HUT74687A - Pyrrole and thiazolidine derivatives of prolyl endopeptidase inhibitor activity and pharmaceutical compositions containing the same - Google Patents
Pyrrole and thiazolidine derivatives of prolyl endopeptidase inhibitor activity and pharmaceutical compositions containing the same Download PDFInfo
- Publication number
- HUT74687A HUT74687A HU9601472A HU9601472A HUT74687A HU T74687 A HUT74687 A HU T74687A HU 9601472 A HU9601472 A HU 9601472A HU 9601472 A HU9601472 A HU 9601472A HU T74687 A HUT74687 A HU T74687A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- formula
- compounds
- mmol
- pharmaceutical composition
- compound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
- C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
- C07D277/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D277/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
A találmány tárgya gyógyszerkészítmény, amely alkalmas memória javítására. A találmány szerinti eljárás során az (1) általános képletü vegyületet vagy gyógyszerkészítménye hatásos mennyiségét adagolják, ahol az általános képletben valamennyi sztereoizomert beleértenek, és
A jelentése benzilcsoport vagy terc-butil-védöcsoport;
X! jelentése kénatom vagy -CH2-csoport; és
X2 jelentése kénatom vagy -CH2-csoport;
B jelentése CF3-csoport vagy -CF2CF3-csoport, azzal a feltétellel, hogy Xt vagy X2 legalább egyikének jelentése kénatom, továbbá, hogy a készítmény gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.
( A-találmány szerinti gyógyszerkészítmértyf gyógyszerószotbcn-atkal—roazzá^
• · • · · ·
62.398/SM
S.B.G.&K.
Nemzetközi Szabadalmi Iroda H-1062 Budapest. A drás^j ,J3
Telefon: 34-24-950, Fax: 34-2+323
KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY
K f x—, φΛί/Q'XiA —
Prolil-endopeptidáz inhibitor^
Yc Cctv A—k*b- <-> rA prolinhoz kötődő peptidkötések, amely peptidkötés prolint tartalmaz, viszonylag ellenállók a széles spektrumú peptidázokkal (Mentlein, 1988) szemben, ami azt jelzi, hogy ezek a peptidkötést hidrolizáló peptidázok, fontosak lehetnek a prolin-tartalmú peptidek metabolizmusában [Atack és munkatársai,
Eur. J. of Pharm., 205, 157-163 (1991)]. A prolil-endopeptidáz valószínűleg ilyen szerepet játszik a biológiailag aktív prolin tartalmú peptidek metabolizmusában. Az enzim számos biológiailag aktív pepiidet hidrolizál, amely prolint tartalmaz. Ilyen peptidek lehetnek az oxitocin, a tirotropin kibocsátó hormon, a lutenizáló hormon, az angiotenzin II, a bradykinin, a P szubsztancia, a neurotenzin és a vasopresszin.
A prolil-endopeptidáz mint karboxi-terminális prolin hasító enzim az aktív peptideket lebontja. Részletesebben, a prolil-endopeptidáz a peptid kötéseket a karboxi-helyzetben a prolin-maradékban hidrolizálja. A prolil-endopeptidázról feltételezik, hogy mechanikusan, mint szerin proteáz hat és így peptid kötéseket hasonló mechanizmus szerint bontja, mint a szerin proteázok, mint például az α-kimotripszin, a tripszin és a subtrilisins.
Ugyan az enzim általában mint peptid-kötés tartalmú prolin-származékok hatóanyaga szerepel, ez az enzim forma mégis különféle szövet forrásokból származhat, amelyekben az enzim különféle eltéréseket mutat a szubsztrát affinitás és specifitás szempontjából. A prolil-endopeptidázt számos növényből izolálták és tisztították (sárgarépa, gomba), továbbá mikroba alapú izolálást • · · · • · ·
- 2 (Fiavobacterium menigosepticum) és állati szövetekből történő izolálást is végeztek. Állatokban az enzimről kimutatták, hogy általában előfordul a test teljest területén, azonban a prolil-endopeptidáz általában legnagyobb koncentrációban a CNS (központi idegrendszer) szöveteiben található (Wilk, 1983). A tesztvizsgálati célra szubsztrátok esetében használható szokásos enzim forrás állati források esetében a marha, a patkány és az egér agyszövet.
A kis molekulatömegű prolil-endopeptidáz inhibitorokat tanulmányozták. Ezek az inhibitor vegyületek általában prolin kémiai származékai vagy kis méretű peptidek, amelyek terminális prolin tartalmúak. A benziloxi-karbonil-propil-prolinal vegyületekröl kimutatták, hogy specifikus átmeneti állapotúak és inhibiálják az enzimet [Wilk, S. és Orloeski, M., J. Neurochem., 41, 69 (1983), Firedman, és munkatársai, Neurochem., 42, 237 (1984)]. Az N-terminális szubsztitúció az L-prolin vagy az L-prolil-pirrolidin esetében [Atack, és munkatársai, Eur. J. of Pharm., 205, 157-163 (1991), JP 03 56,460, EP 384,341], továbbá az N-benziloxi-karobnil-(Z)-dipeptid, amely prolional tartalmú a karboxi terminális helyzetben, ugyancsak előállított, mint prolil-endopeptidáz inhibitor [Nishikata, és munkatársai, Chem. Pharm. Bull. 34(7), 2931-2936 (1986), Baker, A. és munkatársai, Bioorganic & Medical Chem. Letts., 1(11), 585-590 (1991)]. Az alapszerkezetben a tioprolin-, a tiazolidin- és az oxo-pirrolidinszubsztúcióról leírták, hogy ez a prolii-endopeptidázt inhibiálja [Tsuru, és munkatársai, J. Biochem., 94, 1179 (1988), Tsuru és munkatársai, J. Biochem., 104, 580-586 (1988), Saito és munkatársai, J. Enz. Inhib. 5, 51-75 (1991), Uchida, I. és munkatársai, PCT Int. Appl. WO 90 12,005, JP 03 56,461, JP 03 56,462], Hasonlóan, különféle módosításokat hajtottak végre a karboxi-terminális prolinon, beleértve a különféle fluorozott-keton származékokat (Henning, EP 4,912,127). A fluorozott-keton származékok általános szintézisét
62.398/SM • · · • · · · is leírták [Angelastro, M.R., és munkatársai, Tetrahedron Letters 33(23), 3265-3268 (1992)]. Egyéb vegyületeket is leírtak, mint például klór-metil-ketonszármazékok az acil-prolin vagy acil-peptid-prolin vegyületekböl kiindulva (Z-Gly-Pro-CH2CI) és ezekről kimutatták, hogy inhibiálják az enzimet úgy, hogy az enzim aktív helyzetét alkilezik ([Yoshimoto, T. és munkatársai, Biochemistry 16, 2942 (1977)].
A találmány tárgya az (1) általános képletü peptid-származékok, valamint ezek valamennyi sztereoizomerje, ahol az általános képletben A jelentése benzilcsoport vagy terc-butil-csoport;
Xt jelentése kénatom vagy -CH2-csoport; és
X2 jelentése kénatom vagy -CH2-csoport;
B jelentése CF3-csoport vagy -CF2CF3-csoport.
Az (I) általános képletü vegyületek előnyös származékai a Markush csoportosítás tagjai, ebből eredően további csoportosításokat is meghatározhatunk, hogy olyan alcsoportokat hozzunk létre, amelyek megfelelő szubsztituenseket tartalmaznak. Előnyös (I) általános képletü vegyületek lehetnek olyan vegyületek, amelyek az alábbi példákban részletesen bemutatott jellemzőkkel rendelkeznek.
Az (1) általános képletü vegyületek fontos inhibitorai a prolii endopeptidáz enzimnek. Az új inhibitorok diprolil-peptid származékok, amelyek karboxi-terminális pentafluor-etil-szubsztituenseket tartalmaznak. A diprolil-peptid származékokban a prolin-csoport kívánt esetben tioprolin-származékokkal szubsztituált lehet, mint például amennyiben X1 vagy X2 jelentése kénatom. A találmány szerinti peptid-analógok alkalmasan jelentős inhibáló hatást fejtenek ki a prolil-endopeptidáz enzimre és ebből eredően alkalmasak tudományos vizsgálatokban illetve terápiás kezekésekben történő alkalmazásra, mint am62.398/SM « · · ·
- 4 nézia és memória hiány kezelésében, továbbá memória funkció növelésében történő felhasználásra. Ezen túlmenően a tiazolidin-funkciós csoport jelenléte azzal szolgálhat, hogy ez javított potenciát jelent, továbbá kiterjesztett hatásossági időtartamot okoz az ilyen vegyületek alkalmazása során.
A találmány tárgya továbbá a proteolitikus aktivitás inhibiálása a prolil-endopeptidáz esetében, amely memória visszaállítás vagy javítás kezelésében terápiás kezelést jelent. A proteolitikus aktivitás inhibiálása alkalmas arra, hogy az enzim előnytelen magas koncentrációját megakadályozzuk vagy szabályozzuk. A prolil-endopeptidázok inhibitorairól kimutatták, hogy ezek amnézia ellenes hatással rendelkeznek patkányokban, illetve egerekben, illetve számos ilyen modell csoportban [Yoshiomoto és munkatársai, J. Pharmacobio-Dyn., 10, 730 (1983) és Saito és munkatársai, J. Enz. Inhib. 3, 163 (1990), Uchida, I. és munkatársai, PCT Int. Appl. WO 90 12,005], Nem kívánunk semmilyen elméletet felállítani, azonban valószínű, hogy a javított memória funkcióval kapcsolatosan a prolil-endopeptidáz inhibiálás történik, amiatt, hogy az enzim nem képes a vazopresszint lebontani. Továbbá, a prolil-endopeptidáz inhibiálás esetében kimutatták, hogy ez a scopolamin-indukált memória hiányt egerekben megfordítja [Atack és munkatársai, Eur. J. of Pharm. 205, 157-163 (1991)].
A találmány szerinti dipeptidek előállítási eljárását az I. reakcióvázlatban mutatjuk be és ezeket a későbbiekben ismertetjük.
Prolil-endopeptidáz inhibitorok előállítása
Az I. reakcióvázlat, A-G részletek bemutatják az (1) általános képletü vegyület előállítási eljárását.
Az (1) általános képletü vegyületek előállításában alapvető közbenső termékek olyan vegyületek, amelyek karboxi-terminális pentafluor-etil-ketonokat tartalmaznak [(IVa) és (IVb) általános képletü vegyületek] vagy metoxi62.398/SM • ·
- 5 -metil-amino-amidok [(Ha) és (llb) általános képletü vegyületek] és ezeket általában a szakirodalomban leírt eljárásokkal állíthatjuk elő [Angelastro, M., Tetrahedron Letters, 33(23), 3265-3268 (1992) és Nahm, S. és Weinreb, S.M., Tetrahedron Letters, 22, 3815 (1981)].
Az I. reakcióvázlat, A reakciólépésben bemutatjuk a (Ha) és (llb) általános képletü metoxi-metil-amino-amid vegyületek általános előállítási eljárását. A (Ha) és (llb) általános képletü vegyületeket terc-butoxi-karbonil-védett prolinból (2-pirrolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter) és tioprolinból (tiazolidin-3,4-dikarbonsav-1,1-dimetil-etil-észter), illetve ilyen származékokból állíthatjuk elő Ν,Ο-dimetil-hidroxilamin hidrokloriddal végzett reakció segítségével. A reakciót általában a szakirodalomban leírt módon hajthatjuk végre [Nahm, S. és Weinreb, S.M., Tetrahedron Letters, 22, 3815 (1981)]. Lényegében az N,O-dimetil-hidroxilamin hidroklorid vegyületet úgy kapcsolhatjuk, hogy alkalmas kapcsoló reagenst alkalmazunk, amely lehet például vízoldható karbodiimid vagy hasonló vegyület és a terméket ezután szokásos eljárásokkal a szakirodalomban ismert izolálási módszerekkel tisztíthatjuk.
A B reakciólépésben bemutatjuk, hogy a terc-butoxi-karbonil-védőcsoport a tioprolin-vegyületekből (Ha) alkalmas savas kezeléssel eltávolítható, amely savas kezelés lehet például sósavas kezelés etilacetátban, és így a megfelelő N-metoxi-N-metil-4-tiazolidin-karboxamid mono-hidroklorid (III) képletü vegyület állítható elő. A végterméket ezután alkalmasan tisztíthatjuk szokásos izolálási eljárásokkal, amelyek a szakirodalomban ismertek.
A C reakciólépésben a (II) általános képletü vegyületeket a (IVa) és a (IVb) általános képletü pentafluor-etil-keton származékokká alakítjuk. A pentafluor-etil-lítiummal végrehajtott reakciót általában in situ hajtjuk végre, amely reagenst pentafluor-etil-jodidból és metil-lítium.lítium-bromid komplexből
62.398/SM állítunk elő olyan eljárás szerint, hogy ez alkalmas a (Ha) és (llb) általános képletü hidroxamát-vegyületek átalakítására a (IVa) vagy (IVb) általános képletű vegyületekké. A vegyületek felsorolása sorrendben értendő. A reakciót általában a szakirodalomban leírt eljárásoknak megfelelően hajtjuk végre [Angelastro, M. R., és munkatársai, Tetrahedron Letters, 33, 3265 (1992)]. A végterméket alkalmasan tisztíthatjuk szokásos izolációs eljárásokkal, amelyek a szakirodalomban leírtak.
A D reakciólépésben bemutatjuk, hogy a (IVa) vagy (IVb) általános képletei vegyületekben található terc-butoxi-karbonil-védőcsoport savra érzékeny és megfelelő savas kezeléssel eltávolítható, amely savas kezelés lehet sósavval végzett kezelés etílacetát oldószerben. A savval végzett kezelés a megfelelő (Va) vagy (Vb) képletü vegyületeket szolgáltatja, amelyek a [4-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-tiazolidin-mono-hidroklorid vagy a 2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1 -oxi-propil)-pirrolidin-hidroklorid. A végterméket alkalmasan tisztíthatjuk szokásos szakirodalomban leírt izolálási eljárások segítségével.
Az E reakciólépés általánosan bemutatja két alkalmasan védett-aminosav kondenzációs reakcióját, amelyben vagy a 2-{[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-1 -pirrolidinil]-karbonil}-1 -pirrolidin-karbonsav-fenil-metil-észter (Vllb) vagy a 4-{[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1 -oxo-propil)-1 -pirrolidinil]-karboníl}-3-tiazolidin-karbonsav-fenil-metil-észter (VIla) vagy hasonló vegyületek képződnek. A két védett-aminosav kondenzációs reakciója során amid-kötés keletkezik a két molekula között és ez a reakció szakirodalomban jól ismert. Számos kondenzációs eljárást leírtak, mint például a karboxil-terminális savcsoport konverzióját a (IV) általános képletü vegyületben oxalil-klorid segítségével, amelynek során alkalmas oldószerben, mint például dimetil-formamidban a megfelelő származékot állítjuk elő. A savkloridot ezt követően alfa-amino62.398/SM • · · ···· · ·«·· • · · · · · «··» 4 · · « « « a , » _ 7 _ csoporttal kondenzálhatjuk, amely csoport az (Vb) általános képletü vegyület része. A végterméket szokásos szakirodalomban ismert eljárásokkal tisztíthatjuk.
Az F reakciólépésben bemutatjuk a ditiazolidin-származékok, a (Vili) általános képletü vegyületek, mint például a 4-{[4-[(metoxi-metíl-amino)-karbonil]-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter származék előállítási eljárását. Az (la) általános képletü vegyület (III) általános képletü vegyülettel történő kondenzációs reakcióját kapcsoló reagenssel hatjuk végre, és így a két védett-aminosav között jól ismert eljárással amid-kötést hozunk létre. Számos kondenzációs eljárás ismert a szakirodalomban, amely lehet például különféle karbodiimid vegyületekkel, mint például vízben oldható karbodiimid segítségével végrehajtott kondenzációs reakció. A kondenzációs reakciót követően a végterméket a szakirodalomban jól ismert eljárások segítségével tisztíthatjuk.
A C reakciólépésben a terminális metoxi-metil-amino-karbonil-csoportot tartalmazó dipeptideket szubsztitúciós reakcióban reagáltatjuk, amint ezt a G reakciólépésben bemutatjuk. A (Vili) általános képletü vegyületeket perfluor-etil-lítium segítségével, amelyet in situ (C reakciólépés) állítunk elő, szubsztitúciós reakcióban reagáltathatjuk, és így a megfelelő 4-{[4-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter terméket állíthatjuk elő. A végterméket a szubsztitúciós reakciót követően a szakirodalomban ismert izolációs eljárásokkal tisztíthatjuk.
A természetesen előforduló prolin-származékok királis szénatomot tartalmaznak. Megjegyzendő, hogy a prolin és a tioprolin-gyürün belül a nitrogénatomhoz számított alfa-helyzetű szénatomok királis szénatomok. Ebből eredően a prolin és a tioprolin származékok egy vagy több sztereoizomer for62.398/SM
- 8 mában létezhetnek. Hacsak másképp nem jelezzük, az optikailag aktív aminosavak, amelyeket a találmány szerinti eljárásban leírunk, L-konfigurációjúak. Ennek ellenére a kiralitás lehet akár D- akár L-konfiguráció.
A találmány tárgykörébe beleértjük, hogy a keton-funkciós csoport lehet keton vagy hidratált-keton vagy a két állapot keveréke. Például a pentafluor-etil-keton-csoport lehet a 2,2,3,3,3-pentafluor-1,1-dihidroxi-propil- vagy
2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil-szubsztituens.
Az egyes aminosavak esetében alkalmazott cc-aminocsoport védőcsoportok a polipeptid-szekvenciába történő beépítés során olyan védőcsoportok lehetnek, amelyek a szakirodalomban jól ismertek. Ilyen a-aminocsoport védőcsoportok lehetnek az (1) acil-típusú védőcsoportok, mint például formilcsoport, trifluor-acetil-csoport, ftalil-csoport, toluol-szulfonil-csoport (tozilcsoport), benzilszulfonil-csoport, nitro-fenil-szulfenil-csoport, tritil-szulfenil-csoport, o-nitro-fenoxi-acetil-csoport és a-klór-butiril-csoport; (2) aromás karbamid-típusú védőcsoportok, mint például benziioxi-karbonil-csoport és szubsztituált benziloxi-karbonil-csoport, mint például p-klór-benziloxi-karbonil-csoport, p-nitro-benzil-oxi-karbonil-csoport, p-bróm-benziloxi-karbonil-csoport, p-metoxi-benziloxi-karbonil-csoport, 1 -(p-bifenilil)-l-metil-etoxi-karbonil-csoport, cc-dimetil-3,5-dimetoxi-benziloxi-karbonil-csoport és benzhidriloxi-karbonil-csoport; (3) alifás karbamid típusú védőcsoportok, mint például terc-butoxi-karbonil-csoport (Boc), diizopropil-metoxi-karbonil-csoport, izopropil-oxi-karbonil-csoport, etoxi-karbonil-csoport és alliloxi-karbonil-csoport; (4) cikloalkil típusú karbonil-védőcsoportok, mint például ciklopentiloxi-karbonil-csoport, adamantiloxi-karbonil-csoport és ciklohexiloxi-karbonil-csoport; (5) tiokarbamid típusú védőcsoportok, mint például feniltio-karbonil-csoport; (6) alkilcsoport típusú védőcsoportok,
62.398/SM • · ·
- 9 mint például trifenil-metil-csoport (tritilcsoport) és benzilcsoport; és (7) tialkil-szilil-csoportok, mint például trimetil-szilil-csoport. Előnyösen alkalmazható a-amino védőcsoportok a terc-butoxi-karbonil-csoport (Boc) vagy a benziloxi-karbonil-csoport.
Az (1) általános képletü vegyületek terápiás hatóanyagként való alkalmazását, illetve ezek adagolási útját az alábbi ismertetésben részletesen bemutatjuk.
Terápiás alkalmazás
A találmány szerinti vegyületk memória javító hatású alkalmazása azt jelenti, hogy ez a mentális kapacitást javítja, alkalmassá teszi a beteget a kognitív események emlékezésére, továbbá motor-aktivitások megtanulását teszi lehetővé. A találmány szerinti vegyületek ebből eredően alkalmasak aphasia, apraxia, agnosia vagy bármely típusú amnéziás betegségben szenvedő, beleértve a visszamenő és poszt-traumatikus amnéziát, jóindulatú feledékenység, illetve Korsakoff szindróma [Merek Manual of Diagnosis and Therapy, 15th Addition (1987)] kezelésében történő alkalmazásra. Mivel a találmány szerinti vegyületek potenciálisan alkalmasak a memória javításának, illetve a memória funkciók előidézésének kiváltásában, ezek alkalmasak a memória hiány megakadályozására, illetve lassítására.
Terápiás adagolás
A találmány szerinti peptid-származékok alkalmas dózisa, amennyiben ilyen kezelést igénylő betegben alkalmazzuk, 0,2 mg/kg - 250 mg/kg beteg testtömeg közötti napi adagolás, amely dózis egyéb faktorok függvénye, amelyek például a különböző betegek típusa, illetve a használt peptid-származék típusa. Az alkalmas dózis egy adott beteg esetében könnyen meghatározható. Előnyösen az 1-4 napon belüli dózisok jellemzően 5 mg - 100 mg aktív ható62.398/SM
- 10anyag/dózis értékek. A találmány szerinti peptid mennyisége, amely a kezeléshez szükséges, a szakember által könnyen meghatározható.
A „beteg” elnevezés alatt a leírásban emlősöket, mint például főemlősöket, például embert, birkát, lovat, szarvasmarhát, sertést, kutyát, macskát, patkányt és egeret értünk.
A találmány szerinti peptid-származékok közül néhány nem bomlik le a gyomor bélrendszeren keresztül történő áthaladás során, amennyiben orális adagolást alkalmazunk, azonban előnyösen nem orális adagolást, hanem például szubkután, intravénás, intramuszkuláris vagy intraperitoneális adagolást alkalmazunk, amely adagolás lehet például behelyezett injekció forma vagy beültetett forma, ezen túlmenően lehet nyálkahártya membrán adagolás, mint például orr, torok és hörgő adagolási forma, mint például aerosol forma, amely a találmány szerinti peptid-származékot tartalmazhatja, spré vagy száraz por formában.
A találmány szerinti vegyületeket parenterális adagolás esetében adagolhatjuk injektálható dózis formában, amely lehet oldat vagy szuszpenzió forma, amelynek során a találmány szerinti vegyületet gyógyszerészetileg elfogadható hígítóanyaggal és gyógyszerészeti hordozóanyaggal elegyítjük, amely lehet steril folyadék, mint például víz és olaj, adalék felületaktív és egyéb gyógyszerészetileg elfogadható segédanyagokkal együtt vagy ezek nélkül. Az ilyen készítményekben alkalmazható olajok lehetnek például petróleum, állati, növényi vagy szintetikus eredetű olaj, mint például mogyoróolaj, szójaolaj és ásványi olaj, általában az előnyösen alkalmazható folyékony hordozóanyagok az injektálható oldatok esetében lehetnek víz, fiziológiás sóoldat, vizes dextróz oldat és hasonló cukor oldatok, etanol, valamint glikolok, mint például propilén-glikol vagy polietilén-glikol.
62.398/SM
-11Αζ (1) általános képletü vegyületeket, mint gyógyszerészetileg hatásos hatóanyagokat különféle eljárásokkal adagolhatjuk a betegeknek, amelyek kezelésre szorulnak, abból a célból, hogy a kívánt hatást elérjük. Az adagolás az ilyen vegyületek esetében például lehet egyedi adagolás vagy más gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal együtt történő adagolás.
A lírásban az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk a találmány szerinti vegyületek leírásában, illetve a találmány szerinti vegyületek alkalmazása során.
Rövidítések
| Boc-L-Pro-OH | N-terc-butoxi-karbonil-L-prolin |
| CBZ-L-Pro-OH | N-karbobenzoxi-L-prolin |
| CBZ-L-Pro-CI | N-karbobenzoxi-L-prolil-klorid |
| CBZ-L-ThioPro-OH | N-karbobenzoxi-L-tioprolin |
| CBZ-Gly-Pro-p-nitroanilid | N-karbobenzoxi-glicinil-L-prolin-p-nitroanilid |
| cm | centiméter |
| DMAP | 4-dimetil-amino-piridin |
| DMSO | dimetil-szulfoxid |
| DTT | ditio-tretol |
| EDTA | etilén-diamin-tetraecetsav |
| HEPES | 4-(2-hidroxi-etil)-1-piperazin-etánszulfonsav |
| (I) | inhibitor koncentráció |
| Ki | inhibició konstans |
| KOH | kálium-hidroxid |
| NMM | N-metil-morfolin |
| 1H-NMR | hidrogén-1 magmágneses rezonancia spektrum |
| 19f-nmr | fluor-19 magmágneses rezonancia spektrum |
62.398/SM
| M | moláris |
| MH+ | protonált alap ion tömeg |
| ml | milliliter |
| min | perc |
| mól | mól |
| mmol | miilimol |
| nm | nanométer |
| PH | hidrogén ion negatív logaritm ikus koncentráció |
| [S] | szubsztrát koncentráció |
| TLC | VRK kromatográfia |
| WSCDI | vízoldhat karbodiimid, részletesen 1 -(3-dimetil-amino-propil)-3-etil- -karbodiimid hidroklorid |
| Vo | kezdeti kinetikus sebesség |
P éldák
A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk, amelyek csak illusztratív jellegűek és a találmány tárgyát nem korlátozzák. A találmány szerinti más eljárások a szakember számára nyilvánvalóak és a leírt eljárások alapján megvalósíthatók. A találmányt csak az alábbi nem limitáló hatású példákon mutatjuk be az 1. táblázatban, továbbá a későbbi példákban részletesen bemutatjuk.
62.398/SM
- 131. táblázat
| Vegyületek | Példa/ MDL szám | Empirikus képlet | I. vázlat szerkezete |
| 2-{[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-1 -pirrolidinil]-karbonil]-1 -pirrolidin-karbonsav, fenil-metil-észter | I. példa 100,527-01 | C20H21F 5N2O4 | (Vllb) |
| 4-((2-(2,2,3,3,3-pentafluor-oxo-proil)-1 -pirrolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav, fenil-metil-észter | II. példa 102,916-01 | c19h19f 5n2o4s | (Vlla) |
| 4-{[4-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-3-tiazolidinil]-karbonil-3-tiazolidin-karbonsav, 1,1-dímetil-etil-észter | IV. példa 100,676-01 | C15H20F 5n2o4s2 | (IX) |
1. példa
I. 2-([2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-1-pirrolidinill-karbonil}-1-
-pirrolidin-karbonsav-fenil-metil-észter előállítása fi. reakcióvázlat, (Vllb) képletű vegyület]
IA. (R)-2-f(metoxi-metil-amino)-karbonill-1-pirrolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (llb) képletű vegyület]
4,31 g (20,0 mmol) Boc-L-Pro-OH és 2,44 g (20,0 mmol) DMAP 125 ml diklórmetánban készült kevert oldatához argon atmoszférában 1,95 g (20,0 mmol) Ν,Ο-dimetil-hidroxil-amin-hidrokloridot és 2,20 ml (20,0 mmol) NMM vegyületet adagolunk. Az oldathoz 3,83 g (20,0 mmol) vízoldható karbodiimid adagolunk. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd az elegyet körülbelül 20 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrált szuszpenziót gyorskromatográfia
62.398/SM
- 14segítségével 8x14 cm szilikagél oszlopon és etilacetát/hexán 60/40 eluens alkalmazásával tisztítjuk. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat (Rf = 0,32) egyesítjük, majd bepároljuk, és így 3,21 g színtelen olajos anyagot nyerünk. Az anyag tömegspektroszkópiai analízise azt mutatja, hogy MH+ = 259.1655 [számított tömeg a C12H23N2O4 képlet alapján = 259.1658],
IB. 2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-1-pirrolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (IVb) képletü vegyület]
1,03 g (4,00 mmol) 2-[(metoxi-metil-amino)-karbonil]-1-pirrolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter (IA. példa szerinti vegyület) 35 ml etil-éterben készült kevert oldatához argon atmoszférában -78°C hőmérsékleten 1,5 ml (12,8 mmol) perfluor-etil-jodidot, majd ezt követően 7,5 ml (11,25 mmol, 1,5m etil-éteres oldat) metil-lítium.lítium-bromidot adagolunk. Az elegyet -78°C hőmérsékleten 30 percen át keverjük, majd jeges vizes fürdő alkalmazásával hagyjuk 0°C-ra melegedni. A reakciót ezután 1,36 g (10,0 mmol) KHSO4 8ml vízben készült oldatának adagolásával leállítjuk. Ezt követően az elegyet több percen át erősen keverjük míg a kétfázisú szuszpenzió mindkét rétege áttetszővé válik. Ezt követően az elegyet 50 ml vizet tartalmazó elválasztó tölcsérbe visszük. Az egyes rétegeket elválasztjuk, majd a szerves fázist 50 ml félig telített vizes NaHCO3 oldattal mossuk. Ezt követően a szerves oldatot 25 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves fázist ezután magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd bepároljuk, és így 1,3 g halványsárga olajos terméket nyerünk.
A terméket gyorskromatográfia segítségével 5x15 cm szilikagél oszlopon
1,3 liter etilacetát/hexán 15/85 eluens, majd etilacetát/hexán 60/40 eluens alkalmazásával tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepároljuk, és így 0,94 g színtelen folyadékot nyerünk. Tömegspektroszkópiai
62.398/SM analízis szerint a termék MH+ értéke = 318.1135 [várható tömeg a C12H17F5NO3 alapján (MH+) = 318.1129],
IC. 2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-pirrolidin-hidroklorid előállítása [I. reakcióvázlat, (Vb) képletü vegyület]
121 mg (0,38 mmol) 2-[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oco-propil)-1-pirrolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter (IB. példa szerinti vegyület) 15 ml etilacetátban készült 0°C hőmérsékletű kevert oldatába jeges fürdőben 5 percen át sósavgázt buborékoltatunk. A sósavgáz buborékoltatását befejezzük, majd a reakcióelegyet további 2 órán át lezárt körülmények között keverjük. Ezt követően az elegyet bepároljuk, és így színtelen olajos anyagot kapunk, amelyet nagyvákuumban KOH labdacsok fölött 3 órán át szárítunk, és így 103 mg megszilárdult terméket nyerünk.
A termék tömegspektroszkópiai analízise szerint MH+ = 218.0601 [várható tömeg a C7H9F5NO alapján (MH+) = 218.0604],
ID. 2-{[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1 -oxo-propil)-1 -pirrolidinil]-karbonil-}-1 -pirrolidin-karbonsav-fenil-metil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (Vllb) képletü vegyület]
0,62 g (2,49 mmol) CBZ-L-Pro-OH és 1 csepp DMF 10 ml diklórmetánban készült kevert oldatához argon atmoszférában 0,26 ml (2,99 mmol) oxalilkloridot adagolunk, miközben erős gázfejlödés tapasztalható. A gázfejlödés befejeződése után a reakcióelegyet további 30 percen át keverjük. A reakcióelegyet ezt követően bepároljuk, és így világossárga olajos N-karbobenzoxi-L-prolil-klorid (CBZ-L-Pro-CI) terméket nyerünk.
A CBZ-L-Pro-CI termékhez 10 ml diklórmetánt adagolunk, majd az elegyet 2,49 mmol 2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-pirrolidin-hidrokloriddal (IC. példa szerinti anyag) és 0,54 ml (4.98 mmol) N-metil-morfolin 7 ml diklór
62.398/SM • · ♦
- 16metánban készült oldatával reagáltatjuk. A reakcióelegyet 2,5 órán át keverjük, majd bepároljuk és a maradékot 1 ml diklórmetánnal elegyítjük. A kapott terméket gyorskromatográfia segítségével szilikagélen etilacetát/hexán 50/50 eluens alkalmazásával oszlopkromatográfia segítségével tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepároljuk, és így 0,52 g színtelen olajos kívánt terméket nyerünk.
A termék tömegspektroszkópiai analízise MH+ = 449.1508 [a mért tömeg a C20H22F5N2O4 képlet alapján (MH+) = 449.1500],
II. 4-{[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-1-pirrolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-fenil-metil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (Vlla) képletü vegyület!
IIA. Tiazolidin-3,4-dikarbonsav-3-fenil-metil-észter előállítása [I. reakcióvázat, (Vla) képletü vegyület]
13,32 g (0,10 mól) L-tiazolidin-4-karbonsav erősen kevert oldatát jeges vízben lehűtjük, majd az oldathoz 15,70 ml (0,11 mmol) benzil-klór-formiátot és 55 ml 2n nátrium-hidroxidot adagolunk. Az adagolást váltakozva végezzük 5 ml térfogat adagokban 20 perc időtartamon át. A beadagolást követően 10 perccel a reakcióelegyet szobahőmérsékletre melegítjük, majd ezt követően 30 percen át ezen a hőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet 3x75 ml etil-éterrel extraháljuk, majd a vizes fázist kb. 20 ml 6n sósav segítségével megsavanyítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, majd egyesítjük és 100 ml etil-éterrel elegyítjük. Eztuán az oldatot 50 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves fázist nátriumszulfáton megszárítjuk, majd ezt követően bepároljuk, és így 20,4 g viszkózus színtelen olajos terméket nyerünk.
62.398/SM • · ·
IIB. 4-{[2-(2,2,3,3.3-pentafluor-1-oxo-propil)-1-pirrolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-fenil-metil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (Vlla) képletü vegyület]
267 mg (1,00 mmol) CBZ-L-ThioPro-OH (Ha példa szerinti vegyület) és 0,12 ml (1,05 mmol) NMM 15 ml diklórmetánban készült kevert oldatához argon atmoszférában -17°C hőmérsékleten 0,13 ml (1,00 mmol) izobutil-klór-formiátot adagolunk. A reakcióelegyet 20 percen át keverjük, majd további 0,12 ml (1,05 mmol) NMM vegyületet adagolunk hozzá. Ezt követően a reakcióelegyhez 253 mg (1,00 mmol) 2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-pirrolidin-hidrokloridot (IC vegyület) adagolunk 10 ml acetonitrilben készült oldat formájában. Az adagolást több percen át végezzük, majd az elegyet 1,5 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, majd 1 órán át ezen a hőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet bepároljuk, majd 3 ml diklórmetánt adagolunk a maradékhoz és ezután az elegyet 4x15 cm szilikagél oszlopra visszük. A szilikagél oszlopot 400 ml etilacetát/hexán 30/70 eluenssel, majd ezt követően etil-acetát/hexán 35/65 eluenssel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepároljuk, és így 63 mg színtelen viszkózus olajos terméket kapunk.
1Tömegspektrum analízis a termékről azt mutatja, hogy MH+ = 467.1053 [számított tömeg a C19H20F5N2O4S képlet alapján (MH+) = 467.1064],
62.398/SM
III. 4-{f4-[(metoxi-metil-amino)-karbonil]-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazoli- din-karbonsav,1,1-dimetil-etil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (Vili) képletü veqyület]
IIIA. Tiazolidin-3,4-dikarbonsav-3-( 1,1 -dimetil-etil)-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (la) képletü veqyület]
10,0 g (75,09 mmol) L-tiazolidin-4-karbonsav tetrahidrofurán/víz 1/1, 100 ml elegyében képzett erősen kevert szuszpenziójához 11,94 g (0,11 mól) nátirum-karbonátot, majd 16,39 g (75,09 mmol) di-terc-butil-dikarbonátot adagolunk. A kapott szuszpenziót szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet ezután leszűrjük, majd a szürletet elválasztó tölcsérbe visszük, amely 100 ml dietil-étert tartalmaz. A kapott fázisokat elválasztjuk, majd a vizes fázist 200 ml friss dietil-éterrel elegyítjük. Ezt követően a vizes fázist 1n vizes sósavval megsavanyítjuk. A szerves fázist ezután 0,5n vizes sósavval, majd 50 ml telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot ezután magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd bepároljuk, és így 1,56 g fehér szilárd terméket nyerünk.
Az 1 H-NMR spektrum a kívánt szerkezetnek megfelelő: 10.56 (s-1H, CO2H), 4.78 (m-1H, CH), 4.59 és 4.39 (sz d, 2H, J = 8Hz; NCH2S), 3.22-3.36 (m, 2H, CH2S), 1.43 [s, 9H, OC(CH3)3],
IIIB. 4-[(metoxi-metil-amino)-karbonil]-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etíl-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (Ha) képletü veqyület]
2,33 g (9,99 mmol) tiazolidin-3,4-dikarbonsav-3-(1,1-dimetil-etil)-észter és 1,22 g (9,99 mmol) DMAP 40 ml diklórmetánban készült kevert oldatához argon atmoszférában 0,98 g (9,99 mmol) N,O-dimetil-hidroxi-amin-hidroklorid és 1,10 ml (9,99 mmol) NMM 15 ml diklórmetánban készült szuszpenzióját adagoljuk. Ezt követően az elegyhez 1,92 g (9,99 mmol) vízben oldható karbodiimidet adagolunk, majd az elegyet éjszakán át keverjük. A reakcióele
62.398/SM gyet ezt követően kb. 15 ml térfogatra bepároljuk, majd gyorskromatográfia segítségével 6x10 cm szilikagél oszlopon etilacetát/hexán 50/50 eluens alkalmazásával tisztítjuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat (Rf = 0,39) egyesítjük, majd bepároljuk, és így 1,95 g színtelen olajos anyagot kapunk. A termék tömegspektroszkópiai adatai MH+ = 277.1216 [várható tömeg a C1iH21N2O4S képlet alapján (MH+) = 277.1222],
IIIC. N-metoxi-N-metil-4-tiazolidin-karboxamid-monohidroklorid előállítása [I. reakcióvázlat, (III) képletü vegyület]
1,05 g (3,80 mmol) 4-[(metoxi-metil-amino)-karbonii]-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter (IIIB. példa szerinti vegyület) etilacetátban készült kevert oldatába jeges vizes hűtés mellett 10 perc időtartamon át sósavgázt buborékoltatunk. A gázbevezetés befejezése után a reakcióelegyet lezárjuk, és további 2 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután színtelen olajos anyaggá bepároljuk, majd a terméket nagyvákuumban KOH labdacsok felett megszárítjuk. A szárítást 3 órán át végezzük, és így 0,76 g fehér szilárd terméket nyerünk.
IIID. 4-{[4-[(metoxi-metil-amino)-karbonil]-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (Vili) képletü vegyület]
0,81 g (3,49 mmol) 3,4-tiazolidin-dikarbonsav-3-(1,1-dimetil-etil)-észíer (IIIA. példa szerinti vegyület) és 0,43 g (3,49 mmol) DMAP 20 ml diklórmetánban készült kevert oldatához argon atmoszférában 0,38 ml (3,49 mmol) NMM vegyületet, majd ezt követően 0,76 g (3,49 mmol) N-metoxi-N-metil-4-tiazolidin-karboxamid-monohidroklorid (IIIC. példa szerinti vegyület) 10 ml diklórmetánban készült elegyét adagoljuk. Ezt követően az elegyhez 0,67 g (3,49 mmol) vízoldható karbodiimidet adagolunk. A reakció befejeződése után a re62.398/SM
- 20akcióelegyet kb. 10 ml térfogatra bepároljuk, majd 5x13 cm méretű szilikagél oszlopra visszük és gyorskromatográfia segítségével aceton/etilacetát 8/92 eluens alkalmazásával tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük (Rf = 0,66), majd bepároljuk. és így 0.35 g fehér habos terméket nyerünk. A termék tömegspektroszkópiai analízise szerint MH+ = 392.1324 [várható tömeg a C15H60N3O5S2 képlet alapján (MH+) = 392.1314],
IV. 4-{í4-(2.2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-3-tiazolidinil1-karbonil}-3-
-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (IX) képletü vegyűlet]
IVA. 4-{[4-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter előállítása [I. reakcióvázlat, (IX) képletü vegyűlet]
0,33 g (0,84 mmol) 4-{[4-[(metoxi-metil-amino)-karbonil]-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-1,1-dimetil-etil-észter (IIID. példa szerinti vegyület) 30 ml etil-éterben készült kevert oldatához argon atmoszférában -78°C hőmérsékleten 0,32 ml (2,70 mmol) perfluor-etil-jodidot, majd ezt követően 1,57 ml (2,36 mmol, 1,5 mól etil-éteres oldat) metil-lítium.lítium-bromidot adagolunk. A vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint a reakció befejeződik. Ezt követően a reakcióelegyet 100 ml etil-éterbe öntjük, amely 25 g szilikagélt tartalmaz. A termék lombikban maradó mennyiségét etil-éterben oldjuk, majd ezt követően a szilicium-dioxid/éteres oldathoz adagoljuk. Ezt követően a szerves fázist eltávolítjuk, majd a szilikagélt 2x100 ml etil-éterrel mossuk. Az egyesített szerves oldatokat magnézium-szulfáton és nátrium-szulfáton megszárítjuk, majd leszűrjük és bepároljuk. 0,34 g olajos fehér habos anyagot nyerünk. Ezt követően a terméket gyorskromatográfia segítségével 4x10 cm szilikagél oszlopon 0,4 liter etilacetát/hexán 30/70 eluens, majd ezt követően 0,5 liter
62.398/SM • · · ···* ·*·«>· • · ·* · ·♦· • · « « * · · · »· ♦··· ··· ,*... e
- 21 etilacetát/hexán 75/25 eluens alkalmazásával tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepároljuk, és így 49 mg olajos terméket nyerünk.
A termék tömegspektroszkópiai analízise (MH+) = 451.0799 jelet mutat [várható tömeg a C15H20F5N2O4S2 képlet alapján (MH+) = 451.0785].
Szintetikus tesztvizsgálatok
Az előállítási eljárásokat általában vékonyrétegkromatográfia segítségével követjük Analtech szilikagél lemezeken és a lemezek kifejlesztését etilacetát/hexán oldószerekkel végezzük. A találmány szerinti vegyületeket úgy analizáljuk, hogy a lemezeket alkalikus kálium-permanganát oldattal, majd melegítéssel kifejlesztjük.
V. Enzim inhibiálás tesztvizsgálatok
Prolil-endopeptidázt részlegesen tisztítottuk marha agyból kiindulva a Yoshimoto és munkatársai [Biochem., 94, 1179 (1983)] közleményben leírt eljárásnak megfelelően azzal az eltéréssel, hogy 50 mm HEPES pH = 7,4 puffért alkalmaztunk a Tris puffer helyett. Az enzim preparátum alkalmas a rutin inhibiálási mérések számára; azonban az enzimet tovább tisztíthatjuk az alább leírt eljárásoknak megfelelően. Az enzim tisztasági foka általában várhatóan nem befolyásolja a mért K, értéket. Az 50%-80% ammónium-szulfátból képzett labdacs forma újra oldását végeztük homogenizálási pufferben, majd ezt az elegyet Pharmacia Mono Q oszlopon (0,5x5 cm) történő átáramlással 1 ml/perc sebességgel sómentesítettük és az oszlopot 5 ml A pufferrel - B pufferrel (20 ml összes térfogat; A puffer = 5 mmol HEPES, pH 7,4, 1 mmol EDTA és 1 mmol DTT; B puffer = puffer A + 0,5 mól NaCI) mostuk. Az enzim aktivitás kb. (NaCI) = 0,25 mól értéknél eluálódott. A korábbi adatok szerint az enzim tárolás során hosszú időtartamon át nem stabil (1 vagy 2 hónap időtartamon át) ennélfogva előnyösen az enzim friss előállítását végeztük.
62.398/SM
- 22Az enzimet A pufferben (3,0 ml) 37°C hőmérsékleten 20 μιτιοΙ szubsztrát tartalom mellett (CBz-Gly-Pro-p-nitro-anilid) jelenlétében vizsgáltuk. A 410 nm érték mellett mért abszorpció növekedést (410 nm = 8,4 mm‘1cnT1) mértük. Az inhibiálási raktározott oldatokat DMSO oldószerben készítettük. A reverzibilis kompetitív inhibitorok meghatározását úgy végeztük, hogy mértük a három inhibitor koncentráció esetében a kezdeti sebességet és ebben az esetben [S] = 50 μιτιοΙ (KM a szubsztrát esetében 11 μιτιοΙ) értéket alkalmazva. Amennyiben lassú kötődést figyeltünk meg, a végső egyensúlyi sebességet alkalmaztuk.
A kompetitív inhibitorra számított K, állandót ismert formula segítségével számítottuk: v0/Vj = (1 + [IJ/K,, app) és K, = K,, app/(1 + [S]/KM), ahol v0 a kezdeti sebesség az inhibitor jelenléte nélkül, v, a kezdeti sebesség az inhibitor jelenlétében [I] kondentráció esetében és [S] a szubsztrát koncentráció. Amennyiben „lassú kötődést” tapasztaltuk (azaz a kötési egyensúly megközelítése lassú), a végső állandó állapotú sebességet alkalmaztuk v, értékként a kezdeti sebesség helyett.
Az enzim inhibiálási állandókat úgy állapítottuk meg, hogy a különféle (1) általános képletü vegyületek esetében leírt eljárásokat alkalmaztuk. A 2. táblázatban bemutatjuk a tesztvizsgálatnak alávetett vegyületek adatait.
62.398/SM
2. táblázat
| Vegyületek | MDL szám | Enzim inhibiálás |
| 2-((2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1 -oxo-propil)- -1 -pirrolidinil]-karbonil}-1 -pirrolidin- -karbonsav-fenil-metil-észter | I. példa 100,527-01 | 1,4 x 10'9 mól |
| 4-((2-(2,2,3,3,3-pentafluor-oxo-propil)-1 -pirrolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-fenil-metil-észter | II. példa 102,916-01 | 1,0 x 10'9 mól |
| 4-{[4-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxo-propil)-3-tiazolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-1,1 -dimetil-etil-észter | IV. példa 100,676-01 | 1,0x10'9mol |
A találmány szerinti vegyületeket ezen túlmenően in vivő vizsgálatokban is vizsgáltuk és meghatároztuk az inhibiálás értékét. Az ilyen vizsgálatok lehetnek például az [Atack, Eur. J. Pharm., 205, 157-163 (1991)] közleményben leírt eljárás vagy egyéb szakirodalomban leírt eljárások. Például a találmány szerinti vegyületeket fiziológiás sóoldatban injektáltuk vagy hordozóanyaggal injektáltuk, amely lehet például metil-cellulóz és az injektálást intraperitoneális módon végeztük hím BKTO egerekbe (25-30 g testtömeg), majd megfelelő időben az egereket elpusztítottuk és az agyat, illetve a veséket eltávolíthatjuk. Az eltávolítottuk szerveket 10 ml (kb. 20 térfogat) jegesen hütött tesztvizsgálati puffer oldatban homogenizáltuk. A homogenátumokból alikvot mintákat vettünk és ezek alapján meghatároztuk a protein-koncentrációt, és a meghatározást például Lowry és munkatársai, (Lowry, et al., J. Bioi. Chem. 193, 265 (1951) közleményében leírt eljárás szerint végeztük. Az inhibitor disszociációját minimálisra csökkentettük úgy, hogy 199 μΙίίβΓ alikvot mintát alkalmaztunk a nyers homogenátumból egy két perces szobahőmérsékleten végrehajtott inkubálás
62.398/SM ···· segítségével. Az összes idő általában az állat elpusztítása, illetve a tesztvizsgálat befejezése között kb. 3 perc volt. Az aktivitást általában a milligram protein aktivitás értékben adjuk meg és ezt a csak hatóanyag-hordozóanyaggal kezelt állatok eredményekkel összehasonlítva százalék értékben fejezzük ki.
A találmány szerinti vegyületek memóriára kifejtett viselkedési hatását különféle úton határozhatjuk meg, amely lehet például az [Attack, Eur. J. Pharm. 205, 157-163 (1991)] közelményben leírt eljárás. A találmány szerinti vegyületek memóriára kifejtett hatását úgy mérhetjük, hogy meghatároztuk a scopolamin-indukált memória hiány visszafordítás mértékét egy egér passzívelkerülési modellben. Az ilyen modellben az egér különféle csoportokban található, amely csoportok (1) hordozóanyagot; (2) hordozóanyagot és scopolamint (azaz kb. 0,2 mg/kg); vagy (3) különféle tesztvizsgálati vegyület dózist (pl. kb. 0,1 mg/kg - 1,0 mg/kg) kaptak. Ezt követően az egereket megvilágított helyzetbe két kamrába egy világos és egy sötét kamrába helyeztük. Az egerek amikor a kamra sötét oldalára kerültek, enyhe elektromos sokkal kezeltek (pl. 2 másodperc kb. 0,4 mA). A sötét kamrába történő bejutási időt (az áthaladási késlekedést) mértük. A következő napon az egeret a világos kamra részbe helyeztük és az áthaladási időt a sötét oldalra regisztráltuk. A modellben a memória hiány közvetlenül összefüggött a sötét kamrába történő átlépés időtartamával a két egymást követő napon keresztül. Egy hosszabb átlépési időtartam a második napon a memória jelzését mutatta, míg amennyiben az átlépés időtartamában nem volt változás, ez memória hiányt jelezett.
A találmány szerinti eljárás fent leírt módszerei és vegyületei változtathatók és módosíthatók anélkül, hogy a találmány lényegében változtatást eszközölnénk, és mindezen változtatásokat beleértjük a találmány tárgykörébe.
62.398/SM
Claims (3)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Gyógyszerkészítmény memória javítás céljára, azzal jellemezve, hogy az (1) általános képletű vegyület hatásos mennyiségét vagy ezt tartalmazó gyógyszerkészítményt adagoljuk, amely valamennyi sztereoizomert magában foglalja, ahol az általános képletbenA jelentése benzilcsoport vagy terc-butil-védöcsoport;X! jelentése kénatom vagy -CH2-csoport; ésX2 jelentése kénatom vagy -CH2-csoport;B jelentése CF3-csoport vagy -CF2CF3-csoport, azzal a feltétellel, hogy Xt vagy X2 legalább egyikének jelentése kénatom és a gyógyszerkészítmény gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.
- 2. Gyógyszerkészítmény, amely alkalmas memóriazavarok megelőzésére vagy a folyamat lassítására, azzal jellemezve, hogy az (1) általános képletű vegyületet vagy ezt tartalmazó gyógyszerkészítmény hatásos mennyiségét adagoljuk, amely valamennyi sztereoizomert magában foglalja, ahol az általános képletbenA jelentése benzilcsoport vagy terc-butil-védőcsoport;Xt jelentése kénatom vagy -CH2-csoport; ésX2 jelentése kénatom vagy -CH2-csoport;B jelentése CF3-csoport vagy -CF2CF3-csoport, azzal a feltétellel, hogy Xi vagy X2 legalább egyikének jelentése kénatom, és a gyógyszerkészítmény gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.62.398/SM
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemez- ve, hogy az alkalmazott vegyület a 4-{[2-(2,2,3,3,3-pentafluor-1-oxi-propil)-1-pirrolidinil]-karbonil}-3-tiazolidin-karbonsav-fenil-metil-észter.A meghatalmazott . NemzetköziSzabadalmi Iroda tagja H-1062 Budapait, Andrtüy út 113. TOefefl! 34=34.950, J4.J4-J3362.398/SM x „ KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNYO I °\/OCHT o o o oILf) (J II II eu njX X rOI (J cO
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16110693A | 1993-12-02 | 1993-12-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9601472D0 HU9601472D0 (en) | 1996-07-29 |
| HUT74687A true HUT74687A (en) | 1997-01-28 |
Family
ID=22579844
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9601472A HUT74687A (en) | 1993-12-02 | 1994-11-08 | Pyrrole and thiazolidine derivatives of prolyl endopeptidase inhibitor activity and pharmaceutical compositions containing the same |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5661167A (hu) |
| EP (1) | EP0731788B1 (hu) |
| JP (1) | JPH09506090A (hu) |
| KR (1) | KR100341982B1 (hu) |
| CN (1) | CN1136806A (hu) |
| AT (1) | ATE223894T1 (hu) |
| AU (1) | AU684861B2 (hu) |
| CA (1) | CA2177821C (hu) |
| DE (1) | DE69431359T2 (hu) |
| DK (1) | DK0731788T3 (hu) |
| ES (1) | ES2179093T3 (hu) |
| HU (1) | HUT74687A (hu) |
| IL (1) | IL111775A (hu) |
| NO (1) | NO962238L (hu) |
| NZ (1) | NZ276600A (hu) |
| PT (1) | PT731788E (hu) |
| TW (1) | TW280818B (hu) |
| WO (1) | WO1995015310A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA949302B (hu) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5859031A (en) | 1995-06-07 | 1999-01-12 | Gpi Nil Holdings, Inc. | Small molecule inhibitors of rotamase enzyme activity |
| DE602004026289D1 (de) | 2003-05-05 | 2010-05-12 | Probiodrug Ag | Glutaminylcyclase-hemmer |
| EP1824846A2 (en) | 2003-11-03 | 2007-08-29 | Probiodrug AG | Novel compounds for the treatment of neurological disorders |
| ZA200603165B (en) | 2003-11-03 | 2007-07-25 | Probiodrug Ag | Combinations useful for the treatment of neuronal disorders |
| CN1918131B (zh) | 2004-02-05 | 2011-05-04 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂 |
| JP5379692B2 (ja) | 2006-11-09 | 2013-12-25 | プロビオドルグ エージー | 潰瘍、癌及び他の疾患の治療のためのグルタミニルシクラーゼの阻害薬としての３−ヒドロキシ−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン誘導体 |
| ATE554085T1 (de) | 2006-11-30 | 2012-05-15 | Probiodrug Ag | Neue inhibitoren von glutaminylcyclase |
| NZ579310A (en) | 2007-03-01 | 2012-03-30 | Probiodrug Ag | Use of glutaminyl cyclase inhibitors for the treatment of mild cognitive impairment and diagnostic purposes thereof |
| DK2142514T3 (da) | 2007-04-18 | 2015-03-23 | Probiodrug Ag | Thioureaderivater som glutaminylcyclase-inhibitorer |
| US8524654B2 (en) * | 2007-05-21 | 2013-09-03 | The Uab Research Foundation | Prolyl endopeptidase inhibitors for reducing or preventing neutrophilic inflammation |
| US8486940B2 (en) | 2009-09-11 | 2013-07-16 | Probiodrug Ag | Inhibitors |
| EP2542549B1 (en) | 2010-03-03 | 2016-05-11 | Probiodrug AG | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
| BR112012022478B1 (pt) | 2010-03-10 | 2021-09-21 | Probiodrug Ag | Inibidores heterocíclicos de glutaminil ciclase (qc, ec 2.3.2.5), seu processo de preparação, e composição farmacêutica |
| US8541596B2 (en) | 2010-04-21 | 2013-09-24 | Probiodrug Ag | Inhibitors |
| US8530670B2 (en) | 2011-03-16 | 2013-09-10 | Probiodrug Ag | Inhibitors |
| US9771786B2 (en) | 2014-01-28 | 2017-09-26 | Spirit Global Energy Solutions, Inc. | Down-hole gas and solids separator utilized in production hydrocarbons |
| ES2812698T3 (es) | 2017-09-29 | 2021-03-18 | Probiodrug Ag | Inhibidores de glutaminil ciclasa |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4518528A (en) * | 1983-05-19 | 1985-05-21 | Rasnick David W | α Amino fluoro ketones |
| ZA86746B (en) * | 1985-02-04 | 1986-09-24 | Merrell Dow Pharma | Novel peptidase inhibitors |
| DE3712365A1 (de) * | 1987-04-11 | 1988-10-27 | Hoechst Ag | Neue 2-acylpyrrolidin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, sie enthaltende mittel sowie deren verwendung |
| US4855303A (en) * | 1987-07-01 | 1989-08-08 | Pfizer Inc. | Fluorine containing renin inhibitors |
| JPH0662591B2 (ja) * | 1988-12-14 | 1994-08-17 | 株式会社ヤクルト本社 | 新規なチオプロリン誘導体 |
| WO1990012005A1 (en) * | 1989-04-13 | 1990-10-18 | Japan Tobacco Inc. | New amino acid derivatives having prolylendopeptidase inhibitor activity |
-
1994
- 1994-11-08 CA CA002177821A patent/CA2177821C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-08 JP JP7515618A patent/JPH09506090A/ja not_active Ceased
- 1994-11-08 HU HU9601472A patent/HUT74687A/hu unknown
- 1994-11-08 EP EP95901820A patent/EP0731788B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-08 AU AU10917/95A patent/AU684861B2/en not_active Ceased
- 1994-11-08 AT AT95901820T patent/ATE223894T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-11-08 KR KR1019960702894A patent/KR100341982B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-11-08 ES ES95901820T patent/ES2179093T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-08 DK DK95901820T patent/DK0731788T3/da active
- 1994-11-08 PT PT95901820T patent/PT731788E/pt unknown
- 1994-11-08 WO PCT/US1994/012865 patent/WO1995015310A1/en active IP Right Grant
- 1994-11-08 NZ NZ276600A patent/NZ276600A/en unknown
- 1994-11-08 CN CN94194374A patent/CN1136806A/zh active Pending
- 1994-11-08 DE DE69431359T patent/DE69431359T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-23 ZA ZA949302A patent/ZA949302B/xx unknown
- 1994-11-24 TW TW083110932A patent/TW280818B/zh active
- 1994-11-27 IL IL111775A patent/IL111775A/en not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-05-31 NO NO962238A patent/NO962238L/no not_active Application Discontinuation
- 1996-12-02 US US08/759,323 patent/US5661167A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69431359D1 (de) | 2002-10-17 |
| HU9601472D0 (en) | 1996-07-29 |
| IL111775A (en) | 1998-06-15 |
| US5661167A (en) | 1997-08-26 |
| KR100341982B1 (ko) | 2002-11-30 |
| CA2177821A1 (en) | 1995-06-08 |
| PT731788E (pt) | 2003-01-31 |
| DK0731788T3 (da) | 2003-01-20 |
| ZA949302B (en) | 1995-08-07 |
| NO962238D0 (no) | 1996-05-31 |
| ATE223894T1 (de) | 2002-09-15 |
| ES2179093T3 (es) | 2003-01-16 |
| CN1136806A (zh) | 1996-11-27 |
| AU1091795A (en) | 1995-06-19 |
| NO962238L (no) | 1996-05-31 |
| AU684861B2 (en) | 1998-01-08 |
| DE69431359T2 (de) | 2003-07-31 |
| IL111775A0 (en) | 1995-01-24 |
| CA2177821C (en) | 2000-03-28 |
| JPH09506090A (ja) | 1997-06-17 |
| EP0731788B1 (en) | 2002-09-11 |
| NZ276600A (en) | 1997-09-22 |
| WO1995015310A1 (en) | 1995-06-08 |
| TW280818B (hu) | 1996-07-11 |
| EP0731788A1 (en) | 1996-09-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU600226B2 (en) | Novel peptidase inhibitors | |
| CA2338524C (en) | Inhibitors of urokinase and blood vessel formation | |
| US5496927A (en) | Peptidase inhibitors | |
| HUT74687A (en) | Pyrrole and thiazolidine derivatives of prolyl endopeptidase inhibitor activity and pharmaceutical compositions containing the same | |
| US4692458A (en) | Anti-hypertensive agents | |
| JP4489976B2 (ja) | 補体プロテアーゼの低分子インヒビター | |
| HU203369B (en) | Process for producing enzyme inhibiting dipeptidecarbamoyl derivatives and pharmaceutical compositions comprising same | |
| EP1465891A2 (en) | Inhibitors of dipeptidyl peptidase iv | |
| US4745124A (en) | Orally effective anti-hypertensive agents | |
| US4912120A (en) | 3,5-substituted 4,5-dihydroisoxazoles as transglutaminase inhibitors | |
| SK899A3 (en) | Thrombin inhibitors | |
| JP2001518084A (ja) | Ｃ−末端にカルボニル基及び複素環基を有するドラスタチン１５誘導体 | |
| KR100689923B1 (ko) | 트롬빈 억제제 | |
| JPH10509727A (ja) | Ｎ−末端スルホニル−又はアミノスルホニル基を有する新規のジペプチドのｐ−アミノベンジルアミド | |
| JP2004503563A (ja) | 凝固因子Ｘａ阻害剤 | |
| US6693072B2 (en) | Elastase inhibitors | |
| US6417161B1 (en) | Amino acid amidinohydrazones, alkoxyguanidines and aminoguanidines as protease inhibitors | |
| US4734420A (en) | Anti-hypertensive agents | |
| US4833152A (en) | Anti-hypertensive agents | |
| US4690936A (en) | Anti-hypertensive agents | |
| KR100565008B1 (ko) | 4-하이드라지노-3-사이클로부텐-1,2-다이온 유도체 및이들의 제조 방법 | |
| WO2000040600A1 (en) | Selective inhibitors of mmp-12 | |
| MXPA00010379A (en) | Cysteine protease inhibitors | |
| CZ20002463A3 (cs) | Nové inhibitory trombinu |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |