HUT70831A - Narrow poly-and mono dispersed anionic oligomers, and pharmaceutical compositions containing them - Google Patents

Narrow poly-and mono dispersed anionic oligomers, and pharmaceutical compositions containing them Download PDF

Info

Publication number
HUT70831A
HUT70831A HU9402058A HU9402058A HUT70831A HU T70831 A HUT70831 A HU T70831A HU 9402058 A HU9402058 A HU 9402058A HU 9402058 A HU9402058 A HU 9402058A HU T70831 A HUT70831 A HU T70831A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
formula
oligomer
methylphenyl
hydrogen
phenylene
Prior art date
Application number
HU9402058A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9402058D0 (en
Inventor
Michael J Fazio
William A Fordyce
Michael J Mullins
Alan D Cardin
Thomas A Chamberlin
Original Assignee
Merrell Dow Pharma
Dow Chemical Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merrell Dow Pharma, Dow Chemical Co filed Critical Merrell Dow Pharma
Publication of HU9402058D0 publication Critical patent/HU9402058D0/hu
Publication of HUT70831A publication Critical patent/HUT70831A/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
    • C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/235—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/795—Polymers containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
    • C07C309/01—Sulfonic acids
    • C07C309/28—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C309/45—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton containing nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the carbon skeleton
    • C07C309/51—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton containing nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the carbon skeleton at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/68—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen
    • C08G63/685—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing nitrogen
    • C08G63/6854—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing nitrogen derived from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/6856—Dicarboxylic acids and dihydroxy compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/68—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen
    • C08G63/688—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing sulfur
    • C08G63/6884—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing sulfur derived from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/6886—Dicarboxylic acids and dihydroxy compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/68—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen
    • C08G63/692—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing phosphorus
    • C08G63/6924—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing phosphorus derived from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/6926—Dicarboxylic acids and dihydroxy compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G64/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbonic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G64/04—Aromatic polycarbonates
    • C08G64/06—Aromatic polycarbonates not containing aliphatic unsaturation
    • C08G64/08—Aromatic polycarbonates not containing aliphatic unsaturation containing atoms other than carbon, hydrogen or oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
    • C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
    • C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
    • C08G69/26—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from polyamines and polycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G71/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a ureide or urethane link, otherwise, than from isocyanate radicals in the main chain of the macromolecule
    • C08G71/02—Polyureas

Description

A találmány tárgya szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz anionos oligomerek, előállításuk, az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint HÍV (Humán immunodeficiency vírus) ellenes szerként való alkalmazásuk. A találmány szerinti monodiszperz anionos oligomerek az AIDS kezelésében, valamint az 1 és 2 típusú Herpes Simplex vírus (HSV) és a Cytome* gelovírus okozta betegségek kezelésében alkalmazhatók.
Napjainkban erőteljes kutatás folyik az emberi és állati vírusfertőzések, főként az 1 és 2 típusú HSV vírus, az AIDS vírus, valamint az AIDS rokon komplex (ARC) okozta fertőzések kezelése és gyógyítása céljából. A humán AIDS és ARC fertőzések riasztó mértékben emelkednek. Az AIDS fertőzés esetében az öt éves túlélési idő csűggesztő mértékben csökkent és az olyan AIDS betegek, akiknek az immunrendszere a fertőzés következtében komolyan károsodott, különféle fertőzéseknek, mint amilyen a Kaposi szarkoma és Pneumocystic carninini pheumonia, esnek áldozatul. Ezidáig az AIDS gyógyítására nincs ismert szer és módszer: a jelenlegi kezelési eljárások nem igazán sikeresek és igen számos mellékhatásuk van. A betegségtől való félelem a fertőzött vagy fertőzéssel gyanúsított egyének szociális száműzetését és diszkriminációt eredményezi.
A retrovírusok a ribonukleinsav (RNS) vírusok egy osztályát alkotják, amelyek replikációja reverz transzkriptáz felhasználásával történik, egy komplementer DNS (cDNS) szál keletkezése közben, amelyből egy kettős szálú provírus DNS jön létre. Ez a provírus DNS azután találomra beépül a gazdasejt kromoszómái DNS-ébe, így lehetővé téve a vírusreplikációt az integrált vírus genomból származó vírus üzenet későbbi transzlációja által.
« · • · *· Az ismert retrovírusok legnagyobb része onkogénikus vagy tumor okozó. Az első két ismertetett humán retrovírus, az I és II humán T-sejt leukémia vírus (másnéven HTLV-I és II vírus) a kutatások szerint ritkán leukémiákat okoz emberek esetében, a T-limfociták megfertőzése után. A harmadik ilyen humán vírus a HTLV-III, amelyet HÍV vírusnak is neveznek, sejthalált okoz a T-limfociták fertőzése után és az AIDS és ARC okozójaként azonosították.
A HÍV vírus burkoló proteinje egy 160 kDa-os glikoprotein. A proteint egy proteáz hasítja egy 120 kDa-os külső protein (gp 120) és egy transzmembrán glikoprotein (gp 41) keletkezése közben. A gp 120 protein tartalmazza azt az aminosav szekvenciát, amely felismeri a CD4 antigént a humán T-helper (T4) sejteken.
Fontos lépés lenne a siker felé vezető úton a HÍV megkötődésének megakadályozása a humán T4 sejteken. Ezek a T4 sejtek rendelkeznek egy specifikus tartománnyal, egy CD4 antigénnel, amely kölcsönhatásba lép a gp 120 proteinnel. Ha ezt a kölcsönhatást megszakíthatnánk, meggátolnánk a gazdasejt megfertőződését.
A vírus burkoló glikoproteinnel való összetalálkozás megakadályozhatja a kezdeti vírus-gazdasejt kölcsönhatást, vagy az ezt követő fúziót vagy megakadályozhatja a vírus duplikációt azáltal, hogy megakadályozza azt a megfelelő glikoprotein konstruckiót, amely a vírus membrán kialakulásához szükséges. Kutatások szerint [H.A. Blough és társai, Biochem. Biophys. Rés. Comm. 141 (1), 33-38 (1986)] a 2-dezoxi-D-glükóz és β-hidroxi-norvalin nem-specifikus glikozilezés inhibitorok gátolják a HÍV glikoproteinek expresszióját és blokkolják a syncytia képződést. Az ezekkel a szerekkel kezelt HÍV-fertőzött sejtek vírus multipli kációja megáll, feltételezhetően a vírus membrán képződéshez • · · · ·· ·· · • ·· · ··· ·· ·· • · · · a * ······· · · a a a· szükséges glikoprotein hiánya miatt. Egy másik irodalom szerint [W. McDowell és társai, Biochemistry 24 (27), 8145-52 (1985)], a 2-dezoxi-2-fluor-D-mannóz glikozilezésinhibitor gátolja a vírusellenes aktivitást influenza vírus fertőzött sejtek esetén azáltal, hogy megakadályozza a vírus membrán protein glikozilezését. Az említett kutatók vizsgálták a 2-dezoxi-glükóz és 2-dezoxi-fluor-glükóz vírusellenes hatását is és azt találták, hogy mindkettő gátolja a vírus protein glikozilezést, eltérő mechanizmus szerint. Ezzel szemben más ismert glikozilezés-inhibitorok nem mutatnak vírusellenes aktivitást. Mindezek alapján a glikozilezésinhibitorok vírusokkal szemben mutatott általános vírusellenes hatása és specifikus vírus aktivitása eléggé megjósolhatatlan.
A kutatások világszerte erőteljesen a HSV 1 és HSV 2 típusú fertőzések kezelésének és gyógyításának megoldására irányulnak. A HSV 1 és HSV 2 vírusok erőszeretettel fertőzik meg az ektodermális szöveteket, amikor is a vírus felmaródásokat okoz a bőrben, szájüregben, vaginában, kötőszövetben és az idegrendszerben. A HSV 2 típusú (HSV2) vírussal való fertőződés általában genitális és orális sérülések következménye. A kezeletlen HSV fertőzések gyakran vezetnek vaksághoz, neonatális halálhoz és enkefelitiszhez. A HSV 2 típusú fertőzések az USA-ban járvány szinten vannak a nemi úton való terjedés következtében. Új esetként több mint húszmillió embert sújt ez a betegség az USA-ban, a visszaesések száma pedig felülmúlja a félmilliót évente. A HSV fertőzések évi költsége lényeges gazdasági veszteséget okoz. A HSV epidemiológiai szabályozása igen kevéssé hatékony, mivel a népesség többsége, több mint 90%-a fenyegetett a vírustól.
• « • · · « · · • ··· ··· · · _ ······ __ G — ···· ··· ·· ·· ·«
9- Az ember a HSV 1 és 2 fertőzéseknek, természetes gazdájául szolgál, mivel a vírus zárt személyek közti érintkezés által terjed egyik emberből a másikba. A kezdeti vagy primer HSV 1 és 2 fertőzések a mucus membrán sérülésein át jutnak az emberi szervezetbe. Az egészséges hordozó egyednél a vírus megtalálható a könnyben, nyálban, hüvelyi és más váladékokban, már a nyilvánvaló betegség megjelenése előtt. A mucus membránból képes replikádéra és szétterjed a regionális nyirokcsomókba. Ezek a vírusok megfertőzhetik a vérképző rendszert is, virémiát okozva.
A HSV fertőzések kezelésének egyik nehézsége, hogy a vírusok képesek egy látens vagy néma formában létezni. Amikor a primer fertőzés lecsillapul, a vírus általában látens formában megtelepül a szenzoros ganglionokban, amelyek stimulálják a primer fertőzési helyeket.
Okuláris vagy orális HSV 1 fertőzés esetén a vírus általában a trigeminális ganglionokban, HSV 2 fertőzés esetén pedig a szakrális ganglionokban települ meg, amelyek a genitáliákat és az alhasat szolgálják. A HSV vírus latens korszakának determinatív periódusa ismeretlen, a periódust megszakíthatja hőhatás, hideghatás, napsugárzás, hormonális és emocionális rendellenességek vagy immunszupresszív szerek, általában a fertőzés feléledését eredményezve.
A HSV fertőzések kezelése ezidáig nagyrészt hatástalan. A stratégiák nagy része a vírushatás kifejlődésének megállítására irányul. Ezek a szerek általában gátolják valamelyik specifikus vírusfunkciót, így az (1) adszorpciót, (2) kicsomagolódást, (3).
transzkripciót, (4) protein szintézist, (5) nukleinsavreplikációt, (6) vírus érési folyamatot és a (7) kiszabadulást.
• · • · — ······ — κ — ···· ··· ·· ·· ··
A HSV fertőzések kezelésében ezidáig alkalmazott vírus ellenes szerek legnagyobb része olyan vegyület, amely interferál a vírus DNS működésével. Ilyen vegyületek az Idoxuridin, Cytosine Arabinoside, Adenine Arabinoside és Trifluorothymidine. Az ilyen szerek interferálnak a hasonló gazdai funkciókkal is, ez általános problémákat okoz az embereknél a sejt toxicitás és szisztemi* kus alkalmazás terén. Napjainkban az acyclovir a legkedveltebb gyógyszerkészítmény a HSV 1 és HSV 1 fertőzések gyógyításában, erőteljes vírusellenes hatása és elhanyagolható toxicitása következtében. A agy dózisoknál tapasztalt rossz oldékonyság, valamint a gyógyszerrel szemben ellenálló vírusok megjelenése azonban határt szab a gyógyszer alkalmazásának.
Számos RNS és DNS tartalmú vírus becsomagolódik, víruskódolt glikopeptideket beépítve. A HSV és a cytomegalovírus (CMV) két ilyen beesomagolódott vírus. A gazdasejtnek ilyen becsomagolódott vírussal való megfertőzésekor először kölcsönhatás jön létre a gazdasejt felület különféle receptorai és a vírusmembrán burkoló glikoproteinjei között. Ezt követően a vírus és sejt membránok fuzionálnak és a virion tartalom a gazdasejt citoplazmájába ürül. A vírus glikoprotein tartalmú burka fontos szerepet játszik mind a virion és gazdasejt közötti kezdeti kölcsönhatásban, mind pedig az ezt követő vírus-gazdasejt membrán fúzióban. A vírus burok feltehetőleg a sejt membránból származik, de specifikussága a vírus-kódolt glikopeptidek következménye. Ezért, egy olyan inhibitor, amely képes interferálni a vírus-specifikus membrán képződéssel, megakadályozhatja a fertőző utód-vírus keletkezését.
) « · ·· ··*« ·« ·« ♦ ·· » » · ·« • ·· · ··· ·· • · · · « · ······· ·· ·« ··
A 0406512 számú európai szabadalmi leírásban ismertetettek szerint egy tisztított heparin (szulfátéit poliszacharid) egy olyan vírus proteinhez kötődik, amely felelős a sejt felismerésért és így korlátozottan gátolja a gazdasejt fertőződését. Azonban a heparinnak bizonyos mellékhatásai vannak, nevezetesen hemorrhage, és megnövekedett alvadási idő, valamint thrombocytopénia. A heparin alkalmazása olyan betegségeknél kontraindikált, akik aktív vérzékenyek vagy a következő betegségekben szenvednek; hemophilia, purpura, thrombocytopenia, intractranális hemorrhage, bakteriális endocarditis, aktív tuberkolózis, megnövekedett kapilláris permeabilitás, a gasztrointesztinális traktus ulceratív léziói, hipertenzió, fenyegető koraszülés vagy visceralis carcinoma. A hemophilia esetében azért van nagy jelentősége a kontraindikációnak, mert ezek közül a személyek közül igen sokan HÍV pozitívak.
Hosszú ideje ismert, hogy bizonyos szintetikus vízoldható polimerek széles spektrumú biológiai aktivitást mutatnak [R.M. Ottenbrite Biological Activities of Polymers, Amer. Chem. Soc. Symp. Ser. 182, 205-220, Kiadó: C.E. Lorraher és C.G. Gebelein (1982)]. Egy diviniléter-maleinsav-anhidrid kopolimer számos vírussal szemben aktívnak mutatkozott és évek óta tanulmányozzák a rák-kemoterápiában való alkalmazását [Breslow, D.S. Pure and Applied Chem. 46, 103 (1976)]. Poliakril, polimetakril és számos más alifás polimer-vázú vízoldható polimerek szintén széles spektrumú biológiai aktivitást mutatnak [W. Regelson és társai, Natúré, 186, 778 (1960)]. A 004 3974 számú európai szabadalmi leírás szulfonált poliuretánokat ismertet, amelyek nem rendelkeznek a kívánt vírusellenes felhasználhatósággal. A 781 479 • · · · ♦ · • · · · · · » • · · · · · ······· «· ·· Μ *- számú angol szabadalmi leírás szulfonált polikarbamidok centrifugálással való elválasztását ismerteti, de az előállított átlagos molekulatömeg 10,000 vagy nagyobb. Azonban ezeknek a polimereknek a klinikai alkalmazhatóságát megakadályozza nagy toxicitásuk.
Ezen kívül a polimerek nagy molekulatömegűek és így nem jutnak át a renális membránokon.
A toxicitási és áthatolási problémák kiküszöbölésére kis molekulatömegű (1,000-10,000 közötti) polimereket szintetizáltak [R.M. Ottenbrite: Biological Activities of Polymers, Amer.
Chem. Soc. Symp. Ser. No. 182, p. 205-220, Kiadók: E. Carraher és C. G. Gebelein (1982)]. Azt találták, hogy ezek a polimerek kevésbé toxikusak, de sokkal kisebb a vírusellenes aktivitásuk is. Ezek az alacsony molekulatömegű alifás polimerek a véletlenszerű tekercs (”random coil) polimerek osztályába sorolhatók. Az ilyen polimerek véletlenszerű konfigurációjúak, a polimerlánc kötő csoportok flexibilitása következtében. A véletlenszerű
- random - tekercs polimerek konfigurációja oldatban általában gömbölyűként írható le. Habár az ilyen vízoldható polimerek hatásmechanizmusa ismeretlen, egy posztulátum, hogy a polimer egy ionos kötéssel kötődik a vírus membránhoz, például egy encephalomyocarditist okozó vírushoz, így képtelenné teszi a vírust a gazdasejt megfertőzésére.
Másik szintetikus polimeres elképzelés ionos csoportot rakni a polimervázra, amely definiáltabb geometriát jelent. Számos példa ismert olyan nem-ionos szintetikus polimerekre, amelyek nem-vizes oldatban líneárisabb geometriát mutatnak, mint az előzőekben leírt polimerek. [J. Macromol. Sci-Reviews in Macromol. Chem. Phys. C26(4), 551 (1986)]. A faktorok, amelyek • ♦ · ······ • «·· ··· ·· ·· _ ······ _ Q — ···« ·♦· ·· ·« ·· ezt a nem-random tekercs struktúrát okozzák komplexek és kevéssé ismertek. Általánosságban az ilyen polimerek vagy igen korlátozott számú forgásra képes kötéssel rendelkeznek, amelyek nem párhuzamosak a polimer tengelyével, vagy hidrogén kötés, illetőleg dipoláros kölcsönhatások határozzák meg a lineáris struktúrát. Az ilyen polimereket merev polimerláncú polimereknek nevezik. Jól ismert példája az ilyen polimereknek egy tereftálsavból és p-diamino-benzolból származó poliamid (kereskedelmi név: Kevlar™, a duPont terméke).
A szintetikus vízoldható merev polimerek kevésbé általánosak, de néhány nagy molekulatömegű ilyen polimer ismert, például a 4,824,916 és 4,895,660 számú amerikai szabadalmakban ismertetnek ilyeneket. Ennek a polimercsoportnak a nem-random tekercs struktúrája egy adott molekulatömegnél és koncentrációnál magas oldat vizkozitásokat eredményez.
Az utóbbi időkben ismertté váltak olyan anionos oligomerek, amelyek vírus replikáció inhibitor hatásúak a heparin és az eddig ismert polimerek mellékhatásai nélkül. Az oligomerek szabályos anion elhelyezkedéssel rendelkeznek, merev polimerláncúak és vízoldhatók. Az oligomereket mint polidiszperz keverékeket a 0,467,185 számú európai szabadalmi leírás ismerteti, amelyet 1992. január 22-én publikáltak. Bár különféle anionos oligomereket ismertetnek ebben az irodalomban, minden anionos oligomer kevert molekulatömegu.
Az előzőek alapján nyilvánvaló, hogy kívánatos lenne olyan AIDS, ARC és HSV kezelésére és gyógyítására alkalmas szert találni, amely az előzőekben említett polimerekhez képest kevesebb vagy semmi mellékhatással nem rendelkezne, jobb gyógyhatás mel10 ·· ·♦··»♦ • ··· ··· ·· ·· * · · · · · ··♦ ··· ·· ·· ·· lett. Emellett az oligomereknek szűk, molekulatömegeloszlásúnak, alacsony toxicitásúnak és könnyen jellemezhetőnek is kell lennie.
Az 1-4. ábrán a függőleges tengely az UV abszorbanciát, a vízszintes tengely az időt jelenti, percekben.
Az 1. ábra kiindulási anyagként valamilyen (I) általános képletű nyers polidiszperz szulfonált polikarbamidot ábrázol
Λ széles polidiszperzitással.
A 2. ábra a nyers polidiszperz szulfonált polikarbamid --► szűk polidiszperzitású szulfonált polikarbamid átalakítás 1. lépése után (11. oldal) kapott diszperzitás csökkenést mutatja be, a néhány frakció egyikének esetében.
A 3. ábra az 1. ábra szerinti nyers polidiszperz oligomer gélfiltrációs kromatográfiájából nyert 7-17 frakciók kombinációját ismerteti, a 2. ábra frakcióinak rekombinációjaként.
A 4. ábra az 1. ábra szerinti nyers polidiszperz oligomerből fordított fázisú kromatográfiával frakcionált monodiszperz szulfonált polikarbamid oligomert mutatja be.
Az 5-9. ábrákon a függőleges tengely a relatív abszorbanciát, a vízszintes tengely az időt jelenti, percekben.
Az 5. ábra az (I) képlet szerinti polikarbamid különféle HPLC profiljait mutatja be.
A 6. ábra az (I) képlet szerinti szűk molekulatömegeloszlású polidiszperz polikarbamid egy HPLC profilját mutatja be, eluensként vizes trietil-ammónium-acetátot (Et^NHOAc) alkalmazva.
A 7. ábra ugyanezt mutatja be, de eluensként tetrabutil-ammónium-foszfátot [(n-Bu^N)PO4] alkalmazva.
A 8. ábra a 6. ábra szerinti (I) képletű monodiszperz polikarbamid frakciók egy HPLC profilját mutatja be, eluensként vizes • · • *· · tetrabutil-ammónium-foszfátot [(n-Bu^N)PO4] alkalmazva.
A 9. ábra az (I) képletű polidiszperz és monodiszperz polikarbamidok különféle oligomer frakcióinak IC5q vírusellenes koncentrációi hisztogramját mutatja be.
A találmány tárgya szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz vízoldható oligomerek, amelyek karbonil kötőcsoportokkal összekapcsolt 3-50 tagú ismétlődő egységeket tartalmaznak; az oligomerek anionos csoportokat tartalmaznak és főként lineáris geometriájúak úgy, hogy vizes közegben az anionos csoportok között szabályos távolságok vannak. A találmány szerinti előnyös oligomerek az alábbi (I)-(IV) általános képletűek.
A találmány szerinti (I)-(IV) általános képletű szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz anionos oligomereket az alábbiak szerint állíthatjuk elő:
1) a nyers polidiszperz anionos oligomer keveréket egy szűk moltömegeloszlású polidiszperz anionos oligomerkeverékre szűkítjük; és/vagy
2) izoláljuk a monodiszperz oligomert; és
3) kívánt esetben az 1 vagy 2 lépésből nyert monodiszperz anionos oligomer sót a kívánt gyógyászatilag alkalmazható sóvá, célszerűen nátrium- vagy kálium sóvá alakítjuk.
Az előző eljárásban a következő reakciólépés kombinációk lehetségesek: az 1. vagy 2. lépést hajtjuk végre egyedül; az 1. vagy 2. lépés után végrehajtjuk a 3. lépést; vagy mindhárom lépést végrehajtjuk.
A találmány szerinti szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz oligomerek humán immunhiányos állapotot okozó vírus ellenes és herpesz simplex vírus ellenes hatásúak, így ezek az • · • <··« oligomerek az AIDS, ARC és HSV kezelésében alkalmazhatók. A találmány oltalmi körébe tartoznak a szűk moltömegeloszlású poliés monodiszperz oligomerek, az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények, az AIDS, ARC és HSV kezelő szerként való alkalmazásuk és előállítási eljárásuk.
A találmány szerinti poli- és monodiszperz anionos oligomerek vízoldható oligomerek, amelyek 3-50 tagból álló ismétlődő egységeket tartalmaznak, ezek karbonil kötő csoportokkal vannak összekapcsolva; az oligomerek anionos csoportokkal rendelkeznek és túlnyomórészt lineáris geometriájúak úgy, hogy vizes közegben az anionos csoportok között szabályos távolság van. Az oligomerek előnyösen
A) (I) általános képletű polikarbamidok, ahol
R jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport, adott esetben egy-két R1 csoporttal és legfeljebb három szubsztituenssel szubsztituált fenilcsoport, ahol a szubsztituensek egymástól függetlenül fluor-, klór- vagy brómatom vagy 1-20 szénatomos alkilcsoport lehetnek;
R1 jelentése -SO3R2, -CO2R2, PO3(R2)2 vagy -OPO3R2 csoport,
R2 jelentése hidrogénatom vagy valamilyen gyógyászatilag alkalmazható kation;
m jelentése egész szám, melynek értéke 0 vagy 1, azzal a feltétellel, hogy ha m = 0, akkor R jelentése hidrogénatom;
X jelentése (a), (b), (c), (d), (e) , (f) , (g) , (h) , (i) , (j), (k) vagy (1) általános képletű csoport;
Y jelentése -CO2, -C=.C-, -N=N-, -C-N-, -N-N- vagy -C=N-N=C- .
csoport;
n jelentése egész szám, melynek értéke 3-50; és
R3 jelentése -R vagy -C-NH2 általános képletű csoport, ahol
R és X jelentése az előzőekben megadott;
B) (II) általános képletű polikarbonátok, ahol x és n jelentése az előzőekben az (I) általános képletnél megadott ,
X1 jelentése HO-X csoport, ahol X jelentése az (I) általános képletnél megadott vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, adott esetben egy-két R1 csoporttal és legfeljebb három szubsztituenssel szubsztituált fenilcsoport, ahol a szubsztituensek egymástól függetlenül fluor-, klór- vagy brómatom vagy 1-20 szénatomos alkilcsoport lehetnek; és
X2 jelentése hidrogénatom vagy -CO2XX általános képletű csoport, ahol R1 jelentése a fenti;
C) (III) általános képletű poliészterek, ahol
X és n jelentése a fentiekben az (I) általános képletnél megadott ;
R4 jelentése az (I) általános képletnél megadott jelentésű -R2 csoport, vagy a (II) általános képletnél megadott jelentésű X1 csoport;
R5 jelentése R4-O-C-X3-C- általános képletű csoport, ahol
IlII
R4 jelentése a (III) általános képletnél megadott vagy -R2 csoport, ahol R2 jelentése az (I) általános képlet szerinti;
X3 jelentése (d) , (e) , (h) , (m) , (n) , (o) , (p) , (q) , (r) ,(s) vagy (t) általános képletű csoportok, ahol Rx és Y jelen- tése a fentiekben az (I) általános képletnél megadott; vagy
D) (IV) általános képletű poliamidok, ahol «
• · i ·····» V *·· «·· ·« ··* • · · · · · ··»· ·ν· 1« *>· ·4
X és η jelentése az (I) általános képletnél megadott;
R6 jelentése H2N-X-NH-, R20-, RNH- vagy -R-C(0)-NH-X-NH- általános képletű csoport, ahol R, R2 és X jelentése az (I) általános képletnél megadott;
0 0 0 0
2 3 11 U 11 3
R' jelentése hidrogénatom, RZO-C-XJ-C-; R-C- vagy RNH-C-XJ-Cáltalános képletű csoportok, ahol R és R jelentése az (I) általános képletnél megadott; és
X2 jelentése a (III) általános képletnél megadott.
Az általános képletekben használt kifejezések:
Az 1-20 szénatomos alkilcsoport, beleértve az 1-4 szénatomos alkilcsoport kifejezést, egyenes- és elágazó láncú csoportokat, így például inetil-, etil-, izopropil-, t-butil-, η-decil-, n-dodecilcsoportot, stb. jelent.
A gyógyászatilag alkalmazható kation kifejezés gyógyászati célra alkalmas kationt jelent. Az ilyen kationok gyakorlatilag nem toxikusak a kívánt hatás elérése céljából szükséges dózis beadásakor. Ilyen megfelelő kationok például az alkálifémek, így nátrium- és kálium; alkáliföldfémek, így kalcium- és magnézium; ammónium; a IIIA csoport könnyűféméi, így az alumínium; továbbá a primer, szekunder és tercier aminokból származó szerves kationok; az ammónium vagy alkil-ammónium- főként a tercier ammónium sók. Ilyenek például trialkil-aminok, így a trietil-amin, prokain, dibenzil-amin, N,N'-dibenzil-etilén-diamin, dihidroabietil-amin, N-(l-4 szénatomos alkil)piperidin, stb. Előnyösek a nátrium- és káliumsók. A gyógyászatilag alkalmazható kifejezés melegvérű . állatoknak - célszerűen beleértve az embert is - beadható nem toxikus, a melegvérű állatokra nézve nem mérgező anyagot jelent.
A találmány szerinti oligomerek gyógyászatilag alkalmazható kationjait ismert ioncserélő módszerekkel vagy az R1 csoportnak megfelelő sav valamilyen bázissal való kezelésével állítjuk elő, főleg fontos ez a találmány szerinti eljárás 2. lépésében előállított trietil-ammónium sóknál, amelyeket sókkal, előnyösebb gyógyászatilag alkalmazható sókká, így nátrium sóvá alakítunk át.
A találmány szerinti oligomerek szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz, alacsony moltömegű, vízoldható polimerek. Emellett az oligomerek szabályos anion távolságokkal rendelkeznek. A szabályos anion távolság vagy szabályosan előforduló távolság az anionos csoportok között kifejezések azt jelentik, hogy az anionos csoportok a polimervázon az alkalmazott kiindulási reagens milyensége által meghatározott távolságokban helyezkednek el és az anionos csoportok előfordulása előre meghatározott módon szabályozott. Feltételezések szerint az oligomerek anionos csoportjai azon a részen kell legyenek, ahol a molekula a HÍV, HSV és/vagy sejtmembránhoz kötődik, és ezáltal megakadályozzák a vírus replikációra való képességét.
A túlnyomórészt lineáris geometria vizes közegben az oligomer oldat konfigurációjára vonatkozik. A polimer molekulák oldat konfigurációjának mghatározására szolgáló ismert módszer az alábbi Mark-Honwing egyenlőségen alapul [Introduction to Physical Polymer Science, L.H. Sperling, John Wiley & Sons kiadó (1985), p. 81-83]:
[η ] = ΚΜα ahol n a belső viszkozitást jelenti; M jelentése átlagos molekuatőmeg; K egy, a lánckötés dimenzióra vonatkozó konstans; a jelentése egy, a polimer konfiguráció által mghatározott kons • · · * · · • ··· ··· ·· • · « · ····· ·· ·· tans. Az a konstans egy random tekercs polimer esetén 0.5 < αθ,8; egy lineáris polimer esetén 0,8 < = a < 1,8. A képlet a oldat viszkozitás és az M molekulatömeg közti viszonyt fejezi ki. A találmány szerinti lineáris polimerek esetében az a érték nagyobb vagy egyenlő 0,8. Egy merev rúdszerű polimernél az elméleti felső határ = 1,8. Egy adott molekulatömeg esetében nagyobb oldat viszkozitás nyerhető lineáris konfigurációjú polimerekből, mint random tekercs konfigurációjúakból. Egy további megközelítés, hogy az ”a érték az alkalmazott oldószer függvénye. Az a egy adott vízoldható polimer esetében különböző sókoncentrációknál különböző lehet. A találmány szerinti vegyületek esetében a sókoncentráció a szérumban lévő szintekhez van beállítva (közelítőleg 8D g/1 NaCl, 4 g/1 KC1).
A monodiszperz és polidiszperz oligomerek kifejezés (és hasonló kifejezések) az oligomerek eloszlására vonatkozik a mintában. Egy minta polidiszerzitását az molekulatömeg tömeg szerinti átlaga és az Mn molekulatömeg szám szerinti átlaga közti aránnyal mérjük (lásd G. Odian, Principles of Polymerization 2., p. 20-20, John Wiley & Sons, 1981). A találmány esetében a nyers polidiszperz oligomer mintáknál ez az arány Mw/Mn - >1,3 (lásd 1. ábra). A találmány esetében egy oligomer akkor szűk molekulatömegeloszlású polidiszperz oligomer, ha Mw/Mn = 1,0-1,3 (lásd 2. ábra), előnyösen 1,0-1,2, még előnyösebben 1,0-1,15 közötti. A szűk molekulatömegeloszlású polidiszperz oligomert a nyers polidiszperz oligomerkeverékből állítjuk elő. A találmány esetében egy oligomer akkor monodiszperz oligomer, ha Mw/Mn = 1,0-1,1 (lásd 4. ábra), amely egy szűkebb tartomány a szűk polidiszperz tartományon belül. A szűk molekulatömeg
tartomány kifejezés a polidiszperzitás bizonyos mértékű csökkenésére vonatkozik az előző mintával összehasonlítva.
A merev polimerváz kifejezés azt jelenti, hogy az ismétlődő egység főként olyan csoportokkal van körülvéve, amelyek korlátozzák a molekulalánctengelytől való elforgását. Például, a p-fenilén és amid csoportok -[C(O)-NR-] nem hajlanak el könnyen a molekulalánctengelytől. Korlátozott számú hajlékony csoport, igy m-fenilén és karbamid csoportok, tolerálhatok a lánctengelyben. A találmány szerinti oligomerek ilyen merev polimervázzal rendelkeznek.
Bármelyik kívánt n frakció mindegyik monodiszperz frakciójának tisztasága legalább 75%-os, előnyösen körülbelül 85 körülbelül 100% közötti. A tisztaságot a kívánt oligomer HPLC-s csúcsa alatti terület és az összes HPLS-s csúcs alatti terület arányában fejezzük ki.
A leírásban használt oligomer kifejezés az összes lehetséges n értéket magában foglalja, például 3-50 között. Az oligomerek előnyösen lineárisak, ahol n jelentése egész szám, melynek értéke 3-50, előnyösen 3-15, még előnyösebben 5-10, legelőnyösebben 6-9 közötti. Természetesen a molekulatömeg közvetlenül a kapott oligomer n értékével van kapcsolatban. Alapvető, hogy ezek az oligomerek kielégítően alacsony moltömegűek legyenek azért, hogy áthatoljanak a renális excretoriális membránon, de képesek legyenek meggátolni a HÍV vírust.
A találmányban az ismertetett oligomerek és fiziológiásán elfogadható sóik egyenértékűek. A fiziológiásán elfogadható sók olyan bázisok sói, amelyek az Rx csoport legalább egy savas csoportjával sót képeznek és amelyek nem okoznak szignifikánsan « · • · · · · · • ··· ··· ·· ·· • · · · · ·
- 18 - .............
ellentétes fiziológiás hatást beadás után. Megfelelő bázisok például az alkálifém- és alkáliföldfém hidroxidok, karbonátok, hidrogénkarbonátok, így a nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, kálcium-hidroxid, kálium-karbonát, nátrium-hidrogénkarbonát, magnézium-karbonát, stb; ammónia, primer-, szekunder- és tercier aminok, stb. Különösen előnyös bázisok az alkálifém-hidroxidok, karbonátok, valamint hidrogénkarbonátok. A fiziológiásán alkalmazható sókat ismert módon, ioncserés módszerekkel vagy az R^ savnak valamilyen megfelelő bázissal való kezelésével állítjuk elő.
A találmány oltalmi körébe tartozó készítmények szilárd vagy folyékony formájúak. Ezek a készítmények lehetnek kit formájúak, ahol a komponenseket a felhasználás előtt megfelelő idővel keverjük össze. Akár előkeverékről, akár kitről van szó, a készítmények előállításánál általában valamilyen gyógyászatilag alkalmazható hordozó vagy adalékanyagot kell alkalmaznunk.
A találmány szerinti oligomerek vízben és sóoldatokban oldhatók, főként fiziológiás pH-nál és nátrium-klorid oldatokban, így az oligomerek könnyen alakíthatók megfelelő vizes gyógyászati dózisformává. Az oligomer készítmény beadása után az oligomer in vivő oldékony marad.
Az előzőekben ismertetett (I)-(IV) képleteknél a szubsztituensek előnyösen az alábbiak:
R és R3 = 4-metil-fenilcsoport;
m = 1; n = 3-15;
R4 és R5 = hidrogénatom;
R6 = fenilcsoport;
R7 = benzoilcsoport;
9
9
- 19 X1 = 4-metil-fenilcsoport;
X2 = -C02-(4-metil-fenil)-csoport;
X3 jelentése (m) (η), (v) vagy (x) csoport; és
X jelentése (a'), (b'), (c'), (d'), (e'), (f'), (g'), (h') vagy (j') csoport, különösen előnyösen (h1) csoport.
Különösen előnyösek az olyan (I) általános képletű polikar9 bamidok, ahol R és R3 jelentése 4-metil-fenilcsoport; m = 1; n = 3-15; X jelentése (a'), (b'), (c'), (d'), (e'), (f'), (g'), (h') vagy (j') csoport és R2 jelentése az előzőekben megadott. Ilyen polikarbamidok például az alábbiak:
StDS/P/T= poli[imino(3-szulfo-l,4-fenilén)-1,2-étén-dili-(2-szulfo-l,4-fenilén)imino-karbonil], alfa [(4-metil-fenil)amino-karbonil]-ómega-[(4-metil-fenil)-amino, amely olyan (I) általános képletű vegyület, ahol az (I) általános képletben R és R3 jelentése 4-metil-fenilcsoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (j') csoport;
PDS/P/T = poliimino(2,5-diszulfo-l,4-fenilén)imino-karbonil), alfa-{[(4-metil-fenil)amino]karbonil]-ómega-[(4-metilfenil) amino] - , ahol az (I) általános képletben R és R3 jelentése 4-metil-fenil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (a') csoport;
BPDS/P/T = poli{imino[2,2'-diszulfo(1,1'-bifenil)-4,4 ' diil]imino-karbonil}, alfa-{[(4-metil-fenil)amino]-karbonil}ómega-[(4-metil-fenil)amino], amely olyan (I) általános képletű vegyület, ahol az (I) általános képletben R jelentése 4-metil-fenil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (h*) csoport, és n jelentése célszerűen =5, 6, 7, 8, 9 vagy 10.
» · • « • ··· ··· ·· ·· • · · · · · ······« ·· ·· · ·
- 20 Különösen előnyösek az olyan (II) általános képletű polikarbonátok, ahol X1 jelentése 4-metil-fenilcsoport, X2 jelentése -CO2-(4-metil-fenil)-csoport, N = 3-15 és X jelentése (a'), (b1), (v) , (c' ) , (x) , (£'), (g'), (n*) vagy (j') általános képletű csoport.
Ilyen polikarbonátok az alábbiak:
HBDS/P/C = poli[oxi(2,5-diszulfo-l,4-fenilén)oxi-karbonil], alfa-[(4-metil-fenoxi)-karbonil]-ómega-(4-metil-fenoxi), amely olyan (II) általános képletű vegyület, ahol a (II) általános képletben X' jelentése 4-metil-fenil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (a') csoport, X2 jelentése (y) csoport és n = 3-15.
HBPDS/P/C = poli{oxi[2,2'-diszulfo(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]oxi-karbonil), alfa-[(4-metil-fenoxi-karbonilJ-ómega-(4-metil-fenoxi), amely olyan (II) általános képletű vegyület, ahol a (II) általános képletben X' jelentése 4-metil-fenil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (h') csoport, X2 jelentése (y) csoport és n = 3-15.
Különösen előnyösek az olyan (III) általános képletű poliészterek, ahol R4 és r5 jelentése hidrogénatom, n = 3-15 és X2 jelentése (m), (n), (v) vagy (x) csoport és X jelentése (a1), (b'), (c'), (v), (x), (£’), (g '), (h·) vagy (j') általános képletű csoport.
Ilyen poliészterek az alábbiak:
HBPDS/TPC = poli{oxi[2,2'-diszulfo(l,l'-bifenil)-4,4'-diil]oxi-karbonil-1,4-fenilén-karbonil), amely olyan (III) általános' képletű vegyület, ahol a (III) általános képletben R4 és R5 jelentése hidrogénatom, X2 jelentése p-fenilén-atom, X jelentése ··· (h*) csoport és n = 3-15.
HBDS/TPC = poli[oxi(2,5-diszulfo-l,4-fenilén)-oxi-karbonil-
1,4-fenilén-karbonil], amely olyan (III) általános képletű vegyület, ahol a (III) általános képletben R4 és R5 jelentése hidrogénatom, X3 jelentése p-fenilén-csoport, X jelentése (a') csoport és n = 3-15.
Különösen előnyösek az olyan (IV) általános képletű poliamidok, ahol R6 jelentése fenilcsoport; R7 jelentése metil-benzoil-csoport; n = 3-15 és X3 jelentése (m), (n), (v) vagy (x) általános képletű csoport; és X jelentése (v), (c'), (a'), (b'), (x) , (f) , (g* ) , (h') vagy (j') csoport.
Ilyen poliamidok az alábbiak:
BPDS/TPC/MBC = poli{imido[2,2'-diszulfo(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]imino-karbonil-1,4-fenilén-karbonil), alfa-{[(4-metil-fenil)amino]karbonil}-ómega-[(4-metil-fenil)amino] , amely olyan (IV) általános képletű vegyület, ahol a (IV) általános képletben R6 jelentése R-C(0)-NH-X-NH- csoport, R jelentése 4-metil-fenil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom, R7 jelentése 4-metil-benzoil-csoport, X3 jelentése p-fenilén-csoport, X jelentése (h') csoport és n = 3-15.
A találmány tárgya a szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz anionos oligomerek előállítási eljárása is, amely oligomerek szűk molekulatömeg tartományúak, amely képessé teszi az oligomereket főként emberek esetében az AIDS vagy ARC kezelésére szolgáló gyógyszerként való alkalmazásra. A szűk molekulatömeg tartomány előnye ezeknél az oligomereknél a nagyobb aktivitás a megfelelő keverékekkel összehasonlítva, valamint az oligomerek jobb jellemzése.
• · • ··· ·«· ·· ·· • · · · · · ···· ··· ·· ·· ··
- 22 A találmány oltalmi körébe tartozik a fenti oligomerek külön komponensekre, például szűk molekulatömeg tartományba eső komponensekre való szétválasztására szolgáló eljárás és az így előállított izolált oligomer termék.
A találmány szerinti eljárásban a következő reakciólépések szerint járunk el:
1. lépés: a nyers polidiszperz anionos oligomer keveréket egy szűk molekulatömegeloszlású polidiszperz anionos oligomer keverékre szűkítjük gélfiltrációval, szelektív kicsapással, membrán permeációval vagy fordított fázisú kromatográfiával; és/vagy
2. lépés: a monodiszperz anionos oligomert izoláljuk gél elektroforézissel vagy fordított fázisú kromatográfiával. Mindegyik kívánt n frakció monodiszperz tisztasága legalább 75%, előnyösen körülbelül 85 - körülbelül 100% közötti; és
3. lépés: kívánt esetben az 1. vagy 2. lépésben kapott szűk moltömegeloszlású poli- vagy monodiszperz anionos oligomer sót a kívánt gyógyászatilag alkalmazható sóvá, célszerűen nátrium- vagy kálium sóvá alakítjuk; tetrabutil-ammónium só előállítása esetén főként ioncserével, vagy valamilyen gyenge, illékony sav sójának hozzáadásával.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott eljárások az irodalomban ismertek. Az alábbiakban néhány irodalmi helyet ismertetünk ezekre vonatkozóan:
1. Gélfiltráció: Protein Purification, ed. Charles R. Cantor, Springer-Verlag, 1987, in the chapter by Róbert K. Scopes, Separation in Solution, pp. 186-198.
··· ······ • ·· ♦ ··· ·· · · • · · · · »
2. Szelektív kicsapás: Polymer Fractionation, ed Manfred
J. R. Cantow, Academic Press, 1967, in the chapter by Akira Kotera, Fractional Precipitation, pp. 43-65.
3. Membrán permeáció: Polymer Fractionation, ed. Manfred
J. R. Cantow, Academic Press, 1967, pp. 462.
4. Fordított fázisú kromatográfia: J. Chrom. Library, 41A,
High-Performance Liquid Chromatography of Biopolymers and Biooligomers, ed. 0. Mikes, Elsevier, 1988, pp. A127-A208, A303-A399.
5. Gél elektroforézis: Protein Purification, ed. Charles R. Cantor, Springer-Verlag, 1987, in the chapter by Róbert K. Scopes, Separation in Solution, pp. 199-215.
6. Ioncsere: Dowex: Ion Exchange, The Dow Chemical Company, The Lakeside Press, 1958, pp. 39-66.
Az oldatban illékony aminok ammónium sói formájában létező oligomereket gyógyászatilag előnyösebben alkalmazható sókká, így nátrium- vagy kálium sókká alakíthatjuk egy gyenge illékony sav alkálifém sójával való kezeléssel. Az oldat bepárlással vagy liofilizációval való koncentrálása után az amint és gyenge savat eltávolítjuk és az oligomereket alkálifém sóik formájában izoláljuk. Megfelelő átalakított ammónium sók az ammónia, monoetil-amin, trietil-amin vagy dimetil-amin sói (a leírásban ammónium sók). Alkalmazható alkálifém sók a nátrium- vagy kálium-hidroxid, hidrogénkarbonát, acetát, formiát vagy propionát .
A nyers polidiszperz anionos oligomer kiindulási anyagokat a 0467185 számú európai szabadalmi leírásban ismertetettek szerint állítjuk elő. Az eljárás a Kershner féle módszer (4,895,660 számú USA-beli szabadalmi leírás) módosított változata, amelyben a ··· «<···· β ··· ··♦ ♦· ·♦ • · · · · · *«·· ··· 4· ·4 ··
- 24 kétfunkciós monomerek egyikének egy részét egy egyfunkciós láncvégzáró szerrel cserélik ki és a reakciót felületaktív szer nélkül hajtják végre. A molekulatömeg szám szerinti átlagát (Mn) a reakciópartnerek sztöchiometrikus aránya határozza meg.
A polidiszperz anionos oligomereket az alább ismertetett reakciók szerint állíthatjuk elő:
Polidiszperz polikarbamidok és poliamidok [(I) és (III) vegyületek] előállítása:
Az (I) és (III) általános képletű polidiszperz polikarbamidok és poliamidok előnyös előállítási eljárása az irodalomban ismert (Kershner, 4,895,660 számú USA-beli szabadalmi leírás), amelyet az alábbiakban ismertetünk részletesen. A reakciópartnereket és körülményeket szintén ismertetjük.
Diaminok: Sokféle aromás diamin alkalmazható. A lehetséges szubsztituensek is hasonlóan széles tartományba tartoznak, így hidroxil, alkenil-, rövidszénláncú alkilcsoportok, karboxilát-, szulfonátcsoportok és halogénatomok lehetnek. A szubsztituensek neutrális pH-nál, vízben nem szükségszerűen anionosak.
Kétfunkciós elektrofilek: foszgén (karbonil-diklorid) , karbonil-dibromid, CI3COCOCI, karbonil-diimidazol, CI3COCO2CI3, aromás dibázisos savak disavas halogenidjei, így a tereftálsav, izoftálsav, 2,6-naftalin-disav.
Savkötők: bázisokat, így nátrium-karbonátot, nátrium-hidroxidot és tributil-amint alkalmazunk.
Segédanyagok: különböző felületaktív anyagokat alkalmazhatunk. Megfelelőek lehetnek a nem-ionos felületaktív anyagok, így a szorbit-monolaurát, szorbit-monostearát, etilénglikol-distearát, polietilénoxi/polipropilénoxi polimer. A felületaktív « · • · · · • ·«· ·«· < · ·· • V · · · · ···· «·· ·· ·· ··
- 25 anyagokat nehéz eltávolítani a termékből, ezért alkalmazásuk nem előnyös.
Oldószerek: az egy oldószert alkalmazó módszerek poláros aprotikus oldószert, így Ν,Ν-dimetil-acetamidot, N,N-dimetil-formamidot használnak. Alkalmazhatók olyan módszerek is, amelyek víz mellett egy másik oldószert is, például toluolt, széntetrakloridot, benzolt, acetont, etilén-dikloridot, stb. is használnak. A szerves — vizes oldószerek aránya általában körülbelül 0,5 - körülbelül 2.
Az irodalomban ismertetett módszerekben a disav-halogenidet az egyéb kiindulási anyagok kevert oldatához vagy szuszpenziójához adják. Bizonyos esetekben a bázist a disav-halogenid hozzáadás alatt adják a rendszerhez. A hőmérséklet 0°C és 50°C, előnyösen 20-30°C közötti. A reakciópartnerek aránya (diamin disav-halogenid molarány) körülbelül 0,9-1,2 közötti, előnyösen ekvimoláris.
A reakcióelegyet olyan sebességgel keverik, amely elegendő a reakciópartnerek összekeveredéséhez. A reakciópartnerek aránya részben a fázisok közötti határfelületi terület függvénye, ezért erőteljes keverésre van szükség. E célból bármilyen kereskedelemben kapható keverő alkalmazható.
A polidiszperz polikarbamidokat az előzőekben ismertetett eljárás módosított változatával állítjuk elő.
Diaminok: a találmány szerinti diaminok főként aromás diaminok, amelyek képletei az előző részekben ismertetettek lehetnek. Ezek a diaminok legalább egy neutrális pH-nál töltést' viselő csoporttal, előnyösen szulfonátcsoporttal szubsztituáltak.
Egyértékű alifás szubsztituensek megengedhetőek. Aromás gyököket ··· • · · · · « • ·Ρ ·4 ·· • · · · · · ·«·· ·44 ·· ·· ··
- 26 összekötő kis alifás kötőcsoportok, így transz-szubsztituált etilén- és acetiléncsoport, alkalmazhatók. Előnyös diaminok azok, ahol a szén-nitrogén kötések párhuzamosan megerősítettek, ilyen a
2,5-diamino-l,4-benzoldiszulfonsav, (PDS); 4,4'-diamino-(1,1'-bifenil)-2,2'-diszulfonsav, (BPDS); transz-2,2'-(1,2-etén-diil)bisz(5-amino-benzolszulfonsav) (StdS) és a 2,5-diamino-benzolszulfonsav.
Kétfunkciós elektrofilek: polikarbamidok előállításakor foszgént (karbonil-diklorid) és karbonil-dibromidot, valamint más karbamid prekurzorokat használhatunk, mint amilyen a karbonil-diimidazol, hexaklór-aceton, CI3COCO2CCI3, CCI3COCI és CI3COCOCI.
Savkötők: sokféle szervetlen bázist használhatunk, így alkálifém- vagy kétértékű fém hidroxidokat, karbonátokat, hidrogénkarbonátokat, foszfátokat. Előnyösek a puftérhatású savkötők, amikor az összes bázist a reakcióelegyhez adjuk a kétfunkciós elektrofil hozzáadása előtt. Szerves bázisokat, így trietil-amint is használhatunk, de ezek nem előnyösek.
Egyfunkciós láncvégzáró szerek: számtalan ilyen molekulatömeg limitáló szer alkalmazható. Ezek a szerek alifás vagy aromás vegyületek lehetnek, amelyek reagálnak a diaminokkal vagy a kétfunkciós elektrofilekkel. Ilyen egyfunkciós szerek lehetnek aminok, így anilin, metil-anilin, metil-amin, etil-amin, butil-amin, dietil-amin, ammónia, N-metil-anilin, fenol és krezol. Egyfunkciós amin reagálószerek lehetnek például a benzoil-klorid, metil-benzoil-klorid, acetil-klorid, valamint a fenil-klór-formiát. A láncvégzáró szerek töltéssel rendelkező szubsztituenseket is tartalmazhatnak, így például kálium-2-szulfofenolt vagy kálium-4-szulfoanilint.
♦ · · · · ·
V ··« ··» ···* • V · w · ···» 999 «« ♦·♦·
- 27 Segédanyagok: felületaktív szereknek a reakcióelegyhez való adása nem szükséges és nem előnyös, mert bonyolulttá teheti az izolációs eljárást.
Oldószerek: ha az alkalmazott reakcióhőmérsékleten a kétfunkciós elektrofil egy folyadék, egyetlen oldószer, célszerűen a víz alkalmazása előnyös. Ilyen kétfunciós elektrofil a foszfén. Ha ez szilárd, akkor vízoldhatatlan reakciópartnereket alkalmazunk, és kívánatos kis mennyiségű vízzel nem elegyedő ko-oldószer alkalmazása. Ilyen vízzel nem elegyedő ko-oldószerek a kloroform, széntetraklorid, toluol, metilén-klorid. A szerves -♦ vizes oldószerek aránya általában 0-1, előnyösen 0-0,1.
Az eljárást a reakció végbemeneteléhez szükséges hőmérsékleten, célszerűen körülbelül 0-100°C közötti, célszerűen 0-25°C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre.
Alacsony forráspontú kiindulási anyagok, például foszgén (forráspont: 6°C) alkalmazásakor előnyös a forrásponton, vagy a forráspont alatt végrehajtani a reakciót. A nyomásnak nincs jelentősége, általában környezeti nyomáson végezzük a reakciót. A reakcióelegy pH-ját gondosan az optimális értéken kell tartani. Alacsony pH értéknél, pH = 6 alatt, a reakció igen lassan megy végbe, míg magas pH értéknél, pH = 10 felett a kétfunkciós elektrofil nem stabil a hidroxiddal vagy más bázissal való támadáshoz. Magas pH értéknél a polikarbamid bomlása is bekövetkezhet. A pH értéket előnyösen 7-9 között tartjuk a reakció alatt.
Láncvégzáró reagens nélküli reakció esetén a molekulatömeget a reakciópartnerek sztöchiometrikus arányának gondos beállításával szabályozhatjuk. A diamint vagy a kétfunkciós elektrofilt egyaránt alkalmazhatjuk feleslegben, ez például 1-100% molfeles28 · 4 * · · • ••a ··· ·· 4· leget jelenthet. Ezt a sztöchiometrikus arányt figyelembe kell venni a diaminnal való reagáltatás előtt hidrolízissel elbontandó kétfunkciós elektrofil esetében. Például, ha foszfént alkalmazunk magas pH értéknél, nagy feleslegre van szükség, hogy kompenzáljuk az őt elbontó hidroxiddal végbemenő gyors reakciót. Mivel ennek a mellékreakciónak a kiterjedését nehéz szabályozni, célszerű valamilyen egyfunkciós láncvégzáró reagenst alkalmazni a molekulatömeg szabályozása céljából. Habár az említett módszerek használhatók a molekulatömeg szám szerinti átlagának szabályozására, a kapott termékek olyan polimerkeverékek, amelyeket megoszlással jellemzett néhány molekulatömeg jellemez. A reakciópartnerek beadási sorrendje nem kritikus. Előnyös először a kétfunkciós elektrofil beadása. Ha olyan savkötőket alkalmazunk, amelyek nem pufferek, például ilyen a hidroxid, legelőnyösebb ennek egy részét az elején a reakcióelegyhez adni a kívánt pH érték elérésig, a maradékot pedig a kétfunkciós elektrofillel együtt adhatjuk be.
A polimerizációkat kívánatos nagy koncentrátumoknál végrehajtani, ez lehetővé teszi a termék izolálásánál eltávolítandó oldószer mennyiségének csökkentését. Bizonyos esetekben a termék a reakció vége fele kicsapódik a reancióelegyből és egyszerűen az oldószer dekantálásával elkülöníthető. Ebben az eljárásban a legtöbb olyan szervetlen sót, amely a savkötő reakciójából keletkezik, eltávolítjuk. A koncentráció nem kritikus, 0,5-50 tömeg% közötti lehet, az oldószer tömegéhez viszonyított diamin tömegében kifejezve. Ez a koncentrációtartomány előnyösen 1-10 törneg%.
• · * · · · · • · · · · • · · · ·· · ·
A nyers polidiszperz terméket a reakcióelegyből valamilyen vízzel nem elegyedő és a terméket nem oldó oldószer hozzáadásával is kicsaphatjuk a reakcióelegyből. Ilyen oldószer az aceton, metanol, etanol, izopropanol.
(II) és (IV) általános képletű polikarbonátok és poliészterek
Az előzőekben a polikarbamidok és poliamidok előállításánál ismertetett eljárásokat alkalmazzuk, a következő kivételekkel: diaminok helyett difenolokat használunk; a megfelelő aromás difenolok legalább egy olyan szubsztituenst tartalmaznak, amely pH = 7 értéknél anionos. Ezek a difenolok a diaminokkal azonos szerkezetűek, azzal a különbséggel, hogy az aminok hidroxilcsoportokkal vannak helyettesítve. A diolokat egy vagy két mól bázissal előkezelhetjük, mono- vagy difenoxidok keletkezése céljából. Ilyen specifikus vegyületek például a 4,4'-dihidroxi(l,l'-bifenil)-2,2'-diszulfonsav dikáliumsó (HBPDS) és a 2,5-dihidroxi-1,4-benzoldiszulfonsav dikáliumsó (HBDS).
A reakciókörülmények sokkal kritikusabbak a termékeknek vizes oldatokban mutatott instabilitása miatt. Különös fontosságú a pH szabályozása. pH = 7-nél alacsonyabb értéknél a polimerizáció sebessége igen alacsony, míg magas pH értékeknél (>9) a polimer karbonát vagy észtercsoportjai hidrolizálnak. Előnyös pH tartomány a 7-8 közötti, célszerűen ezt egy automatikus pH szabályozóval tarthatjuk. A polimerizáció alatt a hőmérsékletet szűkebb határok között, 0-40°C között, célszerűen 0-25°C között tarthat• · ·
- 30 Miután a disavklorid beadagolása befejeződött, egy ideig, általában 15-120 percig várni kell, ez idő alatt a kiindulási anyagok átalakulása biztosan befejeződik. A várakozási idő alatt még további bázist adhatunk a reakcióelegyhez, de a pH értéknek nem szabad az előzőekben megjelölt értékek fölé emelkedni. A nyers polidiszperz terméket a fentiekben ismertetett módon izolálj uk.
A találmány szerinti szűk molekulatömegeloszlású poli- és monodiszperz anionos oligomereket a HIV-1 vírussal vagy más rokon vírusokkal fertőzött sejtekben a syncytium (sejtfal nélkül egymásba folyó sejtek) képződés megakadályozására alkalmazhatjuk. Az anti-HIV anionos oligomerek az AIDS és ARC, valamint más, a retrovírus HIV-1 vagy egyéb rokon vírusok okozta betegségek kezelésében alkalmazhatók.
Az anionos oligomerek keverék formájában, ahol a polidiszperzitási arány nem nagyobb mint 13; vagy monodiszperz oligomer formájában, ahol az n értékek az (I)-(IV) általános képleteknél megadottak lehetnek; vagy több általános képletnek megfelelő vegyületek keverékei, például az (I) és (II) vegyületek keverékei formájában alkalmazhatók, de alkalmazhatók más ismert vírusellenes hatású szerekkel, például 3'-azido-3'-dezoxi-timidinnel (AZT) keverve is.
A HÍV fertőzött sejtekben a syncytium képződés megakadályozásához szükséges anti-HIV hatású poli- és mono-diszperz anionos oligomerek mennyisége bármely hatásos mennyiség lehet. Kísérletek alapján a vegyületeket 10 μg/ml koncentrációjú vizes készítmény formájában alkalmazva teljesen meggátolják a syncytium képződést és csökkentik a p24 antigén jelenlétét. Az AIDS, ARC vagy más, • ·
HÍV fertőzés okozta betegségek kezeléséhez szükséges anti-HIV anionos oligomer mennyiség széles határok között változhat, függ a konkrét alkalmazott dózisegységtől, a kezelés időtartamából, a kezelt beteg életkorától és nemétől, a kezelt betegség természetétől és kifejlődésétől, valamint egyéb, a kezelő orvos számára jól ismert faktoroktól. Az anti-HIV oligomerek más, a retrovirus betegségek kezelésében alkalmazott szerekkel együtt is alkalmazhatók .
A találmány szerinti anti-HIV anionos oligomerek anti-HIV hatású mennyisége általában körülbelül 0,1 mg/testsúly kg és 500 mg/testsúly kg közötti, és ez a mennyiség egyszer vagy többször adható be naponta. Az oligomerek orálisan vagy parenterálisan, közönséges egységdózis formában, valamilyen szokásos hordozóval keverve adhatók be.
A találmány szerinti szűk moltömeg eloszlású, poli- vagy monodiszperz oligomerek vírus-ellenes hatása a HSV vírus szaporodás és replikáció gátló képességük alapján bizonyítható. A herpesz vírus fertőzés kezelési módszer kifejezés egy olyan betegre vonatkozik, aki az 1 vagy 2 típusú herpesz vírussal fertőzött és ennek a betegnek a találmány szerinti (I)- (IV) általános képletű poli- vagy monodiszperz vegyületek valamelyikét beadjuk, vírusellenes hatású mennyiségben. A vírusfertőzés kifejezés bármilyen állapotra vagy stádiumra vonatkozik, amelyet a beteg testében vagy sejtjeiben jelenlévő vírus okoz.
A találmány szerinti oligomerek vírusellenes aktivitását Tyms és társai [J. Antimerobial Chemotherapy, 8, 65-72 (1981)] módszerével vizsgáltuk. A vizsgálatban humán embrió fibroblast sejteket (MRC5) 24 helyes szövetkultúra lemezen tenyésztettünk • ·
- 32 10% borjúembrió szérummal kiegészített MÉM (Eagles' minimum essential médium) tápközegben. Amikor a sejt monorétegek félig egybefolyók voltak, beoltottuk őket a HG52 HSV2 törzs vagy a 17i HSV1 törzs 30-50 plakk-képző egységével [Davidson & Wilkie, J. Generál Virology, 55, 315-331 (1981)]. Egy órás szobahőmérsékleten végbemenő adszorpciós periódus végén a megfertőzött mono4 rétegekre MEM-et rétegeztünk, amely 2% borjúembrió szérumot,
0,5% alacsony hőmérsékleten gélképző agarózt és a vírusellenes szert tartalmazta, egy megadott koncentrációsorozatban. Három napos inkubáció után a sejteket 10%-os formaldehides sóoldattal fixáltuk, majd 0,3%-os metilénkékkel színeztük. A dózisválasz görbéket a jelenlévő plakkok átlagszáma alapján rajzoltuk fel a vegyület koncentráció logaritmusának függvényében. Lineáris regreszsziós analízis után kiszámítottuk az 50%-os hatásos dózist (ED50).
A találmány szerinti szűk molekulatömegeloszlású poli- vagy monodiszperz anionos oligomerek alkalmazása a humán HSV fertőzések kezelésében nagyon fontos. A Herpesz vírus fertőzés kifejezés olyan fertőzésekre vonatkozik, amelyeket az 1 típusú herpesz vírus vagy a 2 típusú herpesz vírus okoz. A páciens kifejezés emlősöket, így főemlősöket, beleértve az embert is, jelent, ezenkívül lovakat, szervasmarhákat, juhokat, disznókat, kutyákat, macskákat, patkányokat, egereket, stb.
Az (I)-(IV) általános képletű oligomerek beadási mennyisége széles határok között változhat, az alkalmazott dózisegységtől, a kezelés periódusától, a kezelt páciens életkorától és nemétől, a kezelt rendellenesség természetétől és kiterjedtségétől és a kiválasztott anionos oligomertől függően. A találmány szerinti • ·
- 33 oligomereket egyéb, a HSV és CMV fertőzések, valamint általánosságban vírusfertőzések kezelésében alkalmazott szerekkel együtt is alkalmazhatjuk. Az (I) általános képletű anionos oligomerek herpesz vírus elleni és cytomegalo vírus elleni hatásos mennyisége általában a körülbelül 15 mg/kg - 500 mg/kg tartományban van. Egy egységdózis 25-500 mg anionos oligomert tartalmazhat, ezt a mennyiséget naponta egyszer vagy többször adhatjuk be; az ismert módon, valamilyen alkalmazható hordozóanyag segítségével előállított egységdózisokat orálisan, parenterálisan vagy topikálisan adhatjuk be.
Orális beadás esetén az anti-HIV vagy anti-HSV anionos oligomereket szilárd vagy folyékony készítmények, így kapszulák, pirulák, tabletták, ömledékek, porok, oldatok, szuszpenziók vagy emulziók formájában készíthetjük ki. A szilárd egységdózis forma például kemény- vagy lágy zselatinkapszula lehet, amely például felületaktív szereket, kenőanyagokat és inért töltőanyagokat, így laktózt, szacharózt, szorbitot, kálcium-foszfátot, valamint keményítőt tartalmazhat. A találmány szerinti anionos oligomerek közönséges tabletta-alapanyagok, így laktóz, szacharóz és kukoricakeményítő segítségével tablettákká sajtolhatok, amely tabletták kötőanyagokat, így akácmézgát, kukoricakeményítőt vagy zselatint; szétesést elősegítő anyagokat, így burgonyakeményítőt, alginsavat, kukoricakeményítőt, guar-kaucsukot; lubrikánsokat, így talkumot, stearinsavat, magnézium-, kalcium- vagy cinkstearátot; festékeket, szinező- és ízesítőszereket is tartalmazhatnak. Az orális folyékony dózisformák esetében megfelelő adalékanyagok a higítóanyagok, így a víz és alkoholok, például etanol, benzilalkoholok; a polietilénglikolok; ezek adott esetben • * • · gyógyászatilag alkalmazható felületaktív szerek, szuszpendálószerek vagy emulgeálószerek társaságában alkalmazhatók.
A találmány szerinti anti-HIV vagy anti-HSV hatású anionos oligomerek parenterálisan, így szubkután, intravénásán, intramuszkulárisan vagy intraperitoneálisan is beadhatók valamilyen injektálható dózisformában, egy fiziológiásán elfogadható hígító ♦
és hordozóanyagban feloldva a hatóanyagot. Ilyen higító-hordozóanyag lehet valamilyen steril folyadék vagy steril folyadékok keveréke, így víz, sóoldat, vizes dextróz és rokon cukoroldatok; valamilyen alkohol, így etanol, izopropanol vagy hexadecilalkohol; glikolok, így propilénglikol vagy polietilén-glikol; glicerin ketálok, így 2,2-dimetil-l,3-dioxolán-4-metanol; éterek, így poli/etilénglikol/400; valamilyen olaj, zsírsav, zsírsavészter vagy glicerid, vagy acetilezett zsírsavglicerid. Ezek a steril folyadékok adott esetben valamilyen gyógyászatilag alkalmazható felületaktív szert, így szappant vagy detergenst; szuszpendálószert, így pektint, karbomereket, metilallulózt, hidroxi-propilmetilcellulózt vagy karboximetilcellulózt; emulgeálószert és más gyógyászatilag alkalmazható adalékanyagokat is tartalmazhatnak.
A parenterális készítményekben alkalmazható olajok állati, növényi vagy szintetikus olajok lehetnek, így például szójaolaj, szezám olaj, földimogyoróolaj, gyapotmagolaj, kukoricaolaj, olívaolaj, petroléter és ásványolaj. Alkalmazhatók a zsírsavak, így oleinsav, stearinsav, izosztearinsav; zsírsavészterek, így például etil-oleát és izopropil-mirisztát; szappanok, így zsírsavak alkálifém, ammónium- és trietanol-amin sói; detergensek, · így kationos detergensek, például dimetil-dialkil-ammónium-halogenidek, alkil-piridinium-halogenidek és alkil-amin-acetátok, • · ··« • ·· · • · ··· ·* • · ·· ·· anionos detergensek, például alkil-, aril- és olefin szulfonátok, olefin, éter és monoglicerid. szulfátok és szulfoszukcinátok; nem-ionos detergensek, így zsíraminoxidok, zsírsav-alkanolamidok, valamint polioxietilén-polipropilén kopolimerek; valamint amfoter detergensek, így például alkil-béta-amino-propionátok és 2-alkil-amidazolin kvaterner ammónium sók, valamint ezek keverékei .
A találmány szerinti parenterális készítmények általában körülbelül 0,5-25 tömeg% anti-HIV anionos oligomert tartalmaznak oldatban. Célszerűen konzerválószereket és puftereket is tartalmazhatnak ezek a készítmények. Az injekció beadásakor felléphető irritáció megakadályozása vagy minimumra csökkentése céljából a készítmények valamilyen, körülbelül 12-17 HLB (hidrofil-lipofil balansz) értékű nem-ionos felületaktív szert is tartalmazhatnak. A felületaktív szerek mennyisége ezekben a készítményekben körülbelül 5-15 tömeg% lehet. A felületaktív szer lehet egyetlen, a fenti HLB értékkel rendelkező vegyület, de lehet két vagy több olyan vegyület keveréke, amelyek együtt a kívánt HLB értéket mutatják. Parenterális készítményekben alkalmazható felületaktív szerek lehetnek a polietilén szorbit zsírsavészterek, így például a szorbit-monooleát.
A találmány szerinti anionos oligomereket profilaktikusan, azaz a vírusnak fertőzött egyénből egészséges egyénbe való átjutása megelőzése céljából is alkalmazhatjuk.
A vírus vércserével, de más testfolyadék cseréje útjtán is bekerülhet a szervezetbe. Ennek megfelelően a találmány szerinti oligomereket a fertőzött vérmintákkal foglalkozó kutató és klinikai laboratóriumokban szokásosan használt tisztítószerek • ·
- 36 előállításánál alkalmazott detergensekkel együtt is kikészíthetjük. A találmány szerinti oligomereket tartalmazó készítményeket használhatjuk az egyészségügyi/sebészeti berendezések és eszközök, valamint az egészségügyben dolgozók kezének és egyéb bőrfelületének tisztítására is. A találmány szerinti oligomereket folyékony vagy por készítmények formájában a szexuális megelőzésben használt eszközök, igy kondomok felületének kezelésére is alkalmazhatja akár az eszköz használója, akár a gyártója. Az oligomerekből nők részére habfürdők formájában is készíthetünk készítményeket, a fertőzött egyénnel való szexuális érintkezés előtti alkalmazás céljára. Az oligomerekből készíthetünk lubrikánsokat és spermacid zseléket, valamint oldatokat. Végezetül, a találmány szerinti oligomerekből készíthetünk olyan készítményeket is, amelyeket gőzfürdők, pezsgőfürdők, uszodák esetében alkalmazhatunk a fertőzés megelőzésére.
Az alább következő példák a találmányt illusztrálják anélkül, hogy igényünket ezekre a példákra korlátoznánk.
A példákban használt definíciókat az alábbiakban magyarázzuk. Természetesen egyenértékű berendezések, gyanták, stb. is használhatók.
Diódé Array Detector = 280 nm vagy 320 vagy 340 nm vagy 550 nm UV 4 nm vagy 100 sávszélességgel;
Gél filtrációs oszlop = Sephadex™ G-25 gél fltrációs oszlop (3.0 cm x 94 cm);
HPLC = nagynyomású folyadékkromatográfia;
IC5Q = a vírusszaporodás 50%-át gátló dózis;
Folyadékkromatográl = Hewlett Packard™ 1090;
Membránszűrő 10,000 Dalton molekulatömegű szűréshatárral = • · • 9
- 37 *« 9··· • · · « ··* ···· ···
999 ♦ · • · «
Centricon-10 írom. Amicon;
Membránszűrő 3,000 Dalton molekulatömegű szűréshatárral = Centricon-3 from Amicon;
MT4 = humán T-sejt transzformált sejtvonal;
MTT = tetraazolium redukciós reagens; 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazolium-bromid;
Perisztaltikus szivattyú = Gilson Minipuls™ perisztaltikus szivattyú;
pfu = plakk képző egység;
I Fordított fázisú kromatográfiás oszlop = Alltech Hyerprep™ 120 ODS;
II Fordított fázisú kromatográfiás oszlop = Alltech Absorbospzere™ HS high C18 szén töltet;
RPMI 1640 = standard sejt tápközeg (GIBCO);
Fecskendő feltétes oszlop = Alltech Maxi-Clean™ SCX;
TCID50 = fertőző dózisú szövetkultúra, azaz olyan mennyiségű kultúrafolyadék, amely képes a sejtek 50%-ának megfertőzésére (50%-os cytopatikus hatás) 7 napos utófertőzésnél; és UV detektor = Isco modell UA-5 ultraibolya detektor.
A kiindulási anyagok előállítása:
A példa: bróm-láncvégzárás
Négynyakú lombikot fecskendő-nyílással, hőmérővel, mechanikus keverővei, pH-elektróddal, száraz jeges kondenzálóval és egy foszgén gáz bevezető csővel szerelünk fel. A lombikba 8,00 g (23,23 mmol) 4,4'-diamino-bifenil-2,2'-diszulfonsavat, 0,961 g (5,162 mmol) 2-bróm-4-metil-anilint és 250 ml vizet teszünk, ezt 12°C-ra hűtjük és a kevert szuszpenziót 11 ml 5 molos nátrium
····
Λ *··
-hidroxiddal kezeljük, amíg a szilárd anyagok feloldódnak és a pH eléri a 11,5 értéket. Ezt követően a reakcióelegyhez 10 perc alatt 4,5 g (45 mmol) foszgént és még annyi 5 molos nátrium-hidroxidot adunk, hogy a pH-t 8-9 érték közt tartsuk. 3 óráig tartó keverés után 1,848 g (9,93 mmol) 2-bróm-4-metil-anilint és 100 ml vizet, majd 3,7 g (37 mmol) foszgént és a pH 7-8 érték között tartásához elegendő 5 molos nátrium-hidroxidot adunk a rendszerhez. A keverést egy éjszakán át (körülbelül 16 óra) tovább folytatjuk, majd az elegyet 1000 ml acetonba öntjük.
A kapott terméket szűrjük és 3 x 100 ml acetonnal mossuk. A kiszűrt anyagot kristályosító csészébe téve vákuumban, 50°C-on egy éjszakán át szárítjuk, így 249 g nyers, fehéres terméket kapunk, melynek képlete az (V) képlet szerinti, nyers polidiszperzitása vagy az: Mw/Mn arány = körülbelül 1,4.
B példa: az (I)-(IV) általános képletű nyers polidiszperz oligomerek előállítási eljárását a 0,467,185 számú, 1992. január 22-én publikált európai szabadalmi leírás ismerteti.
A nyers oligomer keverék szűkítése szűkebb molekulatömegeloszlású polidiszperz oligomer keverékre.
1. lépés
1. példa: Gélfiltráció
A: 0,542 g B példa (kiindulási anyagok előállítása) szerinti (I) általános képletű nyers polidiszperz szulfonált polikarbamid (a polimerizáció szám szerinti átlaga = 9, lásd 1. ábra, Mn = 2348, Mw = 3408, Mw/Mn = 1,45) 8,34 ml vízben készült oldatát átengedjük egy gélfiltrációs oszlopon. Egy perisztaltikus szivattyú segítségével 5,0 ml/perc áramlási sebességgel ionmente sített vizet áramoltatunk át az oszlopon. Az eluenst 310 nm-nél egy UV detektorral figyeljük, az anionos oligomer keverék jelenlétének ellenőrzése céljából. 40 perc elteltével a minta kezd feltűnni és 4,0 ml-es frakciókat gyűjtünk. Analitikai HPLC analízis jelzi, hogy a frakciók diszperzitása jelentősen csökken a kiindulási anyaghoz viszonyítva. Például a 14-es frakció (2.
ábra) 25 ml szűk molekulatömegeloszlású oligomert tartalmaz (Mn = 2549, Mw = 2880, = 1,13). A 7-17 frakciók egyesítve
271 mg-os mintát adnak (3. ábra, Mn = 2860, = 3830, =
1,34), kisebb mennyiségű alacsony retenciós idejű szennyeződésekkel .
Az 1-4. ábrákon a 0-3 perc időtartományban látható csúcsok láncvégzárás nélküli oligomereket, a 3-5 perc időtartományban látható csúcsok mono-láncvégzárású oligomereket reprezentálnak, az 5-14 perc tartomány csúcsai pedig a kívánt di-láncvégzárású oligomereket reprezentálják, ahol η = 1 14 percnél, n = 2,13 percnél, n - 3,12 percnél, n-t jobbról balra számolva.
A függőleges tengely az UV adszorpciót mutatja 280 nm-nél milli-adszorpciós egységekben (mAU) kifejezve. A mintakoncentráció nincs meghatározva: ezért a mintától-mintáig tartó csúcs méret változás nem értelmezhető.
B: A gélfiltrációs oszlopot úgy állítjuk elő, hogy 115 g Pharmacia Sephades™ G-10 (40-120 μπι gyöngyméret) gyantát 1 óra hosszat hagyunk duzzadni körülbelül 500 ml desztillált vízben. A szuszpenziót egy 1 literes hengerben hagyjuk ülepedni, majd a gyantáról a finom szemcséket dekantáljuk. Egy üvegoszlopba tesszük az iszapos gyantát és 500 ml desztillált vizet engedünk át az oszlopon, 2.5 x 50 cm-es ágyat nyerve. Egy perisztaltikus • · szivattyú segítségével konstans áramlási sebességet (körülbelül
3-4 ml/perc) tartunk fenn az oszlopban. Az eluenst 310 nm-nél egy UV detektorral figyeljük a szűkebb moltömegeloszlású polidiszperz anionos oligomer keverék jelenlétének ellenőrzése céljából.
mg kiindulási anyagok B példája szerinti (IV^ = 27 30, NMR-rel meghatározva) (I) általános képletű polidiszperz aninos 9 polikarbamidot 215 ml desztillált vízben feloldunk és az oszlopra öntjük. Az anyagot desztillált vízzel eluáljuk és három darab 25 ml-es frakciót gyűjtünk. A frakciók HPLC-s analízise azt jelzi, hogy az 1 frakció magasabb molekulatömegű oligomerekben, míg a 2 és 3 frakció alacsonyabb molekulatömegű oligomerekben gazdag, a kiindulási anyagra vonatkoztatva.
C: Az előzőekben készített, a kiindulási anyagok A példája szerinti bróm-láncvégzárt nyers termék 1,078 g-jának 10 ml vízben előállított oldatát átengedjük a gélfiltrációs oszlopon. Egy perisztaltikus szivattyú segítségével 5,0 ml/perc konstans áramlási sebességet tartunk az oszlopban ionmentesített vízzel. Az eluenst 310 nm-nél UV detektorral figyeljük, az oligomer keverék jelenlétét figyelve. 40 perc elteltével a minta láthatóvá válik és 3,0 ml-es frakciókat gyűjtünk. Analitikai HPLC-s analízis azt jelzi, hogy a frakciók diszperzitása jelentősen lecsökkent, a kiindulási anyaghoz viszonyítva. A 8-11 frakciókat egyesítve körülbelül 300 mg bróm-láncvégkapcsolású mintát kapunk, lecsökkent mennyiségű alacsony retenciós idejű szennyeződésekkel. Tehát javított tisztaságú bróm-láncvégkapcsolású polidiszperz oligomert izolálunk.
2. példa: Szelektív kicsapás
3,93 g, a kiindulási anyagok B példája szerinti (I) általá- • * *··· · · ·« ·· • · β ···«*· • · · · ··· · ♦ ·· • · · · · · — “ ······· «· ·· ·· nos képletű nyers polidiszperz szulfonált polikarbamid keverék (a polimerizációsfok szám szerinti átlaga = 6) 40,0 ml vízben készült oldatához 40,0 ml acetont adunk, ennek hatására csapadék keletkezik, amelyet centrifugálással elkülönítünk. Az oldható részt bepárolva 0,82 g szűk polidiszperzitású frakciót kapunk, amelynek átlagos polimerizációfoka = körülbelül 4.
3. példa: Membrán permeáció
A kiindulási anyagok B példája szerinti (I) általános képletű szulfonált polikarbamid nyers keverék (a polimerizáció fok szám szerinti átlaga = 6) 10 mg/ml-es oldatának 167 μΐ-jét egy 10.000 Dalton szűréshatárú membránszűrőn engedjük át, egy centrifuga segítségével. A szűrőn átbocsátott részt egy 3.000 Dalton szűréshatárú membránon is átbocsátjuk, hasonló módon. Ez a szeparációs sorozat olyan oligomer keveréket eredményez, amelyben a frakciók mindegyikének diszperzitása jelentősen csökkent a kiindulási anyagéhoz viszonyítva és nincsenek jelen az alacsony és magas molekulatömegű részek. Az 5. ábrán a felső görbe valamilyen (I) általános képletű nyers polidiszperz polikarbamidot jelöl, a másik görbe pedig a 10.000 Daltonos szűrőn átengedett, de a 3.000 Daltonos szűrőn át nem engedett anyag görbéje.
4. példa: Fordított fázisú kromatográfia
Egy dióda soros UV detektorral (280 nm) felszerelet folyadékkromatográfot egy 250 μΐ-es mintaadagolóval egészítjük ki. Egy 10 μπι-θΞ részecskékkel töltött I fordított fázisú kromatográfiás oszlopra (3,4 cm x 50 mm) 200 μΐ-es adagonként a kiindulási anyagok B példája szerinti (I) általános képletű polidiszperz szulfonált polikarbamid nyers keverék (polimerációfok szám sze• · • · • · • · · · · · • · rinti átlaga =6) 3,8 g-jának 2,65 ml vízben készült oldatát injektáljuk. Két eluens, 5 mM vizes (n-Bu3N)PO4 és acetonitril konstans 45:55 térfogatarányú elegyével eluálva egy széles csúcs figyelhető meg, amelyet kézzel frakcionálunk. A frakciók mindegyikét HPLC-vel analizáljuk. Az eredmények olyan oligomerek keverékeit jelzik, ahol a polidiszperzitások szűkebbek, mint a nyers kiindulási anyagé.
2. lépés: A monodiszperz oligomer izolálása ammónium sója formáj ában
5. példa: Fordított fázisú kromatográfia
A: Egy diódasoros UV detektorral (280 nm) felszerelt folyadékkromatográfot 250 μΙ-es minta adagolóval egészítünk ki. 3 μτπ-θΞ részecskékkel töltött I fordított fázisú kromatográfiás oszlopot (10 mm x 250 mm) alkalmazunk. Az oszlopra 200 μΙ-es részletekben a kiindulási anyagok B példája szerinti (I) általános képletű polidiszperz szulfonált polikarbamid (a polimerizációfok szám szerint átlaga = 6) nyers keverék 905,2 mg-jának 18,0 ml vízben készült oldatát injektáljuk. Az 1,5 ml/perc sebességgel áramoltatott eluens 5 mM-os vizes trietil-ammóniumacetát (Et^NHOAc) acetonitril és tetrahidrofurán oldat. A három komponens aránya indukáláskor 80:20:0 térfogatarányú, és úgy változtatjuk lineárisan, hogy 21,5 percnél 70:40:0 térfogatarányú, 27 percnél 30:40:30 térfogatarányú legyen: az arányokat 36 percig konstans értéken tartjuk, amikor is az eluálást befejezzük. 5 perc után egy következő mintát injektálunk az oszlopra. Az eluenst egy frakciógyűjtő segítségével gyűtjük. Körülbelül 24 órás folyamatos elúció után a frakciókat analizáljuk. 2-9 ismét• ·
- 43 - ......... *·· ··’ lődő egységű oligomereket tartalmazó (85-100 terület%-os tisztaság) néhány frakciót kapunk. Ezeket a frakciókat körülbelül 20 Hgmm nyomáson 50-55°C hőmérsékleten bepároljuk, majd egy északén át szárítjuk vákuumban, 50°C hőmérsékleten. A polikarbamid trietil-ammónium sóit világos borostyánszínű üvegszerű anyagok formájában kapjuk meg, 10-30 mg termeléssel.
B: Diódasoros UV detektorral (320 nm) felszerelt folyadékkromatográfot egy 250 μΐ-es mintaadagolóval egészítünk ki. Egy II fordított fázisú kromatográfiás oszlopot (10 mm x 250 mm) alkalmazunk, 3 μιη-es részecskékkel töltve. Az IC példa szerinti nyers keveréket 5 ml vízben feloldjuk és szűrjük. 75 μΐ-es injekció méretet alkalmazunk. Az eluens vizes 50 mM-os trietil-ammónium-acetát és acetonitril oldat, ezt 1.5 ml/perc sebességgel áramoltatjuk. Indukáláskor a két komponens aránya 70:30 térfogatarány, amelyet 10 percig konstans értéken tartunk, majd lineárisan változtatjuk, amíg az arány 15 percnél 60:40 térfogatarány lesz, ezt 25 percig konstans értéken tartjuk, amikor is befejezzük az elúciót. 5 perc után egy következő mintát injektálunk az oszlopra. Az eluenst egy frakciógyűjtővel gyűjtjük. Körülbelül 24 órás folyamatos művelet után a frakciókat analizáljuk. Kilenc frakciót kapunk, amelyek 1-9 ismétlődő egységet tartalmazó oligomereket (95-100 terület%-os tisztaság) tartalmaznak. A frakciókat körülbelül 20 Hgmm nyomáson, 50-55°C hőmérsékleten bepároljuk, majd vákuumban, szobahőmérsékleten egy éjszakán át szárítjuk. Az I^/Mh < 1,1 értékű monodiszperz polikarbamid trietil-ammónium sóit világos borostyánszínű üvegszerű anyagok formájában kapjuk meg, 5-10 mg-os termeléssel.
C: Diódasoros UV detektorral (340 um) felszerelt folyadékkromatográfot egy 250 μΐ-es minta adagolóval egészítünk ki.
μιη-es részecskékkel töltött II fordított fázisú kromatográfiás oszlopot (10 mm x 250 mm) alkalmazunk. Az IC példa szerinti (IV) általános képletű (Mn = körülbelül 1300) nyers poliamid keverék 200 mg-ját 3 ml vízben feloldjuk és szűrjük. 75 μΐ-es injekció méretet alkalmazunk. Az í,0 ml/perc sebességgel áramoltatott eluens vizes 50 mM-os trietil-ammónium-acetát és acetonitril oldat. A két komponens aránya 72:28 (tf/tf). Az eluenst egy frakció gyűjtővel gyűjtjük. Körülbelül 24 órás folyamatos művelet után a frakciókat analizáljuk. 1-4 ismétlődő egységű oligomereket tartalmazó frakciókat kapunk. Ezeket a frakciókat körülbelül 20 Hgmm nyomáson, 60°C hőmérsékleten bepároljuk és egy éjszakán át vákuumban, 50°C-on bepároljuk. A monodiszperz poliamid trietil-ammónium sóját fehér szilárd anyag formájában kapjuk meg. A kapott só a (VI) általános képletű vegyület.
D: Amikor az elválasztást trietil-ammónium-acetát jelenlétében hajtjuk végre, az oligomer lánc hossza csökken a növekvő retenciós idő függvényében; a fordított rendű elúciót akkor kapjuk, amikor az elválasztást tetrabutil-ammónium-foszfát jelenlétében hajtjuk végre, azaz itt a lánchossz növekszik a növekvő idő függvényében. A 6. ábra a trietil-ammónium-acetátos HPLC profilt mutatja. A 7. ábra a tetrabutil-ammónium-foszfátos HPLC profilt mutatja. A 8. ábra a 6. ábra tisztított monodiszperz komponenseinek HPLC profilját mutatja be.
Egyéb HPLC-s kromatogramokat is futtatunk tetrabutil-ammónium-foszfáttal. Az (I) általános képletű polikarbamid oligomerek különböző frakciói a 8. ábrán láthatók. A 8. ábrán a felső görbe a nyers polidiszperz oligomer kiindulási anyagát reprezentálja. A komponensek lánchossza a növekvő retenciós idővel növekszik (a 7. ábrával összhangban). A második görbe a 3. példa szerint, egy membránszűrővel szűkebb polidiszperzitású, 3.000-10.000 Dalton tartományú polidiszperz anionos oligomerkeverékre szűkített nyers anionos oligomerkeverék görbéje, a szűkítés után. Az egyes oligomer frakciókat összegyűjtjük, majd tetrabutil-ammónium-foszfáttal ismételt HPLC-nek vetjük alá. Az eredmények a 8. ábra többi görbéin láthatók, amelyekhez az n = 1-9 értékek tartoznak. A 8. ábra legalsó görbéje egy n = 10-13 oligomerkeverék görbéje.
Az oligomer ammónium só átalakítása a megfelelő nátrium sóvá
3. lépés
6. példa: Ioncsere
A: Az 5. példa mintáit külön-külön feloldjuk körülbelül 2 ml ionmentesített vízben és egy fecskendő-feltétes oszlopon engedjük át, amely 0,5 milliekvivalens (meq) savas formájú szulfonált térhálós polistirollal van megtöltve. Az oszlopot kétszer átöblítjük 1 ml vízzel. Bepárlás után minden mintát proton NMR-rel analizálunk, az analízis szerint a trietil-ammónium ion teljesen eltávolítódik és hidrogénnel helyettesitődik.
Az egynél több ismétlődő egységű oligomereket tartalmazó minta diasztereomerek keveréke. Bár ezek a frakciók különálló vegyü-leteknek látszanak, valójában diasztereomerek izomerkeverékei, amely az ismétlődő egységben lévő bifenilcsoport királis természetének köszönhető. A 4. ábrán egy tipikus HPLC analízis (Mw = 2950, Mn = 2800, Mw/Mn = 1,05) látszik, ahol egyetlen csúcs dominál. Ebben a mintában a kicsi, korábbi retenciós idős csúcsok • · « · · · « • ··· ·«· · · ·· • · · · ····· ·· ·· ·· egy mono-láncvégzárt oligomer sorozat csúcsai, ezek az oligomerek a fő komponensnek az izolálás közben elszenvedett hidrolízise folytán keletkeznek.
Az oligomerek Mn értékét úgy számítjuk ki, hogy a láncvégi metilcsoportok 'H NMR-es görbe alatti területének integrált értékét összehasonítjuk az aromás régiónak megfelelő területével. Kiválasztott mintákat analizáltunk repülési idő tömegspektrométerrel (time-of-flight mass spectroscopy) is, amely megfelelt az NMR-es meghatározásnak.
B: 0,5 mekv. savas formájú szulfonált térhálós polistirollal töltött fecskendő-feltétes oszlopokat 2 ml 5M nátrium-kloriddal előkezelünk és 5 ml vízzel átöblítjük. Az 5B példából nyert mintákat egyenként feloldjuk körülbelül 2 ml ionmentesített vízzel, majd átbocsátjuk őket az oszlopon, az Et3NH + kationnak Na+ kationra való cserélése céljából. Ezt követően az oszlopot 1 ml vízzel kétszer átöblítjük. Bepárlás után minden mintát XH NMR-rel analizálunk, az eredmények azt mutatják, hogy a trietil-ammónium-ion eltávolítódott. Kiválasztott mintákat repülési idő tömegspektrométerrel· is analizáltunk, amely megfelelt az NMR-es meghatározásnak.
C: A 6A példában ismertetett fecskendő-feltétes oszlopokat alkalmazzuk az 5C példa szerinti poliamid trietil-ammónium kationjainak a megfelelő nátrium kationokra való cserélése célj ából.
7. példa: Gyenge, illékony savak sóinak hozzáadása (I) általános képletű liofilizált polikarbamid oligomereket (előállítva BPDS és toluidin reagáltatásával, izolálva preparatív HPLC-vel, trietil-ammónium-acetát puffer alkalmazásával) ionmen- 47 • · « · · · · « ··· ··· · · ·· • ♦ · · ····· ·· · · ·· tesített vízben feloldunk és nátrium-acetáttal kezeljük, egy ekvivalens szulfonátra az oligomerben egy ekvivalens nátrium-acetátot számítva. Az oldatot 20 órán át liofilizáljuk a víz, trietil-amin és ecetsav eltávolítása céljából.
Egy 63 mg-os (n = 9) oligomer frakciót 10 ml vízben és 195 μΐ 1,1M nátrium-acetát (NaOAc) oldatban feloldunk. Az oldatot liofilizáljuk és 57 mg oligomert nyerünk.
Hasonló módon eljárva, egy 82 mg-os (n = 7) oligomer frakciót 10 ml vízben és 250 μΐ 1,1M NaOAc oldatban feoldva, az oldat liofilizálása után 79 mg oligomert nyerünk.
Egy 162 mg-os (n = 5) olgiomer frakciót 10 ml vízben és 277 μΐ 1,1M NaOAc oldatban feloldva, liofilizálás után 144 mg oligomert nyerünk.
Biológiai adatok
1. példa: Különböző anti-HIV oligomerek vírus okozta sejthalál megakadályozó képessége MT4 sejtek és HIV-1 RF törzs esetén
Az (I) általános képletű polikarbamid monodiszperz oligomerek vírusellenes aktivitását egy standard tetrazolium redukciós vizsgálattal [Nakashima és társai, J. Virol. Methods 26, 319-330 (1989)] határoztuk meg. Az oligomereket RPMI-ben oldottuk standard (körülbelül 100 μg/ml) koncentrációban, majd az oldatok kétszeres hígításában egy 96 mélyedéses mikrotitráló lemezen néztük a vírusellenes hatást. A lemez mélyedéseibe 5 x 104 MT4 sejtet és 100 TCID50 vírust (HIV-1 RF törzs) injektáltunk és a lemezt 37°C-on 7 napig inkubáltuk. Ezt követően minden mélyedésbe, MTT-t adagoltunk és a lemezeket további 2 órán át inku- 48 báltuk. A kék formazán kristályokat savas izopropanol segítségével feloldottuk és 540 nm-nél mértük az abszorbanciát. Az eredmények az I. táblázatban láthatók.
I. táblázat
MTT vizsgálat
Frakció n= M X1n IC50 μg/ml IC50 μπι
2 976 >2 >24
3 1344 >2 >14
4 1712 >2 >11.6
5 2080 1.8 0.86
6 2448 0.88 0.35
7 2816 0.72 0.25
8 3184 0.7 0.21
9 3552 0.7 0.19
10-13 >3920 1.7 = 0.42
polidiszperz 2448 1.1 = 0.44
2. példa: Az oligomerek sejt-gyógyító és HIV-1 fertőzés gátló képessége JM sejtek és HIV-1 GB8 törzs esetén
Az (I) általános képletű polikarbamid monodiszperz oligomerek vírusellenes aktivitását egy standard syncytia vizsgálattal [Cardin és társai, Trans. Assoc. Amer. Phys. C, 101-109 (1989) és Cardin és társai, J. Bioi. Chem. 266, 13355-13363 (1981)] hatá49 roztuk meg. JM sejteket 37°C-on különböző koncentrációkban ^g/ml) különböző vegyületekkel kezeltünk, illetve kezeletlenül hagytunk.
A sejteket RPMI közegben HIV-1 (GB8) törzzsel fertőztük, 2 órán át, szobahőmérsékleten. Ezt követően a sejteket kétszer átmostuk RPMI közegben és frakcionált oligomereket tartalmazó friss közegben újra szuszpendáltuk, mielőtt szétosztottuk volna őket a *
kettős mélyedésekbe és 37°C-on inkubáltuk a lemezt. 3 nap után kiértékeltük a syncytiumokat. Az eredmények a II. táblázatban láthatók.
II. táblázat
Syncytia vizsgálat
Frakció IC50 IC50
n= /xg/ml μπι
2 9 9.2
3 7.8 5.8
4 1.9 1.1
5 0.35 0.17
6 0.25 0.10
7 0.15 0.05
8 0.22 0.07
9 0.14 0.04
10-13 0.36 0.09
polidiszperz 0.18 0.07
/
- 50 ·· · · ♦ · * · ·-· ·· • · · ·««·«« • ·· · ··· ·· ·· • « · « · · ···*··· ·· ·· ··
A 9. ábrán különböző oligomer frakciók IC^q vírusellenes koncentrációinak hisztogramja látható. A vírus ellenes hatás a növekvő oligomer lánchosszal növekszik n = 9 értékig. Az n = 10-13 értékű polidiszperz frakciók és keverékek anti-HIV 1 hatása közelítőleg egyenlő, de mindkét frakció kevésbé hatásos, mint az n = 6 - n = 9 monodiszperz oligomer frakciók bármelyike.
3. példa: az (I) általános képletű szűk molekulatömegelosz- lású polidiszperz polikarbamidok hatása a HSV-2 replikációra
Verő sejteket szaporítottunk egy 24 mélyedéses szövetkultúra lemezen. A sejteket HSV-2 vírussal fertőztük 50 pfu/mélyedés többszörös fertőzéssel. A fertőzést adott esetben különböző koncentrációjú olyan (I) vegyület jelenlétében hajtottuk végre, amely (I) vegyületben R = 4-metil-fenilcsoport; R2 = hidrogénatom, S = (a') csoport és n = az I. táblázatban megadott A vegyület neve: BPDS/P/T, poli{imino[2,2'-diszulfο(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]imino-karbonil), alfa-{[(4-metil-fenil)-amino]-karbonil]-ómega-[(4-metil-fenil)-amino]. 2 órán át, szobahőmérsékleten végrehajtott abszorpció után az inokulomot eltávolítottuk és a sejteket a megfelelő koncentrációjú vegyületet tartalmazó agaróz jelenlétében inkubáltuk. 2 órán át 37°C-on való inkubálás után a sejteket fixáltuk és metilénkékkel megfestettük. A plakkokat megszámoltuk és minden vegyületkoncentrációra kiszámítottuk a %-os gátlást. Az IC5Q értékeket lineáris regressziós analízissel számítottuk ki, az eredmények a III. táblázatban láthatók.
·« ···· ·« ♦»»· • · 9 · «« * ·· « »·« ··· ···· « · · · · » ····««· ·· ·« « ·
III. táblázat
II Herpex Simplex
Frakció IC50 n= >10 <10 <10
5<10
6<1
7<1
8<1 <1
10-13 <1 • · * · · • · · • · • · · • · · «

Claims (3)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Az alábbi szűk molekulatömegeloszlású poli- vagy monodiszperz, vízoldható oligomerek, melyek polidiszperzitási aránya 1.0-1.3 közötti:
    A) (I) általános képletű polikarbamidok, ahol
    R jelentése hidrogénatom, 1-20 szénatomos alkilcsoport, adott esetben 1-2 R1 csoporttal, és legfeljebb 3 alábbi szubsztituenssel szubsztituált fenilcsoport, amely szubsztituensek egymástól függetlenül az alábbiak lehetnek; klór- vagy brómatom, vagy 1-20 szénatomos alkilcsoport;
    R1 jelentése -SO3R2, -CO2R2, -PO2(R2)2, vagy -OPO3R2 csoport;
    R2 jelentése hidrogénatom vagy valamilyen gyógyászatilag elfogadható kation;
    m jelentése egész szám, melynek értéke 0 vagy 1, azzal a feltétellel, hogy ha m = 0, R jelentése hidrogénatom;
    X jelentése (a), (b) , (c) , (d) , (e) , (f) , (g) , (h) , (i) , (j), (k) vagy (1) általános képletű csoport;
    Y jelentése -C09-, -C=C, -N=N-, -C-N-, -N=N- vagy -C=N-N=CII I I 11
    Ο H 0 R R csoport;
    n jelentése egész szám, melynek értéke = 3-15; és
    R3 jelentése -R vagy -X-NH2 csoport, ahol R és X jelentése a fenti;
    B) (II) általános képletű polikarbonátok, ahol
    X és n jelentése az előzőekben az (I) képletnél megadott;
    • · t·· *· ·· * · ·
    X1 jelentése HO-X- csoport, ahol X jelentése a fenti vagy 1-20 szénatomos alkilcsoport, vagy adott esetben 1-2 R1 csoporttal és legfeljebb 3 alábbi szubsztituenssel szubsztituált fenilcsoport, amely szubsztituensek egymástól függetlenül a következők lehetnek; klór- vagy brómatom vagy 1-20 szénatomos t
    alkilcsoport;
    és
    X2 jelentése hidrogénatom vagy -CO2X1 csoport, ahol X1 jelentése a fenti;
    C) (III) általános képletű poliészterek, ahol
    X és n jelentése az előzőekben az (I) képletnél megadott;
    R4 jelentése az (I) általános képletnél megadott jelentésű -R2 csoport;
    • · • · ··
    R5 jelentése R4-O-C-X3-C- csoport, ahol R4 jelentése a (III) általános képletnél megadott vagy R2 általános képletű csoport, ahol R2 az (I) általános képletnél megadott jelentésű;
    X3 jelentése (m) , (n) , (e) , (d) , (o) , (p) , (h) , (q) , (r) , (s) , (t) csoport, ahol R4 és Y jelentése az (I) általános képletnél megadott; vagy
    D) (IV) általános képletű poliamidok, ahol
    X és n jelentése az előzőekben az (I) képletnél megadott;
    X3 jelentése az előzőekben a (III) képletnél megadott;
    R6 jelentése H2N-X-NH-, R2-O-, RNH- vagy R-C(Ο)-NH-X-NH általános képletű csoport, ahol R, R és X jelentése az (I) általános képletnél megadott;
    «« *»·· ·· ·· ·· • · 4 * * · · · · • «4« 4 44 ·· 44 • 4 · · · · ···· 444 *4 44 44
    - 54 0 0 0 0 0
    7 2 3 11 3
    R' jelentese hidrogénatom; RZO-C-XJ-C-; R-C- vagy RNH-C-XJ-Ccsoport) ahol R és R2 jelentése az előzőekben az (I) képletnél megadott.
    2. Az 1. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 5-10.
    3. A 2. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 6-9.
    4. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű polikar- bamid oligomer, ahol n = 3-15; és X jelentése (a'), (b'), (c'), (X), (f’), (ν), (g'), (h') vagy (j') csoport és R2 jelentése az 1. igénypontban megadott.
    5. A 4. igénypont szerinti StDS/P/T oligomer, kémiai nevén poli[imino(3-szulfο-1,4-fenilén)-1,2-etenidil-(2-szulfο-1,4-fenilén)imino-karbonil], alfa[(4-metil-fenil)amino-karbo- nil]-ómega-(4-metil-fenil)-amino, amely olyan 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol R és R3 jelentése
    4-metil-fenilcsoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (j') csoport, n jelentése az 1. igénypont az (I) általános képletnél megadott.
    6. A 4. igénypont szerinti PDS/P/T oligomer, kémiai nevén poli[imino(2,5-diszulfo-l,4-fenilén)iminokarbonil], alfa-{[(4-metil-fenil)amino]karbonil}ómega-[(4-metil-fenil)amino]-, amely olyan 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol R és R3 jelentése 4-metil-fenilcsoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (a') általános képletű csoport és n jelentése az 1. igénypontban az (I) általános képletnél megadott.
    7. A 4. igénypont szerinti oligomer, ahol X jelentése (h') általános képletű csoport, R jelentese az 1. igénypontban megadott.
    •··· ···
    8. A 7. igénypont szerinti BPDS/P/T oligomer, kémiai nevén poli{imino[2,2'-diszulfo-(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]imino-karbonil}, alfa{[(4-metil-fenil)amino]karbonil)ómega-[(4-metil-fenil) -amino]-, amely olyan 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése 4-metil-fenilcsoport, R jelentése hidrogénatom, X jelentése (h') csoport, n jelentése az 1. igénypontban az (I) általános képletnél megadott.
    9. A 8. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 5.
    10. A 8. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 6. 11. A 8. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 7. 12. A 8. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 8. 13. A 8. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 9 . 14. A 8. igénypont szerinti oligomer, ahol n = 10.
    15. Valamely 4. igénypont szerinti oligomer, ahol R jelentése 1-2 R1 csoporttal és legfeljebb 3 brómatommal szubsztituált fenilcsoport.
    16. Valamely 1. igénypont szerinti (II) általános képletű polikarbamát oligomer, ahol n = 3-15; X jelentése az 1. igénypontban megadott.
    17. A 16. igénypont szerinti HBDS/P/C oligomer, kémiai nevén poli[oxi(2,5-diszulfo-1,4-fenilén)oxikarbonil], alfa[(4-metil-fenoxi)-karbonil]-ómega-(4-metil-fenoxi)-, amely olyan 1. igénypont szerinti (II) általános képletű vegyületet, ahol X1 jelentése 4-metil-fenilcsoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (a') csoport, X2 jelentése (y) csoport, n jelentése az 1. igénypontban az (I) általános képletnél megadott.
    18. A 16. igénypont szerinti HBPDS/P/C oligomer, kémiai nevén poli{oxi[2,2'-diszulfo(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]oxi-karbo- <·»··«««« • <·· ·♦· ·· ·« • · · » a * • *η· *·» ·· ·· «·
    - 56 rJ nil], alfa-[(4-metil-fenoxi)-karbonil]-ómega-(4-metil-fenoxi-, amely olyan 1. igénypont szerinti (II) általános képletű vegyület, ahol X-*- jelentése 4-metil-fenilcsoport, R2 jelentése hidrogénatom, X jelentése (a') csoport, Y jelentése (y) csoport, n jelentése az 1. igénypontban az (I) képletnél megadott.
    19. Valamely 1. igénypont szerinti (III) általános képletű poliészter oligomer, ahol R4 és R5 jelentése hidrogénatom; n =
    3-15; R2 jelentése az 1. igénypontban megadott; X3 jelentése (m), (n), (v) vagy (x) csoport és X jelentése (a'), (c'), (x), (b'), (n) , (f) , (g'), (h') vagy (j ') csoport.
    20. A 19. igénypont szerinti HBPDS/TPC oligomer, kémiai nevén poli{oxi[2,2'-diszulfo(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]-oxi-karbonil-1,4-fenilén-karbonil]-, amely olyan 1. igénypont szerinti (III) általános képletű vegyület, ahol R4 és R3 jelentése hidrogénatom, X3 jelentése p-fenilén-csoport, X jelentése (a') csoport, n jelentése az 1. igénypontban megadott.
    21. A 19. igénypont szerinti HBDS/TPC oligomer, kémiai nevén poli[oxi(2,5-diszulfo-1,4-fenilén)-oxi-karbonil-1,4-fenilén-karbonil]-, amely olyan 1. igénypont szerinti (III) általános képletű vegyület, ahol R4 és R5 jelentése hidrogénatom, X3 jelentése p-fenilén-csoport, X jelentése (a') csoport, ahol R2 és n jelentése az 1. igénypontban megadott.
    22. Valamely 1. igénypont szerinti általános képletű poli- amid oligomer, ahol n = 3-15, R2 jelentése az 1. igénypontban megadott, X3 jelentése (m), (n), (v) vagy (x) általános képletű csoport és X jelentése (a'), (b'), (c'), (v) , (x) , (f'), (g'), (h') vagy (j’) csoport.
    V ·
    23. A 22. igénypont szerinti BPDS/TPC/MBC oligomer, kémiai nevén poli[imino[2,2'-diszulfo(1,1'-bifenil)-4,4'-diil]imino-karbonil-1,4-fenilén-karbonil}, alfa-{[(4-metil-fenil)-amino]karbonil}-ómega-[(4-metil-fenil)amino-, amely olyan 1. igénypont szerinti (IV) általános képletű vegyület, ahol jelentése
    R-C(0)-NH-X-NH- csoport, R jelentése 4-metil-fenilcsoport,
    R2 jelentése hidrogénatom, R7 jelentése 4-metil-benzoilcsoport, X3 jelentése p-feniléncsoport, X jelentése (h*) csoport, n jelentése az 1. igénypont szerinti.
    24. Az 1., 4., 8. vagy 15. igénypont szerinti szűk molekulatömegeloszlású polidiszperz oligomer, melynek polidiszperzitási aránya 1.0-1.2 közötti.
    25. Az 1., 4., 8. vagy 15. igénypont szerinti monodiszperz oligomer, melynek polidiszperzitási aránya 1.0-1.1 közötti.
    26. A 8. vagy 15. igénypont szerinti monodiszperz oligomer, melynek polidiszperzitási aránya 1.05 közötti.
    27. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy valamely 1-
    26. igénypont szerinti szűk moltömegeloszlású poli- vagy monodiszperz oligomert tartalmaz, valamilyen gyógyászatilag alkalmazható hordozó mellett.
    28. Diagnosztizáló és/vagy kezelési módszer betegségi állapotban lévő melegvérű állatok kezelésére, azzal jellemezve, hogy a melegvérű állatnak a 27. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény hatásos mennyiségét adjuk be.
    29. A 28. igénypont szerinti kezelési módszer, azzal jelle- mezve, hogy a betegség AIDS és/vagy ARC vagy HSV.
    ·· ···» ·· 4»«· • · » ···*·* • «·· ··· ··99
    9 9 9 9 ·9
    9999 999 ·· ····
    30. Eljárás vírusfertőzés kezelésére beteg páciens esetén, azzal jellemezve, hogy a páciensnek a 27. igénypont szerinti készítmény hatásos mennyiségét adjuk be.
    31. A 30. igénypont szerinti készítmény hatásos mennyiségének profilaktikus alkalmazása.
    32. Eljárás az 1. igénypont szerinti szűk molekulatömeg- eloszlású poli- vagy monodiszperz anionos oligomerek előállítására, azzal jelelmezve, hogy
    1) a megfelelő nyers polidiszperz anionos oligomer keveréket gélfiltrációval, szelektív kicsapással, membrán permeációval vagy fordított fázisú kromatográfiával a kívánt 1.0-1.3 közötti polidiszperzitási arányú szűk molekulatömegeloszlású anionos oligomer keverékre szűkítjük; és/vagy
  2. 2) a monodiszperz oligomert gél-elektroforézissel vagy fordított fázisú kromatográfiával izoláljuk; és
  3. 3) kívánt esetben az 1. vagy 2. lépésben kapott szűk molekulatömegeloszlású poli- vagy monodiszperz anionos oligomert a kívánt gyógyászatilag alkalmazható sóvá alakítjuk.
    33. A 32. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy oligomerként (I) általános képletű polikarbamidot alkalmazunk és n egy 5-10 értékű monodiszperz frakciót jelent.
    34. A 33. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy oligomerként (I) általános képletű polikarbamidot alkalmazunk és n egy 6-9 értékű monodiszperz frakciót jelent.
    35. A 32. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az anionos oligomert ammónium, nátrium vagy kálium sóvá alakít juk.
HU9402058A 1992-01-09 1993-01-07 Narrow poly-and mono dispersed anionic oligomers, and pharmaceutical compositions containing them HUT70831A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/818,753 US5424063A (en) 1992-01-09 1992-01-09 Narrow poly- and mono-dispersed anionic oligomers, and their uses, formulations and process

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9402058D0 HU9402058D0 (en) 1994-09-28
HUT70831A true HUT70831A (en) 1995-11-28

Family

ID=25226322

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9402058A HUT70831A (en) 1992-01-09 1993-01-07 Narrow poly-and mono dispersed anionic oligomers, and pharmaceutical compositions containing them

Country Status (24)

Country Link
US (4) US5424063A (hu)
EP (1) EP0620833B1 (hu)
JP (1) JPH07509446A (hu)
KR (1) KR100255282B1 (hu)
CN (1) CN1049670C (hu)
AP (1) AP381A (hu)
AT (1) ATE159961T1 (hu)
AU (1) AU665056B2 (hu)
CA (1) CA2127356A1 (hu)
CZ (1) CZ282312B6 (hu)
DE (1) DE69315058T2 (hu)
DK (1) DK0620833T3 (hu)
ES (1) ES2110594T3 (hu)
FI (1) FI108459B (hu)
GR (1) GR3026019T3 (hu)
HU (1) HUT70831A (hu)
IL (1) IL104354A (hu)
MX (1) MX9300081A (hu)
NO (1) NO307610B1 (hu)
NZ (1) NZ246791A (hu)
OA (1) OA09962A (hu)
RU (1) RU2160746C2 (hu)
WO (1) WO1993014146A1 (hu)
ZA (1) ZA93136B (hu)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670144A (en) * 1990-07-09 1997-09-23 Merrell Pharmaceuticals Inc. Anti-herpes virus and cytomegalovirus polyester oligomers
US5276182A (en) * 1990-07-09 1994-01-04 The Dow Chemical Company Process for preparing polyurea oligomers
EP0498095B1 (en) * 1991-02-05 1995-01-04 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Sulfonic stilbene derivatives in the treatment of viral diseases
US5424063A (en) * 1992-01-09 1995-06-13 The Dow Chemical Company Narrow poly- and mono-dispersed anionic oligomers, and their uses, formulations and process
WO1994004165A1 (en) * 1992-08-19 1994-03-03 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Antiangiogenic oligomers
US5614559A (en) * 1993-11-23 1997-03-25 Procept Inc. Compound for inhibiting HIV infectivity
IL112174A (en) * 1994-01-03 1999-05-09 Merrell Dow Pharma Oligomers of polythioureas pharmaceutical compositions containing them and a process for their preparation
DE19504913A1 (de) * 1995-02-15 1996-08-22 Basf Ag Neue chiral neumatische Polyester
WO1996025157A1 (en) * 1995-02-17 1996-08-22 Smithkline Beecham Corporation Il-8 receptor antagonists
US5780483A (en) * 1995-02-17 1998-07-14 Smithkline Beecham Corporation IL-8 receptor antagonists
US6005008A (en) * 1996-02-16 1999-12-21 Smithkline Beecham Corporation IL-8 receptor antagonists
US5747639A (en) * 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
US6262113B1 (en) 1996-03-20 2001-07-17 Smithkline Beecham Corporation IL-8 receptor antagonists
US6211373B1 (en) 1996-03-20 2001-04-03 Smithkline Beecham Corporation Phenyl urea antagonists of the IL-8 receptor
US6271261B1 (en) 1996-06-27 2001-08-07 Smithkline Beecham Corporation IL-8 receptor antagonists
WO1997049680A1 (en) * 1996-06-27 1997-12-31 Smithkline Beecham Corporation Il-8 receptor antagonists
US6126919A (en) * 1997-02-07 2000-10-03 3M Innovative Properties Company Biocompatible compounds for pharmaceutical drug delivery systems
US6060235A (en) 1997-09-19 2000-05-09 Geltex Pharmaceuticals, Inc. Antiviral polymers comprising acid functional groups and hydrophobic groups
US6290946B1 (en) 1999-05-13 2001-09-18 Geltex Pharmaceuticals, Inc. Anionic polymers as toxin binders and antibacterial agents
US6270755B1 (en) 1999-05-13 2001-08-07 Geltex Pharmaceuticals, Inc. Anionic polymers as toxin binders
EP1214293A1 (en) 1999-09-08 2002-06-19 Guilford Pharmaceuticals Inc. Non-peptidic cyclophilin binding compounds and their use
CA2314494A1 (en) 2000-05-02 2001-11-02 Geltex Pharmaceuticals, Inc. Anionic polymers as species specific antibacterial agents
JP2004532187A (ja) 2001-01-25 2004-10-21 ギルフォード ファーマシュウティカルズ インコーポレイテッド 三置換カルボサイクリックサイクロフィリン結合化合物とその用途
JP4170214B2 (ja) 2001-03-08 2008-10-22 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルベニア 抗感染用剤としての表面両親媒性ポリマー
EP2471526A3 (en) * 2003-03-17 2012-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Facially amphiphillic polymers and oligomers and uses thereof
EP2468711A3 (en) 2004-01-23 2012-09-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Facially amphiphilic polyaryl and polarylalkynyl polymers and oligomers and uses thereof
US10017462B1 (en) * 2018-03-05 2018-07-10 The Florida International University Board Of Trustees Antimicrobial poly(guanylurea)s

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB781479A (en) * 1953-08-27 1957-08-21 Ciba Ltd New polyureas and process for making them
US2833744A (en) * 1953-08-27 1958-05-06 Ciba Pharm Prod Inc Polyureas and process of preparing same
DE1067212B (de) * 1956-06-04 1959-10-15 Farbenfabriken Bayer Aktiengesellschaft, Leverkusen-Bayerwerk Verfahren zur Herstellung von löslichen Polyharnstoffen
US3164571A (en) * 1959-12-31 1965-01-05 Union Carbide Corp Polyureas from n-phenyl, phenylene biscarbamyl halide and a diamine
BE660945A (hu) * 1964-03-12 1965-07-01
US3528949A (en) * 1968-05-07 1970-09-15 Atlas Chem Ind Polymers from ureas and dihalides
US4312855A (en) * 1970-11-16 1982-01-26 Colgate-Palmolive Company Compositions containing aminopolyureylene resin
US3833744A (en) * 1972-08-24 1974-09-03 Gen Mills Inc Texturizing materials for foods
DE2516305A1 (de) * 1975-04-15 1976-10-28 Dynamit Nobel Ag Wasserdispergierbare esterharze
US4107202A (en) * 1977-03-28 1978-08-15 American Cyanamid Company Substituted 4,4'-biphenylylene bis(2-thioureylene)di-naphthalenetrisulfonic acids and salts thereof
JPS56147822A (en) * 1980-04-17 1981-11-17 Dainippon Ink & Chem Inc Preparation of novel water-soluble or water-dispersible polyester resin
US4328244A (en) * 1980-05-21 1982-05-04 The Dow Chemical Company Novel (((substituted-phenyl)methyl)amino)benzenesulfonic acids and pharmaceutically-acceptable salts thereof
US4349568A (en) * 1980-06-12 1982-09-14 The Dow Chemical Company Sulfur-substituted diphenyl ethers having antiviral activity
JPS5719660A (en) * 1980-07-09 1982-02-01 Fuji Photo Film Co Ltd Microcapsule for immune reaction
JPS5719662A (en) * 1980-07-09 1982-02-01 Fuji Photo Film Co Ltd Preparation of microcapsule reagent for immune reaction
DE3026575A1 (de) * 1980-07-12 1982-02-04 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Antitumoral wirkende mittel
DE3345902A1 (de) * 1983-12-20 1985-08-29 Cassella Ag, 6000 Frankfurt In wasser loesliche polymischester, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US4824916A (en) * 1985-03-15 1989-04-25 The Dow Chemical Company Water-insoluble, crosslinked, sulfonated aromatic polyamide
US4604404A (en) * 1985-04-03 1986-08-05 A. H. Robins Company, Inc. Antiviral sulfonated naphthalene formaldehyde condensation polymers
US4783446A (en) * 1985-11-22 1988-11-08 Neushul Mariculture Incorporated Method for the treatment of AIDS virus and other retroviruses
US4895660A (en) * 1986-07-14 1990-01-23 The Dow Chemical Company Water-soluble aromatic polyamides and polyureas
DE3626309A1 (de) * 1986-08-02 1988-02-18 Stockhausen Chem Fab Gmbh Antivirusmittel
DE3744119A1 (de) * 1987-12-24 1989-07-06 Basf Ag Verwendung von polysulfatierten heparinen
US5670144A (en) * 1990-07-09 1997-09-23 Merrell Pharmaceuticals Inc. Anti-herpes virus and cytomegalovirus polyester oligomers
US5276182A (en) * 1990-07-09 1994-01-04 The Dow Chemical Company Process for preparing polyurea oligomers
FR2669535A1 (fr) * 1990-11-26 1992-05-29 Medgenix Group Sa Utilisation a titre de medicament de macromolecules polysulfonees.
EP0498095B1 (en) * 1991-02-05 1995-01-04 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Sulfonic stilbene derivatives in the treatment of viral diseases
US5424063A (en) * 1992-01-09 1995-06-13 The Dow Chemical Company Narrow poly- and mono-dispersed anionic oligomers, and their uses, formulations and process
KR100275843B1 (ko) * 1992-02-20 2000-12-15 슈테펜엘.네스비트 설폰산 유도체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
US5460807A (en) * 1992-08-19 1995-10-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Antiproliferative oligomers

Also Published As

Publication number Publication date
US5424063A (en) 1995-06-13
FI943268A (fi) 1994-07-08
AP381A (en) 1995-04-19
US5512177A (en) 1996-04-30
NO942574D0 (no) 1994-07-08
DK0620833T3 (da) 1997-12-22
RU94038426A (ru) 1996-07-20
WO1993014146A1 (en) 1993-07-22
OA09962A (en) 1995-12-11
US5986044A (en) 1999-11-16
DE69315058T2 (de) 1998-06-10
IL104354A0 (en) 1993-05-13
JPH07509446A (ja) 1995-10-19
ZA93136B (en) 1994-07-08
CZ165594A3 (en) 1995-03-15
AU3436093A (en) 1993-08-03
EP0620833B1 (en) 1997-11-05
ATE159961T1 (de) 1997-11-15
AU665056B2 (en) 1995-12-14
CN1074437A (zh) 1993-07-21
CZ282312B6 (cs) 1997-06-11
GR3026019T3 (en) 1998-04-30
FI108459B (fi) 2002-01-31
KR100255282B1 (ko) 2000-05-01
NZ246791A (en) 1996-08-27
EP0620833A1 (en) 1994-10-26
HU9402058D0 (en) 1994-09-28
CA2127356A1 (en) 1993-07-22
MX9300081A (es) 1993-12-01
IL104354A (en) 1995-11-27
CN1049670C (zh) 2000-02-23
ES2110594T3 (es) 1998-02-16
FI943268A0 (fi) 1994-07-08
AP9300482A0 (en) 1993-01-31
RU2160746C2 (ru) 2000-12-20
NO307610B1 (no) 2000-05-02
US6013251A (en) 2000-01-11
DE69315058D1 (de) 1997-12-11
NO942574L (no) 1994-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT70831A (en) Narrow poly-and mono dispersed anionic oligomers, and pharmaceutical compositions containing them
JP3442072B2 (ja) 抗ヘルベスウイルス及び抗サイトメガロウイルス用のオリゴマー類
RU2108345C1 (ru) Водорастворимый, жесткоцепной олигоэфир, способ его получения и композиция на его основе
HUT74694A (en) Polythiourea derivatives pharmaceutical formulations containing them and process for producing them
JPH09508102A (ja) ポリチオ尿素を含む薬剤処方剤及びその使用方法