-oxi-karbonil)-alanin 25 ml száraz tetrahidrofuránban készült oldatához -5°C hőmérsékleten 3 mmól 4-metil-morfolint, majd 3 mmól izobutil-klór-formiátot adagolunk. 5 perc elteltével az elegyhez 3 mmól megfelelő amino-tiofén-észtert adunk, a reakcióelegyet -5°C hőmérsékleten 30 percen át, és ezt követően 52-60 órán át keverjük. A kivált csapadékot leszűrjük, 2x10 ml száraz tetrahidrofuránnal mossuk és az egyesített szűrleteket és mosófolyadékot szárazra pároljuk. A maradékot 2x50 ml toluollal együtt bepároljuk. A terméket

- 10 • · ·· · • · • · · • · · · · · • · ·

oszlopkromatográfía segítségével szilikagélen etí1-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk.

2, példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metil-tiofén-3-karboxilát % kitermelés.

IR-spektrum v_raax	(KBr):	3305,	1696, 1670,	1551, 1521 és	1452 cm'¹
NMR-spektrum [	(DC₃) ₂SO]	, δ:
1,17	(6H, m,	2xCH₃)	, 2,32 (3H,	d, J = 1,1 Hz,	CH₃) ,
4,29	(3H, m,	CH és	CH₂), 5,08	(2H, m, CH₂Ph),	6,71 (1H

d, J = 1,1 Hz, 5-H), 7,36 (5H, m, aromás protonok), 8,15 (1H, d, J = 6,32 Hz, D₂0 cserélhető NH) és 11,58 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

Elemanalízis a C_l9H₂₂N₂O₅S képlet alapján:

számított:	C:	58,45,	H:	5,	68,	N:	7,17 %;
mért:	C :	58,34,	H:	5,	67,	N:	7,65 % .

3. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4,5-di- metiltiofén-3-karboxilát % kitermelés.

IR-spektrum v_max (KBr) : 3276, 2985, 1687, 1565, 1529 és 1542 cm \ ^-NMR-spektrum [ (CD₃)₂SO] , δ:

1,32 (6H, m, 2xCH₃) , 2,21 (3H, s, CH₃) , 2,24 (3H, s,

CH₃) , 4,26 (3H, m, CH és CH₂) , 5,08 (2H, m, CH₂Ph), 7,36 ··«· ··««

- 11 (5Η, m, aromás protonok), 8,12 (1H, d, J = 6,6 Hz, D₂0 cserélhető NH) és 11,5 (1H, s, D₂0 cserélhető NH) .

Elemanalízis a C₂oH24N₂0₅S képlet alapján:

számított: C: 59,39, H: 5,98, N: 6,93 %;

mért: C: 59,40, H: 5,91, N: 7,05 %.

4. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-ciklopentán[b]tiofén-3-karboxilát g (4,8 mmól) etil-2-amino-ciklopentán[ b] tiofén-3-karboxilát 20 ml száraz N,N-dimetil-formamidban készült oldatához hozzáadagolunk 5,7 mmól (1,27 g) l-hidroxi-7-azabenzotriazolt és 5,7 mmól (1,1 g) N-(benzil-oxi-karbonil)-alanint. A kapott reakcióelegyet 52 órán át szobahőmérsékleten keverjük, az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 200 ml diklór-metánban oldjuk. Az oldatot 2x50 ml 10 %-os citromsavval (vizes oldat), majd kétszer 50 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, 1x50 ml telített sóoldattal mossuk. Ezután magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert elpárologtatjuk. A terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 5-10 % etilacetát/kloroform eluens alkalamazásával tiszítjuk. 0,61 g (31 % kitermelés)etil-2-[ N- (benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-ciklopentán[ b] tiofén-3-karboxilátot nyerünk, amely színtelen szilárd anyag.

IR-spektrum v_max (KBr) : 3286, 2976, 2934, 1700, 1670, 1559,

1527 és 1453 cm'¹.

¹H-NMR [ (CD₃) ₂SO] , δ:

• * · · (>·*·

- 12 l, 33 (6Η, m, 2xCH₃) , 2,32 (2H, m, CH₂) , 2,83 (4H, m, 2xCH₂), 4,26 (3H, m, CH₂ és CH) , 5,09 (2H, m,

CH₂Ph), 7,36 (5H, m, aromás protonok), 8,14 (1H, d,

J = 6,04 Hz, D₂O cserélhető NH) és 11,36 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH) .

Elemanalízis a C₂₁H₁₄N₂O₅S. 0,2 H₂O képlet alapján:

számított: C: 59,99, H: 5,85, N: 6,67 %;

mért: C: 59,92, H: 5,79, N: 6,62 %.

2., 3. és 4. példa (2. reakciólépés általános eljárása) (S)-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-4H-tieno- ~ [2,3][1,3]oxazin-4-onok

0,5 mmól megfelelő amido-tiofén-észter 10 ml száraz diklór-metánban készült oldatához 2 mmól trifenil-foszfint és 3 mmól szén-tetrakloridot adagolunk. A kapott reakcióelegyet 70°C hőmérsékleten 3,0-3,5 órán át visszafolyatás mellett forraljuk, majd az elegyet 100 ml diklór-metánnal hígítjuk. Ezután az elegyet 2x20 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk és magnézium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, a terméket oszlopkromatográfla segítségével szilikagélen etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk.

2. példa (2, reakciólépés) (S)-2-[-Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on % kitermelés.

Op.: 45-150°C.

• · · · (, «· · • · « ··« · · · ··· • ····· · · | •4 · ·«·«· »*

- 13 IR-spektrum v_max (KBr) : 3425, 3289, 1756, 1691, 1604, 1553,

1540 és 1453 cm'¹.

^-NMR-spektrum [ CD₃)₂SO] , δ:

1,43	(3H, d, J	= 7,15 Hz, CH₃) , 2,42	(3H, J = 0,82	Hz,
CH₃) ,	4,56 (1H,	m, CH) , 5,06 (2H, m) ,	CH₂Ph),7,32 (	:ih,
d, J	= 1,1 Hz,	6-H), 7,36 (5H, m, aromás protonok)	és
8,02	(1H, d, J	= 7,15 Hz,D₂O cserélhető NH) .
Elemanalízis a	Gl7Üi6N₂O₄S	képlet alapján:
számított:	C: 59, 29,	H: 4,68, N: 8,13 %;
mért:	C: 59,20,	H: 4,69, N: 8,19 %.

3. példa (2, reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5,6-dimetil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on % kitermelés.

Op.: 122-125°C.

IR-spektrum v_max (KBr) : 3413, 3302, 1757, 1685, 1601, 1539 és

55 cm ¹ .

¹H-NMR-spektrum [ (CD₃)₂SO] , δ:

1,42

2,40

CH₂Ph) d, J =

Elemanalízis a számított:

mért:

(3H, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,33 (3H, s, CH₃) , 4,56 (1H, m, CH) , , 7,36 (5H, m, aromás protonok) = 7,43 Hz, D₂O cserélhető NH) . C₁₈H₁₈N₂O₄S képlet alapján:

C: 60,32, H: 5,06, N: 7,82 %;

C: 60,61, H: 5,29, N: 7,62 %.

(3H, s, CH₃),

5,06 (2H, m, és 8,01 (1H, • · ·

- 14 4. példa (2. előállítás) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-6,7-dihidro-4H,5H-ciklopenta[4,5]tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on % kitermelés.

IR-spektrum v_max (KBr) : 3414, 3295, 2986, 1775, 1600, 1537 és

53 cm ¹.

¹H-NMR-spektrum [ (CD₃) ₂SO] , δ:

1,42 (3H, d, J = 6,87 Hz, CH₃) , 2,43 (2H, m, CH₂),

3,1 (4H, m, 2xCH₂) , 4,57 (1H, m, CH) , 5,06 <2H, m,

CH₂Ph), 7,36 (5H, m, aromás protonok) és 8,01 (1H, d, J = 7,43 Hz, D₂O cserélhető NH) .

Elemanalízis a C₁₉H₁₈O₄N₂S képlet alapján:

számított: C: 61,61, H: 4,90, N: 7,56 %;

mért: C: 60,00, H: 4,91, N: 7,35 %.

2. példa (2, reakciólépés - 2. eljárás) (S)-2-[N-Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]-oxazin-4-on

0,51 mmól (0,2 g) etil-2-[ N- (benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metil-tiofén-3-karboxilát 2 ml dioxánban készült oldatához 0,52 ml 1 M vizes nátrium-hidroxid oldatot adagolunk. A kapott reakcióelegyet 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd további 0,3 ml M vizes nátrium-hidroxid oldatot adagolunk hozzá. A keverést további 12 órán át folytatjuk és az oldatot híg sósavval semlegesítjük. Ezután az oldószert elpárologtatjuk, majd a maradékot 2x20 ml toluollal együtt bepároljuk. A maradékot ezután 10 ml száraz N,N-dimetil-formamidban oldjuk és az ol· ·.*

- 15 dathoz 1 mmól (0,19 g) 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adagolunk, majd a kapott reakcióelegyet 60 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 100 ml diklór-metánban oldjuk. Az oldatot 1x10 ml 10 %-os vizes citromsavval, 1x10 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, 1x10 ml telített sóoldattal mossuk, majd magnézium-szulfáton megszárítjuk. A terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 20-25 % etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. 15 mg (8 % kitermelés) (S)-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-ont nyerünk. IR-spektrum v_max (KBr) : 3417, 3288, 1756, 1691, 1604, 1553, 1539 és 14 53 cm ¹.

¹H-NMR-spektrum [ CD₃)₂SO] , δ:

1,43 (3H, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,42 (3H, d, J =

1,1 Hz, CH₃), 4,56 (1H, m, CH) , 5,05 (2H, m, CH₂Ph) ,

7,32 (1H, d, J = 1,1 Hz, 6-H), 7,36 (5H, m, aromás protonok) és 8,02 (1H, d, J = 7,442 Hz, D₂O cserélhető NH) .

Elemanalízis a C₁₇H₁₆N₂O₂S képlet alapján:

számított: C: 59,29, H: 4,68, N: 8,13 %;

mért: C: 59,41, H: 4,76, N: 8,08 %.

Az alábbi vegyületeket a 2. és 3. példa szerinti eljárásokkal állítjuk elő.

···· ····

- 16 • « · · · · • · · ··· ··· ··· • · · · · · · · ·· · ··· ·· ··

5. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5,6,7,8-tetrahidro-4H[l]benzotieno[2,3-d] [1,3]oxazin-4-on

Op.: 131-133°C.

6. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-6-(etoxi-karbonil)-5-metil-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

Op.: 100-102°C.

7. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil-L-alaninil]-amino-4-metil-5-nitro-tiofén-3-karboxilát g (2,56 mmól) etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metil-tiofén-3-karboxilát és 0,1 g réz-nitrát 20 ml ecetsav-anhidridben készült kevert oldatához 45°C hőmérsékleten 2 óra időtartam alatt 0,5 g réz-nitrátot adagolunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük, 500 g jégre öntjük és az elegyet 3x100 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 2x50 ml toluollal újra bepároljuk. A terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen etil-acetát:diklór-metán, 2:98 eluens alkalmazásával tisztítjuk. 0,61 g terméket nyerünk (55 % kitermelés).

^H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,35 (6H, m, 2xcH₃) , 2,78 (3H, s, CH₃) , 4,37 (3H, m,

CH és CH₂) , 5,08 (2H, m, CH₂Ph) , 7,14-7,38 (5H, m, • · · · · ···« ···· • ·· ··· ··· ··· • ····· · · · • · ·-··· · · ··

- 17 aromás protonok), 8,18 (1H, széles s, d, J = 6,6 Hz,

D₂0 cserélhető NH) és 11,86 (1H, sz, s, D₂O cserélhető NH) .

Elemanalízis a C₁₉H₂₁N₃O₇S képlet alapján:

számított: C: 52,41, H: 4,86, N: 9,65 %;

mért: C: 52,59, H: 4,80, N: 9,65 %.

7. példa (2. reakciólépés)

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)-amino]-4-metil-5-amino-tiofén-3-karboxilát

0,43 g (1 mmól) 5-nitro-tiofén-származék, 0,3 g vaspor és 1 M ammónium-klorid (5 ml) elegyét képezzük 20 ml 1:1 dioxán:etanol keverékben. Az elegyet ezután 1 óra 40 percen át 40°C hőmérsékleten ultrahangos keverésnek vetjük alá. Ezt követően a reakcióelegyből a vasport leszűrjük és 1:1,2 arányú dioxán:etanol eleggyel mossuk (2x20 ml) . A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük és kis térfogatra bepároljuk. Az elegyhez ml vizet adunk és a terméket 5x15 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat bepároljuk, majd a maradékot 3x20 ml toluollal újra bepároljuk. 0,40 g terméket nyerünk, amelyet tisztítás nélkül alkalmazunk a következő reakciólépésben .

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,31 (6H, m, 2xCH₃), 2,07 (3H, s, CH₃) , 4,22 (3H, m,

CH és CH₂) , 4,88 (2H, széles s, NH₂) , 5,08 (2H, m,

CH₂Ph), 7,14-7,39 (5H, m, aromás protonok), 8,08 (1H, d, J = 6,6 Hz, NH) és 11,35 (1H, s, NH) .

···· ····

- 18 • ·· · · · · « • · · · · ·

I · · ·· · · ·

7. példa (3, reakciólépés)

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)-amino]-4-metil-5-amino-tiofén-3-karboxilát és

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)-amino]-4-metil-5-acetamido-tiofén-3-karboxilát

0,53 mmól (0,230 g) 5-nitro-tiofén-származék és 100 mg vaspor 15 ml ecetsavban készült keverékét 30 percen át 30-40°C hőmérsékleten ultrahanggal keverjük. Ezután az oldathoz további

100 mg vasport adagolunk, majd az ultrahangos keverést további 1 órán át 30-40°C közötti hőmérsékleten folytatjuk. Az elegyhez 50 ml vizet adagolunk és a keveréket 30 percen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A termékeket 5x50 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat bepároljuk, majd a maradékot 3x50 ml toluollal újra bepároljuk. A termékeket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 2:8 etilacetát:hexán eluens alkalmazásával választjuk szét egymástól, így 50 mg (23 % kitermelés) 5-amino-tiofén-származékot nyerünk, majd ezt a szétválasztást 1:1 etil-acetát:hexán eluens alkalmazásával is elvégezzük és így 40 mg (17 % kitermelés) 5acetamido-tiofén-származékot nyerünk.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

I, 30 (6H, m, 2xCH₃), 2,06 (3H, s, CH₃) , 4,23 (3H, m,

CH₂ és CH) , 4,88 (2H, széles s, D₂O cserélhető NH₂) ,

5,08 (2H, m, CH₂Ph) , 7,22-7,39 (5H, m, aromás proto nők), 8,08 (1H, d, J = 6,32 Hz, D₂O cserélhető NH) ,

II, 34 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH).

• · · · · ········ · · • · · · · · • ·· ··· ··· · · · • ····· · · · •· ···· · · ··

-19HRMS-spektrum a C₁₉H₂3N₃O₅S képlet alapján:

számított: 405,1358 %;

mért: 405,1359 %.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,33 (6H, m, 2xCH₃) , 2,09 (3H, s, CH₃) , 2,24 (3H, s, CH₃CO), 4,26 (3H, m, CH₂ és CH) , 5,08 (2H, m,

CH2Ph), 7,34-7,39 (5H, m, aromás protonok), 8,12 (1H, d, J = 6,32 Hz, D₂O cserélhető NH) , 9,98 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH), 11,49 (1H, széles s,

D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₁H₂₅N₃O₆S képlet alapján:

számított: 447,1463 %;

mért: 447,1464 %.

7. példa (4. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-l-amino-etil]-5-metil-6-acetamido-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően járunk el, a kitermelés 16 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,41 (3H, d, J = 7,15 H, CH₃) , 2,18 (3H, s, CH₃) ,

2,49 (3H, s, CH₃CO), 4,53 (1H, m, CH), 5,06 (2H, m, CH₂Ph), 7,31-7,36 (5H, m, aromás protonok), 8,00 (1H, d, J = 7,69 Hz, D₂O cserélhető NH) , 10,67 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₁₉H₁₉N₃O₅S képlet alapján:

• ·

- 20 • · · ··· ·· ·· számított: 401,1046 %;

mért: 401,1048 %.

8. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(N-izobutiril-amino)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 9. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el. ¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,13 (6H, d, J = 6,87 Hz, 2xCH₃) , 1,42 (3H, d, J =

7,15 Hz, CH₃), 2,43 (3H, s, CH₃) , 2,86 (1H, q, J =

6,87 Hz, CH), 4,56 (1H, m, CH) , 5,06 (2H, m, CH₂Ph) , 7,13-7,41 (5H, m, aromás protonok), 8,0 (1H, d, J =

7,43 Hz, D₂O cserélhető NH) , 10,56 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₁H₂3N₃O₅S képlet alapján:

számított: 429,1359 %;

mért: 429,1359 %.

9. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)-amino]-4-metil-5-(N-hexanoil-amino)-tiofén-3-karboxilát

0,4 g (1 mmól) etil-2-[ (N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)-amino] -4-metil-5-amino-tiofén-3-karboxilát 0,17 ml (1,2 mmól) hexanoil-klorid és 0,13 ml (1,2 mmól) 4-metil-morfolin 8 ml tetrahidrofuránban készült elegyét 1,5 órán át 0-5°C hőmérsékleten keverjük. A kivált csapadékot leszűrjük és kétszer 20 ml tetrahidrofuránnal mossuk. Az egyesített szűrleteket és mosófo- 21 lyadékokat szárazra pároljuk és a maradékot 80 ml diklór-metánban oldjuk. Az oldatot 2x20 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk, majd magnézium-szulfáton megszárítjuk. Ezután az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 1x20 ml toluollal újra bepároljuk. A terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 5:95 etil-acetát:diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. 0,264 g terméket nyerünk, a kitermelés

%.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

0,88 (3H, t, J = 6,6 Hz, CH₃) , 1,22-1,39 (10H, m,

2xCH₃, 2xCH₂) , 1,57 (2H, m, CH₂) , 2,23 (3H, s, CH₃)~

2,36 (2H, t, J = 7,15 Hz, CH₂) , 4,20-4,32 (3H, m, CH és CH₂) , 5,08 (2H, m, CH₂Ph) , 7,30-7, 39 (5H, m, aromás protonok), 8,12 (1H, d, J = 6,33 Hz, D₂O cserélhető NH) , 9,89 (1H, s, D₂O cserélhető NH) , és 11,49 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₅H₃₃N₃O₅S képlet alapján:

számított: 503,209 %;

mért: 503,2104%.

9. példa (2. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(N-hexanoil-amino)-4H-tieno[2,3][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően járunk el, a kitermelés 50 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₅) , δ:

0,88 (3H, t, J = 6,6 Hz, CH₃) , 1,30 (4H, m, 2xCH₂) ,

- 22 • ····· · · · ·· ···· · · ··

1,41 (3Η, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 1,61 (2H, t, J =

7,7 Hz, CH₂), 2,42 (3H, s, CH₃) , 2,45 (2H, m, CH₂) ,

4,55 (1H, m, CH) , 5,05 (2H, m, CH₂Ph) , 7,13-7,43 (5H, m, aromás protonok), 8,00 (1H, d, J = 7,7 Hz,

D₂O cserélhető NH) , 10,6 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₃H₂₇N₃O₅S képlet alapján:

számított: 457,1672 %;

mért: 457,1670%.

10. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]amino-4-metil-5-~

-[N-(benzil-oxi-karbonil)-β-alaninil)]-tiofén-3-karboxilát

0,27 g (1,15 mmól) N-(benzil-oxi-karbonil)-β-alanin és 0,13 ml (1,15 mmól) 4-metil-morfolin 10 ml tetrahidrofuránban készült oldatához 0°C hőmérsékleten keverés közben hozzáadagolunk 0,15 ml (1,15 mmól) izobutil-klór-formiátot. Az elegyet 15 percen át keverjük, majd 10 perc alatt hozzácsepegtetjük 1 mmól nyerstermék etil-2-[ (N-benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metil-5-amino-tiofén-3-karboxilát 10 ml tetrahidrofuránban készült oldatához. A becsepegtetést 0°C hőmérsékleten végezzük, majd a kapott reakcióelegyet 1 órán át 0-5°C hőmérsékleten keverjük. További 1,15 mmól 6 ml tetrahidrofurános oldat kevert anhidridet adagolunk a fentiek szerint előállítva a reakcióelegyhez. A kapott elegyet 1 órán át keverjük, majd a kivált csapadékot leszűrjük és 20 ml tetrahidrofuránnal mossuk. A mosófolyadékokat és a szűrleteket egyesítjük, szárazra pároljuk és a terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 1:1 etil-acetát:

:diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. 0,370 g terméket nyerünk, a két lépés után a kitermelés 53 %.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

I, 33 (6H, m, 2xCH₃) , 2,23 (3H, s, CH₃) , 2,58 (2H, t,

J = 6,9 Hz, CH₂) , 3,39 (2H, t, J = 6,9 Hz, D₂O csere után CH₂) , 4,27 (3H, m, CH₂ és CH) , 5,05 (4H, m,

2xCH₂Ph) , 7,17-7,39 (11H, m, aromás protonok és D₂O cserélhető NH), 8,12 (1H, széles d, J = 5,78 Hz, D₂O cserélhető NH), 9,99 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH),

II, 50 (1H, szées s, D₂O cserélhető NH).

HRMS-spektrum a C₃₀H₃₄N₄O₈S képlet alapján: ~ számított: 611,2175 %;

mért: 611,2175 %.

10. példa (2. reakciólépés)

2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-(IS)-1-(amino-etil)]-5-metil-6[(N-benzil-oxi-karbonil-fl-alaninil)-amino]-4-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően járunk el, a kitermelés 22 % .

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

l, 41 (3H, d, J = 6,9 Hz, CH₃) , 2,49 (3H, s, CH₃) , 2,68 (2H, t, J = 6,9 Hz, CH₂), 3,32 (2H, m, CH₂) , 4,55 (1H, m, CH, 5,02 (2H, s, CH₂Ph) , 5,05 (2H, m, CH₂Ph), 7,33 (10H, m, aromás protonok), 7,43 (1H, m, D₂O cserélhető NH), 8,01 (1H, széles d, D₂O cserélhető NH), 10,7 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

···· · ·· ·

- 24 HRMS-spektrum a C₂₈H₂₈N₄O₇S képlet alapján:

számított: 564,168 %;

mért: 564,1678 %.

11. példa

2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-(IS)-1-(amino-etil)]-5-metil-6-[[6-N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-hexanoil]-amino]-4H-tieno[2,3d][1,3]oxazin-4-on

A 10. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el, a kitermelés 5 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,23-1,38	(2H, m,	CH₂) ,	1,41	(3H,	d,	J = 6,88 Hz, CH₃) ,
1,46-1,63	(2H, m,	CH₂) ,	2,42	(3H,	s,	CH₃) , 2,49 (2H, m,
CH₂), 3,01	(2H, m,	CH₂) ,	4,55	(1H,	m,	CH) , 5,00 (2H, s,

CH₂Ph), 5,05 (2H, m, CH₂Ph) , 7,25-7,42 (6H, m, D₂0 cserélhető NH és aromás protonok), 8,01 (1H, d, J = 7,7 Hz, D₂O cserélhető NH) , 10,6 (1H, s, D₂O cserélhető

NH) .

HRMS-spektrum a C₃₁H₃₄N₄O₇ S képlet alapján:

számított: 607,2227 %;

mért: 607,2230%.

12. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil-L-alaninil]-amino-4-metil-5-(N-benzil-oxi-karbonil-amino)-tiofén-3-karboxilát

110 mg (0,27 mmól) etil-2-[ (N-benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metil-5-amino-tiofén-3-kark>oxilát és 0,038 ml (0,35 ··· · ···· ··

- 25 mmól) 4-metil-morfolin 4 ml tetrahidrofuránban készült oldatához keverés közben 0°C hőmérsékleten hozzáadagolunk 0,1 ml (0,35 M oldat tetrahidrofuránban) benzil-klór-formiátot. A reakcióelegyet 0-5°C hőmérsékleten 1 órán át keverjük, a kivált csapadékot leszűrjük és 2x5 ml tetrahidrofuránnal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük, majd az oldószert elpárologtatjuk. A terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 11:98 etil-acetát:diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. 85 mg terméket kapunk, a kitermelés két lépés után 57 %.

¹H-MNR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,32 (6H, m, 2xCH₃) , 2,16 (3H, s, CH₃) , 4,26 (3H, in,

CH és CH₃), 5,08 (2H, s,CH₂Ph), 7,12-7,51 (10H, m, aromás protonok), 8,13 (1H, d, J = 6,32 Hz, NH), 9,57

(1H,	s, NH), 11	, 55	(1H, széles s,
Elemanalízis a	C ₂ 7 H₂ gN ₃O η S	képlet alapján:
számított:	C: 60,10,	H:	5,42, N: 7,79
mért:	C: 59, 96,	H:	5,30, N: 7,52

12. példa (2. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(trifenil-foszforanilidén-amino)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on mg (0,13 mmól) tiofén-5-benzil-karbamát 68 mg (0,26 mmól) trifenil-foszfin és 0,05 ml (0,5 mmól) szén-tetraklorid 5 ml diklór-metánban készült oldatát 1 órán át visszafolyatás mellett 60-70°C hőmérsékletre melegítjük. Ezt követően az elegyhez 30 mg (0,11 mmól) további trifenil-foszfint adagolunk és a melegítést további 1 órán át 60-70°C hőmérsékleten folytatjuk. Az oldatot ··»· ·»·

- 26 50 ml diklór-metánnal hígítjuk, 2x20 ml vizes, telített nátriumhidrogén-karbonát oldattal mossuk és magnézium-szulfáton megszárítjuk. A terméket oszlopkromaotgráfia segítségével· szilikagélen 1:9 etil-acetát:diklór-metán eluens alkalmazásával tiszítjuk. 58,8 mg terméket nyerünk, a kitermelés 73 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₅) , δ:

1,33 (3H, d, J = 6,88 Hz, CH₃) , 2,33 (3H, d, J = 1,1 Hz, CH₃) , 4,44 (1H, m, CH) , 5,02 (2H, m, CH₂Ph), 7,08-731 (5H, m, aromás protonok), 7,59-7,80 (15H, m, aromás protonok), 7,86 (1H, d, J = 7,70 Hz, NH).

Elemanalízis a C₃₅H₃₀N₃O₄PS képlet alapján:

számított: C: 67,84, H: 4,88, N: 6,78 %;

mért: C: 67,12, H: 4,71, N: 6,50 %.

12. példa (3. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(N-benzoil-amino)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

0,230 g (0,37 mmól) imino-foszforán-származék, 0,05 ml (0,45 mmól) benzoil-klorid és 0,1 ml (0,74 mmól) trienil-amin 5 ml diklór-metánban készült oldatát 3 napon át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezután 80 ml diklór-metánnal hígítjuk és az oldatot 2x10 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk és végül magnézium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 35:65 etil-acetát:diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. 45 mg terméket nyerünk, a kitermelés

%.

- 27 4 ·« · ·« · 4 .

• ···«« * « « • Λ * ' · ** · * · « ^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

l, 44 (3Η, d, J = 6,87 Hz, CH₃) , 2,51 (3H, s, CH₃) ,

4,58 (1H, m, CH), 5,07 (2H, m, CH₂Ph), 7,30-7,42 (5H, m, aromás protonok), 7,54-7,69 (3H, m, aromás proto nők), 7,98-8,04 (3H, m,D₂O cserélhető NH és aromás protonok), 10,93 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₄H₂₁N₃O₅S képlet alapján:

számított: 463,1202 %;

mért: 463,1202%.

13. példa ~ (S) -2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-[(N-izopropil-oxi-karbonil)-amino]-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

Etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)] -amino-4-metil-5-(N-izopropoxi-karbonil-amino)-tiofén-3-karboxilátot állítunk elő a 12. példa 1. reakciólépésének megfelelően, majd a 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően ciklizáljuk. A kitermelés 48 %. ¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,28	(6H, d,	J	= 6,	05 Hz,	2xCH₃) , 1,41 (3H,	d, J =
7,15	Hz, CH₃)	t	2,33	(3H, s	, CH₃) , 4,54 (1H,	m, CH),
4, 95	(1H, q,	J	= 6,	05 Hz,	CH) , 5,05 (2H, m)	, CH₂Ph),

7,14-7,63 (5H, aromás protonok), 8,00 (1H, d, J =

7,42 Hz, D₂O cserélhető NH) , 10,34 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₁H₂₃N₃O₆S képlet alapján:

számított: 445,1308 %;

o_ o .

mért:

445,1310 » * « a'» t ·~ ·»· • · a ·» * * · « · * « » »·.* r · « .

- 28 14. példa (R)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-[ (N-izobutoxi-karbonil)-amino]-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 13. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el, a kitermelés 48 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

0,94 (6H, d, J = 6,6 Hz, 2xCH₃) , 1,41 (3H, d, J = 6,88 Hz, CH₃), 1,96 (1H, m, CH) , 2,34 (3H, s, CH₃) , 3,94 (2H, d, J = 6,7 Hz, CH₂), 4,55 (1H, m, CH) , 5,05 (2H, m, CH₂Ph), 7,30-7,36 (5Η, m, aromás protonok), 8,0 (1H, d, J = 7,69 Hz, D₂O cserélhető NH), 10,32 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH).

HRMS-spektrum a C₂₂H₂₅N₃O₆S képlet alapján:

számított: 459,1464 %;

mért: 459,1474%.

15-22. példa általános eljárása

0,16 mmól (S)-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(trifenil-foszforanilidén-amino)-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on és megfelelő 5,0-5,6 ekvivalens izocianát 3 ml diklór-metánban készült vagy 1:1,5 ml diklór-metán:acetonitril elegyben készült oldatát 3-64 órán át szobahőmérsékleten keverjük .

a) Alkil-karbamidok

Az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 2x5 ml toluol alkalmazásával újra bepároljuk. A maradékot 2:1,5 ml dioxán:10 %- 29 »· · ········ • · · · · « • ·· ··· · · · · · « «···· .· · · • · ··· · ♦ ··

-os vizes citromsav eleggyel 6 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az elegyet kis térfogatra bepároljuk, majd a terméket 4x15 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az extraktumokat egyesítjük, magnézium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen etil-acetát/diklór metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. Bizonyos esetekben a reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot 2x5 ml toluollal újra bepároljuk, majd oszlopkromatográfia segítségével tiszítjuk. így tiofén-diimideket és/vagy tiofén-karbamidokat nyerünk. A diimid vegyületeket jégecettel kezeljük 1:9,2 ml jégecet:diklór-metános oldatban. A reakciót 45 perc - 130 percen át szobahőmérsékleten végezzük. Ezt követően az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 2x5 ml toluollal újra bepároljuk. Az alkil-karbamidokat oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen etil-acetát/hexán vagy etil-acetát/diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk.

b) Aril-karbamidok

Az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 2x5 ml toluollal újra bepároljuk és így nyersterméket kapunk. Bizonyos esetekben a reakcióelegyet 50 ml diklór-metánnal hígítjuk, majd 2x10 ml 10 %-os vizes citromsavval, 1x10 m vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk és magnézium-szulfáton megszárítjuk. Más esetben a reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot 2x5 ml toluollal újra bepároljuk, a maradékot 50 ml diklór-metánban oldjuk és a fentiek szerint feldolgozzuk. Az oldószert elpárologtatjuk és minden egyes maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen etil-acetát/diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítunk.

- 30 15, példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-l-amino-etil]-5-metil-6-(3-izopropil-ureido)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 42 %.

^-NMR-spektrumt (CD₃)SO], δ:

1,12 (6H, d, J = 6,6 Hz, 2xCH₃) , 1,41 (3H, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,31 (3H, s, CH₃) , 3,77 (1H, m, CH) , 4,54 (1H, m, CH), 5,05 (2H, m, CH₂Ph), 6,49 (1H, d, J =

7,42 Hz, D₂O cserélhető NH), 7,30-7,39 (5H, m, aromás protonok), 7,98 (1H, d, J = 7,7 Hz, D₂O cserélhető) és 9,04 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

FABMS-spektrum (pozitív ion): 445 (MH⁺) , 4,67 (MNa⁺) .

16. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-l-amino-etil]-5-metil-6-(3-butil-ureido)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 44 %.

¹H-NMR-spektrum [ CD₃SO] , δ:

0,9 (3H, t, J = 7,3 Hz, CH₃) , 1,27-1,36 (4H, m, 2xCH₂) ,

1,40 (3H, d, J = 6,88 Hz, 3H) , 2,31 (3H, s, CH₃) , 3,13 (2H, m, CH₂) , 4,54 (1H, m, CH) , 5,05 (2H, m, CH₂Ph),

6,56 (1H, t, J = 5,4 Hz, D₂O cserélhető NH) , 7,30-7,40 (5H, m, aromás protonok), 7,98 (1H, d, J = 7,14 Hz, D₂O cserélhető NH) és 9,14 (1H, s, D₂O cserélhető NH).

HRMS-spektrum a C₂₂H₂₆N₄O₅S képlet alapján:

számított: 459, 1702 %·;

459,1722 %.

mért:

• · · ·

- 31 17. példa (S) -2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(3-benzil-ureido)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 19 %.

^-NMlk-spektrum (CDC1₃) , δ:

1,52 (3H, d, J = 6,87 Hz, CH₃) , 2,20 (3H, széles s,

CH₃), 4,45 (2H, széles s, CH₂Ph), 4,65 (1H, m, CH) , 5,10 (2H, m, CH₂Ph) , 5,51-5,56 (2H, m, 2xNH) , 6,92-7,19 (1H, v. széles s, NH) és 7,26-7,43 (10H, m, aromás protonok).

HRMS-spektrum a C₁₅H₂₄N₄O₅S képlet alapján:

számított: 493,1546 %;

mért: 493,1544%.

18. példa (S)-2-[N-Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(3-fenil-ureido)-4H-tieno[2,3-d] [1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 40 %.

¹H-NMR-spektrum [ CD₃)SO] , δ:

1,41 (3H, d, J = 6,87 Hz, CH₃) , 2,39 (3H, s, CH₃),

4,56 (1H, m, CH) , 5,05 (2H, m, CH₂Ph) , 7,03 (1H, t,

J = 7,7 Hz, aromás protonok), 7,29-7,36 (7H, m, aromás protonok), 7,47 (2H, d, J = 7,7 Hz, aromás protonok), 8,01 (1H, d, J = 7,15 Hz, D₂O cserélhető NH) , 9,02 (1H, s, D₂O cserélhető NH) , 9,40 (1H, s, D₂O cserélhető NH).

····· ········ ··

HRMS-spektrum a C₂₄H₂₂N₄O₅S képlet alapján:

számított: 478,1311 %;

mért: 478,1315 %.

19. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-[3-(4-klór-fenil)-ureido]-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 30 %.

¹H-NMR-spektrum [ (CD₃) SO] , δ:

l, 42 (3H, d, J = 6,87 Hz, CH₃) , 2,38 (3H, s, CH₃) ,

4,56 (1H, m, CH) , 5,06 (2H, m, CH₂Ph), 7,17-7,48 (7H, m, aromás protonok), 7,51 (2H, d, J = 8,80 Hz, aromás protonok), 8,01 (1H, d, J = 7,15 Hz, NH) , 9,15 (1H,S, NH) , 9, 45 (1H, s, NH) .

HRMS-spekturm a C₂₄H₂₁N₄O₅SC1 képlet alapján:

számított: 512,0922 %;

mért: 512,0928%.

20, példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-[3-(4-metoxi-fenil)-ureido]-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 18 %.

^xH-NMR-spektrum [ CD₃) SO] , δ.

l, 42 (3H, d, J = 7,15 Hz), 2,38 (3H, s, CH₃) , 3,73 (3H, s, CH₃O), 4,55 (1H, m, CH) , 5,06 (2H, m, CH₂Ph) , 6,91 (2H, d, J = 9,07 Hz, aromás protonok), 7,17-7,41 (7H, m, aromás protonok), 8,00 (1H, d, J = 7,4 Hz, D₂O cse···· ····

- 33 - ..........

rélhető NH) , 8,84 (1H, s, D₂0 cserélhető NH) , 9,24 (1H, s, D₂0 cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₅H₂₄N₄O₆S képlet alapján:

számított: 508,1417 %;

mért: 508,1415%.

21. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-[3-(2-metoxi-karbonil-fenil)-ureido]-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 14 %.

^-NMR-spektrum [ (CD₃)SO] , δ:

1.42 (3H, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,44 (3H, s, CH₃) , 3,90 (3H, s, CH₃O), 4,55 (1H, m, CH) , 5,06 (2H, m, CH₂Ph) , 7,15 (1H, dt, aromás proton), 7,36 (5H, m, aromás protonok), 7,61 (1H, dt, aromás proton), 7,96 (1H, dd, aromás proton), 8,01 (1H, d, J = 7,7 Hz), D₂O cserélhető NH), 8,25 (1H, dd, aromás proton), 10,18 (1H, s, D₂O cseréhető NH) , 10,53 (1H, s, D₂O cserélhető NH) .

FABMS-spektrum (pozitív ion) : 537 (MH⁺) , 559 (MNa⁺) .

22, példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(3-acetil-3-benzil-ureido)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A kitermelés 42 %.

¹H-NMR-spektrum [ CD₃) SO] , δ:

1,41 (3H, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,18 (3H, s, CH₃CO) ,

2.43 (3H, s, CH₃) , 4,55 (1H, m, CH) , 4,59 (2H, s,

- 34 • · · · * · • · · ··· ··· ··· • ····· - · · · • · · ··· ·· · ·

CH₂Ph), 5,05 (2H, m, CH₂Ph), 7,28-7,43 (10H, m, aromás protonok), 7,99 (1H, d, J = 5,91 Hz, NH) , 10,68 (1H, s, NH).

HRMS-spektrum a C₂7H₂₆N₄O₆S képlet alapján:

számított: 535,1652 %;

mért: 535,1652%.

23. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-amino-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

0,35 g (0,56 mmól) (a 10. példa 1. reakciólépésének megfelelően előállított) etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metil-5-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-3-amino-butiril) ] -tiofén-3-karboxilát, 0,32 g (1,23 mmól) trifenil-foszfin és 0,3 ml (3,1 mmól) szén-tetraklorid 10 ml diklór-metánban készült oldatát 3 órán át visszafolyatás mellett 60-70°C hőmérsékletre melegítjük. Ezt követően az elegyhez további 0,16 g (0,6 mmól) trifenil-foszfint és 0,15 ml (1,5 mmól) szén-tetrakloridot adagolunk, majd a visszafolyatást további 2 órán át folytatjuk. A reakcióelegyet 53 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk és 80 ml diklór-metánnal hígítjuk. Ezután az elegyet 2x15 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, 15 ml vízzel mossuk és magnézium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot oszlopkromatográfia segítségével 6-9 % etil-acetát/diklór-metán eluens alkalmazásával tiszítjuk. 0,10 g terméket nyerünk, 50 % kitermelés.

• · · ·

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1.38 (3H, d, J = 6,88 Hz, CH₃) , 2,16 (3H, s, CH₃) , 4,51 (1H, m, CH), 5,06 (2H, m, CH₂Ph), 5,95 (2H,s , D₂O cserélhető NH₂) , 7,31-7,41 (5H, m, aromás protonok),

7.39 (1H, d, J = 7,7 Hz, D₂O cserélhető NH) . HRMS-spektrum a C₁₇H₁₇N₃O₄S képlet alapján:

számított: 359,094 %;

mért: 359,0941.

24. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metil-5-(N,N-dimetil-amino)-tiofén-3-karboxilát

0,2 g (0,5 mmól) etil-2-[ N- (benzil-oxi-karbonil) -L-alaninil]-amino-4-metil-5-amino-tiofén-3-karboxilát és 0,2 ml %-os vizes formaldehid oldat 5 ml acetonban készült kevert elegyéhez szobahőmérsékleten 50 mg (0,8 mmól) nátrium-ciano-bórhidrid 2 ml acetonitrilben készült oldatát adagoljuk. A reakcióelegyet 15 percen át keverjük, majd jégecettel semlegesítjük.

Ezt követően az elegyet szobahőmérsékleten további 45 percen át keverjük. Az elegyet ezután 50 ml dietil-éterbe öntjük és a keveréket 3x10 ml vizes 1 normál kálium-hidroxid oldattal, 1x10 ml telített sóoldattal és 1x10 ml vízzel mossuk. Az oldószert elpárologtatjuk, így 0,2 g terméket kapunk, amelyet tiszítás nélkül alkalmazunk a következő reakciólépésben.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,31 (6H, m, 2xCH₃) , 2,20 (3H, s, CH₃) , 2,61 (6H, s,

- 36 ·· · « • · ·

CH₃)₂N), 4,27 (3H, m, CH és CH₂) , 5,07 (2H, m, CH₂Ph) , 7,33-7,39 (5H, m, aromás protonok), 8,12 (1H, v. széles d, D₂O cserélhető NH) , 11,58 (1H, széles s, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₁H₂₇N₃O₅S képlet alapján:

számított: 434,1750 %;

mért: 434,1758 %.

24. példa (2, reakciólépés) (S)-2-[N-Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(N,N-dimetil-amino)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően járunk el, a kitermelés 36 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,39 (3H, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,28 (3H, ms, CH₃) ,

2,69 (6H, s, (CH₃)₂N), 4,50 (1H, m, CH) , 5,07 (2H, m, CH₂Ph), 7,10-7,39 (5H, m, aromás protonok), 8,00 (1H, széles d, D₂O cserélhető NH).

HRMS-spektrum a Ο₁₉Η₂₁Ν₃Ο₄3 képlet alapján:

számított: 387,1253 %;

mért: 387,1253%.

25, példa (S) -2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-(N,N-dipropil-amino)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 24. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el, a kio, o · termelés 50 ···· · ·· · • · • · · · · · • · « « · · · ^-NMR-spektrum (DMSO-dJ , δ:

0,86 (3H, t, J = 7,15 Hz, 2xCH₃) , 1,40 (7H, m, 2xCH₂és CH₃), 2,30 (3H,s , CH₃), 2,86 (3H, t, J = 7,15 Hz, 2xCH₂) , 4,52 (1H, m, CH) , 5,07 (2H, m, CH₂Ph), 7,11-7,41 (5H, m, aromás protonok), 8,03 (1H, d, J = 7,42 Hz, D₂O cserélhető NH) .

HRMS-spektrum a C₂₃H₂₉N₃O₄S képlet alapján:

számított: 443,1879 %;

mért: 443,1881%.

26. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-N-benzil-N-metil-amino)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 24. példának megfelelően járunk el, a kitermelés 40 %.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,39 (3H, d, J = 6,87 Hz, CH₃) , 2,31 (3H, s, CH₃) ,

2,70 (3H, s, CH₃) , 4,09 (2H, s, CH₂Ph) , 4,51 (1H, m, CH) , 5,04 (2H, m, CH₂Ph) , 7,26-7,40 (10H, m, aromás protonok), 7,98 (1H, d, J = 7,42 Hz, D₂O cserélhető

NH) .

HRMS-spektrum a C₂₅H₂₅N₃O₄S képlet alapján:

számított: 464,1644 %;

mért: 464,1661 %.

27. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metil-5-bróm-tiofén-3-karboxilát • · · · · ·««· w·»· ·· • · · · * · • ·· ··· ··· ··· • ····· · · · _{Λ Λ} ·· ···'··*··

- 38 0,61 g (1,56 mmól) etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metil-tiofén-3-karboxilát 5:1 dioxán:víz 18 ml elegyében készült oldatához 55°C hőmérsékleten hozzácsepegtetjük 0,25 g bróm 30 ml dioxánban készült oldatát. A becsepegtetést 2,5 órán át végezzük, majd az oldatot Amberlite IR-45(OH) gyantával pH = 7,0 értékre semlegesítjük. Ezután a gyantát leszűrjük és 3x50 ml dioxánnal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük, szárazra pároljuk és így 0,71 g terméket nyerünk % kitermelés.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,33 (6H, m, 2xCH₃) , 2,30 (3H, s, CH₃) , 4,31 (3H, m,

CH, CH₂) , 5,09 (2H, m, CH₂Ph) , 7,35-7,39 (5H, m, aromás protonok), 8,15 (1H, d, J = 6,32 Hz, NH), 11,62

(1H, s, NH) .
Elemanalazís a C₁₉H₂₁N₂O₅SBr	képlet alapján:
számított: C: 48,62,	H: 4,51, N: 5,97 %;
mért: C: 4 9, 2 3,	H: 4,51, N: 5,88 %.
HRMS-sektrum a C₁₉H₂₁N₂O₅SB	képlet alapján:
számított: 468,0357 %;
mért: 468,0355 % .

27. példa (2. reakciólépés) (S) -2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-bróm-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően járunk el, a kitermelés 47 %.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

• · * · · ·'.····«*· ·» » · -* « * · » 4 · »»«· »U ··· • ···«· « » 4 • - « »·· ·<** · ·

- 39 1,42 (3Η, d, J = 7,15 Hz, CH₃) , 2,38 (3H, s, CH₃) , 4,56 (1H, m, CH), 5,05 (2H, m,CH₃Ph), 7,14-7,41 (5H, m, aromás protonok), 8,04 (1H, d, J = 7,42 Hz, D₂O cserélhető NH) .

Elemanalízis a C₁₇H₁₅N₂O₄SBr képlet alapján:

számított: C: 48,24, H: 3,57, N: 6,62 %;

mért: C: 48,59, H: 3,57, N: 6,23 %.

28. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[(N-benzil-oxi-karbonil-L-alaninil)-amino]-4-metil-5-fenil-tiofén-3-karboxilát

0,150 g (0,32 mmól) etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metil-5-bróm-tiofén-3-karboxilát 70 mg (0,57 mmól) fenil-bórsav és 10 mg bisz(trifenil-foszfin)-palládium-klorid 2 ml - 0,3 ml tetrahidrofurán-2 M nátrium-karbonát oldat elegyében készült keverékét 2 óra 15 percen át elegyítjük. A reakcióelegyet 50 ml diklór-metánnal hígítjuk, majd 20 ml telített vizes nátrium-klorid oldattal mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert elpárologtatjuk. A terméket oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 2:98 etil-acetát:diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. 74,5 mg terméket nyerünk, a kitermelés 50 %.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,34 (6H, m, 2xCH₃) , 2,34 (3H, s, CH₃) , 4,43 (3H, m,

CH₂ és CH) , 5,10 (2H, m, CH₂Ph) , 7,30-7,51 (10H, m, aromás protonok), 8,17 (1H, d, J = 5,22 Hz, D₂O cserélhető NH), 11,63 (1H, s, D₂O cserélhető NH).

- 40 HRMS-spektrum a C₂5H₂₆N₂O5S képlet alapján:

számított: 466,1565 %;

mért: 466,1563 % .

28. példa (2. reakciólépés) (S)-2-[N-Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-fenil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően járunk el, a kitermelés 43 %.

^xH-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,47	(3H,	d, J =	7,06	Hz	, CH₃), 2,49 (3H, s, CH₃), 4,58
(1H,	m, CH)	, 5,07	(2H,	m,	CH₂Ph), 7,13-7,39 (5H, m, aro-
más	protonok), 7,	46-7	, 55	(5H, m, aromás protonok), 8,04
(1H,	d, J	= 6, 61	Hz,	D₂O	cserélhető NH).

HRMS-spektrum a C23H20N2O4S képlet alapján:

számított: 420,1144 %;

mért: 420,1148%.

29. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metil-5-jód-tiofén-3-karboxilát

Etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metil-tiofén-3-karboxilátot jódozunk Y. Kobayashi, I. Kumadaki és T.

Yoshida [J. Chem. Rés (S), 1977, 215] szakirodalomban leírt eljárás alkalmazásával.

Op.: 104-105°C.

¹H-NMR-spektrum (CDC1₃) , δ:

···· ····

- 41 1,35 (3Η, t, J = 7 Hz, CH₂CH₃) , 1,5 (3H, d, J = 7 Hz, CH₃CH₂), 2,35 (3H, s, CH₃) , 4,3 (2H, q, J = 7 Hz,

CH₂CH₃), 4,5 (1H, m, CH₃CH) , 5,15 (2H, s, CH₂Ph), 5,5 (1H, széles NH) és 7,3 (5H, széles, C₆H₅) , 11,8 (1H, széles NH).

Elemanalízis C₁₉H₂₁N₂O₅SI képlet alapján:

számított: C: 44,20, H: 4,10, N: 5,43 %;

mért: C: 44,35, H: 3,87, N: 5,21 %.

29. példa (2. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-6-jód-3H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil) -L-alaninil] -amino-4-metil-5-jód-tiofén-3-karboxilátot ciklizálunk.

Op.: 142-144°C.

¹H-NMR-spektrum (CDC1₃) , δ:

1,55 (3H, d, J = 7 Hz, CH₃CH) , 2,5 (3H, s, CH₃) , 4,75 (1H, m, CH₃CH) , 5,1 (2H, s, CH₂Ph), 5,45 (1H, széles NH) és 7,35 (5H, széles s, C₆H₅) .

MS-spektrum, M⁺ a C₁₇H₁₅N₂O₄SI képlet alapján:

számított: 469,9798 %;

o o .

mért:

469,9797

- 42 ···· · ···· ···« ·· • · · · · · * · · · · · ··· ··· • ··«·· · φ ··* · ·»· · · ·,

30. példa (1. reakciólépés)

Metil-2-amino-4-etil-5-metil-tiofén-3-karboxilát

A G. Gewald, E. Schinke és H. Bottcher [ Chem. Berichte, 1966, 99,94-100] közleményben leírt eljárással előállított.

30. példa (2. reakciólépés)

Metil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-etil-5-metil-tiofén-3-karboxilát

1,12 g (5 mmól) N-benzil-oxi-karbonil)-L-alanin 10 ml száraz dimetil-formamidban készült oldatához 0 - 5°C hőmérsékleten 0,5 ml (5 mmól) N-metil-morfolint, majd 0,65 ml (5 mmól) izobutil-klór-formiátot csepegtetünk. A csepegtetést keverés közben végezzük és a reakcióelegyet 15 percen át keverjük. Ezt követően az elegyhez 1,0 g (5 mmól) metil-2-amino-4-etil-5-metil-tiofén-3-karboxilátot adagolunk 0-5°C hőmérsékleten és a reakcióelegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot 50 ml etil-acetát és 3x20 ml víz elegyében megosztjuk. A szerves fázist magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 20 % detil-éter/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. A kapott terméket aceton/hexán oldószerelegyből átkristályosítjuk és így 1,1 g színtelen terméket nyerünk, a kitermelés 55 %.

30. példa (3. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-etil-6-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

- 43 ···· · ···· • · · • · ···· • · · * · · .

A 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően metil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil) -L-alaninil] -amino-4-etil-5-metil-tiofén-3-karboxilátot ciklizálunk.

Op.: 90-92°C.

^-NMR-spketrum (DMSO-d₆) , δ:

1, 08	(3H, t, J	= 7,4	Hz,	CH₃CH₃) ,	1,42 (	3H, d, J
7,2	Hz, CH₃CH) ,	2,42	(3H,	s, CH₃)	, 2,79	(2H, q, J
7,4	Hz, CH₃CH₂),	4,55	(1H	, kvint.	J = 7,	2 Hz,

CH₃CHNH) , 5,06 (2H, m, CH₂Ph), 7,25-7,40 (5H, m, C₆H₅) és 8,01 (1H, d, J = 7,4 Hz, NH).

Elemanalízis a Ο₁₉Η₂₀Ν₂Ο₄3 képlet alapján:

számított: C: 61,27, H: 5,41, N: 7,52 %;

mért: C: 61,53, H: 5,52, N: 7,45 %.

31. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-izopropil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 30. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el.

Op.: 139-141°C.

¹H-NMR-spketrum (DMSO-d₆) , δ:

l, 24 (6H, d, J = 6,9 Hz, (CH₃)₂), 1,43 (3H, d, J =

7,2 Hz, CH₃CH) , 3,41 (1H, szept., J = 6,6 Hz, (CH₃)₂CHj_, 4,57 (1H, kvint., J= 7,2 Hz, CH₃CHNH), 5,00-5,20 (2H, m, CH₂Ph), 7,25-7,50 (6H, m, C₆H₅ és 6-H), és 8,03 (1H, d, J = 7,1 Hz, NH).

• ·· · ···· • · · · · · ♦ ·· ··· ··· ··· * · · · · · · · _ • · · ··· ·· · a

- 44 Elemanalízis a C₁₉H₂₀N₂O₄S képlet alapján:

számított: C: 61,27, H: 5,41, N: 7,52 %;

mért: C: 61,19, H: 5,29, N: 6,99 %.

32. példa (S)-2-[N-Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-izobutil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 30. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el.

Op.: 137-139°C.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

0,88	(6H, d, J	= 6,6 Hz,	(CH₃) ₂CH) , 1,43 (3H, d, J =
7,2	Hz, CH₃CH) ,	1,90 (1H,	szept., J = 6,6 Hz, (CH₃)₂CH),
2,70	(2H, d, J	= 6,2 Hz,	CH₂CH), 4,56 (1H, kvint., J =
7,2	Hz, CH₃CHNH	), 5,00-5,	15 (2H, m, CH₂Ph), 7,25-7,50
(6H,	m, C₆H₅ és	6-H), és	8,02 (1H, d, J = 7,15 Hz, NH).
Elemanalízis a	C₂gH₂2N₂O₄S	képlet alapján:
számított:	C: 62,16,	H: 5,74,	N: 7,25 %;
mért:	C: 62,08,	H: 5,82,	N: 7,35 %.

33. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-klór-propil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 30. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el.

Op.: 138-140°C.

¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

0,70 (2H, m, CH₂), 0,95 (2H, m, CH₂) , 1,43 (3H, d, J =

- 45 ····· ········ • · · · · · • ·· ··· ··· ··· * · · · · · · · , • · · ··· ·· · ·

7,1 Hz, CH₃CH), 2,41 (1H, m, CH) , 4,56 (1H, kvint.,

J = 6,0 Hz, CH₃CHNH) , 5,06 (2H, d, J = 2,5 Hz, CH₂Ph), 7,12 (1H, s, 6-H) , 7,35 (5H, m, C₆H₅) és 8,03 (1H, d,

J = 7,2 Hz, NH).

Elemanalízis a C₁₉H₁₈N₂O₄S képlet alapján:

számított: C: 61,61, H: 4,90, N: 7,56 %;

mért: C: 61,46, H: 4,86, N: 7,50 %.

34. példa (1. reakciólépés)

Etil-2-amino-4-metoxi-tiofén-3-karboxilát

750 mg (4,0 mmól) etil-2-amino-4-hidroxi-tiofén-3-kaboxilát száraz diklór-metánban készült oldatát 882 mg (6,0 mmól) trimetil-oxónium-tetrafluor-boráttal elegyítjük, majd a reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 2 % metanol/diklór-metán eluens alkalmazásával tiszítjuk. Ezután a terméket aceton oldószerből kristályosítjuk, így sárga kristályos terméket nyerünk.

Op.: 103-105°C.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆), δ:

1,22	(3H,	t,	J = 7,1	Hz,	CH₃CH₂) ,	3,64	(3H, s, OCH₃) ,
4, 15	(2H,	q.	J = 6,8	Hz,	CH₂CH₃) ,	5,29	(1H, s, 5-H),
7,23	(2H,	s,	NH₂) .

mért:

Elemanalízis a C₈H₁₁NO₃S képlet alapján: számított: C: 47,75, H: 5,51, N: 6,96 %;

C: 47,43, H: 5,42, N: 6,90 %.

··· ·

- 46 34. példa (2. reakciólépés)

Etil-2-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil]-amino-4-metoxi-tiofén-3-karboxilát

Etil-2-amino-4-hidroxi-tiofén-3-karboxilátot acilezünk a 30.

példa 2. reakciólépésének megfelelően.

34, példa (3. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metoxi-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

Etil-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alaninil] -amino-4-metoxi-tiofén-3-karboxilátot ciklizálunk a 2. példa 2. reakciólépésének megfelelően.

Op.: 173-175°C.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,42 (3H, d, J = 7,2 Hz, CH₃CH), 3,85 (3H, s, OCH₃) ,

(1H,	m, CH₃CHNH)	, 5,05 (2H, m, CH₂Ph) ,	6,72 (1H, s,
6-H)	, 7,25-7,50	(5H, m, C₆H₅) és 8,04	(1H, d, J =
7,4	Hz, NH).
Elemanalízis a	. C₁₇H₁₅N₂O₅S	képlet alapján:
számított:	C: 5 6, 66,	H: 4,48, N: 7,77 %;
mért:	C: 5 6, 67,	H: 4,32, N: 7,69 %.

35. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-metil]-5-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

209 mg (1 mmól) N-(benzil-oxi-karbonil)-glicin 10 ml száraz dimetil-formamidban készült oldatához 0-5°C hőmérsékleten 148 mg

• · · ·

- 4Ί (1,1 mmól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 210 mg (1,1 mmól) l—(3— -dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adagolunk. A reakcióelegyet 15 percen át keverjük, majd az elegyhez 157 mg (1 mmól) 2-amino-4-metil-tiofén-3-karbonsavat adagolunk. A kapott reakcióelegyet szobahőmérsékletre melegítjük és 18 órán át keverjük. Az elegyhez további 210 mg (1,1 mmól) DEC reagenst adagolunk és az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml etil-acetát és 3x20 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 50 % etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. A terméket aceton/hexán oldószerelegyből átkristályosítjuk, így színtelen, tűszerű kristályos terméket nyerünk. A kitermelés 130 mg, 39 %.

Op.: 120-122°C.

^-NMR-spketrum (DMSO-d₆) , δ:

2,42	(3H,	d, J = 1,1 Hz, CH₃) ,	4,22 (2H, d,	J = 6,05
Hz,	ch₂nh;	1, 5,08 (2H, s, CH₂Ph)	, 7,25-7,50	(5H, m,
c₆h₅	és 6-	H) , 7, 97 (1H, t, J =	6,1 Hz, NH).

Elemanalízis a C₁₆H₁₄N₂O₄S képlet alapján:

számított: C: 58,17, H: 4,27, N: 8,48 %;

mért: C: 58,19, H: 4,26, N: 8,50 %.

36. példa (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-1-amino-propil]-5-metil-4H-tieno[2,3-dl[1,3]oxazin-4-on • ·· · ···· ··

- 48 Iáij uk.

A 35. példa szerinti eljárásnak megfelelően állítjuk elő a terméket.

Op.: 129-130°C.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

0,94 (3H, t, J = 7,4 Hz,CH₃CH₂), 1,70-1, 90 (2H, m, CH₂CH₃), 2,42 (3H, s, CH₃) , 4,35 (1H, m, CHCH₂), 5,04 (2H, m, CH₂Ph), 7,25-7,50 (5H, m, C₆H₅) , 7,32 (1H, s,

6-H), 8,00 (1H, d, J = 7,7 Hz, NH).

Elemanalízis a C₁₈H₁₈N₂O₄S képlet alapján:

számított: C: 60,32, H: 5,06, N: 7,82 %;

mért: C: 60,15, H: 5,13, N: 7,68 %. ~

37. példa (1. reakciólépés) (S)-2-[ N-(Benzil-oxi-karbonil)-l-amino-2-(terc-butoxi)-etil] -4 , 5-dimetil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-ont állítunk elő a 30. példa 2. reakciólépésének megfelelően.

37. példa (2. reakciólépés) (S)-2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-l-amino-2-hidroxi-etil]-4, 5-dimetil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

300 mg (0,69 mmól) (S)-2-[ N-(benzil-oxi-karbonil) -1-amino-2- (terc-butoxi-etil] -4,5-dimetil-4H-tieno[ 2, 3-d] [1,3] -oxazin-4-on 5 ml száraz diklór-metánban készült oldatához 1 ml trifluor-ecetsavat adagolunk, majd az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot 2x50 ml toluollal azetoróp desztillációban desztilA segítségével maradékot oszlopkromatográfia • ·

- 49 szilikagélen 30 % etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. így halvány színű, gumi formájú terméket nyerünk.

H-NMR-spektum (DMSO-d_ó) , δ:
2,33	(3H, s, CH₃), 2,40 (3H, s, CH₃)	, 3,75 (2H,
CH₂) ,	4,50 (1H, m,CH), 5,05 (3H, m,	CH₂Ph és OH)
-7, 50	(5H, m, C₆H₅) és 7,85 (1H, d,	J = 7,7 Hz,

38. példa (S)-2-[N-(terc-Butoxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

A 35. példa szerinti eljárásnak megfelelően járunk el.

Op.: 109-lll°C.

^-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , 5:

1,38 (12H, m, (CH₃)₃C + CH₃CH) , 2,42 (3H, s, CH₃) , 4,46 (1H, m, CHCH₃), 7,30 (1H, s, 6-H) , és 7,54 (1H, d, J =

7,4 Hz, NH).

Elemanalízis a C₁₄H₁₈N₂O₄S képlet alapján:

számított: C: 54,18, H: 5,85, N: 9,03 %;

mért: C: 53,81, H: 5,74, N: 8,90 %.

39. példa (S)-2-(1-Amino-etil)-5-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on-trifluor-ecetsavas só

200 mg (0,61 mmól) (S)-2-[N-(terc-butoxi-karbonil)-l-amino-etil] -5-metil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on 10 ml száraz diklór-metánban készült oldatához 0,075 ml (0,73 mmól) anizolt és 1,0 ml trifluor-ecetsavat adagolunk. A reakcióelegyet 1 órán

- 50 ··« * · · ··« • · ··· • · · · át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradékot 2x50 ml toluollal azeotróp desztillációban desztilláljuk. A maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 3 % metanol/diklór-metán eluens alkalmazásával tisztítjuk. Halvány színű, gumiszerű anyagot nyerünk. ¹H-NMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,54 (3H, d, J = 6,9 Hz, CH₃CH), 2,45 (3H, d, J = 1,4 Hz, CH₃) , 4,52 (1H, m, CHCH₃) , 7,42 (1H, d, J = 1,1 Hz, 6H) és 8,60-8,80 (3H, v. széles, NH⁺3) .

FAB-MS-sepektrum, (+ve ion) : 211 (MH⁺) .

40, példa (S)-2-[N-(4-metoxi-fenoxi-karbonil)-1-amino-etil]-5-metil-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-on

100 mg (0,37 mmól) (S)-2-(1-amino-etil)-5-metil-4H-tieno[ 2,3] [ 1, 3] oxazin-4-on száraz diklór-metánban készült oldatához 0,065 ml (0,37 mmól) N,N-diizopropil-etil-amint és 0,56 ml (0,37 mmól) 4-metoxi-fenil-klór-formiátot adagolunk. A reakcióelegyet órán át szobahőmérsékleten keverjük és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradékot oszlopkromatográfia segítségével szilikagélen 20 % etil-acetát/hexán eluens alkalmazásával tisztítjuk. Ezután a terméket aceton/hexán oldószerelegyből átkristályosítjuk és így színtelen kristályos anyagot kapunk.

Op.: 173-175°C.

^-NIMR-spektrum (DMSO-d₆) , δ:

1,49 (3H, d, J = 6,9 Hz, CH₃CH) , 2,43 (3H, d, J = 0,8 Hz, CH₃) , 3,73 (3H, s, OCH₃) , 4,61 (1H, m, CHCH₃), 6,90

- 51 (2Η, d, J = 9 Hz, 2xArH), 7,02 (2H, d, J = 9,1 Hz, 2xArH), 7,33 (1H, d, J = 1,1 Hz, 6-H) és 8,42 (1H, d, J = 7,2 Hz, NH) .

Elemanalízis a C₁₇H₁₆N₂O₅S képlet alapján:

számított: C: 56,66, H: 4,48, N: 7,77 %;

mért: C: 56,75, H: 4,25, N: 7,45 %.

A találmány szerinti alábbi vegyületet ugyancsak előállítottuk:

olyan vegyületet, ahol R₃ jelentése metilcsoport és a 6-szubstituens R₂ jelentése Cbz-Ala-ΝΗ-, valamint a 2-szub-sztituens jelentése CHMeNHCbz.

Peptidbontó tesztvizsgálat proteázok esetében

A találmány szerinti vegyületeket az alábbi tesztvizsgálatokban vizsgáltuk:

0,1-1 μπιόΐ enzim oldathoz, amelyet pufferben hígítottunk (50 mmól nátrium-foszfát, 150 mmól nátrium-klorid, 0,01 mmól EDTA, 0,01 PEG 3400; pH = 8,0) inhibitor oldatot adagolunk úgy, hogy a végső inhibitor koncentráció az összes térfogat 25 μΐ-re vontkoztatva 0,01-300 μιτιόΐ legyen. 15 percig az elegyet előinkubáltuk,majd 15 μΐ 14-mer peptidszubsztrátot, Ac-HTYLQASEKFKMWG adagoltunk úgy, hogy a szubsztrát végső koncentrációja 250 μιπόΐ legyen. A mintát 27 °C hőmérsékleten 1 órán át inkubáltuk és a reakciót 40 μΐ 5 %-os trifluor-ecetsav vizes oldatának adagolásával indítottuk. A mintát HPLC (nagynyomású-folyadékkromatográfia) segítségével analizáltuk. így a szubsztrát-peptid, vala»· ··« · ·«

- 52 mint az N-terminális és a C-terminális hasított fragmensek menynyiségét meghatároztuk. A hasítás %-át számítottuk és a nem inhibiált kontroll mintából nyert adagokkal összehasonlítottuk. Ennek százalékában fejeztük ki.

A tesztvizsgálatban alkalmazott enzim HSV-2 proteolitikusan aktív területe a HSV-2 UL26 homológ proteinnek (az 1-247 aminsav maradékok) úgy, hogy az amino-terminális MGHHHHHHSSA részletet is tartalmazza. A HSV-2 proteáz szekvenciát a WO 95/06055 számú (SmithKline Beecham Corp.) szabadalmi bejelentésben leírták.

A CMV tesztvizsgálatban alkalmazott enzim a CMV UL80 protein proteolitikus aktív területe (1-256 aminosav maradékok) t- egy aminoterminális csoport, amely a MGHHHHHHHHSSGHIDDDDK. A polipeitidet az A143 és az A144 helyzetek között hasítottuk (természetes UL 80 számozás) és így egy aktív heterodimert nyertünk .

A VZV tesztvizsgálatban alkalmazott enzim a VZV gén 33 protein proteolitikusan aktív területe (1-237 aminosav maradékok).

Az eredmények az alábbiak voltak:

A példák szerinti vegyületek egy vagy több, fenti teszvizsgálatban 10 pmól vagy 1 pmól koncentrációban aktivitást mutattak. Az 1-4., 7-10., 12-18., 21-22., 24-29. és a 35.

példa szerinti vegyületek nagyobb, mint 50 % inhibiálást mutattak egy vagy több proteáz esetében 1 μΐ koncentráció alkalmazásával és a 10., 17., 18., 21., 27., 2., 3., 15., 21., 28; valamint a 8., 15., 21., 28. példa szerinti vegyületek előnyös aktivitást mutattak a HSV-2, illetve a CMV, valamint sorrendben a VZV vírusokkal szemben.

*»· ·

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Az (I) 4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on származék herpes-vírus proteáz inhibitorok, amelyek 2-helyzetben XfYJNH-CHR^ szubsztituenst tartalmaznak, ahol Y jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport, Y jelentése kívánt esetben jelenlévő aminosav és R_t jelentése hidrogénatom vagy aminosav oldallánc.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol a 4H-tieno[ 2, 3-d] -[ 1, 3] oxazin-4-on gyűrűrendszer számozása az (I) képlet szerinti, és amely kívánt esetben az 5- és 6-helyzetben r7, illetve R₂ csoporttal szubsztituált, továbbá 2-szubsztituenst tartalmaz .
3. A 2. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben R₃ és R₂ jelentése lehet halogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkoxicsoport, 1-6 szénatomos alkil-tio-csoport, aminocsoport, amely kívánt esetben egy vagy két, 1-6 szénatomos alkilcsoport vagy kívánt esetben szubsztituált benzilcsoport szubsztituenseket tartalmazhat, hidroxi-alkil-csoport, alkil-karbonil-csoport, alkoxi-karbonil-csoport, kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport vagy R₄ZCONH általános képletű, ahol Z jelentése egy kötés, oxigénatom, NH csoport vagy NCOCH₃ és R₄CO jelentése acilcsoport, ahol R₄ jelentése arilcsopot, alkilcsoport vagy aralkilcsoport, vagy R₃ és R₃jelentése együttesen C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₇ vagy C₈ szénatomos polimetilén-csoport.

·*·· »»··

- 54
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, ahol az általános képletben X jelentése arilcsoport, alkanoilcsoport, ári1-alkoxi-karbonil-csoport, aril-alkil-amino-karbonil-csoport, aroilcsoport vagy aril-szulfonil-csoport.
5. A 4. igénypont szerinti vegyület, ahol az általános képletben X jelentése benziloxi-karbonil-csoport, terc-butoxi-karbonil-csoport és kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, ahol az általános képletben Y jelentése - amennyiben ilyen csoport a molekulában található - alanin, aszparagin, valin vagy hasonló aminosav-csoport.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, ahol az -NH-CHRj^-CO-amino-acil-csoportok, amelyek az NH-CHR^csoportban találhatók, az (I) általános képletű vegyületben lehetnek alanin (R_x = CH₃) , aszparagin, metionin, fenil-alanin, szerin (R₃ = CH₂OH) , valin és α-amino-butánsav (R₃ = CH₂CH₃) .
8. Az alábbi vegyületek:

(S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5,6-dimetil-4H-tieno[ 2,3—d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -6,7-dihidro-4H-5H- 55 ··»· ·*· · ·· • · · · • ··· ·· ··· ·· * · · • ··« » · _φ· ciklopenta[ 4,5] tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5,6,7,8-tetrahidro—4H[ 1] benzotieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -6-etoxi-karbonil-5-metil-tieno[ 2,3-d][ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-acetamido-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(N-izobutíl-amino) -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(N-hexanoil-amino) -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, ~

2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-(IS)-1-(amino-etil) ] -5-metil-6-[ (N-benzil-oxi-karboníl-b-alaniníl)-amino] -4H-tieno[ 2,3-d][ 1,3] oxazin-4-on,

2-[ N-(benzil-oxi-karbonil)-(IS)-1-(amino-etil)] -5-metil-6-[ [ 6-N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-hexanoil] -amino] -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-trifenil-foszforanilidén-amino) -4H-tieno[ 2,3-d][ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(N-benzoil-amino) -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-[ (N-izopropoxi-karbonil)-amino] -4H-tieno[ 2,3-d][ 1,3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-[ N-izobutoxi-karbonil) -amino] -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(3-izopropil-ureido) -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(3-butil···

- 56 -ureido) -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(3-benzil-ureido) -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(3-fenil-ureido) -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S) -2-[ N-benzil-oxi-karbonil) -1-amino-etil] -5-metil-6-[ 3- (4-klór-fenil) -ureido] -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-[ 3-(4-metoxi-fenil) -ureido] -4H-tieno[ 2,3-d][ 1,3] oxazin-4-on, (S) —2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-[ 3-(2-metoxi-karbonil-fenil) -ureido] -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(3-acetil-3-benzil-ureido) -4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-amino-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(N,N-dimetil-amino) -4H-tieno[ 2, 3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(N,N-dipropil-amino) -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-(N-benzil-N-metil-amino) -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-bróm-4H-tieno[ 2, 3-dj [ 1,3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-fenil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-6-jód-4H-tieno[ 2, 3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-etil-6-metil·· /· ·* * · **« ·*’ «·· ··« . · ,,*

- 57 -4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-izopropil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-izobutil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)—2—[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-ciklopropil-4H-tieno[ 2,3-d] [ 1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metoxi-4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-metil] -5-metil-4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-1-amino-propil] -5-metil-4H-tieno[ 2, 3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-benzil-oxi-karbonil)-l-amino-2-hidroxi-etil] -4,5-dimetil-4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N- (terc-butoxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S) -2- (1-amino-etil) -5-metil-4H-tieno[ 2,3-d] [1,3] oxazin-4-on, (S)-2-[ N-(4-metoxi-fenoxi-karbonil)-1-amino-etil] -5-metil-4Htieno[ 2, 3-d] [ 1, 3] oxazin-4-on vagy gyógyszerészetileg elfogadható só formáik.
9. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet és gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.
10. Eljárás az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, mint aktív terápiás vegyület alkalmazására.

- 58
11. Eljárás az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vegyület alkalmazására vírusos betegségek kezelésében.
12. Eljárás az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek alkalmazására gyógyszerkészítmény előállítására, amelyet herpes-vírusok által okozott vírusos betegségek kezelésében alkalmazunk .

A meghatalmazott

KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY ί Rcakcióvcizlat; 1 példa szerinti szintézis

HCu S

SH + MeO_aC CN-** | |