HUT73814A - Methods for enhancing drug delivery with modified saponins - Google Patents

Methods for enhancing drug delivery with modified saponins Download PDF

Info

Publication number
HUT73814A
HUT73814A HU9500001A HU9500001A HUT73814A HU T73814 A HUT73814 A HU T73814A HU 9500001 A HU9500001 A HU 9500001A HU 9500001 A HU9500001 A HU 9500001A HU T73814 A HUT73814 A HU T73814A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
saponin
pharmaceutical composition
fraction
group
reduced
Prior art date
Application number
HU9500001A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9500001D0 (en
Inventor
Charlotte A Kensil
Dante J Marciani
Sean Soltysik
Original Assignee
Cambridge Biotech Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cambridge Biotech Co filed Critical Cambridge Biotech Co
Publication of HU9500001D0 publication Critical patent/HU9500001D0/hu
Publication of HUT73814A publication Critical patent/HUT73814A/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

A találmány szerinti gyógyászati készítmény farmakológiai hatóanyag nyálkahártyán keresztül történő felvételének fokozására szolgál. A készítmény a következő komponenseket tartalmazza:
a) Quillaja saponaria nyers extraktumából kinyerhető, kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója, fairre ly ΟΑ-1?τ-~€7Α-1Έ,ΏΑ-21, QA--21-V1.....ös QA-24-V2 •közül legalább egy. komponenst tartalmazna hol a szaponin vagy annak frakciójának kémiai módosítása
i) __QA-18-,—QA-2-4,—QA-24-V4—és—QA- 21-V2 — triterpén-aldehid csoportjának redukálása metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá, vagy ii) zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízise a megfelelő gikoziddá, vagy iii) i) és ii) kombinációja,
b) gyógyászati hatóanyag és adott esetben
c) gyógyászatilag elfogadható hordozó.
A találmány tárgyköréhez tartoznak továbbá a fenti szaponinok és az azokat tartalmazó frakciók, valamint a fenti gyógyászati készítmény előállítására szolgáló eljárás.
x80814-71777VO/LZs
P 95 00001 • ·
Képviselő:
Danubia Szabadalmi és Védjegy Iroda Kft.
Budapest
Élj árás -gyógyászati hatóanyaigok loadasának fokozására __ módosított szaponinokkaf A‘Mtít
Cambridge Biotech Corporation, Worcester, MA, US
Feltalálók:
KENSIL Charlotte A.
SOLTYSIK Sean MARCIANI Dante J.
Milford, MA
Worcester, MA
Hopkinton, MA, USA
A nemzetközi bejelentés napja:
1993. 07. 01.
Elsőbbsége:
1992. 07. 02. (07/906 870, US)
A nemzetközi bejelentés száma:
PCT/US93/06348
A nemzetközi közrebocsátás száma:
WO 94/01118
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · ·
A találmány tárgya a gyógyszerkémia területére esik. A találmány módosított szaponinok alkalmazására vonatkozik gyógyászati hatóanyag állatok nyálkahártyáján keresztül történő felvételének fokozására. A találmány szerinti módosított szaponinok a természetes szaponinokhoz viszonyítva lényegesen csekélyebb mértékben izgatják a nyálkahártyát.
Ismeretes, hogy bizonyos kis molekulatömegű peptidek „orron át felszívódó gyógyszerként” vagy közvetlenül vizes oldatból az orr nyálkahártyáján keresztül felszívódnak [Gordon G. S. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 74197423 (1985)]. A felszívódás hatásossága azonban jellemző módon alacsony és változó, azonkívül nagyobb molakulaméretű, gyógyászati szempontból fontos peptidek, így az inzulin nem szívódnak fel kielégítő mértékben [Hirai és munkatársai: Diabetes 27, 296-299 (1978)].
Számos kutató kísérletet tett polipeptidek leadásának fokozására detergensek útján. Többek között beszámoltak arról, hogy epesav hidrofób sói révén inzulin orron keresztül történő felszívódása fokozható [Gordon G. S. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 7419-7423 (1985)].
A nátrium-taurodihidrofuzidátról ismertették, hogy gyógyászati hatóanyagok, különösen inzulin nyálkahártyán való átjutását hatásosan fokozza [Longenecker J. P. és munkatársai: J. Pharm. Sci. 76, 351-355 (1987)].
Inzulin és kalcitonin nazális felvétele fokozható poliakrilsavgéllel [Morimoto K. és munkatársai: J. Pharm. Pharmacol. 37, 134-136 (1984)].
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
Inzulin beadását ismertették inzulin/epesav aerosol részeként is [Moses A. C. és munkatársai: Diabetes 32, 1040-1047 (1983)], összehasonlították továbbá a nazális, rektális, orális, szublingvális és intramuszkuláris módon beadott inzulin hatásosságát és epesavsó abszorpciós promoter befolyását [Aungst, B. J. és munkatársai: J. Pharm. Exp. Ther. 244, 23-27 (1988)].
β-Interferon intranazális beadását (nemionos, anionos és amfoter) felületaktív anyaggal és felületaktív anyag nélkül szintén ismertették [Maitani Y. és munkatársai: Drug Design Dél. 1, 65-70 (1986)]. Felületaktív anyag nélkül a β-interferon nyulakban nem szívódott fel. Nazális beadást követően az interferon felszívódását leghatásosabban a nátrium-glikokolát fokozta. A nátrium-glikokolát esetén felszívódott összes β-interferon mennyisége azonban az intravénás beadás esetén felszívódott összes hatóanyagnak csupán 2,2%-a volt.
Egyéb detergensekként többek között szaponinokat használtak polipeptidek nyálkahártyán keresztül történő felvételének fokozására. A szaponinok növényfajokban széles körben (több, mint 400 fajban) elterjedtek, és számos biológiai tulajdonságot mutatnak, amelyek közül egyesek kedvezőek, mások viszont károsak. Vízben elkeverve a szaponinok szappanszerű habot képeznek, nevük ebből a tulajdonságból ered. A szaponinok egyéb tulajdonságai többek között a hemolitikus aktivitás, koleszterint megkötő képesség, valamint a keserű íz. A szaponinok kémiáját és biológiai jelentőségét a szakirodalom részletesen tárgyalja [Price K. R. és munkatársai: CRC Crit. Rév. Food Sci. Nutr. 26, 27 (1987)].
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 ···· ··«·
Szaponinoldatokat alkalmaztak polipeptidek nyálkahártyán keresztül történő bevitelének fokozására. Ismertették, hogy Gypsophilla egyedekből származó tisztítatlan szaponint tartalmazó szemcseppekben inzulin beadása 1%-os oldat alakjában gyors és reprodukálható csökkenést okozott patkányok vérében lévő D-glükóz-koncentrációban [Pillion D. J. és munkatársai: Invest. Opthal. Vis. Sci. 32, 3021-27 (1991)]. Szaponinmentes inzulintartalmú szemcseppek hatástalanok voltak. Szteroid vagy triterpén szerkezetű szaponint alkalmazó, növekedési hormont felszabadító faktor nazális beadását ismerteti a JP 62 126 135. Inzulin szisztémás bevitelét is ismertették szaponint tartalmazó szemcseppek beadása által [Chiou G. C. Y. és munkatársai: J. Pharm. Sci 78, 815-8 (1989); Chiou G. C. Y. és munkatársai: J. Ocul. Pharm 5, 81-91 (1989); Chiou, G. C. Y. és munkatársai: Diabetes Care 11, 750-51 (1988)]. Patkányoknak inzulin nazális beadását is ismertették szaponint tartalmazó oldattal, ahol a szaponinról csupán azt ismertették, hogy a Wako Pure Chemical Ind., Lt., Osaka, Japán cég gyártmánya [Hirari, S. és munkatársai: Int. J. Pharm. 9, 173-84 (1981); Hirari S. és munkatársai: Int. J. Pharm. 9, 165-72 (1989)].
Bár a felületaktív anyagok nagyon ígéretesek hatóanyagok nyálkahártyán keresztül történő felvételének fokozására, jelentős hátrányuk az, hogy ingerük a nyálkahártyát. Ezért hosszabb időn át felületaktív anyagot tartalmazó gyógyászati készítmények alkalmazása nem lehetséges. Akut terápiák esetén azonban helyi hatások jelentősége kisebb, minthogy a nyálkahártya gyorsan gyógyul. Hosszabb időtartamú lokális toxikus hatások még fontosabbak akkor, ha az orr nyálkahártyáján történő átha80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · · · tolást növelő anyagokat használnak. Bizonyos felületaktív anyagok, így a polioxi-etilén-9-lauril-éter által a nyálkahártyában kiváltott krónikus errózió gyulladást, szövetburjánzást, szövetátalakulást és a szokásos orrfunkciókban bekövetkező károsodást idéz elő [Lee W. A. és Longenecker J. P.: BioPharm. 30-37 (1988)].
Szakirodalmi közlemények arról számolnak be, hogy biosók károsítják a nyálkahártya szerkezetét [Martin G. P. és Marriot C.: J. Pharm. Pharmacol. 31, 754 (1981)], gyorsítják foszfolipid és protein leadását a nyálkahártyákból [Whitmore D. A. és munkatársai: J. Pharm. Pharmacol. 31, 277 (1979)], és károsítják a bél nyálkahártyáját [Kimura T. és munkatársai: J. Nut. Sci. Vitaminol. 28, 483 (1982)]. A krónikus erózió a levegőben lévő baktériumok és ártalmas anyagok számára szabaddá teszi az orrba történő bejutást [Lee W. A. és Longenecker J. P.: Biopharm. 30-37 (1988)]. A fentiek alapján igény mutatkozik új felületaktív anyagok kifejlesztése iránt, amelyek fokozzák hatóanyagok leadását a nyálkahártyán keresztül anélkül, hogy izgatnák azt.
A fentiek alapján a találmány gyógyászati készítmény farmakológiái hatóanyag állatok nyálkahártyáján keresztül történő felvételének fokozására, amely a következő komponenseket tartalmazza:
a) Quillaja saponaria nyers extraktumából kinyerhető, kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója, amely QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 csoportja metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá lehet redukálva; vagy ahol a kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízis útján való eltávolításával a megfelelő glikoziddá van alakítva; vagy ahol a kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid csoportja metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá lehet redukálva, és ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízis útján való eltávolításával a megfelelő glikoziddá van alakítva;
b) gyógyászati hatóanyag és adott esetben
c) gyógyászatilag elfogadható hordozó.
A találmány továbbá eljárás farmakológiai hatóanyag állatok nyálkahártyáján keresztül történő felvételének fokozására. Az eljárás során a nyálkahártyát olyan gyógyászati készítménynyel érintkeztetjük, amely a következő komponenseket tartalmazza:
a) Quillaja saponaria nyers extraktumából kinyerhető, kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója, amely QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17,
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 ··· · ·· · · · · · · · ······ · · · _ y _ ··· · ···· ···· ··
QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid csoportja metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá lehet redukálva; vagy ahol a kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója QA-17, QA-18, QA-21,
QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízis útján való eltávolításával a megfelelő glikoziddá van alakítva; vagy ahol a kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója QA-17,
QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21,
QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid csoportja metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá lehet redukálva, és ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízis útján való eltávolításával a megfelelő glikoziddá van alakítva;
b) gyógyászati hatóanyag és adott esetben
c) gyógyászatilag elfogadható hordozó.
A leíráshoz csatolt ábrák közül az 1. ábra QA-17, QA-18, és QA-21 szerkezeti kapcsolatait mutatja.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 * ·
származék R1 R2 R3 M/Z reverz fázisú retenciós idő (min)
A fragmentum B fragmentum
QA-17 glükóz ramnóz apióz 2321 8,0 26,7
QA-18 glükóz H apióz 2174 8,0 26,4
QA-21-V1 H H apióz 2012 9,3 25,6
QA-21-V2 H H xilóz 2012 9,3 25,6
A 2A ábra PBS (O), QA-21 (·) és QA-21 (A) hemolitikus aktivitásának diagramját mutatja, ahol az aldehidcsoport metilén-alkohollá van redukálva. A 2B ábra QA-18-H (O), QA-21-H (·), QA-7 (□) és QA-21 (A) hemolitikus aktivitásának diagramját tünteti fel.
A 3A ábrán olyan diagram látható, amely patkányok vércukorszintjét tünteti fel 20 μΙ sóoldat szembe történő beadása után. A 3B ábrán feltüntetett diagramon patkány vércukorszintje látható 20 μΙ 0,5 tömeg%-os, kereskedelmi forgalomban kapható nyers Gypsophilla szaponin (gyártó cég: Sigma Chemical Corporation) és 0,4 tömeg% sertésinzulin szembe történő beadása után. A 3C ábrán olyan diagram látható, amely patkány vércukorszintjét tünteti fel 20 μΙ 0,5 tömeg%-os nyers (vizes extraktumból ultraszűréssel tisztított) Quillaja saponaria szaponin és 0,5 tömeg% sertésinzulin szembe történő beadása után.
A 4. ábra 20 μΙ 0,1 tömeg%-os (inzulinmentes) QA-21-H szembe történő beadásának hatását mutatja patkányok vércukorszintjére.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · · · ·· · · «·· · · · ·· • · · « · « ······ · ·« w Q _ ·«« · ··«< «·«· ·Az 5. ábra 20 μΙ 0,025 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat szembe történő beadásának eredményeit ábrázolja három hím patkány átlagos vércukorszintjére.
Az 6. ábra 20 μΙ 0,05 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat szembe történő beadásának eredményeit ábrázolja három hím patkány átlagos vércukorszintjére.
Az 7. ábra 20 μΙ 0,1 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat szembe történő beadásának eredményeit ábrázolja négy hím patkány átlagos vércukorszintjére.
A 8. ábra 500 g testtömegű patkányok vércukorszintjének csökkenését mutatja szembe beadott 10 μΙ/szem mennyiségű 0,01 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat (1. patkány: ); 10 μΙ/szem mennyiségű 0,01 tömeg%-os tiszta QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat (2. patkány: (♦); és 20 μΙ/szem mennyiségű 0,01 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat (3. patkány: x) esetén.
A 9A ábra Quillaja saponaria kéregextraktumának fordított fázisú HPLC elemzési eredményeit tünteti fel. A 9B ábra Quillaja saponaria kéregextraktumának lúgos hidrolízis utáni fordított fázisú HPLC elemzési eredményeit tünteti fel.
A 10A ábra QA-18-ból lúgos hidrolízis után kapott tisztított QA-18-H fordított fázisú HPLC elemzésének eredményeit mutatja. A 10B ábra QA-21-ból lúgos hidrolízis után kapott tisztí80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 tott QA-21-H fordított fázisú HPLC elemzésének eredményeit mutatja.
A 11. ábra a hatásjavító szer aktivitását tünteti fel QA-21 (O), a triterpén-aldehidnél glicinnel lefolytatott reduktív aminálás útján módosított QA-21 (·), a triterpén-aldehidnél etilén-diaminnal lefolytatott reduktív aminálás útján módosított QA-21 (□) és a triterpén-aldehidnél etil-aminnal lefolytatott reduktív aminálás útján módosított QA-21 (Δ) esetén.
A 12. ábrán a hatásjavító szer aktivitása látható QA-21 (O) és a triterpén-aldehidnél a megfelelő metilén-alkohollá történő redukálással módosított QA-21 (·) esetén.
A találmány azon a felismerésen alapszik, hogy a szaponinok okozta irritálás - gyógyászati készítmény alkotórészeként farmakológiai hatóanyag nyálkahártyán keresztül történő felvételének fokozására történő alkalmazás esetén - csökkenthető a QA-17, QA-18 és QA-21 aldehidcsoportjának módosítása útján. A felsorolt vegyületek a Quillaja Saponaria Molina kérgében jelen vannak, és abból tisztított állapotban kinyerhetők.
A találmány értelmében módosított szaponinokat használunk, amelyek állatnak beadva lényegében nem mutatnak hatásjavító vagy irritáló hatást, azonban a hatóanyag transzportja szempontjából kellő oldó hatást őriznek meg. Ilyen módosított szaponinokat különböző módon állíthatunk elő. Tisztított QA-17, QA-18, QA-21 vagy azok elegyeinek aldehidcsoportját vagy Quillaja Saponaria Molina kéregből kinyerhető tisztított, és QA-17-, QA-18- és QA-21-tartalmú frakciók aldehidcsoportjait enyhe redukálószerrel, így nátrium- vagy lítium-bór-hidrid80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · ·· ·· ·· ··· * · · ♦ · » · · · · · • *<··· · · · _ ίί _ ··· · ·«*· ··<·· »· dél a megfelelő alkohollá redukálhatjuk (lásd az I. reakcióvázlatot). Eljárhatunk úgy is, hogy QA-17, QA-18 és QA-21, azok elegyeinek, vagy Quillaja Saponaria Molina kérgéből kinyerhető tisztított, QA-17-, QA-18- és QA-21-tartalmú frakcióinak aldehidcsoportját primer amin és redukálószer jelenlétében reduktív aminálásnak vetjük alá, amelynek során QA-17, QA-18 és/vagy QA-21 megfelelő aminszármazékát kapjuk (lásd a II. reakcióvázlatot).
A reduktív alkilezés során használható primer aminok nem korlátozó jellegű felsorolása a következő: metil-amin, etil-amin, propil-amin, etilén-diamin, propilén-diamin, 2-metil-2-amino-etil-amin, 3-metil-3-amino-propil-amin, 4-metil-4-amino-butil-amin, 5-metil-amino-pentil-amin, 6-metil-amino-hexil-amin, 3-metil-amino-2-metil-propil-amin, 2-etil-amino-etil-amin, 3-etil-amino-propil-amin, 4-etil-amino-butil-amin, 5-etil-amino-pentil-amin, 6-etil-amino-hexil-amin, 3-propil-amino-propil-amin, 4-propil-amino-butil-amin, 5-propil-amino-pentil-amin, 6-propil-amino-hexil-amin, 2-(N,N’-dimetil-amino)-etil-amin, 3-dimetil-amino-propil-amin, 4-dimetil-amino-butil-amin, 5-dimetil-amino-pentil-amin, 6-dimetil-amino-hexil-amin, 3-dimetil-amino-2-metil-propil-amin, 2-(N,N’-dietil-amino)-etil-amin, 3-diétil-aminő-propil-amin, 4-dietil-amino-butil-amin, 5-dietil-amino-pentil-amin, 6-dietil-amino-hexil-amin, 3-dipropil-amino-propil-amin,
4-dipropil-amino-butil-amin, 5-dipropil-amino-pentil-amin, 6-dipropil-amino-hexil-amin, 5-dietil-amino-pentán-2-amin és aminosavak, így glicin, tirozin, fenilanalin, metionin, alanin, szerin, izoleucin, treonin, valin, prolin, lizin, hisztidin, glutamin, gluta80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · «· 99 «· ··· · * · · · • · · · · · ·>«··· · ··
- 12 - ............ ·' minsav, triptofán, arginin, aszpartámsav, aszparagin vagy cisztein.
Előnyösen Quillaja Saponaria eredetű szaponin tisztított frakcióját használjuk, ahol az észter oldalláncot a hatásjavító aktivitás csökkentésére hidrolizáltuk (lásd a III. reakcióvázlatot). E hidrolízis reakciótermékei (QA-18-H és QA-21-H) fokozzák gyógyászati hatóanyagok felvételét nyálkahártyán keresztül. Ilyen hidrolízist lefolytathatunk tisztított szaponinokkal vagy nyers eleggyel, amely utóbbi esetben a módosított szaponinokat utólagosan tisztítjuk. A 10. ábra tisztított QA-18 és QA-21 kiindulási anyagokból kapott QA-18-H és QA-21-H fordított fázisú HPLC elemzésének eredményeit mutatja be. A
9. ábra azt mutatja, hogy túlnyomó részben a QA-18-H és QA-21-H termékek fordulnak elő, és a Quillaja saponaria kéregből származó nyers extraktum lúgos hidrolízise után könnyen tisztíthatok.
A gyulladásos reakció és a maradó hatásjavító aktivitás csökkentésére QA-18-H és QA-21-H előnyösen tovább módosítható. Amint a IV. reakcióvázlaton látható, QA-18-H és QA-21-H aldehidcsoportja nátrium- vagy lítium-bór-hidriddel a megfelelő metil-alkohollá redukálható. Egy további lehetőségként az aldehidcsoportot primer aminnal és nátrium- vagy lítium-bór-hidriddel reduktív aminálás útján a megfelelő szekunder aminná alakíthatjuk (lásd a IV. reakcióvázlatot).
A találmány tehát gyógyászati készítmény farmakológiai hatóanyag állatok nyálkahártyáján keresztül történő felvételének fokozására, amely a következő komponenseket tartalmazza:
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
a) Quillaja saponaria nyers extraktumából kinyerhető, kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója, amely QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid csoportja metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá lehet redukálva; vagy ahol a kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója QA-17, QA-18, QA-21,
QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízis útján való eltávolításával a megfelelő glikoziddá van alakítva; vagy ahol a kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója QA-17,
QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol QA-17, QA-18, QA-21,
QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid csoportja metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá lehet redukálva, és ahol QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízis útján való eltávolításával a megfelelő glikoziddá van alakítva;
b) gyógyászati hatóanyag és adott esetben
c) gyógyászatilag elfogadható hordozó.
Az aminocsoportok általános képlete -N(R)-R’, amely képletben R jelentése hidrogénatom, R’jelentése hidrogénatom, 1-8 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkil-amino-alkil80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • ··· · · · ·
- ’** * ···· ···· ·
-csoport, allilcsoport, aralkilcsoport, 3-8 szénatomos cikloalkilcsoport, arilcsoport vagy (a) általános képletű csoport,
R”
I (a)
-CH-CO2H amely képletben
R” jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, amely adott esetben helyettesített lehet, ahol a helyettesítő fenilcsoport, hidroxi-fenil-csoport, indolilcsoport, merkaptocsoport, 1-4 szénatomos alkil-tio-csoport, hidroxil-, karboxi-, amino-, guanidino-, imidazolil- vagy karbamilcsoport lehet; vagy
R és R” együtt pirrolidinil- vagy piperidinilgyűrűt alkothatnak.
Jellemző 1-8 szénatomos alkilcsoportok lehetnek a metil-, etil-, η-propil-, i-propil-, η-butil-, terc-butil-, i-butil-, pentil- és hexilcsoport.
Jellemző 3-8 szénatomos cikloalkilcsoportok lehetnek a ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptil- és ciklooktilcsoport.
Az arilcsoportok jellemző képviselői többek között a fenil-, naftil-, fenantril-, antracil- és fluorenilcsoport.
Jellemző aralkilcsoportok többek között a fent felsorolt arilcsoporttal helyettesített 1-8 szénatomos alkilcsoportok, így a fenetil-, fen i I - pro p i I-, fenil-butil-, fenil-pentil- és fenil-hexilcsoport, valamint azok elágazó láncú izomerei.
Jellemző 2-12 szénatomos alkil-amino-alkil-csoportok többek között a 2-metil-amino-etil-, 3-metil-amino-propil-, 4-metil-amino-butil-, 5-metil-amino-pentil-, 6-metil-amino-hexil-, 3-me80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · tiI-amiη0-2-metil-propiI-, 2-etil-amino-etil-, 3-etil-amino-propil-,
4- etil-amino-butil-, 5-etil-amino-pentil-, 6-etil-amino-hexil-, 3-propil-amino-propil-, 4-propil-amino-butil-, 5-propil-amino-pentil-, 6-propil-amino-hexil-, 2-(N,N’-dimetil-amino)-etil-, 3-dimetil-amino-propil-, 4-dimetil-amino-butil-, 5-dimetil-amino-pentil-,
6-dimetil-amino-hexil-, 3-dimetil-amino-2-metil-propil-, 2-(N,N’-dietil-amino)-etil-, 3-dietil-amino-propil-, 4-dietil-amino-butil-,
5- dietil-amino-pentil-, 6-dietil-amino-hexil-, 3-dipropil-amino-propil-, 4-dipropil-amino-butil-, 5-dipropil-amino-pentíl-, 6-dipropil-amino-hexil- vagy 5-dietil-amino-pentán-2-il-csoport.
Az US 5 057 540 szerint szaponinok tisztíthatok a dél-amerikai Quillaja saponaria Molina fa kérgének vizes extraktumából. Legalább 22 szaponin aktivitású csúcs választható el. A Quillaja eredetű tisztított szaponinok főtömegét QA-7, QA-17, QA-18 és QA-21 alkotja. Ezeket a szaponinokat nagy nyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) és szilikagélen lefolytatott kis nyomású kromatográfiás eljárással tisztították. QA-21 tovább tisztítható hidrofil kölcsönhatású kromatográfiás eljárás (HILIC) útján, és két - QA-21-V1 és QA-21-V2 - csúccsá rezolválható, amelyek különböző vegyületek. így a „QA-21” szimbólum a QA-21-V1 és QA-21-V2 komponensek elegyét jelöli, amelyek Vydac C4 típusú oszlopon (szemcseméret: 5 μιτι, pórusméret: 330 A, belső átmérő: 4,6 mm, hossz: 25 cm) 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó (58:42 térfogatarányú) metanokvíz eleggyel lefolytatott fordított fázisú HPLC elemzéssel különálló csúcsként jelennek meg. A tovább tisztított komponensekkel lefolytatott kísérleteket vagy kapott eredményeket ismertetve e komponensek frakcióira a QA-21-V1 és QA-21-V2 jelöléssel hivatkozunk.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
A Quillaja saponaria Molina kérgéből származó szaponinok tisztítására a kéreg vizes extraktumát vízzel szemben dializáljuk. A dializált extraktumot száraz állapot eléréséig liofilizáljuk, metanollal extraháljuk, majd a metanolban oldható extraktumot szilikagélen lefolytatott kromatográfiás eljárással és fordított fázisú nagy nyomású folyadékkromatográfiás eljárással (RP-HPLC) tovább frakcionáljuk. Az egyes szaponinokat fordított fázisú HPLC útján választjuk el. Legalább 22 (QA-1 - QA-22 jelzésű) csúcs választható el. Mindegyik csúcs szénhidrát csúcsnak felel meg, amely a fordított fázisú vékonyréteg-kromatográfiás eljárással csak egyetlen sávot ad. Az egyes komponenseket a Vydac C4 HPLC oszlopon kapott retenciós idők alapján a következők szerint azonosítottuk:
csúcs retenciós idő (min)
QA-1 oldószerfront
QA-2 4,6
QA-3 5,6
QA-4 6,4
QA-5 7,2
QA-6 9,2
QA-7 9,6
QA-8 10,6
QA-9 13,0
QA-10 17,2
QA-11 19,0
QA-12 21,2
QA-1 3 22,6
QA-14 24,0
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 csúcs retenciós idő (min) • · · · · ·« • · · · · · • · · · · • · · · · · ·
QA-15 25,6
QA-16 28,6
QA-17 35,2
QA-18 38,2
QA-19 43,6
QA-20 47,6
QA-21 51,6
QA-22 61,0
A lényegében tiszta QA-17 szaponint az jellemzi, hogy hatásjavító aktivitása van, (antronnal meghatározva a száraz tömegre vonatkoztatva) mintegy 29 tömeg% szénhidrátot tartalmaz, UV abszorpciójának maximuma 205 és 210 nm között van. Retenciós ideje Vydac C4 típusú oszlopon (töltet: 5 μίτι méretű szemcsék, pórusméret: 330 A, belső átmérő: 4,6 mm, hossz: 25 cm) RP-HPLC útján meghatározva mintegy 35 perc 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó (58:42 térfogatarányú) metanol:víz oldószerben 1 ml/min áramlási sebességnél, ahol az eluálás Vydac C4 típusú oszlopból (töltet: 5 pm méretű szemcsék, pórusméret: 330 A, belső átmérő 10 mm, hossz: 25 cm) 63-64 térfogat%-os metanollal történik 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó oldószerben gradiens eluálással 50-től 80 térfogat%-ig változó mennyiségű metanollal. A kritikus micelláris koncentráció vízben 0,06 vegyes%, foszfáttal pufferolt sóoldatban pedig 0,03 vegyes%. Legalább 25 pg/ml koncentrációban juh vörösvérsejtek homolízisét okozza. A következő monoszacharid-csoportokat tartalmazza: láncvégi ramnóz, láncvégi
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · · · · · ······ · · . 18 - ............
xilóz, 2-fukóz, 3-xilóz, 3,4-ramnóz, 2,3-glükuronsav, láncvégi glükóz, 2-arabinóz, láncvégi galaktóz és (meg nem határozott kapcsolódású) apióz.
A lényegében tiszta QA-18 szaponint az jellemzi, hogy hatásjavító aktivitása van, (antronnal meghatározva a száraz tömegre vonatkoztatva) mintegy 25-26 tömeg% szénhidrátot tartalmaz, UV abszorpciójának maximuma 205 és 210 nm között van. Retenciós ideje Vydac C4 típusú oszlopon (töltet: 5 μηι méretű szemcsék, pórusméret: 330 A, belső átmérő: 4,6 mm, hossz: 25 cm) RP-HPLC útján meghatározva mintegy 38 perc 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó (58:42 térfogatarányú) metanokvíz oldószerben 1 ml/min áramlási sebességnél, ahol az eluálás Vydac C4 típusú oszlopból (töltet: 5 pm méretű szemcsék, pórusméret: 330 A, belső átmérő 10 mm, hossz: 25 cm) 64-65 térfogat%-os metanollal történik 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó oldószerben gradiens eluálással 50-től 80 térfogat%-ig változó mennyiségű metanollal. A kritikus micelláris koncentráció vízben 0,04 vegyes%, foszfáttal pufferolt sóoldatban pedig 0,02 vegyes%. Legalább 25 pg/ml koncentrációban juh vörösvérsejtek homolízisét okozza. A következő monoszacharid-csoportokat tartalmazza: láncvégi arabinóz, láncvégi apióz, láncvégi xilóz, láncvégi glükóz, láncvégi galaktóz, 2-fukóz, 3-xilóz, 3,4-ramnóz és 2,3-glükuronsav.
A lényegében tiszta QA-21 szaponint az jellemzi, hogy hatásjavító aktivitása van, (antronnal meghatározva a száraz tömegre vonatkoztatva) mintegy 22 tömeg% szénhidrátot tartalmaz, UV abszorpciójának maximuma 205 és 210 nm között van. Retenciós ideje Vydac C4 típusú oszlopon (töltet: 5 pm
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · • « · · · « méretű szemcsék, pórusméret: 330 A, belső átmérő: 4,6 mm, hossz: 25 cm) RP-HPLC útján meghatározva mintegy 51 perc 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó (58:42 térfogatarányú) metanokvíz oldószerben 1 ml/min áramlási sebességnél, ahol az eluálás Vydac C4 típusú oszlopból (töltet: 5 pm méretű szemcsék, pórusméret: 330 A, belső átmérő 10 mm, hossz: 25 cm) 69-70 térfogat%-os metanollal történik 40 mmol/l ecetsavat tartalmazó oldószerben gradiens eluálással 50-től 80 térfogat%-ig változó mennyiségű metanollal. A kritikus micelláris koncentráció vízben 0,03 vegyes%, foszfáttal pufferolt sóoldatban pedig 0,02 vegyes%. Legalább 25 pg/ml koncentrációban juh vörösvérsejtek homolízisét okozza. A komponensek frakciói, a lényegében tiszta QA-21-V1 és QA-21-V2 szaponinok azonos molekulatömeget és FAB-MS útján azonos spektrumokat mutatnak. A két komponens csak abban különbözik, hogy QA-21-V1-ben lévő láncvégi apióz helyett a QA-21-V2-ben xilóz van (így az utóbbiban két láncvégi xilóz található, apióz viszont nem fordul elő). A két komponens ezenkívül a következő monoszacharidokat tartalmazza: láncvégi arabinóz, láncvégi apióz, láncvégi xilóz, 4-ramnóz, láncvégi galaktóz, 2-fukóz, 3-xilóz és
2,3-glükuronsav.
A lúgos hidrolízis termékeit a következő módon állítottuk elő. QA-18 rövid idejű lúgos hidrolízise egyetlen fő szénhidráttartalmú lúgos hidrolízisterméket eredményezett (jelölése: QA-18-H). Tisztított QA-18-H terméket QA-18-ból állítottunk elő, és azt a következő módon választottuk el.
ml (5 mg/ml koncentrációjú) QA-18 inkubálását szobahőmérsékleten 25 μΙ 1 mol/l koncentrációjú NaOH jelenlétében
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 folytattunk le 15 percen keresztül. A reakciót 100 μΙ 1 mol/l koncentrációjú ecetsavoldat hozzáadásával befagyasztottuk. A hidrolízishez ilyen körülményeket használva a QA-18 vegyületet teljesen a fő hidrolízistermékké (QA-18-H) alakítottuk át, ami a hidrolizálatlan QA-18 esetén jellemző 66,8 perchez viszonyítva 8,0 perc retenciós idejű csúcs alakjában eluálódik, ami QA-18-H megnövekedett hidrofil jellegét jelzi. [A kromatografálás Vydac C4 típusú oszlopon (belső átmérő: 4,6 mm, hossz: 25 cm) 0,1 tömeg% trifluor-ecetsavat tartalmazó 55:45 térfogatarányú metanoLvíz elegyben történt 180 percen át 1 ml/min áramlási sebességnél 64:36 térfogatarányú metanoLvíz elegyig terjedő gradienssel.] A tiszta QA-18-H vegyületet tartalmazó (8,0 perc retenciós idejű) csúcs anyagát további jellemzők meghatározására összegyűjtöttük. QA-21 QA-21-H-ként jelzett hidrolízistermékét hasonló módon állítottuk elő és tisztítottuk. QA-21-H rentenciós ideje 9,3 perc volt, míg a hidrolizálatlan QA-21 vegyületé 80,4 perc. Ezek a hidrolízistermékek a HPLC és fordított fázisú vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal kapott retenciós idő alapján azonosak a NH4HCO3-tartalmú közegben lefolytatott kíméletes lúgos hidrolízist használó eljárás fő hidrolízistermékeivel [Higuchi és munkatársai: Phytochemistry 26, 229 (1987)], amint az 5. táblázat adataiból látható. Ezenkívül ezeket a QA-18-H és QA-21-H termékeket kapjuk fő hidrolízistermékként „Quil-A” nyers szaponinelegy hidrolízise során, amelyben QA-7, QA-17, QA-18 és QA-21, valamint egyéb szaponinok vannak jelen. Ez azt igazolja, hogy a QA-21-H és QA-18-H ugyanazon hidrolízistermékek, mint amelyeket
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
szerkezeti jellemzés céljára Higuchi és munkatársai izoláltak (lásd az utolsóként megadott irodalmi hivatkozást).
5. táblázat
A lúgos hidrolízis fő termékeinek retenciós ideje
QA-17-H
QA-18-H
QA-21-H hidrolizált „Quil-A
8,0a
8,0a
8,2b
9,3a
9,5b
8,2a, 9,3a.
a Cambridge BioScience szerinti hidrolízis feltételei: 5 mg/ml szaponin, pH = 13, reakcióidő: 15 perc szobahőmérsékleten, b Higuchi és munkatársai által lefolytatott hidrolízis körülményei: 5 mg/ml szaponin, 6 tömeg% NH4HCO3, (1:1 térfogatarányú) metanokvíz elegy, reakcióidő: 60 perc 100 °C hőmérsékleten,
HPLC körülmények: Vydac C4 típusú oszlop, szemcseméret: 5 pm, pórusméret: 300 A, belső átmérő: 4,6 mm, hossz: 25 cm, A oldószer: 0,1 tömeg% trifluor-ecetsav vízben,
B oldószer: 0,1 tömeg% trifluor-ecetsav metanolban, gradiens: 55-64 térfogat% B 180 perc alatt, áramlási sebesség: 1 ml/min.
A módosított szaponinokat tartalmazó találmány szerinti készítmények alkalmazhatók bármilyen nagy számú farmakológiai hatóanyag nyálkahártyán keresztül történő felvételének fokozásá80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • ·· ra. A farmakológiai hatóanyagok közül előnyösek a polipeptidek, a találmány azonban nem korlátozódik ilyen értelemben. A módosított szaponinokat tartalmazó találmány szerinti készítmények alkalmazhatók bármilyen farmakológiai hatóanyag felvételének fokozására, amelynek molakulatömge legfeljebb 200 000.
A találmány szerinti készítményekkel együtt beadható polipeptidek nem korlátozó jellegű felsorolásában említhetők az inzulin, inzulin típusú növekedési faktor, növekedési hormon, mellékpajzsmirigy-hormon, renin, tejképző hormon, pajzsmirigy működést serkentő hormon, mellékvesekéreg-hormon, tüszőt serkentő hormon, középső magzatburok gonadotropin hormon, lutenizációs hormon, lutenizációs serkentő faktor, (α-, β- és γ-) interferon, nyirokkeringést befolyásoló anyagok, interleukin, tumor elhalást faktor, (monoklonális és poliklonális) antitestek, így IgG, enkefalinok [Su K. S. E. és munkatársai: J. Pharm. Sci. 74 394-98 (1985)], kalcitonin [McMartin C. és Peters G.: Delivery Systems Fór Peptide Drugs, S. S. Davis és munkatársai (szerkesztők), 249-53, Planum Press New York (1986)], szomatosztatin [McMartin C. és Peters, G.: Delivery Systems Fór Peptide Drugs, Davis, S. S. és munkatársai (szerkesztők) 255-63, Planum Press New York (1986)], metionil növekedési hormon [Moore, J. A. és munkatársai: Delivery Systems Fór Peptide Drugs, Davis, S. S. és munkatársai (szerkesztők) 317-329, Planum Press New York (1986)], oxitocin [Hendricks C.
H. és Pose S. V.: J. A. M. A. 175, 384-387 (1961)], vazopreszszin és dezmopresszin [Richson D. W. és Robinson A. G.: Ann. Int. Med. 103, 228-239 (1985)], lutenizációs hormont termelő hormon [Fink G. és munkatársai, J. Endocr. 63, 351-360
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 ··· ♦··· ···· (1974)], nafarelin-acetát [Anik, S. T. és munkatársai: J. Pharm. Sci. 73, 684-685 (1984)], szekretin [Ohwaki T. és munkatársai: J. Pharm. Sci. 74, 5510-552 (1985)], glukagon [Pontiroli A. E. és munkatársai: Acta Diabetol Let. 22, 102-110 (1985)], pimolol [Kaila T. és munkatársai: J. Ocular Pharm. 1, 79-83 (1985)], tirotropint termelő hormon [Sandow J. és Petri W.: Trans Nas. System. Med., (szerkesztő: Chien Y. W.) Elsevier Science Publishers Β. B., Amsterdam, 183-199 (1985)].
A találmány szerinti készítményeket ezenkívül alkalmazhatjuk enzimek, transzferázok, hidrolázok, izomerázok, proteázok, ligázok és oxidoreduktázok, így eszterázok, foszfatázok, glikozidázok és peptidázok továbbá enziminhibitorok, így leupeptin, kimosztatin és pepsztatin, valamint növekedési faktorok, így tumor vaszkularizációs faktor nyálkahártyán keresztül történő felvételének fokozására.
Egyéb alkalmas farmakológiai hatóanyagok a zsíroldható szteroidok, így a progeszteron, esztrogének és androgének, valamint a zsíroldható A, D, E és K vitaminok.
A kis és nagy molekulatömegű polipeptideken kívül a farmakológiai hatóanyagok lehetnek gyulladásgátló szerek (így indometacin, flurbiprofén, ketoprofén, ibuprofén, fenilbutazon), antibiotikumok (így β-laktámok, amino-glikozidok, makrolidok, tetraciklinek, priridonkarbonsavak, foszfomicin), tumorellenes szerek (így adriamicin, ciszplatin, bleomicin, mitomicin, fluorouricil, vinblasztin, vinkrisztin), aminosavak (így aszkorbinsav, N-acetil-triptofán), gombaellenes szerek, prosztaglandinok, vitaminok, szteroidok és vírusellenes szerek (AZT, DDI, aciklovir, idoxuridin, amantidin és vidarabin).
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
- 24 • · · · · · • · · · · ···· · · · • ···· ···· ··
A találmány szerinti készítmények bármilyen nyálkahártya, így többek között a kötőhártya, orrgarat, szem, hüvely, vastagbél, húgycső, húgyhólyag, tüdő és vékonybél nyálkahártyája esetén alkalmazható. A találmány szerinti készítmények transzdermálisan, így tapasz részeként is beadhatók. A találmány szerinti készítményeket előnyösen szemcsepp alkotórészeként a szembe, aeroszol alkotórészeként nazálisán vagy szilárd ostya alkotórészeként orálisan adjuk be.
A találmány szerinti gyógyászati készítményeket ezenkívül tartós hatóanyag-leadású készítményként is formulálhatjuk. A módosított szaponint és a gyógyászati hatóanyagot így egyesíthetjük szilikon elasztomerrel, amely hosszabb időtartamon keresztül szabadítja fel a szaponint és a hatóanyagot. A szilikon elasztomer albumint is tartalmazhat (US 4 985 253). A hatóanyag szilikon elasztomerből való felszabadításának sebességét szabályozhatjuk azáltal, hogy a szilikon elasztomerbe vízoldható vagy zsíroldható elegyítőszert vagy társoldószert (így 400 típusú polietilénglikolt, 80 típusú poliszorbátot, nátrium-alginátot, L-alanint, nátrium-kloridot vagy polidimetil-sziloxánt) adunk. A felszabadítási sebesség gyorsítására bármilyen egyéb adalékanyagot is bevihetünk a szilikon elasztomerbe.
A farmakológiai hatóanyag és a szaponin olyan szabályozott hatóanyag-leadású készítményként is formulálható, amely polilaktid és/vagy poliglikolid kopolimert, (metil-, metil-hidroxi-etil-, hidroxi-propil-, hidroxi-etiI-, nátrium-karboxi-etil-) cellulóz polimert, poliakrilsavat, polimetil-metakrilátot, keresztkötéseket tartalmazó poliakrilsavat, poli(vinil-pirrolidon)-t, poli(vi80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · · · · · • ···· · · « · ··· · ···· ···« H nil-alkohol)-t, polietilénglikolt, agarózt vagy keresztkötések útján divinil-azo-benzolhoz kapcsolt sztirol/hidroxi-etil-metakrilát kopolimert tartalmaz. A farmakológiai hatóanyag és szaponin DEEA-dextrán mikrogyöngyök, keményítő mikrogyöngyök vagy albumin mikrogyöngyök alakjában is formulálható.
Ha a szaponint és a farmakológiai hatóanyagot tartós hatóanyag-leadású készítményként formuláljuk, a gyógyászati anyag tartalma a beadandó adagtól és a leadás sebességétől függően megfelelően szabályozható. Ha a készítmény mátrix típusú, a gyógyászati hatóanyag mennyisége általában 5-40 tömeg%, előnyösen legfeljebb 15 tömeg%, így legfeljebb 9 tömeg0/). Ha peptidhormont adunk be, annak mennyisége legfeljebb 6-10 tömeg% legyen. Albumin legfeljebb 50 tömeg%, előnyösen 20-30 tömeg% mennyiségben legyen jelen. A szilikon elasztomer legalább 50 tömeg%, előnyösen 70-90 tömeg% mennyiségben lehet jelen.
Tartós hatóanyag-leadású készítmények előállítása során az alkotórészeket bármilyen sorrendben összekeverhetjük. Ha a készítményhez albumint adunk, először a hatóanyagot és az albumint elegyítjük, előnyösen szilárd állapotban. A gyógyászati hatóanyag vizes oldatát is összekeverhetjük albuminnal, majd a kapott elegyet liofilizálva állítunk elő szilárd elegyet. A kapott elegyet ezután - adott esetben képlékenyítőszert (így dimetil-polisziloxánt) tartalmazó - elasztomer alapanyaggal egyenletesen eloszlatjuk, kötőanyagot adunk hozzá, majd a kapott elegyet keverjük. Az elegyet ezután megfelelő formába öntjük, amely szobahőmérsékleten lejátszódó kötés után az alakos készítményt eredményezi. Úgy is eljárhatunk, hogy ala80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · • · · · · · • · · · ······ · · * ♦·· ♦ ···♦ ··♦· ·» kos készítmény előállítására gyógyászati hatóanyagot nem tartalmazó maganyagot vonunk be a gyógyászati hatóanyagot és adott esetben albumint tartalmazó szilikon elasztomerrel. Ilyen maganyagok bármilyen nem-toxikus anyagot tartalmazhatnak. Maganyagként előnyösen elasztikus polimert használunk.
A találmány szerinti, tartós hatóanyag-leadású készítmények alakja bármilyen lehet, amely alkalmas arra, hogy a testüregekben lévő nyálkahártyával hatásosan érintkezzenek. így ha a gyógyászati hatóanyagot szublingválisan adjuk be, a tartós hatóanyag-leadású készítmény lehet ostya formájában. Ha a gyógyászati hatóanyag beadása a hüvelyen keresztül történik, a tartós hatóanyag-leadású készítmény lehet gyűrű alakú. Szembe történő beadás esetén a tartós hatóanyag-leadású készítmény lehet vékony implantátum alakjában.
A találmány szerinti készítmények rágógumi alkotórészeként is formulálhatók, ahol a rágógumi szapodilla latexéből származó gyantát tartalmaz. A rágógumi előnyösen édesítőszereket (cukrot, aszpartámot és hasonlókat), valamint illatosító anyagokat (fodormenta vagy borsos menta olaját vagy hasonlókat) is tartamaz, amelyek a farmakológiai hatóanyag esetleges kellemetlen ízét elfedik.
A találmány szerinti készítmények szembe vagy orrba történő beadás esetén vizes oldatban is formulálhatók, amelyet gyógyászatilag elfogadható pufferrendszer útján 3,0-8,0, legelőnyösebben 5,0-5,4 pH-értékre pufferolunk. A találmány értelmében bármilyen gyógyászatilag elfogadható pufferrendszer használható, amely alkalmas arra, hogy a pH értékét az elő80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · . 27 - ......
nyös tartományban tartsa. Jellegzetes pufferoló anyagként említhető többek között az acetát-, foszfát-, cifrát- és szukcinát-puffer. A pufferoló anyag koncentrációja 0,005-0,1 mol/l, legelőnyösebben mintegy 0,02 mol/l lehet.
Ha a találmány szerinti készítményeket szembe adjuk be, azok lehetnek nátrium-, kálium-, magnézium-, kalcium-, kloridés hidrogén-karbonát-ionokat, valamint dextrózt és glutationt tartalmazó oldatok (US 4 550 022 és US 4 443 432). A szembe beadandó folyadék lehet nátrium-klorid-, kálium-klorid-, kalcium-klorid- és N-2-hidroxi-etil-piperazin-N-2-etánszulfonsav-tartalmú vizes oldat is. Nátrium-hidroxid hozzáadása útján a pH-értékét beállíthatjuk 7,25-re, ezenkívül magnézium-szulfátot is adhatunk a készítményhez (GB 2 064 320). Az US 4 938 970 olyan öblítő oldatokat ismertet, amelyek a szembe beadva nem okoznak fájdalmat. A fenti szabadalmi leírás szerint a 6,85-8,0 pH-értékre pufferolt elektrolitoldat az alábbiakban felsorolt mennyiségű ionokat tartalmazza: K+: 2-10 mekv/l, Ca++: 0 mekv/l, Mg++: 1 mekv/l és Na+: 110-150 mekv/l.
Ezekhez a formulálásokhoz további anyagokat, így konzerválószereket, a szövetfolyadékkal izotóniás oldat eléréséhez szükséges sókat, valamint ismert, orron vagy szemen keresztül beadandó készítményekben szokásos adalékanyagokat is adhatunk.
Az „állat kifejezésen valamennyi állatot értjük, amelynek a találmány szerinti készítmények hasznosak lehetnek. Közöttük elsőként az ember említendő, a találmány azonban nem korlátozódik emberekre, hanem az összes olyan állatra is kiterjed, amelyekre a találmány kedvező hatást gyakorol.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · ♦ · · ·
Nazális beadás céljára a találmány szerinti készítmények előnyösen olyan tartályban vannak, amely lehetővé teszi a benne lévő készítménynek az orr nyálkahártyájára történő alkalmazását. Ilyen berendezések a technika állásából ismertek, ezek között vannak olyanok, amelyek cseppek vagy permet alakjában adják be a folyékony készítményeket. Minthogy polipeptidek adagolását a lehető legpontosabban kell ellenőrizni, általában olyan porlasztó berendezések használata előnyös, amelyekkel a beadott mennyiség az érzékeny - pontos tartományban szabályozható. Ilyen típusú alkalmas berendezések többek között a habködpermetező és aeroszoladagoló berendezések. Az utóbbi berendezés a találmány szerinti készítményt nazális beadásra alkalmas vivőközeggel együtt tartalmazza. A habködporlasztó berendezés megfelelő porlasztóval van ellátva, amely lehetővé teszi az abban lévő készítménynek az orr nyálkahártyájához történő juttatását. Ilyen berendezések a technika állásából ismertek.
A - nazális beadáshoz használt vagy szemcseppet tartalmazó - tartály tartalmazhat egyetlen adaghoz szükséges vagy több egymást követő dózishoz. így egy napi vagy heti alkalmazáshoz elegendő készítményt.
A következőkben a találmányt nem korlátozó jellegű példákkal szemléltetjük. A klinikai terápiában szokásos és szakember számára nyilvánvaló körülmények és paraméterek egyéb alkalmas változatai a találmány oltalmi körébe esnek.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 • · • · · · · · • «··· * · ·
- 29 - ............
1. példa
Glicin és etilén-diamin összekapcsolása QA-21 triterpén-aldehiddé reduktív alkilezés útján
Glicin QA-21 triterpén-aldehiddel való reagáltatásához 20 mg QA-21 vegyületet 0,8 ml 6,0 pH-jú, 50 térfogat% metanolt tartalmazó, 50 mmol/l koncentrációjú nátrium-foszfát-oldatban oldottunk. Glicin 0,5 ml térfogatú oldatát vízben készítettük el. A QA-21-oldathoz összesen 0,1 ml glilcint adtunk. 0,1 mol/l koncentrációjú nátrium-[ciano-trihidrido-borát](1-)-oldatot készítettünk 32 mg vegyületet 5 ml metanolban oldva. Az így elkészített oldatból összesen 0,1 ml-t adtunk a QA-21-oldathoz. A nátrium-[ciano-trihidrido-borát](1-) hozzáadását 2,5, 21, és 46 óra múlva megismételtük. A reakcióelegyet fordított fázisú HPLC útján tisztítottuk. A 31,3 percnél fellépő új csúcshoz tartozó anyagot összegyűjtöttük. Az új terméket FAB-MS vizsgálati adatai azonosították.
Etilén-diamin QA-21 triterpén-aldehiddel történő reagáltatásához 6 mg QA-21 vegyületet 1 ml 6-os pH-jú, 50 térfogat% metanolt tartalmazó, 20 mmol/l koncentrációjú trietil-amin-foszfát-oldatban oldottunk, összesen 0,15 ml 0,1 mol/l koncentrációjú vizes etilén-diamin-oldatot, majd 0,06 ml 50 mmol/l koncentrációjú metanolos nátrium-[ciano-trihidrido-borát](1-)-oldatot adtunk hozzá. 45 perc és 16 óra múlva a nátrium-[ciano-trihidrido-borát](1 -)-oldat további alikvot részeit adtuk a reakcióelegyhez. A reakcióelegyet fordított fázisú HPLC útján tisztítottuk, amelynek során a B oldószerre vonatkozó gradiens 30-60 térfogat% volt. A 19,6 perc retenciós időnél fellépő új csúcshoz tartozó anyagot összegyűjtöttük és kifagyasztással
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 szárítottuk. A kapott csúcsot fordított fázisú vékonyréteg-kromatográfiás eljárással elemezve megállapítottuk, hogy az ninhidrdinnel reagál, ami szabad aminocsoport QA-21-re történő bevitelére utal.
2. példa
QA-21 triterpén-aldehid redukálása metilén-alkohollá mg/ml végső QA-21-koncentráció beállításához 4 ml vízben lévő 12 mg QA-21-et 8 ml 6,0-os pH-jú 0,1 mol/l koncentrációjú nátrium-foszfáttal kevertünk össze. 0,01 mol/l koncentrációjú NaOH-oldatban nátrium-[tetrahidrido-borát](1-) 1 mol/I koncentrációjú törzsoldatát készítettük el. A QA-21-tartalmú elegyhez kis (közelítőleg 50 μΙ térfogatú) adagokban összesen 0,580 ml nátrium-[tetrahidrido-borát](1-)-oldatot adtunk. A nátrium-[tetrahidrido-borát](1-) végső koncentrációja 0,05 mol/l volt. Ezt a reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezt követően a reakciót 1 ml 1 mol/l koncentrációjú ecetsavoldattal befagyasztottuk. A nátrium-[tetrahidrido-borát](1 -) eltávolítására a QA-21 vegyületet C18-on nyelettük el. 4 ml reakcióelegyet C18-tartalmú patronon engedtünk keresztül. A patront ezután két alkalommal 5 ml vízzel mostuk. A QA-21 vegyületet ezután a C18-ról 5 ml metanollal eluáltuk. Ezt az eljárást a maradék 8 ml reakcióeleggyel megismételtük. A metanolt nitrogénáram alatt elpárologtattuk. A redukált QA-21 vegyületet ezután ismét feloldottuk 0,15 tömeg% trifluor-ecetsavat tartalmazó 30 térfogat%-os acetonitrilben, majd a visszamaradt redukálásán QA-21 eltávolítására HPLC útján tisztítottuk [Vydac C4 típusú oszlop, töltet: 5 pm méretű szemcsék, a B oldószer
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
- 31 gradiense 60 percen át 3 ml/min áramlási sebességnél 25-40 térfogat% (A oldószer: 0,15 tömeg% TFA vízben, B oldószer: 0,15 tömeg% TFA acetonitrilben)]. A redukált QA-21 eluálása során a retenciós idő 46,8 perc volt (a redukálatlan QA-21 48,1 perces retenciós idejéhez hasonlítva). A redukált QA-21 csúcsának megfelelő anyagot összegyűjtöttük, vízzel 1:2 térfogatarányban hígítottuk, majd a fentiekben leírt módon C18 patronokon összegyűjtöttük. A végterméket liofilizáltuk és immunizációs vizsgálatokhoz használtuk.
3. példa
Módosított QA-21 szaponinok hatásjavító aktivitása
A fenti módon előállított módosított QA-21 szaponinokat megvizsgáltuk a hatásjavító aktivitás szempontjából. C57 bl/6 típusú egereket (csoportonként 5 egyedet) immunizáltunk 25 pg ovalbumin és 10-50 pg QA-21 vagy származékai sóoldatban való szubkután beadása útján. Az emlékeztető immunizálásra a 14. napon került sor. A második immunizálás után enzim immunvizsgálat útján tanulmányoztuk az antitest válaszadást (teljes IgG). A triterpén-aldehid reduktív alkilezése útján előállított két származék a vizsgált dózisokban már nem mutatott hatásjavító aktivitást (11. ábra). Az a módosított QA-21, amelyben a triterpén-aldehid alkohollá van redukálva, megőrzött bizonyos mértékű hatásjavító aktivitást, azonban lényegesen nagyobb minimális effektív dózisnál, mint a QA-21 (12. ábra). A
6. táblázatban hasonló kísérletek eredményeit foglaljuk össze, ahol két hét időkülönbséggel két emlékeztető immunizálást végeztünk.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
- 32 6. táblázat
QA-21 és származékainak hatásjavító aktivitása
(10 pg) ovalbuminnal beadott (10 pg) szaponin összes IgG anti-ovalbumin (lóg titer)
- 2,59 ± 0,81
QA-21 4,06 ± 0,30
QA-21 -A-etil-amina 2,69 ± 0,59
QA-21 -A-etil én-dia mi na 2,68 ± 0,36
QA-21 -A-glicina 2,00 ± 0,19
triterpén-aldehidként módosítva
3. példa
Módosított szaponinok hemolitikus aktivitása
A hemolitikus vizsgálat a hártya átbocsátóképességének meghatározása útján közelítő tájékoztatást ad detergensekről, milyen mértékben képesek fokozni farmakológiai hatóanyagok felvételét nyálkahártyán keresztül. A vizsgálat során módosított szaponinok hígításait készítettük legömbölyített aljú mikrotiter lemezek egymást követő soraiban foszfáttal pufferolt sóoldattal végzett 1:2 térfogatarányú hígítással (100 μΙ/mérőhely). Mindegyik mérőhelyhez 10 pl normál juhvért adtunk Alsevers-oldatban (gyártó cég: Whittaker), és a mérőhelyek tartalmát alaposan elkevertük. A lemezeket szobahőmérsékleten 1 óra időtartamig inkubáltuk, ezt követően a hemolizálatlan sejtek kiülepítésére a lemezeket Sorvall RT6000 típusú berendezésben centrifugáltuk. A hemolízis elmaradására a mérőhely alján
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 lévő oldatlan sejtek alkotta pellet jelenlétéből következtettünk. A hemolitikus aktivitást a juh vörösvérsejtjeiből származó hemoglobulin növekedése révén határoztuk meg (amelyet a vörösvérsejt felülúszóban 562 vagy 570 nm hullámhosszúságon bekövetkező elnyelésként mértünk.
Amint a 2. ábrán látható, QA-21 nagyon kis koncentrációknál jelentősen növeli a nyálkahártyán való áthatolást. A redukált QA-21 is növeli a hártya átjárhatóságát, azonban a QA-21-hez viszonyítva kisebb mértékben és nagyobb koncentrációknál.
4. példa
Inzulin szembe történő beadásának fokozása módosított szaponinokkal
Sprague-Dawley típusú hím patkányokat xilazin-ketaminnal narkotizáltunk, és 30 perccel később (a 0 időpontban) szemcseppet adtunk be, amely sóoldatot, adott esetben 0,4 tömeg% inzulint (100 U/ml) és a következő szaponinok valamelyikét tartalmazta: Gypsophilla eredetű Sigma típusú nyers, extrahált szaponin (gyártó cég: Sigma Chemical Company, St. Louis Mo, USA) Quillaja eredetű nyers, extrahált szaponin és QA-21-H tisztított szaponin, amely QA-21 hidrolízisének származéka. Általában 20 μΙ szemcseppet vittünk be az egyik szembe, azonban esetenként mindkét szembe adagoltunk 20 μΙ szemcseppet. A vér D-glükóz-koncentrációját AccuCheck-II típusú vércukorszint-mérő műszerrel (gyártó cég: Boehringer-Mannheim) határoztuk meg. A mért adatok a szemcsepp beadása előtt és azt követően különböző időpontokban a vércukorszintet
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 jelentik. Az egyes vonalak - egyéb utalás hiányában - az egyes kísérleti állatok mérési adatait szemléltetik.
Amint a 3A ábrából látható, ha kontrollként patkányok szemébe sóoldatot adtunk be, a vércukorszint kis mértékben változott. Ha azonban 0,5 tömeg% Sigma típusú Gypsophilla eredetű szaponint is beadtunk 0,4 tömeg% szabályos sertésinzulinnal együtt, a vércukorszint jelentős csökkenése volt megfigyelhető (lásd a 3B ábrát). Ha 0,4 tömeg% szabályos sertésinzulinnal együtt 0,5 tömeg% nyers (módosítatlan) Quillaja eredetű szaponint adtunk be, a vércukorszint csökkenése kevésbé jelentős volt (lásd a 3C ábrát).
A 4. ábra 20 pl 0,1 tömeg%-os (inzulinmentes) QA-21-H szembe történő beadásának hatását mutatja (250-300 g testtömegű) hím patkányok vércukorszintjére. Amint az ábráról látható, inzulin hiányában nem figyelhető meg jelentős vércukorszint-csökkenés.
Az 5. ábra 20 μΙ 0,025 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat szembe történő beadásának eredményeit ábrázolja három (250-300 g testtömegű) hím patkány átlagos vércukorszintjére. Amint a diagramból látható, jelentős vércukorszint-csökkenés volt megfigyelhető.
Az, 6. ábra 20 μΙ 0,05 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat szembe történő beadásának eredményeit ábrázolja három (250-300 g testtömegű) hím patkány átlagos vércukorszintjére. Amint a diagramból látható, jelentős vércukorszint-csökkenés volt megfigyelhető.
Az 7. ábra 20 μΙ 0,1 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat szembe történő beadásának
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 ·· 0 eredményeit ábrázolja négy hím patkány átlagos vércukorszintjére. Amint a diagramból látható, jelentős vércukorszint-csökkenés volt megfigyelhető.
A 8. ábra 500 g testtömegű patkányok vércukorszintjének csökkenését mutatja szembe beadott 10 μΙ/szem mennyiségű 0,01 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat (1. patkány: ); 10 μΙ/szem mennyiségű 0,01 tömeg%-os tiszta QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat (2. patkány: (♦); és 20 μΙ/szem mennyiségű 0,01 tömeg%-os QA-21-H és 0,4 tömeg%-os szabályos sertésinzulin oldat (3. patkány: x) esetén. Az eredmények azt mutatják, hogy még 0,01 tömeg%-os QA-21-H oldat esetén is megfigyelhető volt bizonyos inzulintranszport.
A fenti kísérleti eredmények alapján az alábbi következtetésekhez juthatunk:
1. Valamennyi vizsgált szaponin inzulinfelvételre gyakorolt hatása gyorsan fellép, a vércukorszint-csökkentő hatás maximumát 60 perc múlva figyeltük meg.
2. Inzulin szemcseppből történő szisztémás felvételének fokozása tekintetében a Sigma típusú szaponinhoz hasonlítva a Cambridge Quillajua szaponin kevésbé hatásosnak, míg a Cambridge QA-21-H típusú szaponin jelentősen hatásosabbnak bizonyult.
3. A szaponin koncentrációjának csökkenésével a szem izgatása csökkent. 0,1 tömeg% tisztított QA-21-H izgatta a szemet, míg 0,05 tömeg% és 0,025 tömeg% QA-21-H fokozatosan gyengülő izgatást okozott. A két utóbbi, izgatást nem okozó dózis azonban hatástalan volt az
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001 ·· «
• t anyagtranszport szempontjából, ami arra utal, hogy ez a termék hatásosan használható izgatás okozása nélkül. Részlegesen tisztított (nyers) Quillaja szaponin is izgatta a szemet 0,5 tömeg% mennyiség esetén, amely dózis minimális hatásosságot mutatott az anyagtranszport fokozásában. Ez arra utal, hogy a nyers terméket nem használhatjuk hatásosan izgatás okozása nélkül.
A fenti leírásból szakember könnyen felismeri a találmány alapvető jellegzetességeit, és további kísérletezés nélkül a találmány számos változatát és módosított alakját képes megvalósítani anélkül, hogy eltávolodna a találmány szellemétől és oltalmi körétől.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
Szabadalmi igénypontok

Claims (13)

1. Gyógyászati készítmény farmakológiai hatóanyag állat nyálkahártyáján keresztül történő felvételének fokozására, azzal jellemezve, hogy a következő komponenseket tartalmazza:
a) Quillaja saponaria nyers extraktumából kinyerhető, kémiailag módosított szaponin vagy annak frakciója, amely QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 közül legalább egy komponenst tartalmaz, ahol a szaponin vagy annak frakciójának kémiai módosítása
i) QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 triterpén-aldehid csoportjának redukálása metilén-alkohol- vagy metilén-amino-csoporttá, vagy ii) QA-17, QA-18, QA-21, QA-21-V1 és QA-21-V2 zsírsav-arabinóz- vagy zsírsav-arabinóz-ramnóz-csoportjának hidrolízise a megfelelő gikoziddá, vagy iii) i) és ii) kombinációja,
b) gyógyászati hatóanyag és adott esetben
c) gyógyászatilag elfogadható hordozó.
2. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-17-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-alkohol-csoporttá van redukálva.
3. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-18-at tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-alkohol-csoporttá van redukálva.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
4. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-21-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-alkohol-csoporttá van redukálva.
5. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-21-V1-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-alkohol-csoporttá van redukálva.
6. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-21-V2-t tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-alkohol-csoporttá van redukálva.
7. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-17-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-amino-csoporttá van redukálva.
8. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-18-at tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-amino-csoporttá van redukálva.
9. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-21-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-amino-csoporttá van redukálva.
10. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-21-V1-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-amino-csoporttá van redukálva.
80814-7177/VO/LZs
P 95 00001
11. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy szaponinként vagy annak frakciójaként QA-21-V2-et tartalmaz, ahol az aldehidcsoport metilén-amino-csoporttá van redukálva.
12. A 7-11. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a metilén-amino-csoport jelentése -CH2-N(R)-R’ általános képletű csoport, amely képletben
R jelentése hidrogénatom, és
R’ jelentése hidrogénatom, 1-8 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkil-amino-alkil-csoport, allilcsoport, aralkilcsoport, 3-8 szénatomos cikloalkilcsoport, arilcsoport vagy (a) általános képletű csoport,
R
I (a)
-ch-co2h amely képletben
R” jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy fenil-, hidroxi-fenil-, indolil-, merkaptocsoporttal, 1-4 szénatomos alkil-tio-csoporttal, hidroxi-, karboxi-, amino-, guanidino-, imidazolil- vagy karbamilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomos alkilcsoport, vagy
R és R” együtt pirrolidinil- vagy pirperidinilgyűrűt alkot.
13. Gyógyászati készítmény farmakológiai hatóanyag állat nyálkahártyáján keresztül történő felvételének fokozására, azzal jellemezve, hogy a következő komponenseket tartalmazza:
HU9500001A 1992-07-02 1993-07-01 Methods for enhancing drug delivery with modified saponins HUT73814A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/906,870 US5273965A (en) 1992-07-02 1992-07-02 Methods for enhancing drug delivery with modified saponins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9500001D0 HU9500001D0 (en) 1995-03-28
HUT73814A true HUT73814A (en) 1996-09-30

Family

ID=25423119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9500001A HUT73814A (en) 1992-07-02 1993-07-01 Methods for enhancing drug delivery with modified saponins

Country Status (11)

Country Link
US (2) US5273965A (hu)
EP (1) EP0658111B1 (hu)
JP (1) JP3684370B2 (hu)
AU (1) AU687005B2 (hu)
BR (1) BR9306594A (hu)
CA (1) CA2139437A1 (hu)
DE (1) DE69326772T2 (hu)
FI (1) FI946173A (hu)
HU (1) HUT73814A (hu)
MX (1) MX9303977A (hu)
WO (1) WO1994001118A1 (hu)

Families Citing this family (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5583112A (en) * 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
NL9002314A (nl) * 1990-10-23 1992-05-18 Nederlanden Staat Immunogene complexen, in het bijzonder iscoms.
US5795870A (en) * 1991-12-13 1998-08-18 Trustees Of Princeton University Compositions and methods for cell transformation
US5693769A (en) * 1991-12-13 1997-12-02 Transcell Technologies, Inc. Glycosylated steroid derivatives for transport across biological membranes and process for making and using same
US5780444A (en) * 1991-12-13 1998-07-14 Trustees Of Princeton University Compositions and methods for cell transformation
US5650398A (en) * 1992-07-02 1997-07-22 Cambridge Biotech Corporation Drug delivery enhancement via modified saponins
EP0706376B2 (en) 1993-07-19 2007-08-08 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Anti-angiogenic compositions and methods of use
EP0873116A1 (en) * 1994-02-25 1998-10-28 New England Deaconess Hospital Corporation Anti-inflammatory and infection protective effects of sesamin-based lignans
US5397778A (en) * 1994-02-25 1995-03-14 New England Deaconess Hospital Corporation Enteral formulations for treatment of inflammation and infection
US5739118A (en) 1994-04-01 1998-04-14 Apollon, Inc. Compositions and methods for delivery of genetic material
AU686891B2 (en) * 1994-10-12 1998-02-12 Iscotec A.B. Saponin preparations and use thereof in iscoms
AUPM873294A0 (en) * 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
US5962428A (en) * 1995-03-30 1999-10-05 Apollon, Inc. Compositions and methods for delivery of genetic material
AU2275697A (en) * 1996-02-21 1997-09-10 Matrix Pharmaceutical, Inc. Use of cell membrane permeants in the treatment of cellular proliferative disea ses
AU773686B2 (en) * 1996-02-21 2004-06-03 Intarcia Therapeutics, Inc. Use of cell membrane permeants in the treatment of cellular proliferative diseases
EP0952771B1 (en) * 1996-12-02 2008-02-13 Antigenics Inc. Novel saponin compositions and uses thereof
AU741439B2 (en) 1996-12-30 2001-11-29 Battelle Memorial Institute Formulation and method for treating neoplasms by inhalation
US6080725A (en) * 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
KR100578317B1 (ko) * 1997-05-20 2006-05-11 갈레니카 파마슈티칼스 인크. 면역보강성 및 면역자극 활성을 갖는 트리테르펜 사포닌유사체
US8765177B2 (en) 1997-09-12 2014-07-01 Columbia Laboratories, Inc. Bioadhesive progressive hydration tablets
US7153845B2 (en) 1998-08-25 2006-12-26 Columbia Laboratories, Inc. Bioadhesive progressive hydration tablets
US20040265377A1 (en) * 1997-10-27 2004-12-30 Harry Seager Solid dispersing vaccine composition for oral delivery
US20070059327A2 (en) * 1998-01-15 2007-03-15 Wyeth Streptococcus equi compositions and methods of use
US7070799B1 (en) * 1998-02-10 2006-07-04 Generex Pharmaceuticals, Inc. Method for administering insulin to the buccal region
WO1999053933A1 (en) 1998-04-17 1999-10-28 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agrigulture And Agri-Food Canada Process for recovery and purification of saponins and sapogenins from quinoa (chenopodium quinoa)
US20010034330A1 (en) * 1998-08-10 2001-10-25 Charlotte Kensil Innate immunity-stimulating compositions of CpG and saponin and methods thereof
DE69929444T2 (de) * 1998-08-10 2006-09-28 Antigenics Inc., Woburn Cpg-zusammensetzungen, saponin-adjuvantien und verfahren zu deren verwendung
WO2000009075A2 (en) 1998-08-14 2000-02-24 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified saponins and the use thereof as adjuvants
NZ513935A (en) 1999-02-17 2004-02-27 Csl Ltd Immunogenic complexes and methods relating thereto
CA2391843C (en) * 1999-11-19 2011-10-18 Csl Limited Hcv vaccine compositions
CZ304942B6 (cs) * 2000-03-31 2015-02-04 Purdue Research Foundation Léčivo pro zvyšování specifické eliminace populace tumorových buněk a farmaceutický prostředek obsahující konjugát fosfát-FITC nebo fosfát-dinitrofenyl
JP2004505894A (ja) 2000-06-02 2004-02-26 ユニバーシティー　オブ　コネティカット　ヘルス　センター 免疫療法のためのα（２）マクログロブリンと抗原分子との複合体
US20020037290A1 (en) * 2000-08-07 2002-03-28 Armen Garo H. Compositions comprising heat shock proteins or alpha(2) macroglobulin, antigenic molecules and saponins, and methods of use thereof
NZ529347A (en) 2001-04-04 2008-01-31 Nordic Vaccine Technology As Use of at least one sterol capable of interacting with a nucleic acid and at least saponin to form immunostimulating complexes ( IMSCO )
KR20040015234A (ko) * 2001-05-02 2004-02-18 펄듀 리서치 파운데이션 대식세포 매개된 질환의 치료와 진단
US20030138434A1 (en) * 2001-08-13 2003-07-24 Campbell Robert L. Agents for enhancing the immune response
DK1434603T3 (da) * 2001-09-28 2010-04-26 Purdue Research Foundation Fremgangsmåde til behandling ved anvendelse af ligand-immunogen-konjugater
CA2471092A1 (en) * 2001-12-21 2003-07-10 Antigenics Inc. Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
EP1531859A4 (en) * 2002-05-31 2005-12-07 Univ Jefferson COMPOSITIONS AND METHODS FOR TRANSEPITHELIAL MOLECULAR TRANSPORT
US20040037809A1 (en) * 2002-06-28 2004-02-26 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of interferon beta
CA2522213A1 (en) * 2003-04-08 2004-10-28 Dante J. Marciani Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines
JP2007505147A (ja) 2003-09-12 2007-03-08 アンティジェニクス インコーポレーテッド 単純ヘルペスウイルス感染の治療および予防用ワクチン
US20050175623A1 (en) * 2004-02-10 2005-08-11 Zheng-Pin Wang Saponins as anticancer agent
CA2555921A1 (en) * 2004-02-13 2005-09-15 Nod Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic calcium phosphate particles and methods of making and using same
US7666914B2 (en) * 2004-06-03 2010-02-23 Richlin David M Topical preparation and method for transdermal delivery and localization of therapeutic agents
US20080287662A1 (en) * 2005-06-22 2008-11-20 Zeev Wiesman Balanites Aegyptiaca Saponins and Uses Thereof
US8168164B2 (en) * 2006-02-03 2012-05-01 Purdue Research Foundation Targeted conjugates and radiation
US20100197614A1 (en) * 2007-06-27 2010-08-05 Soeren Kristiansen Treatment of urinary tract infections with a mixture of saponin and an antibiotic
CN101903037A (zh) * 2007-11-15 2010-12-01 恩多塞特公司 施用偶合物的方法
KR20130048208A (ko) 2010-03-11 2013-05-09 이뮨 디자인 코포레이션 인플루엔자 백신
US9332776B1 (en) 2010-09-27 2016-05-10 ZoomEssence, Inc. Methods and apparatus for low heat spray drying
US8939388B1 (en) 2010-09-27 2015-01-27 ZoomEssence, Inc. Methods and apparatus for low heat spray drying
JP2014510721A (ja) 2011-02-15 2014-05-01 イミューン デザイン コーポレイション ベクターワクチンによる免疫原特異的免疫応答を強化するための方法
US20130022728A1 (en) * 2011-03-04 2013-01-24 International Flavor & Fragrances Inc. Spray-Dried Compositions Capable of Retaining Volatile Compounds and Methods of Producing the Same
SI2680712T1 (sl) 2011-03-04 2019-08-30 International Flavors & Fragrances Inc. Postopek izdelave s pršenjem sušenih spojin, zmožnih zadrževanja hlapnih spojin
MX350795B (es) 2011-04-08 2017-09-19 Inmune Design Corp Composiciones inmunogenicas y metodos para utilizar las composiciones para inducir respuestas inmunes humorales y celulares.
US20120288515A1 (en) 2011-04-27 2012-11-15 Immune Design Corp. Synthetic long peptide (slp)-based vaccines
PT2850431T (pt) 2012-05-16 2018-07-23 Immune Design Corp Vacinas para hsv-2
US10195257B2 (en) * 2013-07-28 2019-02-05 Qantu Therapeutics, Inc. Vaccine formulations comprising quillaja desacylsaponins and beta amyloid peptides or tau protein to induce a Th2 immune response
CR20160369A (es) 2014-01-21 2016-10-05 Immune Desing Corp Composiciones para uso en el tratamiento de afecciones alérgicas
BR112016018521A2 (pt) 2014-02-14 2017-10-17 Immune Design Corp composição, e, kit.
MX2017000630A (es) 2014-07-15 2017-04-27 Immune Design Corp Regimenes de sensibilización-refuerzo con un adyuvante de agonista tlr4 y un vector lentiviral.
US10568948B2 (en) 2015-05-13 2020-02-25 Agenus Inc. Vaccines for treatment and prevention of cancer
CA3066915A1 (en) 2017-06-11 2018-12-20 Molecular Express, Inc. Methods and compositions for substance use disorder vaccine formulations and uses thereof
US9993787B1 (en) 2017-08-04 2018-06-12 ZoomEssence, Inc. Ultrahigh efficiency spray drying apparatus and process
US10486173B2 (en) 2017-08-04 2019-11-26 ZoomEssence, Inc. Ultrahigh efficiency spray drying apparatus and process
US9861945B1 (en) 2017-08-04 2018-01-09 ZoomEssence, Inc. Ultrahigh efficiency spray drying apparatus and process
US10155234B1 (en) 2017-08-04 2018-12-18 ZoomEssence, Inc. Ultrahigh efficiency spray drying apparatus and process
WO2019028446A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 ZoomEssence, Inc. APPARATUS AND METHOD FOR HIGH-PERFORMANCE SPRAY DRYING
US10569244B2 (en) 2018-04-28 2020-02-25 ZoomEssence, Inc. Low temperature spray drying of carrier-free compositions
US20210340185A1 (en) 2018-08-29 2021-11-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Ebola vaccine compositions and methods of using same
EP4003425A2 (en) * 2019-07-25 2022-06-01 Sapreme Technologies B.V. Bioactive saponin linked to a functional moiety
IL293446A (en) 2019-12-03 2022-07-01 Neuvogen Inc Tumor cell vaccines
BR112022019207A2 (pt) 2020-03-23 2022-11-08 Univ Loyola Chicago Composições de vacina para coronavírus e métodos de uso das mesmas
WO2021261996A2 (en) * 2020-06-24 2021-12-30 Sapreme Technologies B.V. Nhs-based saponin conjugates
AU2021295292A1 (en) * 2020-06-24 2023-02-16 Sapreme Technologies B.V. Saponin derivatives for use in medicine
US20220133868A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Neuvogen, Inc. Tumor cell vaccines
CN113480985A (zh) * 2021-07-07 2021-10-08 东营煜煌能源技术有限公司 一种微纳米膨胀胶束弹性颗粒驱油乳液制备方法及应用

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD160763A3 (de) * 1978-06-05 1984-03-07 Loeffler Friedrich Inst Verfahren zur herstellung von konzentratvakzinen
FR2456116A1 (fr) * 1979-05-11 1980-12-05 Sarget Lab Nouvelle saponine triterpenique derivee de la caulophyllogenine et ses applications therapeutiques
GB2064320B (en) * 1979-10-13 1983-10-12 Welsh Nat School Med Intra-ocular irrigation fluid
US4550022A (en) * 1981-10-05 1985-10-29 Alcon Laboratories, Inc. Tissue irrigating solution
US4443432A (en) * 1981-10-05 1984-04-17 Alcon Laboratories, Inc. Ophthmalic irrigating solution
US4548922A (en) * 1983-06-06 1985-10-22 Beth Israel Hospital Drug administration
NZ217844A (en) * 1985-10-11 1989-10-27 Sumitomo Pharma A sustained release pharmaceutical composition containing silicone elastomer and an albumin
JPS62126135A (ja) * 1985-11-25 1987-06-08 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 経鼻投与用ｇｒｆ製剤
US4938970A (en) * 1987-02-06 1990-07-03 Hustead Robert E Painless electrolyte solutions
US5166139A (en) * 1987-02-26 1992-11-24 Indena, S.P.A. Complexes of saponins and their aglycons with phospholipids and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them
US5057540A (en) * 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5583112A (en) * 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
CA1331443C (en) * 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US5118676A (en) * 1988-04-08 1992-06-02 Whitby Research, Inc. Penetration enhancers for transdermal delivery of systemic agents
US5118692A (en) * 1988-04-08 1992-06-02 Whitby Research, Inc. Penetration enhances for transdermal delivery of systemic agents
US5182258A (en) * 1989-03-20 1993-01-26 Orbon Corporation Systemic delivery of polypeptides through the eye

Also Published As

Publication number Publication date
MX9303977A (es) 1994-04-29
EP0658111B1 (en) 1999-10-13
EP0658111A1 (en) 1995-06-21
BR9306594A (pt) 1998-12-08
FI946173A0 (fi) 1994-12-30
US5443829A (en) 1995-08-22
JPH07509440A (ja) 1995-10-19
JP3684370B2 (ja) 2005-08-17
AU687005B2 (en) 1998-02-19
FI946173A (fi) 1995-02-15
HU9500001D0 (en) 1995-03-28
AU4664993A (en) 1994-01-31
US5273965A (en) 1993-12-28
WO1994001118A1 (en) 1994-01-20
DE69326772D1 (de) 1999-11-18
CA2139437A1 (en) 1994-01-20
DE69326772T2 (de) 2000-06-29
EP0658111A4 (en) 1996-02-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT73814A (en) Methods for enhancing drug delivery with modified saponins
AU712808B2 (en) Drug delivery enhancement via modified saponins
US5578567A (en) Nasal pharmaceutical composition
US20200289653A1 (en) Improved peptide pharmaceuticals for insulin resistance
Niederau et al. Beneficial effects of cholecystokinin-receptor blockade and inhibition of proteolytic enzyme activity in experimental acute hemorrhagic pancreatitis in mice. Evidence for cholecystokinin as a major factor in the development of acute pancreatitis.
EP2710031B1 (en) Improved peptide pharmaceuticals for insulin resistance
US7244709B2 (en) Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of parathyroid hormone
US8329220B2 (en) Controlled release formulations
HUT53281A (en) Compositions absorbing through mycosa
RU2502519C2 (ru) Терапевтическое средство для лечения ринита
JP2008543878A5 (hu)
US20060069021A1 (en) Compositions and methods for intranasal administration of inactive analogs of PTH or inactivated preparations of PTH or PTH analogs
JPH09506873A (ja) 成長ホルモン放出性を有する化合物
KR20170010412A (ko) 인슐린 저항성에 대한 개선된 펩티드 약제
JPS58116444A (ja) 環状−オクタペプチド及びその製造方法、並びに該化合物を含有する医薬製剤
JP2764930B2 (ja) ペプチドまたはタンパク質の吸収が促進化された医薬組成物
Yanaihara et al. Synthesis and biological evaluation of LH-and FSH-releasing hormone and its analogs
WO2005116053A1 (ja) 新規な育毛剤
JPH05194260A (ja) ペプチド組成物
US5071836A (en) Competitive gonadoliberin antagonists
NZ617824B2 (en) Improved peptide pharmaceuticals for insulin resistance

Legal Events

Date Code Title Description
DFC4 Cancellation of temporary protection due to refusal