HUT71604A

HUT71604A - Pharmaceutical composition for treating osteoporosis

Info

Publication number: HUT71604A
Application number: HU9501043A
Authority: HU
Inventors: Hiroyasu Tobe; Kazuyuki Kitamura
Original assignee: Hoechst Japan
Priority date: 1994-04-12
Filing date: 1995-04-11
Publication date: 1996-01-29
Also published as: DE69507185D1; NO951422L; EP0677289A2; ATE175575T1; FI951702A; EP0677289B1; FI951702A0; TW427901B; NO951422D0; CA2146820A1; AU1638495A; AU696334B2; KR950031059A; HU9501043D0; DK0677289T3; EP0677289A3; DE69507185T2; US5604263A; ES2129691T3

Description

A találmány tárgya csontritkulás kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény.

Japán most egy olyan előrehaladott korú társadalomba érkezett, amelyet a múltban sohasem tapasztalt, és ez egyidejűleg komoly problémát számának növekedése miatt. A száma, akik csonttörés jelent a csontritulásos paciensek olyan idősebb korúak megnövekedett miatt ágyhozkötöttek, hatalmas növekedést okoz az egészségügyi kiadásokban.

Az oszteoporózis gyógyszereként Japánban D vitamin készítményeket, kalcitonin készítményeket és ipriflavon készítményeket használtak és használnak.

Nem alakítottak ki azonban egy olyan módszert, amellyel radikálisan lehetne az oszteoporózist kezelni, egyszerűen ebben a stádiumban tüneti kezelést alkalmaznak.

Oszteoporózis fejlődik ki, ha a csontképződés és a csontfelszívódás közötti egyensúly megszűnik, és következésképpen úgy tartj ák, hogy az oszteoporózist úgy lehet megelőzni, ha elősegítik a csontképződést vagy gátolják a csontfelszívódást.

A találmány tárgya tehát oszteoporózis kezelésére szolgáló új gyógyszerkészítmény. Azt találtuk számos tanulmány eredményeképpen, hogy az a tény, hogy az a-savak és az izo oísav-származékok, melyek komiókivonatokban fordulnak gátló hatást mutatnak csontfelszívódás ellen, és ezt a felismerést találmánnyá dolgoztuk ki.

A komló (Humulus lupulus L.) eredetileg mint gyógyfű volt ismeretes, és hosszú ideig használták sörfőzéshez. Az izo-cesav-származékok olyan vegyületek, melyek sörfőzés közben • · • · · ·

keletkeznek az a-savakból izomerizálással (a komló főzési lépése alatt), és a sör tartalmazza ezen származékokat keserű komponens hatóanyagaként. A fentiekből következik, hogy az oisavak és izo-α-sav-származékok elég alacsony toxicitásúak. Ismeretes, hogy az α-savakhoz tartozik főleg a humulon [(I) képletü vegyület], továbbá a kohumulon [(II) képletü vegyület] és az adhumulon [ (III) képletü vegyület], míg az izo-a-savszármazékokhoz főleg az izohumulon [(IV) képlet], izokohumulon [(V) képlet] és az izoadhumulon [(VI) képlet] tartozik.

A találmány tehát gyógyszerkészítményre voantkozik oszteoporózis kezelésére, és ez a készítmény hatóanyagként egy vagy több alábbi vegyületet tartalmaz: humulon, kohumulon, adhumulon, izohumulon, izokohumulon és/vagy izoadhumulon.

Kifejlesztettünk egy oszteoporózis kezelésére alkalmas gyógyszert is, és megvizsgáltuk az anyagokat csontfelszívódás gátló hatásra.

A csontfelszívódást elősegítő tényezők közül viszont a prosztaglandin E2~t említik [IGAKU NO AYUMI (Journal of Clinical and Experimental Medicine) , (1993), 165. kötet, 568. oldal], és úgy tartják, hogy a csontképző sejtekben termelt prosztaglandin E2 fontos szerepet játszik a csontképződésben, és a csontielszívódás a sejtekre hatván elősegíti a csontielszívódást. Ha sikerül egy olyan anyagot találni, amely képes meggátolni vagy antagonizálni a prosztaglandin E2 hatását, akkor ez az anyag alkalmas volna csontritkulás kezelésére. Ezért számos tanulmány eredményeképpen arra koncentráltuk a figyelmünket, hogy a komlókivonatokban lévő a savak és izo-α-sav-származékok hasonló szerkezetűek, mint a prosztaglandin E2, vagyis telítetlen karbonilcsoportot tartalmazó 6- vagy 5-tagú gyűrűvel rendelkeznek, és tisztított α-savak és izo-a-sav-származékok, majd megvizsgáltuk ezen vegyületeket csontfelszívódás gátló hatásukra lyukképződési kísérlettel. Eredményként azt találtuk, hogy az α-savak és az izo-a-sav-származékok 1 x 10⁹ mól koncentrációban már gátolják a csontfelszívódást. Az a tény, hogy az asavak és az izo-α-sav-származékok rendelkeznek lyukképzés gátló hatással, nem szerepelt eddig az irodalomban.

Mint említettük, az izo a-sav-származékok θ'-savakból keletkeznek izomerizálódással, és ezért az a-savak izomerizálódása izo-oí-sav-származékokká folyamatosan megy végbe izolálás és tisztítás közben. Ugyanakkor a Merek AG-től vásárolt foszfomolibdénsav hatékonynak bizonyult mint színezőszer, amely sárgásszürke színt fejleszt ki mind az asavaknál, mind az izo-α-sav-származékoknál, és ezt a színezőszert használtuk azonosítószerként az a-savakra és izoa-sav-származékokra.

Az α-savakat és izo-α-sav-származékokat tisztítással lehet előállítani természetes komlóból, de előállítható ismert módszerrel az ismert kémiai szerkezet organoszintézisével is.

Az a-savak vagy izo-α-sav-származékok adagolása klinikai használatban bár függ az adagolás módjától, rendszerint 0,1 gtól 2 g-ig terjed felnőtt esetében naponta (1,5 mg-30 mg/kg/nap). Adagolható intravénásán, intramuszkulárisan, orálisan és intrarektálisan. Intravénás adagolás esetében • · · · » «

intravénsá csepegtetést alkalmazhatunk a szokásos intravénás injekción kívül.

Az ο-savakat vagy izo-a-sav-származékokat tartalmazó készítményeket szokásos módon, a szokásos segédanyagok és adalékok alkalmazásával állíthatjuk elő.

Az injektálható készítmények előállítása például inj ektálható porok formájában történhet. Ilyen esetben a porokat úgy állítjuk elő, hogy egy vagy több megfelelő vízoldékony segédanyagot adagolunk, például mannitot, szacharózt, laktózt, maltózt, glükózt, fruktózt, stb. a hatóanyaghoz, feloldjuk az elegyet vízben, fiolákba vagy ampullákba töltjük, majd liofilizáljuk és lezárjuk.

Orális készítményt szokásos tabletta, kapszula, granula, finomgranula, vagy por formájában, vagy enteroszolvens készít menyek formájában állíthatunk elő.

hogy egy hatóanyaghoz segédanyagokat, például mannitot, szacharózt, laktózt, maltózt, keményítőt, kovasavanhidridet, kalcium-foszfátot adagolunk, továbbá használhatunk csúszást elősegítő szert, például talkumot, magnézium-sztearátot, kötőanyagot, például karboxi-metil-cellulózt, metil-cellulózt, zselatint, gumiarábikumot, szétesést elősegítő szert, például kalcium-karboxi-metil-cellulózt, stb., szükség esetén tabletta, granula, finomgranulátum stb. előállítására, és ehhez továbbá egy vagy több enteroszolvens alapanyagot, például cellulózacetát-ftalátot, hidroxi-propil-metil-cellulóz-ftalátot, hidroxi-propil-metil-cellulóz-acetil-szukcinátot, polivinilalkohol-ftalátot, sztirol-maleinsavanhidrid kopolimert, sztirol-maleinsav kopolimert, metil-metakrilát-metakrilsav kopolimert, metil-akrilát-metakrilsav-kopolimert adagolhatunk, és szükség esetén hozzáadhatunk szinezőszert, például titán-oxidot és ilyenkor bevont készítményt kapu nk. A fent leírt módon kapott enteroszolvens granulátumot vagy finomgranulátumot kapszulává alakíthatjuk.

Ezenkívül a kapszulák előállítása ismert módon történhet, és ezeket bevohatjuk a fenti enteroszolvens alapanyagokkal, és így enteroszolvens kapszulát kapunk. Más módszer szerint az enteroszolvens kapszulákat előállíthatjuk úgy is, hogy a fent felsorolt enteroszolvens bázisból készítünk egyedül kapszulát, vagy zselatinnal összekeverve.

A kúpok előállítása úgy történhet, hogy egy hatóanyaghoz liofil alapanyagot, például fél-szintetikus alapanyagot adagolunk, ahol a kakaóvajat vagy zsírsav-trigliceridet összekeverjük zsírsav-monogliceriddel vagy zsírsavdigliceriddel különböző arányban, vagy hidrofil alapanyagot használunk, például polietilén-glikolt vagy glicero-zselatint, melegítés közben feloldjuk, és így homogén elegyet kapunk, majd ezt az elegyet formába öntve állíjtuk elő a kúpot.

A találmány további részleteit a következő példákkal szemléltetjük.

Példák

1. Példa (1) a-savak tisztítása komlóból

250 g kereskedelmi forgalomban lévő Rupofresh Co. Inc.-tói • ·

• · ·« vásárolt komlót hozzáadunk 500 ml acetonhoz, és a szűrési és extrahálási lépést 1 órán keresztül végezve összesen háromszor megismételjük. A kapott acetonos extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk, és így 50 g fekete szirupot kapunk. 17,5 g-ot a kapott szirupból feloldunk 500 ml 0,5 % ecetsavat és 80 % metanolt tartalmazó elegyben, és Dowex-1 anioncserélő gyantán előhívjuk (térhálósodási fok x4, részecskenagyság 200-400 mesh, ecetsav típus, The Dow Chemical Co.), 5 cm átmérőjű és 27,5 cm hosszúságú oszlopot használunk, 3 ml/perc áramlási sebesség mellett.

Az adszorbeált komló extraktumot fokozatosan eluáljuk ecetsav és metanol elegyével az irodalom alapján [Agric Bioi. Chem., 49. kötet, 300-403. oldal, (1985)], és az eluátumot 10 g-os adagokban frakciónáljuk a folyadék tömegére vonatkoztatva egy frakció összegyűjtő segítségével. Először 1 liter 0,5 % ecetsavat és 80 % metanolt, 2 liter 5 % ecetsavat és 80 % metanolt tartalmazó elegyet használunk eluálás céljából.

μΐ-es mintákat vettünk az 1-300-as számú frakciókból minden 10 g frakcióból frakcionálva, és a mintákat szilikagél vékonyrétegen megvizsgáltuk (a szilikagél 5715 számú lemezt a Merek AG-tól szereztük), majd vegyes szerves oldószerrel előhívtuk (etil-acetát:metanol = 30:1). A szilikagél lemezre a Merek AG 4 %-os metanolos foszfomolibdénsav oldatát szórtuk a fenolos hidroxilcsoport szín reakció folyadékaként, majd ezt érintkezésbe hoztuk ammóniagázzal, hogy előidézzük. Az α-sav frakció sárgásszürke színezési reakciót alkalmaztuk az a-sav a színeződést lett, és ezt a frakció további • * · ·

- 8 azonosításához .

Az α-sav frakciókat tartalmazó 232-240 számú frakciókat, melyeket Dowex 1 oszlopkromatográfiásan eluáltunk, tovább tisztítottuk gélszúrési kromatografálási módszerrel: Sephadex LH-20 (5 cm átmérő x 39 cm hosszúság, Pharmacia AB) . Minden 5 g-s adagot frakcionáltunk, eluálószerként metanolt használtunk, és frakció gyűjtőt alkalmaztunk. Eredményképpen az a-savakat a 39-60 számú frakciókból eluáltuk, és csökkentett nyomáson bepároltuk, szárítottuk, 150 mg olajos anyagot kaptunk. A számítás szerint 100 g komlóra 170 mg α-savnak kell keletkezni.

(2) a-Savak szerkezeti meghatározása

Az így frakcionált és tisztított α-savak szerkezeti vizsgálatát szín reakció alkalmazásával proton és ¹³C magmágneses rezonancia spektrummal, tömegspektrummal és ultraibolya abszorpció spektrummal végeztük. Eredményként azt találtuk, hogy az a-sav frakciók főleg humulont, továbbá kohumulont és adhumulont tartalmaznak.

(3) α-savak szín reakciója vasklorid (FeC13) alkalmazásával

Wako Pure Chemicals Ltd.-től származó 2 %-os vas-klorid etanolos oldatát szilikagél lemezen lévő a-savakra permetezzük, hogy hasonló kékesfekete tónust kapjunk, mint ami az irodalomban szerepel [Agric. bioi. Chem., loc cit.]. Az asavak színe megfelelt az irodalomban szereplő színnek.

(4) ¹H-NMR spektrum

Deuteriometanolban 20 mg a-savat oldunk, és az -'-H-NMR színkép elemzést 400 MHz-nél mértük [JEOL Ltd., JNM-GSX400, Jeol Ltd.]. Az eredményeket az alábbiakban közöljük. Belső standardként TMS-t használtunk.

^H-NMR	(CD₃OD): 0,928	(3H,	d,	J =	6,8 Hz,	CH₃), 0,950 (3H, d, J
= 6,8	Hz, CH3)	, 1,508	(3H,	s,	CH₃)	/	1,632	(3H,	s, CH3 x 2),
1,704	(3H, s,	CH3), 2,	048	(1H,	m,	J	= 6,8	Hz,	-CH<), 2,415 (3H,

d, J = 7,2 Hz, -CH₂-), 2,632 (1H, d, J = 6,0 HBz, -CH<), 2,737 (1H, d, J = 7,6 Hz, -CH<), 2,924 (1H, d, J = 6,8 Hz, -CH<),

2,991 (1H, d, J = 7,6 Hz, -CH<), 5,095 (1H, t, J = 6,8 Hz, -CH=) , 5,125 (1H, t, J = 7,2 Hz, -CH=) .

Ezek az értékek megfelelnek az irodalomban leírt humulon értékeinek [Wallestein Láb. commun., 27. kötet, 19-28. oldal (1964)] .

(5) ¹³C-NMR spektrum

Deuteriometanolban 20 mg α-savat oldunk, és a ¹³C-NMR spektrumot 100 MHz-nél mértük (JEOL Ltd. JNM-GSX400, JEOL Ltd.). Az eredményeket az alábbiakban közöljük. Belső standardként TMS-t használtunk.

¹³C-NMR δ (CD₃OD): 18,063, 18,154, 22,283, 23,315, 23,437, 26,275, 27,702, 36,111, 444,384, 83,819, 104,189, 119,566, 125,971, 130,267, 135,397, 182,574, 193,230, 198,937, 199,544.

• · (6) Ultraibolya abszorpciós spektrum μ9/ιη1 a-sav metanolos oldatának ultraibolya abszorpciós spektrumát mértük. A maximális abszorpció Ε (1 %, 1 cm) : 236,

283, 323), ez megfelelt az irodalomban szereplő adatoknak.

[Bull. Soc. Chim. Béig., 72. kötet, 60-68. oldal, 72. kötet].

(7) Tömegspektrum

EIMS m/z: 362 (M⁺), 344, 248, 234, 233, 215, 191, 149, 114, 69.

A különböző fenti 4-7. színképelemzések eredményei azt mutatják, hogy az a-sav frakció főleg humulont, továbbá kohumulont és adhumulont tartalmaz, melyeknek humulonra jellemző közös mátrixuk van, és a humulonból származó különböző rövidszénláncú alkilcsoportokat is jelöl.

2. Példa a-savak csontfelszívódást gátló hatásának meghatározása (1) Sejt előállítása

10-11 napos ICR egerekből (Charles River Inc.) kivettük a combcsontot, és a sípcsontot, melyeket ezután ollóval felvágva ce-MEM közegbe helyeztünk (Flow Labortories Inc.), amely 5 %

FBS-t tartalmaz (Irving Scientific Inc.), valamint 100 U/ml penicillint és 100 μg/ml sztreptomicint is tartalmaz. A kapott felülúszót továbbá pipettálással visszanyerjük, a közeggel mossuk, majd 5 % FBS-t tartalmazó o?-MEM közegben szuszpendáljuk, hogy a csontképző sejteket tartalmazó csontsejtet képezzünk. Az így kapott csontsejt szuszpenziót 1 hétig inku• · « ·

báljuk a patkány mellékvese hormont tartalmazó közegben. Az inkubálás befejezése után a sejteket 0,05 % tripszin EDTA-PBS alkalmazásával visszanyerjük és lyuk képzési vizsgálat alá vetjük.

(2) Lyukképzési kísérlet

Egy elefántcsont darabot 150 μτη vastagságúra vágunk precíziós alacsony sebességű vágó segítségével (Bühler GmbH), majd 6 mm átmérőjű kerek darabokat vágunk egy egylyukú lyukasztó segítségével. Ezeket az elefántcsont darabokat 70 %os etanolba mártjuk, kétszer 5 percig ultrahangos kezeléssel kezeljük, majd háromszor steril PBS-sel és kétszer a közeggel mossuk. Ezeket az elefántcsont darabokat egy tenyésztőlemezre helyezzük (Falcon Inc.), és a különböző koncentrációjú gyógyszereket tartalmazó 100 liter közeget adunk hozzá. Ezután a fent előállított 1

10⁵ csontsejtet tartalmazó 100 μΐ közeget adunk minden üregbe.

Az inkubálást 37 °C-on 2 napig végezzük, %-os szén-dioxid inkubátorban. Az inkubálás befejezése után az elefántcsont darabon lévő sejtet eltávolítjuk, és az abszorpciós üregeket

Coomassie Brillient

Blue festékkel megfestjük, és megszámoljuk mikroszkóp alatt az így képződött abszorpciós üregeket. Az eredményeket az 1.

táblázat mutatja.

Az a-savak a csontfelszívódást dózisfüggő módon gátolják, a fél-maximális gátlási dózis (ΙΌβθ) 1,2 x 10“® mól.

• ·· « • · ····

1. Táblázat

Gyógyszer koncentráció (mól)	Abszorpciós üregek száma (Átlacr + SD)	Gátlási mérték (%)
0	224,0 ± 17,4	-
1 χ 10^{3 4}	0	100
1 x 10⁵	12,3 ± 7,3	94,5
1 χ 10⁶	21,5 ± 9,1	90,4
1 χ 10⁷	32,0 ± 9,3	85,7
1 χ 10⁸	81,5 ± 14,7	63,6
1 χ 10⁹	107,0 ±29,1	52,2
1 χ 10“¹⁰	188,5 ± 57,2	15,8

3. Példa

Szintetikus a-savval végzett lyukképzési kísérlet

Szerves szintetikus humulont állítunk elő Obara H. és munkatársai, Bull. Chem. Soc., Jpn, 62. kötet, 3034-3035. (1989) szerint. Az így kapott szerves szintetikus humulon csontfelszívódást gátló hatását és az 1. példa szerint előállított a-savak csontfelszívódást gátló hatását a 2. példa (2) pontjában leírt kísérlet segítségével határozzuk meg.

Ennek eredményeképpen meghatározzuk az 50 %-os gátló értékeket (ID5Q), és ez azt mutatja, hogy a szerves szintetikus humulon és az 1. példa szerinti α-savak a csontfelszívódást már

1,3 x 10“⁷ mól és 3,5 x 10⁷ mól koncentrációnál gátolják.

Ugyanakkor a 2. példa szerint előállított α-savak ID5Q értéke, melyeket 10 hónapig tároltunk, 3,5 x 10⁷ mól, körülbelül háromszor alacsonyabb, mint a 2. példában kapott érték. A sz szerves szintetikus humulon alacsonyabb hatásának oka feltehetőleg az alacsonyabb stabilitás.

4. Példa la-savakból kapott természetes humulon tisztítása

Az 1. példában kapott α-savakból származó természetes humulont ismert módszerekkel tisztítjuk [Bér. Chem. 49. kötet, 780-794. oldal (1916) és J. Chem. Soc., 1906-1914. oldal (1952)] . A humulon kémiai adatai a következők:

1)	Móltömeg:	362
2)	Olvadáspont:	63 °C
3)	[a]_D	-206°C (c = 0,38, MeOH)
4)	IR	v_max cm^-1 (KBR) 3370, 1670, 1630,
		1530, 1470, 1350
5)	UV	max ^nm (sav EtOH) (e) 234 (® 7300),
		324, 360 (sd)
6)	¹H-NMR (CC1₄:CDC1₃	= 4:1)

Ö: 0,99, 1,03 (mind 3H, d, J = 7 Hz), C9-(CH₃)₂), 1,54,

1,68, 1,70, 1,73 (mindegyik 3H, s, C14-(CH₃)₂, C19(CH₃)₂), 2,10-2,20 (1H, nonet, C9-H), 2,43, 2,53 (mind 1H, dd, J = 8, 14 Hz, C12 vagy C17-H₂), 2,70-2,80 (2H, oktet, C8-H₂), 2,99, 3,07 (mind 1H, dd, J = 7, 14Hz, C12 vagy C17-H₂), 5,00, 5,11 (mind 1H, triplet-szerű, C13 és C18-H) ♦ · · «

- 14 -

7) ¹³C-NMR

Atomszám	a-savak adatai
1	191,0
2	106,0
3	194,8
4	78,8
5	167,4
6	109,6
7	199,1
8	46,4
9	26,1
10	22,9
11	23,1
12	21,3
13	121,6
14	132,0
15	18,0
16	26,3
17	43,0
18	116,5
19	137,6
20	18,1
21	26,5
Az adatok az	Organic Mangetic Resonance, 7. kötet, 415-

417. oldalán (1975) szereplőkkel megegyeznek.

• « · · ** ·· ···«

5. Példa

Természetes humulon csontfelszívódást gátló hatásának meghatározása

A 4. példa szerint kapott természetes humulon csontfelszívódást gátló hatását és a 3. példa szerint kapott szintetikus humulon csontfelszívódás gátló hatását a 2. példa (2) pontjában leírt módszerrel határoztuk meg. Az eredményeket a 2. táblázat mutatja.

A természetes humulon és a szerves szintetizált humulon ID5Q értékei, azaz 50 %-os gátló értékei csontfelszívódás gátlásnál már 5,9 x 10^-9 mól, illetve 2,5 x 10^-8 mól koncentrációnál jelentkeztek.

2. Táblázat

Szintetikus humulon és természetes humulon hatása a lyukképződésre

Szerves szintetikus humulon Természetes humulon

Dózis Lyukak száma Gátlás Lyukak száma Gátlás

	(Átlag	+ SD)	(%)	(Átlag	+ SD)	(%)
0	328 ± 51,0		328,0 ±	51,0
10-11	281,3 ±	38,1	14,2	274,3 ±	91,6	16,4
10-10	221,3 ±	54,1	32,5	274,3 ±	54,9	16,4
10^-9	221,8 ±	88,3	32,4	251,5 ±	135,4	23,3
10^-8	217,1 ±	89,1	33,8	128,5 ±	23,1	60,8
10-⁷	70,7 ±	9,3	78,4	34,5 ±	7,4	89,5
10⁶	33,7 ±	20,2	89,7	6,5 ±	3,8	98,0
10-5	6,8 ±	5,3	97,9	0,3 ±	0,5	99,9

• ·

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként hatékony mennyiségű egy vagy több vegyületet tartalmaz az alábbiak közül: humulon, kohumulon, adhumulon, izohumulon, izokohumulon és izoadhumulon, gyógyászatilag elfogadható hordozóval vagy segédanyaggal együtt.
2. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként humulont tartalmaz.
3. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként kohumulont tartalmaz.
4. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként adhumulont tartalmaz.
5. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként izohumulont tartalmaz.
6. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként izokohumulont tartalmaz.
7. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként izoadhumulont tartalmaz.
8. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként humulon, kohumulon, adhumulon, izohumulon, izokohumulon és izoadhumulon keverékét tartalmazza.
9. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként humulon, kohumulon, adhumulon, izohumulon, izokohumulon és izoadhumulon keverékét tartalmazza, amely komló extrahálásával állítható elő.
10. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként humulont, kohumulont és adhumulont tartalmaz, melyek komló extrahálásával állíthatók elő.
11. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény oszteoporózis kezelésére, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként izohumulont, izokohumulont és izoadhumulont tartalmaznak, melyeket komló extrahálásával állíthatunk elő.