HU229161B1 - Lipophilic diesters of chelating agents - Google Patents

Lipophilic diesters of chelating agents Download PDF

Info

Publication number
HU229161B1
HU229161B1 HU0003517A HUP0003517A HU229161B1 HU 229161 B1 HU229161 B1 HU 229161B1 HU 0003517 A HU0003517 A HU 0003517A HU P0003517 A HUP0003517 A HU P0003517A HU 229161 B1 HU229161 B1 HU 229161B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
group
formula
och
bapta
diesters
Prior art date
Application number
HU0003517A
Other languages
English (en)
Inventor
Alexander Kozak
Israel Shapiro
Original Assignee
Dpharm Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dpharm Ltd filed Critical Dpharm Ltd
Publication of HUP0003517A2 publication Critical patent/HUP0003517A2/hu
Publication of HUP0003517A3 publication Critical patent/HUP0003517A3/hu
Publication of HU229161B1 publication Critical patent/HU229161B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/16—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by amino or carboxyl groups, e.g. ethylenediamine-tetra-acetic acid, iminodiacetic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/76—Metal complexes of amino carboxylic acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

A találmáuy keíátsépzöszer llpofii diésztereire. e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készt;méoyek;e, valamint e vegyületek alkalmazására vonatkozik, B vegyületek alkalmazása során kétértékű fémionok abttormúlis konce«tráciájával, különösen sejten kelőit kaUiumionok megnövekedett koncentrációjával kapcsolatos betegségek vagy reudellenességek kezelésére szolgáló gyógyászati készítményeket állítunk elő, A teláhnátty közelebbről l ,.2-bí8z{2-am:t.oo•te;i;>xi}-eí;tn-N,N,NI,K<-tetraeeetsav (ÖAPFA) dtésztereire vonatkozik, amelyek kétértékű fémionok kel átképzőinek stabil, lépői';! származékai.
Fémionok., .így kaié int»-,, mangán-., magnézium-, réz-, cink- és vasio-nok sarkalatos szerepet játszanak biológiai rendszerekben proteíusaerkezet, enzimaktivitás és sejt sztorii jelzések szabályozása útján. Különféle betegségek vágykóros állapotok, így az agy és szív elégtelen vérellátása, hüdés, szívtzo-minfarktus, epilepszia, krónikus idegdegenerációs betegségek, többek között az Aizhetmer-kór és Parklason-k-ör, valamint az aktit gyulladás vélhetően kapcsolatban vau a .sejten belüli kateíamkonceKtráeió abnormális megnövekedésével. Egyéb, idegsejtek és izmok túlságos aktivitásával kapcsolatos betegségek, többek között, az akaratlan, vizeletürítés, megnövekeáett pro-sztata, izomgörosök, ötöér'í magas vérnyomás,, asztma és túíérzekeny bél szintirö-ma kétértékű Ionok, így 'kalcium· és cinkionok sejten belüli: megnőv-eke-detí koncentrációjával hozható kapcsolatba,
A sejtben lévő kalcium - a sejt által elszenvedett kezdeti rohamtól függetlenül - a sejthalál fontos tényezője. Szerepet játszhat célsejtek károsodása során limfocitak és ölősejtek által közvetített sejthalálban, szervátúlt-etés során lejátszódó szer '/károsodásban és egyéb típusú szöve-tkárosodásban, beleértve az elégtelen vérellátással kapcsolatos rohamokat, -Szővetsérülések elleni védelem céljából vagy szóvetk-árosod-ások csökkentésére javasoltak ka'lciumcsatorna-biokkolökat vagy sejthártya számára átjárható alakban lévő ka 1c lom-ke iát képzőket.
Elégtelen vérellátás során bekövetkező sejtkár-osodás- másodlagos lehet kalcium ionok bejutásához és/vagy sejtett belüli leadásához viszonyítva [CitoL Trends Neurosei,, tt, 4ÓS-4Ő9' (1 75$k); Sicsjo -és Stbíth; .Arzneíroitteíforschung,. 41, 2Sk-292 tT99f .}|. Hasonlóképpen, fontos szerep tulajdonít ható kalcium bejutásának epilepsziás rohamok kialakulásában is. Bár a rejtett belüli kalcium jelentős része sejtett beiül táróit anyagból ered, az utóbbi időben folytatott kutatások szénát kalcium bejutását blokkoló anyagok görcsoldó hatásúak lehetnek íMeyer; Rraia Rés, Rév. Í4, 227-243 í iüábíj.
Ennek megfelelően bizonyos lörmakoíögíai elgondolásoké;: dolgoztak ki a sejtek belaej-ébea lévő kalz-ent kóros felhsdmo-ződásátsak maggá;Sására voey ke. / ♦ «ΦΚ« 99 99 * * *« 9
9 9 9 9 X * ♦ * * ♦ * ♦ * χ φ 99 999 * 9 9
9 9 9 9 9 Λ 9 9 999
99 9 9 99 99 99 9 9 99 Φ zelésére, amely sejten belől tárolt kslcbm kóros leadásából vagy a sejtekbe kar os mértékű k a1 c i u m be jut ás bó-I e red.
Kalciummal kapcsolatos rendel leu-ességek kezelésére jelenleg szokásos vagy potenciálisan hasznos hatóanyagok a következők: (i) kalcium-csatornát bbAkoio anyagok, iAi) a kalctnmegyensúiy· a sejten belüli kakiumtároló helyek. módosításd állal befolyásoló ható-anyagok és (Ili; sejten belől kalcium-mai keiátoi képző szerek. A kilinlkai gyakorlatban használt, kalciumcsatornát blokkoló anyagokra példa a verapamíl, ntfedip-tn és di-ltiazem, ilyen vegyületek alkalmazásával kapcsolatos fő toxikus- hatások a tü-lságos ért-ágit-ás, az tzosnesszebóződás erejének csökkentése, az ü rege-som ők arányának csőkkenté-se és A-V csomók vezetési zavarai. A kalcium mobilizálását és/vagy maszkolását befolyásoló hatóanyagok, Így a kaferu-mcsatornát blokkoló anyagok specifikussága szűk..
A kalciumra nézve legnagyobb affinitáséi és legszelckíívebb kelét-képzők között vannak az ismert 1,2-bi.S:Zf2-amjHo-fen©.xi.-eíán)-Ν,Ν,Μ’,N’-tetra.ece.uav (BAPT.A1 különböző szármszékao .[Tatén: Bíoehem. 19, 2.596 (198001. BAPTA különböző, fluoreszkáló hatású és egyéb reakció-képes származékai' a. technika állásából ismertek (US 4603299, US 4 849 362, US 5 049 673 ós US 5 453 5 171. A fen-j irodalmi forrásokból ne-m ismert a keiátképző stabil diészsere.
Kalcium kel-átképzők alkalmazása emlős sejtekben bekövetkező károsodás csökkentésére ismerhető- meg a WÖ 94/08573 dokumentumból, ahol klinikai kivánalmaknak megfelelő előveg-yűíetekként- kalcium kelátképzőszerek sejthár* tyán áthatoló észtereinek alkalmazását írják le. Kalcium- és egyéb kétértékű fs.m-t-ono-.k sej (hártyán átjüiő, rendelkezésre álló ke-látképzől többek között acetoixí-metil- észterek, ig y eííléngíikoi-b!»g(2-amino-eíü)-óíer-N,N.N’,N’-tetraecetsa v-a-cet-oxl-medí-észter (Εΰ'ΤΑ- A.M4, eti-l-én-á-iamin-tetraecets-av-acetoxí - m e-ti 1 -é s z t e r f E D T A - A M} és 1,2 - b i s z i2 · a mi η o - f e η ο x i) - e t á η - N., N, N ’, N ’ -tetraeeeisav-ace-toxt-melil-észter (BAFTA-AMj. Ezek az ismert komplex molekulák mindenütt jelen lévő e-szteráznk által feltárt el öv egyöletek, következésképpen a sejtek közötti térben lévő kelátképzök aktiválódnak. így ezen vegy illetek eszterázérzékeny-sége fiz-ioió-giai- kőrüllmények között szabad BAPTA nagy keringési koncentrációjához' és a célzott helyen a hatóanyag, '.kis hatásosságához vezet. Ennek megfelelően SAPTA-AM viszonylag nagy terápiás adagolásban has-ználandó, -ami fnxikassá-ggal jár együtt. Ennek alapján igétsv mutatkozik javi-ott kelátképzőszerek iránt.
A fentiek alapját! a találmány stabil, (b) bi.droxtveg.yűle.ttei kétszereseit észterezett fa) karbonsavak és gyógyászatilag elfogadható- sóik, ahol fa) kétértékű fémionok 1 BOUU-CH^vr'^-A-N-i-UHjCOOMU általános köp le tíl, gyö-zyászaülag elfogadható kelátképzőszete, amely képletben A jelentése telített vagy teli· etlen, alifás, arumás vagy heterociklusos kapusolőcsoport. amely a képíetben feltőnte-tett két nstrogé-aatotncst közvetlenül összekötő láncban 2-8 szénatoin<>t tartalmazó folytonos lánc. amelyet 2-4 oxigénatom szakit meg, Téliévé. hogy a képletben lAküníereu két irltrogé-ouomhoz kapcsolódó lánc tagok ox-igé-natotntói eltérőek, és (bj egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen alkanol-. a«nno-alkaaöl-c.s.opor>: és helyettesített vagy he-lyettesitelísn ari:l~ -alkanol-csoporto-k közöl választott csoportot tartalmazó. gyögyássatrlag elfősadható· alkohol,
A találmütty előnyös kiviteli alaksai szerinti kelátkőpzőszerek diészterei; etilén--1,2őioí-bi»z(2-anríno-etíb-éteF)-N.N.N\:N’ -tetraecessav, különösen 1,2- b I s z (2 - a m i η o - f e η ο x i) - e t á r - N, N, N'. N' -t c 5 r a e c e t s a v d ί é s x í e re i,
Még előnyösebb kivire! I alakjának rnegfe-lelö-en a találmány ííi általános képietü vegyületek.
XűOGHp
MOOCCHo
OCH2C.K2O-QH, — N — cxcoox
Π) a .re sly k ép leiben
X jelentése általános képietü csoport, ahol n érték-e l'-től 10-ig terjedő szánt, , (€ηΗ:;„,.( HÍbíCKj),, ál-taláoo-s képietü csoport, ahol n értéke 1-tÖ! 6-íg terjedő szám, és m értéke t-től 6-ig terjedő -szánt, vagy helyettesített vagy helyettesít-ellen Ar CH> általános képietü csoport, és
M jelentése fiziológiailag elfogadható k&tson, ahol az aromás gyljrot! lévő heiyotíesitök orto-helyzetben vannak.
A találmány szerinti előnyös vegyületek olyan (I) általános képietü vegyülitek, ahol X jelentése a következő csoportból választott: C>H5, 1C.tFí-0, C-Htj, CjH;-, CHsCf.Hj és (€li;,)?N€íí>CHj képietü csoport,
Legelőnyösebbek az olyan ti) általános képietü vegyületek, ahol X jelentése a kővetkező csoportból választott: C/b, CJi-, C'4-/, -C--Hi5, C$lii?, .képietü csoport.
A találmány szerinti bizonyos gyógyászati készít menyekhez legelőnyösebb az az (!) általános képietü vegyület, ahol Y jelentése- C„H;? képietü csoport
A jelen találmány vonatkozik a (Ili általános képietü vagy öletek diésztereire
V 4*
(Π) amely képletben
V jelentése CsBín,; }(OCH éhalánes képletó csoport, ahol n értéke 1«tói 2Ö-íg terjed» szám és m értéke 1-tÖl ő-lg terjedő szám és M jelentése fiziológiailag elfogadható kation, .A találmány szerinti előnyös vegyületek olyan (11) általános képletű vegy öletek, ahol Y jelentése a következő csoportból választott: CHsiOCH2CH2! CjHsÖCBjCBí, CsH.OCH.CHj, C4B«OCB2CH2, €7HiSOCH2CH2, CAjOCIUCHj, CrsUsiGCHíCl-h, € nMtrOCWCH;,, C,3HJ7OCH2CH2, CH3(OCtUCIbb, C^HXOCH.CH,),, C4MOCH2€H2)2, CSH U(OCH2CH,)2, CjHísCOCÍ-hCHjfo, CtHn(pCH2CH2).2, CSöH2í<.OCH.2.CH2}2, CHs(OCH2CH2)3, és C^HLisfOCHjCHíb,
Még előnyösebbek az olyan (il) általános képletű vegyületek, ahol Y jelentése a kővetkező csoportból választott: CsBi?Ök'I-I3CH2. <Xo.H2»OCH2C'K2, CjUIrsOCIhCBj, C,sHS2O-Cií2CH2, CXWOClBeifoh és C3ÖH2!Í{OCH2CH2)2.
A találmány szerűit! bizonyos gyógyászait készítményekhez legelőnyösebb az a (11) általános képletö vegyület, ahol Y jelentése C2H}7ÖCH2CH2 képletö csoport..
A találmány ezenkívül gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként találmány szerinti kelátképzőszer stabil, lipofil diészterét tartalmazza gyógyászatílag elfogadható hígító vagy hordozó mellen. A gyógyászati készítmény lehet folyékony vagy szilárd adagolási alakban., é:s beadható orálisan, páréntcrálísan vagy intranazálisan.
A találmány szerinti kelátképzőszerek lipofil diésztersí hasznosak fémionokkal kapcsolatos rendellenességek, így mangán-,, magnézium-, réz-, cink-, vas-, kadmintn-, higany-, kobalt- és különösen kalciomionok abnormális koncentrációjával kapcsolatos rendellenességek kezelésében vagy megelőzésében. Ezért a találmány továbbá a kelátképzőszerek lipofil dlészterelnek alkalmazása kétértékű fémionok feleslegével kapcsolatos betegség vagy rendellenesség kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására. A kezelés szerint szükség esetét! az egyeditek a kétértékű ion gyógyászatilag elfogadható kelátképzőszerének stabil, lipofil észterét terápiásán hatásos mennyiségben keli beadagolni.
A találmány továbbá a találmány szerinti kelátképzőszerek lipofil diészíereinek alkalmazása különösen sejten belüli kaleiamionok feleslegével kapcsolatos betegség vagy .rosdellene-s-ség, Így agy és szív elégtelen vérellátásra, hüdés, szívIzctninl'arfctus.. epilepszia, Alzbeimer-kór, Farkinson-kór, akut gyulladás,. akaratlan vlzeletümiés, pros-ztaíaraegnagyobbodás, ízomgöres., ütőéri magas vérnyomás, asztma és tnlérzékeny bél szindróma kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására, A találmány szerint? gyógyászati készítmény olyan mennyiséget adjak be arra szoruló betegnek, amely a találmány szerint! keiátképzőszer gyógyászatílag elfogadható áté-szterének terápiásán hatásos mennyiségét tartalmazza, A találmány szerinti vegyületek egyéb gyógyászati kezelésekben, igy szívsebészeti műterek esetén is hasznosak,
Λ találmányt a következőkben részletesebben ismertetjük, ennek során a csatolt rajzokra is hivatkozunk.
Az 1A-C ábrák 3 kétértékű fémion kottcenirácíóváhozásaii tüntetik fel vizes oldatokban (üres jelek) és oktasd oldatokban (tele jelek} 8APTA-diokti 1-etiiéngiiko 1-észter ('DP-BAPT'A~9'9; négyzetek} vagy BAPTA (háromszögek) különböző koncentrációinak esetén a következők szerint: A. - Fe*’, 8 - Z,n' cs C - Ca' .
A 2. ábra 8ABTA-dietíl-észter (DT-BAPTA-23} hatását tünteti lei tenyésztett hippocampns idegsejtekben a sejtközi Ca''-koncentrációra hiuo~3/AM színezékkel végzett fluoreszcenclás vizsgálatok alapján.
A 3, ábrán 5 tenyésztett luppocampus idegsejt-tenyészetböl átlagolással meghatározott flaoreszeenclaváltozások (A F/F) diagramja látható Flu.o-3/ΑΜ színezékkel végzett vizsgálatok alapján, amelyek DP-8APTA-99 különböző (0,1: pg/'ml, I gg/ml és 10 pg/nrl) koncentrációinak hatását szemléltetik a sejten belüli Ca -koncentráció kálium által kiváltott növekedésére. Az ábrán bejelölt csillag K'-impuk;ssí jelöl.
A 4. ábra Na/K-ATBáz aktivitását tünteti fel fhatóanyag nélküli ellenőrző minta %-ában) egér agy kéreg-homogesizátamábnn ΒΑΡΎA-dietsI-észter ÍDP-SAPTA-27} különböző koncentrációi esetén mérve.
Az 5. ábra stimulált, tenyésztett szívizomsejlekben a működési membránpotenciált ábrázolja a következő típusú előinkubálást követően: I - ellenőrző minta hozzáadott anyag nélkül, 2' - lő'' mol/1 ouabasa la dg/rd/s gyűszűvirágban található származékát, 6 perc, 3 - íiT'’ mol/1 oaabain, lő perc, 4 - 10* mol/1 ouabaín. 13 perc, 5 - 10' mol/1 ouabata e Írd mg/ml DB-S AFT A-23, 33 pere,
A ő. ábra giuiatnáttal kiváltót:· sejthalált ábrázol a ghítaraáí által kiválton roham előtt l órával hozzáadott különböző koncentrációjú DF-BAFT A-99 jelenlétében,
A 7. ábra giuíanrátíai kiváltott sejthalált ábrázol a g tűt a mát által kiváltott roham ntán a feltüntetett különböző időpontokban hozzáadott különböző koncentrációjú DB-13AFTA-99 jelenlétében,
A 8. ábrán globális előagyi isémiás követően 24 óra múlva mongol homoki patkányok szérumában mát·, Idegsejtre specifikus enoláz (NSE) aktivitása lát*· * 4 X ♦· ♦ # φ
W * 4 4 ♦ * · » * * 4 *
X 4 ♦ « « « 4 φ Λ β * X * * » » 4 4 4 4 ♦ *Χ44 «** 4» 4« íf <-« '««:«>'« 9 ható kezelésük függ.vényébo-n. A > 0 és t-í-5b jelzések óráfea.a adják meg
BAPTA-dioktii-eszter (ÖP - B AETA-öÖ, szürke oszlopok) és 8APTA-diokt 11-et i iétigiikol-észíer (ÖP-8APTA-99, fekete oszlo-pok) • ntraperitoneáíls beadását reperfúziő kezdetéhez viszonyúvá.
A 9A és ü8 ábra globális elöagyi isémlát: követően 24 és 72 óra múlva mongol homoki patkányok szórutnábas mért, idegsejtre specifikus sno'láz (MSE) aktivitást tünteti fel. DP-B APTA~99 (sötét hasábok) orális beadása két séma szerint történik:: A - ö.o mg/kg dózis a. a vér újbóli áramlásának megindulása kezdete előtt 4 órával, amit a a ver újbóli áramlásának megindulása kezdetekor további 0,5 mg/kg dózis követ; B - naponta 0,5 mg/kg az isémlát kővető 3 napon át, A világos hasábok hordozó-oldattal kezelt kotnrollállatokbau mutatják az MSE aktivitást.
A 10. ábra 20 perc globális etoagyi isémlát kővetően mongol homoki patkányok túlélési idejét tünteti fel óra mértékegységben. Az állatoknak a a vér újbóli áramlásának megindulása kezdetekor egyetlen dózisban jatraperitonoálisan vagy hordozóé Mator (fehér oszlop) vagy 10 ug/kg IkB-BAETA-ÚO hatóanyagot (szürke oszlop) vagy DP-BAPTA-99 hatóanyagot (sötét oszlop; adunk be.
A II. ábra DP-BAPTA-úO (szürke oszlopok), DP-BAPTA-99 (sötét oszlopok) hatóanyaggal vagy só-oldattal (hordozó, fehér oszlopok) kezelt patkányokkal a kippecempus különböző (CA-l, CA-2, CA-3 es barázdált agyíekervények) tartományaiban isemia által kiváltott agysérülés kóroktant elemzését tüntet I fel (0 ~ normális, 1 - minimális, 2 » enyhe, 3 ~ közepes, 4 ----- kifejezett).
A 12. ábrán DP-BAPTA~99 különböző koncentrációinak epilepszia elleni véd-Óh&tása látható (%-fean) Wisíar-tipttsú patkányokkal tnegvafösiíolt állatmodellben, ahol az epilepsziát 4ÖÖ mg/kg ptlokarpin útján váltjuk ki. Az epilepszia megfigyelésére használt tünetek: végtagokon fellépő rohamok (fehér oszlopok), általános rohamok (világosszürke oszlopok), L-SE (sötétszürke oszlopok) és túlélés (fekete oszlopok).
A találmány olyan vegyületeket biztosit, amelyek kétértékű fémionok kelátképzöszereinek stabil diészíerei. A kétértékű fémionok többek között lehetnek mangán-, magnézium-, réz-, kobalt-, kadminm-, higany- és óiomíonok, előnyösebbért cink- és vasionok, legelőnyösebben kaleiomionok.
A leírásban és az Igénypontokban a „kelát-k-épzőszer” bármilyen ismert molekulát jelöl, amely kétértékű fémionokkal kelátkepzesre alkalmas. A. „stabil” kifejezés olyan molekulákat jelöl, amelyek lényegileg tiszta alakban izolálhatok.
A találmány szerinti diészterek keiásképzöszerek lípofil származékai, ahol a llpofii jelleg szokásos módszerekkel mérhető. Többek között ilyen suödszer a vegyületek megnövekedőit oktanol/víz megoszlási együtthatóinak Ősszekasonlltása- az alapvegyöletek egyúttbatóivai.
** * A « * *# »»í 0 · 0.
* *040X0 X * 00 0* «♦» A0 0« »> ** *»*X <
A fentiek alapján a találmány stabil, (b) hidroxlveg-yöletlel kétszeresen esz EcrexeU. táj karbonsavak és győgyászatilag elfogadható sóik. ahol (s) kéíértékö fémionok I HOOC-CH:;-5::-N-A-Na-CH;;COOH}3 általános képietö, gyógyászstitag elfogadható kelátképzö-szere, amely képletben A jelentése tel-Ueit vagy teli· sífon. alifás, aro-aás vagy heterociklusos kapcsolóesoport, amely a képletben feltüntetett két nltrogénatomot közvetlenül összekötő láncban 2-8 szénatomot tartalmazó folytonos lánc, amelyet 2-4 oxigénatom szakát meg, feltéve, hogy a képletben feltüntetett két nitrogénatomhoz kapcsolódó láactagofc oxigénatomtól eltérőek, és (b) egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telit étién alkattól-, amisao-atkanol-csoport és helyettesit ett vagy helyettesítetlen aril-alkanol-cs-oportok. közöl választott csoportot tartalmazó, gyógyászatllag elfogadható alkohol.
A találmány egyik kiviteli alakjában az: A kapcsolóesoport .2-4 oxigénatommal megszakított, telített vagy telítetlen alifás lánc és -CR^CR-Ö-CS2CHí-'O-CR’m'CR’- általános képletü csoport közűi vsa választva, amely képletben az R-R és R'-R’ helyettesítőpárok a hozzájuk kapcsolódó --C~C- képietö csoporttal együtt egymástól függetelenál 5- vagy ó-atomos aromás vágyhete ro cife1usos gy ő r őt aik o tnak,
A találmány egyik sajátos kiviteli alakjában az A kapesolócaopori képlete -CfihCHj-Ö-CHjCHj-O-CHjCH>- vagy -CR.-CR-O-CH2CKr-O-CR.'-CR>- általános képietö csoport., amely képletben az R-R és R’-R’ helyettesltöpárok a .hozzájuk kapcsolódó -OC- képleté csoporttal együtt egymástól függetlenül furán, tiofén, pírról, plrazol, Imid ázol,. 1 .,2,3-mázol, -oxazol, iz:o-x.azol, 1,2,3-oxadíazol, 1,2,5-o.xa-diazol, fiazo-i, izottazo-i, 1,2,3-íiadiazoi, 1,2.,5-tradiazol, benzol, piridia, piridazia, pirmídirs, girazán, 1,2,3-sríazis, 1,2,4-íriaztn és 1,2-, :,3- és 1,4-oxazia és -tiazin közül választott aromás vagy heterociklusos györőt alkotnak,
A találmány egyik előnyős kiviteli alakjában az A kapcsolócsoport -CR~CR-O-CH;>CHj-Ö-CR’~CR'- általános képletü csoport, amely képletben sz R-Rés -R*-R' helyettosköpárok a hozzájuk kapcsolódó -C~C- képletü csoporttal együtt egymástól függetlenül helyet teslíeífon vagy hely ette» lset; benzolgyürüí alkotnak, ahol a helyettesített beuzolgyörü 1-4 helyettesRőt tartalmaz, ahol a hefyett.eslröfkj helyettesített vagy helyettesítetlen 1-4 szénatomos alkllcsoporí, helyeireslíeít vagy heJyetíesi'tetlea 1-4 szénatomos alkoxie-soport, fluor-klórhróor·· vagy jódatotn, trífts-or-metil-csop-ort lehetfnsk), vagy a feenzolgyörÜ egyszeresen helyettesített lehet CH >),,-<)- általános képletü. két vegyértékö helyettesítővel, ahol n értéke 1-tol 3-ig terjedő szánt.
A találmány szerinti gyógyászati készítménybe bevitt kalcium-ke lát képzőszer különösen előnyösen éti lén-1,2~dio-i-bisz.-{2-ami:no-eUl-éter}-Ν.Ν,Ν ’ ,N? -tetraecetsav és 1,2-hiszi 2-ami ao-fenoxsj -érán-N,N,M' ,N ’ ··
-tetraecetsav közül választott kelátképzőszer.
φ*
0*0 0 0 X
0 00»*
0» 0 W0« «
A találmány értelmében a legeiöjryöaebfe vegyületek (J) általános képlerü vegyületek
CBCOOM MÖOCCKo j } | í
H--CóH4 — OCHbCrW ---QHs — N ~~ f\.'W
X.
ÍO amely képletbe»
X jelentése C«Hjs.,í általános képletű csoport, ahol n értéke 1-től iö-ig terjedő szám, (C.5H;.>.s<.·)/Ν{CHj};!( általános- képletű csoport, ahol a értéke 1-iöi 6-ig terjedő szám é§ tn értéke 1 -túl 6-ig terjedő szám, és
M jelentése fiziológiailag -elfogadható kation, ahol az aromás gyűrűn lévé helyettesítők orto--.he.lyzethen. vannak.
A találmány kSlő-absen előnyös kivitelt alakjában a találmány szerint!
dlészterek olyan (1) általános képletű vegyülelek, ahol R jelentése C;;H5, i-C;<H7, C-Un, C7H,j, ClbCJh és (CHsjjNCHiCH, képielű csoport.
Még. előnyösebben X jelentése a következő csoportból választott: CXHA,
{.. (..4li-5t~-yH:i 3 es CjjH jMé.g előnyösebben X jelentése Cül;·? képletű csoport.
Λ jelen találmány vo.s?at:k.ozík a (11) általános képleté vegyűletekre
MOOCCH !>
H ~—QKj-OCHbCH^O —Ogís-N cincoox un amely képletben
Y jelentése C;ilU;i.í(OCH;CH2}.,s. általános- képletű csoport, ahol n értéke I-től 20-ig terjedő szám és m értéke I-tol 6-ig -terjedő szám és
M jelentése fiziológiailag elfogadható: k ttt 5 ott·, ahol az aromás gyűrűn .lévő helyettesítők orto-heíyzethen vannak.
* «φφ ♦ « S φ Μ Φ « Φ' β Φ X φ φ * Φ φ Φ χ « φ ΦΦΧΧ » ♦ Φ φ φ χχ φφ ΧΦ ΧΦΦ φ φ
A találmány szerinti előnyős vegyületek olyan (11; általános képletü vegyülerek. ahol V jelentése a következő csoportból választott: €H';<OC'fí>€IHh, C;H5OCH.;CH;, C 5 H ?O C H ,;C Hó, C.dHOCJGCig, CyHijÖCHXHj.
C;;H:-GCH2Cí-f;, Cí;;H;:íuCH:?CH2, Cu.H.!?OCH>€H2í C = sH??OCH;.CH;;. ÜKJOCH2CH:: í;„ CHOiOCHyCH-h, C4'H<,(OCHyCHj)2. C,,ΗAOCH AH,) >, C7Híj(OCHjCHj):>, CsHírCOCíRCfhb, ChiH’.i(OCIOCHj),. CR?(O€H?CH:)!:, és C7Hi5(OCH2CH5b.·
Még előnyösebbek az olyan (11) általános képle-ü vegyületek, ahol Y jelenése a következő csoportból választott: CgH< ?OCH2CÍO, CjsHxjOCHjüHj, C,éH5jOCH2CH2, Csslb-O-CHjCHj, CSHÍ7(OCH2CH:.}; és C:JO , (OCH-CH,):A találmány szerinti bizonyos gyógyászati készítményekhez legelőnyösebb az a (Π) általános képletü vegyület, ahol Y jelentése CsH:-OCH >€H-; képleté csoport,
A találmány egyik további előnyös kiviteli alakjában a találmány szerinti vegyületek kétértékű fémionok gyógyászatliag elfogadható kelátképzőszerének es etil én g 1 jko 1 ©k m ο ηo a 1 ki I - é t e.ré nek ko aj ag á t.«mát íart a 1 rn a z z á k:. K űIó nősén előnyös erilénglikoiok többek között tR<cao-, di- és Irtetilérsglikolók. Használhatnak tetra··, perrta- vagy hexaetiléngliko lókat ís, bigroszkópos tulajdonságaik következtében e vegyületek szonb-a» sajátos reakciókorűitnényeket Igényelnek.
Váratlan .«sódon azt állapítottuk meg, hogy l,2-bisz(2-aniino-fénoxí)-etá«-Ν,Ν,Ν’,Ν Meéraeeetsa v diészterel í B APTA-diészíerek vagy DP-BAPTA) e kaieiumkeíátképzö egyéb származékaihoz viszony iiva jelentősen megnővekedeii terápiás alkalmasságén matatnak.
Egyértelmű, hogy az új 8APTA-diészíerek iipofii jellege erősebb, mint az oiapvegyüleíeké, és tokozott aktivitásuk annak következménye lehet, hogy e molekulákat a sejtek plazmamcntbránja vagy egyéb sejtmembránok visszatartják, ezáltal fokozott mértekben képesek kifejteni sejtmíiköáéseket módosító hasásukat. Lehetséges, hogy e kelátképzöszer-díészterek rendeltetésszerűen a sejtmembrán szomszédságában helyezkednek el. Tekintet nélkül a pontos hatásmecbaniznuísra ezek a dlészterek fokozott terápiás hatásosságot mutatnak.
.A találmány érteimében megntutatkozik, hogy e dlészterek Iipofii jellege a SAPTA molekula karbcmicsoportjsthoz kapcsolódó csoportoktól, valamint a nem ész te rezeit karboxilcsoportokon lévő el len ion októl függ [amelyeket az (1) és 01} általános képletben X/Y és M jelölj.
Diészíer típusú vegyület Iipofii jellege nagy mértékben függ az Χ/Ύ helyettesítőben lévő alifás láncok hosszától, mértéke ugrásszerűen megnő, na a szénatomok száma az X/Y helyettesítőben eléri a 7-et. 7-nél több szénatomot tartalmazó alifás láncok esetén a további szénatomokra jutó növekmény kisebb. Általánosságban az Y helyzetben mono-, dl- vagy inetíléngiikoiok növelik a vegyület iipofii jellegét. Ezért különböző módon észterezeít X/Y-csoportok megválasztása utján a találmánynak megfelelően elérhetjük a tervszert vegyülő10 íek biológiai akis vitásának pontos: beszabályozását. A. választott elleniönt szintén tekintetbe keli ve-ηηΐ egy meghatározott diészter ilpofií jellegénél. Így az 1. táblázatban b emulátort módon megnövelt oktanoímegoszlás figyelhető meg kalciums-ók eseten nátrin.msőkhoz viszonyítva.
Az egyes konkrét kompozíciókhoz megfelelő előnyős alkohol é-s eileo'ion megválasztása függ -a konjugátum. tervezeti terápiás használatától, -ezeket szakember a taíálmá.uy elveinek megfelelően optimálisan megválaszthatja.
Szakember számára egyértelmü, milyen módon alkalmazható a találmány olyan állapotokra és betegségekre, amelyek, kétértékű fémionok, különösen kaiéi Simsonok abnormális koncentrációjával kapcsolatosak, úgy hogy a találmány szerintii kompozíciók hatóanyag olyan diészterét tartalmazzák, amely fém-t-on-kelátképzö, azonban optimálisan megválasztott gyógyászati aktivitást mutat.
A sejtmembránok károsodását okozó különféle események (így s-ej-toxikus vegyi anyag-ok, fizikai stimuláló hatások, és fertőződések) kiválthatnak olyan folyamatokat, amelyek végül lsém.iás károsodást szimuláló állapothoz vezetnek [Robbíns és munkatársai: Patholó-gieal Ba.os fór Disea-se- 10. -oldal, W.8.
S-aundsr-s Co.,. 10841. A találmány felhasználható ilyen körülmények között sejtek védelmére azáltal, hogy kétértékű fémionok kel-á-tképzösz-erét visszük be a sejtekbe vagy a plazmamembrárvba vagy annak közelébe.
A találmány szerinti vegyületek hasznosak lehetnek szívsebészeti műtétekben és olyan gyógyászati állapotok kezelésében, amelyek kétértékű fémek, különösen kalcium m-egnöv-ekedetí koncentrációjával kapcsolatosak. Ezek az állapotok többek között lehetnek az agy vagy -szív elégtelen vérellátása, hűdé», szív Izóráin fa rk tus, epilepszia, krónikus iáe-gdeg-enerációs betegségek, Így Alzhetmer-.kó-r, Parkiosoo-kőr, akut gyulladás, valamint idegsebek és- izom túlzott aktivitásával kapcsolatos betegségek, így akaratlan vizelet-ürítés, pros.ztatamegnagyobb-odás, izomgőrcs, -artériaIis magas vérnyomás, asztma és tálérzé-keny bél szindróma.
Számos találmány szerinti diésztert tanulmányoztunk abnormális sejten belüli kaiéiumkon-centrációval kapcsolatos rend-eilenes-ség.e.k kísérleti m-ode-Hj.eib-en. Ezek a kísérleti -modellek magukban foglalják ts-émta. szlv-rítmnszavar és epilepszia in viO-a és ín vivő rendszerű rno-deÚjest. BAPTA-diészt-erek e modellrendszerek mindegyikében kifejezetten védő-hatásának bizonyultak.
A találmány szerinti vizsgált 8APTA-diészterek biológiai védöhatás-ai-t in vüro követtük, ennek során megfigyeltük a sejtf-unkció paramétereit, az enzimaktivitást és különböző rohamokat kővetően a túlélést, ahol a rohamokat •gintamát tcxie-ilás, oxigénhiány által kiváltott i-degsejthalái és szívizomsejlekben ouaba'in által ki váltott toxikusság. híján idéztük eiö,
A mongol homoki ptstkányokhan ki vált őrt globális előagyi roham, és Wistar-típ ősé patkányokban kiváltéit epilepszia sl la; modellrendszerek itt rtvo modellrendszereket szemléltetnek.
♦ XX ♦β >« ** * « * * φ * X * ♦
X Χ« 4φφ Φ Φ * ·»'♦.♦ ♦ Φ ♦'-«*<
·♦'♦ »» *♦*·♦ «·
A laberaióriiimonkban szintetizált különböző ΒAP'fÁ-díészterek külonos«a hatásosnak bizonyultak idegsejtvó-dö, epilepszlaeUenes és sziwédo hatású vegyöíetekként.
A FTΛ-diéxzíerek ídegsejtvédő hatásai
A islálmány szerinti ΒΛΡΤ A-íliészterek védő hatásénak bizonyultak tenyésztett agykeregsejtekben glu fámát toxikusság és oxigénhiány által kiváltott sejthalál ellen. A hatóanyag védőhatása egyértelmű veit attól függetlenül, bo-gv DP-BAPTA beadása a giutamáí vagy oxigénhiány által kiváltott roham előtt egy órával vagy azt követben legalább egy óra máivá következett be·..
1sétái a .modell
Globális eioagyi isénníát mongol homoki patkányokban váltónk ki kétoldali együttes nyakl 'ütőéreIzárássaI. Ennek ersdsnéayeként agykárosodás mikroszkóppal vjzsgól morfológiai adatok (kórokíani elemzést, megváltozott se.ití'ujikeiók (MSE enzimaktivüá.s) és az egész állat viselkedése (túlélést adatok) alapján megítélve egyértelműen bekövetkezik. Az ídegsejtek károsodásának megelőzése szempontjából díoktil-BAPTA ÍDP-BAPT A-őÖ) és difoktíd•síiiáogÍjkol>-BΑΡΤΑ (DP-BAPTA-óü) egyaránt hatásosak. A vizsgált BAPTA• d-t észterek az állatok túlélési idejét 2-3-szorosára megnövelik.
Megjegyzendő, hogy öAPTA-diészerek kedvező védöhatása igazolható mind fokális, tniad globális agyi isétniás károsodások elleni védelemben.
Epilepszia modell.
Epilepszián rendellenességek csoportját értjük, amelyeket az agy elektromos aktivitásában fellépő rendel lenességek által az idegi funkcióban okozott krónikus·, tstnéiiödő és rohamokban jelentkező változások jellemeznek. Az idegi működés zavarainak szakaszait rohamoknak nevezik, és ezek részleges vagy fokális rohamok, általános rohamok és status vpHepíwws osztályokba sorolhatók. Az emberekben fellépő epilepszia fő okai között gesse ti kas kítüntetettség, fejsérülés, agytnmorok. agyi erek sérülései és anyagcserezavarok említhetők,
Az érintett személyek mimáennapj életében epilepsziás események nagyfokú kényelmetlenséget és zavarokat okoznak, ami sok esetben életveszélyes és végzetes lehet. A iegszokásosabban használt epilepsziaeflenes gyógyszerek az utóbbi '26-3-0 évben kaphatók, és mindegyiknek vannak bizonyos saját, a toxikussággal összefüggő korlátozásai. A jelenleg ismert összes epllepsziaeilenes hatóanyagot és kezelést - beleértve a sebészeti beavat hozást is - figyelembe véve sz epilepsziás betegek nagy hányadánál nem biztosítható teljes védelem a rohamok ellen. A helyezet súlyosbodik olyas betegekben, akikben a 3ö%-os elhalálozást aránnyal járó sfo/as epiívpíteás kifejlődik. Ezért nagy igény mutatkozik minimális mellék hatással járó, biztonságos és hatásos gyógyszerek iráni.:.
BAPTA-dlészterek védőhatásának megállapítására folytatott vizsgálatainkban használt állatmodell patkányokban pilokarpin által kiváltott. elter|edten használt kísérletes epilepszia (Tnrski A'. A., E. A, Cavalhiero, V. Schwarz, S.
X «
J. Czuczwar, Z. Klet tarok és L. Tucskid öebavtoral Bra-íar Research 8, 315-335 (5983)b
Da{oktíl~etii-énglikoI}-BAPT.A. i9P-BΛΡΤΑ-09) az állatmodleHben .aikal.masnak bizonyait .általános roham és 57«/«·,$· eaüeptícu$ meggá.tlására, valamitat a mortalitás .csökkentésére.
Szivvédő hatások
Szív izomhifarkíiis és szívsebészeti műtétek során a legveszélyesebb komplikáció kamrafibriilácíó (VF), Ezt. eredményesen kezelik -a szivdefibrillátor .segítségével. Ás elektromos- so kk során azonban fennáll a bvpass és egyéb típusú transzplantátuanok sérülésének veszélye. A szív sebészet területén ezért előnyősnek tekinthető a ka-tnraftbrífláeió gyógyszeres megoldása, A klinikai farmakológia azonban nem rendelkezik megfelelő gyógyszerekkel e csíra, minthogy a legtöbb ismeri szívritmus-szabályozó hatóanyag fokozza a deísóriiiáíor energiaszükségletét. Az .tsémiávsl kapcsolatos pitvar'.kamrai blokkolás kezelése ezért előnyösen gyógyszeres, ütött történhet.
Goabaia toxi-kusságot elszenvedett, tenyésztett szívizomsej;ekben díeiói-BAPTA. (D'P-ÖAFT A-23) depo-larizálást követően hatásosnak bizonyult késleltetés megszűntetésére, igy e vegyület .hasznos lehet a klinikai gyakorlatban 1} VF vagy a kamrák, szokásosnál gyorsabb működésben megnyilvánuló· ritmuszavsra megelőzésére és 2) megváltozott vezetőképesség kezelésére. A fenti célra számos ritmBxzavsft szabályozó hatóanyag eredményesnek bizonyult. Azonban mindegyiknek van néhány nemkívánatos mellékhatása: előzetes- ritmustalanság, alacsony vérnyomás és negatív i-notre-píás hatások. A BAPT/l-di-é-szterek hatásmechanizmusa jelenleg ismeretlen. Rltmuszavart szabályozó hagyományos .hatóanyagokkal azonban nem matat tüneti analógiát, A ritmus-zavart szabályozó ismert hatóanyagok egyike sem képes a szív vezetőképességét megjavítani. Az ismert ritmus-szabályozó hatóanyagok e hátrányai ki nem elégített gyógyászati .igényt jeleznek, ami ΒAPTA-di-észterek, a ritmus-zavart szabályozó hatóanyagok egy új osztályának -hasznosságát jelzik, amely különösen, hasznos lehet a üie likas seb eszes ben.
Hangsúlyozandó, hogy BAFT A-diészterek számos vizsgáit .modellrendszerben gyógyászati hatást mutattak mind gyógyászati kezelés, mind megelőzés tekinetében. igy megelőzés és gyógyítás céljából beadhatók vagy a roham előtt vagy a roham után,
A fentieknek megfelelően a találmány ezesk-lvöi a BAPTA-diésztere-k alkalmazása kétértékű fémionok» különösen ka.kiutnionok sejten belüli feleslegével kapcsolatos betegségek vagy rendeileaességek kezelésére szolgáló gyógyászati készít menyek előállítására. Ilyen betegségek vagy rendellenességek az. agy vagy szív elégtelen vérellátása, -hüdés, szlvizominfarktus, epilepszia, Alzheimer-kőr, Parkinson - kór, akut gyulladás, akaratlan vizeletürítés, prosztaiaine?,nagyobbodás, ízomgőrcs, arte-riáiis magas vérnyomás, asztma, túlérzé13 * * Λ X ♦ ♦ * Χ- * « φ « * * « * »# »»» « « V * * * * * * * * * V»9 • * * *♦ ** * * »* «*«4 * kény bél szindróma. és szívritmuszavar. A BÁPTA-díászterek alkalmazhatók ezenkívül tervezett műtétek, így szívműtétek és bypass-műtétek során a no-rmáHsboz közeli ionhomeosztázis fenntartására is.
Hatóanyagként kelátképző-szerek diószt-ereít tartalmazó gyógyászati készítmények a technika -állásából ismert módon tartalmaznak továbbá gyógyás-zatilag elfogadható hígítókat vagy hordozókat. B készítményeket formálhatják bármilyen alkalmas- alakban, többek között oldat, szuszpenzió, aeroszol, mieellák, emulzió, m-ikro-emnlzió és tabletták formájúban, amint a megfelelő beadási mód megkívánja.
A találmány kiterjed valamennyi alkalmas beadási módra, ezek többek között lehetnek orális, intravénás, intramuszkui-á-ris, szubkután, iuhaláciő-s, íntranazáiís, rektáUs vagy egyéb ismert beadási módok.. Az előnyős kiviteli alakokban a találmány szerinti gyógyászati készítményeket intravénásán, orálisan vagy intramuszkulárisan adjak be. A találmány szerinti kompozíciók beadására szánt dózisok a. kívánt védöhatás kiváltásához elégséges dózisok, A beadott dózis nagysága függ a beteg életkorától, nemétől, egészségi állapotától és testtömegétől, a.z esetleges egyidejűleg alkalmazott kezelések típusától, a kezelés .gyakoriságától és a kívánt hatás természetétől. Az adagolás· módját és a beadandó készítményt a kezelőorvos vagy egyéb szakember határozza -meg.
BAPTA-AM - amely ismert vegy ölet - hatásos sejt ν-édö anyagnak bizonyait szá-mo-s -kóros folyamatban, amelyben szerepet játszik megnövekedőit kalciumkono-estráetó [Tymiansky és munkatársai: Neuron 11, 223-235, (1993);
Tymí&nski és munkatársai: 3. Cerebral Blood Flow and Metabolism, 14, 911-923 (1994):; Abdel-Ba.mid és Tymíanski: J,. Neuroscie-n-ee,. 17, 3533-3553]. A kalcium-homeosztázis ellenőrizetlen befolyásolása azonban jelentős nehézségeket vet fel a biztonságosság terén, ami egyértelműen korlátozza a klinikai alkalmazásokat. A leírásban feltárt új diészterek sokkal -szelektívebb hatásúak, amennyiben a. viz-sgálatok szerint a sejten belüli kalciutn-homeosztázist nem befolyásolják, és ezért biztonságosabbak, mint az eddig ismert BAPTA-származékok.
A következőkben a találmányt példákkal szemléltetjük..
A) Kémiai példák
1, példa - BAPTA-diaíkli-észterek és sóik szintézise l,2-bisz(2-amino-fenoxi)-etán-N,N,N’',N>:-t.etraecet«av (BAPTA) dié-sztereinek dinátriu-m- vagy kalciumsóit három lépésben állítjuk elő a következő módon.
Az 1, lépésben. SAP?A aahidrídjéi állítjuk elő az 3. reakciövá2iaton bemutatott módon.
14 - * ««* * «« « V * φφ φ »♦ » X φ Φ * X Φ * φ Φ X ♦ Φ X ΦΦ ΦΦΧ Φ Λ φ * Φ Φ Φ X * Φ X ♦ »ΦΦΦ ΦΦ* Α« φχ. ** V X- ΦΦΦ φ X
H00C í COOH HOOG 1 COOl· í εχ η
CH, CH, CHj I CK, co vco -i L, €Ο'·'Άθ · {
\ HZ \ z' a”gco,a, -:y CH·, ..CH, -?0' - ΥίΚ..ΖΗ< χΐ
i ϊ ί
C s/í;--- OC H tC i {·. 0---í V -ΥΛ··<ί C/Ó— ΟοΗ,ΟΗ,Ο........Cg-g
A 2, lépésben. SÁPTA-d'.iésztert áíthtink elő a isii tnóilon.
reakció· vázlat ok fel tűnteCO'J>CO 00^00 ci-l· aH ck xCHx
N ~g?'
v. C% ΐ'ΐηνΗ-ίΟ ‘
X/YOOC i COOH 1 X/YOOC COOH
2X/Y0H k ! CH2 1 OH- CB,
\ \ Z “ B'Z
ca —och2ch>o —ca
X/Y C^B-sd AX1H,
Az e reakció vázlaton szereplő általános képletekben X/Y jelentése €,40.,,) (τν-ΌΖ), CaH^tlOCSbCH;},, (a-l-7, ·η-{-·3}, (C J-b-rthNÍCiOifH: (o:::1-6, m.~l--6} vagy ArCHj általános képietö csoport.
A találmány további előnyős kiviteli alakjainak megfelelően X/Y jelentése előnyösen 0;βΗ2β^5 általános képietö csoport, ahol « értéke I-tői 10-ig terjedő szánt, vagy Ο.,Η,,,,-ί/ΟΟΗ,ΟΗ,}™ általános képletű csoport, ahol ti értéke 1-tői 20-ig terjedő szám, és tn értéke 1 -tol 6~lg terjedő szám.
A 3. lépes BÁRTA-tiíésKcer díHáírim»- vagy kalewtnsój.ának előállítására vonatkozik, ezt a lépést a 3. rsakeióvázlat szemlélte·í.
COOH X/YO-GC C0ÖB X/YOOC
óik >r
CB, Óís \ XBZ
CB,
C00W€^WX5C cooH
CH, / Λ s I CB, /CB,
Cél.)--OCiijClŐO--;0ίΒΐ
CJ%--OCBXHjÖ'-Α.Η,
1. lépés - 8APTA-aablá:rid előállítása “ *· ** » * 4 9 Κ 4 » * ♦ * * * * X Χ9 ♦»* 9 9 »
4 4 9 * * * * 4 ♦ *»* '*♦-* 4 4 X» 4 4 XX »«*« X
Egy (vízhűtésű): vísszafolyós hűtő vé* és mágneskeverővei felszereli 5 00 tní -érfogsitú, egynyakú gőínbiomblkba 24 g (0,05 mól) BAPTA, 8- g (0,t mól) pirsdin és (-95 ml. 1,0 mól) eeeísavanhrdrtd reagenseket viszünk be. A reakcióelegyet 5 órán ás 90 :’C hőmérsékletre melegítjük, miközben a mágneakeverövel inten-zí-ven keverjük. Ekkor a hő-mérsékletet 50 ö€-ra esókkentjük, és a melegítést ezen- a hőmérsékleten 10· órán át folyfatjo.k. A 10-órás időtartam végén a reakcióelegyet. szobahőmérsékletre hötjük,. és a -csapadékét szűréssel eltávolítjuk.. A csapadékot ezután négy alkalommal (egyenként 5ö mi) etil-acetáttal, majd két alkalommal (egyenként 60 ml) dies 11-éterrel -mossuk, A csapadékot vákuumba a 6-8 órán .át 50 ’C hőmérsékleten szárítjuk, Termékként 17,6 g 8 APTA.-anhidrid.et kapunk,. -{kitermelés: 80%:). ölvsdáspont: 148-149 ^C,
Vékonyréteg-kromatográfiás eljárás során a vegyület bomlik. Ή N'MR (CJANOJ δ (ppm): 4,40* (sr 8(0, 4,47 (s, 4H), és 6,85-7.01 <m, 8H). ÍR:
1762,9 ca ’ (s), 1:829,7 ess'1 ís·.
Eiemanalizts a C^HjoOgNj összegképletre vonatkozóan:
C% 11% N% számított: 6-0,00 4,54 6,36 mért: 59,60 4,66 6,20
2, lépés - BAPTA-dsatkíI-diirrii-észter előállítása
Viss2afol.yós hűtővel és mágnes ke verő vei ellátott egy nyak ó góxnbkraibikba argonatmo-szféra alatt lö g (0,023 mól) 1. lépés szerinti 8 APTA-anhidrídet és 300 mi megfelelő abszolút alkoholt viszünk be. Az «legyet olajfürdőn 90 ’C {dimetii-- -és d-eísÍ-észterek esetén 70 C) hőmérsékletre melegítjük intenzív keverés közben, 6 óra múlva az alkohol felét a reakcíoelegybői- ledesztíHáljak (nagy molekoiatőmegü alkoholok esetén vá-kuumd-esztiií'ációt' alkalmazunk i. A kapott eiegyet 0 Ö-C hőmérsékletre hütjük, és 5-8 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk, A csapadékot az oldattól (144 jelű ávegszürőn keresztül végzett)· váhütUTíszüí'ésse! választj-ak el, majd ,3-4 alkalommal (egyenként 49 ml) etabollál, ezt követően három -alkalommal (egyenként: 106 mis etil-acetáiral, végül három alkalommal (egyeskést I50 rnl) díetii-éterrel mossuk. A terméket g órán át vákuumban szárítjuk. Az előállítóit SAPTA-diészíorek kémiai és fizikai jellemzőit az alábbiakban ismertetjük.
BAPfA-dieíil-észter fehér por alakban 1:1 g terméket kapunk (kitermelés: 90%). Olvadáspont:
161-162 C, FTC elemzést aluíaímtumiem-ezea lévő 60 tipusö sziiikagélen végzünk. klsáldszerkéBt kloroform: metanollal és vízzel alkotott (89:20:::,5 térfogatarányú) «Ügyét használjak, A kromatogrmot kiértékeléshez indikát-erp-ermetteí pori:as2tjuk, majd 350-400 ftC hőmérsékleten: elszeaesiíjük. Az indikátorpermet összetétele: 10 ml 4·•mefnxs-benzaldehíd, 200 mi etanol, 10 ml: 98 tóxneg%~o« kénsav és 2 mi vízmentes: eeetsav, A vizsgálat során 1 foltot kapunk, Pr: 0,3.
‘H AMR íCDrOiO) 6 (ppm): 1.5-i.U 645), 3,91-4,00 idd, 4H), 4,05· (s.
41%, 4,i-4 is, 4Hí, 4,27 ís. 411). 6,83-6,96 (m, 3H).
Eiemanalizis « ’ c ° \ összegképletre vonatkozóan:
C% 11% A%
számított: 5 8,64 ,6, 0 5 5,2 6
né rí: 3 8,00 6,00 5,09
Λ FT Λ - d s ρ r 6 ρ i 1 - e s z t e r fehér por alakban 11,5 g terméket kapánk (kitermelés: 9093). 04vadásponf: 187 :,C. Λ TLC elemzés során a BAFTA-díetít-éte.f vizsgálataker hsszfiáit körülményeket alkalmazzuk, A vizsgálat során i foltot kapunk, R,·: 0,55.
’H NMR «CDj)2SOJ δ (ppts): 0,7 1-0,77 (i. 6í-Ií, 1,58-1,47 (m 4H), 3,80-3,85 ír, 4H), 4,00 ís, 4H), 4,13 (s, 4H1,. 4,2ö ís, 4H), 6,70-6,96 (m, 8H).
Liemanallz is a Ο^Η^Ο^Ν·» összegképletre vonatkozóan-
€% 1468 N%
számított: 60,00 6,45 5,00
snéri: 60,2 5 6,77 5,0 8
A FT A - d 1 1 z « p r ο ρ í Ϊ - c s z f e r
Fehér por alakban 10,2 g iermeket kapunk (kitermelés: 80531. Olvadáspont: 181-182 ®C.. A TLC elemzést alumm iumlemezen lévő 60 'F25$ típusú szilikagélexs végezzük, hluálószerként kloroform és xaetaa»·! 65:50 térfogatarányú elegyét használjuk. A Isromasograts kiértékeléséhez ináikátorpermetet porlasztunk rá, majd 350-400 ’-C hőmérsékleten ehzenssitjük. Az uidikátorpennsí összetétele: 10 mi 4-;metcsxi-henzaidehÍd, 20Ü ml esanoi, 10 ml 98 íömegH-os kénsav és 2 mi vízmentes ecetsav, A. kiértékelés során 1 foltot kapunk, R,-: 0,72.
!H NMR KCD.;hSOi Ö ípptn): 1,07-1,09 (d, 12H), 4,00 ís, 4H), 4.08 (s, 4Hs. 4,22 (s, 4Hs, 4,78-4.85 tm. 28),: 6,71-6,98 (m, 8H).
Elemsmtlíz ís a CjdbíAshO összegképletre vonatkozóan:
C% H% N% számított: 60,00 6,43 5,00 mért: 59,78 6,50 5,00
Β Λ F T Λ - d i h u ’ ΐ 1 - é s z t e r
Fehér porként 12,1 g -érmékét kapunk (kitermelés: 9036). Olvadáspont; 183 *€.. A TLC elemzéshez a 8ALTΑ-dreísl-ésxter elemzése során használt viszonyokat alkalmazzuk, Λ kiértékeléskor 1 fohoi kapunk, R#: 0,42.
Al NMR j'íCO.ihSO.1 d (ppm): 0,74-0,80 (>, 614), 1,00-1 J8 (m, 4I-Q, 1,83•1.38 (tn, 411), 3,80-3,86 í t, 4H), 5,98 ís, 4H), 4.10 (s, 4H), 4,17 ís, 411), 6,606.92 (m, 861).
hieirsarmitz is a ,ÍÍ;...C>;. N> összegképletre vonatkozóan:
* ♦*«» «♦ X* . ♦ * * « * * * » ♦ * 0 ♦ * * * ♦ ♦ «♦· * rt 4 e * * * * « * * * » *·♦♦
C% B% 24%
számított: 61,22 6.60 4,7 6
sóért: 61,54 7,10 5,03
8 A Ρ' í .4 -álheptil-észter
Fehér porként lö.-S g terméket kapunk (kitermelés: 70%). Olvadáspont: 146-147 Ά. A TLC elemzési·, a BAFTA-dletíl-éter elemzése során alkalmazott viszonyok között folytatják le. A kiértékelés során 1 foltot kapunk, Rj·: 0,50.
\M NMR {(COLbSÖ) $ (ppm): 0,79-0,84 it, ÓH), 1.O8-1J7 (széles s, 16H), 1.34-1,40 fás, 4H), 3,79-3,67 (ί, 4H), 3,98 is, 4H). 4,13 (s, 4H), 4,17 (s, 4H), 6,67-6,92 int, 8 HL
Fletnanallzis a C^HsjO^ÖÍj összegképletre vonatkozóan:
C% H% N% számított: 64,29 7,74 4,16 mért: 64,37 “,82 3.36
ΑΡΤΑ - á i ο kíit-észter
Fehér porként 11,3 g terméket kapunk (kitermelés: 70%). Olvadáspont: 155 Ά. A TLC elemzés során a BÁPTA-dietil-észter elemzésekor használt körülményeket a.l kai mázzuk. A kiértékeléskor 1 foltot kapunk, R,: 0,55,
Ή NMR í<CD.}}3SO| ö (ppmi: 0,81-0,36, (t, 6)1), 1,19-1,23 (széles s, 2011), 1,29-1,34 (re, 4H), 3,33-3,87 (», 4H), 3,96 (s, 4ΙΪ), 4,11 is, 4H). 4,19 is, 4Hí, 6,30-6,84 (m, 8HL .ElemanállzIs a CíAstótóebb-összegképletre vonatkozóan:
„·-< <5 / -77 RT. NT
.szám.í t ott: 65,14 6,;?0 4,00
reéri: 64,91 8,20 3,76
A Ρ T ek - d í fe e n z í 1 ~ é s z t e r
Fehér porként 10,6 g terméket kapunk (kitermelés: 70·%). Olvadáspont: 161-163 ’C, A TLC elemzés során a 8 ÁPTA-dietil-észter elemzésekor használt körülményeket alkalmazzuk. A kiértékelés során 1 foltot kapunk R»·: 0,64, (A dtbeuzil-észtert dttnettl-fonnamldban. lévő oldat alakjában visszük fel a TLC lemezre.) tói NMR ((CDjbSO) «5 (ppm):: 4,02 is, 4Hy 4.18-4.19 id, 8H), 4,97 is, 411). 6.73-6,94 (re. Mi). 7.22-7,32 (m, 1011).
Eletnanaltz is a Cító-L<;O!(,N;; Összegképletre vonatkozóan:
CT. H% N% számított: 65,85 5,49 4,27 mért: 65,56 5,83 4,12
A F T A - d M 2 - ( d i i« e 1:1.1 - a m: s η o) - e U11 -észter fehér porként 9.95 g terméket kapunk ikitermelés: 7066). Olvadáspont: 126 -12 7 ’C A TLC elemzést aktmínsom lemezen 1 é vö 60 F>54 típusú ♦ **♦ * *x »« · κ rfrf rf ~ i >. < ~ »* «««»*«««« X * χ X rf *x X.»rf « rf >
*♦ * * rfrf rf *' » rf rf rfrf *♦♦ rfrf rf > rfrf rfrf rfrfrfrf rf sziiikagéles folytatjuk Je. Eluálós-zerként kloroform. metanol és víz 69:40:2 térfo-g-atarányű elegyét használjuk.. A kiértékelés során 5 foltot kapunk, P,y 9,2.
Ή NMR (CDCIA 0 (ppusj:: 2,57 (s, J21IJ. 2,60-2,63 (t, 4'Hj, 3,60 %, 4H),
5,75-3,78 fi. 4H). 4,06 U, 4Hj, Ö.U <s, 4Hj. 6,68-6.85 í®, 8H).
Eíemanaüzis a C.^H^-jOk^ ősszegképtasre vonatkozóan:
C% 11% N'%
számított.: 5:8,25 6,80 9.06
mért: 57,94 6,90 8,97
2a lépés - BAFTA-diészterek nátríumsóinak eídállhása Mágaeskeverővei ellátott 500 «0 térfogatú £rle.nmeyer-lo-m.bikba 0,019 mól megfelelő 8AFTÁ-dialfcFI-észtert viszünk be.. Az észterhez 250 ml 1:1 tér•fogalará«y& m-et.a-.nol/víz eiegyet adnak. Az eiegyet -Intenzíven .keverjük, minthogy az észter nincs feloldva az oldatban. A. kevert eiegyhez 3,19 g (0,038 snois NaHCOs vagy 0.038 mól MeONa tömény vizes oldatát adjuk. 5-8 óra múlva. az elegy átjátszóvá válik, ez azt jelzi., hogy a tíí&iRii-észter átalakult din-átriumsóvá, A metanolt és g. vizet vákuumban elpárologtatjuk. A. kapott sót etanolial és díetíi-éter rel lefolytatott: azeotrop áes2tiiláetóval szárítjuk. A kapóit sőt végül 8 órás át vákuumban (0,67-0,86 kPa nyomáson·} szárítjuk.
A F T A - d te t s I - és z te r d t n á £ r 1 a m s ó j a
Fehér porként 10,4 g terméket kapunk (kitermelés: 95%). E1 s m a na 1 íz 1 s a a > ős s z.«gké p 1 e t re v o na t ko z6 an:
C% H% N% Na 33
számított: 54,16 5,21 4.86 7,9 8
méri: 54,10 5,27 4,65 8,10
BA FTA-djp ro p i I-észtér din á tri umsója
Fehér porként 10,9 g terméket kapnak (kitermelés: 9523). Elemanaiizis a CjsH^OíoN>Na? öss-zegképletre vonatkozóan:
<?% 11% N% Na %
számított: 55,6.7 5.62 4,63 7,61
mért: 54,76 6.13 4,46 6,73
B A ? f A - d ΐ b u t i 1 - « $ z £ e r din á trió m s ö j a
Fehér porként 11,2 § terméket kapunk (kitermelés: 9596). Elemanaiizis a Cj^hsösoNjNa?, összegképletre· vonatkozóan:
C% H% N%
számított: 5 6,96 6,0 1 4.43
mért: 56,50 6,00 4,20
8zkPTA- dibeptíl -észter dícátrium$ója
Na %
7,28
7.20 szátni
Fehér porként 10,2 :g terméket kapunk (kitermelés:: 90%;. Elemanaiizis a C^vtönANa·. «összegképletre -vonatkozóan: (.'% H%
60,22
6,98
N% 3,9 I * ♦»!»« »Φ Φ« ** « * Φ Φ » * Φ X ** * » Φ χ χ » φ«ν «χ «« ««
5908 7,49 4,12 6,76
Β A Ρ Τ A - d ΐ ο k t Π - é s ζ t e r d ί a á t r I κ m s á j &
Fehér porként 15,7 g terméket kapu-nk (kitermelés·: 90%).
• * «* * * » * í •φφφ Φ * * ♦ » φ ♦ «f *# »*Φχ ♦
Elemanaíizis a CéAÍ^Ö.yMjNa> összegképletre vonatkozóan:
<7% V·· Ma %
számi tett: 6 1.29 7.26 3,76 6,16
ráért: 60.60 7,84 5,26 6,5 2
b lépés - B APTA-d suszterek ka lein sasé hsak előállítása 1 g megfelelő 8APTA-diósaiért etanol és viz 1 I (.70:30- térfogatarányó) «legyébe» oldunk. A kapott oldathoz €a(OH)> méíegysnétléknyt mennyiségét adjuk. A. kapott elegyet 24 órán át' szobahőmérsékleten mágneske verő vei keverjük.. Ezután a SAPTA-dietil-, -diprcpii- és -dibuiil-észíerek sói esetéi! az oldatot Whatmann gyártmányú, Nt jelű szűrőpapíron keresztül szűrjük, majd váktJüHtban (2,67-4,8 kPa) nyomásén szárítjuk. A csapatiékor háromszor (egyesként löt; usú) dietil-éterrel mossuk, tnajd 6 órás át szobahőmérsékleten vákuumban (ö, 267-0,4 kPa nyom-ás-on) szárít jefc.
A BAPTA-disepíil- és· -dioktll-észterek- kuleinmsél esetén az etanolos oldatot szárazra betöményítjűk. A csapadékot- 0,8 I etaaolban oldjuk. A kapott elegyet Whatmann gyártmányú·, Mi jelé szűrőpapíron keresztül szűrjük, majd az etanolt vákuumban (.2,67-3,33 kPa nyom-áso-a) elpárologtatjuk. A csapadékot háromszor, egyenként 100 m.l dietil-éterrel mossuk, majd 6-7 órán át szobahőmérsékleten vákuumban (ö,267-8,4 kPa) nyomáson szárítjuk.
BAPTA-áíetil-észtér kaiéi umsój a
Fehér porként 0,96 g terméket kapunk íkitermelés: 907¾).
FJemaualizis a C^ílj^xOsoCa összegképletre vonatkozóan:
G% N% Ca %
számított: 54,70 5,26 4,91 7,04
mért: 54,32 5,40 4,8 1 6,84
8 A P T A - d t p r o p I1 - é s z t e r k.a te 1 u m s ó j a
Fehér porként 8,98 g terméket kapunk (kitermelés: 90%),
Fieroanalízis a CXílH:wN'>O),>Ca összegképletre vonatkozóan:
(76 14% Méz C ii /0
szárúit ntí: 56,19 5.6 8 4.68 í) „ 6 9
mért: 5-6,22 5.88 4.51 6,5 1
Β Λ P T A - d i fe··« t i t -és ?. tér ka í e ín m s4 j a
Fehér porként 0,90 g terméket kapunk (kitermelés: 907;,).
Elemanaiúz is· a Cj,d'l>«M/3:,)Ca összegképletre vonatkozóan:
<2% N% Ca %
szánd í ott: 57,50 6,07 9.4 7 6,39
mért:. 5 7,18 6,2 4 9,28 6,11
*e *«*.«> ** *4 • * » > 4 ♦ * * ·♦.» * . ·χ Φ ♦ ·« * * * e
N Kíí* «««« «
Β A Ρ Τ A - d ί h e ρ ί ΐ 1 · é s ζ tér k a I c I« m s aj a
Fehér porként 0,85 g terméket kapunk (ki termelés: 80%). gíemaaaihis a C^vH$«yN-,O:KjCs összegképletre vonatkozóan:
Cfo N% Ca %
számított: 6 1,71 7,14 4,00 5.7 1
mert: 6 1,44 7,24 4,18 6.3 I
Β Λ P F A d i o k t i I -· έ s z t e r k a I ε I o rn s ή f a
Fehér porként 0,8 3 g terméket kapunk (kitermelés: 80¾). Eleaianalíz is a CísHtoééhÁ'a összegképletre vonatkozóan:
Na %
5,42
5,31
C% K% N% számított: 61,79 7,32 3,79 mén; 61.94 7,14 4,(70
2, példa - ΒΛ.ΡΎΛ mertodíészteres és sóik
E sók előállítást eljárása négyfépéses «töve let, amelyet 8A.RTA-di.aikií“észterek sóinak előállítási eljárásához hasonló módots folytatunk le..
1. lépés - BAPTA-atshídrid előállítása
Az 1. lépésben ÖAPTA-nnhidríd-et állítunk elő- as 1. példa 1, lépésében leírtakkal azonos módom.
öt- és tríetííénglíkal aikil-éteréveí képzett
2. lépés - Mono-, dl- és írtét»lénglikel mnannlkil-éterelnek előállítása Mono-, dl- és ídetUénglikoí monoaikil-étereit a következő reakcióegyenleteknek megfelelően állítjuk e-löt
H(OCH>CHÚA>H <- NaH(OCH,CH,)inONa-1/2Η,
Η ( O C H 2 C H j}<:„ Oka C ff H > R, ,8 r-» Η (OC H > C H á} ra O C B Η :ί,, fo N a B r amely reakcióegyenletekben szereplő általános képletekben tn értéke 1 -tői 3-ig terjedő szám, és n értéke 5-től 18-ig terjedő szám.
Visszafolyó» hűtővel és mágneske verő vei ellátott 250 mi térfogatú, kétnyakú gömbiomiúkba tsrgonataioszférá alatt 0,8-11,9 g (5-8 tnm méretű darabokra vágott? nátriumot viszünk be. A aátriu tu-ho z szintén argongáz alatt 3 5 ml (0,62 moll etiiénglikoh adunk, és a lombikot intenzív keverés közben olaj fürdőn 70 nC hőmérsékletre melegítjük. Amikor a nátrium túlnyomó része oldott: áiiapo-ban van, a nátrium: maradékát (a nátrium jellemző mennyisége 3,9 g, 0.17 moll) darabonként a reakcióelegy hoz .adjuk. Megjegyezzük, hogy a nátrium oldását a reakcióelegy hőmérsékletének növekedése kíséri, ami a reakciósebesség növekedésével jár együtt. Robbanás -elkerülése érdekében a sálriatn lassú adagolása szükséges, hogy a reakciót jól szabályozhassak. Miután a nátrium teljes mennyisége oldódott, a lombikhoz csepegtetőtölcsert csatlakoztatunk, amelyben 60 ml terrahidrofuránbafö o.ldva 0,12 mól megfelelő alkrl-bromid vau. A esepegíetőtölcsérbeo lévő oldatot eseppenkést a reakefóedénybe adagoljuk. A *·».♦ y# » O 0 4* » * ft 9 V « 0* **« » » 4 * * * 0 « ·««·*« ! *» *4 *00* » reakeióelegy hőmérsékletet 70 C-ext tartjuk. A nátriura-bromid •csapadék majdnem piilanatszerűen megjeleník, és mennyisége a reakció során növekszik. 16 óra snü.lva· a reakeióelegyet szo-babőfnérsékletre hűíjiik, és a szerves oldathoz 159 rnf vizet adunk. A terméket etil-acetát két (egyenként 40 ral térfogatú) részletével extraháljuk. Az egyesített eííl-acetát-o-ldafot vízzel mossuk és vízmentes· nátrlom-szulfáítal -szárítjuk. A termék etil-acetáthan. lévő sárga oldatát aktív szénnel melegítve e'lsziatelenítjűk. A színtelen, oldatot: szűréssel elválasztjuk a széntől., és az oldatot be tömény kjük. A kapott terméket vákuumban desztilláljuk, majd meghatározzak fizikai és kémiai tulajdonságait.
E111 é n g 11 k ο 1 - m o a o h « ρ 111 - é te r
Színtelen folyadékként 13,4 g termékei kapunk, forráspont: 95 °C (133,3 Pa nyomáson), kitermelés: 70%. A TI.C elemzést alamtniamleraezeti lévő 60 Fj54 típusú szi-ltkagéléjt folytatjuk le. Eluálós-zerként etil-aeetát és a-hexán 2:1 térfogatarányú «'legyét használjuk. Az índikátorpermet összetétele: 10 ml 4-metoxl-benzaidehid, 208 stíl stand, 16 ml .98 íom:eg%-os kénsav és 2 -ml -vízmentes eeeís-av. A kiértékeléshez a kromatogramra indlkátorpermetet porlasztónk, majd 350 ;'C hőmérsékleten elszenesitjök. .A kiértékelés során I foltot kapunk, Rf-: 0,8.
lH NMR (CDCh), δ (ppm): 0,84-0,99 (t, 3H), 1,27-1,33 (széles s, 8H), 1,55-1,61 (tn, 2Hj, 2,25-2,30 {·, 1 H, (XH-csoport jele, helyzete változó·), 3,43-3,54 (m, 4H), 3,66-3,75 tűt, 2H).
D í e t i1 é n g 1 í k «I - h e p ti 1 - é t e r
Színtelen folyadékként 17,1 g terméket kapunk, forráspont: i00 °C (133,3 Pa nyomáson)., kitermelés: 70%. A TLC elemzést az etiléngllkol-mo-noheptil-éter esetére ismertetett körülmények között folytatjuk le, A kiértékelés során 1 foltot kapunk, R,·: 0.4.
rH SMR (CDCl?), Ó (ppm): 6,84-6.90 <t, 3H|, 1,2 7- 1,32 (széles s, 8H), 1,55-1,61 (tn, 2Hj, 2,71 (t, IH, Ο·Η-csoport jele), 3,45-3,48 ít, 2H). 3,58-3,75 (tn, 8H).
T r let llénglí kol-hept.il-éter
Színtelen folyadékként 20,8 g. terméket kapunk, forráspont: i97 aC (133,3 .Pa nyomáson), kitermelés: 79%,. A TLC elemzést az etilénglíkol-monolieptil-éter esetére ismertetett körülmények közölt folytatjuk le. Λ kiértékelés során • fokot kapunk, Rf.: 6,3.
!H HMR iCDCíj), δ (ppm): 9,34-9,96 gí, 3Hj, 1,26-1.29 (széles s, 8H), 1,54-1,57 (tn, 2H), 2,72 íí, 1 H, Oll-esopot't jele), 3.41-3,47 (t, 2H), 3,58-3,74 (tn, 1211).
Aí α no e t i 1 é n g I i k ο 1 - o k 111 - é t e r
Színtelen folyadékot kapunk, forráspont·:· 60 ’C (66,6 Pa nyomáson), kitermelés: 35%. A monoetiléngltkol-oktil-étet TLC elemzését a fentiekben k9 Χ-.«.« « « mertetetl körülmények között folytatjuk le. A kiértékelés sorári’l Toltb’t l-Oapuífk,’’'
R.·· 0.7.
TI NMR. íCDCN). ö íppm): 0.83-1),89 ít, 3H), 1.25-1,27 (széles s, LOHi, 1.54-1.57 lm, 2FÍ), 2.39 (t, Hl), 3.41-3.52 (m, 4H1. 3,67-3,73 lm. 4Hj.
3, lépés - BAPTA mono-, dl- és triedléngiikaí rnsnisaikii-éíiírével képzett dlészteres
Visszafolyés kötővel és mágneskeveröveí ellátott. 51) ml sárfogatú, egynyakú gömb lombikba argonatmoszféra alatt 1,5 g: (0.0033 mól) 1. lépés szerinti BARTA-anhidrldét és a 2. lépés szerinti megfelelő 10-12 ml mono-, di- vagy trfeüléagljkol-moöoalkjl-éíert viszünk be. Az elegyet olajfürdőn intenzív keverés közben 115-120 CC hőmérsékleten melegítjük, 1-1,5 óra múlva az elegy átlátszóvá válik, A melegítést további 1,5 órán át folytatjuk, .atűig a reakció befejeződik. A lombikot ezután szobahőmérsékletre kötjük, majd 100 ml 160-80 ’C l'orráspontü) petrolétert adunk hozzá. A képződött csapadékot ceHtrifogáiással elkülönítjük, majd károm a lka le innia! (egyenként 40 mii psíróié térré 1 mossuk. A szilárd termékei vákuumban 5 órán át szárítjuk, majd a termék tulajdonságainak vizsgálatával az egyes vegyületekre a kővetkező eredményeket kapjak,
A R T A -)« «i 11 ·· e 111 é n g 11 k «I - d s é s z t e r
Fehér porként 1,81 g terméket kapunk (kitermelés: 9073). Olvadáspont: 151-152 C, A TLC elemzést aiumlníjrmiömezers lévő 60 F2S-t típusú szidikagéles folytatjuk le. Eluálőszerként kloroform és metanol Ni térfogat-arányú elegyét használjuk. Ki úri éke lés hez a kromatogramra Indikátorpermetet poriasztunk, majd löO-ÍSO °C bemérsékdeten elszenesit jük, Az indikátorpermet összetétele: lö mi 4-meioxl-benzaidehid, 209 mi etanol, lö ml 98 íőmeg%-os kénsav és 2 ml vízmentes eeetsav. A. kiértékelésnél 1 foltot kapunk, Rf: 0,14..
Hl NMR tCOyOD) Ő (ppm};: 3,33 |'s, 6H), 3,47-3,51 ít, 4H), 3.66 (s. 4.H), 3,85 is, 4H>, 3,02-3,06 (t, 311), 4,35 (s, 4H), 7,02-7,1 1 (m, 8H).
Elemanaliz is a összegképletre vonatkozóan:
C% IN·· NN számított: 56,76 6,08 3,73 mért: 56,38 6,39 4,72
B Λ Ρ T A - h e p ti 1 - e f i 1 é » g 11 k ο í ~ d lé s z tér
Fehér porként 2,3.2 g terméket: kapunk (kitermelés: 90¾}. Olvadáspont: 111-112 ‘C, A TLC vizsgálat körülményei megegyeznek a BAPTA-metii-eíiléngiiko 1-diészícr vizsgálatánál alkalmazottakkal. A kiértékelésnél 1 foltot kapunk, Rf: 0,4.
'11 NMR (íCDíMSCC ö (ppm): 0,81-0,86 (r, 6H), 1,22 {'széles s, I6H), 1,42' (tn, 4H>, 3,27-3,32 lm, 4H1, 3,07-3,40: (m, 411), 3,96-5,39 (m, 8N), 4,12 Is, 2(1}, 4,19 is. 211) 6(73-6,92 isi, 8H'}.
L le mánál íz is a összegkép leire vo natkozóan:
- 23 számító!!: mért:
€33 13% · - N76
63,16 7,90 3,68
63,3-B 8.4 4 3,76
A Ρ T A - o k t ϊ I - e 1 i I é a g 13 k o 3 - á1 és z t e r
Fehér porként i.,4 g terméket kapunk (kitermelés: 80%.). Olvadáspont::
121-122 :’C. A TtC elemzést alamlnlu-tn-lemezen lévő 60 típus ή -sziii-kagélen folytatjuk te. EInálószerként kloroform és tfeetaaol I.·. 1 térf»ga-ta-rán.yu eiegyét használjuk. Kiértékeléshez, a kromategr.a-mra indíkátorpermetet poriasztunk, majd 100-159 °C hőmérsékleten eiszenesítjük, Az indi fcátorpermet összetétele·:: lö ml 4-meto-xr-benzaldefeid, 290 ml etanol, lö ml 98 tő-meg%-08 kénsa-y és 2 ml vízmentes ecetsav, A kiértékelésnél f, foltot kapunk, R.r: 0,45,
Ή HM& (COCA) δ (pp-n): ö,84-0,89 ít, 611), 1,26 (széles s, 2011), 1,5 1-1,57 (m, 4H>, 3,37-3,42 ít, 4H)„ 3,53-3,56 411), 3,96 (s. 4H), 4,03 (s, 4H>,
4,17-4,21 (m, 4H), 4,3? :(s, 4H). 6,87-6,94 (m, 4H), 7,03-7.09 ím, 4H).
Elemaaaljzís. a Qaií^O-íjM-j-összegképletre vonatkozóan:
C% H% N% száuíílett: 63,96 8,12 3.55 mért: 63,57 8,11 3,53
B Λ Ρ Ϊ A - b e ρ t11 - d l e t ί ί έ n g 11 k © 1- d lés zte r
Fehér porként 2,5 .g terméket kapunk (kitermelés.: 85%). Olvadáspont: 95-96 “'C. A TLC vizsgálat körülményei megegyeznek a 8 APT A.-metil-etiiénglikol-diészter vizsgálatánál alkalmazottakkal. A kiértékelésnél 1 foltot kapunk, Rf: 0,4, ‘lí NMR |'(CD3)2SO] S (ppm): 0,89-0,86 (t. 6H), 1,23 {széles s, 16H), 1,45 ím, 411), 3,30-3,35 (mv 8H), 3,40-3,46 (m, 1211), 3,97-3,99 (tn, 8H)„ 4,13 {s, 411). 4,1 Ο ís. 411). 6,74-6,92 (m, 8H-, 12,37 ís, 211).
Eletnanali-z is a összegképletre vonatkozóan:
számított: C% 62,26 K% 8,02. N% 3,30
mért: 62.47 8,42 3,90
B A F T A - 3t e p 11.1 - i r í etil έ ti gl i kai- d I é $ z tér
Fehér porként 2,7 g terméket kapunk {kitermelés: 85%), Olvadáspont; 63-65 °C. A TLC vizsgálni körülményei megegyeznek & S.AP TA-metii-etilénglikol-diészter vizsgálatánál alkalmazottakkal. A kiértékelésnél t foltot kapunk, ÜL·: 0,4.
9T NMR KCDybSÖ] Ö ippm); 9,39 -9,87 (t, 6H), 1,23 (széles s, I6H), 1,45 (m, 4Í-Í>,. 3,31-3,56 (ra, 4H>, 3,42-3,48 ím, 20H), 3,97-3,99 ím, 8H), 4,13 (s, 411). 4,19 (>, 41-1), 6,74-6,92 ím, 8H), 12.38 ts. 2H).
41«) lépés - BAPTA »«»«-,. dt- és triet.Hangi-lkot sí feli-éteré vei képzett d i é s z s e r e 1 u e k d s n á t rí tt msét * '· » X *· ♦ * »er y ♦ «
ΒΑΡΙΑ mono-, di- vagy tr 1 e t t lén glíkoi al ki 1 -éteré vei kápzvtt *í>,t)l>3'5 raoki». ’%* megfelelő diészterét metanolban oldjuk (!,ö g BAPTA-dsé-szter oldásához 1-0 tó névleges mennyiségű alkohol szüksége»?, és a kapott oldatot mágneskeveröveI ellátott. 50 ml térfogatú Erleoineysr-lotnfeikba visszük be. A BAPTA-diészter «je-sooios oldatához -nátriu-m-hidrogén-karb-osát (2 ml 0,005 tnol'l koneeníráelójüj vizes oldatát adjuk, és az elegye· szobahőmérsékletet} 2 órán át keverjük.
Ezután az oldószert vákuombao (4 kPa nyomáson} elpárologtatják. A kapott csapadékot bárom alkalommá 1 etanollal és kél alkalommal dtetil-éíerreí lefolytatott azeotrop dosztiliációval szárítjuk. A kapott terméket végül hexánnal, mossak és vákuumban szárítjuk,
B A Ρ T A - m e t ί 1 - m ο a oe t ί í é n g I í k o i - d í é s z t e r - d I r»á t r i o m s ó .Fehér szinti, hígroszkópos szilárd anyagként 1,5 g terméket kapunk (kiterme les:: 95%}.
Elemanalízis a C^Hs-A),>N:;Na2 összegképletre vonatkozóan:
C% H% N% Na % számított: 52,80 5,3-5 4,40 7..23 mért: 52,20 5,59 4,49 7.20
A Ρ T A - h e p t ί 1 - m- ο r o e-t ί l é n g B. k o 5 - d 1 é sz t e r- d i n á t r í a m s é
Fehér színű, higro-szkó-:pos szilárd anyagként 1,9 g terméket kapunk (kitermelés: 95%).
Flemanallz is a -C^KssOn-NiNaj összegképletre vonatkozóan::
számított; C% 59,70 •4% 7,21 N% 3,43 Na% 5,7 2
mért: 59,60 7,75 3,51 5,5 I
8 A Ρ í A - h e ρ t i 1 - í S i e t í t é a g 1 í k sí 1 - d 1 é s z t e r - ás a 41 r 1« m s 6
Fehér színű, hígroszkópos szilárd anyagként 2,1 g terméket kapunk
termelés; 95%},.
Ele mart aláz is a C^Hóiö-sNiNa- összegképletre v onaíkozóan:
C% H% N% Na%
számított: 59, í 9 7,40 3,14 5,1 6
inéit: 58,55 7,43 3,46 5,49
.8 Á Ρ T A - h e ρ i 11 -í r s e j: s 1 é n g li k ο '1 - d i és z t e t - d t n á t r i a m s«
Fehér színű, nagyon higroszköpos viaszként 2,2 g terméket kapunk íkitermelés: 9655).
E témánál íz ís a €.íJÍ7íO:»N;Nsj összegképletre vonatkozóan:
zámltott.; C% 55,77 H% 7,5 5 N% 2,86 Na 54 4,69
téri: 5 7,98 8.05 2.94 4,64
Β A Ρ T A - o k t i 1 - e í Π-é π glr k β 1 - d í é s-z te r-d i ® á r ri u m s 6
A terméke? fehér színű szilárd anyagként 80%-o.s kitermeléssel kapj-uk. A ÍLC elemzést aluroín-íurnfemezen lévő 69 típusú szilikagélen végezzük:.
- 25 * *4¥* «« ,A * χ *♦ ♦ ♦ * * * « 9 9 Λ 4 * X φ 4» «V* 4 »
Eíuálószerként kloroform és metanol 1:1 t-.érfogatarányű eleg*yéf*has«na4jolir,*“»h»*« “ kiértékeléshez a kromaíogramra índikárorpermetet poriasztóak, -majd 100-159 CC hőmérsékleten elszenesitjü-k. Az iadíkáiorpermet összetétele: 10 tni 4-.taeíoxt.-feenz:aldehÍd, 200 mi etanol, lö mi 93 tön-egfó-os kénsav ss 2 mi vízmentes ecet sav. A kiértékelés során l foltot kapnak, K··: 9,4.5.
’H NMR {CDCh} o ippraO 0,84-9,89 (t, 6H), 1,26 í-széles s, 20H), 1,51-1,5-7 ím, 4-Hj, 3,3/-3,42 (£. 4H9, 3,53-3,56 im, 4H). 5,96 is, 4H), 4,05 (s, 414), 4,17-4,21 (tn, 4H}., 4,37 (s, 4Hi, 6,87-6,94 (;a, 4H), 72 0 3 - 7,09- ím, 41-1).
Eleman-alizrs a Co-H^Njö-nNaj összegképletre vonatkozóan:
C% H% N% számított.: 6 3,96 8,12 3,5 5 mért: 63.57 8,11 3,53
4h) lépés - ΒΑΡΙΆ «ββ«-, dl-· és tríeílléaglskol alkil-éterével képzett diészteretaek ka 1ei»-msó 1
BAPTA mono-, dl- -vagy trieíiién-gl-ikol- alkii-éterével képzett 0,0025 mól •megfelelő dié-s-zte-rét 250 ml metanolban oldjak. A kapott oldathoz 3-5 ml vizet adónk. Ezt az oldatot mágnes-heve?övei ellátott 300 mi térfogatú Eríenmeyer-lombtkba visszük be. Intenzív- keverés közben az oldathoz 0,0025 mól porított Calíj-et adnak. A keverést szobahőmérsékleten 3 órán át folytatjuk. Ezt követően az elegyet (What.man- gyártmányú, N I jelzésű) szűrőpapíron kérésztől szűrjek, ss a kapott oldatot vákuumban- (1,33-2 kPa nyomáson} betömányítjük, A kapott -csapadékot bárom alkalommal (egyenként 25-30' mis etanollal,. majd két alkalommal dietil-éterrel lefolytatott azeotrop d-eaztilíáe tóval szárítjuk. A terméket végúl hexánnal mossak, majd szobahőmérsékleten 5 órán át vákuumban (9,67 kPa nyomáson·)· szárítják..
A Ρ T A -metil- m a n a e t i I é ss g i 1 k s 1 - d i é s z t e r - k a lei u m só
Fehér por alakban 1,42 g terméket kapunk. kitermelés: 90%.
Eíemaoaiízis a GMCAfOíjCa összegképletre vonatkozóan.;
C% H%: N% Ca% számított;. 55,33 5,40 4,44 6,35 mért: 53,7-4 5,78 4,43 5-,.90
SAPTA-h e ρ £ ί 1 - ns ;> n a ? t ί 1 é n g H k ο 1 - d í é s z tér -kai e í « m só Fehér por alakban 1,79 g terméket kapónk, kitermelés: 9076, Elemaaalizts a összegképletre vonatkozóan:
C% K% M% CA%
számított: 69,15 7,27 3,54 5,01
tnérí: 60,32 7,63 3.54 4,59
A Ρ T A - o k t í 1 - mo a o e 111 é n g1 í k © 1 - ó t é s z te r- k a 1 e 1« m s ő
Fehér por alakban 1,31 g terméket kapunk, kitermelés: 90%.
Elemanalizis a GsíHájNjO^^a összegképletre vonatkozóan:
C% Hö N% CA % számított:
mért:
61,01
61,00
7,50
7,82
3,38
3,84 »'* »* «Λ 4*
4,84
4,88
Β ΑΡΊΓA~hepíil-dlet iléngííkol-dsészi er- ka lehrntsó Fehér szilárd anyag alakjában 1,7? g terméket kapunk., kitermelés; 80%.
.Elemanalízrs a összegképletre vonatkozóan:
C% NM Ca%
számított: 59,59 7,44 3.16 4,51
mórt: 59,61 7,79 .3,15 4,04
A ΡTA~ nset11~írieί t 1 έng8ikο 1 -dsészter-ka ieinm só
Fehér szilárd anyag alakjában kél g terméket kapunk, kitermelés: 80%, Elem-analízis a CkilsíiN^OjrCa összegképletre vonatkozóan:
C% 1Ί% Ca%
szárait ott; 5.3,60 6,26 3,47 4,96
mért: 53,95 6,33 3,26 4,73
3. példa - BAPTÁ-diósxter-sók ín idíre lípofil jellegének meghatárözáA llpoítl jelleget & találmány szerlsöí BAPTA-diészierek számos sója esetén tanulmányozzuk oly módon, hogy összehasonlítjuk e vegyöletek oldhatóságát szerves és vizes oldatokban, A szerves és vizes oldathoz oktasolí és Száológíat sóoldatot használónk, A megoszlási együtthatót (P.,}, vagyis a szerves és vizes fázis közötti megoszlási arányt számos (Ijllletve (11) általános képletü BAPTA-diészter-sóra meghatározzuk, ahol
CHjCOOM' MOOCCHy
Y/XOOCHs -H-QSj--GCBhCHíG-CgHf — N- Y/XOOCH2 (1) liléivé (11) képletö vegyület
Χ/Ύ jelentése Cs:iljB,; általános képletö csoport, ahol n értéke 2-lSl 8-ig terjedő szára, vagy CaH^iíöCHjCHj),,.,. álPPPPtal.ános képletö csoport, ahol m értéke 1-fől 3-ig terjedő szára, és n értéke l~töl IS-ig terjedd szám, és
M jelentése nátrium- vagy kálium ion, és amely képletben az aromás gyűrűn a helyettesítők az orto-helyzetben vannak.
Az eredményeket - LogFc értékeként számítva - az 1. táblázat fönteti fel.
1, táblázat
SAFTA-dtészterek megoszlási együtthatója (Pj oktaaol/s.óőláat közegben
— i X az (0 általános képletben Y a fii) általános képletben LogP5 2ó aC hőmérséklete»
Μ « N a' M - -- CL’
; -k .·$ $ » -3. j» -L?i**
C LL -Lói - L3.3
Ctótó .................................................................... -0,63. -0,51
CLL -0,0 1. 032 i
CL II <, 0,82 0,76
CLL? 0,85 0.70
CHjOCH2CH2 -2.27 -L85
CjH5OCH;.CH2 -L41 -0,99
CjH7OCHjCH:: -0,8 1 -0,48
CLL0CILC1L -0,06 0,14
CyHiíOCHjCH, 1,34 i ,00 ΐ
CsHnOCfhCH, 0,80 Llö ;
C.oHjjOC-H^CHj 1,90 1.50
C,^Í3.?OCH2CHj Ló? * Φ *
C,xH>;0CH>CH3 L5Ö ** $
€ H ${ Ó'C H > C ίΐ y ) -ϊ - L8 2 -1,1 8
CLB5fO€Í-h€H?h -L20 -0,,7 3
CtóitóOCHvCrhh -0,29 0,83
CAHhÍOCHjCH;,};; 0,83 0,9 5
€,H($íöCH3CH2b L30 8,95 i
ό,Η 7(OCH;;CK:).> * £ * 1,20
Citól.fiOCHjCHj), 1,2 5 L02
CHaOCHjCH,?;; -1,93 - i .00
€L-'H,$fOCH2€H2b * ΐ $. j
tétranátrtumső rtsses- adat >* dikalcísmsó *m fi) - 3ΛΡΤΑ
A közök adatokból látható, hogy ÖAPTA áj dlés-ztereinek többsége esetén a iipo-fil jelleg jeientö-sea meghaladja a 8APTÁ alap vegyit let. lipofti jellegét. A megoszlást együtthatót érdekes tnődon az ellen-ionok megválasztása is betelyá•salja. A 8A.PTA-diészterek któeLmsóLtak Ii pofii jellege általában meghaladja a megfeleld í-átrtómsékét.
4. példa - BAPTA-digszterek /« v/rra hatása €«-, Fe:>- és Zsí-ionok me go sz1 ásá r a v I z/o-k t st a ο 1 koz eg ben * X ♦♦
- os « » » ; ; »·. ”· .„·
A találmány szerinti áj BAP'f A-díészterek kelátképzö íHiéHás'áí vrze^ey»·· hldroíőb környezetben vizsgáljuk,, és· BAPTA-dioktíl-eiiiéngUkol-észtej· (DE-BAFTA-90. titnátriomsői háre-m· keiértékö fémionra ffe. Zn és Ca'A gvakot ο 1t h a t á s a v a 1 s z e m 1 élte 11 ü k.
Az e vizsgálatsorozatban használt hidrofil· 'hidroföb rendszer 15 tnl oktanoibóí és. 15 ml 6,5 pH-jú sőoldaíból áll. DP-ÖAP?A-99-st az oktanolban oldjak, mielőtt ezt a fázist a sőeldattal Össszekeverjük. OP-ÖAPTA koncentrációját a különböző kísérletekben a kővetkezőkben adjak meg: Ca^'-ionokkal végzett kísérletekben 2.1 x lö'® - 5,5 x lö'* mól. Zn- vagy fe '-ionokkal végzet: kis érietekben 5,4 x lö'<; - 1,4 x 10';l mól,, amint az ÍA-C ábrákon. {eltüntetést. pontok jelzik. A megfelelő fémionokat a vizes oldathoz adjak a kővetkező koncentrációjú, klorídok alakjában: Fedő - 2xfö'J mól, ZrtClj - 10 lmol és CaCij ·· 2x1 Ö'·’ tnoi.
Az oktanofí -és a pnffere-lt fázisokat összekeverjük egymással, majd 1 órán át szohaS-iömérsékleten Intenzív keverést, ez: kovetoett percenként 4ÖÖ0 fordulattal 10 percen á: centrifagálást végzünk az elegy két fázisra szétválasztása céljából.
A vizes és ektan-ofos mintákhoz eltérő analitikai eljárásokat használunk.
A vizes mintákat kíerk gyártmányú TCP etalonokkal elemezzük. A vizsgált oldatokban a kalcium- és cl oktart álmát induktív csatolású plazmát alkalmazó atememisszlós spektrometriás eljárással határozzuk meg. Ehhez Specíroflame ki odú la E típusú 1CP-AES berendezést használunk {gyártó cég: Spécire, Kdévé, DE) szabványosított, keresztárhmlásá porlasztót és állandó EOF lángot használva. A berendezés beállításai a következők: energiaszint - 1,2 kW, hütöáram - 15 l/.mírs, segédáratrtlús 0,5 i/mtn, po riasztó áram -0,.5 l/mln.
Az egyenként 2 ml térfogatú oktanolmintákat üvegcsőben fűlőtömbben helyezzük el. Az okíanol elpárologtatósára a mintát folyamatos sitrogénöb 1 ités közben 150 ®C hőmérsékletre melegítjük. A. maradékot 2 ml tömény salétromsavban oldjuk, majd 1 órán át 120 -5C hőmérsékleten tartjuk.. A csöveket ezután hagyjuk szobahőmérsékletre lehűlni, ezt kővetően ioncserélt vízzel 10 ml végtér fogatra egészítjük ki,
A vizsgálati eredmények azt matatják, hogy BAPTA-dioklil-etilenglikoí-észte-r lipofll jellege 10 ööö-szeresea meghaladja a SAPTA alapmoickuía nátrsumsójáét, és előnyösen a szerves oldószerben oldódik, amely ez esetben okíanol.
Ezenkívül - amint az I A-C ábrákból látható - a SAPf A-diészler közvetíti fémionok átvitelé? vízből oktanolba és ezen fonok felhalmozódását a szerves fázisban, míg ΒΑΡΙΑ esetén ez nem figyelhető meg. A BAPTA-dsészíer ezen előnyős keláíképzö hatása egyértelmű abból, hogy Zn-Ionokat vízből oktanolba visz át akár már 10 gmol/i koncentrációban. míg Ca~ és Ee '-ionok megfelelő átviteléhez 2 5O-5ÖÖ pmcí/l koncentrációjú hatóanyag szükséges.
- 29 ♦ «χ«φ ** * φ « * φ φ * * * * * * * »« φ
8) 8Á.PTA-diész.$er«k biológiai vizsgálata *·» '*>* *··* *♦♦* ·.* λ találmány szerinti kelátképzöszerek áj diésztereit különféle biológiai mod-elirendszerekben vizsgáljuk abnormális kaieiu-mkoncentráctö ólján -kiváltott rohamokra* elszenvedő sejtekre vagy szervekre gyakorolt védöhatásak szempontjából. Az in vi.lro (szöveti sejttenyészefeken és agyhoceogenizáíuíoouj és ín vivő (mongol homoki patkányokon, és Wisrar-típ asú patkányokon) lefolytatott kísérletek eredményeit az alábbiakban ismertetjük,
5. példa ~ BAPTA-dlész.(.erek hatása a sejten, belüli Ca'~
-koíicentráelór» (ín vtírn vizsgálatok)
Két különböző 8APTA-dieszter kelátképzó hatását vizsgáljak sejten belüli Ca''-koncentrációra i« Wfro körülmények között patkány kipp&ca input eredetű tenyésztett ídegsejtekben, és a hatást fluoreszceneiavizsgálattal követjük.
Az a 1 kaíma-zott sejfte.«yés-zet patkány óíppocimpas eredetű, elsőd leges ssétosztású kultúra, amelyet E 19 magzatból áiliíuak elő és 104 héten át 13 m-m-cs fedöü-vegen tenyésztünk. Röviden összefoglalva a .sejteket tö térfegat-% lús-zérumot és lö térfogattá borjóetaferiő-szér'em.ot tartalmazó DMEM. közegben helyezzük mérölem-ezekre, és e közeget 1 hét múlva lö térfogat% fószéromo· tartalmazó DMEM közeggel helyettesítjük. A mérőlemezekre helyezést követő 5 nap múlva glia burjánzását 3 napon, át ö-ftuor-^’-dezoziaridinaei végzett i-akubálással blokkoljuk. A. C a’-ionok, kimutatására a fedöüvegeket rőgzitőkőzeggel mossak és 3 p.mol(l ΡΙαο-3-.'ΆΜ (gyártó cég; Moleeular. Probes Inc.) színezékkel inkubáljuk 0,2 vegyes% Flurontc FI 27 kereskedelmi nevű termék jelenlétében szobahőmérsékleten 1-1.5 órán át rázva. A tenyészeteket ezután legalább 1 órán át a rőgzitókőzegben mossuk és a kővetkező 1-3 óra alatt felhasználjuk.
A vizsgálatok során a következő oldatokat é.s hatóanyagokat használjak. A rhgzsíőközeg komponensei: ;29 mmn-i/l NaCI, 4 nmol/l KCI, 1 snirsol/1 MgClj, 2 uimol/1 CaCU, 4,2 mmold glükóz és 10 atmol/f HEPES. A pH értékét n-átrium-hidrex'íddai 7,4-re, az oztnolarítás-f szacharózzal 320 műt® értékre állítják be. A dseíil-BAPTA (DP-B APT A-2.3; vagy dioktil-etilénglikoi-8ΛΡΤΑ ((>?--8APTA-99) 8APTA-dlésztereket használat előtt fagyasztott tö-rzsoid.at:bó{ állítják elő -rögzítőközeghen, A BAFT/k-diészíert az egyes vizsgálatoknál megadottak szerint b. 1 mmol/1 végső koncentrációban 2 pm átmérőjű hegyben végződő, nyomás alatti pipettába töltsük, amelyet a cellától 50 pm névleges távolságban helyezőnk el, A hatóanyagot 0,5-5 s időtartamú nyo-másimpulzusokkal őrit j ük a pipettából.
A megjelenítéshez Fluo-3/.ΑΜ színezék adagolása után a fedőüvegeket közős- fókuszü, lézeres pásztázó elektronmikroszkópban (teiea, Heideíberg, DE) helyezzük el, és szobahőmérsékleten 1 pmol/l tetrodoto-xint (ΠΧ1 tartalmazó rögzitökőzeget áramoltatunk felette 3-5 mi/min áramlási sebességgel. A közös fokaszü, lézeres pásztázó elektronmt.kro-$:zk:dp 443 nm huiiásihos.szü.ságnái vég<« « « „ » * ** ·»» zett gerjesztéshez .argonlo-nlézerred vas· tel szere Ive.. Feted í.wmifcai«*K-áí«-be«dSs elkerülésére a lézerfényt a névleges inzcozstss I-3%-ánál használjuk, ó,3-s»oros nagyítású, vízbe merülő objetóvvei 256 x 256 képeiétnes felvételeket készítünk. Szükség esetén a- cella teljes háro-mdimenztós rekonstrukcióját a cellán * *'♦*·» **» X keresztül 15-20 egymást követő 0,5-1,0 ρπι.-es optikai metszet, alapján, végezzük el, Λ fluoreszcencia intenzitását Leiea kiértékelő program és Adobe 'Photoshop berendezés (forrás: Adobe Syst.ems) alkalmazásával határozzuk meg.
2,4 mmol/i kalciareion-kűitcentrácáójű DMEM közegben, tenyésztett, iH'ppoeő/npKs eredetű idegse-jteket vagy hordozóval, -azaz rögzitöközeggel (2. ábra, 1. és 2. keret) vagy PF-3AFTA-23 használatával (2. ábra, 3-11, keret) kezelünk. A hatóanyag (1 omold; 9 s impulzussal végzett) hozzáadása a sejten belül a kalcíumk-onceatráetó csökkenését váltja ki, amit a kezelt sejtekben a regisztrált fluoreszcencia csökkenése tükröz. A kalcíumíon-koncentráció ezen átmeneti csökkenését 7-8 s időtartamon beiül teljes regenerálódás követi a sejtekből a hatóanyag kimosása után (2, ábra, 12-20. keret). Azonos mennyisá.gii hatóanyag rövidebb íöötaríareü alkalmazása ugyanazon cellában a fluoreszcencia rövidebb idejű és kisebb mértékű csökkenését váltja ki (ezek az adatok nincsenek ábrázolva).
Fontos megjegyezni, hogy a sejtfalon -át nem hatoló alapvegyűlet (BAFTA-Na^) a sejten belüli kalciumtojs-konc-entrác-iőnak csupán jelentéktelen növekedését idézi elő patkány ítippoc.«mxn«.$' eredetű tenyésztett idegsejtek felületén alkalmazva (nem. ábrázolt adatok szerint),
A 3, ábrán 3APTA-diészterek hatását mutatjuk b-e a -sejten, belüli, kalciumion-kencentráctó kálium által ki váltott «öve ke dósé re.
//tpp.ocuffrptfs eredetű idegsejteket a fentiek szerint tenyésztünk, és a *-gal jelzett időpontokban 4Ö ros időtartamú K‘-impulzusok hatásának tesszük ki t löö mmol/l koncentrációjú KCl-oldatot tartalmazó pipettából), bileoöí'zó körülmények között minden ilyen K'-lmpulzos a sejten belüli Ga! koncentráció 3-4-.szer«s növekedésével jár, amit a fluoreszcencia jel .átmeneti növekedésekéül regisztrálunk.
A sejttenyészeten minden regisztrálás előtt 5 percen át 0,1. 1,0 vagy 10,ö pg/ml koncentrációjú. 3AFTA-díoktil-eíiíéngfikolt folyatunk át. A 3. ábrán feltűntetett eredmények 5 egyedi éi'ppoeömpn.r eredetű idegsejt fluoreszcencia változásának átlagértékei grafikusan ábrázolva.
Amint a 3. ábrán Járható, a 8'APTA-dtészter csillapít ja a sejten belüli kalclumion-koncentráció káliu;« okozta- növekedését, és ezt a hatást koncentrációjától függően fejt; ki.
6, példa - 8APTA-díészterek hatása a NaZK-ATPdz aktivitásra Rilokarpin j«iekoióv.al kiváltóit kísérletes epilepszia során patkány hippocoívpiís-áfo-an vizsgálták a Na/K-ATPóz enzim akt t v i i.á.s át ffernandes és munkatársai; Neuro-chem. lót. 28, 497-500, (199611. A. vizsgálat során megálla♦ *
Μ X *φ Í * ψ** *** * * * pííot-ák,. hogy az: akut és nyugalmi időszakok alatt az cnzttr^WtvA«sá».c:sőkó.í.. T kent, míg az epilepszia krónikus fázisában növekedett (bár nem a normális mértékűre}. Ezekből az eredményekből levonható az a következtetés, hogy a pilokarpin injekció okozta agykárosodást kővető spontán és ismétlődő rohantok megjelenésében szerepet játszhatnak a Na/K-ATPáz aktivitásban bekövetkező változások.
Pslokarpla által kiváltott rohatnokat modellnek tekintik humán epilepszia számos típusához és szók kifejlődéséhez. bgy vélik, hogy sejten kívül meg növekedett K. '-koncentrációt eredményező csökkent Na/K-ATEáz enzlmaktivltás az epilepsziás állapotnak és ki fejlődésének egyik kiváltó tényezője lehet.
Ezért megvizsgáljuk 8APTA-diészterek hatását a Na/K-ATFáz aktivitásra különböző koncentrációja dieíil-SAFTA íDF~8ÁP?A. 27, dinátrsumső) útján kezeit egéragy-homogenizáíutnhaa, A 8AFTA-diészter vizsgált konoeutráclötart o tn á n y a: 10' ' -1 0 * p g/ tn 1.
Egéragy-homogenizátumot a következő módon állítunk elő. CD-I típusú flö-d! napos) kim egereket gyors lefejezéssel megöltünk.. A koponyát felnyitjuk, az agyat eltávolítjuk és két részre vágjuk. Az agykérget elkülönítjük, nátrium tart a í tn ü Riager- pof fér oldatba helyezzük, jéghideg PB S -sel háromszor mossuk és jégen tároljuk. Az agyszővetes jégen Polytron típusú berendezéssel 4 χ 3.0 s időtartamig percenként 14 000 fordulattal homogenizáljuk. A homogenizáló puffer a következő alkotórészeket tartalmazza: 250 mmol/1 szacharóz, I mmol/l EGTA, 2 δ mmol/1 7,4 p-H-jd í-ÍEEES-tris és a PMSF proteáz inhibitor,
A homogenizáfutnot Sorval típusú hűtött centrifugában 2? Oöö g-vel pörgetjük, A membráafrakciö· ősszegyüj(lük és a homogenizáló pufferben újra sz.ttszpersztbí készítünk belőle. Miudert kísérlethez 1 mg/úti koncentrációjú törzsoidatbói frissen hígítunk DE-BAPT.A 27 oldatot, amelyet a feltüntetett végső koncentrációban adunk sz ATPóz reafcclóközeghez.
Na/K-ATbáz vizsgálatát a szakírodalomfban ismertetet módon is mmol/l)
Na.· X-.ATFáz inhibitor (ouabainl jelenlétében és inhibitor nélkül folytatjuk le [Norby 1, és O. Cottpied: Methods ta Etizyttiology, 156, 116-119 (1908}]. A prote iníartalcm meghatározására az ismert, B rád fo rd-féle Bio Rád módszert használjuk [Braáford, M.: Aaa. Biocnem. 72, 248-257 (1973)].
Atnint a 4. ábrából látható, 0P-8ÁPTA 27 egér agykéregben Na/K-ATEáz aktivitásában dózísfuggö növekedést vált ki, ezért fiziológiai viszonyok között vélhetően kisebb sejten kívüli K.'-koncentrációt eredményez,
7, példís - BAFTA-diészíereh hatásai sejt szintű szívműködésre
Dieül-ÖÁBl A ( DF-B.AP Í A-22 t szivet védő hatásosságát e hatóanyagnak tenyésztett szivizotnsejtekben a membrán működési potenciáljára gyakorolt befolyása útján állapítjuk meg.
Szív kamra-ízomsejteket OSÜ-4ŐÖ g testtömegú) ívarérett tengeri malacokból enzimes szétválasztási eljárással kaput-k (Íseaberg G. és Kiockner 1/.:
Pflugers Arch., 39S, 6-18 (1982)]. A sej)ekei D-tÁFH0T-'3WD*’típ’u-sú«snwr» mikroszkóp (gyártó cég:: Nikon, Tokió, .IP) tárgyasztalán 0,5 ml rögzitőközegben helyezzük e.l,. amely felest 1-2 ml/min. sebességgel Tyrode-oldatot (140 mmol/1 NaCI, 4· mmo-l/1 KC1, 1,3 mmol/1 CaCh. I nvnwl/1 MgCL, 10 mmol/1 glükóz és 5 ermoi/l HEPES, pH-7.4) áramoltatunk.· Az. ízomsejteket 0,2 Hz. frekvenciával síimulál.juk és szo-bahöm-érsékíeten (24-25 ’C) vizsgáljuk. Az ennek során használt csatlakozó elektródákat üveg mlkropipettákból készítjük; (120 mmol/1 K-aszpariát, 20 mmo-l/l XC1, 3,5 mmol/1 MgCL, 20 mroel/l KlLPÖs- 3 mmol/l Na:;:ATP, 10 m.mol/1 glükóz és· I or mol/1 EGTA kompoaeaseket tartalmazó, (7.4 pi-l-jú) pip-ettaoldattal töltve a pípettavég ellenállása· 2-4 ΜΠ. Tengerimalacokból származó sz.ívkam.ra-i.zojnsejtek működési potenciálját ismert mő-d<so Axon 2Ö0A típusú berendezéssel (gyártó cég: Axoa ínstromeots íné,, Foster City., CA, US) regisztráljuk (Felzen és munkatársai: Pflugers Areh., 427, 422-421 (1095); Felzen és munkatársai; Circ. kés. 78, 253-261 (1996)1.
Megállapítottuk, hogy (sem ábrázolt eredmények szerinti 10'! !-}0‘l4 mo-l/l DP-BaPTA-23· tú'lpolarizálást váll ki a tenyésztett sz;vizomsejtek nyugalmi potenciáját (8 mV-ía.1} csökkentve- és működési időtartamukat lerövidítve.
Az 5. ábrán stimulált izomsejteken végzett membránpotenciál-mérések eredményei láthatók ouabain nélkül inkubálva (1 jelű görbe, ellenőrző sejtek) vagy íö' moi/.l·ouabaia jelenlétében ó percig (2 jelű görbe). 10 percig (3 jelű görbe) és 13 -percig (4 jelű görbe) iukubáiva - ouabaia és 10’mg/mt 09-8APTA-23 jelenlétében 35 percig inkubált stimulált izomsejtek mért asembránp-otenciájához hasonlítva (5 jelű görbe),.
Amint az .5. ábrán látható, az oaabaín Na/K-ATP&z inhibitorral 13 percig -végzett inkubálás a szívizomsejtekbea -(a 4 jelű görbén nyilakkal jelölt) depóianzátá-s utáni késleltetést (DAO) Idéz elő. Az ouabaia toxi.kus-ságára jellemző ezen reagálást DF-SAPTÁ-23 ate-g szűnteti (5 je-iű görbe·),
S. példa ~ BAFTA-dlészterek hatása gl»tárnát akozta idegsejthalálra .A találmány szerinti 8 APTA-dicsztgrek ide gsejtek el: védő- hatását glütamát okozta toxikuaság (» virro modellrendszerében vizsgáljuk.
Fatkáuyból származó üjszülői;i agykéreg-ideg-sejíeket 24-méfö-helyes lemez mérőhelyeire viszünk fel és ismert módot? tenyésztünk (Sattler és .munkatársai; 1. Cer'eb, 8 io od Flow Metals.·, 17, 456 (1997;).
A szexumpreíeiaek teljes eftávo-lltására a sejteket egy alkalommal 0,5 ml/'mérőhely ellenőrző oldatul mossuk., A (Sigma gyártmányü) ellenőrző oldat a következő komponenseket tartalmazza: 12; atmol/l N'aCi, 5 mtnol/1 KO, 10 mmol/1 iiEFES-sav, 7 mmol/1 HEFES-sátdurösó, 1 atmol/1 nátriunj-pirnvát, 1,8 mmol/1 CaC'l-», 3 mmől/i HaHCOi, 0,01 mmol/1 glicss é« 20 mtnol/1 D-glükóz, pH--7.4. Λ DP-B-aP'TA-23- hatóanyagot először OMSÖ-ban oldjuk, majd az ellenőrző oldatban tovább higsi juk 3Öö, 100, 3(í, lő és 5 pmol/'l koncestráció el* Jt «««.
» · ’» i *' ’* 'χ* * éréséig. A sejtekhez adott DMSO mennyisége legfeljebb f fömeg^.’-A* t«o*yós2-t-. tett idegsejtekhez adjuk a vizsgáit (0,5 mlAnérőh-ely,» DP-BAPTA--2.3 hatóanyagot, és 37 °C-on 1 órán áí nedvesített légierő kamrában i-nkubá.ljpk. Ezuíán a mérőhelyekről a kőzege-t iesztvatjuk és friss ellenőrző oldattal helyettesítjük.
•majd 37 ’C hőm érsek .leien további 30 percen át ín kubálást végzünk. A mérőhelyekre l mg/ml koncentrációjú törzs-oldatból 50 pg/mi végső koncentrációnak megfelelő f-Cat # P-1304 kereskedelmi jelzésű) propidíum-jodidöt (Pl, gyártó cég: Moleeular Probe.s Inc.) adunk, és meghat ározzsrk a fluoreszcencia kiindulási értékét, A sejteket ezután 1 órán át szobahőmérsékleten sz egyes kísérleteknél feltüntetett, különböző· koncentrációjú DP-BAPTA-23 jelenlétében vagy hatóanyag rtéiköl 309 mmol/1 (Signta gyártmányú! L-glutaroáttal kezeljük.
A vizsgálatok során amikor a giutamát álfal kiváltott rohamot megelőzően a sejteket a B APTA-diészíerrel kezeljük, a hatóanyag a roham időtartama alatt jelen van a közegben (6. ábra). Egyéb esetekben a DP-BAPTA hatóanyagot csak a giutamát által kiváltott rohamot, követően alkalmazzuk a feltüntetett időpontokban (lásd a 7, ábrát), A vizsgáit: 8APT'A-áiészíert tartalmazó ellenőrző mérőhelyekre giutamátmentes. ellenőrző oldatot adunk az önmagában a vegyület által okozott tosikusság mértékének ellenőrzésére.
A rohamot kővetően a gluiamáiiafsalmó közeget eltávolítjuk és glutamátmentes, {50 ng/mi) 'Pl-rartahsá közegre cseréljük. Pl-fluoreszcencia méréseket I óra időközönként 24 órán át folytatunk.
Az alapszint levomásával kapott fluo-res-zceaciatné-rési eredményeket I ro-mo-l/í MMDA hatásának l órán át kitett azonos· tenyészeten végzett Pl í'luoreszcencíaméí'ések eredményeshez képest aortnalizáljuk, A sejthalált sok mérőbelyes lemezekhez alkalmas Cytofiaor II típoső leolvasóval (gyártó cég: PerSeptive Biosystems)- végzett fluoreszcencia-méréssel követjük. A glutaraátroham okozta idegsejrhalái '24 óra alatt megközelíti a lőö%-ot.
Az elpusztult sejtek hányadát a kővetkező módon számítjuk:
elpusztult sejtek hányada = (Ρ»-Εο) / F^MDA ahol F( jelentése a Pl fluoreszcencia a t időpontban, F* jelentése a kezdeti Pl fluoreszcencia :a ö idő-pontban, és Fimm&a jelentése I stntsl/l N-tnetil-D-aszpartát í'KMDA) utján 60 percen át kezelt, ugyanazon elválasztásból származó és ugyanazon méröleroezeo 24 óra időtartamig. tenyésztett azonos tenyészet Pl fluoreszcenciájából az alapszint levonásával kapott érték.
Amint a 6. ábrán látható, DF-BAPTA-23 dózistól függő módon csökkenti a glu·árnál által kiváltott idegsejtbalált. A 8APTA-dicsztcr ilyen védő-hatása már 3U prooi/1 koncentrációnál egyértelmű.
Ez az idegsejtvédö hatás .ezenkívül kimutatható, ha. a (390 pm-ol/i) DP-BAE'ÍA hatóanyagot i órával a gl-utamátroham sióit (b. ábra), a glutamáttal egy üt 5 vagy a giutamátroharnot követő 60 perc máivá 3Íkalw«.z-í«?k*«'ífá*ad* a,“* ábrát).
9. példa - BAPT'Á-diészíerek itlegsejtvédő hatásai; globális eloagys lse áss a modeil
A találmány szerinti B API: ?r-d tesztetek. ideg sejt védő képességét megvizsgáljuk továbbá mongol homoki patkányokban megvalősított globális, elöagyi is éra· i-a modell rendszerében.
E vizsgálatokhoz 69-70 g: testtömegé. hím mongol homoki patkányokat 'használunk (szállító eég; Charles Siver Laboratories, OS).
A vizsgált álfátokba.» a következő módon váltunk: ki isémiát. Patkányokat (50 tő r fogat % oxigént és 70 ).érfo-gat% diniírogén-oxldot tartalmazó) érzéstelenítő kamrában 4 térfogat0/» halotáso.a.1. érzéstelenítünk, és az érzéstelenítést orra helyezett maszkot használva 30 tér foga t% oxigén ás 70 iérfoga.t% dínitrogén-oxid elegyében lévő I térfogat% halotánoal. tartjuk fenn. A.z isémla kiváltásához mindkét nyahi verő-erei -a nyak középvonalán végzett: bemetszéssel izoláljuk, majd ártériacsipeszeket: 'használva átmenetileg - a jelzett módon '10 vagy 20 percre - elzárjuk. Az agyi 1 sémi a teljes időtartama alatt - amíg: a csipeszeket használjuk - az érzéstelenít est halo-tás nélkül csak 30 térfogati» os igén es 70 térfogatié .dlaítrogén-oxíid alkalmazásával tartjuk fenn. Az tsémia időtartama alatt a végbéfszondával mért végöélhőmérsékletet 37-37,5 °C értéken tartjuk, ehhez melegitőlámpát és ínelegitöpárnát használunk. Alkalmazásuk esetén a vizsgált 3AP'TA-diészíereket vagy pare-nterálisan iatraperítoaeális úton vagy orálisan adjuk be az egyes kísérietekoéi feltüntetett időpontokban, és dózisokban. Kontrollállatokat. csak hordozóval, vagyis a BAPTA-diészter helyeit 0,9 tömeg%-os NaCi-oldattal kezelünk.
A túlélési vizsgálatok során a globális elöagyi isétnia 20 pere időtartamát táiéió állatokat az isémiét követő 10 na-pon át .megfigyeljük.
S t -a tisztikai elemzéshez a Séudeat-féle t-vizsgáíatoí alkalmazzuk Bo-nferroai-.kor.rekciókkal és p <0,05 megbízhatósági halárral..
Idegsejtre specifikus enoláz (NSE) vizsgálathoz az agyi ísémia 10 perc időtartamát követően 24 és 72 óra múlva vérmintát veszünk a patkányok szemgödréből. Szérum fa felülás-zó frakció) kinyerésére a vérmintákat 5 percen át percenként 3000 fordulattal centrifugáljuk. A szérum MSE .akvtíííásút radioitüffiua-vizsgálattal .határozzuk meg, ehhez NSE készletet használunk, (gyártó eég: Pharmatops Ltd,, íL).
Az ideg-sejtre specifikus enoláz (MSE) szérumba·! megállapít .ot t enzimaríkus akii vitását arra használjuk, hogy megállapítsuk a vizsgált ÖAP'TA-óiészterek hatásosságát idegsejtek károsodásának: megelőzése szempontjából.
A globális isétais tanulmányozása során uiegáliapitható, hegy az isémlát követő 2-172 óra során a szérumba» nő az MSE koncentrációja, ami ezen kísérleti kő• 35 * Κ « · * ·· * * **♦ * * * rül mé nye k 'között előforduló idegsej tba iái késleltetésének fetet ♦meg/N í?Fií.> az Idegsejtkárosodás mérték-ének kvantitatív jellemzőjeként szolgáiba·.
A ).. 9. és lő. ábrán -olyan kísérletek, eredményes· vasutak összefoglalva, amelyekben két találmány szerinti BAPTA-diészíer, a diöktil-BA FTA (DP-BAPTA.-6Ó, d 1 oá t r i a xn só) és d iokíil-etilénglikoI-8 APT A í DP-.B APT A--99, dinátriamsój hatását vizsgálj-ok az idegsej tvé-dő képesség tekintetében. A mongol homoki patkányokban megvalósított globális eiőagyi isémia módéi trendszerében a hatóanyag különböző alkalm-azást jellegét és beadási módját vizsgáljuk.
A tanulmány ozott párámé terek: i) az idegsejtekre specifikus extoláz aktivitása az Állat -szérumában az idegsejthaiálí jelző mutatóként (8. és 9. ábra), és ii) az állatok túlélése í lö. ábra).
Amint a 8. ábrán látható, az is-émiás patkányoknak a vér áramlásának újbóli megi-adníásakor közvetlenül (í-ő) vagy azt követően .5 óra múlva (í~3) IntrapeníoöeáUsan beadott egyetlen 5 pg/kg DP-BAPTA-60 (szürke oszlopok) vagy DP-BAPTA-99 (fekete oszlopok) dózis- meggátolja az id.egs.ej.tek károsodását. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy BP-SAPTA hatóanyagok gyógyító- és megelőző módon egyaránt hatásosak..
A 9. ábrán két módon orálisan beadott ÖP--BAPTA-99 idegsejtvédő hatása látható.: A) ö,3 irsg/kg dózis 4 órával a vér áramlásának újbóli megindulása elöli és· egy további 0,5 mg/kg -dózis a vér áramlásának újbóli megindulásakor, és B)
0,5 mg/kg napi dózis az isémiát. követő 3 napon keresztül· Á DP-8.APTA-99 mindkét beadási módban erős védöhaíást fejt ki, amit a globális agyi Isémiát követő 24 és 7 2 óra múlva a szérumban mért NSE aktivitás jelentős- c-sökkenése •nótát,
Egy további vizsgálatban, a. SAPT/A-diészte-rek védőhatásának megállapításához a fentiek szerint 20 perc időtartamé globális efóagyi ísémiának alávetett patkányok túlélési idejét figyeljük meg. A vizsgáit állatok (mindegyik csoportban n~15) a vér áramlásának újbóli megindulásakor egyetlen dózisban intraperltoneáiisas beadott lő p-g/kg DP-3APTA-ÓŐ vagy DP-BAPTA-99 hatóanyagot kapnak. Kontrollálhatok is-30) a hordozóoldatot kapják.
Amint a lő. ábrán látható, DP-BAPTA-őO és ΒΡ-ΒΑΡΤΛ-99 egyaránt megnövelik az áilato-k túlélési idejét (kétszeres illetve háromszoros mértékben j.
Összefoglalóim megállapít ható, hogy 8 A FT A-diészterek hatásosnak bizonyulnak iaémia által okozott .idegsej (károsodás gyógyítása és megelőzése .szempontjából egyaránt, valuta-iát a gyógyászati hatóanyag paremeráh's és orális beadáss módja egyaránt alkalmazható.
Fontos megjegyezni azt, hogy a óioktil-BAPT A din-átriu-m-só-ja és kaieiumsója az ide.gs-e-jtvédö képesség tekintetében egyformán hatásos. Másrész! ebben a modeíiren-dszerhen a di-oktíl-etil-éogíiko'1-ΒΑΡΤ.Α Í .OP-Β ΑΡΤΛ--99 · nátrium sója sokkal krfejesettebí? idegsejtvédö hatást tnuia&oU.*if».m1tiÍekv3«.;'. ·*♦♦· kadcjumsójához viszonyítva.
18, példa - BA PT A-diészterek idegsejtvédö hatásának kőroktarti elet»zése
A ΒAPTA-diészterek idegsejtvédö hatásának további vizsgálatára részletes féikvantitatív mikroszkópos patológiai elemzést végzünk olyan állatok agysnintáln, amelyek S-AFTA-diészterek beadásával vagy anélkül globális elhagy! íséi»ta kiváltását szenvedték el.
A találmány szerinti kát leghatásosabb idegsejtvédö 8 APTA-diésztert vizsgáljuk dinátriurnsó alakiában, amelyek dioktil-BΑΡΤΑ .(DP-SÁPTA-óO) és diöktii-etiléngükoi-SΑΡΤΑ (f.)P-·8ΑΡΤΑ-99).
A 9, példában ismertetett módon 39 mongol homoki patkányt 10 percen át globális eiöagyi j-sémda hatásának teszünk ki. Az állatokat három csoportra osztjuk, amelyeket az alábbi módos kezelünk:
I. csoport -13 patkány, amelyekbe közvetlenül az isérnia utas DP-BAPTA-60 5 pg/kg dózisát itijektáljuk intrapeníoneálisan.
II. csoport · 11 patkány, amelyekbe közvetlenül az isémta után DP-8ÁPTA-99 5 ttg/kg dózisát injektáljak nüraperitoneáiisan.
Hl. csoport - 13 patkány, ezek ellenőrző állatok, amelyekbe hordozót, vagyis s ó ο 1 ti a ί ο I ί n j e k t á 1 tt n k,
Az isémiát követő 3 nap múlva az állatokat kerámia és ksziiazit? elegyévei újra érzéstelenít jak, az agyukat sebészetlleg eltávolítják és 7 napon át 4 terteg% formaldehidet tartalmazó PBS-hea tároljak. A éínpooowpns hátulsó részéből 7 μ na· vastagságú szeleteket veszünk, amelyeket mikroszkópos vizsgálathoz hetnatosiíianel és eozinnal színezünk.
A éíppűoompwz CA-1, C.A-2, CA-3 es barázdái· agytekervény alcsoportjait három aíterületre osztva vizsgáljuk,, ezek a test középvonalába eső, a középső és az oldalsó rész. Ezután mindegyik részben megszámoljak az élő sejtek teljes számát és meghatározzuk az ideg-sejtek károsodását. Az agykárosodás meghatározására használt önkényes skálának öt fokozata van: ti - normál, károsodásmentős szövet; 1 - minimális károsodás, az idegsejtek 20%-nál kisebb hányada ital el; 2 - enyhe károsodás, az idegsejtek 40%-nál kisebb hányada hal el; 3 közepes károsodás - az idegsejtek 60%-nál kisebb hányada hal el; és 4 - kifejezett károsodás, az idegsejtek Ső%-nál nagyobb hányada bal el.
Aralnt all. ábrán látható, a áíppoo «m/jus CA-2, CA-3 és barázdált agytekervéay tartományaiban DP-8APTA-99 szignilíkáns tdegssjl.védő hatást matat. Ügyenezen tartotnán yokban DF-ÖAPTA-6Ö Is hatásosnak bizonyul az isérnia által kiváltóit idegsejt-károsodások csökkentésében - bár kevésbé hatásos, mint t)P-BAPTA-99.
11, példa ~ BAFTA-dfészterek epííepsziselk-nés hatása (A? ví.v«o modell
DP-BAPTA-99 eoilepsziaelleaes hatását Wístar típusú óklkS^yókbna*t»eg»*»« valósított· állat modellben követjük, ahol (409 mg/kg) pilokarpin útján váltunk ki rohamokatE kisériethez 350 g névleges testtömegei (Wlsur típusú) patkányokat, használunk, A pílokarpits injektálása előtt I órával íntraperltoneálisan DP-3ΛΡΤΑ-99 hatóanyagot injektáíusik a 12. ábrán feltüntetett különböző koncentrációkban, A piíokarpis?. perifériás ntuszkarin hatásának csökkentésére 30 perccel a (400 mg/kg iní-raperítoneális) pilökarptn beadás eiőtt szubkután li mg/kg) met-íl-szbopö-íamint injektálunk,
Piiokar pín injektálását követően az állatok perceken belát porfínt adnak le a szeműk körűt, krónikásán rángatóznak,. bólogatnak, görcsös, akaratlan .mozdít la tokát végeznek és nedves kutyához hasonlóan rázzák magukat,· Ezek a tünetek végtagokon fellépő rohamok fokozatai, amelyek a Ractne-skála t-,2. fokozatává 1 hasonlíthatók össze. Az állatok ezután szokásosan a 3. fokozat felé tartanak, amelyben az állatok első végtagjukkal dobolnak. Általában 20 percen beiül az állatok a roham általáno-ssá válásának jeleit mutatják. Ekkor az állatok ágaskodsrak, vagy ágaskodnak és elesnek az el.só- lábak egyidejű rársgatőzása közben, és általános rángatózásos rohamokban szenvednek. Általában 20 percen beiül a patkányok a -rrn/tís epiiepíieus stádiumában vasnak. Ez az állapot természetét tekintve a végtagokat érinti, rövid időszakokban ráng-atózásos rohan? lép fel, A sísííív e/’í/epí/eux állapota olyan roham, amely spontán módon nem szűnik meg. A patkányban me-gyalösitott moáe.ttbe« ez azt jelenti, hogy 5 percen túl tart. Azoknak az állatoknak, amelyek 3 órán túl río/us ep»/eprf«?H,$ stádiumában vannak (és csak ilyen állatoknak) a. roham megszüntetésére intraperisoneálfsan 1:0 mg/kg ds azé pán. és 6.0 mg/kg i'sniioií? hatóanyagot adunk bo. A nagy dózisa pi'leksrpínnai kiváltott, modellben az epilepszia állapotában a mortalitás szokásosan 3-ő-5ö%-os.
Amint a 12. ábrán látható, ÖP-Β APTA-99 nem befolyásolja a végtagokon jelentkező- rohamokat, azonban képes az általánossá vált rohamok meggátiására, valamint a populáció telében meggátolja a .ctu/tiv epf/epz/czis· kialakulását, Ezenkívül a hatóanyag: csökkenti a sía?«.$ ep/Zepdcas 3 órás időtartama alatt fellépő mortalitást,
A közöli adatokból tehát levonhatjuk azt a következtetést, hogy DP~3AP’ÍA-99 alkalmas & kitérjedt (általános) rohamok me-ggátlására.

Claims (13)

  1. Szabadalmi igénypontok
    í. Stabil, ib} hidroxi vegyülettel kétszeresen -észterezett. (a) karbonsavak és gyógyászatilag elfogadható sóik. ahol (a) kétértékű fémionok (HO-OC-C HN-A-N-(-ClMCOOlí) j általános· képletű, gyógyászatilag el fogad h a ró- 38 kelátképzöszers. amely .képletben A jelentése telis sít vagy**feilfeííe-n.*-tAií>ás*«»·‘'“í* aromás vagy heterociklusos kapcso-lőcsopo-rt, atacly a képiéiben feltűntetett két nitrogénatomot közvetlenül összekötő láncban 2-8 szénatomot tartalmazó folytonos- tánc, antelyet 2-4 oxigénatom. szakit meg, feltéve, hogy a képletben Celsüntetett két nitrogénstorahoz kapcsolódó lánctagok oxigénatomtól eltérőek, és tb) egyenes vagy elágazó- láncú, telkei· vagy telítetlen alkatról·, amino aik.ano-1-csopo-rt és helyettesített vagy bel yett-esite tlett aril-aikanol-cso-portök közül választott csoportot tartalmazó, gyógyászatilag. elfogadható alkohol.
  2. 2, Az 1. Igénypont szerinti diészterek, ahol az A kapesolócsoport 2-4 oxigénaromtnal megszakított,. telít ért vagy telítetlen alifás lánc és -CR'-ÜR-O-CK;,CH:,-Ö-C· R’-;CR'- általános képletű csoport közül van választva, amely képletben az R-R és R'-R’ helyette-sltópárok a hozzájuk kapcsolódó -C~C- képletti csoporttal együtt egymástól függetlenül 5- vagy 6-atomos· aromás vagy heterociklusos gyűrűi: alkotnak, ahol az R-R résszel kiegészített gyűrű az R*-R’ résszel kiegészített gyűrűvel megegyezik vagy attól eltérő.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti diészterek, ahol az A kapesolócsoport képlete -CHjCfb-O-ClLCHj-O-CHjCH;-.
  4. 4. A 2. igénypont szerinti diés-zterck, ahol az A kapesolócsoport -CR^CR-ö-CHaCHa-O-CR’—CR’·· általános képletű csoport, amely képletben az R-R és R’-R’ hélyette-sítőpárok a hozzájuk kapcsolódó -C~C- képletű csoporttal együtt fxtráa, ttofén, púról., pirszol, im-idazol, 1,2,3-triazol, oxazol, izoxasoi, 1,3,3-oxadiazol, 1,2,5-oxa-díazoI, tiozol, izotlazol, 1,2,5-í ia.díazol, 1,2,5-tíadíazol, benzol, piridiö, píridazin, pirtnidin, pirazin, 1,2,3-triazin, 1,2,4-trtazin- és 1,2-, 1,3- és 1,4-oxaztn és -tíazic közül választott aromás vagy heterociklusos gyűrűt alkotnak., ahol az R-R résszel kiegészített gyűrű az R'-R’ résszel kiegészített gyűrűvel megegyezik vagy ettől eltérő.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti diészterek, ahol az A kapesolócsoport -CS~CR-O-CI3,CHj-{3-CR'~CR>- általános kép lelő csoport, amely képletben az R-R é.s R’-R·* helyeítesiíopáröfe a hozzájuk kapcsolódó -C~C- képletű csoporttal együtt egymástól függetlenül azonos vagy eltérő, helyettesit elles vagy helyettesített benzolgyűröt alkotnak, ahol a helyettesített be-nzolgyörú 1-4 helyettesítőt tartalmaz, ahol a he lyette-s sióik) helyettesített vagy helyett es 1 tet len 1-4 szénatomos alkilcsoport, helyettesített vagy helyettesítetl-en 1-4 szésato-mos. alkoxicsoport, fluor-, klór-, bróm- vagy jóda-tom, trífluor-m-etil-csopo-rt lehet{nek), vagy a benzolgyürű egyszeresen hely értés itett lehet -O-{CWA.,-O- általános képletű, két vegyértékű h-eíyetíesltővei, ahol n értéke 1.-tői 3-ig terjedő szám.
    ó, A 2. igénypont szerinti di-és-zterek,. amelyek 0.;ϊ1όί·-Ι,2-ίΙϊ<·1-0ίνζ-ί2-amino-eíií-éter)-N,N,34AN’-sesraecetsav és I. ,2 -brszí'2-amino -Cenex i) - etán-Ν,Ν,Ν’,Ν’'-tetraeceisav közül választott kelátképzöszert •rartaimaz.nak.
    -- 39 ** * 0 * $ 0 0 ♦ 0* * ♦ β » ’» » * ,** ’** X » s
  6. 7. Az i. igénypont szerinti diészter vegyületek, amelyek az t,B*k«p*le<«M*». *‘í jenem ez he tök
    CHgCOOM
    MOOCCH?
    XGöCíL·
    N — CáBt
    CáAGOOX
    0), ahol az aromás gyűrűn lévő hely ettesitők orto-helyzetben vannak.,, és X jelentése €,,1A,,,; általános képletű csoport, ahol n értéke 1 -tői tO-ig terjedő· szám, €!·!>:),„ általános képlett; csoport., a ttod' n értéke I-töl 6-ig terjedő szám, ás xn értéke 1-tőt 6-ig terjedő szám, vagy helyettesített; vagy helyettesítetlen ArCH> általános képletű csoport, é.s
    M jelentése fiziológiailag ei fogadható kation.
  7. 8. A 7. igénypont szerinti vegyületek,. ahol X jelentése a következő csoportból választott;
    <AH<. C?H·;, C4U, C;H;S, CsHí7, C1í2C6H.5 és (CH5b.NCH2Clf2.
  8. 9. (Π) képletű vegyületek
    CHCOOM MOOCCH, • «* i «
    1 ·
    YOOCHv -H — (½¾ —0CHCH20 — CsHt — N — CHzCOOX üti ahol a.z .ar öntés gyűrűn lévő helyettesítők orto-helyzetben vannak, és Y jelentése C.,íbi; + 1ÍÜÜH2CH2A,, ahol π értéke 1 -tő 1 20-ig terjedő szám. és in értéke- i-töl 6-ig terjedő szára; ét;
    M jelentése fiziológiailag elfogadható kation..
    lő. A 9. igénypont szerinti vegyületek., ahol Y jelentése rtwno-, dt- vagy tí-ietiiéogsíkol tnottoalkíl-óters.
    II, A 9. í:génypoat szerinti vegyületek, ahol ¥ jelentése a következő csoportból választott; ClhOCILCfh, €:;H5OÜIi7CH?, ej-í7OCH>CHj, C 4 Η ·> O C H ? C Η >, C I I; j O C li;; C Η,, C, 11; - 0 € HC Η ?, ólII >. O C H; C Η ?,
    C i:, Η, X ö C Η.x C H ,, <: {s Η;OC H; € Η >, C Η, t Ο € HC Sí > A, €, Η«(O C H ? C Η ?) ?,
    40 C^íaOCHjCIL·).;- CGL.óOCiLeil;)> C7HS5(OCH;CHA>, ”»*
    Cí;>1LáO€HAL1LL, CHAOCH?£Hl·h és C-j-Khí.OCHjCH-Lij képletü. csoport,
  9. 12. A 11. igénypont szerinti: vegyület, ahol Y jelentése CLL ;OCH2CH;
    képletü csoport,
    1 L Λ 11. igénypont szerint! vegyület. ahol Y jelentése CíAL-TíCi-hCl-h képletü csoport.
  10. 14. Gyógyásza· 1 készítmény, amely hatóanyagként az L-LL igénypontok bármelyike szerinti kelátképzoszer stabil, llpofii diészterét. tartalmazza gyógy ászatilag elfogadható hígító vagy hordozó mellett.
  11. 15. A 14. igénypont, szerinti gyógyászati készítmény p-arenteráli-s vagy orális beadáshoz.
    lő. Az l-O. igénypontok bármelyike szerinti diészterek alkalmazása kétértékű fémionok feleslegével kapcsolatos betegség vagy rendeiíenssség kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására,
  12. 17. A lő. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a kétértékű fémion a következő csoportból választóit: Ca', Cd\ Co'L CiL-J-V'’, Kg. Mg’L Mn'L Pb ’ es Zn ionok.
    IS. A 17, igénypont szerinti alkalmazás, ahol a kétértékű fémionok sejten belüli Ca ionok.
  13. 19, A 16--13. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a betegség vagy rendellenesség agy vagy sz.lv elégtelen vérellátása, hödés (sztrók), szívizomxnfa.rktös, epilepszia, Álzbeimer-kőty Parkinsoo-kőr, aktit gyulladás, akaratlan vizeletürítés, proszíaíasnegnagyobbodás, Izomgörcs, artériáil.s- maga-s vérnyomás·,. asztma., tóíérzékeny bél szindróma és szívritmuszavar.
HU0003517A 1997-09-28 1998-09-27 Lipophilic diesters of chelating agents HU229161B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IL12184497A IL121844A0 (en) 1997-09-28 1997-09-28 Lipophilic diesters of chelating agents
PCT/IL1998/000468 WO1999016741A2 (en) 1997-09-28 1998-09-27 Lipophilic diesters of chelating agents

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0003517A2 HUP0003517A2 (hu) 2001-02-28
HUP0003517A3 HUP0003517A3 (en) 2003-06-30
HU229161B1 true HU229161B1 (en) 2013-09-30

Family

ID=11070677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0003517A HU229161B1 (en) 1997-09-28 1998-09-27 Lipophilic diesters of chelating agents

Country Status (17)

Country Link
US (1) US6458837B1 (hu)
EP (1) EP1027325B1 (hu)
JP (1) JP4668411B2 (hu)
KR (1) KR100545487B1 (hu)
AT (1) ATE235457T1 (hu)
AU (1) AU739835B2 (hu)
BR (1) BR9814053B1 (hu)
CA (1) CA2304700C (hu)
CZ (1) CZ300455B6 (hu)
DE (1) DE69812679T2 (hu)
DK (1) DK1027325T3 (hu)
ES (1) ES2195393T3 (hu)
HU (1) HU229161B1 (hu)
IL (2) IL121844A0 (hu)
NZ (1) NZ503085A (hu)
PT (1) PT1027325E (hu)
WO (1) WO1999016741A2 (hu)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6350780B1 (en) * 1995-07-28 2002-02-26 Allergan Sales, Inc. Methods and compositions for drug delivery
WO2001041756A2 (en) * 1999-12-02 2001-06-14 University Of South Florida Method and composition for treatment of ischemic neuronal reperfusion injury
AUPS255402A0 (en) * 2002-05-27 2002-06-13 Monash University Agents and methods for the treatment of disorders associated with oxidative stress
IL151921A0 (en) * 2002-09-25 2003-04-10 Pharma Ltd D Liphopilic diesters of chelating agent for inhibition of enzyme activity
IL157396A0 (en) * 2003-08-14 2004-02-19 Dpharm Ltd Use of lipophilic diesters of chelating agent for the treatment of amyloidosis and atherosclerosis
WO2008099210A2 (en) 2007-02-12 2008-08-21 Merck & Co., Inc. Piperazine derivatives for treatment of ad and related conditions
GB0708507D0 (en) 2007-05-02 2007-06-13 Queen Mary & Westfield College Substituted phosphonates and their use
CN102093234B (zh) * 2009-11-26 2014-06-18 福州乾正药业有限公司 一种二元酯酸的氨丁三醇盐化合物及其制备方法和药物应用
WO2013052787A2 (en) * 2011-10-05 2013-04-11 The Johns Hopkins University Membrane activated chelators and use in the prevention and treatment of parasitic infection
CN103373957A (zh) * 2012-04-12 2013-10-30 成都苑东药业有限公司 一种具有神经细胞保护作用的螯合物
WO2015092789A1 (en) * 2013-12-17 2015-06-25 D-Pharm Ltd. Onium salts of lipophilic diesters of chelating agents
CN107315915A (zh) * 2017-06-28 2017-11-03 上海联影医疗科技有限公司 一种医疗手术模拟方法及系统

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3479535A (en) * 1966-11-23 1969-11-18 Us Army Symmetrical pulse generator controlled by self-resetting snap diodes
US3497535A (en) 1967-07-25 1970-02-24 Geigy Chem Corp Stabilization of fats and oils with esters of edta and related compounds
US3751440A (en) * 1971-08-30 1973-08-07 Ciba Geigy Corp Metal complexes of n,n-dialkylesters of ethylenedinitrilotetraacetic acid and and compositions stabilized thereby
JPS5867652A (ja) * 1981-10-16 1983-04-22 Dai Ichi Pure Chem Co Ltd エチレンジアミン四酢酸−ｎ，ｎ′−ジ（２−エチルヘキシル）エステル
JPS59168442A (ja) * 1983-03-16 1984-09-22 Fuji Photo Film Co Ltd 画像形成方法
US4603161A (en) * 1985-06-14 1986-07-29 Olin Corporation Selected oxyalkylated 2,6-dialkylphenol compounds and their use as stabilizers of organic materials against oxidative degradation
US4849362A (en) * 1988-05-19 1989-07-18 Smithkline Beckman Corporation Fluorescent intracellular calcium indicators
US5453517A (en) * 1992-02-25 1995-09-26 Molecular Probes, Inc. Reactive derivatives of bapta used to make ion-selective chelators
US6015834A (en) * 1992-10-20 2000-01-18 Toronto Neuroprotection Group In vivo treatment of mammalian cells with a cell membrane permeant calcium buffer
US5618513A (en) * 1995-06-07 1997-04-08 Mallinckrodt Medical, Inc. Method for preparing radiolabeled peptides

Also Published As

Publication number Publication date
KR20010015634A (ko) 2001-02-26
HUP0003517A2 (hu) 2001-02-28
IL135097A (en) 2009-09-01
JP4668411B2 (ja) 2011-04-13
DE69812679D1 (de) 2003-04-30
DE69812679T2 (de) 2004-03-04
ES2195393T3 (es) 2003-12-01
WO1999016741A2 (en) 1999-04-08
BR9814053B1 (pt) 2010-11-30
CZ300455B6 (cs) 2009-05-20
BR9814053A (pt) 2000-09-26
NZ503085A (en) 2002-09-27
JP2001518458A (ja) 2001-10-16
HUP0003517A3 (en) 2003-06-30
CA2304700A1 (en) 1999-04-08
AU739835B2 (en) 2001-10-18
AU9365198A (en) 1999-04-23
CZ20001065A3 (cs) 2000-08-16
EP1027325B1 (en) 2003-03-26
ATE235457T1 (de) 2003-04-15
KR100545487B1 (ko) 2006-01-24
CA2304700C (en) 2010-10-26
PT1027325E (pt) 2003-08-29
US6458837B1 (en) 2002-10-01
EP1027325A2 (en) 2000-08-16
DK1027325T3 (da) 2003-07-21
WO1999016741A3 (en) 1999-07-01
IL121844A0 (en) 1998-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4323581A (en) Method of treating carcinogenesis
KR100300816B1 (ko) N-아실아미노산에스테르및이것을이용한육모제혹은양모제
KR101312982B1 (ko) 5-아미노레불린산염, 이의 제조방법 및 이의 용도
EP2308830A1 (en) Acid addition salts of 5-aminolevulinic acid or its derivatives
US7354952B2 (en) Pharmaceutical gallium compositions and methods
EP0230893A2 (en) Paramagnetic chelates
HU229161B1 (en) Lipophilic diesters of chelating agents
JP3801225B2 (ja) アミノアルコール類の塩およびこれを含有する医薬処方物
US11434198B2 (en) Compounds and methods for the treatment of neurodegenerative diseases
JPS58131962A (ja) 新規アミノ酸誘導体の製法
JPS60166645A (ja) 安息香酸誘導体、その製法並びに薬物、殺菌剤もしくは防腐剤としての使用法
US7045546B2 (en) Stabilized derivatives of ascorbic acid-3-phosphate
SU1192619A3 (ru) Способ получени солей 4-(9-акридиниламино)-метансульфон-м-анизидина
KR20140016556A (ko) 16-히드록시헥사데카노익 피토스핑고신을 유효성분으로 포함하는 피부장벽 손상의 개선 또는 치료, 또는 피부장벽 기능의 개선 또는 강화용 조성물
EP2522394A2 (en) Substituted phosphonates and their use decreasing amyloid aggregates
McCully et al. Chemopreventive effect of N-homocysteine thiolactonyl retinamido cobalamin on carcinogenesis by ethyl carbamate in mice
JPS62116545A (ja) 殺菌性ωアミノアルカノ−ル置換芳香族誘導体、その製造方法およびそれを含む組成物
WO2024012556A1 (zh) 一种氨基脂质化合物、其制备方法、组合物和应用
DE102017010898A1 (de) Neue Inhibitoren des Shikimisäurewegs
KR100847781B1 (ko) 세라마이드 유도체, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및치료용 약학적 조성물
JPS58208229A (ja) 抗腫瘍剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees