HUP0202794A2 - Oligonucleotides for inhibiting the expression of human eg5 - Google Patents
Oligonucleotides for inhibiting the expression of human eg5 Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0202794A2 HUP0202794A2 HU0202794A HUP0202794A HUP0202794A2 HU P0202794 A2 HUP0202794 A2 HU P0202794A2 HU 0202794 A HU0202794 A HU 0202794A HU P0202794 A HUP0202794 A HU P0202794A HU P0202794 A2 HUP0202794 A2 HU P0202794A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- sequence
- derivative
- antisense oligonucleotide
- modified
- Prior art date
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 206
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims description 24
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 53
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 41
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 59
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims description 34
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 32
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 31
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 27
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 26
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- SIIZPVYVXNXXQG-KGXOGWRBSA-N [(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-[[(3s,4r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-3-hydroxyoxolan-2-yl]methyl [(2r,4r,5r)-2-(6-aminopurin-9-yl)-4-hydroxy-5-(phosphonooxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OC2[C@@H](O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@H]2O)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)[C@@H](O)[C@H]1OP(O)(=O)OCC([C@@H](O)[C@H]1O)OC1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 SIIZPVYVXNXXQG-KGXOGWRBSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002718 pyrimidine nucleoside Substances 0.000 claims description 8
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 7
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 20
- -1 mRNA Chemical class 0.000 description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 10
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 8
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical group [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 6
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 5
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 5
- STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N (3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolane-2,4-diol Chemical group CO[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N 0.000 description 4
- GIIGHSIIKVOWKZ-UHFFFAOYSA-N 2h-triazolo[4,5-d]pyrimidine Chemical compound N1=CN=CC2=NNN=C21 GIIGHSIIKVOWKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydrouracil Chemical compound O=C1CCNC(=O)N1 OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JDBGXEHEIRGOBU-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethyluracil Chemical compound OCC1=CNC(=O)NC1=O JDBGXEHEIRGOBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PNWOYKVCNDZOLS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-chloro-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1Cl PNWOYKVCNDZOLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 3
- KQLDDLUWUFBQHP-UHFFFAOYSA-N Cordycepin Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OCC(CO)C1O KQLDDLUWUFBQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical group P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- OFEZSBMBBKLLBJ-BAJZRUMYSA-N cordycepin Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)C[C@H]1O OFEZSBMBBKLLBJ-BAJZRUMYSA-N 0.000 description 3
- OFEZSBMBBKLLBJ-UHFFFAOYSA-N cordycepine Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)CC1O OFEZSBMBBKLLBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- 230000020347 spindle assembly Effects 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical compound NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010000834 2-5A-dependent ribonuclease Proteins 0.000 description 2
- 102100027962 2-5A-dependent ribonuclease Human genes 0.000 description 2
- CJHGCXGTUHBMMH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethyl dihydrogen phosphate Chemical compound OCCOCCOCCOP(O)(O)=O CJHGCXGTUHBMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BISHACNKZIBDFM-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound NC1=CNC(=O)NC1=O BISHACNKZIBDFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZFTBZKVVGZNMJR-UHFFFAOYSA-N 5-chlorouracil Chemical compound ClC1=CNC(=O)NC1=O ZFTBZKVVGZNMJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QFVKLKDEXOWFSL-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-bromo-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1Br QFVKLKDEXOWFSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241001432959 Chernes Species 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- RSPURTUNRHNVGF-IOSLPCCCSA-N N(2),N(2)-dimethylguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N(C)C)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O RSPURTUNRHNVGF-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 2
- XKFCKNDXVMFENB-BAJZRUMYSA-N [(2s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-hydroxyoxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)C[C@H]1O XKFCKNDXVMFENB-BAJZRUMYSA-N 0.000 description 2
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000003793 centrosome Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 2
- IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol Chemical group OCCOCCOCCOCCOCCOCCO IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTMCGHPIYOSATH-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol monophosphate Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCOCCOP(O)(O)=O PTMCGHPIYOSATH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000022766 lymph node neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PSHHQIGKVLIVBD-UHFFFAOYSA-N purine-2,4-diamine Chemical compound C1=NC(N)=NC2(N)N=CN=C21 PSHHQIGKVLIVBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000006134 tongue cancer Diseases 0.000 description 2
- ZDSRFXVZVHSYMA-CMOCDZPBSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]pentanedioic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZDSRFXVZVHSYMA-CMOCDZPBSA-N 0.000 description 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006569 (C5-C6) heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- JUDOLRSMWHVKGX-UHFFFAOYSA-N 1,1-dioxo-1$l^{6},2-benzodithiol-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)SS(=O)(=O)C2=C1 JUDOLRSMWHVKGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 1
- IFYBJVSWSICROI-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethyl dihydrogen phosphate Chemical compound OCCOCCOCCOCCOP(O)(O)=O IFYBJVSWSICROI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-TEMPO Chemical compound CC1(C)CC(O)CC(C)(C)N1[O] UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N Deoxycytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1OC(CO)C(O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001022780 Homo sapiens Myosin light chain kinase, smooth muscle Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 1
- 102000010638 Kinesin Human genes 0.000 description 1
- 108010063296 Kinesin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251131 Sphyrna Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-MBMOQRBOSA-N alpha-D-arabinofuranose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-MBMOQRBOSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000019568 aromas Nutrition 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N beta-D-ribose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-KKQCNMDGSA-N beta-D-xylofuranose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-KKQCNMDGSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940017687 beta-d-ribose Drugs 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- SPTYHKZRPFATHJ-HYZXJONISA-N dT6 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CO)[C@@H](O)C1 SPTYHKZRPFATHJ-HYZXJONISA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 102000045549 human MYLK Human genes 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 1
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- CPQCSJYYDADLCZ-UHFFFAOYSA-N n-methylhydroxylamine Chemical compound CNO CPQCSJYYDADLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000005987 sulfurization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010068794 tyrosyl-tyrosyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/11—Compounds covalently bound to a solid support
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/318—Chemical structure of the backbone where the PO2 is completely replaced, e.g. MMI or formacetal
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát képezi egy oligonukleotid vagy származéka, amelyegy-öt kódoló szekvencia egy részének felel meg. A találmány szerintioligonukleotid a természetes DNS-ből felépülő oligonukleotidhoz képestkülönböző módosításokat tartalmazhat. A találmány tárgyát képezitovábbá a találmány szerinti oligonukleotidok előállítására szolgálóeljárás és a találmány szerinti oligonukleotidok alkalmazása egyexpressziójának gátlására. A találmány tárgyát képezi továbbá azoligonukleotidokat tartalmazó gyógyászati készítmény. A találmányszerinti oligonukleotidok egy expressziófának gátlására és egyexpressziójával kapcsolatos betegségek kezelésére alkalmazhatók. Ó
Description
PO
Képviselő :
Danubia
Szabadalmi és Védjegy Iroda Kft.
Budapest
Oligonukleotidok humán eg5 expressziójának gátlására
A találmány tárgyát képezi oligonukleotid vagy származéka, amelynek szekvenciája humán eg5-öt vagy ennek egy mutáns formáját kódoló nukleinsavszekvencia egy meghatározott részének felel meg, az oligonukleotidokat tartalmazó gyógyászati készítmény, valamint az oligonukleotid előállítására szolgáló eljárás és az oligonukleotid alkalmazásai .
A találmány szerinti oligonukleotidok előnyösen alkalmazhatók égő expressziójának gátlására és eg5 expressziójával kapcsolatos betegségek kezelésére.
A mitózis során egy mikrotubulusokból álló orsószerű képlet segíti a megkettőződött kromoszómákat a leánysejtekbe egyformán szétosztani. A kinezinnel rokon motoros fehérjék képezik az orsó kialakításához és a kromoszómák szétosztásához szükséges erő egyik részét. A bipoláris, mitotikus orsó kialakítása sok, különböző, motoros fehérje aktivitását igényli. Egy humán eredetű, kinezinnel rokon,
Aktaszámunk: 95990-9449/SG
- 2 motoros fehérje a humán eg5, amely a mitotikus centroszómával lép kölcsönhatásba, és amelyről kimutatták, hogy a bipoláris orsó kialakításához alapvetően fontos [Blangy és mtsai., Cell 83, 1159 (1995)]. Specifikus, humán eg5-ellenanyagok mikroinjekciója meggátolja a centroszómavándorlást, és a sejteket a mitózisban megállítja.
A bipoláris orsó kialakulásának meggátlására egy másik lehetőség az eg5 expressziójának gátlása. Az eg5expresszió specifikus gátlására agy lehetőség olyan antiszensz oligonukleotidok alkalmazása, amelyek adott esetben a tulajdonságaik javítása érdekében módosíthatók [Uhlmann, E. és Peyman, A., Chemical Reviews 90, 543 (1990); Agrawal, S., TIBTECH 376 (1996)]. Az antiszensz oligonukleotidok feltehetőleg az mRNS specifikus szekvenciáihoz kötődnek, amely az mRNS lebomlásához és/vagy a fehérjeszintézis gátlásához vezet.
A találmány tárgyát képezi egy oligonukleotid vagy származéka, amely eg5-öt, előnyösen humán eg5-öt vagy egy kórokozó, pl. Plasmodium falciparum (malária) eg5-jét kódoló szekvencia egy részének felel meg. Előnyösen az oligonukleotid az eg5-szekvencia 8-100 nukleotidjának, előnyösebben 8-20 nukleotidjának felel meg. Az oligonukleotid vagy a származék az előzőekben ismertetett szekvenciához kötődik, és megakadályozza az eg5-fehérje kialakulását. A humán eg5-szekvenciát nyilvánosságra hozták [Blangy és mtsai., Cell 83, 1159 (1995)]. A 20. azonosítószámú szekvencia a humán eg5-öt kódoló szekvencia egy példája. A 21.
azonosítószámú szekvencia Plasmodium falciparum eg5 szekvenciájára egy példa.
Az oligonukleotid előnyösen tartalmaz olyan szekvenciát, amely humán eg5-öt vagy Plasmodium falciparum eg5-jét kódoló nukleinsav egy részének felel meg. A megfelel kifejezésen azt értjük, hogy az oligonukleotid bázisszekvenciája komplementer egy olyan nukleinsav egy részével, amely eg5-öt kódol (pl. gén, cDNS, mRNS) , amely lehetővé teszi, hogy az oligonukleotid az eg5-öt kódoló nukleinsav szensz részével hibridizáljón (ahhoz kötődjön). Ezen az alapon antiszensz oligonukleotidnak nevezzük. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid tehát antiszensz oligonukleotid. A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid ribozim. A ribozim olyan katalitikus nukleinsav, amely mRNS-t hasít. A ribozim előnyösen a kalapácsfej-ribozimok („hammerheadrybozyme) csoportjából választható [Vaish és mtsai., Nucleic Acids Res. 26, 5237 (1998)].
A találmány szerinti oligonukleotid az eg5-mRNS hibridizációra alkalmas részéhez kötődik és gátolja az eg5fehérje képződését. Az eg5 mRNS-éhez történő kötődésre és az expresszió gátlására alkalmas oligonukleotidok például az eg5 transzlációs startszakaszára alakíthatók ki.
Az eg5-öt kódoló nukleinsavszekvencia oligonukleotidnak megfelelő részének hosszúsága 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 vagy több nukleotid, és az oligonukleotid előnyösen az eg5-öt kódoló szekvenciának 12 vagy 19 nukleotid hosszúságban felel meg. A találmány szerinti oligonukleotid 10 (10-mer), 11 (11-mer), 12 (12 — mer) , 13 (13-mer), 14 (14-mer), 15 (15-mer), 16 (16-mer) , 17 (17-mer), 18 (18-mer) vagy 19 (19-mer) nukleotid hosszúságú is lehet.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid 12 vagy 19 nukleotid hosszú, ilyen oligonukleotidok például az 1., 2., 3., 4., 5., 6., 7., 8., 9. azonosítószámú szekvenciák szerinti egyik szekvenciát vagy egy részüket tartalmazhatják, ahol az 1. azonosítószámú szekvencia: 3’-CTTAAGGCAGTA CCGCAGC-5'; 5'-CGACGCCATGACGGAATTC-3' a 2. azonosítószámú szekvencia: 3'-ACCACTC
TACGTCTGGTAA-5’; 5'-AATGGTCTGCATCTCACCA-3' a 3. azonosítószámú szekvencia: 3’-GGCAGTACCG
CAGCGTCGG -5’; 5’-GGCTGCGACGCCATGACGG-3’ a 4. azonosítószámú szekvencia: 3’-CTTAAGGCAGTA-5'; 5'-ATGACGGAATTC-3' az 5. azonosítószámú szekvencia: 3 ’-TAAGGCAGTACC-5 '; 5 ' -CCATGACGGAAT-3 ' a 6. azonosítószámú szekvencia: 3 '-GGCAGTACCGCA-5 '; 5' -ACGCCATGACGG-3' a 7. azonosítószámú szekvencia: 3’-AGTACCGCAGCG-5'; 5'-GCGACGCCATGA-3' a 8. azonosítószámú szekvencia: 3’-CCGCAGCGTCGG-5’; 5'-GGCTGCGACGCC-3' a 9. azonosítószámú szekvencia: 3'-GCAGCGTCGGTT-5’;
5'-TTGGCTGCGACG-3'
Különösen előnyös, ha az oligonukleotidot a tulaj donságainak javítása érdekében módosítjuk, például nukleázokkal szembeni ellenálló képességének javítása érdekében, illetőleg hogy nukleázokkal szemben rezisztenssé tegyük, vagy egy komplementer, eg5-öt kódoló nukleinsavhoz, pl. mRNS-hez történő kötődési affinitásának növelése érdekében, vagy a sejtbe történő felvételének javítása érdekében .
A találmány tárgyát képezi tehát egy oligonukleotid, amelynek szekvenciája egyike az előzőekben ismertetett, jellemző szekvenciáknak, és amely ezenkívül egy természetes DNS-sel összehasonlítva - amely a nukleozidok között foszfodiészterhidakkal összekötött, természetes nukleozid-dezoxiadenozinból (adenin + β-ϋ-2’-dezoxiribóz), dezoxiguanozinból (guanin + β-ϋ-2'-dezoxiribóz) dezoxicitidinből (citozin + β-ϋ-2'-dezoxiribóz) és timidinből (timin + β-ϋ-2'-dezoxiribóz) áll - egy vagy több kémiai módosítást tartalmaz. Az oligonukleotidok egy vagy több, ugyanolyan típusú és/vagy különböző típusú módosítást tartalmazhatnak, minden egyes módosítási típus a másiktól függetlenül választható az oligonukleotidok módosítására ismert típusok közül.
A találmány tárgyát képezik az oligonukleotidok származékai is, például sóik, elsősorban fiziológiailag elfogadható sóik. A sók és a fiziológiailag elfogadható sók ismertetése a következő műben található: Remingtons Pharma ceuticals Science, 1418. oldal, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985). A származékok kifejezést a módosított oligonukleotidokra is alkalmazzuk, amelyek egy vagy több módosítást tartalmaznak (például meghatározott nukleotidhelyzetekben és/vagy meghatározott nukleozidok közötti hidakban, azaz internukleozid-hidakban), az oligonukleotidanalogokra (például poliamid-nukleinsavakra, pns) , a foszfomonoészter-nukleinsavakra (PHONS=PMENS), az oligonukleotid-kimérákra (például egy DNS- és egy PNS-részből allo, vagy egy DNS- és egy PHONS-részből álló oligonukleotidra). a származékok kifejezést az olyan oligonukleotidokra is értjük, amelyek normál vagy természetes eg5 alléljeinek és/vagy mutáns formáinak (mutánsainak) felelnek meg, például humán eg5 alléljei és/vagy mutánsai (Pl. 20. azonosítószámú szekvencia) és Plasmodium falciparum eg5-jének alléljei és/vagy mutánsai (pl. 21. azonosítószámú szekvencia).
Kémiai módosítások példái a szakember számára jól ismertek, és például Uhlmann, E. és Peyman, A., Chemical Reviews 90, 543 (1990) és Synthesis and Properties & Synthesis and Analytical Techniques, Protocols for Oligonucleotides and Analogs, szerk.: Agrawal, s., Hrsg., kiad.: Humana Press, Totowa, USA (1993) és Crooke, S.T., Bennet, F., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 36., 107-129 (1996); Hunziker, J. és Leuman, C., Mod. Synt. Methods 7, 331-417 (1995) munkáiban található ismertetés.
A természetes DNS-sel összehasonlítva például a nukleozidok közötti egyik foszfodiészterhíd, egy β-ϋ-2’dezoxiribóz-egység és/vagy egy természetes nukleozidbázis (adenin, guanin, citozin, timin) módosítható, illetve cse rélhető ki. A találmány szerinti oligonukleotid egy vagy több ilyen módosítást tartalmazhat, ahol minden egyes módosítás egy azonos szekvenciájú, természetes DNS-ből álló oligonukleotiddal összehasonlítva egy meghatározott foszfodiészter-internukleozidhídban és/vagy egy meghatározott D2'-dezoxiribóz-egységben és/vagy egy meghatározott természetes nukleozidbázis-helyzetben található.
A találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amely egy vagy több módosítást tartalmaz, ahol minden egyes módosítás egymástól függetlenül az alábbiak bármelyike:
a) nukleozidok 3’-vége és/vagy 5'-vége közötti foszfodiészterhíd kicserélése módosított internukleozidhídra,
b) nukleozidok 3'-vége és/vagy 5'-vége közötti foszfodiészterhíd kicserélése defoszfohídra,
c) a cukor-foszfát-vázból egy cukor-foszfát-egység kicserélése egy másik egységre,
d) egy β-ϋ-2'-dezoxiribóz-egység kicserélése egy módosított cukoregységre,
e) egy természetes nukleozidbázis kicserélése egy módosított nukleozidbázisra,
f) egy olyan molekulához való kötés, amely az oligonukleotid tulajdonságait befolyásolja,
g) 2'5'-kötést tartalmazó oligoadeniláthoz vagy egy származékához történő kötés, adott esetben alkalmas kapcsolómolekulán (linkeren) keresztül, és
h) egy 3'-3'- és/vagy 5'-5'-inverzió kiépítése az oligonukleotid 3'-végén és/vagy 5'-végén.
Az oligonukleotid kémiai módosításaira konkrét példák a következők:
a) nukleozidok 3'-vége és/vagy 5’-vége közötti foszfodiészterhíd kicserélése egy módosított internukleozid-hídra, ahol a módosított internukleozid-híd például foszforotioát-, foszforoditioát-, NR1R1'-foszforoamidát, borofoszfát-, foszfát- (C1-C21) -O-alkilészter-, foszfát- [ (C6-Ci2) -aril- (C1-C21) -O-alkil] észter-, (Ci-C8) -alkilfoszfonát- és/vagy (C6~Ci2) -arilfoszfonát-híd és (C7-Ci2)-ahídroxi-metíl-aril (ismertetése például a WO 95/01363 számú nemzetközi közzétételi iratban található, ahol a (C6-Ci2) aril, a (Ce-C2o) -aril és a (C6-Ci4) -aril adott esetben halogén-, alkil-, alkoxi-, nitro- vagy ciano-csoporttal szubsztituált, és ahol R1 és R1' jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, (Ci-Ci8)-alkil-, (C6-C2o)-aril-, (C6-Ci4)-aril-(CxC8) -alkil-, előnyösen hidrogén, (Ci~C8)-alkil-, előnyösen (C1-C4)-alkil- és/vagy metoxietil-csoport, vagy
R1 és R1' jelentése a hozzákapcsolódó nitrogénatommal együtt egy 5-6-tagú heterociklusos gyűrűt képez, amely egy további heteroatomot is tartalmazhat, amely 0, S vagy N,
b) nukleozid 3’-vége és/vagy 5'-vége között található foszfodiészterhíd kicserélése egy defoszfohídra [defoszfohidak ismertetése például Uhlmann, E. és Peyman, A., Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Methods in Molecular Biology, 20. kötet, 16. fejezet, 355ff szerk.: Agrawal, S., Hrsg., kiad.: Humana Press, Totowa (1993) című műben található], ahol a defoszfohíd például formacetál-,
3'-tioformacetál-, dimetil-hidrazo-, csoport.
metil-hidroxil-amin-, oxim-, metilén dimetilén-szulfon- és/vagy szili!
c) egy cukor foszfát-egység (a 0-D-2'-dezoxiribóz és a nukleozidok közötti foszfodlészterhid képez együtt egy cukor-foszfát-egységet) kicserélése a cukor-foszfát-vázból (a cukor-foszfát-váz cukor-foszfát-egységekből ál!) egy másík egységre, ahol a másik egység például morfolinoszármazék-oligomer felépítésére alkalmas
[amelyet például Stirchak és
6129 (1989) ismertetnek], mtsai., Nucleic Acids Res. 17, azaz például egy morfolinoszármazék-egységre történő kicserélés poliamid-nukleinsav (PNS) felépítésére alkalmas [amelynek ismertetése például Nielsen és mtsai., Bloconj. Chem. 5, 3 (1994) és az EP 0672677 A2 számú európai közzétételi iratban található], azaz például egy PNS_ vázegységre, például 2-aminoetll-gllcinre történő kicserélés, foszfonsav-monoészter-nukleinsav (PHONS) felépítésére alkalmas [amelynek Ismertetése például Peyman és mtsai., Angew. chem. Int. Ed. Engl. 35, 2632-2638 (1996) és az EP 0739898 A2 számú európai közzétételi iratban található), azaz egy PHONS-egységre történő kicserélés,
d) egy 0-D-2-dezoxiribóz-egység kicserélése egy módosított cukoregységre, ahol a módosított cukoregység például β-D-ribóz, a-D-2'-dezoxiribóz, L-2-dezoxiribóz, 2'-F2'-dezoxiribóz, 2 '-0-(C1-C6)-alkil-ribóz, ahol az előnyös 2’-O-(C,-Ce)-alkil-ribóz 2 '-O-metll-rlbóz, 2'-0-(C,-Cl
- 10 alkenil-ribóz, 2 ’ - [O- (Ci-C6) -alkil-O- (Ci-C6) -alkil] ribóz, 2 ' -NH2-2'-dezoxiribóz, β-D-xilofuranóz, a-arabinofuranóz, 2, 4-didezoxi-p-D-eritro-hexopiranóz és karbociklusos [pl. Froehler, J. Am. Chem. Soc. 114, 8320 (1992)] és/vagy nyílt láncú cukoranalóg [pl. Vandendriessche és mtsai., Tetrahedron 49, 7223 (1993)] és/vagy biciklusos cukoranalóg [pl. Tarkov, M. és mtsai., Helv. Chim. Acta 76, 481 (1993)] egyike.
e) egy természetes nukleozidbázis kicserélése egy módosított nukleozidbázisra, ahol a módosított nukleozidbázis például uracil, hipoxantin, 5-hidroxi-metiluracil, N2-dimetil-guanozin, pszeudouracil, 5-hidroximetil-uracil, 5-amino-uracil, dihidro-uracil, 5-fluoruracil, 5-fluor-citozin, 5-klór-uracil, 5-klór-citozin, 5bróm-uracil, 5-bróm-citozin, 2,4-diaminopurin, 8-azapurin, szubsztituált 7-deazapurin, előnyösen 7-deaza-7szubsztituált és/vagy 7-deaza-8-szubsztituált purin vagy természetes nukleozidbázisok más módosításainak egyike (módosított nukleozidbázisok ismertetése az EP 0710667 A2 és az EP 0680969 A2 európai közzétételi iratokban találhfitó)egy olyan molekulához való kötődés, amely az oligonukleotid tulajdonságait befolyásolja azáltal, hogy az oligonukleotid kötődése egy vagy több molekulához az oligonukleotid tulajdonságait (kedvezően) befolyásolja (például az oligonukleotidnak azt a képességét, hogy a sejtmembránon keresztülhatoljon, illetőleg egy sejtbe bejusson, nukleázokkal szembeni stabilitását, eg5-öt kódoló célszekvenciához való affinitását, az oligonukleotid
- 11 farmakokinetikáját, cgy antiszensz oligonukleotid/ribozim, illetőleg az oligonukleotiddal konjugált molekula azon képességét, hogy a konkrét eg5-öt kódoló célszekvenciát megtogjaz például kötésre és/vagy keresztkötésre való képességét, ha az oligonukleotid az eg5-öt kódoló célszekvenciával hibridizál), ahol a molekula például az oligonukleotidhoz kötődni képes molekula, polilizin, interkaláló anyag, például pirén, akridin, fenazin vagy fenantridin, fluoreszkáló anyag például fluoreszcein, keresztkötésre alkalmas anyag, például pszoralén vagy azidoproflavin, lipofil molekula, például (C12-C20) ~alkil, lipid, például 1,2-dihexadecil-racglicerin, szteroid, például koleszterin vagy tesztoszteron, vitamin, például E—vitamin, poli— vagy oligoetilénglikol előnyösen egy foszfátcsoporton keresztül (pl. trietilénglikol-foszfát, hexaetilén-glikol-foszfát) az oligonukleotidhoz kötve, (Ci2-Cig) — alkilfoszfát—diészter és/vagy 0— CH2-CH (OH)-0- (C12-C18) -alkil jöhet számításba, ezek a molekulák a szekvencia 5'—végén és/vagy 3'—végén és/vagy a szekvencián belül épülhetnek be, például oligonukleotidkonjugátumok kiépítésére alkalmas nukleotidbázisnál, oligonukleotid-konjugátumok előállítására szolgáló eljárások a szakember számára jól ismertek és ismertetés a következő művekben található: Uhlmann, E. és Peyman, A., Chem. Rév. 90, 543 (1990); Manoharan, M., Antisense Research and Applications, 17. fejezet, 303ff oldal, Crooke és Lebleu, Hrsg., CRC Press, Boca Raton (1993) és EP-A 0552766 számú európai közzétételi irat.
g) 2'5’-kötést tartalmazó oligoadeniláthoz történő kötés, előnyösen egy alkalmas kapcsolómolekulán (linkeren) keresztül, ahol a 2'—5’—kötést tartalmazó oligoadenilát például 2'5'-kötést tartalmazó triadenilát, 2’5'-kötést tartalmazó tetraadenilát, 2'5’-kötést tartalmazó penta- adenilát, 2’5’-kötést tartalmazó hexaadenilát vagy 2’5'kötést tartalmazó heptaadenilát—molekula és származékaik egyike, ahol a 2'5'-kötést tartalmazó oligoadenilátszármazék például Cordycepin (2'5'-kötést tartalmazó 3'dezoxi-adenilát, és ahol trietilén-glikol például egy alkalmas kapcsolóanyag, és ahol a 2'5'-kötést tartalmazó oligoadenilát 5'-vége foszfát-, difoszfát- vagy trifoszfátcsoportot kell hordozzon, amelyben egy vagy több oxigénatom például kénatommal helyettesíthető, ahol a foszfát- vagy tiofoszfát-csoporton keresztül történő helyettesítés előnyös .
h) 3'-3'- és/vagy 5’-5'-inverzió bevitele az oligonukleotid 3'-végén és/vagy 5'-végén, ahol ezen fajta kémiai módosítások a szakember számára jól ismertek, és ismertetés például Koga, M. és mtsai., J. Org. Chem. 56, 3757 (1991) és EP 0464638 és EP 0593901 számú európai közzétételi iratokban található.
A cukor-foszfát-vázból egy cukor-foszfát-egység kicserélése egy másik egységre, amely például PNS-vázegység vagy PHONS-vázegység lehet, előnyösen egy nukleotid kicserélése például egy PNS-egységre vagy egy PHONS-egységre, amely már természetes nukleozidbázisokat és/vagy módosított nukleozidbázisokat tartalmaz, például egy módosított
- 13 nukleozidbázist a következők közül: uracil, hipoxantin, 5 (hidroxi-metil)-uracil, N2-dimetil-guanozin, pszeudouracil, 5-(hidroxi-metil)-uracil, 5-amino-uracil, pszeudouracil, dihidro—uraci1, 5—fluor—uracil, 5—fluor—citozin, 5 klór uracil, 5-klór-citozin, 5-bróm-uracil, 5-bróm-citozin, 2,4diamino—purin, 8—azapurin, szubsztitualt 7 deazapurin, elő nyösen 7-deaza-7-szubsztituált és/vagy 7-deaza-8-szubsztituált purin vagy természetes nukleozidbázis más módosításai (módosított nukleotidbázisok ismertetése az EP 0710667 A2 és az EP 0680969 A2 számú európai közzétételi iratokban található).
Az EP 0710667 A2, az EP 0680969 A2, az EP 0464638, az EP 0593901, az EP 0672677 A2, az EP 0739898 A2 és az EP 0552766 számú európai és a WO 95/01363 számú nemzetközi közzétételi iratokban ismertetett oligonukleotidmódosítások a kitanítás részét képezik.
A találmány egy megvalósítási módja szerint az oligonukleotid-szekvenciában a nukleozidok közötti egy vagy több foszfodiészterhidat módosítjuk, előnyösen nukleozidok közötti egy vagy több foszfodiészterhidat nukleozidok kö2ötti foszforotioáthíddal és/vagy nukleozidok közötti (Cö C12)-arilfoszfonát-híddal, előnyösen a-hidroxibenzil-foszfonát-híddal helyettesítjük, amelyekben a benzil-csoportot előnyösen szubsztituáljuk, például nitro-, metil-, halogén csoporttal helyettesítjük. Egy teljesen foszforotioátoligonukleotidban a nukleozidok közötti valamennyi foszfodiészterhidat foszforotioát-hídra módosítjuk. Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid,
- 14 amelyben nem minden.
nukleozidok közötti foszfo diészterhidat módosítunk egységesen foszforotioátra (a nukleozidok között foszforotioáthidakra). Előnyösen legalább egy internukleozid-hidon másfajta módosítást hajtunk végre, vagy nem módosítjuk. Előnyösebben a találmány tárgyát képezi egy olyan nukleotid, amely ezen kívül még legalább egy másfajta módosítást tartalmaz. A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid-szekvencián belül egy vagy több nukleozidot (β-Ό-2'-dezoxiribóz és/vagy nukleozidbázis) módosítunk, előnyösen a β-ϋ-2'-dezoxiribózt 2'-0-(Ci-C6)-alkil-ribózra, előnyösen 2'-O-metil-ribózra cseréljük és/vagy a nukleozidbázist 8-azapurinra, 7-deaza-7-szubsztituált purinra és/vagy 7-deaza-8-szubsztituált purinra cseréljük (purin, adenin, guanin). Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amelyben nem minden nukleozidot módosítunk egységesen. Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amely ezen kívül legalább egy másfajta módosítást is tartalmaz.
A találmány egy további megvalósítási módja szerint a cukor-foszfát-vázból egy vagy több cukor-foszfát-egységet PNS-vázegységre, előnyösen 2-aminoetil-glicin-egységre cserélünk. Előnyösen a kicserélt cukor-foszfát-egységek legalább egy bizonyos mértékig egymáshoz kapcsoltak. Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amelyben nem minden cukor-foszfát-egységet cseréltünk ki egységesen. A találmány tárgyát kepezik előnyösen a kimera oligonukleotidok, például az olyanok, amelyek egy vagy több
- 15 PNS- és egy vagy több DNS-részből állnak. Az ilyen kiméra oligonukleotidokra például szolgálnak a következő módosítási minták, amelyek nem korlátozzák a találmány tárgykörét: DNS-PNS, PNS-DNS, DNS-PNS-DNS, PNS-DNS-PNS, DNS-PNS-DNSPNS, PNS-DNS-PNS-DNS. Hasonló minták DNS-részekből és PHONS-részekből összeállított kiméra molekulákra is lehetségesek, például DNS-PHONS, PHONS-DNS, DNS-PHONS-DNS, PHONS-DNS-PHONS, DNS-PHONS-DNS-PHONS, PHONS-DNS-PHONS-DNS. Ezenkívül természetesen három különböző részből, mint DNSrész(ek)ből, PHONS-rész(ek)bői vagy PNS-rész(ek)bői álló kiméra molekulák is lehetségesek. Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amely ezenkívül még legalább egy, másfajta módosítást is tartalmaz.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid 3'-végéhez és/vagy 5'-végéhez egy (C12-C18)-alkil-csoportot, előnyösen egy Cie-alkil-csoportot, egy trietilén-glikol-csoportot vagy egy hexaetilén-glikolcsoportot kötünk - ezek a csoportok előnyösen foszfátcsoporton keresztül kötődnek az oligonukleotidhoz. Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amely nincs mind a két végén (3'-végén és 5'-végén) (egyformán) módosítva. Előnyösen a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amely ezen kívül még legalább egy, másfajta módosítást is tartalmaz.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid-szekvencián belül csak meghatározott helyzetekben történt módosítás (pl. részlegesen módosított oligonukleotid). Részlegesen módosított oigonukleotidokat
- 16 egyes leírásokban minimálisan módosított oligonukleotidoknak is nevezik. A szekvencián belül egy módosítás egy meghatározott helyre korlátozódhat (meghatározott nukleotídokra, meghatározott nukleozidokra, meghatározott nukleozidbázisokra, meghatározott internukleozid-hidakra).
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint olyan részlegesen módosított oligonukleotidot állítunk elő, amelyben csak egyes foszfodiészterhidakat cserélünk ki módosított internukleozid-hidakra, például foszforotioáthidakra és/vagy α-hidroxibenzil-foszfonát-hidakra. Előnyösen a találmány tárgyát képezik a csak bizonyos mértékben módosított oligonukleotidok.
A találmány tárgyát képezi előnyösen egy olyan oligonukleotid, amelynél az 5'-végen és/vagy a 3'-végen 1-5 terminális nukleotidegység a megfelelő nukleozidok 5'-végén es/vagy 3'-végén található internukleozid-hidak módosításával védve van, előnyösen a nukleozidok közötti foszfodiészterhidak foszforotioáthidakra és/vagy a-hidroxibenzil-foszfonát-hídakra történő kicserélésével. Előnyösebbek az oligonukleotid 3'-végén lévő, olyan 1-5 terminális nukleotidegységek, amelyek a megfelelő nukleozid 5'-végén és/vagy 3'-végén található, módosított internukleozidhidakkal vannak védve. Adott esetben ezenkívül az oligonukleotid 5'-végén lévő 1-5 terminális nukleotidegység is védve van a megfelelő nukleozidok 5'-végén és/vagy 3'végén található, módosított internukleozid-hidakkal. Adott esetben az oligonukleotid más helyzetekben további módosításokat is tartalmazhat.
- 17 A találmány tárgyát képezi továbbá egy olyan oligonukleotid, amelynél legalább egy, belső pirimidinnukleozid és/vagy ennek a pirimidinnukleozidnak (nukleozid egy pirimidinbázissal, például citozinnal, uracillal, timinnel) az 5'-végén és/vagy a 3'-végén található internukleozid-hid módosítva van, előnyösen nukleozidok közötti foszfodiészterhíd/hidak kicserélése egy vagy több foszforotioáthídra/hidakra és/vagy egy vagy több ahidroxi-benzil-foszfonáthídra/hídakra.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid 5'-végén és/vagy 3'-végén lévő 1-5 terminális nukleotidegységek a megfelelő nukleozidok 5'és/vagy 3'-végén található, módosított internukleozidhidakkal védve vannak, és ezenkívül legalább egy belső pirimidinnukleozid és/vagy a pirimidinnukleozid 5'-végén és/vagy 3'-végén található internukleozid-híd módosítva van.
A részlegesen módosított oligonukleotid elvét például Peyman, A. és Uhlmann, E. ismertetik [Peyman, A. és Uhlmann, E., Biol. Chem. Hoppe-Seyler 377, 67-70 (1996) és EP 0653439 számú európai közzétételi irat, amelyek a kitanítás részét képezik]. Ebben az esetben az 5'-végen és/vagy a 3'-végen lévő 1-5 terminális nukleotidegység védve van, például a megfelelő nukleozid 3'-végén és/vagy 5'-végén található, nukleozidok közötti foszfodiészterhidak például nukleozidok közötti foszforotioáthidakra cserélhetők. Ezenkívül előnyösen legalább egy belső pirimidin-nukleozidhelyzet (illetőleg nukleotid-helyzet) módosítva van, elő
- 18 nyösen pirimidin-nukleozid 3'- és/vagy 5’-internukleozidhíd/hidak van(nak) módosítva vagy kicserélve, például nukleozidok közötti egy vagy több foszforotioáthídra/hidakra. Részlegesen módosított oligonukleotidoknak különösen előnyös tulajdonságaik lehetnek, például nukleázokkal szemben igen nagy mértékben ellenállók, és mindemellett csak minimálisan vannak módosítva. Ezenkívül jelentősen csökkent mértékben mutatnak nem antiszensz hatásokat, amelyek a csak foszforotioátból álló oligonukleotidok alkalmazásával gyakran kapcsolatosak [Stein és Krieg, Antisense Res. Dev. 4, 67 (1994)]. Részlegesen módosított oligonukleotidok magasabb kötési affinitást is mutatnak a csak foszforotioátokból álló oligonukleotidoknál.
A találmány tárgyát képezik előnyösen a részlegesen/minimálisan módosított oligonukleotidok.
10. azonosítószámú szekvencia:
i
3'-C*T*T*A AGG C*A G T*A C*C G*C A G*C-5’ (K3) j
5'-C G A C*G*C*C*A*T G A*C G G A A*T*T*C-3'
11. azonosítószámú szekvencia:
3'-A*C*C*A C*T C*T A C*G T*C*T G G*T A*A-5' (K4) 5'-A*A T*G G T*C*T G*C A T*C T*C A*C*C*A-5' 12. azonosítószámú szekvencia:
3’-G*G*C*A G*T A C*C G C*A G*C G T*C G*G-5' (K6)
5'-G*G C*T G C*G A*C G C*C A T*G A*C*G*G-3'I
13. azonosítószámú szekvencia:I
3'-C*T*T*A A G G*C A G*T*A-5'
5'-A*T*G A C*G G A A*T*T*C-3' 14. azonosítószámú szekvencia:
- 19 3'-T*A*A G G C*A G*T A*C*C-5' 5'-C*C*A T*G A*C G G a*A*T-3' 15. azonosítószámú szekvencia: 3’-G*G*C A G*T A C*C*G C*A-5' 5'-A*C G*C*C A T*G A C*G*G-3’ 16. azonosítószámú szekvencia: 3'-A*G*T A 0*0 G*C A G*C*G-5' 5'-G*C*G A C*G C*C A T*G*A-3’ 17. azonosítószámú szekvencia: 3’-C*C*G*C A G*C G T*C G*G-5' 5'-G*G C*T G C*G A C*G*C*C-3' 18. azonosítószámú szekvencia: 3'-G*C*A G C*G T*C G G*T*T-5' 5'-T*T*G G C*T G C*G A*C*G-3' ahol az internukleozid-híd módosítását jelenti, előnyösen foszforotioát-internukleozidhíd
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint a találmány tárgyát képezi egy részlegesen módosított oligonukleotid, amelynél egy nukleozidot módosítottunk, például egy nukleozidbázist és/vagy egy β-ϋ-2'dezoxiribóz—egységet módosítottunk. Előnyösen agy β D dezoxiribóz—egységet cseréltünk ki agy 2 —0—(Ci-Cg) alkil ribózra, előnyösebben 2’-O-metil-ribózra (egy β-ϋ-2’dezoxiribonukleozidőt cserélünk ki 2 —0—metil ribo nukleozidra).
A találmány szerinti oligonukleotid egy fajta módosítási típuson kívül egy másik fajta módosítási típust is tartalmazhat.
- 20 A találmány egy további megvalósítási módja szerint az oligonukleotid meghatározott helyzetekben módosított internukleozid—hidakat és ezenkívül meghatározott helyzetekben nukleozid módosításait tartalmazza, előnyösen egy βD-2'-dezoxiribózt cserélünk ki. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az internukleozid-módosítás egy foszfodiészterhíd kicserélése egy foszforotioáthídra, és a β-ϋ-2'-dezoxiribóz módosítása 2'-O-metilribózra történő kicserélés, ebben az esetben az oligonukleotid kiméra oligonukleotid, amely módosított és nem módosított DNS- és RNS-részekből áll, amelyek 2’-O-metilribonukleozidokat és β-ϋ-2'-dezoxiribonukleozidokat, valamint a nukleozidok között foszfodiészter- és foszforotioáthidakat tartalmaznak.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint a találmány tárgyát képezi egy olyan oligonukleotid, amely egy vagy több (Ci2-Ci8) -alkil-csoportot tartalmaz, előnyösen egy Ci6-alkil-csoportot a 3’- és/vagy 5 » — végén. A (Ci2~Sis) —alkil—csoport például foszfo diészterként kötődhet, mint ezt az EP 0552766 A2 számú európai közzétételi iratban ismertetik (az EP 0552766 A2 számú európai közzétételi irat a kitanítás részét képezi), vagy O-CH2-CH (OH) -O- (Ci2-Ci8) -alkil 3'-foszfodiésztereként. Előnyös az olyan oligonukleotid, amelynél egy Ci6 alkil csoport kötődik a 3'- és/vagy az 5'-végen.
A találmány tárgyát képezi az olyan oligonukleotid is, amelyben a 3'- és/vagy az 5'-végen oligoetilén-glikolcsoport kötődik, előnyösen trietilén-glikol vagy hexaetilengiiko1, előnyösebben foszfodiészteren keresztül
- 21 (tri- vagy hexaetilén-glikol-foszfátészter). Egy ilyen oligonukleotid természetesen további módosításokat is tartalmazhat .
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid egy kapcsolómolekulán (linkeren) keresztül 2'5'-kötést tartalmazó oligoadenilát-5'(tio)foszfáthoz kötődik. Kapcsolómolekula lehet például egy oligoetilénglikol-foszfát-csoport, előnyösen trietilénglikol-foszfát-, tetraetilén-glikol-foszfát- vagy hexaetilén-glikol-foszfát-csoport. A 2'5'-kötést tartalmazó oligoadenilát előnyösen a 2'-végén keresztül tetra- vagy pentaadenilátként kötődhet, amelynek 5'-hidroxi-csoportja egy foszfát- vagy tiofoszfát-csoporttal van szubsztituálva. Ismert, hogy 2'5'-kötést tartalmazó oligoadenilát RN-áz L-t indukál a cél-mRNS hasítására [Torrence és mtsai., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1300 (1993)]. A 2'5'-oligoadenilát aktiválja a ribonukleáz L-et (RN-áz L), amely azután az eg5-mRNS-t lebontja. Egy 2'5'-kötést tartalmazó adenilát helyett például egy, a Cordycepin nukleozidanalógból levezetett 2'5'-kötést tartalmazó 3'-dezoxiadenilát is beépíthető. Ebben az esetben az az oligonukleotid-rész, amely a megcélzott nukleinsavval komplementer, előnyösen meghatározott helyzetekben 2’-0-(Ci-C6)-alkil-ribonukleoziddal (előnyösen 2'-O-metil-ribonukleoziddal) vagy PNS-sel van módosítva .
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint egy vagy több természetes nukleozidbázist kicserélünk nem természetes, illetőleg módosított nukleozid
- 22 bázisokra, előnyösen 8-azapurinra és/vagy 7-deaza-7szubsztituált purinra és/vagy 7-deaza-8-szubsztituált purinra, amelyeket például az EP 0171066 és EP 0680969 számú európai közzétételi iratokban ismertetnek.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint a nukleozidban 3'3'- és/vagy 5'5'-inverziók találhatók a 3'- és/vagy 5'-végen, amelyeket például az EP 0464638 és az EP 0593901 számú európai közzétételi iratokban ismertetnek.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint egy vagy több foszfodiészterhidat kicserélünk ahidroxibenzil-foszfonáthídra, amelyet a WO 95/01363 számú nemzetközi közzétételi iratban ismertetnek.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotidban módosítás történt a cukor foszfát-vázban, előnyösen egy PNS-egységre történő módosítás .
Más módosítási minták is lehetségesek, például DNSPNS-DNS, PNS-DNS. Hasonló módosítási minták lehetségesek PHONS/DNS-kimérákra is. Ezek a módosítási minták minden egyes másfajta módosítási fajtával kombinálhatok, és hasonló módosítási minták természetesen más, találmány szerinti oligonukleotidokra is lehetségesek.
Az előzőekben ismertetett, bizonyos oligonukleotidok - meghatározott szekvenciával, meghatározott helyzetekben meghatározott módosítási típussal/típusokkal (speciális mó dosítási minta) csak a találmány különböző megvalósítási módjainak példájául szolgálnak. A találmány tárgyköre nem
- 23 korlátozódik ezekre a bizonyos oligonukleotidokra. Más szekvenciakombinációk és módosítási minták ugyanúgy lehetségesek.
A találmány szerinti oligonukleotid specifikusan gátolja a célfehérje (azaz az eg5) , illetőleg a célszekvencia (egy eg5-öt kódoló nukleinsav, előnyösen eg5mRNS) expresszióját. A találmány szerinti oligonukleotid előnyösen specifikusan gátolja az eg5 expresszióját. Ennek hatására az eg5-fehérje koncentrációja csökken a nem kezelt egyedek expressziójával összehasonlítva. A specifitás például a találmány szerinti oligonukleotid eg5-expressziójára való hatásának ugyanezen oligonukleotid béta-aktinexpressziójára való hatásának összehasonlításával mutatható ki az mRNS és/vagy a fehérje szintjén. A találmány szerinti oligonukleotiddal történő kezelés csak az eg5-mRNS és/vagy az eg5-fehérje koncentrációját csökkenti, míg például a béta-aktin (egy létfontosságú fehérje) mRNS-ének és/vagy fehérjéjének koncentrációja változatlan marad.
A találmány szerinti oligonukleotid humán eredetű sejtekben előnyösen az eg5 expresszióját hatékonyan gátolja és/vagy gerinces állatokban a tumornövekedést képes gátolni. A találmány szerinti oligonukleotid előnyösen csökkenti az eg5 mRNS-ének és/vagy fehérjéjének koncentrációját a kezelt egyedek tumorában a kezeletlenekhez képest. A találmány szerinti oligonukleotid előnyösen csökkenti a tumor nagyságát gerinces állatokban, például egerekben, a kezeletlen egerekkel összehasonlítva, illetőleg ugyanebben az
- 24 állatban a tumor kezelés előtti nagyságával összehasonlítva .
A találmány tárgyát képezi eljárás a találmány szerinti nukleotid előállítására. Az előállítási eljárás az oligonukleotid kémiai szintézisét jelenti. A kémiai szintézis előnyösen oligonukleotidok szintézisére alkalmazott, hagyományos eljárások egyikével történik, például foszforamidit-eljárással Caruthers szerint [Caruthers, Tetrahedron Letters 24, 245 (1983)], H-foszfonát-eljárással [Todd és mtsai., J. Chem. Soc. 3291 (1957)] vagy foszfotriészter-eljárással [Sonveaux, Bioorg. Chern. 14, 274 (1986); Gait, M. J., Oligonukleotide Synthesis, Apractical Approach, IRL Press, Oxford (1984)] vagy javított vagy megváltoztatott eljárásokkal, amelyek ezekből a hagyományos eljárásokból származnak. A találmány szerinti oligonukleotid például az 1. példában ismertetettek szerint állítható elő. A találmány szerinti oligonukleotid előnyösen szilárd fázison szintetizálható, amelyre megfelelő módon védett monomereket (pl. nukleozidok) kondenzálunk, hogy a monomerek között internukleozid-hidakat építsünk ki. A találmány tárgyát képezi például eljárás oligonukleotid vagy származékának előállítására, amely eljárás során 3'- vagy 2'-terminális foszfor (V)-csoporttal és szabad 5'-hidroxilvagy merkapto-csoporttal bíró nukleotidegységet egy másik, a 3'-helyzetben foszfor (III)- vagy foszfor(V)-csoporttal bíró nukleotidegységre vagy aktivált származékára cseréljük, és ahol adott esetben védőcsoportokat alkalmazunk, amelyeket átmenetileg beviszünk az oligonukleotidba, hogy
- 25 más funkciós csoportokat védjünk, és amelyeket a szintézis után eltávolítunk, és a szilárd fázisról lehasított oligonukleotid adott esetben fiziológiailag elfogadható só formájába alakítható. Módosított oligonukleotid szintéziséhez a hagyományos eljárások bizonyos mértékben változtathatók. Ezek a változtatások a szakember számára ismertek, és például Agrawal, S. ismerteti [Agrawal, S., Protocols for oligonucleotides and analogs, Human Press Inc., Totowa, New Jersey (1993)]. Módosított oligonukleotidok előállítását az EP 0710667, az EP 0680969, az EP 0464638, az EP 0593901, az EP 0672677, az EP 0739898 és az EP 0552766 számú európai közzétételi iratokban és a WO 95/01363 számú nemzetközi közzétételi iratban is leírják. Az előzőekben ismertetett hivatkozásokban közölt eljárások módosított oligonukleotidok előállítására a kitanítás részét képezik.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás eg5 expressziojának gátlására és/vagy egy eg5-öt kódoló nukleinsav expressziójának megváltoztatására, amely során a találmány szerinti oligonukleotid egy eg5-öt kódoló nukleinsavval (pl. mRNS, cDNS) kapcsolatba kerül, és az oligonukleotid az eg5-öt kódoló nukleinsavval hibridizál
A találmány tárgyát képezi továbbá egy eljárás, amely során az oligonukleotid egy eg5-öt kódoló nukleinsavval (pl. mRNS, CDNS) kapcsolatba kerül, például oly módon, hogy az oligonukleotidot ismert eljárások segítségével bevisszük egy sejtbe, például sejteknek az előzőekben ismertetett oligonukleotiddal vagy kiszerelésével történő inkubálásával ilyen kiszerelés a felvételt elősegítő anyagokat tártál- 26 mázhat, például lipofectint, Llpofectamint, Celltectint vagy polikationokat (pl. polilizin)
Az oiigonukleotldot például előbb Cellfectinnel inkubáljuk pl. 30 percen keresztül szobahőmérsékleten, majd körülbelül maximum 5 érán keresztül sejttel inkubáljuk, és ilyen módon az oligonukleotid bekerül a sejtbe.
A találmány tárgyát képezi továbbá az oligonukleotid alkalmazása, előnyösen antiszensz oligonukleotidként (az oligonukleotid kötődik egy eg5-öt kódoló mRNS-hez) vagy nbozlmként (egy eg5-öt kódoló mRNS-hez kötődik, és hasítja az mRNS-t). A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az oligonukleotid egS-öt kódoló mRNS RN-áz H által történő hasításának indukálására alkalmazható, amely csőkkent eg5-expressziót eredményez.
A találmány tárgyát képezi az oligonukleotid alkalmazása bipoláris gátlására, és ezáltal tumornövekedés gátlására.
mitotikus orsó kialakulásának a sejtproliferáció, elsősorban
A találmány tárgyát képezi továbbá az oligonukleotid gyógyszerként történő alkalmazása, és az oligonukleotid alkalmazása gyógyászati készítmény előállítására. Az oligonukleotid előnyösen eg5 expressziójával kapcsolatos vagy eg5 expressziójának gátlásával gyógyítható betegség megelőzésére és/vagy kezelésére szolgáló gyógyászati készítményekben alkalmazható.
- 27 A találmány tárgyát képezi továbbá egy gyógyászati készítmény, amely egy oligonukleotidot és/vagy fiziológiailag elfogadható sóját tartalmazza gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagokkal és segédanyagokkal együtt.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy gyógyászati készítmény, amely legalább egy, találmány szerinti nukleotidot tartalmaz, amely eg5 expressziójának gátlásával gyógyítható betegség, például restenosis és rák, kezelésére alkalmazható.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy gyógyászati készítmény előállítására szolgáló eljárás, amely során egy vagy több, találmány szerinti oligonukleotidot fiziológiailag elfogadható hordozóanyagokkal és adott esetben további anyagokkal, például adott esetben alkalmas adalékanyagokkal és/vagy segédanyagokkal keverünk.
A találmány tárgyát képezi előnyösen az oligonukleotid vagy az oligonukleotidból előállított gyógyászati készítmény alkalmazása rák kezelésére, például tumornövekedés és tumormetasztázis gátlására. Az oligonukleotid vagy az oligonukleotidból előállított gyógyászati készítmény például szilárd tumorok, mint mellrák, tüdőrák, fejvagy nyakrák, agydaganat, has-, vastagbélrák, colorectalis carcinoma, nyelőcsőrák, gyomor—bel—rák, gliatumor, májrák, nyelvrák, neuroblastoma, osteosarcoma, petefészekrák, hasnyálmirigyrák, prosztatarák, retinoblastoma, Wilms-tumor, multiplex myeloma kezelésére alkalmazható, és bőrrák, például melanoma kezelésére, nyirokcsomótumorok és vérrák kezelésére alkalmazható. A találmány tárgyát képezi előnyösen
- 28 a találmány szerinti oligonukleotid vagy az oligonukleotidból előállított gyógyászati készítmény alkalmazása eg5 expressziójának gátlására és/vagy különböző rákoknál, például vérrákok, tüdőrák, fejrák nyakrák, agydaganat, has-, vastagbélrák, colorectalis carcinoma, nyelőcsőrák, gyomor-bél-rák, gliatumor, máj rák, nyelvrák, neuroblastoma, osteosarcoma, petefészekrák, hasnyálmirigyrák, prosztatarák, retinoblastoma, Wilms-tumor, multiplex myeloma, bőrrák, melanoma, nyirokcsomótumorok, vérrák, ascites és pleuraömleny felhalmozódásának gátlására. Az eg5 expressziójára gyakorolt gátló hatása miatt a találmány szerinti oligonukleotid, illetőleg az abból előállított gyógyászati készítmény javítja az életminőséget.
A találmány tárgyát képezi továbbá az oligonukleotid vagy az oligonukleotidból előállított gyógyászati készítmény alkalmazása például rák kezelésére vagy tumormetasztázis gátlására más gyógyszerekkel és/vagy más terápiás gyógymódokkal együtt, például ismert gyógyszerekkel és/vagy ismert terápiás módszerekkel együtt, mint például amelyeket jelenleg rák kezelésére és/vagy tumormetasztázis megakadályozására alkalmaznak. Előnyös a sugárkezeléssel és kemoterápiás szerekkel, például cisplatinnal, ciklofoszfamiddal, 5-fluoruracillal, adriamycinnel, daunorubicinnel vagy damoxifennel alkotott konstrukció.
Az oligonukleotid és/vagy fiziológiailag elfogadható sója egy állatnak, előnyösen egy emlősnek és előnyösebben embernek egymagában, más oligonukleotiddal (vagy fiziológiailag elfogadható sójával) keverékben vagy egy gyógyásza- 29 ti készítmény formájában adagolható, amely topikálisan, perkutan, parenterálisan vagy enterálisan alkalmazható, és amely aktív alkotórészként legalább egy oligonukleotid hatásos dózisát tartalmazza a szokásos, gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagokon és segédanyagokon kívül. Ilyen gyógyászati készítmény normál esetben körülbelül 0,1-90 súly-s-ban tartalmazza a terápiásán aktív oligonukleotidot/oligonukleotidokat. Az adag széles sávban változhat, és minden esetben az egyedi körülményekhez kell igazítani. Pikkelysömör kezelésére topikális alkalmazás előnyős. Rák esetében infúzió, orális vagy rectalis adagolás előnyös, vagy aeroszol formájában történő nazális adagolás, előnyösen tüdőrák esetében, míg diabetikus retinopathia esetében topikális, intravitreális és orális adagolás előnyös.
A gyógyászati készítmény az ismert módokon állítható elő [pl. Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publ. Co., Easton, PA (1985)] gyógyászatilag inert, szervetlen és/vagy szerves hordozóanyagok alkalmazásával. Laktóz, kukoricakeményítő és/vagy származékaik, talkum, sztearinsav és/vagy sóik, stb. alkalmazhatók például pirulák, tabletták, filmtabletták és kemény zselatinkapszulák előállítására. Lágy zselatmkapszulák és/vagy végbélkúpok hordozóanyagai például zsírok, viaszok, félkemény és folyékony poliolok, természetes és/vagy keményített olajok, stb. lehetnek, oldatok és/vagy szirupok előállításánál alkalmas hordozóanyagok például a víz, a szacharóz, az invertcukor, a glukóz, a poliol stb. Injekciós oldatok előállításához
- 30 alkalmas hordozóanyagok a víz, az alkohol, a glicerin, a poliolok, a növényi olajok, stb. Mikrokapszuláknál, implantátumoknál és/vagy pálcikáknál alkalmas hordozóanyagok a glikolsav és a tej sav kevert polimerei. Ezenkívül ismertek a liposzómakiszerelések, amelyekről a következőkben található leírás: Weiner, N., Drug Develop Ind. Pharm. 15, 1523 (1989); Liposome Dermatics, Springer Verlag (1992) és Hayashi, Gene Therapy 3, 878 (1996). A gyógyászati összeállítás olyan kiszerelést is magában foglalhat, amely az oligonukleotid orális felhasználhatóságát növeli, mint amelyek például a bélben történő felvétel javítására szolgáló anyagok, például mannit, urea, epesavak sói, mint CDCA (chenodesoxycholate)(2%).
Bőrön történő kezelésnél lehetséges például iontoforetikus eljárások és/vagy elektroporáció alkalmazása. Ezen kívül lipofektin és más hordozórendszerek is alkalmazhatók, például amelyeket a génterápiában használnak. Előnyösek azok a rendszerek, amelyek nagy hatékonysággal alkalmazhatók oligonukleotidoknak eukarióta sejtekbe vagy eukarióta sejtek magjába történő bevitelére. A gyógyászati készítmény tartalmazhat két vagy több különböző oligonukleotidot és/vagy azok fiziológiailag elfogadható sóit, és a legalább egy oligonukleotidon kívül, egy vagy több különböző terápiás hatóanyagot is.
A hatóanyagokon és hordozóanyagokon kívül a gyógyászati készítmény adalékanyagokat is tartalmazhat, például töltőanyagokat, robbanóanyagot, kötőanyagot, síkosítóanyagot, hálósítóanyagot, stabilizátorokat, emulgeáló anya
- 31 gokat, konzerváló anyagokat, édesítő anyagokat, színanyagokat, ízanyagokat vagy aromákat, sűrűsítő anyagokat, hígító anyagokat vagy pufferanyagokat tartalmazhat, valamint oldószereket és/vagy oldódást elősegítő anyagokat és/vagy késleltetett hatást elősegítő anyagokat és sókat az ozmózisnyomás megváltoztatására, rétegező anyagokat és/vagy antioxidánsokat.
1. példa
01igonukleotid-szintézis
Az oligonukleotidokat (ON) Applied Biosystems 394 DNS-szintetizátorral (Perkin Elmer Applied Biosystems, Inc., Foster City, USA) és hagyományos foszforamiditkémiával szintetizáltuk. Az összekapcsolás után Beaucagereagens alkalmazásával történő kénezéssel, majd azt követően ecetsavanhidriddel és N-metil-imidazol történő lefedéssel foszforotioát-kötéseket vittünk be. A szilárd fázisról történő lehasítás, majd a védőcsoportok koncentrált ammóniás kezeléssel történő eltávolítása után az oligonukleotidokat poliakrilamid-gélelektroforézissel tisztítottuk. A módosított 2’-O-metil-oligonukleotidokat oly módon állítottuk elő, hogy a hagyományos foszforamiditet a megfelelő ciklusban 2'-O-metil-ribonukleozid-foszforamiditre cseréltük. Minden oligonukleotidot elektropermet-tömegspektrográfiával negatív ionokkal vizsgáltunk (Fisons BioQ), amelyek minden esetben igazolták a számított tömeget. A Cl6-módosított oligonukleotidokat a hagyományos amiditek helyett foszfitiláló reagensként hexadeciloxi-(cianoetoxi)Ν,Ν-diizopropil-aminofoszfán alkalmazásával szintetizáltuk
- 32 az oligonukleotid-szintézis utolsó lépésében, vagy egy megfelelő származékot képezett szilárd fázisról leválasztva szintetizáltuk. A trietilén-glikol-kapcsoló Glen Research Corporation forgalmazásában kapható. Az adenozin és Cordycepin 2'-foszforamiditjét Chern. Genes Corporation-tól, illetőleg Chemogen Corporation—tói szereztük be. Az 5'foszfát vagy tiofoszfát-csoportokat az előzőekben ismertetettek szerint állítottuk elő [Uhlmann és Engels, Tetrahedron Lett. 27, 1023 (1986)]. A PNS-DNS-kimérákat az EP 0672677 számú európai közzétételi iratban leírtak szerint állítottuk elő.
Az oligonukleotidokat a következők segítségével vizsgáltuk:
a) analitikai gélelektroforézis 20%-os akrilamidban, 8 M karbamidban, 45 μΜ Tris-borát-pufferben, pH 7,0 és/vagy
b) HPLC-vizsgálat: Waters GenPak Fax oszlop, Gradiens CH3CN (400 ml), víz (1,6 1), NaH2PO4 (3,1 g) , NaCl (11,7 g) , pH 6,8 (0,1 M NaCl-nál) a következő után: CH3CN (400 ml), víz (1,6 1), NaH2PO4 (3,1 g) , NaCl (17,53 g) , pH 6,8 (1,5 M NaCl-nál) és/vagy
c) kapilláris elektroforézis Beckmann eCAP™, U100P gélkapilláris—oszloppal, 65 cm hosszú, 100 mm belső átmérőjű, ahol az ablak az egyik végétől 15 cm-re található, puffer 140 μΜ Tris, 360 mM borát, 7 M karbamid és/vagy
d) elektropermet tömegspektrografia negatív ionokkal, amelyek minden esetben igazolták a várt tömeget.
- 33 Az oligonukleotidok vizsgálatára szolgáló, a), b) , c) és d) pontok szerinti eljárások szakember számára ismertek. Ezek az eljárásokat például Schweitzer és Engels ismertetik [Schweitzer és Engels, Analysis of oligonucleotides, Antisense - from technology to therapy, laboratóriumi kézikönyv és tankönyv, szerk.: Schlingensiepen és mtsai., Hrsg., Bioi. Science, 6. kötet, 78-103 (1997)].
A következő oligonukleotidokat állítottuk elő (lásd leírás) és vizsgáltuk:
ON1: 3'-C*T*T*A AGG C*A G T*A C*C G*C A G*C (K3) 10. azonosítószámú szekvencia
ON2: 3’-A*C*C*A C*T C*T A C*G T*C*T G G*T A*A (K4)
11. azonosítószámú szekvencia
ON3: 3’-A*A*G*A G*T C*A C*T C*T C*C*T A G G*C (K5) 12. azonosítószámú szekvencia
ON4: 3’-C*T*T*A AGG C*A G T*A C*C G*C A G*C-FITC-5' (K6) 10. azonosítószámú szekvencia
ON5: 3'-G*G*C A G*T A C*C G*C A G C*G 22. azonosítószámú szekvencia
ON6: 3'-C*T*T*A A G G*C A G*T*A 13. azonosítószámú szekvencia
ON7: 3'-T*A*A G G C*A G*T A*C*C 14. azonosítószámú szekvencia
ON8: 3'-G*G*C A G*T A C*C*G C*A 15. azonosítószámú szekvencia
ON9: 3'-C*A*G*T A C*C G*C A G*C 23. azonosítószámú szekvencia
- 34 ONIO: 3’-A*G*T A C*C G*C A G*C*G 16. azonosítószámú szekvencia
ON11: 3'-C*C*G*C A G*C G T*C G*G 17. azonosítószámú szekvencia
ON12: 3'-G*C*A G C*G T* C G G*T*T 18. azonosítószámú szekvencia
0N13: 3’-A*A*G*A G*T C*A C*T C*T C*C*T A G G*C-Flu-5' (v.ö.: 1) —> 19. azonosítószámú szekvencia
0N14: 3’-G*G*C*A G*T A C*C G C*A G*C G T*C G*G 12. azonosítószámú szekvencia
0N15: 3'-C*T*T*A A G G*C A G*T*A-FITC 13. azonosítószámú szekvencia ahol foszforotioát-internukleozid-hidat és FITC fluoreszcens markert jelent.
Az 0N1-0N12 oligonukleotidok REH-leukémiasejtek szaporodását gátló hatását egy sejtes vizsgálati eljárással teszteltük. Az ON1-, 0N2-, ON64-ON71-oligonukleotidok antiszensz-oligonukleotidok, amelyek az eg5-mRNS transzlációs startszakaszával ellentétes irányúak. Az 0N4 az 0N1 5'-fluoreszcens markerrel jelölt analógja. Az 0N3 egy referencia oligonukleotid.
A szaporodási gátlás vizsgálatának eredményét az 1. ábrán mutatjuk be.
2. példa
Az antiszensz eg5-oligonukleotidok szaporodást gátló hatásának meghatározása
REH-sejteket (humán pre-B-leukémiasejtek, DSM ACC 22), illetőleg A549-tumorsejteket tenyésztettünk OptíMEMben (Gibco BRL) 10% magzati borjúszérummal (FCS, GIBCO-BRL) 37°C-on, 5% CO2-légkörben. A vizsgálatnál a sejtsűrűség körülbelül 1 x 106/ml. Az oligonukleotidokat (0,17 mM) a komplexképzéshez Cellfectinnel kevertük (0,83 mg/ml, GibcoBRL), hogy a sejtekbe történő felvételt elősegítsük. A sejteket és az oligonukleotid/Cellfectin-komplexet szérum nélkül inkubáltuk 4 órán keresztül, 24-lyukas lemezeken. Az oligonukleotid/Cellfectin-komplexet azután eltávolítottuk, és szérumot adtunk hozzá 10% végkoncentrációban. A 96 órás, 37°C-on, 5% CO2-légkörben történő inkubációt követően a sejtsűrűséget Casy 1-gyel mértük („Fa. Scharfe) . A sejteket előtte minden egyes lyukban alaposan összekevertük, és azonnal 1:100 arányban Casitonnal hígítottuk. A sejtsűrűség középértékét egyazon oligonukleotid-koncentrációjú, három egyedi lyukból határoztuk meg. A szaporodásgátló hatás eredményét az 1. ábrán mutatjuk be.
1. táblázat: Humán eg5 nukleotidszekvenciája (20. azonosítószámú szekvencia
Ϊ gaattccgtc atggcgtcgc agccaaattc gtctgcgaag aagaaagagg 51 AGAAGGGGAA GAACATCCAG GTGGTGGTGA GATGCAGACC ATTTAATTTG JOI GCAGAGCGGA AAGCTAGCGC CCATTCAATA GTAGAATGTG ATCCTGTACG 151 AAAAGAAGTT AGTGTACGAA CTGGAGGATT GGCTGACAAG AGCTCAAGGA 201 AAACATACAC TTTTGATATG GTGTTTGGAG CATCTACTAA ACAGATTGAT 251 GTTTACCGAA GTGTTGTTTG TCCAATTCTG GATGAAGTTA TTATGGGCTA 3 01 TAATTGCACT ATCTTTGCGT ATGGCCAAAC TGGCACTGGA AAAACTTTTA 3 51 CAATGGAAGG TGAAAGGTCA CCTAATGAAG AGTATACCTG GGAAGAGGAT
- 36 401 CCCTTGGCTG GTATAATTCC ACGTACCCTT CATCAAATTT TTGAGAAACT 451 TACTGATAAT GGTACTGAAT TTTCAGTCAA AGTGTCTCTG TTGGAGATCT 501 ATAATGAAGA GCTTTTTGAT CTTCTTAATC CATCATCTGA TGTTTCTGAG 551 AGACTACAGA TGTTTGATGA TCCCCGTAAC AAGAGAGGAG TGATAATTAA 601 AGGTTTAGAA GAAATTACAG TACACAACAA GGATGAAGTC TATCAAATTT 651 TAGAAAAGGG GGCAGCAAAA AGGACAACTG CAGCTACTCT GATGAATGCA 701 TACTCTAGTC GTTCCCACTC AGTTTTCTCT GTTACAATAC ATATGAAAGA 751 AACTACGATT GATGGAGAAG AGCTTGTTAA AATCGGAAAG TTGAACTTGG 801 TTGATCTTGC AGGAAGTGAA AACATTGGCC GTTCTGGAGC TGTTGATAAG 851 AGAGCTCGGG AAGCTGGAAA TATAAATCAA TCCCTGTTGA CTTTGGGAAG 901 GGTCATTACT GCCCTTGTAG AAAGAACACC TCATGTTCCT TATCGAGAAT 951 CTAAACTAAC TAGAATCCTC CAGGATTCTC TTGGAGGGCG TACAAGAACA
1001 TCTATAATTG CAACAATTTC TCCTGCATCT CTCAATCTTG AGGAAACTCT 1051 GAGTACATTG GAATATGCTC ATAGAGCAAA GAACATATTG AATAAGCCTG 1101 AAGTGAATCA GAAACTCACC AAAAAAGCTC TTATTAAGGA GTATACGGAG ' 1151 GAGATAGAAC GTTTAAAACG AGATCTTGCT GGAGCCCGTG AGAAAAATGG 1201 AGTGTATATT TCTGAAGAAA ATTTTAGAGT CATGAGTGGA AAATTAACTG 1251 TTCAAGAAGA GCAGATTGTA GAATTGATTG AAAAAATTGG TGCTGTTGAG • 1301 GAGGAGCTGA ATAGGGTTAC AGAGTTGTTT ATGGATAATA AAAATGAACT 1351 TGACCAGTGT AAATCTGACC TGCAAAATAA AACACAAGAA CTTGAAACCA 1401 CTCAAAAACA TTTGCAAGAA ACTAAATTAC AACTTGTTAA AGAAGAATAT 1451 ATCACATCAG CTTTGGAAAG TACTGAGGAG AAACTTCATG ATGCTGCCAG 1501 CAAGCTGCTT AACACAGTTG AAGAAACTAC AAAAGATGTA TCTGGTCTCC 1551 ATTCCAAACT GGATCGTAAG AAGGCAGTTG ACCAACACAA TGCAGAAGCT 1601 CAGGATATTT TTGGCAAAAA CCTGAATAGT CTGTTTAATA ATATGGAAGA 1651 ATTAATTAAG GATGGCAGCT CAAAGCAAAA GGCCATGCTA GAAGTACATA
1701 AGACCTTATT TGGTAATCTG CTGTCTTCCA GTGTCTCTGC ATTAGATACC 1751 ATTACTACAG TAGCACTTGG ATCTCTCACA TCTATTCCAG AAAATGTGTC
1801 TACTCATGTT TCTCAGATTT TTAATATGAT ACTAAAAGAA CAATCATTAG 18 51 CAGCAGAAAG TAAAACTGTA CTACAGGAAT TGATTAATGT ACTCAAGACT 1901 GATCTTCTAA GTTCACTGGA AATGATTTTA TCCCCAACTG TGGTGTCTAT 1951 ACTGAAAATC AATAGTCAAC TAAAGCATAT TTTCAAGACT TCATTGACAG 2001 TGGCCGATAA GATAGAAGAT CAAAAAAAAA GGAACTCAGA TGGCTTTCTC 2051 AGTATACTGT GTAACAATCT ACATGAACTA CAAGAAAATA CCATTTGTTC
- 37 2101 CTTGGTTGAG TCACAAAAGC AATGTGGAAA CCTAACTGAA GACCTGAAGA 2151 CAATAAAGCA GACCCATTCC CAGGAACTTT GCAAGTTAAT GAATCTTTGG 2201 ACAGAGAGAT TCTGTGCTTT GGAGGAAAAG TGTGAAAATA TACAGAAACC 2251 ACTTAGTAGT GTCCAGGAAA ATATACAGCA GAAATCTAAG GATATAGTCA 23 01 ACAAAATGAC TTTTCACAGT CAAAAATTTT GTGCTGATTC TGATGGCTTC 2351 TCACAGGAAC TCAGAAATTT TAACCAAGAA GGTACAAAAT TGGTTGAAGA 2401 ATCTGTGAAA CACTCTGATA AACTCAATGG CAACCTGGAA AAAATATCTC 2451 AAGAGACTGA ACAGAGATGT GAATCTCTGA ACACAAGAAC AGTTTATTTT 2501 TCTGAACAGT GGGTATCTTC CTTAAATGAA AGGGAACAGG AACTTCACAA 2551 CTTATTGGAG GTTGTAAGCC AATGTTGTGA GGCTTCAAGT TCAGACATCA 2601 CTGAGAAATC AGATGGACGT AAGGCAGCTC ATGAGAAACA GCATAACATT 2651 TTTCTTGATC AGATGACTAT TGATGAAGAT AAATTGATAG CACAAAATCT 2701 AGAACTTAAT GAAACCATAA AAATTGGTTT GACTAAGCTT AÁTTGCTTTC 2751 TGGAACAGGA TCTGAAACTG GATATCCCAA CAGGTACGAC ACCACAGAGG ' 2301 AAAAGTTATT TATACCCATC AACACTGGTA AGAACTGAAC CACGTGAACA
2851 TCTCCTTGAT CAGCTGAAAA GGAAACAGCC TGAGCTGTTA ATGATGCTAA 2901 ACTGTTCAGA AAACAACAAA GAAGAGACAA TTCCGGATGT GGATGTAGAA 2951 GAGGCAGTTC TGGGGCAGTA TACTGAAGAA CCTCTAAGTC AAGAGCCATC i 3001 TGTAGATGCT GGTGTGGATT GTTCATCAAT TGGCGGGGTT CCATTTTTCC 3 051 AGCATAAAAA ATCACATGGA AAAGACAAAG AAAACAGAGG CATTAACACA ! 3101 CTGGAGAGGT CTAAAGTGGA AGAAACTACA GAGCACTTGG TTACAAAGAG
3151 CAGATTACCT CTGCGAGCCC AGATCAACCT TTAATTCACT TGGGGGTTGG 32 01 CAATTTTATT TTTAAAGAAA AACTTAAAAA TAAAACCTGA AACCCCAGAA 3251 CTTGAGCCTT GTGTATAGAT TTTAAAAGAA TATATATATC AGCCGGGCGC 3301 GTGGCTCTAG CTGTAATCCC AGCTAACTTT GGAGGCTGAG GCGGGTGGAT 3351 TGCTTGAGCC CAGGAGTTTG AGACCAGCCT GGCCAACGTG CGCTAAAACC 3401 TTCGTCTCTG TTAAAAATTA GCCGGGCGTG GTGGGCACAC TCCTGTAATC 3451 CCAGCTACTG GGGAGGCTGA GGCACGAGAA TCACTTGAAC CCAGAAGCGG
3501 GGTTGCAGTG AGCCAAAGGT ACACCACTAC ACTCCAGCCT GGGCAACAGA 3551 GCAAGACTCG GTCTCAAAAA YAAAATTTAA AAAAGATATA AGGCAGTACT 3601 GTAAATTCAG TTGAATTTTG ATATCTACCC ATTTTTCTGT CATCCCTATA 3 651 GTTCACTTTG TATTAAATTG GGTTTCATTT GGGATTTGCA ATGTAAATAC 3 701 GTATTTCTAG TTTTCATATA AAGTAGTTCT TTTAGGAATT C
2. táblázat: 21. azonosítószámú szekvencia, P.
falciparum szekvenciája (részszekvencia. Genbank Z98551 nyilvántartási szám) '
TTTTTTTTTTTTTATTCCTTGGATGTTCTTGGTAGTTTAAATTTTTTATTTTTGTAGTTTTC TTCTTTTATACGTTTTAAAGCAGGGGATGCCTTTTTAGGAAATGCCCTATTTTCAATAGCTT TAATTTTTGTAGATTGAAATTTATTATTATTATTATTATTATTGTTGTTGTTGTTGTTGTTG TTGTTGTTGTTATTATTTGAATAATTATTTGTTATATGAACATTTTGAACATTTATATTTCT ÍctttCTTTCATATTCTTTTAAACTTGTIACACTCATATTTTCTGTATTTACATCAAATCTTT jTATTATGTTGATTGTTATTTAAATAATTTAATTCTTGAIATGTTTCATCTATTGGTTGTAIA GGATTATCCGTTGTATTCTTATTATATAGCATATATTCATTTAAGGGTAGATTATTGTGATT AGTTTTTACATTTAATTTATTTTTATCACCTTTATTATTTATATTATGAGGTATACTACTAT TCGTTGTATGATCATTTAAACTATTGTAACGAGAGTAATTATTTTCATGCGCTACAATTTTA TCATCTTGAATAAGAAATTGGAAGTTTTCATCGATTTGTTCAAATACTTTACTTAAATCTAT atcatgtgttgttgtaatttgttctatctctttcatcaaggtatttttaacttccaagtata aattttgtcttatgatatcatcattataaagataataattatgatgatcaccttgatctatt ttattatcatcattataaagataataattatgatgatcaccttgatccattttattatcatc attataaagataattattatgatcatgaccttgatccattttattatcatcattataaagat AATTATTATGATCATGACCTTGATCCATTTTATTATCATCATTATAAAGATAATTATTATGA TCATGACCTTGATCCATTTTATTATCATCATAATTATTATTGTCACCATTTTTATTATTGTC atgatcatttttattattgtcaccatttttattattatcatgattatttttattattatcat GATTATTTTTATTATTATCATGATTATTTTTATTATTATCATCATTTTTATTATTATCATAA ttcgtgtcgtaagtcgaatccctatttagtgatgtgattttcatcggagtaaacatatctat gacattcacaaacgtttcccttatcctttgtacatcatcctttatatttagataaaattcat catccatattttccatgagatcataacttgatgtacttggaatgtcttgtaagtaatctttt TTTTTTAATATATCTATTAATTCTGCTATATACATATTACATTTGTTTAAATTTTGTTCAAA TATATTATTAAAAAGTTTTATATTTTCATTAGACTTTAACATATGTATACGACGTCCCCCTT TTTGTTCTTGTGATTCTTTATTTTTATTTTGTAAAATCTTTTCAGATATAACGTTATATAAC TTTCGTTTCTCTATTTTGTTTATATTAGTTTGACTTGTAAAGTTATTTATGATTTTATCAAT ATTTAGATTATTTGTATATAATAAATTATTATAAATATTTAAAGTATCATTTAAACATTTGC TGTGTTCCTTTTCTTCAATATAACTTTTTCTTTTTAAATAAGATAATATGTTATATAAAACA GTATGATAATTTGTTATCTTCCTTTTAATATCATTATTAATATTATTATATTCCTTTTCATC attaatattgcattcagaaaaatgttgtatagtatcatctatcttttttacagaattcataa AAACAGATTTATAATTTTTTTTTGACTTATCATATAATTCTTTATTTAATAAATCGAACTTG TTATTCATTTTTTCATAAATATCTTCCACATTTTTATTTATAAGTAATTCAATATCTTTCAA AATATTTTCTTTAAATTCTTGTATATCTTCATTTATCATTTTTTTATAATTATTAATTATAA TATTATCCTCCTTTTCAAAAACATCATATTTTTTATAAATATATTCAATGTTGTCATTCATA atcttcttgtccttatcccaatgtatatatttttcatgacattttttttctagtaacataaa
- 39 TGATTCGTTTAAAAAAATATGAAATATATTACATATACTTTTAATATATTGTATTAATGATT TTGCATTATATAACTTTTTTTCAGATTCGTGATTATCTAAATTTTGTATAATATCTTCACCT TGTCTATTTAATAATAAATCTTTTATAAATTCTTTATTCTCAGGATAATTAAATGATTCCTC TATATGGTCAAATGGCATCTCATTATTTTCTTCTTTACCATATTGTTTTTGACATGTTTTTC CTTCACCATTTTGTTTTTCACATATTATTCCTTCACCGTTTTGTTTTTCACATATTATCTCG TCACCGTTTTGTTTTTCACATATTATCTTTTCACCACTTTGTTTTTCACATATTATZTCTTC ACCGTTTTGTTTTTCACATATTATCTTTTCACCACTTTGTTTTTCACATATTATCTTTTCAC CACTTTGTTTTTCACATATTATCTTTTCACCA.CTTTGTTTTTCTTTTTTTAATCCGTTTGTA TTATATACACCAATAATTGCTGGCATTTTCTGCTTGGCTTCATCACTTATATGTGGTATGTT TATTTTAGATTGTGATATTTCCTTTTTAATATTTTCGGAGAGAGAAAAGTAATCATGATCAT ATTTTTGTAAAATATCCATATGGTCCAGTATAAAATTCAGAGTATCATTATATTTAAAATTA ATGTTACTATTGAGTTCTTCAAAATGGTTAATATAATCATTGTATGATTTTTTATTTTGTAC 'TAGATAATTTTTGGTATCATCTAAAATGAATAAGATGGTTTTACATATATCGTTTAAAAGAT GATTTTCTTGATGAATATTTTTTTTTATATTTAATAGATTATCATGCATTATATTAGACATA TTTGTTTTAATTTGTTGAAAAGATTTTTTTTGATTTATAAAATTTTCTTCTAAAGAATGATA TTTATTTAATAAGAATTGTGTAATATATTTTTCTTCTATTATTTTTTTAATTAATATTTGAT 'GAAATGCTTGTATATTTTTATATTTTTGAATAGTATCTTTTAAAAAGAAAAATATTTTATTT TGTAGATCATCTGTATTATCCATTTTATTTAATAAATTTTTTATTTTTTTACTTTTTTCAAA TAAAATTTTTTCTTTTTCTAATAATATTTCTTTATTTTTCTTTAGACTATTTTGTATATTAT TATATTCTTCTGTATCAAGATAAACACCTCTCTTTTCTCTGCTTAAATTCAGTGCATTTCTT AACTTTTCGATTTCATTATTTAAATCCTTTATTTTTAATTGTTTCGTTGTTTTTATATTTAT
I CTCGGGTCTATTCTTAATATTCTTAGCTCGAAAGACATAATCTAAAGTGCTTAAAGTCTCAT i CAATACATAAAGAGGAGGGTGATATAGTGGCGACAATAAAAGTCTTCGTTTTCCCACCTAAC j GAATCTTGTAATAATCTGGTTAATTTAGAATCTCTGTAAGGAATATAAGATGAATTCTCAAT • CAACGAATTAATAACTCTACCTAAGGTTAATAAAGATTGATTTATATTACAACTTTCTTGTT
GTCTAATTTTTAAAGAACCATAAGAGCTTTTCAAAGCA.TTTTCACTACCCGCTAAATCAACT j AAATTTAATTTTCCTATTTTTGTTATACTTTCTCCTACATTATTTATATCTTTTATAATTAA ! TGTTATAGTAAAAATCGAATGACTTCTACTCGATTTTTTATTATAAGCCGTTTCAGCTGTCC
TTCTTTTTTTAATAGCTGAACATATAATATAATATATTTCTTCAAAAGAATTAATACTTTTT TCTTCTAACTTATCAACATTTAATCCTTTACTTTTATTATTACTATCTTCATATATTCGAAG TTTCATATTTTCATTTGTTGAACTTAATAAATCACATAATTCTTCATTATATATTTCTAGAT AGCTAATTTTTATATTAAAATCGTACATATTCTTATCATCAAATGTTTGATACATATCATTA TTCCTATTTTTATCTACACTACATTTTTGTACAACATCACAAGTAATATCTCTACTCTTTTC GTTAACTAACAJkATTGTTAGGTTCTTTATTAATTTTTAAATTATTATAAATATCATTTTTAT CAATATTTATTTTGTTACATAATAAATTATTATAATTATTATTAATAATATTATTATTGTTA CCATTAGTTTCCTTATTTATTACATTTATATGTTCGTTATCCTTTTCATCAAATATATTCTT TTTTCCTTTAAAATGTCGAATCTTTTCTTCTTTCCTTTTATTTAATATATCGAATATTCTTT TCGTAACTCGAAATATAAGTCCAGTATCCTCATTCTCACAAAGTTCATAGCAATAGCTGATG
- 40 TCGCTATTAATACTTTCATTCAAATCCACCTTTTTATTATTATCATATTGTTTCAGGTGTTC TAGTATTTTCCCTTCCATAGTATAGGTCTTACCCGTCCCGGTCTGTCCATAGCAGAACAGCG TACAATTGAATCCTTGCAAAACCTGAAGCGGCGAACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATATAT ATATATATGTACATGTATATTTATATGTATATGTATATATATATGTATAGTTATATGTATTT ΊΤΑΤΤΤΤΤΑΤΤΤΤΤΑΤΤΤΤΤΑΤΑΤΤΤΑΤΊΤΓΤΑΤΤΤΤΤΑΤΑΤΤΤΑΤΤΤΤΤΑΤΤΤΤΤΑΤΑΤΤΤ ATTTTTATTTTTATATTTATATTTATATATGTGTAAAATTAACATGGGGAGCAAAGAATTTC CCATATATTTTTTTTTTTTAATCTATTTAATAAAACATTATTATGATATACGCAGAGGTGAT ATATACATGGTATTTATTTATTTTTTTTTATATATTTTTCAT
TTCTTTCGTAGGAATATTCTTTTTTTTTCTGCACATATATTTCACTATCCATATAATATCAT AATACATCATGGAATAATTTATATATATATATATATATATGTATATTTTATTTTTACCTCAT CTACTATTTGGTAAATATAATTATTGAACAAAGTTTTCTGATCCACATCTTTATCACATGCA TAATCAAAACTATATTTTTTTTCGTATATTTCATTGTTTCTATTAATTGTTAATATAACCTC ATTATTATTAATTCGAACTACCTCTTCATTATTTATATCGTTTTTTTCTTTTTCATTTAATG GTCTACACCTTACGATAACTTTTATATTTACGCAACTTGATTTATCATTATTATAAGAATTT CTGAGCATTTTACTTTTATTCAAATAAT
3. táblázat: Szekvencíahomológia: Humán eg5-szekven- cia összehasonlítása Plasmodium falciparum eg5-szekvenciájával χ60 human . SEQ GAATTCCGTCAT.........GGCGTC.... GCAGCC . AAATTC. . . GTCTGCGAAGAAG
PLASMO . SEQ TTTTTTTTTTTTTATTCCriTGGATGTTCTTGGTAGTTTAAATTTTTTATTTTTGTAGTTT human . SEQ .........AAAGA.... GGAGAAGGGGAAGAACATCCAGGTGGTGGTGAGATGCAGACC
PLASMO. SEQ TCTTCTTTTATACGTTTTAAAGCAGGGGATGCCTrTTTAGGAAATGCCCTATTTTCAATA
121 human. SEQ A. TTTAATTTGGCAGAGCGGAAAGCTAGCGCCCAT. TCAATAGTAGAATGTGATCCTGTA PLASMO . SEQ GCTTTAATTTTTGTAGATTGAAATTTATTATTATTATTATTATTATTGT . TGTTGTTGTT
181 human .SEQ CGAAAAGAAGTTAGTGT . ACGAACTGGAGGATTGGCTG. . ACAAGAGCTCAAGGAAAACA PLASMO . SEQ GTTGTTGTTGTTGTTGTrATTATTTGAATAATTATTTGTTATATGAACATTTTGAACATT
241 human . SEQ TACACTTTTGAT......ATGGTGTTTGGAGC.............ATCTACTAAAC. . AG plasmo . seq tatatttctctttctttcatattcttttaaacttgttacactcatattttctgtatttac
301 human . SEQ ATTGA. . TGTTTACCG .... AAGTGTTGTTTG.....TCCAATTCTGGATGAAGTT. AT.
PLASMO . SEQ ATCAAATCTTTTATTATGTTGATTGTTATTTAAATAATTTAATTCTTGATATGTTTCATC
- 41 human. SEQ TATGGGCTATA. . . . ATTGCAC. . . .TATCTTTGC.GTATGGC CAAACT GG
PLASMO . SEQ TATTGGTTGTATAGGATTATCCGTTGTATTCTTATTA^A^ATATATicATTTAAG^ human. SEQ CA.....CTG. GAAAAACTTTTACAATGGA. . . AGGTGAAAGGTC ACCTA
PLASMO. SEQ TAGATTATTGTGATTAGTTTTTACATTTAATTTATTTTTATCACCTTTATTATT^TATT
1. abra: Az 1. és 2. példák eredményeit foglaljuk össze. Az 0Nl-0N12-oligonukleotidok (antiszensz eg5oligonukleotidok) REH-sejtek szaporodására gyakorolt gátló hatását mutatja be (százalékban)
1. kísérlet
2. kísérlet
CF: Cellfectin-összehasonlítás
- 42 SZEKVENCIALISTA (210)1 (211)19 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása:
oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(19) (400)1 cgacgccatg acggaattc (210)2 (211)19 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása:
oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(19) antiszensz antiszensz
- 43 (400)2 aatggtctgc atctcacca (210)3 (211)19 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(19) (400)3 ggctgcgacg ccatgacgg (210)4 (211)12 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság
- 44 (222) (400) (1) . . . (12) atgacggaat te (210) 5 (211) 12 (212) DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása:
oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) antiszensz (400) 5 ccatgacgga at (210) 6 (211) 12 (212) DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása:
oligonukleotid antiszensz
- 45 (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) (400)6 acgccatgac gg (210)7 (211)12 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása:
oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) (400) 7 gcgacgccat ga antiszensz
| (210) | 8 |
| (211) | 12 |
| (212) | DNS |
| (213) | mesterséges szekvencia |
- 46 (220)
| (223) | A mesterséges szekvencia leírása- Anbio dsa. antiszensz oligonukleotid |
(220)
| (221) | kevert sajátság |
| (222) | (1) . . . (12) |
| (400) | 8 |
ggctgcgacg cc (210)9 (211)12 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220)
| (223) | A mesterséges szekvencia leírása- leiidsa. antiszensz oligonukleotid |
220)
| (221) | kevert sajátság |
| (222) | (1).. . (12) |
| (400) | 9 |
ttggctgcga cg i
(210)10 (211)19 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(19) (400)10 cgacgccatg acggaattc (210)11 (211)19 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(19) i
(400)11 aatggtctgc atctcacca (210)12 (211)19 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1) . . . (19) (400)12 ggctgcgacg ccatgacgg19 (210)13 (211)12 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) (400)13 atgacggaat te12 (210)14 (211)12 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) (400) 14 ccatgacgga at 12
| (210) | 15 |
| (211) | 12 |
| (212) | DNS |
| (213) | mesterséges szekvencia |
(220) i
(223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1) ... (12 (400)15 acgccatgac gg12
| (210) (211) (212) (213) | 16 12 DNS mesterséges szekvencia | |||
| (220) (223) | Ά mesterséges | szekvencia | leírása: | antiszensz |
| oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1) ··. (12) (400) 16 gcgacgccat ga | 12 |
(210)17 (211)12 (212) DNS (213) mesterséges szekvencia
- 51 (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) (400)17 ggctgcgacg cc12 (210)18 (211)12 (212)DNS (213) mesterséges szekvencia (220) (223) A mesterséges szekvencia leírása: antiszensz oligonukleotid (220) (221) kevert sajátság (222) (1)...(12) (400)18 ttggctgcga cg12 (210)19 (211) 3784 (212)
DNS
- 52 (213) homo sapiens (400) gaattccgtc atggcgtcgc agccaaattc gtctgcgaag aagaaagagg agaaggggaa60 gaacatccag gtggtggtga gatgcagacc atttaatttg Ogcagagcgg aaagctagcg120 cccattcaat agtagaatgt gatcctgtac gaaaagaagt tagtgtacga actggaggat180 tggctgacaa gagctcaagg aOaaacatac acttttgata tggtgtttgg agcatctact240 aaacagattg atgtttaccg aagtgttgtt tgtccaattc tggatgaagt tattatgggc300 taOtaattgc actatctttg cgtatggcca aactggcact ggaaaaactt ttacaatgga360 aggtgaaagg tcacctaatg aagagtatac ctgggaagag gatOcccttg gctggtataa420 i ttccacgtac ccttcatcaa atttttgaga aacttactga taatggtact gaattttcag480 tcaaagtgtc tctgttggag atctOataat gaagagcttt ttgatcttct taatccatca540 tctgatgttt ctgagagact acagatgttt gatgatcccc gtaacaagag aggagtgata600 attaaOaggt ttagaagaaa ttacagtaca caacaaggat gaagtctatc aaattttaga660
Í aaagggggca gcaaaaagga caactgcagc tactctgatg aatgcaOtac tctagtcgtt720
I cccactcagt tttctctgtt acaatacata tgaaagaaac tacgattgat ggagaagagc780 ! ttgttaaaat cggaaagttg aacttggOtt gatcttgcag gaagtgaaaa cattggccgt840 : tctggagctg ttgataagag agctcgggaa gctggaaata taaatcaatc cctgttgact900 ; ttgggaagOg gtcattactg cccttgtaga aagaacacct catgttcctt atcgagaatc960 i taaactaact agaatcctcc aggattctct tggagggcgt acaagaacaO Otctataatt1020 j gcaacaattt ctcctgcatc tctcaatctt gaggaaactc tOgagtacat tggaatatgc1080 ! tcatagagca aagaacatat tgaataagcc tgOaagtgaa tcagaaactc accaaaaaag1140 ctcttattaa ggagtatacg gaggagatag aacgtttaaa acgagatctt gctgcagccc1200 ! gtgagaaaaa tggOagtgta tatttctgaa gaaaatttta gagteatgag tggaaaatta1260 actgttcaag aagagcagat tgtagaattg attgaaaaaa ttggtgctgt tgagOgagga1320
I getgaatagg gttacagagt tgtttatgga taataaaaat gaacttgacc agtgtaaatc1380 tgacctgcaa aataaaacac aagaaettga aaccaOctca aaaacatttg caagaaacta1440 ; aattacaact tgttaaagaa gaatatatca catcagcttt ggaaagtact gaggagaaac1500 : ttcatgatgc tgccagOcaa gctgcttaac acagttgaag aaactacaaa agatgtatet1560 ί ggtctccatt ccaaactgga tegtaagaag gcagttgacc aacacaatgc agaagctOca1620 : ggatattttt ggcaaaaacc tgaatagtet gtttaataat atggaagaat taattaagga1680 tggcagctca aagcaaaagg ccatgctaga agtacataOa gaccttattt ggtaatctgc1740 tgtcttccag tgtetetgea ttagatacca ttactacagt ageaettgga tctctcacat1800 ctattccaga aaatgtgtcO tactcatgtt tctcagattt ttaatatgat actaaaagaa1860 caatcattag cagcagaaag taaaactgta ctacaggaat tgattaatgt actcaagact1920
Ogatetteta agttcactgg aaatgatttt atccccaact gtggtgtcta taetgaaaat1980 caatagtcaa ctaaagcata ttttcaagac ttcattgaca gOOtggeega taagatagaa2040 gatcaaaaaa aaaggaactc agatggcttt ctcOagtata ctgtgtaaca atctacatga2100 ' actacaagaa aataccattt gttcOcttgg ttgagtcaca aaagcaatgt ggaaacctaa2160 ctgaagacct gaagacaata aagcagaccc attcccagga aetttgeaag ttaatgaatc2220 : tttggOacag agagattetg tgctttggag gaaaagtgtg aaaatataca gaaaccactt2280 agtagtgtcc aggaaaatat acagcagaaa tetaaggata tagtcaOaca aaatgacttt2340 tcacagtcaa aaattttgtg etgattetga tggettetea caggaactca gaaattttaa2400 ccaagaaggt acaaaattgg ttgaagaOat ctgtgaaaca ctctgataaa ctcaatggca2460 acctggaaaa aatatctcaa gagactgaac agagatgtga atctctgaac acaagaacag2520 tttattttOt ctgaacagtg ggtatcttcc ttaaatgaaa gggaacagga acttcacaac2580 ttattggagg ttgtaagcca atgttgtgag gcttcaagtt cagacatcaO etgagaaate2640 agatggaegt aaggcagctc atgagaaaca gcataacatt tttettgate agatgactat2700 tgatgaagat aaattgatag cacaaaatct Oagaaettaa tgaaaccata aaaattggtt2760 tgactaagct taattgettt ctggaacagg atctgaaact ggatatccca acaggtacga2820
| caccacagag gOaaaagtta tttataccca | tcaacactgg | taagaactga | accacgtgaa | 2880 |
| catctccttg atcagctgaa aaggaaacag | cctgagctgt | taatgatgct | aaOactgttc | 2940 |
| agaaaacaac aaagaagaga caattccgga | tgtggatgta | gaagaggcag | ttctggggca | 3000 |
| gtatactgaa gaacctctaa gtcaagagcc | atcOOtgtag | atgctggtgt | ggattgttca | 3060 |
| tcaattggcg gggttccatt tttccOagca | taaaaaatca | catggaaaag | acaaagaaaa | 3120 |
| cagaggcatt aacacaOctg gagaggtcta | aagtggaaga | aactacagag | cacttggtta | 3180 |
| caaagagcag attacctctg cgagcccaga | tcaaccttta | attcacttgg | gggttggOca | 3240 |
| attttatttt taaagaaaaa cttaaaaata | aaacctgaaa | ccccagaact | tgagccttgt | 3300 |
| gtatagattt taaaagaata tatatatcag | ccgggcgcOg | tggctctagc | tgtaatccca | 3360 |
| gctaactttg gaggctgagg cgggtggatt | gcttgagccc | aggagtttga | gaccagcctg | 3420 |
| gccaacgtgc gctaaaaccO ttcgtctctg | ttaaaaatta | gccgggcgtg | gtgggcacac | 3480 |
| tcctgtaatc ccagctactg gggaggctga | ggcacgagaa | tcacttgaac | ccagaagcgg | 3540 |
| Oggttgcagt gagccaaagg tacaccacta | cactccagcc | tgggcaacag | agcaagactc | 3600 |
| ggtctcaaaa ataaaattta aaaaagatat tgatatctac ccatttttct gtcatcccta | aaggcagtac tagttcactt | tOgtaaattc tgtattaaat | agttgaattt tgggtttcat | 3660 3720 |
| ttgggatttg caatgtaaat acOgtatttc | tagttttcat | ataaagtagt | tcttttagga | 3780 3784 |
| attc |
(210)20 (211)5340 (212)DNS (213) Plasmodium falciparum (400) 20 tttttttttt tttattcctt ggatgttctt tcttctttta tacgttttaa agcaggggat gctttaattt ttgtagattg aaatttatta ttgttgttgt tgttgttatt atttgaataa atatttctct ttctttcata ttcttttaaa tcaaatcttt tattatgttg attgttattt attggttgta taggattatc cgttgtattc agattattgt gattagtttt tacatttaat :tgaggtatac tactattcgt tgtatgatca tcatgcgcta caattttatc atcttgaata aatactttac ttaaatctat atcatgtgtt gtatttttaa cttccaagta taaattttgt ttatgatgat caccttgatc tattttatta tcaccttgat ccattttatt atcatcatta tccattttat tatcatcatt ataaagataa ttatcatcat tataaagata attattatga taattattat tgtcaccatt tttattattg ttattattat catgattatt tttattatta tttttattat tatcatcatt tttattatta tttagtgatg tgattttcat cggagtaaac atcctttgta catcatcctt tatatttaga ggtagtttaa attttttatt tttgtagttt 60 gcctttttag gaaatgccct attttcaata 120 ttattattat tattattgtt gttgttgttg 180 ttatttgtta tatgaacatt ttgaacattt 240 cttgttacac tcatattttc tgtatttaca 300 aaataattta attcttgata tgtttcatct 360 ttattatata gcatatattc atttaagggt 420 ttatttttat cacctttatt atttatatta 480 tttaaactat tgtaacgaga gtaattattt 540 agaaattgga agttttcatc gatttgttca 600 gttgtaattt gttctatctc tttcatcaag 660 cttatgatat catcattata aagataataa 720 tcatcattat aaagataata attatgatga 780 taaagataat tattatgatc atgaccttga 840 ttattatgat catgaccttg atccatttta 900 tcatgacctt gatccatttt attatcatca 960 tcatgatcat ttttattatt gtcaccattt 1020 tcatgattat ttttattatt atcatgatta 1080 tcataattcg tgtcgtaagt cgaatcccta 1140 atatctatga cattcacaaa cgtttccctt 1200 taaaattcat catccatatt ttccatgaga .1260
- 54 tcataacttg atgtacttgg aatgtcttgt aagtaatctt ttttttttaa tatatctatt1320 aattctgcta tatacatatt acatttgttt aaattttgtt caaatatatt attaaaaagt1380 tttatatttt cattagactt taacatatgt atacgacgtc cccctttttg ttcttgtgat1440 tctttatttt tattttgtaa aatcttttca gatataacgt tatataactt tcgtttctct1500 attttgttta tattagtttg acttgtaaag ttatttatga ttttatcaat atttagatta1560 tttgtatata ataaattatt ataaatattt aaagtatcat ttaaacattt gctgtgttcc1620 ttttcttcaa tataactttt tctttttaaa taagataata tgttatataa aacagtatga1680 taatttgtta tcttcctttt aatatcatta ttaatattat tatattcctt ttcatcatta1740 atattgcatt cagaaaaatg ttgtatagta tcatctatct tttttacaga attcataaaa1800 acagatttat aatttttttt tgacttatca tataattctt tattteataa atcgaacttg1860 ttattcattt tttcataaat atcttccaca tttttattta taagtaattc aatatctttc1920 aaaatatttt ctttaaattc ttgtatatct tcatttatca tttttttata attattaatt1980 ataatattat cctccttttc aaaaacatca tattttttat aaatatattc aatgttgtca2040 ttcataatct tcttgtcctt atcccaatgt atatattttt catgacattt tttttctagt2100 aacataaatg attcgtttaa aaaaatatga aatatattac atatactttt aatatattgt2160 attaatgatt ttgcattata taactttttt tcagattcgt gattatctaa attttgtata2220 atatcttcac cttgtctatt taataataaa tcttttataa attctttatt ctcaggataa 2280 ttaaatgatt cctctatatg gtcaaatggc atctcattat tttcttcttt accatattgt 2340 ttttgacatg tttttccttc accattttgt ttttcacata ttattccttc accgttttgt 2400 ,ttttcacata ttatctcgtc accgttttgt ttttcacata ttatcttttc accactttgt 2460 'ttttcacata ttatctcttc accgttttgt ttttcacata ttatcttttc accactttgt 2520 i ttttcacata ttatcttttc accactttgt ttttcacata ttatcttttc accactttgt 2580 ttttcttttt ttaatccgtt tgtattatat acaccaataa ttgctggcat tttctgcttg 2640 gcttcatcac ttatatgtgg tatgtttatt ttacattgtg atatttcctt tttaatattt 2700 tcggagagag aaaagtaatc atgatcatat ttttgtaaaa tatccatatg gtccagtata 2760 aaattcagag tatcattata tttaaaatta atgttactat tgagttcttc aaaatggtta 2820 atataatcat tgtatgáttt tttattttgt actagataat ttttggtatc atctaaaatg 2880 .aataagatgg ttttacatat atcgtttaaa agatgatttt cttgatgaat attttttttt 2940 Iatatttaata gattatcatg cattatatta gacatatttg ttttaatttg ttgaaaagat 3000 i tttttttgat ttataaaatt ttcttctaaa gaatgatatt tatttaataa gaattgtgta 3060 i atatattttt cttctattat ttttttaatt aatatttgat gaaatgcttg tatattttta 3120 ;tatttttgaa tagtatcttt taaaaagaaa aatattttat tttgtagatc atctgtatta 3180 tccattttat ttaataaatt ttttattttt ttactttttt caaataaaat tttttctttt 3240 tctaataata tttctttatt tttctttaga ctattttgta tattattata ttcttctgta 3300 tcaagataaa cacctctctt ttctctgctt aaattcagtg catttcttaa cttttcgatt 3360 tcattattta aatcctttat ttttaattgt ttcgttgttt ttatatttat ctcgggtcta 3420 ttcttaatat tcttagctcg aaagacataa tctaaagtgc ttaaagtctc atcaatacat 3480 aaagaggagg gtgatatagt ggcgacaata aaagtcttcg ttttcccacc taacgaatct 3540 tgtaataatc tggttaattt agaatctctg taaggaatat aagatgaatt ctcaatcaac 3600 gaattaataa ctctacctaa ggttaataaa gattgattta tattacaact ttcttgttgt 3660 ctaattttta aagaaccata agagcttttc aaagcatttt cactacccgc taaatcaact3720 aaatttaatt ttcctatttt tgttatactt tctcctacat tatttatatc ttttataatt3780 aatgttatag taaaaatcga atgacttcta ctcgattttt tattataagc cgtttcagct3840 gtccttcttt ttttaatagc tgaacatata atataatata tttcttcaaa agaattaata3900 cttttttctt ctaacttatc aacatttaat cctttacttt tattattact atcttcatat3960 attcgaagtt tcatattttc att'tgttgaa cttaataaat cacataattc ttcattatat4020 atttctagat agctaatttt tatattaaaa tcgtacatat tcttatcatc aaatgtttga4080 tacatatcat tattcctatt tttatctaca ctacattttt gtacaacatc acaagtaata4140 tctctactct tttcgttaac taacaaattg ttaggttctt tattaatttt taaattatta4200
- 55 taaatatcat ttttatcaat atttattttg ttacataata ataatattat tattgttacc attagtttcc ttatttatta ttttcatcaa atatattctt ttttccttta aaatgtcgaa tttaatatat cgaatattct tttcgtaact cgaaatataa caaagttcat agcaatagct gatgtcgcta ttaatacttt ttattatcat attgtttcag gtgttctagt attttccctt gtcccggtct gtccatagca gaacagcgta caattgaatc gaacaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaatatat atatatatgt atgtatatat atatgtatag ttatatgtat ttttattttt ttttattttt atatttattt ttatttttat atttattttt atatgtgtaa aattaacatg gggagcaaag aatttcccat atttaataaa acattattat gatatacgca gaggtgatat tttttttata tatttttcat ttgtttcgta ggaatattct ttcactatcc atataatatc ataatacatc atggaataat atgtatattt tatttttacc tcatctacta tttggtaaat tctgatccac atctttatca catgcataat caaaactata tgtttctatt aattgttaat ataacctcat tattattaat ttatatcgtt tttttctttt tcatttaatg gtctacacct cgcaacttga tttatcatta ttataagaat ttctgagcat aattattata attattatta 4260 catttatatg ttcgttatcc 4320 tcttttcttc tttcctttta 4380 gtccagtatc ctcattctca 4440 cattcaaatc caccttttta 4500 ccatagtaca ggtcttaccc 4560 cttgcaaaac ctgaagcggc 4620 acatgtatat ttatatgtat 4680 atttttattt ttatatttat 4740 atttttatat ttatatttat 4800 atattttttt tttttaatct 4860 atacatggta tttatttatt 4920 ttttttttct gcacatatat 4980 ttatatatat atatatatat 5040 ataattattg aacaaagttt 5100 ttttttttcg tatatttcat 5160 tcgaactacc tcttcattat 5220 tacgataact tttatattta 5280 tttactttta ttcaaataat 5340
Claims (14)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amely egy eg5-öt kódoló szekvencia egy részének felel meg.
- 2. Az 1. igénypont szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amely eg5-öt kódoló szekvencia 8-100 nukleotidjának felel meg.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amely 8-20 nukleotid hoszszúságú.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amely humán eg5-öt és/vagy Plasmodium falciparum eg5-öt kódoló szekvencia egy részének felel meg.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amelynek szekvenciája az 1., 2., 3., 4., 5., 6., 7., 8. vagy 9. azonosítószámú szekvenciák szerinti szekvencia, ahol1. azonosítószámú szekvencia: 5’-CGACGCCATGACGGAATTC-3’2. azonosítószámú szekvencia: 5’-AATGGTCTGCATCTCACCA-3'3. azonosítószámú szekvencia: 5'-GGCTGCGACGCCATGACGG-3'4. azonosítószámú szekvencia: 5’-ATGACGGAATTC-3’5. azonosítószámú szekvencia: 5'-CCATGACGGAAT-3'
- 6. azonosítószámú szekvencia: 5'-ACGCCATGACGG-3'
- 7. azonosítószámú szekvencia: 5'-GCGACGCCATGA-3’
- 8. azonosítószámú szekvencia: 5'-GGCTGCGACGCC-3'
- 9. azonosítószámú szekvencia: 5'-TTGGCTGCGACG-3’6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amelyben egy vagy több módosítás van, ahol minden módosítás egy ugyanolyan szekvenciájú, természetes DNS-ből felépülő oligonukleotiddal öszszehasonlítva egy meghatározott foszfodiészter-internukleozid-hídban és/vagy egy meghatározott, β-ϋ-2'dezoxiribóz-egységben és/vagy egy meghatározott természetes nukleozidbázis-pozícióban található.7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amelyben az oligonukleotid 5'-végén és/vagy 3'-végén található 1-5 terminális nukleotidegység a megfelelő nukleozid(ok) 5'-végén és/vagy 3'-végén lévő, módosított internukleozid-hidakkal van védve .8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amelyben legalább egy, belső pirimidinnukleozid és/vagy a pirimidinnukleozid 5'-végén és/vagy 3'-végén lévő internukleozid-híd módosítva van.9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka, amelyben minden egyes módosítás a többitől függetlenül az alábbiak bármelyike:a) egy nukleozid 3'- és/vagy 5'-végén lévő foszfodiészterhíd kicserélése egy módosított internukleozid-hídra,b) egy nukleozid 3'- és/vagy 5'-végén lévő foszfodiészterhíd kicserélése egy defoszfohídra,c) a cukor-foszfát-vázból egy cukor-foszfát-csoport kicserélése egy másik csoportra,d) egy β-ϋ-2'-dezoxiribóz-egység kicserélése egy módosított cukoregységre,e) egy természetes nukleozidbázis kicserélése egy módosított nukleozidbázisra,f) egy olyan molekulához történő kötés, amely befolyásolja az oligonukleotid tulajdonságait,g) egy 2'5'-kötést tartalmazó oligoadenilátmolekulához vagy származékához történő kötés, adott esetben egy alkalmas kapcsolómolekulán keresztül, ésh) egy 3'-3'- és/vagy 5'5'-inverzió bevitele az oligonukleotid 3’- és/vagy 5’-végébe.
- 10. Eljárás az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származéka előállítására, azzal jellemezve, hogy az alkalmas módon védett monomereket szilárd fázisra kondenzáljuk.
- 11. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotid vagy származékának alkalmazása eg5 expressziójának gátlására.
- 12. Eljárás eg5 expressziójának gátlására, azzal jellemezve , hogy az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotidot vagy származékát egy eg5-öt kódoló nukleinsavval kapcsolatba hozunk, és ahhoz kötjük.
- 13. Eljárás gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotidot vagy származékát fiziológiailag elfogadható hordozóanyaggal és adott esetben kiegészítő anyagokkal keverjük.
- 14. Gyógyászati készítmény, amely legalább egy, az 19. igénypontok bármelyike szerinti antiszensz oligonukleotidot tartalmaz vagy azok bármelyikének származéká.t tartalmazza.A meghatalmazott:DANUBIASzabadalmi és Védjegy Iroda Kft.Dr. Svingor Ádám szabadalmi ügyvivő
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19935303A DE19935303A1 (de) | 1999-07-28 | 1999-07-28 | Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5 |
| PCT/EP2000/007345 WO2001007602A2 (de) | 1999-07-28 | 2000-07-21 | Oligonukleotide zur inhibierung der expression von humanem eg5 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0202794A2 true HUP0202794A2 (en) | 2003-03-28 |
| HUP0202794A3 HUP0202794A3 (en) | 2006-03-28 |
Family
ID=7916259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0202794A HUP0202794A3 (en) | 1999-07-28 | 2000-07-21 | Oligonucleotides for inhibiting the expression of human eg5 |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6472521B1 (hu) |
| EP (1) | EP1204742A2 (hu) |
| JP (1) | JP2003505080A (hu) |
| KR (1) | KR20020033744A (hu) |
| CN (1) | CN1165617C (hu) |
| AR (1) | AR024953A1 (hu) |
| AU (1) | AU6568200A (hu) |
| BR (1) | BR0013180A (hu) |
| CA (1) | CA2380192A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ2002324A3 (hu) |
| DE (1) | DE19935303A1 (hu) |
| EE (1) | EE200200044A (hu) |
| HK (1) | HK1048337B (hu) |
| HR (1) | HRP20020075A2 (hu) |
| HU (1) | HUP0202794A3 (hu) |
| IL (1) | IL147541A0 (hu) |
| MX (1) | MXPA02000817A (hu) |
| NO (1) | NO20020365L (hu) |
| NZ (1) | NZ516839A (hu) |
| PL (1) | PL353733A1 (hu) |
| RU (1) | RU2249458C2 (hu) |
| SK (1) | SK1162002A3 (hu) |
| TR (1) | TR200200201T2 (hu) |
| WO (1) | WO2001007602A2 (hu) |
| YU (1) | YU91901A (hu) |
| ZA (1) | ZA200200655B (hu) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6617115B1 (en) * | 1999-10-27 | 2003-09-09 | Cytokinetics, Inc. | Methods of screening for modulators of cell proliferation |
| US6440686B1 (en) | 2000-06-15 | 2002-08-27 | Cytokinetics, Inc. | Methods for screening and therapeutic applications of kinesin modulators |
| US6900214B2 (en) | 2001-03-29 | 2005-05-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Cyano-substituted dihydropyrimidine compounds and their use to treat diseases |
| US6809102B2 (en) | 2001-03-29 | 2004-10-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Cyano-substituted dihydropyrimidine compounds and their use to treat diseases |
| US20040009156A1 (en) * | 2001-10-12 | 2004-01-15 | Christoph Reinhard | Antisense therapy using oligonucleotides that target human kinesin genes for treatment of cancer |
| US7163927B2 (en) * | 2002-05-23 | 2007-01-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of kinesin-like 1 expression |
| US7199107B2 (en) | 2002-05-23 | 2007-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of kinesin-like 1 expression |
| WO2004074301A2 (en) * | 2003-02-14 | 2004-09-02 | Smithkline Beecham Corporation | Differentially expressed nucleic acids that correlate with ksp expression |
| US7662581B1 (en) | 2003-12-18 | 2010-02-16 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Eg5 co-crystals |
| TW200600785A (en) * | 2004-03-23 | 2006-01-01 | Oncotherapy Science Inc | Method for diagnosing non-small cell lung cancer |
| US7700567B2 (en) | 2005-09-29 | 2010-04-20 | Supergen, Inc. | Oligonucleotide analogues incorporating 5-aza-cytosine therein |
| EA014886B1 (ru) * | 2006-03-31 | 2011-02-28 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА Eg5 |
| RU2464030C2 (ru) * | 2006-05-26 | 2012-10-20 | Регадо Байосайенсиз, Инк. | Введение противосвертывающей системы reg1 |
| WO2007140000A2 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Regado Biosciences, Inc. | Administration of the reg1 anticoagulation system |
| AU2008326187B2 (en) * | 2007-11-06 | 2014-12-04 | Adiutide Pharmaceuticals Gmbh | Immune stimulatory oligoribonucleotide analogs containing modified oligophosphate moieties |
| DE102010007562A1 (de) * | 2010-02-10 | 2011-08-11 | sterna biologicals GmbH & Co KG, 35043 | Dermatologische, pharmazeutische Zusammensetzung geeignet für Oligonukleotide |
| LT2750768T (lt) | 2011-08-30 | 2019-02-11 | Astex Pharmaceuticals, Inc. | Decitabino darinio kompozicijos |
| US9498540B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-11-22 | Novartis Ag | Cell proliferation inhibitors and conjugates thereof |
| RS60796B1 (sr) | 2013-05-01 | 2020-10-30 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Kompozicije i postupci za modulaciju ekspresije apolipoproteina (a) |
| AU2014312196C1 (en) * | 2013-08-28 | 2019-12-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of prekallikrein (PKK) expression |
| KR20160062069A (ko) * | 2013-10-11 | 2016-06-01 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | Ｃ９ｏｒｆ７２ 발현을 조절하기 위한 조성물 |
| SI3137596T1 (sl) * | 2014-05-01 | 2019-08-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Sestavki in postopki za moduliranje izražanje faktorja B komplementa |
| CN108024535A (zh) | 2015-07-02 | 2018-05-11 | 大塚制药株式会社 | 冻干药物组合物 |
| RU2020108580A (ru) | 2017-08-03 | 2021-09-03 | Оцука Фармасьютикал Ко., Лтд. | Лекарственное соединение и способы его очистки |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0171066A3 (de) | 1984-08-09 | 1989-02-01 | Siemens Aktiengesellschaft | Verfahren und Schaltungsanordnung zum Adressieren von Signalabgabe-/Signalaufnahmeeinrichtungen von einer zentralen Verarbeitungseinrichtung her |
| ATE151076T1 (de) | 1990-07-02 | 1997-04-15 | Hoechst Ag | Oligonucleotid-analoge mit terminalen 3'-3'-bzw. 5'-5'-internucleotidverknüpfungen |
| US6033909A (en) | 1992-01-22 | 2000-03-07 | Hoechst Aktiengesellschaft | Oligonucleotide analogs, their preparation and use |
| FI115214B (fi) | 1992-01-22 | 2005-03-31 | Hoechst Ag | Menetelmä oligonukleotidianalogien valmistamiseksi ja niiden käyttö |
| DK0593901T3 (da) | 1992-09-24 | 1997-10-27 | Hoechst Ag | Oligoribonucleotid- og ribozym-analoge med terminale 3-3- og 5-5-bindinger. |
| GB9311113D0 (en) * | 1993-05-28 | 1993-07-14 | Medical Res Council | Probes |
| DE4321946A1 (de) | 1993-07-01 | 1995-01-12 | Hoechst Ag | Methylphosphonsäureester, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| US5801154A (en) * | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
| DE4338704A1 (de) | 1993-11-12 | 1995-05-18 | Hoechst Ag | Stabilisierte Oligonucleotide und deren Verwendung |
| DE4408528A1 (de) | 1994-03-14 | 1995-09-28 | Hoechst Ag | Peptid-Oligonucleotid-Derivate, deren Herstellung und Verwendung |
| DE4415370A1 (de) | 1994-05-02 | 1995-11-09 | Hoechst Ag | Modifizierte Oligonukleotide, deren Herstellung sowie deren Verwendung |
| DE4438918A1 (de) | 1994-11-04 | 1996-05-09 | Hoechst Ag | Modifizierte Oligonukleotide, deren Herstellung sowie deren Verwendung |
| DE19502912A1 (de) | 1995-01-31 | 1996-08-01 | Hoechst Ag | G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide |
| DE59607750D1 (de) | 1995-03-13 | 2001-10-31 | Aventis Pharma Gmbh | Phosphonomonoesternnukleinsäuren, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
| US6309821B1 (en) * | 1996-05-16 | 2001-10-30 | Incyte Genomics, Inc. | DNA encoding a PAC10 human homolog |
| AU8656098A (en) * | 1997-07-23 | 1999-02-16 | Brigham And Women's Hospital | Lens epithelial cell derived growth factor |
| JP2002519000A (ja) * | 1998-01-28 | 2002-07-02 | カイロン コーポレイション | ヒト遺伝子および遺伝子発現産物ｉｉ |
-
1999
- 1999-07-28 DE DE19935303A patent/DE19935303A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-07-21 NZ NZ516839A patent/NZ516839A/en unknown
- 2000-07-21 RU RU2002105021/15A patent/RU2249458C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-21 EE EEP200200044A patent/EE200200044A/xx unknown
- 2000-07-21 TR TR2002/00201T patent/TR200200201T2/xx unknown
- 2000-07-21 JP JP2001512871A patent/JP2003505080A/ja not_active Withdrawn
- 2000-07-21 HK HK03100581.2A patent/HK1048337B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-07-21 WO PCT/EP2000/007345 patent/WO2001007602A2/de not_active Ceased
- 2000-07-21 CZ CZ2002324A patent/CZ2002324A3/cs unknown
- 2000-07-21 IL IL14754100A patent/IL147541A0/xx unknown
- 2000-07-21 BR BR0013180-6A patent/BR0013180A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-21 MX MXPA02000817A patent/MXPA02000817A/es unknown
- 2000-07-21 KR KR1020027001188A patent/KR20020033744A/ko not_active Ceased
- 2000-07-21 PL PL00353733A patent/PL353733A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-07-21 HU HU0202794A patent/HUP0202794A3/hu unknown
- 2000-07-21 AU AU65682/00A patent/AU6568200A/en not_active Abandoned
- 2000-07-21 HR HR20020075A patent/HRP20020075A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2000-07-21 CA CA002380192A patent/CA2380192A1/en not_active Abandoned
- 2000-07-21 YU YU91901A patent/YU91901A/sh unknown
- 2000-07-21 EP EP00953119A patent/EP1204742A2/de not_active Withdrawn
- 2000-07-21 SK SK116-2002A patent/SK1162002A3/sk unknown
- 2000-07-21 CN CNB008108293A patent/CN1165617C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-07-26 AR ARP000103872A patent/AR024953A1/es unknown
- 2000-07-27 US US09/627,122 patent/US6472521B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-01-23 NO NO20020365A patent/NO20020365L/no unknown
- 2002-01-24 ZA ZA200200655A patent/ZA200200655B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AR024953A1 (es) | 2002-10-30 |
| HUP0202794A3 (en) | 2006-03-28 |
| SK1162002A3 (en) | 2002-06-04 |
| HRP20020075A2 (en) | 2005-10-31 |
| CN1367828A (zh) | 2002-09-04 |
| NO20020365L (no) | 2002-03-25 |
| NZ516839A (en) | 2004-04-30 |
| RU2249458C2 (ru) | 2005-04-10 |
| JP2003505080A (ja) | 2003-02-12 |
| YU91901A (sh) | 2003-02-28 |
| TR200200201T2 (tr) | 2002-05-21 |
| NO20020365D0 (no) | 2002-01-23 |
| DE19935303A1 (de) | 2001-02-08 |
| PL353733A1 (en) | 2003-12-01 |
| CA2380192A1 (en) | 2001-02-01 |
| CZ2002324A3 (cs) | 2002-05-15 |
| HK1048337B (zh) | 2005-02-25 |
| BR0013180A (pt) | 2002-04-09 |
| EE200200044A (et) | 2003-06-16 |
| MXPA02000817A (es) | 2002-07-30 |
| WO2001007602A3 (de) | 2001-05-17 |
| ZA200200655B (en) | 2003-09-23 |
| IL147541A0 (en) | 2002-08-14 |
| EP1204742A2 (de) | 2002-05-15 |
| AU6568200A (en) | 2001-02-13 |
| KR20020033744A (ko) | 2002-05-07 |
| US6472521B1 (en) | 2002-10-29 |
| CN1165617C (zh) | 2004-09-08 |
| HK1048337A1 (en) | 2003-03-28 |
| WO2001007602A2 (de) | 2001-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUP0202794A2 (en) | Oligonucleotides for inhibiting the expression of human eg5 | |
| CA2398432C (en) | Modulation of oligonucleotide cpg-mediated immune stimulation by positional modification of nucleosides | |
| EP0979869A1 (en) | Short oligonucleotides for the inhibition of VEGF expression | |
| JP2002534073A (ja) | 新規抗アポトーシスｂｃｌ−２−関連タンパク質のアンチセンスモジュレーション | |
| JP2002539846A (ja) | インターロイキン−５シグナルトランスダクションのアンチセンスモジュレーション | |
| AU2001257366A1 (en) | Modulation of oligonucleotide CpG-mediated immune stimulation by positional modification of nucleosides | |
| WO2001083503A2 (en) | MODULATION OF OLIGONUCLEOTIDE CpG-MEDIATED IMMUNE STIMULATION BY POSITIONAL MODIFICATION OF NUCLEOSIDES | |
| AU765928B2 (en) | Antisense modulation of transforming growth factor-beta expression | |
| US6878547B1 (en) | Antisense oligonucleotides against tenascin for treating vitiligo | |
| EP0978561A1 (en) | Antisense oligonucleotides for the inhibition of VEGF expression | |
| AU2002325305B2 (en) | Novel oligoribonucleotide derivatives for the targeted inhibition of gene expression | |
| MXPA01000908A (en) | Short oligonucleotides for the inhibition of vegf expression | |
| CZ2001454A3 (cs) | Krátké oligonukleotidy pro inhibici exprese VEGF, způsob jejich přípravy a jejich použití | |
| MXPA01000910A (en) | Antisense oligonucleotides for the inhibition of vegf expression | |
| CZ2001419A3 (cs) | Oligonukleotidy pro inhibici exprese VEGF, způsob jejich přípravy a jejich použití |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA9A | Lapse of provisional patent protection due to relinquishment or protection considered relinquished |