KR20100029201A

KR20100029201A - 중금속 해독 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR20100029201A
Application number: KR1020097025967A
Authority: KR
Inventors: 매튜 엘 트립; 비라 콘다; 에이미 홀; 아누 데사이; 제프리 에스 브랜드; 디에나 미니치
Original assignee: 메타프로테오믹스, 엘엘씨
Priority date: 2007-05-11
Filing date: 2008-02-13
Publication date: 2010-03-16
Also published as: MX2009012087A; CA2686043A1; US8475850B2; AU2008251756B2; US8241674B2; WO2008140842A1; US20090155382A1; CN101687834A; EP2152684A4; NZ581064A; JP2010526882A; AU2008251756A1; EP2152684A1; US20120189721A1

Abstract

중금속 해독을 강화하기 위한 조성물 및 방법이 개시된다. 개시된 조성물 및 방법은 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST) 및 NADPH 퀴논 리덕타제(NQO1) 활성과 같은 2상 해독 효소를 유도하는 것을 포함하여 핵심 해독계의 활성을 강화한다.

중금속, 해독, 해독 효소

Description

중금속 해독 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR HEAVY METAL DETOXIFICATION}

본 출원은 2007년 5월 11일에 출원된 미국 가출원 제60/917,425호에 대한 우선권을 주장한다.

본 발명은 일반적으로는 중금속 해독(heavy metal detoxification) 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 비급성 상태(non-acute state)의 중금속 해독을 위한 스펜트 홉(spent hop), 아연, (1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온), 및 (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온) 또는 이들의 조합의 용도에 관한 것이다.

주거적 또는 직업적 노출로 인해 건강 염려 문제를 제기할 수 있는 다수의 금속이 있다. 이들 중, 안티몬, 비소, 비스무스, 카드뮴, 세륨, 크롬, 코발트, 구리, 갈륨, 금, 철, 납, 망간, 수은, 니켈, 백금, 은, 텔루르, 탈륨, 주석, 우라늄, 바나듐 및 아연이 가장 문제인 것으로 보인다. 이들 원소들 중 많은 것은 우리의 음식물 및 환경에서 일반적인 것이고, 좋은 건강을 유지하기 위해 실제적으로 필요한 것이다. 그러나, 다량에 노출되면, 급성 및 만성 독성이 초래될 수 있다.

중금속 독성은 정신 및 중추 신경 기능을 손상 또는 저하시킬 수 있고, 정력을 더욱 저하시킬 수 있고, 혈액 성분, 폐, 신장, 간 및 기타 생명 유지 기관에 손상을 초래할 수 있다. 또한, 이에 대한 장기간의 만성적 노출은 근육퇴행위축, 다발성 경화증, 파킨슨병 또는 알츠하이머병을 의태하는 것으로 보이는 신체, 신경 및 근육 퇴화 과정을 초래하여 왔다. 또한, 일부의 중금속은 유력한 돌연변이유발물질 및/또는 발암물질로 확인되었다.

중금속 독성 증상은 인식하기가 어렵다. 그 증상은 보통은 심각하며, 금속에의 알려진 노출 또는 금속의 섭취와 일반적으로 관련이 있다. 그 증상의 발병은 일반적으로 급속하며, 경련, 욕지기, 및 구토; 통증; 발한; 두통; 호흡 곤란; 인식 장애, 운동 장애, 언어 능력 장애; 조병; 및 경기를 동반할 수 있다.

만성 노출의 증상은 다른 건강 상태의 증상과 아주 유사하며, 흔히 수 개월 또는 심한 경우 수 년에 걸쳐서 천천히 진전된다. 그러나, 만성 노출에 의해 초래되는 독성의 증상(인식 장애, 운동 장애, 언어 능력 장애; 학습 장애; 신경 과민, 정서 불안정; 및 불면증, 욕지기, 기면, 및 불편함)은 쉽게 인식되는 반면, 그 원인과 관련시키기가 아주 어렵다. 만성 노출을 확인하는데 있어서의 또 다른 문제는, 만성 노출의 증상이 시간이 지날수록 약화되어, 중독된 사람이 치료를 뒤로 미루게 되어 그 증상이 금속 중독이 아닌 다른 어떤 것과 관련이 있는 것으로 생각할 수 있다는 것이다.

가장 일반적으로 접하는 독성 금속은 알루미늄, 비소, 카드뮴, 철, 납, 및 수은을 포함한다. 비소 및 납 중독이 가장 일반적일 수 있는데, 이는 비소 및 납이 제련 공정, 화학약품 및 유리 제조에서 및 살충제(비소)로서 폭 넓게 사용되는 한편 파이프, 페인트, 배터리 및 PVC 플라스틱의 납에 노출될 수 있기 때문이다. 비소 독성에 대한 표적 기관은 혈액, 신장, 소화기, 피부 및 중추신경계를 포함하며, 납은 뼈, 뇌, 혈액, 신장 및 갑상선을 가장 일반적으로 표적화한다.

카드뮴 독성은 PVC 파이프, 배터리 및 페인트 안료로부터의 환경 노출로 인해 초래되며 보통은 뇌 및 신장을 표적화한다.

알루미늄은 그 자체로는 중금속이 아니지만, 신경독성(Halatek T. et al., J Environ Sci Health A Tox Hazard Subst Environ Eng. 43(2): 118-24, 2008), 알츠하이머병(Prolo P. et al., Bioinformation. 2007 2(l):24-7, 2007; Molloy, D W. et al., J Toxicol Environ Health A. 70(23):2011-9, 2007), 및 세포사(Satoh E. et al., Biol Pharm Bull. 30(8): 1390-4, 2007)와 관련이 있어 왔다.

일부 중금속들이 유력한 돌연변이유발물질 및/또는 발암물질로 확인되었다. 이들 금속은 세포사멸 및 세포 성장 조절, 핵 전사 조절 및 여러 가지 신호 전달 경로에 관여하여 왔다, 이들 금속은 유전자 발현, 발암, 돌연변이유발 및 세포독성을 유발하는 활성을 갖는 외에도 유리 라디칼 발생에도 관여하는 것으로 확인되었다. 이의 검토를 위하여, Wang S. 및 Shi X., MoI Cell Biochem 222; 3-9, 2001을 참조한다.

생체이물 대사 효소는 화학적 발암물질의 독성, 산화적 손상, 돌연변이유발 및 신생물성 효과를 조절하는데 있어서 주요한 역할을 한다. 축적되는 증거는 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST) 및 NADPH 퀴논 리덕타제(NQO1) 활성과 같은 2상 해독 효소(phase Ⅱ detoxification enzymes)의 유도는 특히 상기 초기 상 동안 독성 및 화학적 발암에 대한 보호를 야기하는 것을 나타낸다. NQO1는 퀴논 및 질소 산화물의 2 전자 환원을 촉매하는 플라보 단백질이다(Riley, RJ. 및 P., Workman, Biochem Pharmacol, 43(8): 1657-69, 1992; 및 Ross, D. 등, Cancer Metastasis Rev, 12(2): 83-101, 1993). 이러한 단백질의 주요 기능은 1 전자 환원 및 관련 산화환원 주기를 감소시킴으로써 반응성 산소종의 형성을 감소시키는 것일 수 있지만, 이러한 단백질은 일부 항암제의 활성화 및 암 방지에 역할을 한다(Begleiter, A. et al., Cancer Lett, 45(3): 173-6, 1989 및 Begleiter, A. et al., Oncol Res, 9(6-7): 371-82, 1997). 최근의 연구 결과에 따르면, NQO1는 전사인자 p53 및 세포사멸의 조절에 관여할 수 있다(Asher, G., 등, Proc Natl Acad Sci U S A, 98(3): 1188-93, 2001 및 Long, D.J., 2nd, 등, Cancer Res, 62(11): 3030-6, 2002).

상기 2상 효소의 전사 활성화를 통해, ARE로 불리워지는 cis-작용 전사 인핸서(Rushmore, T.H. 등, Proc Natl Acad Sci U S A, 87(10): 3826-30, 1990) 또는 친전자 반응 요소(Friling, R. S., et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 87(16): 6258-62, 1990)가 규명되었다. 전사인자 Nrf-2는 2상 해독 효소 유전자의 ARE 매개 발현을 실제적으로 조절하는 것으로 확인되었다. Itoh et al.(Biochem Biophys Res Commun, 236(2): 313-22, 1997)은 최근, 마우스에서의 유전자 표적화 파괴(gene-targeted disruption)를 통해, Nrf-2가 친전자체 및 반응성 산소에 반응하는 2상 효소 유전자의 일반적인 조절자라는 사실을 확립했다. 더욱 최근에, 친전자체 역습 반응(electrophile counterattack response)의 기초가 되는 일반적인 조절 기작이 입증되었는데, 상기 기작에서 친전자 물질은 Nrf-2와 이의 억제 단백질(Keap-1)과의 상호작용을 변화킴으로써, Keap-1에 의한 억제로부터 Nrf-2 활성을 유리시켜서 ARE를 통해 2상 효소 유전자 및 항산화성 스트레스 단백질 유전자를 유도한다(Itoh, K. 등, Genes Dev, 13(1): 76-86, 1999).

Keap-1로부터 Nrf-2를 분리하는 것은 이들 단백질 중 어느 하나를 수식하는 것을 포함할 수 있고 직접 또는 간접 기작을 통해 달성될 수 있는 것으로 제안되어 왔다. 예를 들어, Nrf-2는 분리될 수 있는 MAP 키나아제 캐스케이드(kinase cascade)의 성분들에 의해 포스포릴화된다(Yu, R. 등, J Biol Chem, 274(39): 27545-52, 1999). 한편, Dinkova-Kostova et al.(Dinkova-Kostova, A.T. et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 98(6): 3404-9, 2001)은 이러한 복합체의 분리가 상기 두 단백질 중 어느 하나에서 친전자성 물질과 반응성 티올 잔기와의 직접 상호작용을 통해서 달성될 수 있다는 대안적 가능성을 제안했다. 이러한 가설은 ARE를 통한 유전자 발현의 유도물질로서 상기 친전자성 물질의 유효성과 상기 물질과 설프히드릴기의 반응 속도 사이의 강한 상관관계에 의해 입증된다. 이러한 기작은 상기 유도물질이 Keap-1 나 Nrf-2에 공유결합함을 나타낸다.

헴 이화작용(heme catabolism)의 필수 효소인 헴 옥시게나아제-1(HO-1), 및 시스테인의 집단을 갖는 작은 금속 결합 단백질인 메탈로티오네인(metallothionein) ⅡA (MT-2A)은 HeLa 세포에서 유도되며, 카드뮴이나 아연으로 처리된다. 상기 두 단백질은 금속 독성에 대한 방어계에 관여하는 것으로 여겨진다. 헴 옥시게나아제는 헴 옥시게나아제 유전자상의 ARE 및 MRE 결합 부위의 활성화를 통해 Nrf-2 및 MTF-1 전사 인자 모두에 의해 조절된다.

일반적으로, 의학적 연구는, 금속 독소의 지속적인 존재가 환자를 생사의 상황에 빠지게 하는 한에 있어서 독성 물질의 해독 및 제거가 신속히 달성되어야 하는 금속 독소 노출의 급성 경우에 대한 것이었다. 금속 독성에 대한 가장 일반적인 해독 치료법으로는 화학적 불활성화, 대사성 해독, 또는 예를 들어 킬레이드화 등이 있다.

오늘날, 이러한 치료법들은 저농도 독소 노출에 대하여 적절한 것으로도 또는 지적된 것으로도 여겨지지 않기 때문에, 독소 축적이 전술한 더욱 극단적인 조치를 필요로 하게 하는 필수 수준에 도달하기 전에 아급성(sub-acute) 독소 노출이 있는 개체를 해독하기 위한 안전하고도 효과적인 방법에 대한 절실한 필요성이 발생한다. 본 발명자들은 핵심 해독 효소의 활성을 조절하고 신체로부터 독소 제거를 촉진하는 것으로, 안전성 내력을 갖는 다수의 화합물을 확인했다. 본 발명은 핵심 해독 효소를 조절하는 동시에 추가적인 해독제 및 영양제를 투여하는 것을 통해 아급성 독소 노출에 있어서 해독 효소계를 강화 또는 유도하는 것을 개시한다.

본 발명은 포유동물에서 비급성 상태(non-acute condition)의 중금속 해독을 촉진하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 비급성 상태의 중금속 해독을 위한 스펜트 홉(spent hop), 아연, (1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온), 및 (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온) 또는 이들의 조합의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 제 1 구현예는 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 조성물을 기재한다. 상기 조성물은 스펜트 홉(spent hop); 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 아연; 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 2종의 성분을 치료학적 유효량으로 포함한다.

제 2 구현예에는 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법이 기재되어 있다. 이러한 구현예에서, 상기 방법은 스펜트 홉(spent hop); 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 아연; 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 2종의 성분을 치료학적 유효량으로 상기 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 구현예는 약 0.10 내지 약 10.00g의 스펜트 홉(spent hop); 약 5 내지 약 1200㎎의 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 약 0.10 내지 약 24㎎의 아연; 및 약 5 내지 약 1200㎎의 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온을 포함하는 조성물을 기재한다.

본 발명의 또 다른 구현예는 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법을 기재한다. 이러한 구현예에서, 상기 방법은 약 0.10 내지 약 10.00g의 스펜트 홉(spent hop); 약 5 내지 약 1200㎎의 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 약 0.10 내지 약 24㎎의 아연; 및 약 5 내지 약 1200㎎의 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온을 포함하는 조성물을 이용한다.

또 다른 구현예는 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법을 기재한다. 상기 방법은 치료학적 유효량의 스펜트 홉(spent hop)을 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 포유 동물에서 비급성 상태의 중금속 해독을 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 비급성 상태(non-acute state)의 중금속 해독을 위한 스펜트 홉, 아연, (1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온), 및 (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온) 또는 이들의 조합의 용도에 관한 것이다.

본 명세서에서 기재하는 특허, 출원공개공보 및 과학 문헌은 당업자의 이론을 확립하는 것으로서, 그 각각이 참조로 통합된다고 특별하고도 개별적으로 나타내고 있는 바와 동일한 정도까지 그 전체 개시 내용이 본 발명에 참조로 통합된다. 본 명세서에서 언급한 어떠한 참조문헌과 본 명세서의 특정의 개시내용 사이에 어떠한 모순이 있는 경우, 이는 본 명세서에 편들어 해결되어야 한다. 마찬가지로, 종래 기술에서 이해되는 단어나 문구의 정의와 본 명세서에서 구체적으로 언급한 단어나 문구의 정의 사이에 어떠한 모순이 있는 경우, 이는 본 명세서에 편들어 해결되어야 한다.

본 명세서에서 사용되는 기술 및 과학 용어는 달리 정의하지 않는 한 당업자가 일반적으로 이해하고 있는 바와 의미가 동일하다. 본 발명에서는 당업자에게 알려진 여러 가지 방법 및 물질을 참조한다. 재조합 DNA 기술의 일반적인 원리를 나타내고 있는 표준 참조문헌은 하기의 것을 포함한다: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989); Kaufman et al., Eds., Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine, CRC Press, Boca Raton (1995); McPherson, Ed., Directed Mutagenesis: A Practical Approach, IRL Press, Oxford (1991). 약리학의 일반적 원리를 나타내고 있는 표준 참조문헌은 하기의 것을 포함한다: Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2006).

본 명세서 및 특허청구범위에서, 단수형은 달리 명확히 나타내지 않는 한 복수형을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 단수형 "a," "an" 및 "the"는 달리 명확히 나타내지 않는 한 이들이 나타내는 용어의 복수형을 포함한다. 또한, 본 명세서에서, 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 단어 "또는"은 "양자택일의(either/or)"의 배타적인 의미가 아니라 "및/또는"의 포괄적인 의미로 사용된다. 본 명세서에서 용어 "약"은 "대충"이나 "대략"을 의미하도록 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이는 그 수치 범위의 위 및 아래로 경계를 연장함으로써 범위를 변경하는 것이다. 일반적으로, 본 명세서에서 용어 "약"은 나타낸 수치의 위 및 아래로 20%의 편차 만큼 수치를 변경하는 것이다.

본 명세서에 이용된 바와 같이, 변수에 대한 수치 범위의 상술은 그 범위내의 값들 중 어느 하나와 동일한 변수를 이용하여 본 발명이 실시될 수 있음을 시사하기 위한 것이다. 따라서, 본래부터 불연속적인 변수의 경우, 그 변수는 그 수치 범위의 종점을 포함한 어떠한 정수 값과 동일할 수 있다. 마찬가지로, 본래부터 연속적인 변수의 경우, 그 변수는 그 수치 범위의 종점을 포함한 어떠한 실수 값과 동일할 수 있다. 예를 들어, 0 내지 2 사이의 값을 갖는 것으로 기재되는 변수는 본래부터 불연속적인 변수의 경우 0, 1 또는 2 일 수 있고, 본래부터 연속적인 변수의 경우 0.0, 0.1, 0.01, 0.001, 또는 다른 어떤 실수 값일 수 있다.

이하, 본 발명의 특정 구현예를 참조로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 본 발명을 이들 특정 구현예를 참조로 설명하지만, 본 발명을 이들 특정 구현예로 제한하려는 것이 아님이 이해될 것이다. 이에 반하여, 특허청구범위에서 정의하는 본 발명의 정신 및 범위에 포함될 수 있는 대안, 변경 및 균등물을 포함하려는 것이다. 하기의 설명에서, 다수의 특정한 사항들은 본 발명의 완전한 이해를 제공하기 위하여 기재되는 것이다. 본 발명은 이러한 특정한 사항들중 일부 또는 전부가 없이도 실시될 수 있다. 다른 경우에 있어서, 본 발명을 불필요하게 흐리지 않도록 하기 위하여 잘 알려진 공정 조작은 상세히 기재하지 않았다.

본 발명을 실시하는데 있어서 당업자에게 알려진 어떤 적당한 물질 및/또는 방법이 이용될 수 있다. 그러나, 바람직한 물질 및 방법이 기재된다. 하기의 설명 및 실시예에서 언급되는 물질, 시약 등은 달리 나타내지 않는 한 상업적인 출처로부터 입수가능한 것이다.

본 발명의 제 1 구현예는 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 조성물로서, 스펜트 홉; 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 아연; 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 2종의 성분을 치료학적 유효량으로 포함하는 조성물을 기재한다.

이러한 구현예의 한 측면에서, 상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸프로파노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[( 1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함한다.

상기 구현예의 또 다른 측면에서, 상기 조성물은 (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함한다.

상기 구현예의 또 다른 측면에서, 상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함한다.

이러한 구현예의 일부 측면에서, 상기 조성물은 코팅제, 등장 및 흡수 지연제(isotonic and absorption delaying agents), 결합제, 점착제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 풍미제, 감미제, 흡수제, 세제 및 유화제로 이루어진 군에서 선택되는 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 다른 측면에서, 상기 조성물은 항산화제, 비타민, 미네랄, 단백질, 지방, 및 탄수화물로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 성분을 추가로 함유한다.

본 발명에서 사용되는 문구 "중금속 해독을 촉진"은 해독 효소 생성을 유도하거나, 기존 해독 효소의 효소활성을 증가시키거나, 해독 효소 억제제를 억제하는 것을 나타낸다. 해독 효소의 대표적인 비제한적 예는 알코올 설포트랜스퍼라제( alcohol sulphotransferase), 아민 N-메틸트랜스퍼라제, 아민 O-설포트랜스퍼라제, 아릴아민 N-아세틸트랜스퍼라제(NAT2), 카테콜 O-메틸트랜스퍼라제, 시스테인 콘주게이트 β-리아제(cysteine conjugate β-lyase), 시스테인 N-아세틸트랜스퍼라제, 글리신 아실트랜스퍼라제, 글루타메이트 아실트랜스퍼라제, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST), 헴 옥시게나아제-1, 히스타민 N-메틸트랜스퍼라제, 마이크로솜 에폭사이드 히드롤라제(mEH), 메탈로티오네인, NAD(P)H, 퀴논 옥시도리덕타제(NQO1), 페놀 O-메틸트랜스퍼라제, 페놀 설포트랜스퍼라제, 로다네제(rhodanese), 티올 S-메틸트랜스퍼라제, 티올트랜스퍼라제, 및 UDP-글루쿠로노실 트랜스퍼라제(UDP-GT)를 포함한다.

본 명세서의 청구항의 연결부(transitional phrase)에서 또는 특징부(body)에서 사용된 용어 "포함한다" 및 "포함하는"은 개방형 의미를 갖는 것으로 해석되어야 한다. 즉, 이러한 용어들은 문구 "적어도 ~를 갖는" 또는 "적어도 ~를 포함하는"과 같은 의미로 해석되어야 한다. 공정에 관한 문맥에서 사용되는 경우, 용어 "포함하는"은 그 공정이 적어도 열거된 단계를 포함하는 외에도, 추가의 단계를 포함할 수 있다는 것을 의미한다. 화합물이나 조성물에 관한 문맥에서 사용되는 경우, 용어 "포함하는"은 그 화합물이나 조성물이 적어도 열거된 특징이나 성분을 포함하는 외에도, 추가의 특징이나 성분을 포함할 수 있다는 것을 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 "화합물"은 이의 화학 구조, 화학명 또는 일반명에 의해 확인될 수 있다. 화학 구조와 화학명 또는 일반명이 서로 일치하지 않는 경우, 그 화학 구조에 우선하여 화합물의 정체를 결정한다. 본 명세서에서 기재된 화합물들은 일 이상의 키랄 중심 및/또는 이중 결합을 함유할 수 있으므로, 이중 결합 이성질체(즉, 기하 이성질체)와 같은 입체 이성질체, 거울상 이성질체 또는 부분 입체 이성질체로 존재할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 나타낸 화학 구조는 입체 이성질체적으로 순수한 형태(즉, 순수한 기하 이성질체, 순수한 거울상 이성질체 또는 순수한 부분 입체 이성질체) 및 거울상 이성질체 혼합물 및 입체 이성질체 혼합물을 포함하는, 예시 또는 확인된 화합물의 모든 가능한 거울상 이성질체 및 부분 입체 이성질체를 포함한다. 거울상 이성질체 혼합물 및 입체 이성질체의 혼합물은 당업자에게 알려진 분리 방법 또는 키랄 합성 방법을 이용하여 거울상 이성질체 성분 또는 입체 이성질체 성분으로 분할될 수 있다. 또한, 상기 화합물은 에놀 형태, 케토 형태 및 이들의 혼합물을 포함한 몇 가지 호변 이성질체 형태로 존재할 수도 있다. 따라서, 본 명세서에 나타낸 화학 구조는 예시 또는 확인된 화합물의 모든 가능한 호변 이성질체 형태를 포함한다. 또한, 본 명세서에서 기재한 화합물은 일 이상의 원자가 자연계에서 통상적으로 확인되는 원자 질량과 상이한 원자 질량을 갖는 동위원소 표지 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물에 포함될 수 있는 동위원소의 예로는 ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다. 화합물은 비용매화 형태(unsolvated form)뿐 아니라, 수화 형태를 포함한 용매화 형태 및 N-산화물의 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로 화합물은 수화, 용매 또는 N-산화물 형태로 존재할 수 있다. 어떤 화합물은 다결정 형태 또는 비결정질 형태로 존재할 수 있다. 또한, 본 발명의 범위내에서 예상되는 것으로는 상기 화합물의 동족체(congener), 유사체(analog), 가수분해 생성물, 대사산물 및 전구체 또는 프로드러그(prodrug)가 있다. 일반적으로, 달리 나타내지 않는 한, 모든 물리적 형태가 본 발명에서 예상되는 용도에 대하여 균등하고 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명에 따른 화합물은 염의 형태로 존재할 수 있다. 특히, 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염이 예상된다. 본 발명의 "약학적으로 허용가능한 염"은 본 발명 화합물과 염(예, 본 명세서에서 "Mg" 또는 "Mag"로 나타내는 마그네슘염)을 형성하는 산 또는 염기의 어느 하나와 본 발명의 화합물의 조합이며, 치료학적 조건하에서 개체에 의하여 허용되는 것이다. 일반적으로, 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 치료 지수(therapeutic index; 최저 치료학적 유효 용량에 대한 최저 독성 용량의 비)가 1 이상이다. 당업자는 최저 치료학적 유효 용량(lowest therapeutically effective dose)이 개체 및 징후에 따라 변화하므로 적당히 조절된다는 것을 인지할 것이다.

본 발명에 따른 조성물은 희석제 및 부형제를 포함하는 잘 알려진 약학적으로 허용기능한 담체를 이용하여 약학적으로 허용가능한 비히클(vehicle) 내에서 선택적으로 제제화된다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA 1990; 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams & Wilkins, 1995). 본 발명의 조성물을 제조하는데 있어서 이용되는 약학적으로 허용가능한 담체/비히클의 형태는 포유동물에 대한 조성물의 투여 방식에 따라 변화하지만, 약학적으로 허용가능한 담체는 생리학적으로 비활성이고 무독성인 것이 일반적이다. 본 발명에 따른 조성물의 제제는 일 이상 형태의 본 발명의 화합물 외에도, 증상/상태의 치료에 유용한 다른 어떠한 약학적 활성 성분을 함유할 수 있다. 용어 "약학적으로 허용가능한"은 조성물의 다른 성분과 상용성이 있고 이의 수령자에게 해가 없다는 의미로 사용되는 것이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "홉"(hop) 또는 "홉들"은 세균 작용을 방지하고 맥주에 쓴맛을 첨가하기 위하여 양조 산업에서 사용되는 쓴 방향성 오일(bitter aromatic oil)을 함유하는 후물루스(Humulus) 속의 식물 구과(cones)를 나타낸다. 상기 사용되는 홉은 후물루스 루풀루스(Humulus lupulus)로부터 유도되는 것이 더욱 바람직하다.

용어 "치료학적 유효량"은 추구하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 양의 조성물을 이용하여 치료하는 것을 나타내기 위하여 사용된다. 또한, 당업자는 치료학적 유효량은, 미세하게 조율함으로써 및/또는 본 발명의 하나 이상의 조성물을 투여함으로써, 또는 본 발명의 조성물을 또 다른 조성물 또는 화합물과 함께 투여함으로써 감소 또는 증가시킬 수 있음을 인식할 것이다. 예를 들어, Meiner, C. L., "Clinical Trials: Design, Conduct, and Analysis," Monographs in Epidemiology and Biostatistics, Vol. 8 Oxford University Press, USA (1986)을 참조한다. 따라서, 본 발명은 투여/치료를 소정의 포유동물에게 특유한 특정의 급박상태(exigency)에 맞추기 위한 방법을 제공한다. 하기의 실시예에서 예시하는 바와 같이, 치료학적 유효량은 예를 들어 비교적 적은 양에서 출발하고 그 양을 단계적으로 증가시키면서 유익한 효과를 평가함으로써 쉽게 결정될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "스펜트 홉"(spent hop)은 (1) 홉 식물 산물(hops plant product)을 용매에 노출시키고, (2) 상기 홉 식물 산물로부터 용매를 분리하고, (3) 상기 용매를 제거하는 것으로부터 얻어지는 고체상 친수성 잔류물(solid hydrophilic residue)을 말한다. 대표적인 용매로는 CO₂, 물, 유기 용매(예, 알코올), 또는 이들의 혼합물이 있다.

1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온이 도 1에 도시되어 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온"은 강황(Curcuma longa)의 뿌리줄기에서 분리된 황색으로 착색된 분획인 쿠르쿠민(curcumin)을 말한다. 쿠르쿠미노이드(curcuminoid)가 중요한 유효 성분인 것으로 여겨지며, 강황의 생물학적 활성의 원인인 되는 것으로 생각된다. 이의 주요 활성은 항염증성이지만, 쿠르쿠미노이드는 항산화, 항알레르기, 상처 치유, 항경련, 항세균, 항균 및 항종양 활성도 갖는 것으로 보고되어 왔다.

3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온이 도 2에 도시되어 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온"은 디테르펜 락톤(diterpene lactone)인 안드로그라폴리드(andrographolide)/안드로그라피스(andrographis)이다. 안드로그라폴리드와 같은 디테르펜 락톤 종은 일반적으로 식물에서 확인되며 이들의 항염증 특성이 이용된다. 이들의 작용 기작은 (i) 비만 세포(mast cell)로부터 히스타민 방출을 억제하거나, 또는 (ii) 리폭시게나제 및 시클로옥시게나제를 억제함으로써 아라키돈산 캐스케이드(arachidonic acid cascade) 동안에 형성된 염증 인자의 합성을 감소시키는 것에 기인하는 것으로 여겨진다.

본 발명에서 사용되는 용어 "환원된 이소알파산"(reduced isoalpha acid)"은 홉 식물 산물로부터 분리된 후 이성체화 및 환원된 알파 산(alpha acid)을 말하며, 시스(cis) 및 트랜스(trans) 형태를 포함한다. 환원된 이소알파산(RIAA)의 예로는 디히드로-이소알파산, 더욱 구체적으로는 Rho 디히드로-이소알파산(표 1), 테트라히드로-이소알파산(표 2), 헥사히드로-이소알파산(표 3), 및 이들의 유도체기 있으나, 이에 제한되지 않는다. "Rho"는 환원이 4-메틸-3-펜테노일 측쇄에서 카르보닐기의 환원인 환원된 알파산을 말한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "유도체" 또는 "로부터 유도되는 물질"은 또 다른 물질과 구조적으로 관련이 있고 그로부터 이론적으로 얻어질 수 있는 화학적 물질, 즉, 또 다른 물질로부터 만들어질 수 있는 물질을 말한다. 유도체는 화학 반응 또는 드노보(de novo) 화학 합성을 통해 얻을 수 있는 화합물을 포함한다. 홉 화학(hop chemistry)의 상세한 사항에 대하여는 Verzele, M. and De Keukeleire, D., Developments in Food Science 27: Chemistry and Analysis of Hop and Beer Bitter Acids, Elsevier Science Pub. Co., 1991, New York, USA의 전체 개시내용을 참조한다.

본 발명의 제 2 구현예는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법을 기재하며, 상기 방법은 스펜트 홉; 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 아연; 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온으로 이루어진 군에서 선택되는 2종 이상의 성분을 치료학적 유효량으로 포함하는 조성물을 이용한다.

이러한 구현예의 일 측면에 있어서, 상기 방법의 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸프로파노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택된 화합물을 추가로 포함한다.

상기 구현예의 또 다른 측면에서, 상기 방법의 조성물은 (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함한다.

상기 구현예의 또 다른 측면에서, 상기 방법의 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 추가로 포함한다.

이러한 구현예의 일부 측면에서, 사용된 조성물은 코팅제, 등장 및 흡수 지연제(isotonic and absorption delay agents), 결합제, 점착제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 풍미제, 감미제, 흡수제, 세제 및 유화제로 이루어진 군에서 선택되는 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 다른 측면에서, 상기 조성물은 항산화제, 비타민, 미네랄, 단백질, 지방, 및 탄수화물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 포함한다.

본 발명의 방법은 본 발명에 따른 방법의 이득을 경험할 수 있는 어떠한 포유동물에 사용하기 위한 것이다. 이러한 포유동물중 주요한 것은 인간이지만, 본 발명은 이로 제한되는 것은 아니며 수의용으로 적용할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따라, "포유동물" 또는 "중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물"은 인간 외에도, 인간이 아닌 포유동물, 특히 고양이, 개, 말 등을 포함하는 길들인 동물을 포함한다.

본 발명의 제 3 구현예는 약 0.10 내지 약 10.00g의 스펜트 홉(spent hops); 약 5 내지 약 1200㎎의 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 약 0.10 내지 약 24㎎의 아연; 및 약 5 내지 약 1200㎎의 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온을 포함하는 조성물을 기재하며, 본 발명의 또 다른 구현예는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법을 설명하며, 상기 방법은 약 0.10 내지 약 10.00g의 스펜트 홉; 약 5 내지 약 1200㎎의 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 약 0.10 내지 약 24㎎의 아연; 및 약 5 내지 약 1200㎎의 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온을 포함하는 조성물을 이용한다.

본 발명의 또 다른 구현예는 치료학적 유효량의 스펜트 홉을 포함하는 조성물을 이용하여 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법을 기재한다.

하기의 실시예들은 본 발명의 특정의 바람직한 구현예들을 더욱더 설명하기 위한 것으로서 제한하려는 의도가 있는 것은 전혀 아니다. 당업자는 단지 일상적인 실험을 이용하여, 본 명세서에 기재된 특정의 물질 및 과정에 대한 다수의 균등물을 인식 또는 확인할 수 있다.

도 1은 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온의 화학적 구조의 도식적 표현이다.

도 2는 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온의 화학적 구조의 도식적 표현이다.

도 3은 나타낸 시험 화합물을 이용하여 4 시간 동안 처리된 HepG2 세포의 핵 분획에서 Nrf-2의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다. 포뮬러 DF-SH는 스펜트 홉, 7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온(쿠르쿠민; curcumin), 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온(안드로그라피스; andrographis), Rho 디히드로-이소알파산(RIAA) 혼합물 및 Zn의 조합(525:30:30:4:1)이다.

도 4는 나타낸 시험 화합물을 이용하여 4 시간 동안 처리된 HepG2 세포의 핵 분획에서 Nrf-2의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다. 포뮬러 "3 성분"은 이소알파산(IAA), 7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온 (쿠르쿠민), 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸리덴나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온(안드로그라피스)의 조합(1:1:1)이다.

도 5는 정제 1 개당 아연(1.667 mg), 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온(50 mg), 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온(50 mg), 스펜트 홉(875 mg) 및 Rho 디히드로-이소알파산 혼합물(6.667 mg)을 포함하는 시험 제제를 투여한 후 지원자에서 메탈로티오네인(metallothionein) mRNA의 수준의 증가된 유도량(induction)을 그래프로 나타낸다.

도 6은 정제 1 개당 아연(1.667 mg), 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온(50 mg), 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온(50 mg), 스펜트 홉(875 mg) 및 Rho 디히드로-이소알파산 혼합물(6.667 mg)을 포함하는 시험 제제을 투여한 후 지원자에서 대안의 프라이머를 이용하여 측정된 메탈로티오네인 mRNA의 수준의 증가된 유도량을 그래프로 나타낸다.

도 7은 임상적으로 중요한 금속의 뇨분비에 관한 시험 제제의 효과를 그래프로 나타낸다. *는 분비량의 검출가능한 증가를 나타낸다.

도 8은 비임상적으로(non-clinically) 중요한 금속의 뇨분비에 관한 시험 제 제의 효과를 그래프로 나타낸다.

도 9는 영양물의 뇨분비에 관한 시험 제제의 효과를 그래프로 나타낸다. *는 분비량의 검출가능한 증가를 나타낸다.

실시예 1

해독 효소 활성에 대한 시험 화합물의 효과

시험 물질: 모든 시험 화합물은 Metagenics(San Clemente, CA., USA)로부터 얻었다. 시험 화합물을 디메틸 설폭시드(DMSO)에서 제조하여 -20℃에서 보관했다. 설포라판(sulforaphane), 글루타티온(glutathione) 및 1-클로로 2,4-디니트로 벤젠(CDNB)을 Sigma Chemicals(St.Louis, MO)로부터 구입했다. 다른 모든 화학 약품은 분석 등급이었다.

세포 배양 및 처리: 쥐의 간세포주 RL-34를 Japan Health Science Foundation(Tokyo, Japan)로부터 구입했다. 세포를, 5% 열 불활성화 FBS, 100 IU 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신이 보충된 DMEM 배지에서 대수증식기(log phase)로 유지했다. 인간의 간세포주 HepG2를 ATCC(Manassas, VA)로부터 구입했다. 세포를, 10% 열 불활성화 FBS, 100 IU 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신이 첨가된 DMEM 배지에서 대수증식기로 유지했다.

RL -34 세포에서의 효소 활성: 세포를 6-웰 플레이트에서 웰(well) 당 3 x 10⁵개 세포의 밀도로 계대배양했다. 다음날, DMSO 중의 시험 화합물을 0.1% DMSO 최종 농도로 첨가했다. 세포를 시험 화합물과 함께 37℃로 습식 배양기에서 2일간 배양한 후, 세포를 용해하여 효소 활성을 분석했다. 시험 화합물로 처리한 후, 세포를 0.5 ㎖ PBS로 두 번 세척하고 모든 잔류 액체를 제거했다. 세포를 용해시키기 위하여, 150 ㎕ 완충액 D(2 mM EDTA에 용해된 0.8% 디기토닌)를 각 웰에 첨가하고 실온에서 5분간 배양했다. 세포 용해물(cell lysate)을 10,000 rpm으로 10분간 원심분리했다. 상기 세포 용해물을 함유하는 상청액을 96-웰 플레이트에 옮겼다. Bicinchoninic Acid Kit (Sigma, St. Louis, MO)를 이용하여 단백질 측정을 수행했다. 모든 효소 활성 분석에서 동일 단백질 농도가 사용되었다.

GST 활성 분석: GST 효소를 함유하는 세포 용해물(20 ㎕)을 UV 평판 바닥 96-웰 마이크로티터 플레이트(UV flat bottom 96 well well microtiter plate)에 첨가했다. 반응 완충액(300 ㎕)을 각 웰에 첨가하여 100 mM KPO₄에서 8 mM 글루타티온 및 3.2mM CDNB의 최종 농도를 달성했다. CDNB의 효소 전환율(enzymatic conversion)을 340 ㎚에서 3분간 측정하여 GST 활성의 비율을 결정하였다(Apati, P., et al., J Pharm Pharmacol, 58(2): 251-6, 2006, 및 Habig, W.H., MJ. Pabst, and W.B. Jakoby, J Biol Chem., 249: 7130-9, 1974).

NADPH 퀴논 옥시도 리덕타제 분석( NQO1 ): NQO1 활성을 분석하기 위하여, NQO1 효소를 함유하는 20㎕의 세포 용해물을 평판 바닥 96-웰 마이크로티터 플레이드의 각 웰에 첨가했다. 반응 완충액(200㎕)을 각 웰에 첨가하여 25mM Tris-HCl, pH 7.4, 5μM FAD, 1mM G6P, 30μM NADP, 2U/㎖ G6PDH, 0.06% BSA, 725μM MTT 및 50μM 메나디온(menadione)의 최종 농도를 달성했다. 3분 후 610 ㎚에서 MTT의 환원을 측정하여 NQO1 활성의 유도율(induction)을 측정했다(Feng, R. et al., J Biol Chem, 280(30): 27888-95, 2005. 및 Prochaska, HJ. and A.B. Santamaria, Anal Biochem., 169: 328-36, 1988). NQO1 활성의 유도율은 비히클 대조군에 대한 처리군의 비로 측정했다.

리포터 및 발현 플라스미드의 공동형질감염( Co - transfection of Reporter and Expression Plasmids ): 헴 옥시게나제 리포터(heme oxygenase reporter)의 구조는 이미 보고되었다(Gong, P. et al., Arch Biochem Biophys, 405(2): 265-74, 2002). Invitrogen으로부터 얻은 Lipofectamine 2000 형질감염 시약을 이용하여 상기 제조자의 포로토콜에 기재된 과정에 따라 형질감염을 수행했다. HepG2 세포를, 혈청 및 항생제가 없는 MEM 배지에서 웰 당 5 x 10⁴ 개 세포의 밀도로 96-웰 백색 플레이트에서 계대배양했다. 다음날, HO-1 리포터 구조체(constsruct)을 25㎕의 opti-MEM에서 pRL-TK(2:1의 비율로 0.2 ㎍ 총 DNA)를 이용하여 희석하고 서서히 혼합했다. 0.5 ㎕의 Lipofectamine 2000을 25 ㎕의 opti-MEM에 희석하고 실온에서 5분간 배양했다. 다음에, 상기 희석된 DNA를 희석된 Lipofectamine 2000과 합치고, 서서히 혼합하고 실온에서 20 분간 배양했다. 상기 세포를 37℃의 습식 배양기에서 6 시간 동안 50㎕의 상기 복합체와 함께 배양했다. 6 시간 배양한 후, 혈청 및 항생제가 없는 100㎕ MEM 배지를 첨가하고 18 시간 동안 배양했다. 상기 배지를 버리고, DMSO 중의 시험 화합물을 24 시간 동안 0.1% DMSO 최종 농도로 첨가했다. 레닐라 루시퍼라제(Renilla luciferase)를 코딩하는 플라스미드 pRL-TK를 각 형질 감염의 내부 대조군(internal control)으로 사용했다.

루시퍼라제 활성( Luciferase activity ): 형질감염 후 2일째에, 세포를 인산염 완충 식염수로 세척하고, 듀얼 루시퍼라제 리포터 분석 장치(Dual Luciferase reporter assay system, Promega)를 이용하여 제조자의 프로토콜에 따라 수동 용해 완충액(passive lysis byffer)에서 용해시켰다. 우선, 상기 세포 용해물에 대하여, 100㎕의 기질 LARII를 이용하여 반딧불 루시퍼라제 활성을 분석했다. 다음에, 100 ㎕의 STOP & GLO 시약을 첨가하여 반딧불 루시퍼라제 활성을 억제하고 레닐라 루시퍼라제(Renilla luciferase)를 활성화하여 그 활성을 또한 측정했다. 상기 분석은 PerkinElmer 발광분석기(luminometer)에서 수행하였으며, 상대적 루시퍼라제 활성(relative luciferase activity)은 하기와 같이 계산되었다: 100,000/레닐라 루시퍼라제 활성(유닛(unit)) 3 반딧불 루시퍼라제 활성(유닛(unit)). 각 세트의 형질감염을 3회 반복했다.

정량적 PCR: HepG2 세포를 6-웰 플레이트에서 웰 당 3 x 10⁵ 개 세포의 밀도로 계대배양했다. 다음날, DMSO 중의 시험 화합물을 0.1% DMSO 최종 농도로 첨가했다. 상기 세포를 37℃의 습식 배양기에서 8 시간 동안 배양했다. 다음에, mRNA를 TRI 시약(Sigma Chemicals)을 이용하여 제조자의 지시에 따라 유전자 발현 분석을 위해 정제했다. mRNA 정제 후, QPCR 분석에 사용하기 위하여 cDNA 주형을 생성하였다. 이는 Techgene 서모사이클러(thermocycler)(Techne, Burlington, NJ)에서 60 분간 37℃로 Omniscript RT kit(Qiagen, Valencia, CA)를 이용하여 수행하여, 2 ㎍ 출발 mRNA를 갖는 20 ㎕ 반응액을 얻었다. 블라인드 시료(blinded sample)를 Albany(Renesselaer, NY)에 있는 대학의 Center for Functional Genomics의 John Tine 박사에게 보냈다. Taqman® 화학 및 ΔΔCt 정량화를 이용하여 정량적 PCR을 수행했다. 분석은 웰 당 20 ng 총 RNA 및 내부 대조군으로 GADPH를 이용하여 삼중으로 수행했다. 분석된 나머지 5개의 유전자는 GSTA1, NQO1, HMOX1, 및 메탈로티오네인의 두 개의 그룹인 hMT1&2 및 hMT1&2alt이었다. 메탈로티오네인 유전자 발현을 위한 프로토콜을 Aydemir et al.의 연구결과(Proc Natl Acad Sci U S A, 103(6): 1699-704, 2006)로부터 얻었는데, 두 개의 포워드 프라이머(forward primer), 두 개의 역방향 프라이머(reverse primer) 및 두 개의 Taqman® 프로브의 조합이 MT1H, -1H-유사(-1H-like), -1G, -1L, -1E, -1A, 및 MT2에 매치되었다.

웨스턴 블롯 검출: HepG2 세포주를 위와 같이 배양하고 시험 화합물을 4 시 간 동안 참가한 다음, 세포를 용해하고 핵 분획을 분리했다(Dignam, J. D., R.M. Lebovitz, 및 R.G. Roeder, Nucleic Acids Res, 11(5): 1475-89, 1983). 총 단백질 농도를 Bicinchoninic Acid Kit (Sigma)를 이용하여 측정했다. 총 세포 용해물(60 ㎍ 총 단백질)을 전기영동하고, 4℃에서 밤새 일차 항체 배양(primary antibody incubation)을 이용하여 Nrf-2의 검출을 수행했다(Santa Cruz Biotechnology, Inc, Santa Cruz, CA). 서양고추냉이 퍼옥시다제(horseradish peroxidase)에 결합된 이차 항체를 1 시간 동안 배양한 다음(GE Healthcare, Piscataway, NJ), 증강 화학발광(enhanced chemiluminescence(ECL)) 장치를 이용하여 단백질을 시각화했다. 밴드의 순수 강도(net intensity)를 측정하는 Kodak Molecular Imaging Software v.4.0 (Eastman Kodak Company, Rochester, NY)를 이용하여 밀도 측정(densitometry)을 수행했다.

통계학적 분석: GST 및 NADPH 퀴논 리덕타제 분석 활성의 유도율(induction)을 비히클(DMSO) 대조군에 대한 시험 화합물 처리군의 비로 결정했다. GST 및 NQO1 활성을 동일 단백질에 대하여 표준화했다. 각 조건마다 최소 두 개의 웰을 이용했다. 헴 옥시게나제 프로모터(heme oxygenase promoter) 활성의 유도율은 비히클 대조군에 대한 시험 화합물 처리군의 비로 결정했다. 대조군으로 레닐라 루시퍼라제 활성을 이용하여 루시퍼라제 활성을 표준화했다. 각 조건마다 최소 4 개의 웰을 이용했다. 데이터는 세 개의 독립적인 실험의 평균으로 나타냈다(SEM).

결과

효소 활성: 설포라판(sulforaphane)은 Nrf-2의 알려진 활성자로서, 상기 효소 활성 분석에서 대조군으로 사용되었다. DMSO 대조군과 비교하여 시험 화합물에 의한 활성의 20% 유도율은 활성(active)인 것으로 간주된다. GST 활성(표 4)은 RL-34 세포주에서 설포라판(3 ㎍/㎖), 안드로그라피스(25 ㎍/㎖), 잔토휴몰(xanthohumol; 1 ㎍/㎖), 푸룬(prune; 20 ㎍/㎖), 비타니아(withania; 20 ㎍/㎖), 오스테오신(osteosine; 20 ㎍/㎖), MCHA(20 ㎍/㎖), 및 돼지 아트레드(arthred porcine; 20 ㎍/㎖)에 의해 20% 이상 유도되었다. NQO1 효소 활성(표 5)은 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온)(쿠르쿠민)(5 ㎍/㎖), (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온)(안드로그라피스)(25 ㎍/㎖), 잔토휴몰(1 ㎍/㎖), 설포라판(3 ㎍/㎖), 비타니아(20 ㎍/㎖), I3C(25 ㎍/㎖), 레스베라트롤(resveratrol; 20 ㎍/㎖), 밀크 시슬(milk thistle; 25 ㎍/㎖), IAA(5 ㎍/㎖), 포메그라나이트(pomegranite; 25 ㎍/㎖), 파르테놀리드(parthenolide; 20 ㎍/㎖), 암라(amla) (25 ㎍/㎖), 올레아놀산(Oleanolic acid; 25 ㎍/㎖), DIM (25 ㎍/㎖), 케르세틴(quercetin; 20 ㎍/㎖), 베르베린(berberine; 20 ㎍/㎖), 계피(cinnamon; 25 ㎍/㎖), 갈근(Puerariae; 20 ㎍/㎖), 고추냉이 뿌리줄기(Wasabia Rhizome; 25 ㎍/㎖), 물냉이(watercress; 25 ㎍/㎖), 삼지구엽초(Epimedium; 20 ㎍/㎖), 클로로젠산(chlorogenic acid; 25 ㎍/㎖), 오크라(Abelmoschus; 20 ㎍/㎖), 보니스테인(bonistein; 20 ㎍/㎖), 페퍼민트(peppermint; 25 ㎍/㎖), 블루베리(blueberry; 25 ㎍/㎖), 호황련(Picrorhiza; 25 ㎍/㎖), 고추냉이 분말 (25 ㎍/㎖), HHIAA (5 ㎍/㎖), 오스테오신(osteosine; 20 ㎍/㎖), 민들레(Dandelion; 25 ㎍/㎖), 커피 생두(green coffee; 25 ㎍/㎖) 및 THIAA(5 ㎍/㎖)에 의하여 20% 이상 유도되었다.

RL -34 세포주에서 GST 효소 활성에 대한 시험 화합물의 스크리닝

시험 화합물(㎍/㎖)	GST 활성 유도율(배)	SEM	n	시험 화합물(㎍/㎖)	GST 활성 유도율(배)	SEM	n
설포라판 (3㎍/㎖)	1.8	0.12	5	블루베리 (25㎍/㎖)	1.0	0.05	2
안드로그라피스 (25㎍/㎖)	1.4	0.03	4	아이리쉬 모스 (Irish Moss, 25㎍/㎖)	1.0	0.08	2
잔토휴몰 (1㎍/㎖)	1.4	0.05	3	프럭터스 LL (Fructus LL, 20㎍/㎖)	1.0	0.08	2
푸룬 (20㎍/㎖)	1.4		1	FOS (20㎍/㎖)	1.0	0.05	2
포뮬러 DF-SH (50㎍/㎖)	1.3	0.10	3	DIM (25㎍/㎖)	1.0	0.00	2
비타니아 (20㎍/㎖)	1.3	0.02	2	Broc 13 (25㎍/㎖)	1.0		1
오스테오신 (20㎍/㎖)	1.2		1	갈근 (20㎍/㎖)	1.0	0.07	2
MCHA (20㎍/㎖)	1.2		1	THIAA (5㎍/㎖)	1.0	0.02	3
돼지 아트레드(20㎍/㎖)	1.2		1	페퍼민트 (25 ㎍/㎖)	1.0	0.05	2
글루코사민 (20㎍/㎖)	1.1		1	암라 (25 ㎍/㎖)	1.0	0.02	4
레스베라트롤 (Resveratrol, 20㎍/㎖)	1.1	0.08	2	유염기성 단백질 (Milk Basic Protein, 20㎍/㎖)	1.0		1
CLA (20㎍/㎖)	1.1	0.03	2	폴리코사놀 (Policosanol, 20㎍/㎖)	1.0	0.05	2
민들레 (25㎍/㎖)	1.1	0.19	4	밀크 시슬 (25㎍/㎖)	1.0	0.04	4
I3C (20㎍/㎖)	1.1	0.08	2	글라브리딘 (Glabridin, 20㎍/㎖)	1.0		1
블랙 코호시 (Black Cohosh, 20㎍/㎖)	1.1	0.04	2	고추냉이 분말 (25㎍/㎖)	1.0	0.04	2
스펜트 홉 (50㎍/㎖)	1.1	0.07	3	플로리진 (Phloridzin, 20㎍/㎖)	1.0	0.01	2
IAA (5㎍/㎖)	1.1	0.05	4	커피 생두 (25㎍/㎖)	1.0	0.03	2
비타민 C (20㎍/㎖)	1.1	0.01	2	Broc 12 (25㎍/㎖)	1.0		1
이프리플라본(Ipriflavone, 20㎍/㎖)	1.1	0.00	2	호황련 (25㎍/㎖)	1.0	0.03	3
클로로젠산(25㎍/㎖)	1.1		1	녹차 (25㎍/㎖)	1.0		1
K-시트레이트 (20㎍/㎖)	1.1	0.04	2	베르베린 (20㎍/㎖)	1.0		1
히알루론산 (20㎍/㎖)	1.1		1	DHEA (20㎍/㎖)	1.0	0.01	2
소 아트레드 (Arthred bivune, 20 ㎍/㎖)	1.0	0.01	2	Broc 10 (25㎍/㎖)	1.0		1
계피 (25 ㎍/㎖)	1.0	0.01	2	본펩 (Bonepep, 20㎍/㎖)	1.0	0.01	2
RIAA (5 ㎍/㎖)	1.0	0.00	2	Broc 14 (25 ㎍/㎖)	1.0		1
아스트라갈러스 (Astragalus, 20㎍/㎖)	1.0		1	올리유로핀 (Oleuropein, 20㎍/㎖)	1.0	0.04	2
Broc 19 (25 ㎍/㎖)	1.0		1	비타민 K2 (20㎍/㎖)	1.0		1
Broc 49 (25 ㎍/㎖)	1.0		1	마늘 (25㎍/㎖)	1.0	0.06	2
보니스테인 (Bonistein, 20㎍/㎖)	1.0		1	데빌스 크로우 (Devil's Claw, 20㎍/㎖)	1.0	0.12	2
Broc 11 (25 ㎍/㎖)	1.0		1	콜라 2 (Kolla 2, 20㎍/㎖)	1.0	0.04	2
루틴 (Rutin, 20 ㎍/㎖)	1.0	0.04	2	고추냉이 뿌리줄기(25㎍/㎖)	1.0	0.00	2
페릴라 (Perilla, 20 ㎍/㎖)	1.0	0.03	3	헤스페리딘 (Hespeidine, 20㎍/㎖)	1.0	0.07	2
올리브유 (20 ㎍/㎖)	1.0	0.05	2	물냉이 (25㎍/㎖)	1.0	0.05	2
파르테놀리드 (20 ㎍/㎖)	1.0	0.06	2	마 (Dioscorea, 20㎍/㎖)	1.0	0.05	3
HHIAA (5 ㎍/㎖)	1.0	0.01	3	DHA (20㎍/㎖)	1.0	0.03	2
케르세틴 (20 ㎍/㎖)	1.0	0.02	2	홍차 (black tea, 20㎍/㎖)	1.0	0.13	2
테르미날린 (Terminalin, 25㎍/㎖)	1.0	0.03	2	샐비어 MB(Salvia MB, 20㎍/㎖)	0.9	0.04	2
포메그라나이트(Pomegranite, 25㎍/㎖)	1.0	0.04	3	오크라 (20㎍/㎖)	0.9	0.10	2
올레아놀산 (25㎍/㎖)	1.0	0.01	4	콩 이소플라본 (20㎍/㎖)	0.9	0.04	2
아마씨 (Flaxseed, 20㎍/㎖)	1.0	0.07	2	Broc 09 (25㎍/㎖)	0.9		1
쿠르쿠민 (5㎍/㎖)	1.0	0.04	2	흑미 (Black Rice, 20㎍/㎖)	0.8	0.14	2
이눌린 (Inulin, 20㎍/㎖)	1.0	0.04	2	홍국 (Red Yeast Rice, 20㎍/㎖)	0.8	0.09	2
삼지구엽초 (20㎍/㎖)	1.0	0.09	2

포뮬러 DF-SH는 스펜트 홉, (1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온)(쿠르쿠민), (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온) (안드라그라피스), Rho 이소알파산 및 Zn의 조합(525:30:30:4:1)이다.

RL -34 세포주에서 NQO -1 효소 활성에 대한 시험 화합물의 스크리닝

시험화합물(㎍/㎖)	NQO1 활성 유도율	SEM	n	시험화합물(㎍/㎖)	NQO1 활성 유도율	SEM	n
쿠르쿠민 (5㎍/㎖)	4.6	1.59	3	Broc 09 (25㎍/㎖)	1.1		1
안드로그라피스 (25㎍/㎖)	4.5	1.00	4	Broc 12 (25㎍/㎖)	1.1		1
포뮬러 DF-SH (50㎍/㎖)	4.0	0.43	3	Broc 14 (25㎍/㎖)	1.1		1
잔토휴몰 (1㎍/㎖)	3.7	0.78	3	아마씨 (20 ㎍/㎖)	1.1	0.05	2
설포라판 (3㎍/㎖)	3.7	0.76	4	슬라이 이소플라본 (Sly Isoflavones, 20㎍/㎖)	1.1	0.02	2
비타니아(20㎍/㎖)	2.4	0.72	2	돼지 아트레드 (20㎍/㎖)	1.1		1
I3C (25㎍/㎖)	2.4	0.34	2	마늘 (25㎍/㎖)	1.0		1
레스베라트롤(20㎍/㎖)	2.2	0.44	2	헤스페리딘 (20㎍/㎖)	1.0	0.04	2
스펜트 홉 (50㎍/㎖)	2.0	0.15	3	테르미날린 (25㎍/㎖)	1.0	0.16	2
밀크 시슬 (25㎍/㎖)	2.0	0.04	4	Broc 11 (25㎍/㎖)	1.0		1
IAA (5㎍/㎖)	1.9	0.16	4	페릴라 (20㎍/㎖)	1.0	0.05	2
프로메그라나이트 (Promegranite, 25㎍/㎖)	1.8	0.41	3	푸룬 (20㎍/㎖)	1.0		1
파르테놀리드 (20㎍/㎖)	1.7	0.25	2	CLA (20㎍/㎖)	1.0	0.05	2
암라 (25㎍/㎖)	1.6	0.09	4	샐비어 MB (20㎍/㎖)	1.0	0.03	2
올레아놀산 (25㎍/㎖)	1.5	0.08	4	MCHA (20㎍/㎖)	1.0		1
DIM (25㎍/㎖)	1.5	0.22	2	마 (20㎍/㎖)	1.0	0.12	2
케르세틴 (20㎍/㎖)	1.4	0.07	2	올리유로핀 (20㎍/㎖)	1.0	0.02	2
베르베린 (20㎍/㎖)	1.4	0.47	2	Broc 13 (25㎍/㎖)	1.0		1
계피 (25㎍/㎖)	1.4	0.28	2	글라브리딘 (20㎍/㎖)	1.0	0.02	2
갈근 (20㎍/㎖)	1.4	0.06	2	소 아트레드 (20㎍/㎖)	1.0	0.13	3
고추냉이 뿌리줄기 (25㎍/㎖)	1.4	0.17	2	블랙 코호시 (20㎍/㎖)	1.0	0.03	2
물냉이 (25㎍/㎖)	1.3	0.03	2	올리브유 (20㎍/㎖)	1.0	0.06	2
삼지구엽초 (20㎍/㎖)	1.3		1	플로리진 (20㎍/㎖)	1.0	0.02	2
클로로젠산 (25㎍/㎖)	1.2	0.02	2	콜라 2 (20㎍/㎖)	1.0	0.04	2
오크라 (20㎍/㎖)	1.2	0.28	2	글루코사민 (20㎍/㎖)	1.0		1
보니스테인 (20㎍/㎖)	1.2		1	아스트라갈러스 (20㎍/㎖)	1.0		1
페퍼민트 (25㎍/㎖)	1.2	0.09	4	DHA (20㎍/㎖)	0.9	0.03	2
블루베리 (25㎍/㎖)	1.2	0.04	2	히알루론산 (20㎍/㎖)	0.9		1
호황련 (25㎍/㎖)	1.2	0.03	2	이눌린 (20㎍/㎖)	0.9	0.03	2
고추냉이 분말 (25㎍/㎖)	1.2	0.03	2	FOS (20㎍/㎖)	0.9	0.07	2
HHIAA (5㎍/㎖)	1.2	0.07	3	비타민 C (20㎍/㎖)	0.9		1
오스테오신 (20㎍/㎖)	1.2		1	본펩 (20㎍/㎖)	0.9		1
민들레 (25㎍/㎖)	1.2	0.01	2	K-시트레이트 (20㎍/㎖)	0.9	0.05	2
커피 생두 (25㎍/㎖)	1.2	0.01	2	홍차 (20㎍/㎖)	0.9	0.00	2
THIAA (5㎍/㎖)	1.2	0.08	3	녹차 (25㎍/㎖)	0.9		1
RIAA (5㎍/㎖)	1.1	0.01	2	비타민 K2 (20㎍/㎖)	0.9	0.02	2
아이리쉬 모스 (25㎍/㎖)	1.1		1	유염기성 단백질 (20㎍/㎖)	0.9		1
Broc 10 (25㎍/㎖)	1.1		1	루틴 (20㎍/㎖)	0.9	0.07	2
Broc 19 (25㎍/㎖)	1.1		1	프럭터스 LL (20㎍/㎖)	0.9	0.03	2
Broc 49 (25㎍/㎖)	1.1		1	이프리플라본 (20㎍/㎖)	0.8	0.02	2
흑미 (20㎍/㎖)	1.1	0.10	2	홍국 (20㎍/㎖)	0.8	0.04	2
폴리코사놀 (20㎍/㎖)	1.1	0.06	2	데빌스 크로우 (20㎍/㎖)	0.8	0.14	2
DHEA (20㎍/㎖)	1.1	0.11	2

HO -1 전사 활성화: 헴 옥시게나제는 헴 옥시게나제 유전자상의 ARE 및 MRE 결합 부위의 활성화를 통해 Nrf-2 및 MTF-1 전사 인자에 의해 조절된다. Nrf-2 전사 인자의 활성화를 위한 알려진 화합물인 설포라판은 HepG2 세포주에서 헴 옥시게나제 프로모터 활성을 유도한다(표 6). DMSO 대조군과 비교하여 시험 화합물에 의한 활성의 30% 유도율은 활성(active)인 것으로 간주된다. 시험 화합물(1,7-비스(4-히드록시-3-메틸페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온)(쿠르쿠민), 잔토휴몰, (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온)(안드로그라피스) 추출물, 설포라판, IAA, 올레아놀산, 녹차 카테킨(green tea caatechins), 밀크 시슬, 테르미날린(terminalin), ZnCl₂, 마늘, 암라(amla) 열매 추출물 및 계피 가루는 헴 옥시게나제 프로모터 활성의 발현을 유도했다.

HepG2 세포주에서 시험 화합물에 의한 헴 옥시게나제(( HO -1) 루시퍼라제 리포터의 활성화

시험 화합물	헴 옥시게나제 루시퍼라제 활성의 유도율(배)
시험 화합물	활성	±SEM
쿠르쿠민	6.1	±2.55
잔토휴몰	5.4	±0.64
안드로그라피스 추출물	4.4	±0.57
설포라판	4.2	±0.70
IAA	3.6	±0.85
올레아놀산	2.7	±1.20
녹차 카테킨	2.6	±0.49
밀크 시슬	2.0	±0.28
테르미날린	1.7	±0.01
ZnCl2	1.5	±0.01
마늘	1.4	±0.01
암라 열매 추출물	1.3	±0.50
계피 가루	1.3	±0.01

유전자 발현: 분석된 유전자의 상대 발현량(relative expression, RE)을 GAPDH에 대하여 기록했다. 대조군 세포에 대한 상대 발현량을 측정하기 위하여, DMSO 대조군의 평균 RE 값에 대한 처리군의 비를 모든 시료에 대하여 계산했다. hMT1&2 및 hMT1&2alt의 평균을 계산하여 MT 1,2로 나타냈다. GSTA1 및 NQO1의 평균을 계산하여 2상 유전자 유도율(Phase Ⅱ gene induction)로 나타냈다. 메탈로티오네인(MT 1,2), 헴 옥시게나제(HMOXl), 및 2상 효소(GSTAl 및 NQO1)에 대한 평균 유전자 발현량을 하기 표 7에 나타낸다. 대조군인 CdCl₂는 MT 및 HMOX1 모두를 유도하는 것으로 확인되었으나, 2상(Phase Ⅱ)을 증가시킬 수는 없었다. 또는, 설포라판은 2상 및 HMOX1를 증가시켰으나, MT를 증가시키지는 못했다. 2상을 20% 이상 증가시킨 시험 화합물은 순서대로 안드로그라피스, IAA 및 쿠르쿠민을 포함하며, HMOX1를 증가시킨 화합물은 순서대로 쿠르쿠민, 안드로그라피스, 푸쿠스 매시(fucus mesh), 부챗살(gymnogongrus), IAA, 및 잔토휴몰을 포함하고, MT를 증가시킨 시험 화합물은 순서대로 올레아놀산, 푸쿠스 매시, 잔토휴몰 및 부챗살이다.

시험 화합물로 처리한 후 HepG2 세포에서 유전자 발현(나타내진 값들은 ㎍/㎖임)

	MT 1,2(ave)		HMOX1		2상(ave)
	DMSO에 대한 비	±SD	DMSO에 대한 비	±SD	DMSO에 대한 비	±SD
DMSO 대조군	1.00	0.26	1.00	0.15	1.00	0.09
CdCl₂(40 μM)	83.31	18.50	21.23	5.28	0.94	0.23
설포라판(3)	0.67	0.16	8.82	1.98	1.84	0.44
안드로그라피스(25)	0.87	0.12	2.43	0.37	2.29	0.39
쿠르쿠민(5)	0.90	0.48	2.09	1.14	1.15	0.43
ZnCl₂ (10)	12.43	8.98	0.97	0.16	0.94	0.09
IAA (5)	0.89	0.12	1.26	0.15	1.26	0.18
RIAA(5)	0.83	0.22	2.54	1.82	1.15	0.35
THIAA(5)	0.90	0.17	1.11	0.01	0.99	0.13
잔토휴몰(1)	0.90	0.40	1.11	0.12	1.02	0.19
스펜트 홉(20)	1.35	0.31	1.31	0.15	0.69	0.29
스펜트 홉(50)	2.12	0.61	1.25	0.08	1.14	0.64
SH 포뮬러(10)	0.95	0.13	1.64	0.20	1.06	0.07
SH 포뮬러(20)	1.04	0.13	3.55	0.15	1.52	0.07
SH 포뮬러(50)	0.79	0.30	1.14	0.12	0.66	0.09
3C 포뮬러(1)	1.15	0.14	0.85	0.12	0.84	0.16
3C 포뮬러(2.5)	1.05	0.11	1.03	0.05	1.00	0.20
3C 포뮬러(5)	2.07	2.00	30.34	49.01	29.93	59.01
3C 포뮬러(7.5)	1.12	0.11	2.14	0.33	11.12	21.07
올레아놀산(25)	2.39	0.52	1.88	1.41	0.91	0.27
비타니아(20)	1.06	0.18	1.17	0.23	0.98	0.24
As. Nod Mush(25)	1.05	0.08	0.82	0.02	0.68	0.16
C. Chamissoi(25)	1.01	0.07	1.04	0.13	0.86	0.15
C. Crispus(25)	1.07	0.18	0.90	0.20	0.79	0.16
푸쿠스 매시(25)	1.28	0.18	2.12	1.37	6.82	11.77
녹차(25)	0.85	0.09	0.77	0.00	0.83	0.11
부챗살(25)	1.19	0.03	1.63	0.89	0.97	0.02
아이리쉬 모스(25)	2.07	2.26	0.91	0.07	0.91	0.07
사르코디오테카(Sarcodiotheca, 25)	0.88	0.09	0.85	0.15	0.77	0.08

3C 포뮬러는 동일 비율의 IAA, 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온(쿠르쿠민) 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온(안드로그라피스)의 조합이다. SH 포뮬러는 스펜트 홉, Rho 이소알파산, 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온(쿠르쿠민), 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온)(안드로그라피스) 및 아연의 조합(525:4:30:30:1)이다. 회색 음영은 단지 하나의 복제(replicate)만을 나타낸다.

Nrf -2 전좌(translocation): 생체이물(xenobiotics) 및 항산화제로 처리하면 세포질로부터 핵으로 Nrf-2의 전좌가 일어나는 것으로 확인되었다(Chan, J. Y. 및 M. Kwong, Biochim Biophys Acta, 1517(1): 19-26, 2000, 및 Chan, K. et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 93(24): 13943-8, 1996). 도 3 및 도 4에 도시한 바와 같이, 시험 화합물로 처리한 HepG2 세포의 핵 분획에서 4 시간 후 Nrf-2가 관찰되었다. 대조군인 설포라판은 Nrf-2 핵 전좌의 극적인 증가를 나타냈다. 또한, 스펜트 홉, (1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온)(쿠르쿠민), (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온)(안드로그라피스), Rho 이소알파산 및 Zn의 조합(525:30:30:4:1), 및 IAA, (1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온)(쿠르쿠민) 및 (3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온)(안드로그라피스)의 조합(1:1:1)은 Nrf-2의 핵으로의 두드러진 전좌를 나타냈다.

실시예 2

mRNA 생성시 메탈로티오네인에 대한 시험 제제의 효과

이 실시예는 금속 해독 및 배출(elimination)의 바이오마커에 관한 독특한 영양치료제(nutraceutical) 조합의 효과를 조사하는 연구이었다.

9 명의 지원자를 모집하여 14 일간 추적 조사했다. 첫 번째 방문(Visit 1)시, 기준선 평가치(baseline evaluation)를 얻었다. 그 후 즉시, 정제(tablet) 1개당 아연(1.667 mg), 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온(50 mg), 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온(50 mg), 스펜트 홉(875 mg) 및 Rho 디히드로-이소알파산 혼합물(6.667 mg)을 포함하는 시험 제제를 이용한 치료를 시작했고 그 치료를 10일간 계속했다.

임상 평가치는 2 번째 방문(3일째), 3 번째 방문(6일째), 4 번째 방문(8일째), 5 번째 방문(10 일째) 및 6 번째 방문(14일째)시 얻었다. 6번째 방문은 치료의 중단후 4일째 였다. 1 번째 및 5 번째 방문시, 일반 혈액 검사, 종합 신진대사 패널(comprehensive metabolic panel) 및 감마 글루타밀 트랜스퍼라제 수준을 포함하는 기본 안전성 실험을 수행했다. 효능 종점(Efficacy endpoint)은 메탈로티오네인 1 및 2의 메신저 RNA 수준(유전자 상향 조절을 반영함) 및 독성 및 영양 미량원소의 자극되지 않은 뇨분비(unprovoked urinary excretion)의 측정을 포함했다.

인간 혈액 시료에서 메탈로티오네인 mRNA의 측정 및 평가는 하기와 같이 수행했다.

RNA 추출: 채혈 후, 2㎖ 전혈(whole blood)을 5㎖의 RNAlater(Ambion, Austin, TX)와 혼합했다. RNA 추출은 RiboPure Blood RNA Isolation Kit(Ambion, Austin, TX)를 이용하여 제조자의 지침에 따라 수행했다. Nanodrop 분광광도계(Nanodrop Technologies, Wilmington, DE)를 이용하여 RNA를 정량했다.

역전사효소 분석( Reverse Transcriptase Assays): RETROscript First Strand Synthesis Kit(Ambion, Austin, TX)를 이용하여 RNA를 첫 번째 스트랜드 cDNA로 전환하고 oligo-dT를 이용하여 제조자의 지침에 따라 프라이머 처리했다.

프라이머 및 프로브: 내생적 대조군으로 사용되는 GAPDH 발현을 정량하기 위한 Taqman 유전자 발현 분석값을 Applied Biosystems(Foster City, CA; assay Hs99999905_ml)로부터 얻었다. 인간 메탈로티오네인을 표적화하는 Taqman-기반 분석을 위한 프라이머 및 프로브는 이전에 설명되었다(Aydemir TB, Blanchard RK, 및 Cousins RJ, 2006. Zinc supplementation of young men alters metallothionein, zinc transporter, and cytokine gene expression in leukocyte populations. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103, 1699-1704). 포워드 및 리버스 프라이머, 및 5'-FAM 및 3'-TAMRA로 표지된 HPLC-정제된 Taqman 프로브는 Operon Biotechnologies, Inc(Huntsville, AL)로부터 얻었다.

이러한 시약들의 서열은 아래와 같다:

hMTl,2-F 5'-GCACCTCCTGCAAGAAAAGCT

hMTl,2-R 5'-GCAGCCTTGGGCACACTT

hMT1,2-T 5'-FAM CACAGCCCACAGGGCAGCAGGTAMRA

hMTl,2Alt-F 5'-GCACCTCCTGCAAGAAGAGCT

hMTl,2Alt-R 5'-GCAGCCCTGGGCACACTT

hMTl,2Alt-T 5'-FAM ACAGCCCACAGGACAGCAGG

정량적 PCR 분석: 2-단계 Taqman-기반 RT-qPCR을 수행했다. 첫 번째 스트랜드 cDNA를 위에서 설명한 바와 같이 합성했다. 첫 번째 실험에서는, 20 ng 출발 RNA의 cDNA 등가물을 qPCR 반응액에 포함시켰다. 메탈로티오네인발현을 검출하기 위한 반응액은 1X Taqman Master Mix(Applied Biosystems, Foster City, CA), 400nM의 포워드 및 리버스 프라이머 및 200nM의 Taqman 프로브를 함유했다. GAPDH 발현을 검출하기 위한 반응액은 제조자(Applied Biosystems)에 의하여 추천된 1X Taqman Master Mix(Applied Biosystems) 및 1X 유전자-특이 분석 시약(Applied Biosystems)을 포함했다. 모든 반응은 삼중으로 진행했다. 주형 cDNA를 함유하지 않는 반응액을 음성 대조군으로 포함시켰다. 서브세트의 시료를 이용한 두 번째 실험에서는, 100ng의 출발 DNA의 cDNA 등가물을 상기와 다른 조건으로 qPCRs에 포함시켰다. 교차 분석 비교(cross-assay comparison)가 가능하도록 기준 시료를 두 분석에 포함시켰다.

반응 플레이트를 Applied Biosystems 7900HT Sequence Detection System상에서 처리했다. AmpliTaq Gold 폴리머라제를 95℃에서 10 분간 활성화한 다음, 95℃에서 15초의 변성 및 60℃에서 60초의 어닐링 및 확장(extension)으로 이루어진 사이클을 40회 반복했다.

증폭 데이터를 ABI Prism SDS 2.1 software(Applied Biosystems)를 이용하여 분석했다. 유전자 발현의 상대적 정량화는 ΔΔCt 방법을 이용하여 수행했으며(Winer J, Jung CKS, Shackel I, Williams, PM. 1999, Development and validation of real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction for monitoring gene expression in cardiac myocytes in vitro. Anal Biochem. 270, 41-49), GAPDH 발현은, 각 시료 내의 발현을 표준화하기 위한 내생적 대조군으로 작용하였다.

시험 결과가 도 5 및 도 6에 그래프로 도시되어 있으며, 이는 간 해독 메탈로티오네인 mRNA 수준의 증가 수단에 있어서의 본 발명의 효능을 입증한다.

실시예 3

중금속의 뇨분비에 관한 시험 제제의 효과

이 실시예는 인간 지원자를 대상으로 중금속의 뇨분비에 관한 시험 제제의 효과를 결정하기 위하여 수행되었다.

연구 설계: 연구 그룹 및 치료 계획은 상기 실시예 2에 기재한 바와 같다. 소변 시료를 채취하고, Genova Diagnostics(North Carolina, USA)에 의하여 중금속 측정이 수행되었다.

결과: 하기 표 8은 시험 지원자들에 있어서 임상적으로 관련이 있는 미량 원소들의 배출(elimination)에 관하여 보고하고 있다. 도 7 및 도 8은 임상적으로 중요한 금속(도 7) 및 비임상적으로 중요한 금속(도 8)의 분비에 관한 시험 제제의 결과를 그래프로 나타내고 있다. 도 7에서 확인할 수 있는 바와 같이, 시험 제제는 다수의 중요한 금속의 분비를 현저하게 촉진했다. 도 9는 영양물의 뇨분비에 관한 시험 제제의 결과를 그래프로 나타내고 있다.

중금속의 뇨분비

금속	V1 avg*	V5 avg	변화(%)	금속	V1 avg	V5 avg	변화(%)
알루미늄	10.41	11.29	8.4	망간	0.51	2.17	327.0
안티몬	0.061	0.063	4.1	수은	ND	ND
비소	17.25	21.36	23.9	몰리브덴	39.5	45.75	15.8
바륨	2.35	2.95	25.5	니켈	1.3883	1.4867	7.1
비스무스	ND	ND		니오븀	ND	ND
카드뮴	0.16	0.30	90.5	백금	1.256	0.087	-93.1***
칼슘	93.13	93.38	-1.9	칼륨	2307.13	2594.38	12.5
세슘	5.33	5.01	-5.9	루비듐	1831.38	1758.38	-4.0
크롬	2.25	1.38	-38.9	셀레늄	89.75	89.00	-0.8
코발트	0.12	0.30	148.4	스트론튬	101.75	96.00	-5.7
구리	8.29	9.46	14.2	황	519.38	466.38	-10.2
크레아티닌	43.12**	58.86	36.5	탈륨	0.31	0.29	-6.9
가돌리늄	ND	ND		토륨	ND	ND
갈륨	0.033	0.059	80.0	주석	2.19	1.68	-23.3
철	ND	ND		텅스텐	ND	ND
납	0.35	0.617	76.2	우라늄	ND	ND
리튬	22.50	24.50	8.9	바나듐	1.10	1.08	-2.3
마그네슘	54.13	51.00	-5.8	아연	330.5	326.0	-1.4

* = 보고된 양은 달리 나타내지 않는 한 크레아티닌 1g 당 ㎍임.

** = mg/dL으로 보고됨.

*** = 검출가능한 수준의 금속을 갖는 개체에 대하여만 제시된 데이터

ND = 검출 가능한 한계 미만

Claims

스펜트 홉(spent hops); 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 아연; 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 2종의 성분을 치료학적 유효량으로 포함하는, 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1- 일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸프로파노일)-5-(3-메틸부트-2-엔- 1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 더 포함하는

조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물은 (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노 일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4R,5S)-3,4-디히드록시-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)-4-(4-메틸펜타노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 더 포함하는

조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2- (3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜 틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 더 포함하는

조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물은 코팅제, 등장 및 흡수 지연제, 결합제, 점착제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 풍미제, 감미제, 흡수제, 세제 및 유화제로 이루어진 군에서 선택되는 약학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함하는

조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물은 항산화제, 비타민, 미네랄, 단백질, 지방 및 탄수화물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 성분을 더 포함하는

조성물.
중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법으로서, 스펜트 홉(spent hop); 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온; 아연; 및 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 2종의 성분을 치료학적 유효량으로 포함하는 조성물을 중금 속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
제 7 항에 있어서,

상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트- 3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4R,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸프로파노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5R)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1R)-히드록시-4-메틸펜트- 3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-2-(2-메틸부타노일)-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-히드록시-4-메틸펜트-3-엔-1-일]-5-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2-(2-메틸프로파노일)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 더 포함하는

방법.
제 7 항에 있어서,

상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[( 1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜 틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜 틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시크로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시크로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 더 포함하는

방법.
제 7 항에 있어서,

상기 조성물은 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5- (3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸페틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5- (3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온;(4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온;(4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-l-디히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온; 및 (4S,5S)-3,4-디히드록시-4-[(1S)-1-히드록시-4-메틸펜틸]-2-(3-메틸부타노일)-5-(3-메틸부틸)시클로펜트-2-엔-1-온으로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 더 포함하는

방법.
제 7 항에 있어서,

상기 조성물은 코팅제, 등장 및 흡수 지연제, 결합제, 점착제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 풍미제, 감미제, 흡수제, 세제 및 유화제로 이루어진 군에서 선택되는 약학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함하는

방법.
제 7 항에 있어서,

상기 조성물은 항산화제, 비타민, 미네랄, 단백질, 지방 및 탄수화물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 성분을 더 포함하는

방법.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물은

(a) 약 0.10 내지 약 10.00g의 스펜트 홉;

(b) 약 5 내지 약 1200㎎의 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온;

(c) 약 0.10 내지 약 24㎎의 아연; 및

(d) 약 5 내지 약 1200㎎의 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온을 포함하는

조성물.
제 7 항에 있어서,

상기 조성물은

(a) 약 0.10 내지 약 10.00g의 스펜트 홉;

(b) 약 5 내지 약 1200㎎의 1,7-비스(4-히드록시-3-메톡시페닐)헵타-1,6-디엔-3,5-디온;

(c) 약 0.10 내지 약 24㎎의 아연; 및

(d) 약 5 내지 약 1200㎎의 3-(2-(데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌나프틸)에틸리덴)디히드로-4-히드록시푸란-2(3H)-온을 포함하는

방법.
치료학적 유효량의 스펜트 홉(spent hop)을 포함하는 조성물을 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 중금속 해독 촉진을 필요로 하는 포유동물에서 중금속 해독을 촉진하기 위한 방법.