HU222264B1 - Új peszticid fehérjék és a termelő törzsek - Google Patents

Új peszticid fehérjék és a termelő törzsek Download PDF

Info

Publication number
HU222264B1
HU222264B1 HU9702268A HU9702268A HU222264B1 HU 222264 B1 HU222264 B1 HU 222264B1 HU 9702268 A HU9702268 A HU 9702268A HU 9702268 A HU9702268 A HU 9702268A HU 222264 B1 HU222264 B1 HU 222264B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
protein
plant
dna molecule
proteins
lys
Prior art date
Application number
HU9702268A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT77449A (hu
Inventor
Brian Carr
Nalini Manoj Desai
Nicholas Brendan Duck
Juan Jose Estruch
Kristy Kostichka
Michael Gene Koziel
Martha Alice Mullins
Gordon James Nye
Gregory Wayne Warren
Original Assignee
Syngenta Participations Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26979445&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU222264(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Syngenta Participations Ag filed Critical Syngenta Participations Ag
Publication of HUT77449A publication Critical patent/HUT77449A/hu
Publication of HU222264B1 publication Critical patent/HU222264B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8285—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for nematode resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/82—Proteins from microorganisms
    • Y10S530/825—Bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát bizonyos növénykárosító rovarok ellen hatásospeszticid fehérjék képezik, amelyeket Bacillus-- fajok termelnek avegetatív növekedés során. A találmány oltalmi körébe tartoznak afenti fehérjéket kódoló nukleo- tidszekvenciák, azokat természetesvagy rekombináns módon tartalmazó és azokat kifejezni képesmikroorganizmu- sok, valamint transzgén növények, továbbá az általukelőállított rovarspecifikus fehérjék tisztítására és rovar kártevőkelleni alkalmazására irányuló eljárások. ŕ

Description

A találmány tárgyát növényi kártevők kiküszöbölésére szolgáló eljárások és készítmények képezik. Különösen olyan új peszticid fehéijéket teszünk közzé, amelyek Bacillus-törzsék. vegetatív fejlődési szakaszában termelődnek. A fehérjék peszticid hatóanyagként használhatók.
A találmány tárgyát közelebbről egy lényegében tisztított Bacillus-törzs képezi, amely vegetatív növekedése során egy peszticid feltétjét termel; ez a Bacillus nem azonos a B. sphaericus SSB-l-gyel.
Előnyben részesítjük az NRRL B-21225 és NRRL B-21439 letéti számú Bacillus thuringiensis-törzseket.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy Bacillus spp. - előnyösen egy Bacillus thuringiensis- és B. cereus-törzs - vegetatív növekedése során izolálható rovarspecifikus feltétje és ennek komponensei, ahol a nevezett fehérje nem a B. sphaericus SSII-1 szúnyogölő toxinja. A találmány szerinti rovarspecifikus fehérje előnyösen mérgező a Coleoptera és Lepidoptera rovarokra és körülbelül 30 kD vagy nagyobb, előnyösen körülbelül 60-100 kD, és még előnyösebben körülbelül 80 kD molekulatömeggel rendelkezik.
Még részletesebben, a találmány szerinti rovarspecifikus fehérje olyan rovarölő aktivitásspektrummal rendelkezik, amely felöleli az Agroiis- és/vagy Spodopíera-fajok elleni aktivitást, de előnyösen a fekete bagolypille hernyója (Agrotis ipsilon; BCW=black cutworm) és/vagy hulló sereghemyó (Spodoptera frugiperda) és/vagy répasereghemyó (Spodoptera exigua) és/vagy dohányrügyhemyó és/vagy kukorica-fiilhemyó (Helicoverpa zea) elleni aktivitást.
A találmány szerinti rovarspecifikus fehérje előnyösen izolálható az NRRL B-21225 és NRRL 21439 letéti számú törzsek csoportjából kiválasztott Bacillus spp. törzsből.
Előnyben részesítünk egy olyan rovarspecifikus fehérjét, amely a 2. vagy 5. számú szekvenciával rendelkezik, beleértve bármilyen fehérjét, amely szerkezetileg és/vagy működésében ezekkel homológ.
A találmánynak további, előnyben részesített kiviteli alakja egy rovarspecifikus fehérje, amelyből a szekréciós szignált képviselő szekvenciákat eltávolítottuk vagy inaktiváltuk.
A találmány tárgyát képezik továbbá olyan összetett (multimer) peszticid fehérjék, amelyek több mint egy polipeptidláncot tartalmaznak, és amelyekben a nevezett polipeptidláncoknak legalább egyike a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét képviseli, és a nevezett polipeptidláncoknak legalább egyike a találmány szerinti olyan segédfehérjét képviseli, amely aktiválja vagy fokozza a nevezett rovarspecifikus fehérje peszticidaktivitását.
A találmány szerinti összetett peszticid fehérjék előnyösen körülbelül 50-200 kD molekulatömeggel rendelkeznek.
A találmány tárgyát továbbá olyan fúziós fehérjék képezik, amelyek több fehérjedomént tartalmaznak, beleértve legalább egy találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét, amely a riboszómák által transzlálódva, fúziós fehérjét képez, amely rendelkezik legalább a találmány szerinti rovarspecifikus fehérje és adott esetben a fúzióhoz használt többi komponens kombinált jellegzetességeivel.
A leírásban használt értelemben „lényegi” szekvenciahomológia aminosavak szekvenciái közötti közeli szerkezeti rokonságot jelent. Például a lényegében homológ fehérjék lehetnek 40%-ban, előnyösen 50%-ban és legelőnyösebben 60%-ban, vagy 80%-ban vagy nagyobb mértékben homológok. A homológiába olyan rokonság is beletartozik, ahol az aminosavaknak egy vagy néhány alszekvenciája hiányzik, vagy hozzáadott aminosavakból álló alszekvenciák közbeékeltek.
A találmány tárgyát további vonatkozásban olyan nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekula képezi, amely Bacillus spp. vegetatív növekedési fázisa során izolálható rovarspecifikus fehérjét és ennek komponenseit kódolja, ahol a nevezett fehérje nem a B. sphaericus SSII-1 szúnyogölő toxinja. A találmány különösen olyan rovarspecifikus fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekulára vonatkozik, amelyben a rovarölő aktivitás spektrumába beletartozik az Agrotis- és/vagy Spodoptera-fajok elleni aktivitás, de előnyösen a fekete bagolypille hernyója (Agrotis ipsilon; BCW=black cutworm) és/vagy hulló sereghernyó (Spodoptera frugiperda) és/vagy répasereghemyó (Spodoptera exigua) és/vagy dohányrügyhemyó és/vagy kukorica-fiilhemyó (Helicoverpa zea) elleni aktivitás.
Előnyben részesítünk olyan DNS-molekulát, amelyben a nevezett molekula az 1. vagy 4. számú szekvenciavázlatban megadott nukleotidszekvenciát tartalmazza, beleértve bármilyen DNS-molekulát, amely szerkezetileg és/vagy működésében ezzel homológ.
A találmánynak egy további kiviteli alakja olyan nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekulára vonatkozik, amely Bacillus spp. vegetatív növekedési fázisa során izolálható rovarspecifikus fehérjét és ennek komponenseit kódolja - ahol a nevezett fehérje nem a B. sphaericus SSII-1 szúnyogölő toxinja -, amely nukleotidszekvenciát mikroorganizmusban vagy növényben történő kifejezésre optimáltuk.
Előnyben részesítünk olyan DNS-molekulát, amelyben a nevezett molekula a 3. számú szekvenciavázlatban megadott nukleotidszekvenciát tartalmazza, beleértve bármilyen DNS-molekulát, amely szerkezetileg és/vagy működésében ezzel homológ.
A találmány tárgyát képezi továbbá olyan összetett peszticid fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekula, amely több mint egy polipeptidláncot tartalmaz, és amelyben a nevezett polipeptidláncoknak legalább egyike a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét képviseli, és a nevezett polipeptidláncoknak legalább egyike a találmány szerinti olyan segédfehérjét képviseli, amely aktiválja vagy fokozza a nevezett rovarspecifikus fehérje peszticidaktivitását.
A találmánynak egy további kiviteli alakját olyan fúziós fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekula képezi, amely tartalmaz több fehérjedomént - beleértve legalább egy, in fiamé genetikai fúzióval előállított, találmány szerinti rovarspecifikus fehér2
HU 222 264 Β1 jét amely a riboszómák által transzlálódva, fúziós fehérjét eredményez és rendelkezik a találmány szerinti rovarspecifikus fehérje kombinált tulajdonságaival és adott esetben a fúzióhoz használt egyéb komponensek kombinált jellegzetességeivel.
A találmány tárgyát képezi továbbá olyan fúziós fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNSmolekula, amely egy találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét tartalmaz szignálszekvenciával fúzionáltan, előnyösen szekréciós szignálszekvenciával vagy olyan célba juttató szekvenciával, amely a transzgén terméket specifikus sejtszervecskébe vagy sejtkompartmentbe irányítja, amely szignálszekvencia a befogadó DNS-re nézve heterológ eredetű.
A találmány továbbá kiterjed találmány szerinti fúziós fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó olyan DNS-molekulára is, amelyet egy mikroorganizmusban vagy növényben történő kifejezésre optimáltunk.
A találmány tárgyát továbbá olyan optimált DNSmolekula képezi, amelynek 5’ végéről eltávolítottuk a szekréciós szignált kódoló szekvenciákat.
A leírásban használt értelemben a lényeges szekvenciahomológia az aminosavszekvenciák közötti közeli szerkezeti rokonságot jelent. Például lényegében homológ fehérjék lehetnek 60%-ban, előnyösen 80%-ban és legelőnyösebben 90%-ban, vagy 95%-ban vagy nagyobb mértékben homológok. A homológiába olyan rokonság is beletartozik, ahol aminosavaknak egy vagy néhány alszekvenciája hiányzik, vagy további aminosavalszekvenciák vannak közbeékelve.
Szintén a találmány tárgyát képezik olyan DNS-molekulák, amelyek az előzőekben definiált találmány szerinti DNS-molekulával - előnyösen a nevezett DNSmolekulából kapható olyan oligonukleotidpróbával, amely legalább 10 nukleotid hosszúságú, a nevezett rovarspecifikus fehérjét kódoló szekvenciával összefüggő részt tartalmaz - mérsékelten szigorú körülmények között hibridizálnak, és rovarspecifikus aktivitással rendelkeznek, valamint a nevezett DNS-molekulák által kódolt rovarspecifikus fehérjék.
Előnyben részesítünk olyan DNS-molekulákat, amelyekben 7% SDS-t és 0,5 M nátrium-foszfátot tartalmazó pufferben 65 °C-on történik a hibridizáció.
Különösen előnyben részesítünk olyan, a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekulát, amely a következő eljárással kapható meg:
i) rovarspecifikus fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekula kinyerése;
ii) nevezett DNS-molekula hibridizálása az 1., 3. vagy
4. számú szekvenciavázlatban megadott nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekulából kinyert, oligonukleotidpróbával; és iii) nevezett hibridizált DNS izolálása.
A találmány tárgyát továbbá olyan rovarspecifikus fehéije képezi, amelyet a találmány szerinti DNS-molekula kódol.
A találmány tárgykörébe olyan expressziós kazetta is beletartozik, amely a találmány szerinti DNS-molekulát olyan expressziós szekvenciákhoz működőképesen hozzákötve tartalmazza, amelyek magukban foglalják a kapcsolt DNS-szerkezeteknek gazdaszervezetben
- előnyösen mikroorganizmusban vagy növényben történő kifejezéséhez (expressziójához) szükséges transzkripciós és transzlációs szabályozószignálokat, és adott esetben további szabályozószekvenciákat.
A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti expressziós kazettát tartalmazó vektormolekula.
A találmány szerinti expressziós kazetta és/vagy vektormolekula előnyösen a növényi genom részét képezi.
A találmánynak további kiviteli alakját olyan gazdaszervezet képezi, előnyösen a növényi és rovarsejteket, baktériumokat, élesztőket, bakulovírusokat, protozoákat, fonalférgeket (hematódákat) és algákat tartalmazó csoportból kiválasztott gazdaszervezet, amely a találmány szerinti DNS-molekulát, a nevezett DNS-molekulát tartalmazó expressziós kazettát vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulát tartalmazza, előnyösen a gazdaszervezet genomjába stabilan beépítve.
A találmány tárgyát képezi továbbá olyan transzgén növény - de előnyösen kukoricanövény - beleértve annak részeit ugyanúgy, mint utódait és magját, amely a találmány szerinti DNS-molekulát, a nevezett DNSmolekulát tartalmazó expressziós kazettát vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulát tartalmazza, előnyösen a növény genomjába stabilan beépítve.
Előnyben részesítünk olyan transzgén növényt - beleértve annak részeit ugyanúgy, mint utódait és magját -, amelyet a találmány szerinti DNS-molekulával, a nevezett DNS-molekulát tartalmazó expressziós kazettával vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulával stabilan transzformáltunk.
Szintén előnyben részesítünk olyan transzgén növényt - beleértve annak részeit ugyanúgy, mint utódait és magját -, amely találmány szerinti rovarspecifikus fehéijét fejez ki.
A találmány tárgyát képezi továbbá olyan, az előzőekben definiált találmány szerinti transzgén növény
- előnyösen kukoricanövény -, amely kifejez még egy második, eltérő rovarellenes elvet, de előnyösen Bt δ-endotoxint. A nevezett növény előnyösen hibrid növény.
A találmány oltalmi körébe beleértendő transzgén növények részei, például növényi sejtek, protoplasztok, szövetek, kallusz, embriók ugyanúgy, mint virágok, szárak, gyümölcsök, levelek, gyökerek, amelyek a találmány szerinti DNS-molekulával előzőleg transzformált transzgén növényekből vagy ezek utódaiból származnak és ily módon legalább részben transzgén sejteket tartalmaznak, szintén a találmány tárgyát képezik.
A találmány további tárgyát a találmány szerinti növény szaporítóanyaga képezi, amelyet magvédő bevonattal kezeltünk.
A találmány továbbá felölel a találmány szerinti DNS-molekulával, a nevezett DNS-molekulát tartalmazó expressziós kazettával vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulával transzformált mikroor3
HU 222 264 Bl ganizmust, amelyben a nevezett mikroorganizmus előnyösen olyan mikroorganizmus, amely növényeken szaporodik és még előnyösebben gyökéren megtelepedő (kolonizálódó) baktérium.
A találmánynak további kiviteli alakját olyan, kapszulába zárt rovarspecifikus fehérje képezi, amely a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét magában foglaló mikroorganizmust tartalmaz.
A találmány tárgyát képezi a találmány szerinti gazdaszervezetet - de előnyösen tisztított Bacillus-törzset - tartalmazó rovarölő készítmény is, rovarölő hatáshoz hatékony mennyiségben, alkalmas hordozóanyaggal együtt.
A találmány továbbá magában foglal a találmány szerinti, izolált fehérjemolekulát tartalmazó rovarölő készítményt egymagában, vagy a találmány szerinti gazdaszervezettel és/vagy kapszulába zárt találmány szerinti rovarspecifikus fehérjével kombináltan, rovarölő hatáshoz hatékony mennyiségben, alkalmas hordozóanyaggal együtt.
A találmánynak további megvalósítási formáját tisztított találmány szerinti rovarspecifikus fehérje kinyerésére szolgáló módszer képezi, nevezett módszer magában foglalja a nevezett rovarspecifikus fehérjét tartalmazó oldatnak a felvitelét NAD-oszlopra, és a megkötődött fehérje eluálását.
A találmány magában foglal a találmány szerinti rovarspecifikus fehérje rovar elleni aktivitásának azonosítására szolgáló módszert is, nevezett módszer tartalmazza:
Bacillus-törzs szaporítását tenyészetben; a felülúszó kinyerését a nevezett tenyészetből; rovarlárvák etetését a nevezett felülúszóval kevert táplálékkal; és az elhullás meghatározását.
A találmány tárgyát egy másik vonatkozásban a találmány szerinti rovarspecifikus fehérje izolálására szolgáló módszer képezi, nevezett módszer tartalmazza:
Bacillus-tÖTZs szaporítását tenyészetben; a felülúszó kinyerését a nevezett tenyészetből; és nevezett rovarspecifikus fehérje izolálását a nevezett felülúszóból.
A találmány felölel olyan DNS-molekula izolálására szolgáló módszert is, amely tartalmazza a találmány szerinti fehérjék rovarölő aktivitását mutató rovarspecifikus fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát, nevezett módszer tartalmazza:
rovarspecifikus fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekula kinyerését; és nevezett DNS-molekula hibridizációját Bacillusspeciesből kapott DNS-sel; és a nevezett hibridizált DNS izolálását.
A találmány tárgyát képezi továbbá rovarcélpontok körének növelésére irányuló módszer, a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjének legalább egy második - a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjétől eltérő, de előnyösen a Bt δ-endotoxinokat, proteázinhibitorokat, lektineket, α-amilázokat és peroxidázokat tartalmazó csoportból választott - rovarölő fehérjével történő kombinált felhasználásával.
Előnyben részesítünk rovarcélpontok körének növelésére irányuló növényen belüli módszert, a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjének legalább egy második - a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjétől eltérő, de előnyösen a Bt δ-endotoxinokat, proteázinhibitorokat, lektineket, α-amilázokat és peroxidázokat tartalmazó csoportból választott - rovarölő fehérjével kombináltan történő kifejezésével a nevezett növényben.
A találmány magában foglal növények védelmére irányuló módszert is rovar kártevők által - de előnyösen Spodoptera- és/vagy Agrotis-fajok által, és még előnyösebben a fekete bagolypille hernyóját (Agrotis ipsilon; BCW=black cutworm), hulló sereghemyót (Spodoptera frugiperda), répasereghemyót (Spodoptera exigua), dohányrügyhemyót és kukorica-fiilhernyót (Helicoverpa zea) tartalmazó csoportból választott rovar kártevők által - okozott károsodással szemben, amely tartalmazza a találmány szerinti rovarölő készítmény vagy toxikus fehérje alkalmazását a növényre vagy a nevezett növény termesztési területére.
A találmány tárgyát képezi továbbá növények védelmére irányuló olyan módszer rovar kártevők által - de előnyösen Spodoptera- és/vagy Agrotis-fajok által, és még előnyösebben a fekete bagolypille hernyóját (Agrotis ipsilon: BCW=black cutworm), hulló sereghemyót (Spodoptera frugiperda), répasereghemyót (Spodoptera exigua), dohányrügyhemyót és kukoricafülhemyót (Helicoverpa zea) tartalmazó csoportból választott rovar kártevők által — okozott károsodással szemben, amely tartalmazza a találmány szerinti rovarspecifikus fehéqét kifejező transzgén növény ültetését olyan területen belül, ahol a nevezett rovarkártétel előfordulhat.
A találmány felölel olyan gazdaszervezet előállítására szolgáló módszert is, amely a találmány szerinti DNSmolekulát genomjába stabilan beépítve tartalmazza, és előnyösen találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét fejez ki, magában foglalva a nevezett gazdaszervezet transzformálását a találmány szerinti DNS-molekulával, a nevezett DNS-molekulát tartalmazó expressziós kazettával vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulával.
A találmánynak egy további megvalósítási formáját olyan transzgén növény vagy növényi sejt előállítására szolgáló módszer képezi, amely a találmány szerinti DNS-molekulát a növényi genomba stabilan beépítve tartalmazza és előnyösen találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét fejez ki, magában foglalva a nevezett növény vagy növényi sejt egyenkénti transzformálását a találmány szerinti DNS-molekulával, a nevezett DNS-molekulát tartalmazó expressziós kazettával vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulával.
Szintén a találmány tárgyát képezi rovarölő készítmény előállítására szolgáló eljárás, amely magában foglalja a találmány szerinti izolált Bacillus-törzs és/vagy gazdaszervezet és/vagy izolált fehérjemolekula és/vagy kapszulába zárt fehérje rovarölő hatáshoz hatékony mennyiségben történő összekeverését megfelelő hordozóval.
HU 222 264 BI
A találmány felölel olyan transzgén növény transzgén utódainak az előállítására szolgáló módszert is, amely a növényi genomba stabilan beépítve tartalmazza a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó DNS-molekulát, a nevezett DNS-molekulát tartalmazó expressziós kazettát vagy a nevezett expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulát, és amely a peszticid jellemzőt átviszi a nevezett transzgén növény utódaira, beleértve ismert növénytermesztési technológiákat.
A találmány felölel olyan oligonukleotidpróbát is, amely képes specifikusan hibridizálni Bacillus spp. vegetatív növekedési szakaszában izolálható rovarspecifikus fehérjét és annak komponenseit kódoló nukleotidszekvenciával, ahol a nevezett fehérje nem a B. sphaericus SSII-1 szúnyogölő toxinja, ahol a nevezett próba a nevezett rovarspecifikus fehérjét kódoló szekvenciával összefüggő - legalább 10 nukleotid hosszúságú - részt tartalmaz, és a nevezett oligonukleotidpróba felhasználását bármilyen Bacillus-tötzs vagy más szervezet screenelésére, kiderítendő, vajon a rovarspecifikus fehérje természetes módon jelen van-e, vagy az illető transzformáit szervezet tartalmazza-e a nevezett gént.
A találmány felismeri, hogy peszticid hatású fehérjék a Bacillus-törzsek vegetatív növekedési szakaszában termelődnek. Felismerve, hogy ilyen osztály létezik, a találmány oltalmi körébe tartozik minden vegetatív rovarölő hatású fehérje - innentől kezdve VIP-ként (VIP=vegetative znsecticidal protein) említve -, kivéve a B. sphaericus SSII-1 szúnyogölő toxinját.
A jelen VIP-ek nincsenek elégséges mennyiségben spórázás után, és különösen a logaritmikus növekedési szakaszban, a stacioner fázis előtt fejeződnek ki. A találmány céljának megfelelően a vegetatív növekedési szakaszt úgy definiáljuk, mint a spórázás kezdete előtti időperiódust. Ilyen VIP-eket kódoló gének izolálhatok, klónozhatok és különböző átvivőhordozókba transzformálhatók kártevők elleni kezelési programok céljából.
A találmány céljainak megfelelően a kártevők körébe tartoznak - de korlátozást nem jelentve - a rovarok, gombák, baktériumok, fonalférgek, kukacok, atkák, patogén protozoák, állatparazita májmétely és hasonlók. Rovar kártevők közé tartoznak a Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Lepidoptera, Mallophaga, Homoptera, Hemiptera, Orthroptera, Thysanoptera, Dermaptera, Isoptera, Anoplura, Siphonaptera, Trichopíera stb., különösen a Coleoptera- és Lepidoptera-rendből választott rovarok.
Az 1-10. táblázatok felsorolják a főbb szántóföldi növényekkel kapcsolatos kártevőket és a humán- és állatgyógyászati jelentőséggel bíró kártevőket. Az ilyen kártevők beletartoznak a találmány oltalmi körébe.
1. táblázat
Lepidoptera - Pikkelyesszámyúak (lepkék és molyok)
Kukorica
Ostrinia nubilalis, európai kukoricamoly Agrotis ipsilon, fekete bagolypille hernyója
Helicoverpa zea, kukorica-fülhemyó
Spodoptera frugiperda, hulló sereghemyó
Diatraea grandiosella, délnyugati kukoricamoly
Elasmopalpus lignosellus, kis kukoricaszármoly
Diatraea saccharalis, cukomádmoly
Cirok
Chilo partellus, cirokmoly Spodoptera frugiperda, hulló sereghemyó Helicoverpa zea, kukorica-fülhemyó Elasmopalpus lignosellus, kis kukoricaszármoly Feltia subterranea, granulátum bagolypille hernyója
Búza
Pseudaletia unipunctata, sereghemyó Spodoptera frugiperda, hulló sereghemyó Elasmopalpus lignosellus, kis kukoricaszármoly Agrotis orthogonia, halvány nyugati bagolypille hernyója
Napraforgó
Suleima helianthana, napraforgórügymoly Homoeosoma electellum, napraforgómoly
Gyapot
Heliothis virescens, gyapotbagolypille hernyója
Helicoverpa zea, kukorica-fülhemyó Spodoptera exigua, répasereghemyó Pectinophora gossypiella, rózsaszín gyapotbagolypille hernyója
Rizs
Diatraea saccharalis, cukomádmoly Spodoptera frugiperda, hulló sereghemyó Helicoverpa zea, kukorica-fülhemyó
Szójabab
Pseudoplusia includens, szójabab-araszolólepke hernyója
Anticarsia gemmatalis, bársonyos babhemyó Plathypena scabra, zöld lóherekukac Ostrinia nubilalis, európai kukoricamoly Agrotis ipsilon, fekete bagolypille hernyója Spodoptera exigua, répasereghemyó Heliothis virescens, gyapotbagolypille hernyója Helicoverpa zea, kukorica-fülhemyó
Árpa
Ostrinia nubilalis, európai kukoricamoly Agrotis ipsilon, fekete bagolypille hernyója
2. táblázat
Coleoptera (bogarak)
Kukorica
Diabrotica virgifera virgifera, nyugati kukorica-gyökérhemyó
Diabrotica longicomis barberi, északi kukorica-gyökérhemyó
Diabrotica undecimpunctata howardi, déli kukorica-gyökérhemyó
Melanotus spp., drótférgek
Cyclocephala borealis, északi álcás bogár (fehér légykukac)
HU 222 264 Bl
2. táblázat (folytatás)
Cyclocephala immaculata, déli álcás bogár (fehér légykukac)
Popillia japonica, japán bogár Chaetocnema pulicaria, kukorica-ugróbogár Sphenophorus maidis, kukorica-váltópoloska
Cirok
Phyllophaga crinita, fehér légykukac Eleodes, Conoderus és Aeolus sp., drótférgek Oulema melanopus, gabonalevél-bogár Chaetocnema pulicaria, kukorica-ugróbogár Sphenophorus maidis, kukorica-váltópoloska
Búza
Oulema melanopus, gabonalevél-bogár Hypera punctata, lóherelevél-zsizsik (ormányosbogár)
Diabrotica undecimpunctata howardi, déli kukorica-gyökérhemyó
Napraforgó
Zygogramma exclamationis, napraforgóbogár Bothyrus gibbosus, sárgarépabogár
Gyapot
Anthonomus grandis, gyapotrügyfúró (likasztóbogár)
Rizs
Colaspis brunnea, szólőkolaszpisz Lissorhoptrus oryzophilus, rizs vízi ormányosbogár
Sitophilus oryzae, rizszsizsik Szójabab
Epilachna varivestis, mexikói bab bogár
3. táblázat
Homoptera (kabócák, tetvekstb.)
Kukorica
Rhopalosiphum maidis, kukorica-levéltetű Anuraphis maidiradicis, kukorica-gyökértetű
Cirok
Rhopalosiphum maidis, kukorica-levéltetű Siphaflava, sárga cukomádtetű
Búza
Orosz búzatetű
Schizaphis graminum, zöld poloska Macrosiphum avenae, angol gabonatetű
Gyapot
Aphis gossypii, gyapotlevéltetű Pseudatomoscelis seriatus, gyapotbolha Trialeurodes abutilonea, csíkosszámyú liszteske
Rizs
Nephotettix nigropictus, rizslevélbolha Szójabab
Myzus persicae, zöld őszibaracklevél-tetű Empoasca fabae, burgonyakabóca
Árpa
Schizaphis graminum, zöld poloska Olajos magvú repce
Brevicoryne brassicae, káposztalevél-tetű
4. táblázat
Hemiptera (poloskák)
Kukorica
Blissus leucopterus leucopterus, amerikai búzarontó féreg
Cirok
Blissus leucopterus leucopterus, amerikai búzarontó féreg
Gyapot
Lygus lineolaris, patinás növénypoloska Rizs
Blissus leucopterus leucopterus, amerikai búzarontó féreg
Acrostemum hilare, zöld büdös poloska Szójabab
Acrostemum hilare, zöld büdös poloska Árpa
Blissus leucopterus leucopterus, amerikai búzarontó féreg
Acrostemum hilare, zöld büdös poloska Euschistus servus, barna büdös poloska
5. táblázat
Orthoptera - Egyenesszárnyúak (szöcskék, tücskök és csótányok)
Kukorica
Melanoplus femurrubrum, vörös combú szöcske Melanoplus sanguinipes, vándorló szöcske
Búza
Melanoplus femurrubrum, vörös combú szöcske Melanoplus differentialis, differenciálszöcske Melanoplus sanguinipes, vándorló szöcske
Gyapot
Melanoplus femurrubrum, vörös combú szöcske Melanoplus differentialis, differenciálszöcske
Szójabab
Melanoplus femurrubrum, vörös combú szöcske Melanoplus differentialis, differenciálszöcske
Háztartás
Periplaneta americana, amerikai csótány
Blattella germanica, német csótány
Blatta orientalis, konyhai csótány vagy svábbogár
6. táblázat
Diptera - Kétszárnyúak (legyek és szúnyogok)
Kukorica
Hylemya platura, vetőmagkukac Agromyza parvicomis, búzalevél-aknázó
Cirok
Contarinia sorghicola, cirokgubacslégy Búza
Mayetiola destructor, hesseni légy Sitodiplosis mosellana, búzamuslica Meromyza americana, amerikai búzalégy (nyű) Hylemya coarctata, búzagubacslégy
HU 222 264 Bl
6. táblázat (folytatás)
Napraforgó
Neolasioptera murtfeldtiana, napraforgómag-muslica
Szójabab
Hylemya platura, vetőmagkukac Árpa
Hylemya platura, vetőmagkukac Mayetiola destructor, hesseni légy
Emberi és állati szervezetet támadó rovarok és betegséghordozók
Aedes aegypti, maláriaszúnyog
Aedes albopictus, erdei szúnyog
Phlebotomus papatasii, papatázi légy
Musca domestica, házilégy
Tabanus atratus, lóbögöly
Cochliomyia hominivorax, csavarhemyólégy
7. táblázat
Thysanoptera - Hólyagoslábúak (tripszek)
Kukorica
Anaphothrips obscurus, szénatripsz Búza
Frankliniella fusca, tripsz Gyapot
Thrips tabaci, dohánytripsz Frankliniella fusca, tripsz
Szójabab
Sericothrips variábilis, szójatripsz Thrips tabaci, dohánytripsz
8. táblázat
Hymenoptera - Hártyásszámyúak (levéldarazsak, termeszek, darazsak stb.)
Kukorica
Solenopsis milesta, tolvajhangya Búza
Cephus cinctus, búzaszalmadarázs
9. táblázat
Egyéb rendek és azokat képviselő fajok
Dermaptera (fülbemászók)
Forficula auricularia, európai fülbemászó
Isoptera (termitek)
Reticulitermes flavipes, keleti föld alatti termit Mallophaga (rágótetvek)
Cuclotogaster heterographa, szárnyasok rágótetve Bovicola bovis, szarvasmarha rágótetve
Anoplura (szívótetvek)
Pediculus humánus, fej- és ruhatetű
Siphonaptera (bolhák)
Ctenocephalides felis, macskabolha
10. táblázat
Atkafélék (atkák és kullancsok)
Kukorica
Tetranychus urticae, kétpettyes takácsatka Cirok
Tetranychus cinnabarinus, vörös takácsatka Tetranychus urticae, kétpettyes takácsatka
Búza
Acaria tulipae, búzazsugoratka Gyapot
Tetranychus cinnabarinus, vörös takácsatka Tetranychus urticae, kétpettyes takácsatka
Szójabab
Tetranychus turkestani, földieper-takácsatka Tetranychus urticae, kétpettyes takácsatka
Árpa
Petrobia latens, barna búzaatka Fontos humán és állati atkafélék
Demacentor variábilis, amerikai kutyakullancs Argas persicus, baromfikullancs Dermatophagoides farinae, amerikai háziporatka Dermatophagoides pteronyssinus, európai háziporatka
Felismertük, hogy peszticid fehérjék izolálhatok Bacillus vegetatív növekedési szakaszában, egyéb törzsek izolálhatok standard technikákkal és tesztelhetők egyes növényi és nem növényi kártevőkkel szembeni aktivitásra. Bacillus-törzsek. általában környezetből származó mintából izolálhatók - beleértve talajt, növényt, rovart, gabonaelevátor porát és egyéb anyagmintákat stb. - a szakmában ismert módszerekkel [Travers et al., Appl. Environ. Microbiol. 53, 1263-1266 (1987); Saleh et al., Can. J. Microbiol. 15, 1101-1104 (1969); DeLucca et al., Can. J. Microbiol. 27, 865-870 (1981) és Norris et al., The genera Bacillus and Sporolactobacillus, in Starr et al. (eds.) The Prokaryotes: A Handbook on Habitats, Isolation and Identification of Bacteria, Vol. II, Springer-Verlag Berlin, Heidelberg]. Izolálás után a törzsek peszticidaktivitását tesztelhetjük a vegetatív növekedés során. Ilyen módon új peszticid fehéqék és törzsek azonosíthatók.
Az ilyen Áací7/i«-mikroorganizmusok, amelyek felhasználást nyernek a találmányban, magukban foglalják a Bacillus cereust és Bacillus thuringiensist ugyanúgy, mint a 11. táblázatban felsorolt Bacillusfajokat.
11. táblázat
Bacillus-fajokfelsorolása
1. morfológiai csoport B. megaterium B. cereus*
B. cereus var. mycoides B. thuringiensis*
B. licheniformis B. subtilis*
B. pumilus
HU 222 264 Bl
11. táblázat (folytatás)
B. firmus*
B. coagulans
2. morfológiai csoport
B. polymyxa B. macerans B. circulans B. stearothermophilus B. alvei*
B. laterosporus*
B. brevis B. pulvifaciens B. popilliae*
B. lentimorbus*
B. lárváé*
3. morfológiai csoport
B. sphaericus*
B. pasteurii
Be nem sorolt törzsek
A alcsoport B. apiarus*
B. ftlicolonicus B. thiaminolyticus B. alcalophilus
B alcsoport
B. cirroflagellosus B. chitinosporus B. lentus
C alcsoport B. badius B. aneurinolyticus B. macroides B. freundenreichii
D alcsoport
B. pantothenticus B. epiphytus
El alcsoport
B. aminovorans B. globisporus B. insolitus B. psychrophilus
E2 alcsoport
B. psychrosaccharolyticus B. macquariensis * azok a Bacillus-tajok, amelyeket előzőleg rovarokkal kapcsolatosnak találtak, Parry, J. M. és munkatársai szerint csoportosítva [Color Atlas of Bacillus species, Wolfe Medical Publications, London (1983)].
A találmány szerint a vegetatív növekedési szakaszban termelt peszticid fehéijéket Bacillusbói izolálhatjuk. Egy megvalósítási formában vegetatív növekedési szakaszban termelt rovarölő fehéijéket izolálhatunk. Fehéijeizolálási módszerek ismertek a szakmában. Fehérjék általában tisztíthatok hagyományos kromatográfiával - beleértve gélszűrést, ioncserét és immunoaffinitás-kromatográfiát - nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (high-performance liquid chromatography = HPLC), úgymint reverz fázisú HPLC-vel, ioncserés HPLC-vel, méretkizárásos HPLC-vel, nagy teljesítményű kromatofokuszálással és hidrofób kölcsönhatás kromatográfiával stb., elektroforetikus elválasztással, úgymint egydimenziós gélelektroforézissel, kétdimenziós gélelektroforézissel stb. Ilyen módszerek ismeretesek a szakmában [lásd például, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 és 2, Ausubel et al. (eds.) John Wiley & Sons, NY (1988)]. Továbbá készíthetők a fehéqe lényegében tiszta preparátumaival szembeni antitestek [lásd például Radka et al., J. Immunoi. 128, 2804 (1983) és Immunogenetics 19, 63 (1984)]. A módszerek bármilyen kombinációja használható peszticid sajátságokkal rendelkező fehéije tisztítására. Ahogyan a leírás megfogalmazza, minden tisztítási lépés után meghatározzuk a peszticidaktivitást.
Ilyen tisztítási lépések lényegében tisztított fehéijefrakciót eredményeznek. A „lényegében tisztított” vagy „lényegében tiszta” olyan fehéijére vonatkozik, amely lényegében mentes bármilyen olyan vegyülettől, amely normális esetben a fehérje természetes állapotához tartozik. „Lényegében tiszta” fehéqekészítmények megbecsülhetők egyéb kimutatható fehérjesávok hiányával, SDS-PAGE-t követő vizuális vagy denzitometriás meghatározással. Más lehetőségként, egyéb aminoterminális szekvenciák vagy N-terminális maradékok hiánya a tisztított preparátumban jelezheti a tisztaság fokát. A tisztaság igazolható az ioncserével, reverz fázisú vagy kapilláriselektroforézissel, egyéb csúcsok hiányát mutató, „tiszta” preparátumok újrakromatografálásával. A „lényegében tiszta” vagy „lényegében tisztított” kifejezésekkel nem szándékozunk kizárni a fehéqéknek más komponensekkel való mesterséges vagy szintetikus keverékeit. A kifejezések szintén nem záqák ki olyan kis tisztátalanságok jelenlétét, amelyek nem gátolják a fehéqe biológiai aktivitását, és amelyek például nem teljes tisztítás következtében jelen lehetnek.
Amint tisztított fehérjét izolálunk, a fehéijét vagy a benne foglalt polipeptideket jellemezhetjük és szekvenálhatjuk a szakmában ismert standard módszerekkel. Például a tisztított fehéijét vagy a benne foglalt polipeptideket fragmentálhatjuk bróm-ciánnal vagy proteázokkal, úgymint papainnal, kimotripszinnel, tripszinnel, lizil-C endopeptidázzal stb. [Oike et al., J. Bioi. Chem. 257, 9751-9758 (1982); Liu et. al., Int. J. Pept. Protein Rés. 21, 209-215 (1983)]. Az eredményül kapott peptideket elválasztjuk egymástól - előnyösen HPLC-vel vagy gélek felbontásával és PVDF membránokra történő elektroblottal -, és aminosavszekvenálásnak vetjük alá. E feladat végrehajtásához a peptideket előnyösen automata szekvenátorokkal analizáljuk. Ismeretes, hogy N-terminális, C-terminális vagy köztes aminosavszekvenciák határozhatók meg. A tisztított fehéije aminosavszekvenciája alapján szintetizálható egy olyan nukleotidszekvencia, amely próbaként felhasználható a peszticid fehéijét kódoló gén izolálásának elősegítésére.
Ismeretes, hogy a peszticid fehéijék lehetnek oligomerek és molekulatömegükben, protomerek számában, peptidkomponensekben, egyes kártevők elleni aktivitásban és más sajátságokban különbözhetnek. Az itt közzé8
HU 222 264 BI tett módszerekkel azonban különböző kártevők ellen aktív fehérjék izolálhatok és jellemezhetők.
Mihelyt izoláltuk és jellemeztük a tisztított fehérjét, ismeretes, hogy különböző módon megváltoztathatjuk azt, beleértve aminosavszubsztitúciókat (helyettesítéseket), deléciókat (kivágásokat), csonkolásokat és inszerciókat (beszúrásokat). Ilyen beavatkozások módszerei általánosan ismertek a szakmában. Például a peszticid fehérjék aminosavszekvencia-változatai előállíthatók a DNS-ben történő mutációkkal. Az ilyen változatok rendelkeznek a kívánt peszticidaktivitással. A mutációk, amelyeket a változatot kódoló DNS-ben végzünk, nyilvánvalóan nem helyezhetik a szekvenciát a leolvasási kereten kívülre, és előnyösen nem hoznak létre olyan komplementer régiókat, amelyek másodlagos mRNS-szerkezeteket eredményezhetnének. Lásd a 75,444 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentést.
Ily módon a találmány felöleli a peszticid fehéqéket ugyanúgy, mint azok komponenseit és fragmentumait. Ez ismeretesen azt jelenti, hogy a fehéijéknek olyan protomer, polipeptid- vagy fragmentumkomponensei állíthatók elő, amelyek peszticidaktivitást őriznek. Ezek közé a fragmentumok közé tartoznak csonkolt szekvenciák ugyanúgy, mint a fehéqék N-terminális, C-terminális, közbenső, és közbülső részből kivágott aminosavszekvenciái.
A legtöbb kivágás, beszúrás és helyettesítés a fehérje szekvenciájában várhatóan nem okoz radikális változásokat a peszticid fehérje tulajdonságaiban. Ha azonban nehéz előre megjósolni a helyettesítés, kivágás vagy beszúrás pontos hatását e műveletek előtt, a szakember úgy dönt, hogy a szokásos screeningmeghatározásokkal értékeli a hatást.
Az itt leírt fehérjék vagy egyéb polipeptidkomponensek felhasználhatók önmagukban vagy kombináltan. Azaz számos fehéqe alkalmazható különböző rovar kártevők kiküszöbölésére.
Néhány fehérje egyedülálló polipeptidlánc, miközben sok fehérje több mint egy polipeptidláncot tartalmaz, azaz oligomer. Továbbá néhány VIP oligomerként aktív peszticid. Ezekben az esetekben további protomereket alkalmazunk a peszticidaktivitás fokozására vagy peszticid fehérjék aktiválására. Azokat a protomereket, amelyek fokoznak vagy aktiválnak, segédfehérjéknek nevezzük.
A találmány szerinti peszticid fehérjék között meglepő módon a rovarspecifikus fehérjék új osztályát tudtuk azonosítani a találmány oltalmi körén belül. A nevezett fehérjék, amelyeket ebben a bejelentésben VIP3ként jelölünk, Bacillus spp. törzsekből, de előnyösen Bacillus thuringiensis-törzsékbői és legelőnyösebben Bacillus thuringiensis AB88 és AB424 törzsekből nyerhetők. A nevezett VIP-ek leginkább őací'Zúis-tenyészetek felülúszóiban vannak jelen, az AB88 törzsben az egésznek legalább 75%-át kitéve. A VIP-fehéijéket jellemzi továbbá rovarölő aktivitásuk egyedi spektruma, amely magában foglal Agrotis- és/vagy Spodoptera-fajok elleni aktivitást, de különösen a fekete bagolypille hernyója (BCW) és/vagy hulló sereghemyó és/vagy répasereghemyó és/vagy dohányrügyhemyó és/vagy kukorica-fülhemyó elleni aktivitást.
A fekete bagolypille hernyója mezőgazdaságilag fontos rovar, δ-endotoxinokra teljesen érzéketlen. Macintosh és munkatársai [J. Invertebr. Pathol. 56, 258-266 (1990)] beszámolnak arról, hogy a CrylA(b) és CrylA(c) δ-endotoxinok rovarölő sajátságokkal rendelkeznek BCW ellen, egyenként több mint 80 pg és 18 pg/ml táplálék LC50-értékkel. A találmány szerinti VIP3A rovarölő fehérjék több mint 50%-os mortalitást eredményeznek, ha a fehérjét legalább 10-500-szor, előnyösen 50-350-szer és még előnyösebben 200-300szor alacsonyabb koncentrációban adjuk, mint amennyi az 50%-os mortalitás eléréséhez szükséges CrylA-fehérjék mennyisége.
A találmány szerinti VIP3 rovarölő fehéqék leginkább a tenyészetek felülúszóiban találhatók, és ilyenformán a kiválasztott fehéqék közé soroljuk azokat. Az Nterminális szekvenciában előnyösen számos pozitív töltésű maradékot tartalmaznak, amelyet hidrofób core-régió követ, és nem N-terminálisan alakulnak át a kivitel során.
Ahogyan a többi, itt a találmány oltalmi körén belül említett peszticid fehéqe, a VIP3-fehérjék a spórázást megelőző növekedési szakaszban mutathatók ki, megállapítva további világos megkülönböztetést más fehérjéktől, amelyek a δ-endotoxin családba tartoznak. A rovarspecifikus fehéqe kifejeződése előnyösen a log-fázis közepén kezdődik és folytatódik a spórázás alatt. A specifikus kifejeződési séma és a VIP3-fehérjék nagy stabilitása kombinációjának következtében VIP3-fehérjék nagy mennyiségei találhatók spórázó tenyészetek felülúszójában. Különösen előnyben részesítjük a 2. számú szekvenciával és az 5. számú szekvenciával azonosított VIP3-fehérjéket és a nevezett fehéqéket kódoló nukleotidszekvenciákat tartalmazó megfelelő DNS-molekulákat, de különösen azokat a DNS-molekulákat, amelyek az 1., 3. és 4. számú szekvenciavázlatokban megadott nukleotidszekvenciákat tartalmazzák.
A találmány szerinti peszticid fehéqék felhasználhatók Bí-endotoxinokkal vagy más rovarölő fehérjékkel kombinációban rovarcélpontok körének növelésére. Továbbá a találmány szerinti VIP-ek alkalmazása Bt δ-endotoxinokkal vagy más, eltérő természetű elven működő rovarölőkkel kombinációban különösen hasznos a rovarok rezisztenciájának megelőzésében és/vagy kezelésében. Egyéb rovarölőelvek magukban foglalnak proteázinhibitorokat (szerin és cisztein típusúakat egyaránt), lektineket, α-amilázokat és peroxidázokat. Egy előnyben részesített kiviteli alakban VIP-ek kifejeződése transzgén növényben együtt jár egy vagy több Bt δendotoxin kifejeződésével. Ez a több mint egy rovarölőelvnek ugyanazon transzgén növényben történő együttes kifejeződése (coexpression) elérhető a növény olyan genetikai átalakításával, hogy tartalmazza és kifejezze mindazon géneket, amelyeket szükséges. Másképpen, egy növény, az 1. szülő genetikailag átalakítható VIP-ek kifejezésére. Egy második növény, 2. szülő genetikailag átalakítható Bt δ-endotoxin kifejezésére. Az 1. szülőt keresztezve a 2. szülővel olyan utódnövénye9
HU 222 264 Β1 két kapunk, amelyek az 1. és 2. szülőbe bevitt minden gént kifejeznek. Különösen előnyben részesített δ-endotoxinok azok, amelyeket az EP-A 0618976 számú szabadalmi irat tesz közzé, és itt referenciaként beépítettünk.
Számos citotoxikus fehéije, bár nem mindegyik, kettős működésű. A kettős toxinok jellemzően két fehérjedoménból állnak, az egyiket A doménnek, a másikat B doménnek nevezik [lásd Sourcebook of Bacterial Protein Toxins, J. E. Alouf and J. H. Freer eds. Academic Press (1991)]. Az A dómén erős citotoxikus aktivitással rendelkezik. A B dómén külső sejtfelszíni receptorhoz kötődik, mielőtt intemalizálódik. Jellemzően a citotoxikus A domént kell hogy kisélje a citoplazmába egy transzlokációs dómén. Az A és B domének gyakran különálló polipeptidek vagy protomerek, amelyek fehéije-fehérje kölcsönhatással vagy diszulfidkötéssel kapcsolódnak. A toxin azonban lehet egyedülálló polipeptid, amely proteolitikusan alakul át a sejten belül két doménné, mint a Pseudomonas exotoxin A esetében. Összességében a kettős toxinok jellemzően három fontos doménnel rendelkeznek, egy citotoxikus A doménnel, egy receptorkötő B doménnel és egy transzlokációs doménnel. Az A és B doméneket gyakran fehéije-fehéije kölcsönhatást létrehozó domének kapcsolják össze.
A találmány szerinti receptorkötő domének felhasználhatók bármilyen fehéije, toxin, enzim, transzkripciós faktor, nukleinsav, kémiai vagy bármilyen más faktor szállítására olyan célrovarokba, amelyek rendelkeznek a találmányban leírt kettős toxinok receptorkötő doménje által felismert receptorral. Hasonlóan, mivel a kettős toxinok rendelkeznek transzlokációs doménekkel, amelyek behatolnak kétrétegű foszfolipidmembránokba és átkísérik azokon a citotoxinokat, ilyen transzlokációs domének alkalmasak lehetnek bármilyen fehérje, toxin, enzim, transzkripciós faktor, nukleinsav, kémiai vagy bármilyen más faktor átvitelére a kétrétegű foszfolipiden - úgymint a plazmamembránon vagy vezikulamembránon - keresztül. A transzlokációs dómén önmaga perforálhat membránokat, ily módon rendelkezve toxikus vagy rovarölő sajátságokkal. Továbbá minden kettős toxin rendelkezik citotoxikus doménekkel; egy ilyen citotoxikus dómén alkalmas lehet letális fehéqeként vagy egymagában, vagy ha valaminek a segítségével bármilyen célsejtbe bevisszük.
Végül, mivel a kettős toxinok két polipeptidet gyakran komplex formájában tartalmaznak, valószínű, hogy a találmány szerinti kettős toxinok komponensein belül fehérje-fehéije kölcsönhatásban levő régiók találhatók. Ezek a fehéije-fehéije kölcsönhatást létrehozó domének alkalmasak lehetnek összekapcsolódások képzésére toxinok, enzimek, transzkripciós faktorok, nukleinsavak, antitestek, sejtkötő részek vagy bármilyen egyéb vegyületek, faktorok, fehérjék vagy fehétjedomének bármilyen kombinációja között.
Toxinok, enzimek, transzkripciós faktorok, antitestek, sejtkötő részek vagy egyéb fehérjedomének fuzionálhatok peszticid vagy segédfehéijékhez kereten belüli genetikai fúzió létrehozásával, amely - ha a riboszómákon transzlálódik - a VIP és a fúzióhoz használt másik komponens kombinált tulajdonságaival rendelkező fúziós fehéijét eredményez. Továbbá, ha a VIP-hez fuzionált fehéijedomén affinitással rendelkezik egy másik fehéijéhez, nukleinsavhoz, szénhidráthoz, lipidhez vagy más vegyülethez vagy faktorhoz, akkor háromkomponensű komplex képződhet. Ez a komplex minden komponensének sajátságaival rendelkezni fog. Hasonló okoskodás alkalmazható négy vagy több komponensű komplexek előállítására. Ezek a komplexek felhasználhatók mint rovarölő toxinok, gyógyszerkészítmények, laboratóriumi reagensek és diagnosztikai reagensek stb. Ilyen komplexek jelenlegi felhasználására példák fúziós toxinok hatásos rákterápia céljára, reagensek ELISA-meghatározásoknál és immunblot-analíziseknél.
Egy stratégia peszticid vagy segédfehéijék megváltoztatására egy 15 aminosavból álló „S-tag” fúziója a fehéijéhez anélkül, hogy tönkretennénk a fehéqék rovarsejtkötő doménjé(i)t, transzlokációs doménjeit vagy fehéije-fehéije kölcsönhatást létrehozó doménjeit. Az S-tag nagy affinitással (Kd=10~9 M) rendelkezik a ribonukleáz S-fehéqéhez, amely ha az S-taghoz kötődik, aktív ribonukleázzá alakul [F. M. Richards and H. W. Wyckoff in: The Enzymes, Vol. IV (Boyer, P. D. ed.), Academic Press, NY, 647-806 (1971)]. A fúzió elvégezhető oly módon, hogy tönkretesszük vagy eltávolítjuk a peszticid vagy segédfehéije citotoxikus aktivitását, ezáltal kicserélve a VIP citotoxikus aktivitását egy új, citotoxikus ribonukleázaktivitással. A végleges toxin tartalmazza az S-fehéijét, peszticid fehéijét és segédfehéqét, ahol vagy a peszticid fehéijét, vagy segédfehéijét az „S-tag”-gal való transzlációs fúzióval állítottuk eló. Hasonló stratégiák alkalmazhatók más hatásos citotoxinoknak peszticid vagy segédfehéijékhez történő fúziójához, beleértve (de nem korlátozódva ezekre) riboszómainaktiváló fehéijéket, rovarhormonokat, hormonreceptorokat, transzkripciós faktorokat, proteázokat, foszfatázokat, Pseudomonas exotoxin A-t vagy bármilyen más fehéijét vagy kémiai faktort, amely sejtekbe bejuttatva letális. Hasonlóan bevihetők sejtekbe olyan fehéqék, amelyek nem letálisak, viszont megváltoztathatják a sejt biokémiáját vagy fiziológiáját.
A toxicitás spektruma különböző fajok irányába megváltoztatható olyan doméneknek peszticid vagy segédfehéijékhez történő fúziójával, amelyek más fajok sejtfelszíni receptorait ismerik fel. Az ilyen domének közé tartozhatnak (de nem korlátozódva ezekre) antitestek, transzferrin, hormonok vagy választható könyvtárhoz affinitást mutató fágból izolált peptidszekvenciák. Olyan peptidszekvenciák is felhasználhatók a toxicitás spektrumának megváltoztatására, amelyek sejtekbe bevitt tápanyagokhoz, vitaminokhoz, hormonokhoz vagy más vegyületekhez kötődnek. A találmány szerinti peszticid fehérjék azok a fehéqék, amelyek specifikus peszticid sajátságot adnak át. Ilyen fehéqék molekulatömegük szerint különbözőek lehetnek, amelyek legalább 30 kD vagy nagyobb, előnyösen körülbelül 50 kD vagy nagyobb a molekulatömege, polipeptidkomponenseket tartalmaznak.
HU 222 264 Β1
Lehetséges, hogy a peszticid fehérje egy többszörös (multimer), peszticid hatású fehéije komponense. Ilyen peszticid fehéqe - amely a segédfehéijéket, mint egy vagy több polipeptid komponensét tartalmazza - különböző molekulatömegű lehet, legalább 50-200 kD, előnyösen körülbelül 100-150 kD molekulatömegű.
A találmány céljaira a „vegetatív rovarölő fehéqe” (VIP=vegetative insecticidal protein) kifejezés olyan, a vegetatív növekedési szakaszban termelődő fehérjéket ölel fel, amelyek egymagukban vagy kombinációban peszticidaktivitásra használhatók. Ez magában foglal peszticid fehéqéket, segédfehéijéket és azokat a fehéqéket, amelyek csak a segédfehétje vagy e fehérjéknek a polipeptidkomponense jelenlétében mutatnak aktivitást.
Ismeretes, hogy alternatív módszerek állnak rendelkezésre a jelen fehéqék nukleotid- és aminosavszekvenciáinak meghatározására. Például a peszticid fehéijét kódoló nukleotidszekvencia kinyeréséhez a peszticid fehéijét kifejező kozmid kiónok izolálhatok genomiális könyvtárból. Nagyobb aktív kozmid kiónokból kisebb szubklónokat készíthetünk, és tesztelhetjük aktivitásukat. Ilyen módon aktív peszticid fehéijét kifejező kiónok szekvenálhatók a gén nukleotidszekvenciájának meghatározására. Ezután levezethető a fehérje aminosavszekvenciája. Általános molekuláris módszerekhez lásd például a Sambrook és munkatársai által készített kézikönyvet [Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1983)] és az abban hivatkozott referenciákat.
A találmány felölel BacillusiíA eltérő szervezetekből való nukleotidszekvenciákat is, amelyekben a nukleotidszekvenciák a találmány szerinti Bacillus nukleotidszekvenciákkal történő hibridizációval izolálhatok. Az ilyen nukleotidszekvenciák által kódolt fehéqék peszticidaktivitásra tesztelhetők. A találmány a nukleotidszekvenciák által kódolt fehéqéket is felöleli. Továbbá a találmány tárgyát képezik BacillusXcX eltérő szervezetekből kinyert olyan fehéijék, amelyekben a fehéije keresztreakciót ad a találmány szerinti fehéqék ellen képződött antitestekkel. Az izolált fehéijék újra vizsgálhatók peszticidaktivitásra az itt közzétett vagy más, a szakmában ismert módszerekkel.
Amint izoláltuk a találmány szerinti peszticid fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciákat, átalakíthatjuk és felhasználhatjuk azokat a fehéije különböző gazdaszervezetekben történő kifejezésére, beleértve más szervezeteket, mikroorganizmusokat és növényeket.
A találmány szerinti peszticid gének optimálhatok fokozott kifejeződésre növényekben [lásd az EP-A 0618976, EP-A 0359472, EP-A 0385962 számú szabadalmi iratokat; WO 91/16432 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi bejelentést; Perlak et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 3324-3328 (1991) és Murray et al., Nucleic Acids Research 17, 477-498 (1989)]. Ebben az esetben a gének növények által előnyben részesített kodonok felhasználásával szintetizálhatok. Az egyes gazdaszervezet számára előnyben részesített kodon az az egyedülálló kodon, amely leggyakrabban kódolja azt az aminosavszekvenciát abban a gazdaszervezetben. A kukorica számára előnyben részesített kodon, például egy bizonyos aminosavra, kukoricából való ismert génszekvenciákból származtatható. Murray és munkatársai kukoricakodon-felhasználást találtak kukoricanövényből való 28 génre [Nucleic Acid Research 17, 477-498 (1989)], melynek közzétételét itt beépítettük referenciaként. Szintetikus gének is előállíthatók kodonok megoszlása alapján, amelyet egyes gazdaszervezet egyes aminosavhoz felhasznál.
Ily módon a nukleotidszekvenciák optimálhatok bármilyen növényben történő kifejeződésre. Ismeretes, hogy a génszekvenciának minden vagy bármely része lehet optimált vagy szintetikus. Ez azt jelenti, hogy szintetikus vagy részben optimált szekvenciák szintén alkalmazhatók.
Hasonló módon optimálhatok a nukleotidszekvenciák bármilyen mikroorganizmusban történő kifejeződésre. Bacillus számára előnyben részesített kodonfelhasználáshoz lásd például az U. S. P. 5,024,837 számú szabadalmi iratot és Johansen et al., Gene 65, 293-304 (1988) irodalmi hivatkozást.
Növényi expressziós kazetták összeállításának módszertanát ugyanúgy, mint az idegen DNS bevitelét növényekbe leírták a szakmában. Az ilyen expressziós kazetták tartalmazhatnak promotereket, terminátorokat, fokozókat (enhancers), bevezetőszekvenciákat (leader sequences), intronokat és egyéb szabályozószekvenciákat működőképesen hozzákötve a peszticid fehéijét kódoló szekvenciához. Továbbá ismert, hogy a VIP-gének promoterei és terminátorai használhatók expressziós kazettákban.
Általában idegen DNS-nek növényekbe történő bevezetésére Ti-plazmidvektorokat használunk az idegen DNS szállítására ugyanúgy, mint közvetlen DNS-felvételhez, liposzómákat, elektroporációt, mikroinjektálást és mikrobelövések alkalmazását. Ilyen módszereket már közzétettek a szakmában [lásd például Guerche et al., Plánt Science 52, 111-116 (1987); Neuhause et al., Theor. Appl. Génét. 75, 30-36 (1987); Klein et al., Natúré 327, 70-73 (1987); Howell et al., Science 208, 1265 (1980); Horsch et al., Science 227, 1229-1231 (1985); DeBlock et al., Plánt Physiology 91, 694-701 (1989); Methods fór Plánt Molecular Biology (Weissbach and Weissbach, eds.) Academic Press, Inc. (1988) és Methods in Plánt Molecular Biology (Schuler and Zielinski, eds.) Academic Press, Inc. (1989). Lásd még az itt referenciaként beépített U. S. P. 08/008,374 sorozatszámú szabadalmi iratot. Lásd még az EP-A 0193259 és EP-A 0451878 számú szabadalmi iratokat. Nyilvánvaló, hogy a transzformációs eljárás a transzformálandó növényi sejttől függ.
Továbbá ismeretes, hogy az expressziós kazetta komponensei módosíthatók a kifejeződés növelése érdekében. Például csonkolt szekvenciák, nukleotidhelyettesítések vagy más módosítások alkalmazhatók [Perlak et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 3324-3328 (1991); Murray et al., Nucleic Acids Research 17, 477-498 (1989)] és WO 91/16432 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi bejelentés].
HU 222 264 Bl
A szerkezet tartalmazhat bármilyen más szükséges szabályozót, úgymint terminátorokat [Guerineau et al., Mól. Gén. Génét. 226, 141-144 (1991); Proudfoot, Cell 64, 671-674 (1991); Sanfacon et al., Genes Dev. 5, 141-149 (1991); Mogen et al., Plánt Cell 2, 1261-1272 (1990); Munroe et al., Gene 91, 151-158 (1990); Ballas et al., Nucleic Acids Rés. 17, 7891-7903 (1989); Joshi et al., Nucleic Acids Rés. 15, 9627-9639 (1987)], növényi transzlációs megegyező szekvenciákat [Joshi C. P., Nucleic Acids Rés. 15, 6643-6653 (1987)], intronokat [Luehrsen and Walbot, Mól. Gén. Génét. 225, 81-93 (1991)] és hasonlókat, működőképesen hozzákötve a nukleotidszekvenciához. Előnyös lehet, ha az expresszióskazettaösszeállítás 5’ bevezetőszekvenciákat tartalmaz. Az ilyen bevezetőszekvenciák fokozhatják a transzlációt. Transzlációs bevezetők ismertek a szakmában és ezek közé tartoznak:
Picomavirus-bevezetők, például EMCV-bevezető (encephalomyocarditis 5’nem kódolórégió) [Elroy-Stein O., Fuerst T. R. és Moss B., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 6126-6130 (1989)];
Potyvirus-bevezetők, például TEV-bevezető (Tobacco Etch Virus=dohány bemaródását okozó vírus) és MDMV-bevezető (Maize Dwarf Mosaic Virus=kukorica-törpemozaikvírus) [Allison et al., Virology 154, 9-20 (1986)];
Humán immunglobulin nehéz lánc kötő fehérje (BiP=binding protein) [Macejak D. G. and Samow P. Natúré 353, 90-94 (1991)];
Nem transziáit bevezető az alfa-mozaikvírus-burokfehérje mRNS-ből (AMV RNA=alfa mosaic vírus ribonucleic acid) [Jobling S. A. and Gehrke L. Natúré 325, 622-625 (1987)];
Dohánymozaikvírus-bevezető (TMV=tobacco mosaic Vírus) [Gallie D. R. et al., Molecular Biology of RNA 237-256 (1989)] és
Kukoricaklorotikusfoltosvírus-bevezető (MCMV= maize chlorotic mottle vírus) [Lömmel S. A. et al., Virology 81, 382-385 (1991) és Della-Cioppa et al., Plánt Physiology 84, 965-968 (1987)].
Növényi terminátor alkalmazható az expressziós kazettában [Rosenberg et al., Gene 56, 125 (1987); Guerineau et al., Mól. Gén. Génét. 226, 141-144 (1991); Proudfoot, Cell 64, 671-674 (1991); Sanfacon et al., Genes Dev. 5, 141-149 (1991); Mogen et al., Plánt Cell 2, 1261-1272 (1990); Munroe et al., Gene 91, 151-158 (1990); Ballas et al., Nucleic Acids Rés. 17, 7891-7903 (1989); Joshi et al., Nucleic Acids Rés. 15, 9627-9639 (1987)].
Szövetspecifikus kifejeződés céljából a találmány szerinti nukleotidszekvenciák működőképesen hozzáköthetek szövetspecifikus promoterekhez. Lásd például az EP-A 0618976 számú szabadalmi iratot, amelyet itt referenciaként beépítettünk.
Továbbá a találmány tárgyát képezik olyan transzgén növények, különösen transzgén termékeny növények - amelyeket az előzőekben leírt eljárások segítségével transzformáltunk - és azok ivartalan és/vagy ivaros utódai, amelyek tartalmazzák és előnyösen ki is fejezik a találmány szerinti peszticid fehérjét. Különösen előnyben részesítjük a hibrid növényeket.
A találmány szerinti transzgén növény lehet kétszikű vagy egyszikű növény. Előnyben részesítjük az egyszikű növényeket a Gra/wmaceae-családból, beleértve Lolium, Zea, Triticum, Triticale, Sorghum, Saccharum, Bromus, Oryzae, Avena, Hordeum, Secale és Setaria növényeket.
Különösen előnyben részesítjük a transzgén kukoricát, búzát, árpát, cirokot, rozsot, zabot, pázsitfüvet és rizst.
A kétszikű növények között a szójababot, gyapotot, dohányt, cukorrépát, olajos repcét és napraforgót részesítjük itt különösen előnyben.
Az „utód” kifejezés a transzgén növények „ivartalan” és „ivaros” úton létrehozott utódait egyaránt felöleli. Ez a definíció magában foglalja az összes mutánst és változatot, amelyek ismert eljárások segítségével kaphatók - úgymint például sejtfúzióval vagy mutáns szelekcióval - és amelyek még mutatják az eredetileg transzformáit szülőnövény jellemző sajátságait, a transzformáit növényi anyag összes keresztezési és fúziós termékével együtt.
A találmánynak egy másik tárgyát a transzgén növények szaporítóanyagai képezik.
A transzgén növények szaporítóanyagait a találmány vonatkozásában úgy definiáljuk, mint bármilyen növényi anyag, amely ivarosán vagy ivartalanul szaporítható in vivő vagy in vitro. Különösen előnyben részesítjük a találmány oltalmi körén belül a protoplasztokat, sejteket, kalluszokat, szöveteket, szerveket magokat, embriókat, pollent, zigótákat együtt bármilyen egyéb, transzgén növényekből nyert szaporítóanyaggal.
Növényi részek, úgymint például virágok, szárak, gyümölcsök, levelek, gyökerek, amelyek a találmány szerinti eljárás segítségével előzőleg transzformált transzgén növényekből vagy azok utódaiból származnak, és ilyenformán legalább részben transzgén sejteket tartalmaznak, szintén a találmány tárgyát képezik.
Mielőtt a növényi szaporítóanyag (gyümölcs, gumó, szem, mag), de különösen a mag eladásra kerül, mint kereskedelmi termék, a szokásos módon gyomirtót, rovarölőt, gombaölőt, baktériumölőt, fonalféregirtót, puhatestűeket irtot vagy e preparátumokból néhánynak keverékeit tartalmazó védőbevonattal kezeljük, ha szükséges együtt további hordozókkal, felületaktív anyagokkal vagy kihelyezést segítő adjuvánsokkal, amelyeket a formulázásban szokásos módon alkalmaznak abból a célból, hogy védelmet nyújtson baktérium, gomba vagy állati kártevők okozta kár ellen.
A mag kezelése céljából a védőbevonatot felvihetjük a magokra a gumóknak vagy szemeknek folyékony formulázással történő impregnálásával, vagy bevonva azokat kombinált nedves vagy száraz formulázással. Továbbá speciális esetekben lehetségesek a növényekre történő felvitelnek más módszerei, például a rügyekre vagy a gyümölcsre irányuló kezelés.
A találmány szerinti növényi mag - amely tartalmazza a találmány szerinti peszticid fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát magában foglaló DNS-moleku12
HU 222 264 Β1 lát - kezelhető olyan magvédő bevonattal, amely magot kezelő vegyszereket, úgymint például captant, carboxint, thiramot (TMTD®), methalaxylt (Aprón®) és pirimiphos-methylt (Actellic®) és egyéb, a magok kezelésében általánosan használt vegyszereket tartalmaz. A találmány oltalmi körén belül előnyben részesítünk olyan magvédő bevonatokat, amelyek a találmány szerinti rovarölő készítményt tartalmazzák egymagában, vagy kombinációban a magok kezelésében szokásos módon használt magvédő bevonatok egyikével.
Ilyenformán a találmány további tárgyát képezi termesztett növény számára növényi szaporítóanyag - de különösen olyan növényi mag, amelyet az előbbiekben definiált magvédő bevonattal kezeltünk - szolgáltatása.
Ismeretes, hogy a peszticid fehéijét kódoló gének felhasználhatók rovarpatogén szervezetek transzformálására. Ilyen szervezetek közé tartoznak a Baculovírusok, gombák, protozoák, baktériumok és puhatestűek.
A találmány szerinti Bacillus-törzsek alkalmazhatók mezőgazdasági terméseknek és termékeknek kártevők elleni védelmére. Másképpen, a peszticidet kódoló gén megfelelő vektoron keresztül bevezethető mikrobiális gazdaszervezetbe, és a nevezett gazdaszervezet felhasználható a környezetben vagy növényeken vagy állatokon. Olyan mikroorganizmus gazdaszervezetek választhatók, amelyekről tudott, hogy egy vagy több fontos termés „fitoszféráját” (levélsíkot, levélszférát, gyökérszférát és/vagy gyökérsíkot) birtokolják. Ezeket a mikroorganizmusokat úgy választjuk ki, hogy képesek legyenek sikeresen versenyezni az illető környezet vad típusú mikroorganizmusaival, nyújtsanak stabil fennmaradást és a polipeptidpeszticidet kifejező gén kifejeződését, és ha szükséges, gondoskodjanak a peszticid tökéletesített védelméről a környezeti lebomlással és inaktiválással szemben.
Ilyen mikroorganizmusok közé tartoznak baktériumok, algák és gombák. Különösen fontos mikroorganizmusok, úgymint baktériumok, például Pseudomonas, Erwinia, Serratia, Klebsiella, Xanthomonas, Streptomyces, Rhizobium, Rhodopseudomonas, Methylius, Agrobacterium, Acetobacter, Lactobacillus, Arthrobacter, Azotobacter, Leuconostoc és Alcaligenes; gombák, különösen élesztők, például Saccharomyces, Cryptococcus, Kluyveromyces, Sporobolomyces, Rhodotorula és Aureobasidium. Különösen fontosak olyan fitoszféra-baktériumfajok, mint Pseudomonas syringae, Pseudomonas fluorescens, Serratia marcescens, Acetobacter xylinum, Agrobacteria, Rhodopseudomonas spheroides, Xanthomonas campestris, Rhizobium melioti, Alcaligenes entrophus, Clavibacter xyli és Azotobacter vinlandii; és fitoszféra-élesztőfajok, mint Rhodotorula rubra, R. glutinis, R. marina, R. aurantiaca, Cryptococcus albidus, C. diffluens, C. laurentii, Saccharomyces rosei, S. pretoriensis, S. cerevisiae, Sporobolomyces rosues, S. odorus, Kluyveromyces veronae és Aureobasidium pollulans. Különösen fontosak a pigmentált mikroorganizmusok.
Számos út áll rendelkezésre a peszticid fehérjét kifejező gén bevitelére a mikroorganizmus gazdaszervezetbe olyan körülmények között, amelyek lehetővé teszik a stabil fennmaradást és a gén kifejeződését. Például összeállíthatók olyan expressziós kazetták, amelyek tartalmazzák a kérdéses DNS-szerkezeteket a DNS-szerkezetek kifejezésére szolgáló transzkripciós és transzlációs szabályozószignálokkal működőképesen összekötve, és egy olyan DNS-szekvenciát, amely homológ a gazdaszervezetnek azzal a szekvenciájával, amellyel létrejön az integráció, és/vagy a gazdaszervezetben működő replikációs rendszerrel, amellyel integráció vagy stabil fennmaradás jön létre.
Transzkripciós és transzlációs szabályozószignálok közé tartoznak - de nem korlátozódnak ezekre - a promoter, transzkripciós iniciációs starthely, operátorok, aktivátorok, fokozok, egyéb szabályozóelemek, riboszómakötő helyek, iniciációs kodon, terminációs szignálok és hasonlók [lásd például U. S. P. 5,039,523; U. S. P. 4,853,331; EPO 0480762A2 számú szabadalmi iratokat és Sambrook et al., lásd fent; Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Maniatis et al. (eds.) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1982); Advanced Bacterial Genetics, Davis et al. (eds.) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1980) és az ezekben hivatkozott referenciákat].
Alkalmas gazdasejtek - amelyekben a peszticidet tartalmazó sejteket kezeljük a toxin aktivitásának meghosszabbítására a sejtben, amikor majd a kezelt sejtet a kártevő(k) célkömyezetébe juttatjuk - vagy prokarióták vagy eukarióták, normális esetben azokra a sejtekre korlátozódnak, amelyek nem termelnek magasabb rendűekre, úgymint emlősökre nézve toxikus anyagokat. Használhatunk azonban olyan, a magasabb rendű szervezetekre toxikus anyagokat termelő szervezeteket, amelyekben a toxin nem stabil vagy az alkalmazás szintje elég alacsony ahhoz, hogy elkerüljük az emlősszervezet mérgezésének bármilyen lehetőségét. Gazdaszervezetként különösen fontosak a prokarióták és az alacsonyabb rendű eukarióták, úgymint gombák. Szemléltető példák prokariótákra Gram-negatívok és Gram-pozitívok egyaránt, beleértve az Enterobacteriaceaet, úgymint Escherichia-, Erwinia-, Shigella-, Salmonella- és Proteusnemzetségeket; Bacillaceaet, Rhizobiaceaet, úgymint RhizobiumoC, Spirillaceaet, úgymint PhotobacteriumoX.·, Zymomonas-, Serratia-, Aeromonas-, Vibrio-, Desulfovibrio, Spirillum-nemzetségéket; Lactobacillaceaef, PseudomonadaceaeX, úgymint Pseudomonas- és Acetobacter-nemzeXségeket; Azotobacteraceaet és Nitrobacteraceaet. Az eukarióták között gombák, úgymint Phycomycetes és Ascomycetes, amelyek közé tartoznak élesztők, mint Saccharomyces és Schizosaccharomyces; és Basidiomycetes élesztő, úgymint Rhodotorula, Aureobasidium, Sporobolomyces és hasonlók.
A termeltetés céljára szolgáló gazdaszervezetek kiválasztásánál különösen fontos jellemzők közé tartozik a fehéijegén könnyű bevezetése a gazdaszervezetbe, expressziós rendszerek hozzáférhetősége, a kifejeződés hatékonysága, a fehérje stabilitása a gazdaszervezetben és segédgenetikai képességek jelenléte. A peszticid mikrokapszulaként történő felhasználáshoz fontos jellem13
HU 222 264 Bl zők közé tartozik a peszticid védelem minősége, úgymint vastag sejtfalak, pigmentáció, és intracelluláris csomagolás vagy zárványtestek képzése; levélaffinitás; toxicitás hiánya emlősökre; a kártevők számára vonzó legyen az elfogyasztása; könnyű ölés és rögzítés a toxin tönkretétele nélkül, és hasonlók. Egyéb szempontok közé tartozik a könnyű kiszerelés és forgalmazás, gazdaságosság, tárolási stabilitás és hasonlók.
Különösen fontos gazdaszervezetek közé tartoznak az élesztők, úgymint Rhodotorula-, Aureobasidium-, Saccharomyces- és Sporobolomyces-ía)ok; levélen található szervezetek, úgymint Pseudomonas-, Erwiniaés F/avoóacZerzwzn-fajok; vagy egyéb olyan szervezetek, mint Escherichia-, Lactobacillus-, Bacillus-fajők és hasonlók. Specifikus szervezetek közé tartozik a Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Saccharomyces cerevisiae, Bacillus thuringiensis, Escherichia coli, Bacillus subtilis és hasonlók.
VIP-gének növényeken szaporodó mikroorganizmusokba (epifitákba) vihetők be, hogy a VIP-fehérjéket a lehetséges célkártevőkhöz juttassuk el. Epifiták lehetnek például Gram-pozitív vagy Gram-negatív baktériumok.
Gyökéren megtelepedő baktériumok például izolálhatok a kérdéses növényről a szakmában ismert módszerekkel. Különösen gyökereken megtelepedő Bacillus cereus-törzset tudtak izolálni növényi gyökerekről [J. Handelsman, S. Raffel, E. Mester, L. Wunderlich and C. Grau, Appl. Environ. Microbiol. 56, 713-718 (1990)]. VIPl-et és/vagy VIP2-t és/vagy VIP3-at be tudtak vinni gyökéren megtelepedő Bacillus cereusba a szakmában ismert standard módszerekkel.
A találmány szerinti VIP3 vagy egyéb VIP-ek szintén bevihetők a gyökéren megtelepedő Bacillusba elektrotranszformáció segítségével. VIP-ek különösen ingázó vektorba (shuttle vector) klónozhatok, például pHT3101-be [D. Lereclus et al., FEMS Microbiol. Letts. 60, 211-218 (1989)], ahogyan azt a 10. példában leírjuk. Az egyes VIP kódolószekvenciáját tartalmazó pHT3101 ingázó vektor azután transzformálható a gyökéren megtelepedő Bacillusba elektroporáció segítségével [D. Lereclus et al., FEMS Microbiol. Letts. 60, 211-218(1989)].
Expressziós rendszereket úgy tervezhetünk, hogy a VIP-fehérjék kiválasztódnak a Gram-negatív baktérium, például E. coli citoplazmájából. A kiválasztott VIP-fehéijék előnyei, (1) elkerüli a citoplazmán belül kifejeződött VIP-fehérjék lehetséges toxikus hatásait és (2) képes növelni a kifejeződött VIP-fehérje szintjét és (3) segíteni tudja a VIP-fehérje hatékony tisztítását.
VIP-fehérjék előállíthatok E. coliban kiválasztva, például egy megfelelő E. coli szignálpeptidnek a VIP szignálpeptid aminovégével történő fúziójával, vagy a VIP szignálpeptidnek az E. coli szignálpeptidjével történő lecserélésével. E. coli által felismert szignálpeptidek találhatók olyan fehérjékben, amelyeknek E. coliban való kiválasztódása már ismert, például az OmpAfehérje [J. Ghrayeb, H. Kimura, M. Takahara, Y. Masui and M. Inouye, EMBO J. 3, 2437-2442 (1984)]. OmpA az E. coli külső membránjának fő fehérjéje, és így ennek a szignálpeptidje feltételezhetően hatékony a transzlokáció folyamatában. Az OmpA szignálpeptidet nem is szükséges módosítani a folyamat előtt, mint ahogyan esetleg más szignálpeptidek esetében, például lipoprotein szignálpeptideknél [G. Duffaud, P. March and M. Inouye, Methods in Enzymology 153, 492 (1987)].
Különösen egyedi BamHI restrikciós helyek vihetők be a VIP kódolószekvenciáinak aminoterminális és karboxiterminális végeire a szakmában ismert módszerek felhasználásával. Ezek a BamHI-fragmentumok kereten belül klónozhatók a pIN-III-ompAl, A2 vagy A3 vektorba [J. Ghrayeb, H. Kimura, M. Takahara, Y. Masui and M. Inouye, EMBO J. 3, 2437-2442 (1984)], ily módon létrehozva ompA: VIP fúziós gént, amely kiválasztódik a periplazmás térbe. A többi restrikciós hely a pIN-III-ompA polilinkerben eltüntethető a szakmában ismert standard módszerekkel oly módon, hogy a VIP aminoterminális aminosavat kódoló szekvenciája közvetlenül az ompA szignálpeptid hasítási hely után található. Ezért a kiválasztott VIP-szekvencia E. coliban azonos lesz a natív VIP-szekvenciával.
Ha a VIP natív szignálpeptid nem szükséges az érett fehérje megfelelő hajtogatottságához, az ilyen szignálszekvenciák eltávolíthatók és helyettesíthetők az ompA szignálszekvenciával. Egyedi BamHI restrikciós helyek vihetők be az előfehérjét kódoló szekvenciák aminoterminálisainál, közvetlenül a VIP szignálpeptidet kódoló szekvenciái után és a VIP kódolószekvencia karboxivégeinél. Ezek a BamHI-fragmentumok azután klónozhatok a pIN-III-ompA vektorokba, ahogyan azt fent leírtuk.
Általános módszerek ismertek a szakmában a találmány szerinti törzseknek kártevők kiküszöbölésében vagy más szervezeteknek peszticid szerekké való átalakításában történő alkalmazására. Lásd például az U. S. P. 5,039,523 és EPO 0480762A2 számú szabadalmi iratokat.
VIP-ek fermentálhatok baktérium gazdaszervezetben és a keletkezett baktériumok feldolgozhatok és felhasználhatók mikrobiológiai permetként ugyanolyan módon, mint ahogyan Bacillus thuringiensis-törzseket használtunk rovarölő permetként. Bacillus által kiválasztott VlP(-ek) esetében a szekréciós szignált eltávolítottuk vagy a szakmában ismert eljárásokkal mutációnak vetettük alá. Ilyen mutációk és/vagy kivágások megakadályozzák a VIP-fehéije kiválasztódását a szaporító tápoldatba a fermentációs eljárás alatt. A VIP-ek bent maradnak a sejtben és a sejteket azután feldolgozzuk, hogy kinyerjük a kapszulába zárt VIP-eket. Bármilyen alkalmas mikroorganizmus használható e célra. Pseudomonast használtak Bacillus thuringiensis endotoxinok kifejezésére, mint kapszulába zárt fehérjéket, és az eredményül kapott sejteket feldolgozták és kipermetezték rovarölő szerként [H. Gaertner et al., in: Advanced Engineered Pesticides, L. Kim (ed.) (1993)].
Bacillus thuringiensis különböző törzsei használatosak ily módon. Az ilyen őí-törzsek endotoxinfehérjéket ugyanúgy termelnek, mint VIP-eket, Másképpen, ilyen törzsek csak VIP-eket képesek termelni. Bacillus subti14
HU 222 264 Bl fenek egy spórázásra képtelen törzséről kimutatták, hogy nagy mennyiségben termeli a Bacillus thuringiensis CrylIlA endotoxint [Agaisse, H. and Lereclus, D., „Expression in Bacillus subtilis of the Bacillus thuringiensis CrylIlA toxin gene is nőt dependent on a sporulation-specific sigma factor and is increased in a spoOA mutant”, J. Bacteriol. 176, 4734-4741 (1994)]. Hasonló spoOA mutáns készíthető Bacillus thuringiensisben és felhasználható a tápoldatba ki nem választódó, hanem a sejtben maradó, kapszulába zárt VIP-ek termelésére.
A Bacillus-sejtben bent tartott VIP-ek előállítása céljából ártalmatlaníthatjuk a szignálpeptidet oly módon, hogy már ne működjön tovább szekréciós szignálként.
Másképpen, a találmány szerinti VIP-ek szignálpeptidjei eltüntethetők a szekvenciából, ezáltal szekréciós fehérjeként felismerhetetlenné téve azokat Bacillusbw. Specifikusan metionin starthely alakítható ki az előfehéije szekvenciája előtt, a szakmában ismert módszereket alkalmazva.
VIP-géneket bevihetünk növényeken szaporodó (epifita) mikroorganizmusokba, hogy eljuttassuk a VIP-fehéijéket a lehetséges célkártevőkhöz. Epifiták lehetnek például Gram-pozitív vagy Gram-negatív baktériumok.
A találmány szerinti Sac/Z/us-törzsek, vagy a peszticid gént és fehérjét tartalmazó, genetikailag módosított mikroorganizmusok felhasználhatók mezőgazdasági termények és termékek kártevők elleni védelmére. A találmány egy vonatkozásában a toxin (peszticid) termelő szervezet teljes, azaz nem lizált sejtjeit kezeljük olyan reagensekkel, amelyek meghosszabbítják a sejtben termelődött toxin aktivitását, ha a sejtet a célkártevő(k) környezetére visszük fel.
Másképpen, a peszticideket heterológ génnek a sejtes gazdaszervezetbe történő bevitelével állítjuk elő. A heterológ gén közvetlen vagy közvetett kifejeződése a peszticid intracelluláris termelődését és fennmaradását eredményezi. Ezeket a sejteket azután olyan körülmények között kezeljük, amelyek meghosszabbítják a sejtben termelődött toxin aktivitását, ha a sejtet a célkártevő(k) környezetére visszük fel. Az eredményül kapott termék megtartja a toxin toxicitását. Ezek a természetesen kapszulázott peszticidek azután kiszerelhetők hagyományos technikák szerint a célkártevőt hordozó környezetre - talajra, vízre és növények levélzetére - történő kihelyezés céljából. Lásd például az EPA 0192319 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentést és az abban hivatkozott referenciákat.
A találmány szerinti aktív alkotórészeket szokásosan készítmények formájában alkalmazzuk, és kihelyezhetjük a kezelendő termény területére vagy növényre egyidejűleg, vagy egymás után más komponensekkel együtt. Ezek a komponensek lehetnek trágyát vagy mikrotápanyagot adók, vagy egyéb olyan készítmények, amelyek befolyásolják a növények növekedését. Ezek lehetnek szelektív gyomirtók, rovarölők, gombaölők, baktériumölők, fonalférgeket és puhatestűeket irtok vagy e készítmények némelyikének keverékei is, ha szükséges együtt további mezőgazdaságilag elfogadható hordozókkal, felületaktív anyagokkal vagy kihelyezést segítő adjuvánsokkal, amelyeket a formulázásban szokásos módon alkalmaznak. Alkalmas hordozók és adjuvánsok lehetnek szilárdak vagy folyékonyak, és a formulázási technológiában általában alkalmazott anyagoknak - például természetes vagy regenerált ásványi anyagoknak, oldatoknak, diszpergálószereknek, nedvesítőszereknek, ragacsosítóknak, kötőanyagoknak vagy trágyáknak - megfelelőek.
A találmány szerinti baktériumtörzsek által termelt rovarspecifikus fehérjéknek legalább egyikét tartalmazó, találmány szerinti aktív alkotórész vagy agrokémiai készítmény kihelyezésének előnyben részesített módszerei a levélre helyezés, magbevonás és talajra helyezés. A kihelyezések száma és aránya a megfelelő kártevővel való elárasztottságtól függ.
A találmány ilyenformán továbbá olyan rovarölő készítményt nyújt, amely aktív alkotórészként a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjéknek legalább egyikét és/vagy az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló, legalább egy DNS-molekulát tartalmazó rekombináns mikroorganizmust tartalmaz, de különösen rekombináns Bacillus spp. törzset, úgymint Bacillus cereust vagy Bacillus thuringiensist, amelyek az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló legalább egy DNSmolekulát, vagy annak származékát vagy mutánsát tartalmazzák mezőgazdasági adjuvánssal, úgymint hordozóval, hígítóval, felületaktív anyaggal vagy kihelyezést segítő adjuvánssal együtt. A készítmény tartalmazhat további biológiailag aktív vegyületet is. A nevezett vegyület lehet trágyát vagy mikrotápanyagot adó, vagy egyéb, a növények növekedését befolyásoló készítmény. Ez lehet szelektív gyomirtó, rovarölő, gombaölő, baktériumölő, fonalférgeket és puhatestűeket irtó vagy e készítmények némelyikének keverékei is, ha szükséges együtt további mezőgazdaságilag elfogadható hordozókkal, felületaktív anyagokkal vagy kihelyezést segítő adjuvánsokkal, amelyeket a formulázásban szokásos módon alkalmaznak. Alkalmas hordozók és adjuvánsok lehetnek szilárdak vagy folyékonyak, és a formulázási technológiában általában alkalmazott anyagoknak - például természetes vagy regenerált ásványi anyagoknak, oldatoknak, diszpergálószereknek, nedvesítőszereknek, ragacsosítóknak, kötőanyagoknak vagy trágyáknak megfelelőek.
A készítmény 0,1-99% aktív alkotórészt, 1-99,9% szilárd vagy folyékony adjuvánst és 0-25% felületaktív anyagot tartalmazhat. Az aktív alkotórész - amely a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjéknek legalább egyikét vagy az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló, legalább egy DNS-molekulát tartalmazó rekombináns mikroorganizmust tartalmaz, de különösen rekombináns Bacillus spp. törzset, úgymint Bacillus cereust vagy Bacillus thuringiensist, amelyek az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló legalább egy DNS-molekulát,
HU 222 264 Β1 vagy annak származékát vagy mutánsát tartalmazzák vagy a nevezett aktív alkotórészt tartalmazó készítmény adagolható a megvédendő növényeknek vagy terményeknek együtt bizonyos egyéb rovarölő szerekkel vagy vegyszerekkel (1993 Crop Protection Chemicals Reference, Chemical and Phaimaceutical Press, Canada) hatásvesztés nélkül. Ez összeegyeztethető a legtöbb általánosan használt mezőgazdasági permetezőanyaggal, de rendkívül alkalikus permetezőoldatokban nem szabad használni. Adagolható porként, szuszpenzióként, nedvesíthető porként vagy bármilyen más, mezőgazdasági kihelyezésre alkalmas formában.
A találmány tárgyát továbbá rovar kártevők kiküszöbölésére vagy gátlására szolgáló módszerek képezik, a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjéknek legalább egyikét, vagy az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló, legalább egy DNS-molekulát tartalmazó rekombináns mikroorganizmust tartalmazó aktív alkotórészt, vagy a nevezett aktív alkotórészt tartalmazó készítményt kihelyezve (a) abba a környezetbe, ahol a rovar kártevő előfordulhat, (b) növényre vagy növényi részre annak érdekében, hogy megvédje a nevezett növényt vagy növényi részt rovar kártevő okozta károsodástól vagy (c) magra annak érdekében, hogy megvédje a nevezett magból fejlődő növényt rovar kártevő okozta károsodástól.
A növényvédelem területén történő alkalmazásnak előnyben részesített módszere a növényi levélzetre való kihelyezés (lombos alkalmazás), ahol a kihelyezések száma és aránya a megvédendő növénytől és a kérdéses kártevővel való elárasztottság kockázatától függ. Az aktív alkotórész azonban a gyökereken keresztül is behatolhat a növényekbe (rendszeres hatás), ha a növények helyét folyékony készítménnyel átitatjuk (impregnáljuk), vagy ha az aktív alkotórészt szilárd formában építjük be a növény helyére, például a talajba, például granulált formában (alkalmazás talajban). Hántolatlan rizsterményeknél ilyen granulák kihelyezhetők egyenletesen elosztott mennyiségekben az elárasztott rizsföldre.
A találmány szerinti készítmények alkalmasak növényi szaporítóanyag - például mag, úgymint gyümölcs, gumók vagy szemek, vagy növényi dugványok - rovar kártevőktől való védelmére is. A szaporítóanyag kezelhető a készítménnyel ültetés előtt: mag például bevonható vetés előtt. A találmány szerinti aktív alkotórész szemekre is alkalmazható (bevonás), vagy folyékony készítménnyel impregnálva a szemeket vagy szilárd készítménnyel vonva be azokat. A készítmény az ültetési helyre is kihelyezhető, ha a szaporítóanyag ültetésre kerül, például a barázdába a vetés során. A találmány tárgyát képezik növényi szaporítóanyag kezelésének módszerei, és az így kezelt növényi szaporítóanyagok is.
Az aktív alkotórészként legalább egy új toxingént rekombináns formában tartalmazó rekombináns mikroorganizmust - de különösen rekombináns Bacillus spp. törzset, úgymint Bacillus cereust vagy Bacillus thuringiensist, amelyek az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló legalább egy DNS-molekulát, vagy annak származékát vagy mutánsát tartalmazzák - magában foglaló találmány szerinti készítmények alkalmazhatók bármilyen ismert eljárásban, amely magnak vagy talajnak baktériumtörzsekkel történő kezelésére szolgál. Lásd például az U. S. P. 4,863,866 számú szabadalmi iratot. A törzsek biokontroll számára még akkor is hatékonyak, ha a mikroorganizmus nem élő. Előnyben részesítjük azonban élő mikroorganizmusok alkalmazását.
A találmány oltalmi körén belül megvédendő céltermények magukban foglalják például a következő növényfajokat: gabonafélék (búza, árpa, rozs, zab, rizs, cirok és rokon termények), répa (cukorrépa és takarmányrépa), abrakfüvek (csomós ebír, csenkeszfu és hasonlók), csonthéjasok, almafélék és puha gyümölcsök (alma, körte, szilva, barack, mandula, cseresznye, földi eper, málna és szeder), hüvelyes növények (bab, lencse, borsó, szójabab), olajos növények (repce, mustár, mák, olíva, napraforgó, kókuszdió, ricinusolaj-növény, kakaóbab, földimogyoró), uborkafélék (uborka, tök, dinnye), szálas növények (gyapot, len, kender,juta), citrusfélék (narancs, citrom, grapefruit, mandarin), zöldségfélék (spenót, saláta, spárga, káposzta és egyéb Brassicae, hagyma, paradicsom, burgonya, paprika), Lauraceae (avokádó, sárgarépa, fahéj, kámfor), lombhullató fák és tűlevelűek (például hársfa, tiszafa, tölgyfa, égerfa, nyárfa, nyírfa, fenyő, vörösfenyő, feketefenyő) vagy növények, úgymint kukorica, dohány, dió, kávé, cukornád, tea, szőlő, komló, banán és természetesgumi-növények ugyanúgy, mint dísznövények (beleértve összetételeket).
Rekombináns Bacillus spp. törzset - úgymint Bacillus cereust vagy Bacillus thuringiensist, amelyek az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló legalább egy DNS-molekulát tartalmaznak - általában rovarölő készítmények formájában alkalmazzuk, és kihelyezhető a termőterületre vagy a kezelendő növényre egyidejűleg vagy egymás után további biológiailag aktív vegyületekkel együtt. Ezek a vegyületek lehetnek trágyát vagy mikrotápanyagot adók, vagy egyéb olyan készítmények, amelyek befolyásolják a növények növekedését. Ezek lehetnek szelektív gyomirtók, rovarölők, gombaölők, baktériumölők, fonalférgeket és puhatestűeket irtok vagy e készítmények némelyikének keverékei is, ha szükséges együtt további hordozókkal, felületaktív anyagokkal vagy kihelyezést segítő adjuvánsokkal, amelyeket a formulázásban szokásos módon alkalmaznak.
A találmány szerinti aktív alkotórész felhasználható módosítatlan formában vagy együtt bármilyen alkalmas mezőgazdaságilag összeegyeztethető hordozóval. Ilyen hordozók a mezőgazdasági formulázásban szokásosan alkalmazott adjuvánsok, és ezért ismert módon emulgeálható koncentrátumokba, kenhető pasztákba, közvetlenül permetezhető vagy hígítható oldatokba, hígított emulziókba, nedvesíthető porokba, oldható porokba, porokba, granulátumokba és kapszulákba is, például polimer vegyületekbe kiszereltek. A készítmények természetéhez hasonlóan a kihelyezés módszereit
HU 222 264 Bl
- úgymint permetezést, porlasztást, porszórást, eloszlatást vagy öntést - a megcélzott tárgynak és az uralkodó körülményeknek megfelelően választjuk ki. A kihelyezés előnyös arányai általában körülbelül 50 g-5 kg aktív alkotórész (a. i.=active ingredient) hektáronként (ha, körülbelül 2,471 acre), előnyösen körülbelül 100 g-2 kg a. i./ha. A kihelyezés fontos arányai körülbelül 200 g-1 kg a. i./ha és 200 g-500 g a. i./ha.
Magbevonásra előnyös alkalmazási arányok 0,5 g-1000 g a. i./lOO kg mag, előnyösen 3 g-100 g a. Ϊ./100 kg mag vagy 10 g-50 g a. i./ΙΟΟ kg mag.
Megfelelő hordozók és adjuvánsok lehetnek szilárdak vagy folyékonyak, és a formulázási technológiában általában alkalmazott anyagoknak - például természetes vagy regenerált ásványi anyagoknak, oldatoknak, diszpergálószereknek, nedvesítőszereknek, ragacsosítóknak, kötőanyagoknak vagy trágyáknak - megfelelőek. A készítményeket, azaz a rovarölő készítményeket, preparátumokat vagy a rekombináns Bacillus spp. törzset - úgymint Bacillus cereust vagy Bacillus thuringiensist, amelyek az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló legalább egy DNS-molekulát tartalmaznak aktív alkotórészként - tartalmazó keverékeket vagy ezeknek más aktív komponensekkel való kombinációit, és ahol helyénvaló, szilárd vagy folyékony adjuvánsokat ismert módon készítjük, például az aktív alkotórészeknek kiterjesztőkkel - például oldószerekkel, szilárd hordozókkal és néhány esetben felületaktív vegyületekkel - történő homogénre keverésével és/vagy őrlésével.
Megfelelő oldószerek: aromás szénhidrogének, előnyösen a 8-12 szénatomot tartalmazó frakciók, például xilolkeverékek vagy szubsztituált naftalinok, ftalátok, úgymint dibutil-ftalát vagy dioktil-ftalát, alifás szénhidrogének, úgymint ciklohexán vagy paraffinok, alkoholok és glikolok és ezek éterei és észterei, úgymint etanol, etilénglikol-monometil- vagy monoetil-éter, ketonok, úgymint ciklohexanon, erősen poláros oldószerek, úgymint N-metil-2-pirrolidon, dimetil-szulfoxid vagy dimetil-formamid ugyanúgy, mint növényi olajok vagy epoxidált növényi olajok, úgymint epoxidált kókuszdióolaj vagy szójababolaj; vagy víz.
A felhasznált szilárd hordozók, például porokhoz és diszpergálható porokhoz általában természetes ásványi töltőanyagok, úgymint kalcit, talkum, kaolin, montmorillonit vagy attapulgit. A fizikai sajátságok megjavítása érdekében lehetséges nagymértékben diszpergált metakovasav vagy abszorbens polimerek adása is. Alkalmas granulált adszorptív hordozók porózus típusúak, például habkő, tört tégla, szepiolit vagy bentonit; és alkalmas nem-szorbens hordozók, olyan anyagok, mint kalcit vagy homok. Továbbá nagy számban használhatók szervetlen vagy szerves természetű, előre granulált anyagok, például különösen dolomit vagy porított növényi maradványok.
A kiszerelendő aktív alkotórészek természetétől függően az alkalmas felületaktív komponensek nemionos, kationos és/vagy anionos felületaktív anyagok, amelyek jó emulgeáló, diszpergáló és nedvesítő sajátságokkal rendelkeznek. A „felületaktív anyag” kifejezés alatt felületaktív anyagok keverékeit is értjük. Alkalmas anionos felületaktív anyagok egyaránt lehetnek vízoldható szappanok és vízoldható szintetikus felületaktív vegyületek. Alkalmas szappanok a hosszabb szénláncú (C10-C22) zsírsavak alkálifémsói, alkáliföldfémsói vagy nem-szubsztituált vagy szubsztituált ammóniumsói, például az olajsav vagy sztearinsav nátrium- vagy káliumsója, vagy természetes zsírsavkeverékek, amelyeket például kókuszdióolajból vagy faggyúolajból nyerhetünk. További alkalmas felületaktív anyagok a zsírsav metil-taurin-sók ugyanúgy, mint módosított vagy módosítatlan foszfolipidek.
Még gyakrabban használnak azonban úgynevezett szintetikus felületaktív anyagokat, különösen zsír-szulfonátokat, zsír-szulfátokat, szulfonált benzimidazolszármazékokat vagy alkil-aril-szulfonátokat. A zsír-szulfonátok vagy -szulfátok általában alkálifémsók, alkáliföldfémsók, vagy nem szubsztituált vagy szubsztituált ammóniumsók formájában vannak, és általában C8-C22 alkilgyököt tartalmaznak, amelybe az acilgyökök alkilrészét is beleértjük, például a lignoszulfonsav, dodecilszulfát vagy természetes zsírsavakból kapott zsíralkohol-szulfátok keverékeinek nátrium- és kalciumsóját. Ezek a vegyületek magukban foglalják a zsíralkohol/etilén-oxid adduktok kénsav-észtereinek és szulfonsavainak sóit. A szulfonált benzimidazolszármazékok előnyösen 2 szulfonsavcsoportot és egy körülbelül 8-22 szénatomot tartalmazó zsírsavgyököt tartalmaznak. Példák alkil-aril-szulfonátokra a dodecil-benzolszulfonsav, dibutil-naftalinszulfonsav vagy naftalinszulfonsav/formaldehid kondenzációs termék nátrium-, kalcium- vagy trietanol-amin-sói. Szintén alkalmasak megfelelő foszfátok, például p-nonil-fenol 4-14 mól etilén-oxiddal való adduktja foszforsavészterének sói.
Nemionos felületaktív anyagok előnyösen alifás vagy cikloalifás alkoholok, vagy telített vagy telítetlen zsírsavak és alkil-fenolok poliglikol-éter-származékai, nevezett származékok az alkil-fenolok alifás szénhidrogénrészében 3-30 glikol-éter-csoportot és 8-20 szénatomot, és az alkilrészben 6-18 szénatomot tartalmaznak.
További alkalmas nemionos felületaktív anyagok a polietilén-oxidnak polipropilénglikollal, etilén-diaminpolipropilénglikollal és az alkilláncban 1-10 szénatomot tartalmazó, alkil-polipropilénglikollal alkotott vízoldható adduktjai, amely adduktok 20-250 etilénglikoléter-csoportot és 10-100 propilénglikol-éter-csoportot tartalmaznak. Ezek a vegyületek általában 1-5 etilénglikolegységet tartalmaznak propilénglikolegységenként. Nemionos felületaktív anyagokra szemléltető példák, nonil-fenol-polietoxi-etanolok, ricinusolaj-poliglikol-éterek, polipropilén-/polietilén-oxid adduktok, tributil-fenoxi-polietoxi-etanol, polietilénglikol és oktil-fenoxi-polietoxi-etanol. Polioxi-etilén-szorbitán zsírsavészterei - úgymint polioxi-etilén-szorbitán-trioleát - szintén alkalmas nemionos felületaktív anyagok.
Kationos felületaktív anyagok előnyösen kvatemer ammóniumsók, amelyek N-szubsztituensként legalább egy C8-C22-alkilgyököt, és további szubsztituensek17
HU 222 264 Bl ként kisebb szénatomszámú nem szubsztituált vagy halogénezett alkil-, benzil-, vagy hidroxilezett kisebb szénatomszámú alkilgyököket tartalmaznak. A sók előnyösen halogenidek, metil-szulfátok vagy etil-szulfátok, például sztearil-metil-ammónium-klorid vagy benzidil-(2-klór-etil)-etil-ammónium-bromid formájában vannak.
A formulázásban szokásos módon alkalmazott felületaktív anyagokat írnak le például N. J. Ridgewood, „McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers Annual”, MC Publishing Corp. (1979) és Dr. Helmut Stache, „Tensid Taschenbuch” (Handbook of Surfactants), Cári Hanser Verlag, Munich/Vienna.
A találmány szerinti rovarölő készítménynek egy másik különösen előnyös tulajdonsága az aktív alkotórész tartóssága, amikor növényekre és talajra helyezzük. Az aktivitás elvesztésének lehetséges okai közé tartozik az ultraibolya fény, hő, levélizzadmányok és pH hatására történő inaktiválódás. Például magas pHértéken, különösen reduktív anyagok jelenlétében a δendotoxin-kristályok oldhatóvá válnak és ily módon proteolitikus inaktiválásra hozzáférhetőbbé válnak. Magas levél-pH szintén fontos lehet, különösen ahol a levél felszínének pH-ja 8-10 között mozog. A találmány szerinti rovarölő készítmény kiszerelésével kézben tarthatók ezek a problémák, vagy olyan adalékokat tartalmazva, amelyek megelőzik az aktív alkotórész elveszítését, vagy az anyag kapszulába zárásával oly módon, hogy az aktív alkotórészt megvédjük az inaktiválódástól. Kapszulába zárás megvalósítható kémiailag [McGuire and Shasha, J. Econ. Entomol. 85, 1425-1433 (1992)] vagy biológiailag [Bames and Cummings (1986) és az EP-A 0192319 számú szabadalmi irat]. Kémiai kapszulába zárás olyan eljárást foglal magában, amelyben az aktív alkotórészt polimerrel vonjuk be, míg a biológiai kapszulába zárás a δ-endotoxin-génnek mikrobában történő kifejezését jelenti. Biológiai kapszulába záráshoz az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló, legalább egy DNS-molekulát tartalmazó intakt mikrobát használjuk fel aktív alkotórészként a kiszerelésnél. UV védőanyagok hozzáadása hatékonyan csökkentheti a sugárzásból adódó károsodást. A hő következtében történő inaktiválódás szintén kiküszöbölhető megfelelő adalékkal.
A találmány oltalmi körén belül előnyben részesítünk olyan készítményeket, amelyek aktív alkotórészként élő mikroorganizmusokat tartalmaznak vagy vegetatív sejt formájában, vagy még előnyösebben - ha rendelkezésre áll - spórás formában. Alkalmas készítmények például ezeket a mikroorganizmusokat többértékű kationokkal keresztkötött polimer gélekben tartalmazzák. Ezt például D. R. Fravel és munkatársai írják le [Phytopathology 75 (7), 774-777 (1985)] alginátra, mint polimer anyagra. Ebből a publikációból megtudható az is, hogy hordozóanyagokat együttesen is használhatunk. Ezek a készítmények rendszerint természetben előforduló vagy szintetikus gélképző polimereknek - például alginátoknak - és többértékű fémionok vízoldható sóoldatainak egyedi cseppecske formájában történő összekeverésével készülnek, amelyek lehetővé teszik a mikroorganizmus szuszpendálását a kettő közül egy, vagy mindkét reakcióoldatban. A gélképződés a csepp formájában való összekeveréssel kezdődik. Lehetséges e gélrészecskéknek ezt követő szárítása. Ezt a folyamatot ionotróp gélesedésnek nevezzük. A szárítás fokától függően, a többértékű kationok által szerkezetileg keresztkötött, és a mikroorganizmusokat és a túlsúlyban jelen levő hordozót egyenletesen eloszlatva tartalmazó polimerek tömör és kemény részecskéi képződnek. A részecskék mérete 5 mm-ig terjedhet.
Részlegesen keresztkötött poliszacharidokon alapuló készítményeket - amelyek a mikroorganizmuson felül például finoman eloszlatott metakovasavat is tartalmazhatnak hordozóanyagként, és a keresztkötés például kalciumionokon keresztül történik - írnak le az EP-A 0097571 számú szabadalmi iratban. A készítmények nem rendelkeznek 0,3-nál nagyobb vízaktivitással. W. J. Comick és munkatársai áttekintő cikkben [New Directions in Biological Control: Altematives fór Suppressing Agricultural Pests and Diseases p. 345-372, Alán R. Liss, Inc. (1990)] írnak le különböző formulázási rendszereket, granulákat féreggel mint hordozóval, és a már említett ionotróp gélesedési eljárással készült kompakt alginátgyöngyöket. Ilyen készítményeket tesz közzé Fravel is [D. R. Fravel, in: Pesticide Formulations and Application Systems: llth Vol., ASTM STP 1112 American Society fór Testing and Materials, Philadelphia, p. 173-179 (1992)], és ezek felhasználhatók a találmány szerinti rekombináns mikroorganizmusok formulázására.
A találmány szerinti rovarölő készítmények általában körülbelül 0,1-99%-ban, előnyösen körülbelül 0,1-95%-ban és legelőnyösebben körülbelül 3-90%ban az aktív alkotórészt, körülbelül 1-99,9%-ban, előnyösen körülbelül 1-99%-ban és legelőnyösebben körülbelül 5-95%-ban szilárd vagy folyékony adjuvánst, és körülbelül 0-25 %-ban, előnyösen körülbelül 0,1-25%-ban és legelőnyösebben körülbelül 0,1-20%ban felületaktív anyagot tartalmaznak.
A találmánynak egy előnyben részesített kiviteli alakjában a rovarölő készítmények általában 0,1-99%-ban, előnyösen 0,1-95%-ban tartalmaznak rekombináns Bacillus spp. törzset, úgymint Bacillus cereust vagy Bacillus thuringiensist - amelyek az új rovarspecifikus fehérjéket kódoló nukleotidszekvenciát rekombináns formában magában foglaló legalább egy DNS-molekulát tartalmaznak - vagy ezeknek más aktív alkotórésszel való kombinációját, 1-99,9% szilárd vagy folyékony adjuvánst, és 0-25%, előnyösen 0,1-20% felületaktív anyagot.
Míg a kereskedelmi termékeket előnyösen koncentrátumok formájában szerelik ki, a végső felhasználó rendszerint lényegesen alacsonyabb koncentrációjú, hígított készítményt alkalmaz. A rovarölő készítmények tartalmazhatnak további alkotórészeket is, úgymint stabilizátorokat, habzásgátlókat, viszkozitást szabályozókat, kötőanyagokat, ragasztókat ugyanúgy, mint trágyákat vagy egyéb aktív alkotórészeket speciális hatás elérése érdekében.
HU 222 264 Bl
A találmányt általánosan leírtuk, ugyanez jobban érthetővé válik a következő részletes példákra történő hivatkozással, amelyek a szemléltetés célját szolgálják és nem tekintendők a találmány korlátozásaként, ha más kikötés nincs.
Standard nevezéktant fejlesztettünk ki a találmány oltalmi körébe tartozó fehérjék szekvenciájának azonossága alapján. A következő részletes példák gén- és fehérjeneveit, és ezeknek az eredeti bejelentésben (314594/08 sorozatszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés) használt nevekkel való kapcsolatát az alábbiakban mutatjuk be.
Gén/fehérje név a standard nevezékben Gén/fehérje név az eredetiben A fehérje leírása
VIP3A(a) VIP az AB88 töizsből a jelen találmány 1. számú szekvenciája
VIP3A(b) VIP az AB424 törzsből a jelen találmány 4. számú szekvenciája
Példák
Kiszerelési példák
A következő kiszerelési példákban használt aktív alkotórészek az NRRL B-21058 letéti számú (katalógusszámú) Bacillus cereus AB78 törzs; az NRRL B21060, NRRL B-21224, NRRL B-21225, NRRL B21226, NRRL B-21227 és NRRL B-21439 letéti számú Bacillus thuringiensis-törzsék; és az NRRL B-21228, NRRL B-21229 és NRRL B-21230 letéti számú Bacillus spp. törzsek. Az említett törzsek mindegyike olyan természetes izolátum, amely tartalmazza a találmány szerinti rovarspecifikus fehérjéket.
Másképpen, az izolált rovarspecifikus fehérjéket aktív alkotórészként egymagukban, vagy a fent említett Bacillus-törzsekkei kombinációban használjuk.
Al. Nedvesíthető porok
a) b) c)
Bacillus thuringiensis-spÓTák 25% 50% 75%
lignoszulfonsav nátriumsója 5% 5% -
nátrium-lauril-szulfát 3% - 5%
diizobutil-naftalinszulfonsav
nátriumsó - 6% 10%
oktil-fenol-polietilénglikol-éter - 2% -
(7-8 mól etilén-oxid)
erőteljesen diszpergált
metakovasav 5% 10% 10%
kaolin 62% 27% —
A spórákat az adjuvánsokkal alaposan összekeverve és a keveréket alkalmas malomban megőrölve olyan nedvesíthető porokat készítünk, amelyek vízzel hígíthatok a kívánt koncentrációjú szuszpenziókat adva.
A2. Emulgeálhatö koncentrátumok
Bacillus thuringiensis-spÓTák 10% oktil-fenol-polietilénglikol-éter 3% (4-5 mól etilén-oxid) dodecil-benzolszulfonsav kalciumsója 3% ricinusolaj-poliglikol-éter 4% (36 mól etilén-oxid) ciklohexanon 30% xilolkeverék 50%
Bármilyen kívánt koncentrációjú emulziók kaphatók ebből a koncentrátumból vízzel történő hígítással. A3. Porok
a) b)
Bacillus thuringiensis-spóxák 5% 8% talkum 95% kaolin - 92%
Felhasználásra kész porokat az aktív alkotórésznek a hordozókkal történő összekeverésével, és a keveréknek alkalmas malomban történő megőrlésével kapunk.
A4. Extrudált granulátum
Bacillus thuringiensis-spÓTák 10% lignoszulfonsav nátriumsója 2% karboxi-metil-cellulóz 1% kaolin 87%
Az aktív alkotórészt vagy kombinációt összekeverjük és megőröljük az adjuvánsokkal, és a keveréket ezután vízzel megnedvesítjük. A keveréket extrudáljuk, granuláljuk és levegőáramban szárítjuk.
A5. Bevont granulátum
Bacillus thuringiensis-spÓTák 3% polietilénglikol (móltömeg 200) 3% kaolin 94%
Az aktív alkotórészt vagy kombinációt egyenletesen helyezzük a keverőbe a polietilénglikollal megnedvesített kaolinhoz. Ily módon nem porzó, bevont granulátumokat kapunk.
A6. Szuszpenziókoncentrátum Bacillus thuringiensis-spóiák 40% etilénglikol 10% nonil-fenol-polietilénglikol-éter 6% (15 mól etilén-oxid) lignoszulfonsav nátriumsója 10% karboxi-metil-cellulóz 1%
37%-os vizes formalinoldat 0,2% szilikonolaj 75%-os vizes oldat formájában 0,8% víz 32%
Az aktív alkotórészt vagy kombinációt jól összekeverjük az adjuvánssal olyan szuszpenziókoncentrátumot nyerve, amelyből vízzel történő hígítással bármilyen kívánt koncentrációjú szuszpenziókat kaphatunk.
1.példa: Baktériumtenyésztés
Be AB78 törzs szubkultúráját használtuk a következő, TB-levesként ismert tápoldat beoltására:
tripton 12 g/i
élesztőkivonat 24 g/i
glicerin 4 ml/1
KH2PO4 2,1 g/i
k2hpo4 14,7 g/i
PH 7,4
HU 222 264 Bl
A kálium-foszfátot az autoklávozott tápleveshez adtuk lehűtés után. A lombikokat 30 °C-on inkubáltuk 250 rpm fordulatszámú körkörös rázógépen 24-36 órán keresztül, amely a logaritmikus fázis korai-középső szakaszát jelenti.
A fenti eljárás könnyen méretnövelhető nagy fermentorokra a szakmában ismert eljárásokkal.
A vegetatív növekedés során - általában 24-36 órával a tenyésztés indítása után, amely a logaritmikus fázis korai-középső szakaszát jelenti - az AB78-baktériumokat centrifugáltuk a tenyészet felülúszójától. Az aktív fehérjét tartalmazó tenyészet-felülúszót használtuk bioassay-meghatározásokhoz.
2. példa: Rovar-bioassay
B. cereus AB78 törzset teszteltünk különböző rovarokkal szemben, ahogyan azt lent leírjuk. Nyugati, északi és déli kukorica-gyökérhemyóval, Diabrotica virgifera virgiferával, D. longcomis barberivel és D. undecempunctata howardival szemben, egyenként: AB78 24-36 órás tenyészetének felülúszójából hígításokat készítettünk, összekevertük megolvasztott, mesterséges táplálékkal [Marrone et al., J. Economic Entomology 78, 290-293 (1985)] és hagytuk megszilárdulni. A megszilárdult táplálékot felaprítottuk és edényekbe helyeztük. Újszülött lárvákat helyeztünk a táplálékra és 30 °C-on tartottuk. Az elhullást 6 nap után jegyeztük fel.
E. coli-klón-bioassay: E. co/z'-sejteket szaporítottunk egy éjszakán át 100 pg/ml ampicillint tartalmazó táplevesben 37 °C-on. A tenyészet 10 ml-ét szonifikáltuk 3-szor, egyenként 20 másodpercig. A szonifikált tenyészet 500 μΐ-ét adtuk nyugati gabona-gyökérhernyó megolvasztott táplálékához.
Colorado burgonyabogár, Leptinotarsa decemlineata: AB78 24-36 órás tenyészetének felülúszójából hígításokat készítettünk Triton Χ-100-ban (0,1% TX100 végső koncentráció eléréséig). 5 cm2-es burgonyalevél-darabkákat merítettünk ezekbe az oldatokba, levegőn szárítottuk, és műanyag edényekbe, megnedvesített szűrőpapírra helyeztük. Újszülött lárvákat helyeztünk a levéldarabokra és 30 °C-on tartottuk. Az elhullást 3-5 nap után jegyeztük fel.
Sárga házi lisztbogár, Tenebrio molitor: AB78 24-36 órás tenyészetének felülúszójából hígításokat készítettünk, összekevertük megolvasztott, mesterséges táplálékkal (Bioserv #F9240) és hagytuk megszilárdulni. A megszilárdult táplálékot felaprítottuk és műanyag edényekbe helyeztük. Újszülött lárvákat helyeztünk a táplálékra és 30 °C-on tartottuk. Az elhullást 6-8 nap után jegyeztük fel.
Európai kukoricamoly, fekete bagolypille hernyója, dohányrügyhemyó, dohányszaruhemyó és répasereghernyó; Ostrinia nubilalis, Agrotis ipsilon, Heliothis virescens, Manduca sexta és Spodoptera exigua: AB78 24-36 órás tenyészetének felülúszójából hígításokat készítettünk Triton Χ-100-ban (0,1% TX-100 végső koncentráció eléréséig). 100 μΐ-t pipettáztunk 18 cm2-es megszilárdított mesterséges táplálék (Bioserv #F9240) felületére, és hagytuk levegőn megszáradni. Újszülött lárvákat helyeztünk a táplálék felületére és 30 °C-on tartottuk. Az elhullást 3-6 nap után jegyeztük fel.
Északi háziszúnyog, Culex pipiens: AB78 24-36 órás tenyészetének felülúszójából hígításokat készítettünk. 100 μΐ-t pipettáztunk 30 ml-es műanyag csészében levő 10 ml vízbe. Harmadik lárvaállapotban levő lárvákat adtunk a vízhez és szobahőmérsékleten tartottuk. Az elhullást 24-48 óra elteltével jegyeztük fel. Az AB78 rovarölő aktivitás spektrumát a 14. táblázatban adjuk meg.
14. táblázat
AB78 tenyészet felülúszójának aktivitása különböző rovarfajok ellen
Az eddig tesztelt rovarfajok Rend Aktivitás
Nyugati kukorica-gyökérhemyó (Diabrotica virgifera virgifera) Col. + + +
Északi kukorica-gyökérhemyó (Diabrotica longicornis barberi) Col. + + +
Déli kukorica-gyökérhemyó (Diabrotica undecimpunctata howardi) Col.
Colorado burgonyabogár (Leptinotarsa decemlineata) Col. -
Sárga házi lisztbogár (Tenebrio molitor) Col. -
Európai kukoricamoly (Ostrinia nubilalis) Lep. -
Dohányrügyhemyó (Heliothis virescens) Lep. -
Dohányszaruhemyó (Manduca sexta) Lep. -
Répasereghemyó (Spodoptera exigua) Lep. -
Fekete bagolypille hernyója (Agrotis ipsilon) Lep. -
Északi háziszúnyog (Culex pipiens) Dip. -
Az újonnan felfedezett B. cereus AB78 törzs szignifikánsan különböző spektrumú rovarölő aktivitást mutatott ismert, a Coleoptera-renáre nézve aktív Bt δ-endotoxinokkal összehasonlítva. Az AB78 különösen bogarak ellen mutatott szelektívebb aktivitást, mint az ismert, Coleoptera-renáre nézve aktív FZ-törzsek, ebben speciálisan aktív volt űza/woZz'ca-fajokkal szemben. Még specifikusabban, a legaktívabb volt D. virgifera virgiferával és D. longicornis barberivel szemben, a D. undecimpunctata howardival szemben azonban nem.
Számos Bacillus-törzset teszteltünk bioassay-vel a vegetatív növekedés során, nyugati kukorica gyökérhernyó elleni aktivitásra (15. táblázat). Az eredmények azt mutatják, hogy az AB78 egyedülálló ebben az aktivitásban a nyugati kukorica-gyökérhemyóval szemben, ez nem általános jelenség.
HU 222 264 Β1
15. táblázat
Különböző fiacú/us-fajok tenyészetéből származó felülúszók aktivitása nyugati kukorica-gyökérhemyóval szemben
Bacillus-törzs Nyugati kukoricagyökérhemyó (WCRW) százalékos pusztulás
B. cereus AB78 (Bat.l) 100
B. cereus AB78 (Bat.2) 100
B. cereus (Carolina Bio.) 12
B. cereus ATCC 11 950 12
B. cereus ATCC 14 579 8
B. mycoides (Carolina Bio.) 30
B. popilliae 28
B. thuringiensis HD135 41
fi. thuringiensis HD191 9
fi. thuringiensis GC91 4
fi. thuringiensis isrealensis 24
Vizes kontroll 4
Az AB78-nak nyugati kukorica-gyökérhemyó elleni specifikus aktivitását a 16. táblázat szolgáltatja.
16. táblázat
ΝΒΠ8 tenyészet felülúszójának aktivitása újszülött nyugati kukorica-gyökérhemyó ellen
Tenyészet felülúszójának koncentrációja (μΐ/ml) Nyugati kukoricagyökérhemyó (WCRW) százalékos pusztulás
100 100
25 87
10 80
5 40
2,5 20
1 6
0 0
Az LC50-értéket 6,2 μΐ tenyészetfelülúszó-mennyiségnek számítottuk a nyugati kukorica-gyökérhemyó táplálékának ml-ére vonatkoztatva.
A sejtpelletet szintén bioassay-nek vetettük alá, és ez nem rendelkezett WCRW elleni aktivitással. Tehát az, hogy csak a felülúszóban van aktivitás, azt jelenti, hogy ez a VIP egy exotoxin.
3. példa: B. cereus AB78 törzs teljes DNS-ének kozmid klónozása
A VIP1 A(a) gént klónoztuk az AB78 törzsből készített teljes DNS-ből a következők szerint :
AzAB78 DNS izolálása a következő volt:
1. Baktériumok szaporítása 10 ml L-táplevesben egy éjszakán át (steril 50 ml-es centrifugacső felhasználásával).
2. 25 ml friss L-tápleves és ampicillin (30 pg/ml) hozzáadása.
3. Sejtek szaporítása 2-6 óráig 30 °C-on rázatással.
4. Sejtek pörgetése 50 ml-es polipropilén narancs fedelű csőben, IEC benchtop klinikai centrifugában 3/4 sebességnél.
5. Sejtpellet újraszuszpendálása 10 ml TES-ben (TES=50 mM Tris pH 8,0, 100 mM EDTA, 15 mM NaCl).
6.30 mg lizozim hozzáadása és 2 órán át 37 °C-on történő inkubálás.
7. 200 pl 20%-os SDS és 400 pl Proteinase K-törzs (20 mg/ml) hozzáadása, inkubálás 37 °C-on.
8. 200 pl friss Proteinase K hozzáadása. Inkubálás
I órán át 55 °C-on. 5 ml TES hozzáadása 15 ml végső térfogat elérésére.
9. Fenolos extrakció kétszer (10 ml fenol, pörgetés szobahőfokon 3/4 sebességnél IEC benchtop klinikai centrifugában). A felülúszó (felső fázis) átvitele tiszta csőbe széles lyukú pipettával.
10. Extrahálás egyszer 1:1 térf. fenol :kloroform/izoamil-alkohol (24:1) elegyével.
11. DNS kicsapása azonos mennyiségű hideg izopropanollal; centrifugálás a pellet DNS kiülepítésére.
12. A pellet újraszuszpendálása 5 ml TE-ben.
13. DNS kicsapása 0,5 ml 3 M Na-acetáttal pH 5,2 és
II ml 95%-os etanollal. 2 óráig 20 °C-on tartás.
14. DNS „kihorgászása” a csőből műanyag hurokkal, átvitele egy mikrofugacsőbe, pörgetés, a fölösleges etanol leszívása pipettával, szárítás vákuumban.
15. Újraszuszpendálás 0,5 ml TE-ben. Inkubálás 90 percig 65 °C-on a DNS visszaoldódásának elősegítésére.
16. Koncentráció meghatározása standard eljárásokkal. Az AB78 kozmid klónozása
Minden eljárást - ha másképpen nem jelezzük - a Stratagene Protocol, Supercos 1 Instruction Manual, Cat. No. 251301 szerint végeztünk.
A lépések általában a következők voltak:
A) Az AB78 DNS részleges emésztése Sau3A-val.
B) Vektor-DNS készítése.
C) DNS ligálása és csomagolása.
D) A kozmid könyvtár titrálása.
1. HB101 sejtek szaporításának elindítása egy éjszakás tenyészet 50 ml-ének 5 ml, 0,2% maltózt tartalmazó TB-be helyezésével. Inkubálás 3,5 órán át 37 °C-on.
2. A sejtek kipörgetése és újraszuszpendálása 0,5 ml 10 mM MgSO4-ban.
3. A következők összeöntése:
100 ml sejt
100 ml hígított csomagolókeverék
100 ml 10 mM MgSO4 ml TB
4. Adszorbeálás szobahőmérsékleten 30 percig rázatás nélkül.
5.200 ml kiöntése L-amp lemezekre. Inkubálás egy éjszakán át 37 °C-on.
Legalább 400 kozmid kiónt szelektáltunk véletlenszerűen, és screeneltük nyugati kukorica-gyökérhemyó elleni aktivitásra, ahogyan azt a 2. példában leírtuk. 5 aktív kiónból és 5 inaktív kiónból való DNS-eket
HU 222 264 Bl használtunk Southem-hibridizációkban. Az eredmények azt mutatták, hogy a fent leírt oligonukleotidpróbát alkalmazva, a hibridizáció kölcsönös megfelelést mutatott a nyugati kukorica-gyökérhemyó aktivitással (18. táblázat).
P3-12 és P5-4 kozmid kiónokat letétbe helyeztünk az Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL) gyűjteményben és az NRRL B-21061 és NRRL B-21059 letéti számot adtuk nekik, különkülön.
18. táblázat
AB78 kozmid kiónok aktivitása nyugati kukorica-gyökérhemyó ellen
Klón Százalékos pusztulás középértéke (N=4)
A próbával hibridizáló kiónok
Pl-73 47
Pl-83 64
P2-2 69
P3-12 85
P5-4 97
A próbával nem hibridizáló kiónok
Pl-2 5
P3-8 4
P3-9 12
P3-18 0
P4-6 9
4. példa: VIP-ek tisztítása AB88 törzsből
Baktérium folyékony tenyészetét szaporítottuk egy éjszakán át (12 óra) 30 °C-on TB-tápoldatban. A sejteket 5000 g-n centrifugáltuk 20 percig, és a felülúszót visszatartottuk. A felülúszóban jelen levő fehérjéket ammónium-szulfáttal kicsaptuk (70%-os telítés), centrifugáltuk (5000 g-n 15 percig) és a pelletet visszatartottuk. A pelletet újraszuszpendáltuk 20 mM Tris pH 7,5 eredeti térfogatában, és egy éjszakán át ugyanezzel a pufferrel szemben dializáltuk 4 °C-on. Az AB88 dializátum zavarosabb volt, mint az AB78-ból kapott összehasonlító anyag. A dializátumot pH 4,5-re titráltuk 20 mM nátrium-citrát (pH 2,5) felhasználásával, és 30 perces, szobahőmérsékleten történő inkubálás után az oldatot 3000 g-n 10 percig centrifugáltuk. A fehérjepelletet újra oldottuk 20 mM Bis-Tris-propánban pH 9,0.
AB88 fehérjéket szeparáltunk néhány eltérő módszerrel a tisztítást követően, beleértve izoelektromos fokuszálást (Rotofor, BioRad, Hercules, CA), pH 4,5-nél történő kicsapást, ioncserés kromatográfiát, méretkizárásos kromatográfiát és ultraszűrést.
A fehérjéket Poros HQ/N anioncserélő oszlopon (PerSeptive Biosystems, Cambridge, MA) választottuk el 20 mM Bis-Tris-propán- (pH 9,0) pufferben oldott, 0-500 mM NaCl lineáris gradiensét alkalmazva 4 ml/perc áramlási sebességnél. A rovarölő fehérje 250 mM NaCl-nál eluált.
Európai kukoricamoly (ECB=european com borer) ellen aktív fehérje maradt a dializátum 4,5 pH-nál történő kicsapásánál kapott fehérjepelletben. Amikor a dializátumon pH 3-10 amfolitok alkalmazásával preparatív IEF-et végeztünk, ECB rovarölő aktivitást találtunk minden 7, vagy ennél magasabb pH-jú frakcióban. Ezeknek a frakcióknak az SDS-PAGE analízise körülbelül 60 kD és 80 kD molekulatömegű fehérjesávokat mutatott. A 60 kD és 80 kD sávokat anioncserélő HPLC-vel választottuk el Poros Q oszlopon (PerSeptive Biosystems, Cambridge, MA). Két olyan frakció N-terminális szekvenciáját állapítottuk meg, amelyek némileg különböző - de mindkettő körülbelül 60 kD - molekulatömegű fehérjéket tartalmaznak. A kapott szekvenciák egymáshoz és néhány δ-endotoxinhoz hasonlóak.
Ha az ECB aktív 4,5 pH-jú pelletet tovább szeparáltuk anioncserével Poros Q oszlopon, csak azokban a frakciókban találtunk aktivitást, amelyek körülbelül 60 kD fő sávot tartalmaztak.
Fekete bagolypille hernyója ellen aktív fehérje szintén maradt a pelletben, amikor AB88 dializátum pH-ját 4,5-re csökkentettük. Preparatív IEF-ben 3-10 pH amfolitokat alkalmazva, nem találtunk aktivitást az ECB aktív IEF frakciókban; helyette a pH 4,5-5,0 frakcióban volt a legmagasabb. Ennek fő komponensei körülbelül 35 kD és 80 kD molekulatömeggel rendelkeznek.
A 4,5 pH-jú pelletet szeparáltuk anioncserélő HPLC-vel olyan frakciók kinyeréséhez, amelyek csak a 35 kD molekulatömegű anyagot tartalmazzák és olyan frakciók kinyeréséhez, amelyek egyaránt tartalmazzák a 35 kD és 80 kD sávokat.
5. példa: AB88 VIP jellemzése
A különböző Lepidopterák ellen aktív vegetatív fehérjéket tartalmazó frakciókat a 4. példában leírtak szerint hoztuk létre. A rovarölő aktivitással rendelkező frakciókat 8-16%-os SDS-poliakrilamid gélben szeparáltuk és PVDF-membránokra vittük át [LeGendre et al., in: A Practical Guide to Protein and Peptide Purification fór Microsequencing, ed Matsudaria PT (Academic Press Inc., New York (1989)]. A frakciók biológiai analízise azt mutatta, hogy a különböző Lepidoptera-í&jok elleni aktivitásért különböző VIP-ek voltak felelősek.
Az Agrotis ipsilon elleni aktivitás egy 80 kD és/vagy 35 kD fehérjének köszönhető egymagában vagy kombinációban. Ezek a fehérjék semmilyen Bt δendotoxinnal nem rokonok, ahogyan ez az ismert Bt δendotoxin-szekvenciákkal való szekvenciahomológia hiányából nyilvánvalóvá vált. Az AB88 törzsből származó VIP3A(a) rovarölő fehéije az, amely leginkább (legalább 75%-ban) jelen van AB88 tenyészetek felülúszójában.
Ezek a fehérjék sem találhatók meg az AB88 δ-endotoxin-kristályban. A fő δ-endotoxin-fehérjék N-terminális szekvenciáit összehasonlítottuk a 80 kD és 35 kD VIP N-terminális szekvenciájával és nem tapasztaltunk szekvenciahomológiát. A VIP3A(a) rovarölő fehérje N-terminális szekvenciája számos pozitív töltésű maradékkal rendelkezik (2. Asn-tól a 7. Asn-ig), amelyet hidrofób core-régió (8. Thr-tól 34. Ile-ig) követ.
HU 222 264 Β1
A legtöbb ismert szekréciós fehérjétől eltérően az AB88-ból származó VIP3A(a) rovarölő fehérje nem Nterminálisan alakul át a kivitel során.
Az Ostrinia nubilalis elleni aktivitás 60 kD VIPnek, és a Spodoptera frugiperda elleni aktivitás egy ismeretlen méretű VIP-nek köszönhető.
A Bacillus thuringiensis AB 8 8 törzset az Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL), 1815 North University Street, Peoria, IL 61604 gyűjteményben helyeztük letétbe és az NRRL B-21225 letéti számot kapta.
6. példa: B. thuringiensis AB424 izolálása és biológiai aktivitása
B. thuringiensis-törzsét, az AB424 jelűt izoláltuk mohával takart fenyótobozmintáról a szakmában ismert standard módszerekkel. AB424 szubkultúráját szaporítottuk és előkészítettük az 1. példában leírt bioassayhez. A biológiai aktivitást a 2. példában leírtak szerint értékeltük.
Az eredmények a következők:
A tesztelt rovarfajok Pusztulás %-ban
Ostrinia nubilalis 100
Agrotis ipsilon 100
Diabrotica virgifera virgifera 0
A B. thuringiensis AB424 törzset az Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL), 1815 North University Street, Peoria, IL 61604 gyűjteményben helyeztük letétbe és az NRRL B-21439 letéti számot kapta.
7. példa: A fekete bagolypille hernyója ellen aktív fehérjéket kódoló VIP3A(a) és VIP3A(b) gének klónozása
AB88 és AB424 izolátumokból teljes DNS-t izoláltunk [Ausubel et al., in: Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, NY) (1989)] és emésztettük egyenként Xbal (B. thuringiensis AB88 DNS 4,0-5,0 kb méretűre frakciónak Xbal fragmentumainak könyvtára) és EcoRI (B. thuringiensis AB424 DNS 4,5-6,0 kb méretűre frakciónak EcoRI fragmentumainak könyvtára) restrikciós enzimekkel, ligáltuk pBluescript vektorba, amelyet előzőleg linearizáltunk ugyanezekkel az enzimekkel és defoszforileztünk, és E. coli DH5a törzsbe transzformáltuk. Rekombináns kiónokat blottoltunk nitro-cellulóz-szűrőkre, amelyeket ezután 32P-vei jelzett 33 bázis hosszúságú - az Agrotis ipsilomaá (fekete bagolypille hernyójával) szemben aktív 80 kD fehérje 11 N-terminális aminosavjának megfelelő - oligonukleotiddal próbának vetettük alá. A hibridizációt 42 °C-on, 2 χ SSC/0,1% SDS-ben (lxSSC=0,15 M NaCl/0,015 M nátrium-citrát, pH 7,4) 5 percig, és kétszer 50 °C-on 1 χ SSC/0,1% SDS-ben 10 percig végeztük. 400 rekombináns klónból négy volt pozitív. A pozitív rekombinánsok rovarölő-bioassay vizsgálatai a fekete bagolypille hernyójának lárvája ellen az AB88 vagy AB424 felülúszókkal összehasonlítható toxicitást mutattak.
pCIB7104 plazmid az AB88 DNS 4,5 kb Xbal fragmentumát tartalmazza. Szubklónokat készítettünk a rovarölő fehérjét kódoló régió definiálására.
E. coli pCIB7105 plazmidot a pCIB7104 3,5 kb Xbal-AccI fragmentumának pBluescriptba történő klónozásával állítottuk elő.
pCIB7106 plazmid az AB424 DNS 5,0 kb EcoRI fragmentumát tartalmazta. Ezt a fragmentumot tovább emésztettük HincII-vel olyan 2,8 kb EcoRI-HincII inszertum (pCIB7107) létrehozására, amely még működőképes rovarölő fehérjét kódolt.
Az AB88-ból származó pozitív rekombináns klón, pCIB7104 és az AB424-ből származó pozitív rekombináns klón, pCIB7107 nukleotidszekvenciáját a Sangerféle didezoxiterminációs módszerrel [Sanger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5463-5467 (1977)] határoztuk meg PRISM Ready Reaction Dye Deoxy Terminator Cycle Sequencing Kit és PRISM Sequenase® Terminator Double-Stranded DNA Sequencing Kit alkalmazásával, és ABI373 automata szekvenálón analizáltuk.
A pCIB7104 klón tartalmazza a VIP3A(a) gént, amelynek kódolórégióját az 1. számú szekvenciavázlatban adjuk meg, és a kódolt fehéijeszekvenciát a 2. számú szekvenciavázlatban tesszük közzé. A kódolórégiónak kukoricában nagymértékű kifejeződésre tervezett szintetikus változatát a 3. számú szekvenciavázlatban adjuk meg. A 2. számú szekvenciavázlatban megadott aminosavszekvenciára alapozva bármilyen számú szintetikus gén tervezhető. A szintetikus és natív szekvenciák fúzióját a 6. számú szekvenciavázlat mutatja be.
A pCIB7107 klón tartalmazza a VIP3A(b) gént, amelynek kódolórégióját a 31. számú szekvenciavázlatban adjuk meg, és a kódolt fehérjét a 32. számú szekvenciavázlatban tesszük közzé. pCIB7104-et és pCIB7107-et egyaránt letétbe helyeztük az Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL) gyűjteményben, és az NRRL B-21422 és B-21423 letéti számot kapták külön-külön.
A VIP3A(a) gén olyan nyílt leolvasási keretet tartalmaz (ORF), amely a 732-3105. nukleotidig terjed. Ez az ORF kódol egy 791 aminosavból álló peptidet, amely 88,5 kD molekulatömegnek felel meg. ShineDalgamo (SD) szekvencia helyezkedik el 6 bázissal az első metionin előtt, és ennek szekvenciája azonosítja a Bacillus erős SD-jét.
A VIP3A(b) gén 98%-ban azonos a VIP3A(a) génnel.
Amikor B. thuringiensis AB88 sejtekből izolált teljes DNS blotolását végeztük 33 bázisból álló olyan fragmentummal, amely átfogja a VIP3A rovarölő fehérje N-terminális régióját, különböző restrikciós emésztéseknél egyedülálló sávokat figyelhettünk meg. Ezt az eredményt megerősítettük a gén kódolórégióját átfogó nagyobb próbák alkalmazásával. A GenBank adatbázisban való kutatás nem fedett fel ismert fehérjékkel való homológiát.
8. példa: A VIP3A rovarölő fehérjék kifejezése
A VIP3A(a) rovarölő fehérje kifejeződésének időbeli lefutását vizsgáltuk Westem-blottal. Bacillus thurin23
HU 222 264 Bl giensis AB88 tenyészetekből vettünk mintákat a növekedési görbe mentén és spórázás alatt. A VIP3A(a) rovarölő fehéije kimutatható az AB88 tenyészetek felülúszójában a logaritmikus fázis során, már a szaporítás indítása után 15 órával. Maximális szintjét a stacioner fázis kezdetén éri el, és a magas szint megmarad a spórázás alatt és után. Hasonló eredményeket kaptunk, amikor Bacillus cereus AB424 tenyészetek felülúszóit használtuk. A VIP3A(a) rovarölő fehéije mennyiségei a VIP3A(a) gén kifejeződését tükrözték, ahogyan azt Northem-blottal meghatároztuk. A spórázás kezdetét közvetlen mikroszkópos megfigyelésekkel és a sejtpelletekben δ-endotoxinok jelenlétének analízisével határoztuk meg. Cryl típusú fehérjéket tudtunk kimutatni a késői stacioner fázisban, a spórázás alatt és után.
9. példa: Új, VIP3-hoz hasonló gén azonosítása hibridizációval
Az AB88 izolátumból származó VIP3A(a)-val rokon géneket tartalmazó Bacillusók azonosítására Bacil/us-izolátumok gyűjteményét screeneltük hibridizációval. 463 Bacillus-törzs tenyészeteit szaporítottuk mikrotitermélyedésekben spórázásig. 96 tűs kolónianyomót használtunk a tenyészeteknek 150 mm-es, L-agart tartalmazó lemezekre történő átviteléhez. A beoltott lemezeket 10 órán keresztül 30 °C-on tartottuk, azután egy éjszakán át 4 °C-on. A telepeket nejlonszűrőkre blotoltuk és VIP3A(a)-ból származó 1,2 kb HindlII fragmentummal próbának vetettük alá. A hibridizációt éjszaka végeztük 62 °C-on, Maniatis és munkatársai által leírt [Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982)] hibridizációs körülményeket alkalmazva. A szűrőket azután 2xSSC/0,l% SDS-ben mostuk 62 °C-on és röntgenfilmnek tettük ki.
A 463 screenelt Bacillus-törzs közül 60 tartalmazott olyan VIP3-hoz hasonló géneket, amelyeket hibridizációval ki tudtunk mutatni. Néhányuk (AB6 és AB426) további jellemzése azt mutatta, hogy felülúszóik a fekete bagolypille hernyója ellen aktív VIP3-fehérjéhez hasonló, BCW rovarölő fehéijét tartalmaznak.
10. példa: VIP3-hoz hasonló, látens gént tartalmazó
B. thuringiensis M2194 törzs jellemzése
M2194 jelzésű B. thuringiensisAönsrőX a 8. példában leírtak szerinti kolóniahibridizációval kimutattuk, hogy VIP3-hoz hasonló gén(eke)t tartalmaz. Az M2194 jelű, VIP3-hoz hasonló gént rejtélyesnek tekintjük, mivel a bakteriális növekedési fázisok során nem tudtunk kifejeződést kimutatni sem immunblot-analízissel az AB88-ból izolált VIP3A(a) fehérje ellen termelődött poliklonális antitesteket felhasználva, sem a 2. példában leírt bioassay-vel.
A tisztított VIP3A(a) rovarölő fehéije ellen nyulakban termeltettünk antiszérumot. Nitro-cellulózhoz kötött fehéijét (50 pg-ot) oldottunk fel DMSO-ban és emulgeáltuk Freund-féle komplett adjuvánssal (Difco). Két nyúlnak adtunk bőr alá (szubkután) injekciókat havonta, három hónapon keresztül. A második és a harmadik injekció után 10 nappal vért vettünk, és a vérmintákból kinyertük a szérumot [Harlow et al., in: Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY) (1988)].
A VIP3-hoz hasonló M2194 gént pKS-be klónoztuk a 3. példában leírt eljárás szerint, amely pCIB7108at eredményezett. A VIP3-hoz hasonló M2194 gént magában foglaló pCIB7108-at tartalmazó E. coli aktív volt fekete bagolypille hernyójával szemben, szemléltetve azt, hogy a gén rovarölő aktivitással rendelkező funkcionális fehéijét kódol. A pCIB7108 plazmidot letétbe helyeztük az Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL) gyűjteményben és az NRRL B-21438 letéti számot kapta.
11. példa: VIP3 fehérjék rovarölő aktivitása
A VIP3 rovarölő fehéijék aktivitásspektrumát kvalitatíve rovar-bioassay-vizsgálatokban határoztuk meg, amelyekben VIP*A géneket hordozó rekombináns E. colit etettünk lárvákkal. Ezekben a meghatározásokban a VIP3A(a) és VIP3A(b) géneket hordozó sejtek rovarölő aktivitással bírtak Agrotis ipsilon, Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Heliothis virescens és Helicoverpa zea ellen. Ugyanazon kísérleti körülmények között VIP3A fehéijéket tartalmazó baktériumkivonatok nem mutattak aktivitást Ostrinia nubilaftsszal szemben.
VIP*A rovarölő fehéijék hatása Agrotis ipsilon-Xárvákia
kezelés %-os pusztulás
TB-tápoldat 5
AB88 felülúszó 100
AB424 felülúszó 100
Puffer 7
E. coli pKS 10
E. coli pCIB7104 (AB88) 100
E.coli pCIB7105 (AB88) 100
E.coli pCIB7106 (AB424) 100
E. coli pCIB7107 (AB424) 100
VIP3A rovarölő fehéijék hatása Lepidoptera rovarok lárváira
Kezelés Rovar %-os pusztulás
E. coli pKS BCW 10
FAW 5
BAW 10
TBW 8
CEW 10
ECB 5
E. coli pCIB7105
BCW 100
| E.colipCIB7107 FAW 100
BAW 100
HU 222 264 BI
Táblázat (folytatás)
Kezelés Rovar %-os pusztulás
TBW 100
CEW 50
ECB 10
BCW=fekete bagolypille hernyója (black cut worm); FAW=hulló sereghemyó (fali armyworm); BAW=répasereghemyó (beet armywoim); TBW=dohányrügyhemyó (tobacco búd worm);
CEW=kukorica-fülhemyó (com earworm); ECB=európai kukoricamoly (european com borer)
12. példa: Egyéb Bacillus-fajok izolálása és biológiai aktivitása
Egyéb olyan Őací7/us-fajokat izoláltunk, amelyek a vegetatív növekedés során rovarölő aktivitással rendelkező fehérjéket termelnek. Ezeket a törzseket környezeti mintákból izoláltuk standard módszerekkel. Az izolátumokat az 1. példában leírtak szerint készítettük elő a bioassay-hez, és a 2. példában leírtak szerint vizsgáltuk. Azokat az izolátumokat, amelyek a vegetatív növekedés során - a bioassay-ben Agrotis ipsilon ellen - rovarölő aktivitással rendelkező fehérjéket termeltek, táblázatosán foglaltuk össze az alábbiakban. Nem találtunk összefüggést δ-endotoxin-kristály jelenléte és vegetatív rovarölőfehéije-termelés között.
Bacillus- izolátum δ-endotoxinkristály jelenléte %-os pusztulás
AB6 + 100
AB53 - 80
AB88 + 100
AB195 - 60
AB211 - 70
AB217 - 83
AB272 - 80
AB279 - 70
AB289 + 100
Bacillus- izolátum δ-endotoxinkristály jelenléte %-os pusztulás
AB292 + 80
AB294 - 100
AB300 - 80
AB359 - 100
Az AB289, AB294 és AB359 izolátumokat az Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL), Northern Régiónál Research Center, 1815 North University Street, Peoria, IL 61604 törzsgyűjteményben helyeztük letétbe, és az NRRL B15 21227, NRRL B-21229 és NRRL B-21226 letéti számot kapták külön-külön.
Azokat a Sa«7/us-izolátumokat, amelyek a vegetatív növekedés során Diabrotica virgifera virgifera ellen rovarölő aktivitással rendelkező fehérjéket termelnek, táblázatosán foglaltuk össze az alábbiakban.
I Bacillus- izolátum δ-endotoxinkristály jelenléte %-os pusztulás
AB52 - 50
AB59 - 71
AB68 + 60
AB78 - 100
AB122 - 57
1 AB218 - 64
1 AB256 - 64
Az AB59 és AB256 izolátumokat az Agricultural 35 Research Service, Patent Culture Collection (NRRL), Northern Régiónál Research Center, 1815 North University Street, Peoria, IL 61604 törzsgyűjteményben helyeztük letétbe, és az NRRL B-21228 és NRRL B21230 letéti számot kapták külön-külön.
A következő törzseket helyeztük letétbe az
Agricultural Research Service, Patent Culture Collection (NRRL), Northern Régiónál Research Center, 1815 North University Street, Peoria, Illinois, 61604, USA törzsgyűjteményben:
Törzs jelölése Leteti szám Letét dátuma
l.£. coli PL2 NRRL B-21221 1994. 03. 09.
2. E. coli PL2 NRRL B-21221N 1994. 09. 02.
3. £. co/ι pCIB6022 NRRL B-21222 1994. 03. 09.
4. E. coli pCIB6023 NRRL B-21223 1994. 03. 09.
5.E. co/t pCIB6023 NRRL B-21223N 1994. 09. 02.
6. Bacillus thuringiensis HD73-78VIP NRRL B-21224 1994. 03. 09.
7. Bacillus thuringiensis AB88 NRRL B-21225 1994.03.09.
8. Bacillus thuringiensis AB359 NRRL B-21226 1994. 03. 09.
| 9. Bacillus thuringiensis AB289 NRRL B-21227 1994. 03. 09.
| 10. Bacillus spp. AB59 NRRL B-21228 1994.03. 09.
HU 222 264 Bl
Táblázat (folytatás)
Törzs jelölése Letéti szám Letét dátuma
11. Bacillus spp. AB294 NRRLB-21229 1994. 03. 09.
12. Bacillus spp. AB256 NRRLB-21230 1994. 03. 09.
13. E. coli P5-4 NRRLB-21059 1993. 03.18.
14. £ CO//P3-12 NRRLB-21061 1993. 03.18.
15. Bacillus cereus AB78 NRRL B-21058 1993. 03.18.
16. Bacillus thuringiensis AB6 NRRLB-21060 1993. 03.18.
17. E. co/í pCIB6202 NRRLB-21321 1994.09. 02.
18. E. colipCJR'nto NRRL B-21322 1994.09. 02.
19. E. coli pCIB7101 NRRL B-21323 1994. 09. 02.
20. E. coli pCIB7102 NRRL B-21324 1994. 09. 02.
21. £ coli pCIB71O3 NRRL B-21325 1994. 09. 02.
1 22. E. cofí pCIB7104 NRRL B-21422 1995. 03. 24.
23. £ co/í pCIB7107 NRRL B-21423 1995. 03. 24.
24. £ co/í pCIB7108 NRRL B-21438 1995. 05. 05.
25. Bacillus thuringiensis AB424 NRRL B-21439 1995. 05. 05.
Jóllehet a találmányt a világos megértés céljából 25 körén belül bizonyos változtatások és módosítások elvé szemléltetés és példák útján néhány részletében leírtuk, gezhetők. nyilvánvaló, hogy a hozzácsatolt igénypontok oltalmi
Szekvenciavázlatok (i) Általános tájékoztatás:
(A) Név: Novartis AG (B) Utca: Klybeckstrasse 141 (C) Város: Bázel (E) Állam: Svájc (F) Postai kód (ZIP): 4002 (G) Telefon: +41 61 696 11 11 (H) Telefax: +41 61 696 79 76 (ii) A találmány címe: Új peszticid fehérjék és törzsek (iii) A szekvenciák száma: 7 (iv) Komputeres leolvasási forma:
(A) Közepes típus (floppy disk) (B) Komputer: IBM-kompatibilis (C) Operatív rendszer: PC-DOS/MS-DOS (D) Szoftver: a szabadalmas #1,0 számú szabad terméke, # l,30B verzió.
Az 1. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 6049 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus cereus (B) Törzs: AB78 (C) Egyedi izolátum: NRRL B-21058 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 1082...2467 (D) Egyéb információ: /termék=„VIP2A(a)”
HU 222 264 Β1 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 2475...5126 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„a 100 kD VIPlA(a) fehérje kódolószekvenciája. Ez a kódolószekvencia megismétlődik a 4. számú szekvenciában, és külön transzlálódik.” (xi) Az 1. számú szekvencia leírása:
ATCGATACAA TGTTGTTTTA CTTAGACCGG TAGTCTCTGT AATTTGTTTA ATGCTATATT 60
CTTTACTTTG ATACATTTTA ATAGCCATTT CAACCTTATC AGTATGTTTT TGTGGTCTTC 120
CTCCTTTTTT TCCACGAGCT CTAGCTGCGT TTAATCCTGT TTTGGTACGT TCGCTAATAA 180
TATCTCTTTC TAATTCTGCA ATACTTGCCA TCATTCGAAA GAAGAATTTC CCCATAGCAT 240
TAGAGGTATC AATGTTGTCA TGAATAGAAA TAAAATCTAC ACCTAGCTCT TTGAATTTTT 300
CACTTAACTC AATTAGGTGT TTTGTAGAGC GAGAAATTCG ATCAAGTTTG TAAACAACTA 360
TCTTATCGCC TTTACGTAAT ACTTTTAGCA ACTCTTCGAG TTGAGGGCGC TCTTTTTTTA 420
TTCCTGTTAT TTTCTCCTGA TATAGCCTTT CTACACCATA TTGTTGCAAA GCATCTATTT 480
GCATATCGAG ATTTTGTTCT TCTGTGCTGA CACGAGCATA ACCAAAAATC AAATTGGTTT 540
CACTTCCTAT CTAAATATAT CTATTAAAAT AGCACCAAAA ACCTTATTAA ATTAAAATAA 600
GGAACTTTGT TTTTGGATAT GGATTTTGGT ACTCAATATG GATGAGTTTT TAACGCTTTT 660
GTTAAAAAAC AAACAAGTGC CATAAACGGT CGTTTTTGGG ATGACATAAT AAATAATCTG 720
TTTGATTAAC CTAACCTTGT ATCCTTACAG CCCAGTTTTA TTTGTACTTC AACTGACTGA 780
ATATGAAAAC AACATGAAGG TTTCATAAAA TTTATATATT TTCCATAACG GATGCTCTAT 840
CTTTAGGTTA TAGTTAAATT ATAAGAAAAA AACAAACGGA GGGAGTGAAA AAAAGCATCT 900
TCTCTATAAT TTTACAGGCT CTTTAATAAG AAGGGGGGAG ATTAGATAAT AAATATGAAT 960
ATCTATCTAT AATTGTTTGC TTCTACAATA ACTTATCTAA CTTTCATATA CAACAACAAA 1020
ACAGACTAAA TCCAGATTGT ATATTCATTT TCAGTTGTTC CTTTATAAAA TAATTTCATA 1080
A ATG AAA AGA ATG GAG GGA AAG TTG TTT ATG GTG TCA AAA AAA TTA 1126
Me t Lys Arg Me t Glu Gly Lys Leu Phe Met Val Ser Lys Lys Leu 15 10 15
CAA GTA GTT ACT AAA Ly s 20 ACT GTA TTG CTT AGT ACA GTT TTC TCT Ser ATA Ile 30 TCT Ser 1174
Gin Val Val Thr Thr Val Leu Leu Ser 25 Thr Val Phe
TTA TTA AAT AAT GAA GTG ATA AAA GCT GAA CAA TTA AAT ATA AAT TCT 1222
Leu Leu Asn Asn 35 Glu Val Ile Lys Al a 40 Glu Gin Leu Asn Ile 45 Asn Ser
CAA AGT AAA TAT ACT AAC TTG CAA AAT CTA AAA ATC ACT GAC AAG GTA 1270
Gin Ser Lys 50 Tyr Thr Asn Leu Gin 55 Asn Leu Lys Ile Thr 60 Asp Lys Val
GAG GAT TTT AAA GAA GAT AAG GAA AAA GCG AAA GAA TGG GGG AAA GAA 1318
Glu As p 65 Phe Lys Glu Asp Lys 70 Glu Lys Al a Lys Glu 75 Trp Gly Lys Glu
AAA GAA AAA GAG TGG AAA CTA ACT GCT ACT GAA AAA GGA AAA ATG AAT 1366
Lys 80 Glu Lys G1 u Trp Lys 85 Leu Thr Al a Thr Glu 90 Lys Gly Lys Me t Asn 95
AAT TTT TTA GAT AAT AAA AAT GAT ATA AAG ACA AAT TAT AAA GAA ATT 1414
Asn Phe Leu Asp Asn 100 Lys Asn Asp Ile Lys 105 Thr Asn Tyr Lys Glu 110 Ile
ACT TTT TCT ATG GCA GGC TCA TTT GAA GAT GAA ATA AAA GAT TTA AAA 1462
Thr Phe Ser Me t 115 Al a Gly Ser Phe Glu 120 Asp Glu Ile Lys Asp 125 Leu Lys
GAA ATT GAT AAG ATG TTT GAT AAA ACC AAT CTA TCA AAT TCT ATT ATC 1510
Glu Ile As p 130 Lys Me t Phe Asp Ly s 135 Thr Asn Leu Ser Asn 140 Ser Ile Ile
HU 222 264 Β1
ACC TAT AAA AAT GTG GAA CCG ACA ACA ATT GGA TTT AAT AAA TCT TTA
Thr Tyr 145 Lys Asn Val Glu Pro 150 Thr Thr Ile Gly Phe 155 Asn Ly s Ser Leu
ACA GAA GGT AAT ACG ATT AAT TCT GAT GCA ATG GCA CAG TTT AAA GAA
Thr 160 Glu Gly Asn Thr Ile 165 Asn Ser Asp Al a Me t 170 Alá Gin Phe Lys Glu 175
CAA TTT TTA GAT AGG GAT ATT AAG TTT GAT AGT TAT CTA GAT ACG CAT
Gin Phe Leu Asp Arg 180 Asp Ile Lys Phe Asp 185 Ser Tyr Leu Asp Thr 190 Hi s
TTA ACT GCT CAA CAA GTT TCC AGT AAA GAA AGA GTT ATT TTG AAG GTT
Leu Thr Al a Gin 195 Gin Val Ser Ser Lys 200 Glu Arg Val Ile Leu 205 Lys Val
ACG GTT CCG AGT GGG AAA GGT TCT ACT ACT CCA ACA AAA GCA GGT GTC
Thr Val Pro 210 Ser Gly Lys Gly Ser 215 Thr Thr Pro Thr Lys 220 Al a Gly Val
ATT TTA AAT AAT AGT GAA TAC AAA ATG CTC ATT GAT AAT GGG TAT ATG
Ile Leu 225 Asn Asn Se r Glu Tyr 230 Lys Me t Leu Ile Asp 235 Asn Gly Tyr Me t
GTC CAT GTA GAT AAG GTA TCA AAA GTG GTG AAA AAA GGG GTG GAG TGC
Val 240 Hi s Val Asp Lys Val 245 Ser Lys Val Val Lys 250 Lys Gly Val Glu Cys 255
TTA CAA ATT GAA GGG ACT TTA AAA AAG AGT CTT GAC TTT AAA AAT GAT
Leu Gin Ile Glu Gly 260 Thr Leu Ly s Lys Ser 265 Leu Asp Phe Lys Asn 270 Asp
ATA AAT GCT GAA GCG CAT AGC TGG GGT ATG AAG AAT TAT GAA GAG TGG
Ile Asn Al a Glu 275 Al a Hi s Ser Trp Gly 280 Me t Lys Asn Tyr Glu 285 Glu Trp
GCT AAA GAT TTA ACC GAT TCG CAA AGG GAA GCT TTA GAT GGG TAT GCT
Al a Lys Asp 290 Leu Thr Asp Ser Gin 295 Arg Glu Al a Leu Asp 300 G1 y Tyr Al a
AGG CAA GAT TAT AAA GAA ATC AAT AAT TAT TTA AGA AAT CAA GGC GGA
Arg Gin 305 Asp Tyr Lys Glu Ile 310 Asn Asn Tyr Leu Arg 315 Asn Gin Gly Gly
AGT GGA AAT GAA AAA CTA GAT GCT CAA ATA AAA AAT ATT TCT GAT GCT
Ser 320 G1 y Asn Glu Lys Leu 325 Asp Al a Gin Ile Lys 330 Asn Ile Ser Asp Al a 335
TTA GGG AAG AAA CCA ATA CCG GAA AAT ATT ACT GTG TAT AGA TGG TGT
Leu Gly Lys Lys Pro 340 Ile Pro Glu Asn Ile 345 Thr Val Tyr Arg Trp 350 Cys
GGC ATG CCG GAA TTT GGT TAT CAA ATT AGT GAT CCG TTA CCT TCT TTA
Gly Me t Pro Glu 355 Phe Gly Tyr Gin Ile 360 Ser As p Pro Leu Pro 365 Ser Leu
AAA GAT TTT GAA GAA CAA TTT TTA AAT ACA ATC AAA GAA GAC AAA GGA
Lys Asp Phe Glu Glu Gin Phe Leu Asn Thr Ile Lys Glu Asp Lys Gly
370 375 380
1558
1606
1654
1702
1750
1798
1846
1894
1942
1990
2038
2086
2134
2182
2230
HU 222 264 Bl
TAT Tyr ATG AGT ACA Thr AGC Ser TTA TCG AGT GAA CGT CTT GCA GCT TTT GGA TCT Ser 2278
Me t 385 Ser Leu Ser 390 Ser Glu Arg Leu Al a 395 Al a Phe Gly
AGA AAA ATT ATA TTA CGA TTA CAA GTT CCG AAA GGA AGT ACG GGT GCG 2326
Arg Lys Ile Ile Leu Arg Leu Gin Val Pro Lys Gly Ser Thr Gly Al a
400 405 410 415
TAT TTA AGT GCC ATT GGT GGA TTT GCA AGT GAA AAA GAG ATC CTA CTT 2374
Tyr Leu Ser Al a Ile Gly Gly Phe Al a Ser Glu Lys Glu Ile Leu Leu
420 425 430
GAT AAA GAT AGT AAA TAT CAT ATT GAT AAA GTA ACA GAG GTA ATT ATT 2422
Asp Lys Asp Ser Lys Tyr Hi s Ile Asp Lys Val Thr Glu Val Ile Ile
435 440 445
AAA GGT GTT AAG CGA TAT GTA GTG GAT GCA ACA TTA TTA ACA AAT 2467
Lys Gly Val Lys Arg Tyr Val Val Asp Al a Thr Leu Leu Thr Asn
450 455 460
TAAGGAGATG AAAAATATGA AGAAAAAGTT AGCAAGTGTT GTAACGTGTA CGTTATTAGC 2527 TCCTATGTTT TTGAATGGAA ATGTGAATGC TGTTTACGCA GACAGCAAAA CAAATCAAAT 2587 TTCTACAACA CAGAAAAATC AACAGAAAGA GATGGACCGA AAAGGATTAC TTGGGTATTA 2647 TTTCAAAGGA AAAGATTTTA GTAATCTTAC TATGTTTGCA CCGACACGTG ATAGTACTCT 2707 TATTTATGAT CAACAAACAG CAAATAAACT ATTAGATAAA AAACAACAAG AATATCAGTC 2767 TATTCGTTGG ATTGGTTTGA TTCAGAGTAA AGAAACGGGA GATTTCACAT TTAACTTATC 2827 TGAGGATGAA CAGGCAATTA TAGAAATCAA TGGGAAAATT ATTTCTAATA AAGGGAAAGA 2887 AAAGCAAGTT GTCCATTTAG AAAAAGGAAA ATTAGTTCCA ATCAAAATAG AGTATCAATC 2947 AGATACAAAA TTTAATATTG ACAGTAAAAC ATTTAAAGAA CTTAAATTAT TTAAAATAGA 3007 TAGTCAAAAC CAACCCCAGC AAGTCCAGCA AGATGAACTG AGAAATCCTG AATTTAACAA 3067 GAAAGAATCA CAGGAATTCT TAGCGAAACC ATCGAAAATA AATCTTTTCA CTCAAAAAAT 3127 GAAAAGGGAA ATTGATGAAG ACACGGATAC GGATGGGGAC TCTATTCCTG ACCTTTGGGA 3187 AGAAAATGGG TATACGATTC ACAATAGAAT CGCTGTAAAG TGGGACGATT CTCTAGCAAG 3247 TAAAGGGTAT ACGAAATTTG TTTCAAATCC ACTAGAAAGT CACACAGTTG GTGATCCTTA 3307 TACAGATTAT GAAAAGGCAG CAAGAGATCT AGATTTGTCA AATGCAAAGG AAACGTTTAA 3367 CCCATTGGTA GCTGCTTTTC CAAGTGTGAA TGTTAGTATG GAAAAGGTGA TATTATCACC 3427 AAATGAAAAT TTATCCAATA GTGTAGAGTC TCATTCATCC ACGAATTGGT CTTATACAAA 3487 TACAGAAGGT GCTTCTGTTG AAGCGGGGAT TGGACCAAAA GGTATTTCGT TCGGAGTTAG 3547 CGTAAACTAT CAACACTCTG AAACAGTTGC ACAAGAATGG GGAACATCTA CAGGAAATAC 3607 TTCGCAATTC AATACGGCTT CAGCGGGATA TTTAAATGCA AATGTTCGAT ATAACAATGT 3667 AGGAACTGGT GCCATCTACG ATGTAAAACC TACAACAAGT TTTGTATTAA ATAACGATAC 3727 TATCGCAACT ATTACGGCGA AATCTAATTC TACAGCCTTA AATATATCTC CTGGAGAAAG 3787 TTACCCGAAA AAAGGACAAA ATGGAATCGC AATAACATCA ATGGATGATT TTAATTCCCA 3847 TCCGATTACA TTAAATAAAA AACAAGTAGA TAATCTGCTA AATAATAAAC CTATGATGTT 3907 GGAAACAAAC CAAACAGATG GTGTTTATAA GATAAAAGAT ACACATGGAA ATATAGTAAC 3967 TGGCGGAGAA TGGAATGGTG TCATACAACA AATCAAGGCT AAAACAGCGT CTATTATTGT 4027 GGATGATGGG GAACGTGTAG CAGAAAAACG TGTAGCGGCA AAAGATTATG AAAATCCAGA 4087 AGATAAAACA CCGTCTTTAA CTTTAAAAGA TGCCCTGAAG CTTTCATATC CAGATGAAAT 4147 AAAAGAAATA GAGGGATTAT TATATTATAA AAACAAACCG ATATACGAAT CGAGCGTTAT 4207 GACTTACTTA GATGAAAATA CAGCAAAAGA AGTGACCAAA CAATTAAATG ATACCACTGG 4267 GAAATTTAAA GATGTAAGTC ATTTATATGA TGTAAAACTG ACTCCAAAAA TGAATGTTAC 4327 AATCAAATTG TCTATACTTT ATGATAATGC TGAGTCTAAT GATAACTCAA TTGGTAAATG 4387 GACAAACACA AATATTGTTT CAGGTGGAAA TAACGGAAAA AAACAATATT CTTCTAATAA 4447 TCCGGATGCT AATTTGACAT TAAATACAGA TGCTCAAGAA AAATTAAATA AAAATCGTGA 4507 CTATTATATA AGTTTATATA TGAAGTCAGA AAAAAACACA CAATGTGAGA TTACTATAGA 4567 TGGGGAGATT TATCCGATCA CTACAAAAAC AGTGAATGTG AATAAAGACA ATTACAAAAG 4627 ATTAGATATT ATAGCTCATA ATATAAAAAG TAATCCAATT TCTTCACTTC ATATTAAAAC 4687 GAATGATGAA ATAACTTTAT TTTGGGATGA TATTTCTATA ACAGATGTAG CATCAATAAA 4747 ACCGGAAAAT TTAACAGATT CAGAAATTAA ACAGATTTAT AGTAGGTATG GTATTAAGTT 4807 AGAAGATGGA ATCCTTATTG ATAAAAAAGG TGGGATTCAT TATGGTGAAT TTATTAATGA 4867
HU 222 264 Β1
AGCTAGTTTT AATATTGAAC CATTGCAAAA TTATGTGACC AAATATGAAG TTACTTATAG TAGTGAGTTA GGACCAAACG TGAGTGACAC ACTTGAAAGT GATAAAATTT ACAAGGATGG GACAATTAAA TTTGATTTTA CCAAATATAG TAAAAATGAA CAAGGATTAT TTTATGACAG TGGATTAAAT TGGGACTTTA AAATTAATGC TATTACTTAT GATGGTAAAG AGATGAATGT TTTTCATAGA TATAATAAAT AGTTATTATA TCTATGAAGC TGGTGCTAAA GATAGTGTAA AAGTTAATAT ACTGTAGGAT TGTAATAAAA GTAATGGAAT TGATATCGTA CTTTGGAGTG GGGGATACTT TGTAAATAGT TCTATCAGAA ACATTAGACT AAGAAAAGTT ACTACCCCCA CTTGAAAATG AAGATTCAAC TGATTACAAA CAACCTGTTA AATATTATAA GGTTTTAACA AAATATTAAA CTCTTTATGT TAATACTGTA ATATAAAGAG TTTAATTGTA TTCAAATGAA GCTTTCCCAC AAAATTAGAC TGATTATCTA ATGAAATAAT CAGTCTAATT TTGTAGAACA GGTCTGGTAT TATTGTACGT GGTCACTAAA AGATATCTAA TATTATTGGG CAAGGCGTTC CATGATTGAA TCCTCGAATG TCTTGCCCTT TTCATTTATT TAAGAAGGAT TGTGGAGAAA TTATGGTTTA GATAATGAAG AAAGACTTCA CTTCTAATTT TTGATGTTAA ATAAATCAAA ATTTGGCGAT TCACATTGTT TAATCCACTG ATAAAACATA CTGGAGTGTT CTTAAAAAAT CAGCTTTTTT CTTTATAAAA TTTTGCTTAG CGTACGAAAT TCGTGTTTTG TTGGTGGGAC CCCATGCCCA TCAACTTAAG AGTAAATTAG TAATGAACTT TCGTTCATCT GGATTAAAAT AACCTCAAAT TAGGACATGT TTTTAAAAAT AAGCAGACCA AATAAGCCTA GAATAGGTAT CATTTTTAAA AATTATGCTG CTTTCTTTTG TTTTCCAAAT CCATTATACT CATAAGCAAC ACCCATAATG TCAAAGACTG TTTTTGTCTC ATATCGATAA GCTTGATATC GAATTCCTGC AGCCCGGGGG ATCCACTAGT TCTAGAGCGG CCGCCACCGC GG
A 2. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 462 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehéije (xi) A 2. számú szekvencia leírása:
4927
4987
5047
5107
5167
5227
5287
5347
5407
5467
5527
5587
5647
5707
5767
5827
5887
5947
6007
6049
Me t 1 Ly s Arg Me t Glu 5 Gly Lys Leu Phe Me t 10 Va 1 Ser Lys Ly s Leu 15 Gin
Val Val Thr Lys 20 Thr Val Leu Leu Ser 25 Thr Val Phe Ser Ile 30 Ser Leu
Leu Asn Asn 35 Glu Val Ile Lys Alá 40 Glu Gin Leu Asn Ile 45 Asn Ser Gin
Ser Ly s 50 Tyr Thr Asn Leu Gin 55 Asn Leu Lys Ile Thr 60 Asp Lys Val Glu
Asp 65 Phe Lys Glu Asp Lys 70 Glu Lys Al a Lys Glu 75 Trp Gly Lys Glu Lys 80
Glu Lys Glu Trp Ly s 85 Leu Thr Al a Thr Glu 90 Lys Gly Lys Me t Asn 95 Asn
Phe Leu Asp Asn 100 Lys Asn Asp Ile Lys 105 Thr Asn Tyr Lys Glu 110 Ile Thr
Phe Ser Me t 115 Al a Gly Ser Phe Glu 120 Asp Glu Ile Lys Asp 125 Leu Lys Glu
Ile Asp 130 Lys Me t Phe Asp Lys 135 Thr Asn Leu Ser Asn 140 Ser Ile Ile Thr
Tyr 145 Lys Asn Val Glu Pro 150 Thr Thr Ile Gly Phe 155 Asn Lys Se r Leu Thr 160
Glu Gly Asn Thr Ile 165 Asn Ser Asp Alá Me t 170 Al a Gin Phe Lys Glu 175 Gin
HU 222 264 Bl
Phe Leu Asp Arg 180 Asp Ile Lys Phe Asp 185 Ser Tyr Leu Asp Thr 190 Hi s Leu
Thr Al a Gin Gin Val Ser Ser Lys Glu Arg Val Ile Leu Lys Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Gly Ly s Gly Ser Thr Thr Pro Thr Lys Al a Gly Val Ile
210 215 220
Leu Asn Asn Ser Glu Tyr Lys Me t Leu Ile Asp Asn Gly Tyr Me t Val
225 230 235 240
His Val Asp Lys Val Ser Lys Val Val Lys Ly s Gly Val Glu Cys Leu
245 250 255
Gin Ile Glu Gly Thr Leu Lys Ly s Ser Leu Asp Phe Lys Asn Asp Ile
260 265 270
Asn Al a Glu Al a His Ser Trp Gly Me t Lys Asn Tyr Glu Glu Trp Al a
275 280 285
Lys Asp Leu Thr Asp Ser Gin Arg Glu Al a Leu Asp Gly Tyr Al a Arg
290 295 300
Gin Asp Tyr Lys Glu Ile Asn Asn Tyr Leu Arg Asn Gin G1 y Gly Ser
305 310 315 320
Gly Asn Glu Lys Leu Asp Al a Gin Ile Lys Asn Ile Ser As p Al a Leu
325 330 335
Gly Lys Lys Pro Ile Pro Glu Asn Ile Thr Val Tyr Arg Trp Cys Gly
340 345 350
Me t Pro Glu Phe Gly Tyr Gin Ile Ser Asp Pro Leu Pro Ser Leu Lys
355 360 365
Asp Phe Glu Glu Gin Phe Leu Asn Thr Ile Lys Glu Asp Lys Gly Tyr
370 375 380
Me t Ser Thr Ser Leu Ser Ser Glu Arg Leu Al a Al a Phe Gly Ser Arg
385 390 395 400
Lys Ile Ile Leu Arg Leu Gin Val Pro Lys Gly Ser Thr Gly Ala Tyr
405 410 415
Leu Ser Al a Ile Gly Gly Phe Al a Ser Glu Ly s Glu Ile Leu Leu Asp
420 425 430
Lys Asp Ser Lys Tyr Hi s Ile Asp Lys Val Thr Glu Val Ile Ile Lys
435 440 445
Gly Va 1 Lys Arg Tyr Val Val Asp Al a Thr Leu Leu Thr Asn
450 455 460
A 3. számú szekvencia adatai: (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 20 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris
HU 222 264 BI (ii) Molekula típusa: peptid (ix) Jellemzők (A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1.. .20 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„szignálszekvencia vakuólumba történő bejuttatáshoz” (xi) A 3. számú szekvencia leírása:
Ser Ser Ser Ser Phe Alá Asp Ser Asn Pro Ile Arg Val Thr Asp Arg 15 10 15
Alá Alá Ser Thr 20
A 4. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2655 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (iv) Antiszenz: nem (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus cereus (B) Törzs: AB78 (C) Egyedi izolátum: NRRL B-21058 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 1.. .2652 (D) Egyéb információ: /termék=„100 kD VIPlA(a) fehérje” /megjegyzés=„Ez a szekvencia azonos az 1. szá mú szekvenciának a 2475-5126. nukleotidok közötti részével.” (xi) A 4. számú szekvencia leírása:
ATG AAA AAT ATG Me t AAG Lys AAA Lys AAG Lys TTA GCA AGT GTT GTA ACG TGT ACG TTA Leu 48
Me t Lys Asn 465 Leu 470 Alá Ser Val Val Thr 475 Cys Thr
TTA GCT CCT ATG TTT TTG AAT GGA AAT GTG AAT GCT GTT TAC GCA GAC 96
Leu Al a 480 Pro Me t Phe Leu Asn 485 Gly Asn Val Asn Alá 490 Val Tyr Al a Asp
AGC AAA ACA AAT CAA ATT TCT ACA ACA CAG AAA AAT CAA CAG AAA GAG 144
Ser 495 Lys Thr Asn Gin Ile 500 Ser Thr Thr Gin Ly s 505 Asn Gin Gin Lys Glu 510
ATG GAC CGA AAA GGA TTA CTT GGG TAT TAT TTC AAA GGA AAA GAT TTT 192
Me t Asp Arg Lys Gly 515 Leu Leu Gly Tyr Tyr 520 Phe Lys Gly Lys As p 525 Phe
AGT AAT CTT ACT ATG TTT GCA CCG ACA CGT GAT AGT ACT CTT ATT TAT 240
Ser Asn Leu Thr 530 Me t Phe Alá Pro Thr 535 Arg Asp Ser Thr Leu 540 Ile Tyr
GAT CAA CAA ACA GCA AAT AAA CTA TTA GAT AAA AAA CAA CAA GAA TAT 288
Asp Gin Gin 545 Thr Al a Asn Lys Leu 550 Leu Asp Lys Lys Gin 555 Gin Glu Tyr
CAG TCT ATT CGT TGG ATT GGT TTG ATT CAG AGT AAA GAA ACG GGA GAT 336
Gin Ser 560 Ile Arg Trp Ile Gly 565 Leu Ile Gin Ser Lys 570 Glu Thr Gly Asp
HU 222 264 Bl
TTC Phe 575 ACA TTT AAC TTA TCT GAG GAT GAA CAG GCA ATT ATA GAA ATC AAT 384
Thr Phe Asn Leu Ser 580 Glu Asp Glu Gin Al a 585 Ile Ile Glu Ile Asn 590
GGG AAA ATT ATT TCT AAT AAA GGG AAA GAA AAG CAA GTT GTC CAT TTA 432
Gly Lys Ile Ile Ser Asn Lys Gly Lys Glu Lys Gin Val Val Hi s Leu
595 600 605
GAA AAA GGA AAA TTA GTT CCA ATC AAA ATA GAG TAT CAA TCA GAT ACA 480
Glu Lys Gly Lys Leu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gin Ser Asp Thr
610 615 620
AAA TTT AAT ATT GAC AGT AAA ACA TTT AAA GAA CTT AAA TTA TTT AAA 528
Lys Phe Asn Ile Asp Ser Lys Thr Phe Ly s Glu Leu Lys Leu Phe Lys
625 630 635
ATA GAT AGT CAA AAC CAA CCC CAG CAA GTC CAG CAA GAT GAA CTG AGA 576
Ile Asp Ser Gin Asn Gin Pro Gin Gin Val Gin Gin Asp G1 u Leu Arg
640 645 650
AAT CCT GAA TTT AAC AAG AAA GAA TCA CAG GAA TTC TTA GCG AAA CCA 624
Asn Pr o Glu Phe Asn Lys Lys Glu Ser Gin Glu Phe Leu Al a Lys Pro
655 660 665 670
TCG AAA ATA AAT CTT TTC ACT CAA AAA ATG AAA AGG GAA ATT GAT GAA 672
Ser Lys Ile Asn Leu Phe Thr Gin Lys Me t Ly s Arg Glu Ile Asp Glu
675 680 685
GAC ACG GAT ACG GAT GGG GAC TCT ATT CCT GAC CTT TGG GAA GAA AAT 720
Asp Thr Asp Thr As p Gly Asp Ser Ile Pro As p Leu Trp Glu Glu Asn
690 695 700
GGG TAT ACG ATT CAA AAT AGA ATC GCT GTA AAG TGG GAC GAT TCT CTA 768
Gly Tyr Thr Ile Gin Asn Arg Ile Al a Val Lys Trp Asp Asp Ser Leu
705 710 715
GCA AGT AAA GGG TAT ACG AAA TTT GTT TCA AAT CCA CTA GAA AGT CAC 816
Alá Ser Lys Gly Tyr Thr Lys Phe Val Ser Asn Pro Leu G1 u Ser Hi s
720 725 730
ACA GTT GGT GAT CCT TAT ACA GAT TAT GAA AAG GCA GCA AGA GAT CTA 864
Thr Val Gly Asp Pro Tyr Thr Asp Tyr Glu Lys Alá Al a Arg Asp Leu
735 740 745 750
GAT TTG TCA AAT GCA AAG GAA ACG TTT AAC CCA TTG GTA GCT GCT TTT 912
Asp Leu Ser Asn Al a Lys Glu Thr Phe Asn Pro Leu Val Al a Al a Phe
755 760 765
CCA AGT GTG AAT GTT AGT ATG GAA AAG GTG ATA TTA TCA CCA AAT GAA 960
Pro Ser Val Asn Val Ser Me t Glu Lys Val Ile Leu Ser Pro Asn Glu
770 775 780
AAT TTA TCC AAT AGT GTA GAG TCT CAT TCA TCC ACG AAT TGG TCT TAT 1008
Asn Leu Ser Asn Ser Val Glu Ser Hi s Ser Ser Thr Asn Trp Ser Tyr
785 790 795
ACA AAT ACA GAA GGT GCT TCT GTT GAA GCG GGG ATT GGA CCA AAA GGT 1056
Thr Asn Thr Glu Gly Al a Ser Val G1 u Al a Gly Ile Gly Pro Ly s Gly
800 805 810
HU 222 264 Bl
1104
ATT TCG TTC GGA GTT AGC GTA AAC TAT CAA CAC TCT GAA ACA GTT GCA
Ile 815 Ser Phe Gly Val Ser 820 Val Asn Tyr Gin Hi s 825 Ser Glu Thr Val Al a 830
CAA GAA TGG GGA ACA TCT ACA GGA AAT ACT TCG CAA TTC AAT ACG GCT
Gin Glu Trp Gly Thr 835 Ser Thr Gly Asn Thr 840 Ser Gin Phe Asn Thr 845 Al a
TCA GCG GGA TAT TTA AAT GCA AAT GTT CGA TAT AAC AAT GTA GGA ACT
Ser Al a Gly Tyr 850 Leu Asn Al a Asn Val 855 Arg Tyr Asn Asn Val 860 Gly Thr
GGT GCC ATC TAC GAT GTA AAA CCT ACA ACA AGT TTT GTA TTA AAT AAC
Gly Al a Ile 865 Tyr As p Val Lys Pro 870 Thr Thr Ser Phe Val 875 Leu Asn Asn
GAT ACT ATC GCA ACT ATT ACG GCG AAA TCT AAT TCT ACA GCC TTA AAT
Asp Thr 880 Ile Al a Thr Ile Thr 885 Al a Lys Ser Asn Ser 890 Thr Al a Leu Asn
ATA TCT CCT GGA GAA AGT TAC CCG AAA AAA GGA CAA AAT GGA ATC GCA
Ile 895 Se r Pro Gly Glu Ser 900 Tyr Pro Lys Lys Gly 905 Gin Asn Gly Ile Al a 910
ATA ACA TCA ATG GAT GAT TTT AAT TCC CAT CCG ATT ACA TTA AAT AAA
Ile Thr Ser Me t Asp 915 Asp Phe Asn Ser Hi s 920 Pro Ile Thr Leu Asn 925 Lys
AAA CAA GTA GAT AAT CTG CTA AAT AAT AAA CCT ATG ATG TTG GAA ACA
Lys Gin Val Asp 930 Asn Leu Leu Asn Asn 935 Lys Pro Me t Me t Leu 940 Glu Thr
AAC CAA ACA GAT GGT GTT TAT AAG ATA AAA GAT ACA CAT GGA AAT ATA
Asn Gin Thr 945 Asp Gly Val Tyr Lys 950 Ile Lys Asp Thr Hi s 955 Gly Asn Ile
GTA ACT GGC GGA GAA TGG AAT GGT GTC ATA CAA CAA ATC AAG GCT AAA
Val Thr 960 Gly Gly Glu Trp Asn 965 Gly Val Ile Gin Gin 970 Ile Lys Al a Lys
ACA GCG TCT ATT ATT GTG GAT GAT GGG GAA CGT GTA GCA GAA AAA CGT
Thr 975 Al a Ser Ile Ile Val 980 Asp Asp Gly Glu Arg 985 Val Alá Glu Lys Arg 990
GTA GCG GCA AAA GAT TAT GAA AAT CCA GAA GAT AAA ACA CCG TCT TTA
Val Al a Al a Lys Asp 995 Tyr Glu Asn Pro Glu Asp 1000 Lys Thr Pro Ser Leu 1005
ACT TTA AAA GAT GCC CTG AAG CTT TCA TAT CCA GAT GAA ATA AAA GAA
Thr Leu Lys Asp Alá 1010 Leu Lys Leu Ser Tyr 1015 Pro Asp Glu Ile Lys 1020 Glu
ATA GAG GGA TTA TTA TAT TAT AAA AAC AAA CCG ATA TAC GAA TCG AGC
Ile Glu Gly Leu 1025 Leu Tyr Tyr Lys Asn 1030 Lys Pro Ile Tyr Glu 1035 Ser Ser
GTT ATG ACT TAC TTA GAT GAA AAT ACA GCA AAA GAA GTG ACC AAA CAA
Val Me t Thr Tyr Leu Asp Glu Asn Thr Al a Lys Glu Val Thr Lys Gin
1040 1045 1050
1152
1200
1248
1296
1344
1392
1440
1488
1536
1584
1632
1680
1728
1776
HU 222 264 Β1
TTA AAT Leu Asn 1055 GAT Asp ACC Thr ACT Thr GGG AAA Gly Lys 1060 TTT Phe AAA Lys GAT Asp GTA AGT Val Ser 1065 CAT Hi s TTA Leu TAT Tyr GAT Asp 1070 1824
GTA AAA CTG ACT CCA AAA ATG AAT GTT ACA ATC AAA TTG TCT ATA CTT 1872
Val Lys Leu Thr Pro Lys Met 1075 Asn Val Thr Ile Lys 1080 Leu Ser Ile Leu 1085
TAT GAT AAT GCT GAG TCT AAT GAT AAC TCA ATT GGT AAA TGG ACA AAC 1920
Tyr Asp Asn Alá Glu 1090 Ser Asn Asp Asn Ser 1095 Ile Gly Ly s Trp Thr 1100 Asn
ACA AAT ATT GTT TCA GGT GGA AAT AAC GGA AAA AAA CAA TAT TCT TCT 1968
Thr Asn Ile Val 1105 Ser Gly Gly Asn Asn 1110 Gly Lys Lys Gin Tyr 1115 Ser Ser
AAT AAT CCG GAT GCT AAT TTG ACA TTA AAT ACA GAT GCT CAA GAA AAA 2016
Asn Asn Pro 1120 Asp Al a Asn Leu Thr 1125 Leu Asn Thr Asp Alá 1130 Gin Glu Lys
TTA AAT AAA AAT CGT GAC TAT TAT ATA AGT TTA TAT ATG AAG TCA GAA 2064
Leu Asn 1135 Ly s Asn Arg Asp Tyr 1140 Tyr Ile Ser Leu Tyr 1145 Me t Lys Ser Glu 1150
AAA AAC ACA CAA TGT GAG ATT ACT ATA GAT GGG GAG ATT TAT CCG ATC 2112
Lys Asn Thr Gin Cys Glu Ile 1155 Thr Ile Asp Gly Glu 1160 Ile Tyr Pro Ile 1165
ACT ACA AAA ACA GTG AAT GTG AAT AAA GAC AAT TAC AAA AGA TTA GAT 2160
Thr Thr Ly s Thr Val 1170 Asn Val Asn Lys Asp 1175 Asn Tyr Ly s Arg Leu 1180 Asp
ATT ATA GCT CAT AAT ATA AAA AGT AAT CCA ATT TCT TCA CTT CAT ATT 2208
Ile Ile Alá His 1185 Asn Ile Lys Ser Asn 1190 Pro Ile Ser Ser Leu 1195 His Ile
AAA ACG AAT GAT GAA ATA ACT TTA TTT TGG GAT GAT ATT TCT ATA ACA 2256
Lys Thr Asn 1200 Asp Glu Ile Thr Leu 1205 Phe Trp Asp Asp Ile 1210 Ser Ile Thr
GAT GTA GCA TCA ATA AAA CCG GAA AAT TTA ACA GAT TCA GAA ATT AAA 2304
Asp Val 1215 Al a Ser Ile Lys Pro 1220 Glu Asn Leu Thr Asp 1225 Ser Glu Ile Lys 1230
CAG ATT TAT AGT AGG TAT GGT ATT AAG TTA GAA GAT GGA ATC CTT ATT 2352
Gin Ile Tyr Ser Arg Tyr Gly 1235 Ile Lys Leu Glu Asp 1240 Gly Ile Leu 11 e 1245
GAT AAA AAA GGT GGG ATT CAT TAT GGT GAA TTT ATT AAT GAA GCT AGT 2400
Asp Lys Lys Gly Gly 1250 Ile His Tyr Gly Glu 1255 Phe Ile Asn Glu Alá 1260 Ser
TTT AAT ATT GAA CCA TTG CAA AAT TAT GTG ACC AAA TAT GAA GTT ACT 2448
Phe Asn Ile Glu 1265 Pro Leu Gin Asn Tyr 1270 Val Thr Lys Tyr Glu 1275 Val Thr
TAT AGT AGT GAG TTA GGA CCA AAC GTG AGT GAC ACA CTT GAA AGT GAT 2496
Tyr Ser Ser 1280 Glu Leu Gly Pro Asn 1285 Val Ser Asp Thr Leu 1290 Glu Ser Asp
HU 222 264 Bl
2544
AAA ATT Lys Ile 1295 TAC Tyr AAG Lys GAT Asp GGG ACA Gly Thr 1300 ATT Ile AAA Ly s TTT Phe GAT TTT Asp Phe 1305 ACC Thr AAA Lys TAT Tyr AGT Ser 131
AAA AAT GAA CAA GGA TTA TTT TAT GAC AGT GGA TTA AAT TGG GAC TTT
Lys Asn Glu Gin Gly Leu Phe Tyr Asp Ser Gly Leu Asn Trp Asp Phe
1315 1320 1325
AAA ATT AAT GCT ATT ACT TAT GAT GGT AAA GAG ATG AAT GTT TTT CAT
Lys Ile Asn Al a Ile Thr Tyr As p Gly Lys Glu Met Asn Val Phe Hi s
1330 1335 1340
AGA TAT AAT AAA TAG
Arg Tyr Asn Lys
1345
2592
2640
2655
Az 5. számú szekvencia adatai: (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 884 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehérje Ser 10 Val Val Thr Cy s Thr 15 Leu
(xi) Az 5. Me t Lys 1 . számú szekvencia leírása: Al a
Asn Me t Lys 5 Lys Lys Leu
Leu Al a Pro Me t Phe Leu Asn Gly Asn Val Asn Al a Val Tyr Al a Asp
20 25 30
Ser Lys Thr Asn Gin Ile Ser Thr Thr Gin Ly s Asn Gin Gin Lys Glu
35 40 45
Me t Asp Arg Lys Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe
50 55 60
Ser Asn Leu Thr Me t Phe Al a Pro Thr Arg As p Ser Thr Leu Ile Tyr
65 70 75 80
Asp Gin Gin Thr Al a Asn Lys Leu Leu Asp Ly s Lys Gin Gin Glu Tyr
85 90 95
Gin Ser Ile Arg Trp Ile Gly Leu Ile Gin Ser Lys Glu Thr Gly Asp
100 105 110
Phe Thr Phe Asn Leu Ser Glu As p Glu Gin Al a Ile Ile Glu Ile Asn
115 120 125
Gly Lys Ile Ile Ser Asn Ly s Gly Lys Glu Ly s Gin Val Val Hi s Leu
130 135 140
Glu Lys Gly Ly s Leu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gin Ser Asp Thr
145 150 155 160
Lys Phe Asn Ile As p Ser Lys Thr Phe Lys Glu Leu Lys Leu Phe Lys
165 170 175
Ile Asp Ser Gin Asn Gin Pro Gin Gin Val Gin Gin As p Glu Leu Arg
180 185 190
HU 222 264 Bl
Asn Pro Glu 195 Phe Asn Lys Lys Glu 200 Ser Gin Glu Phe Leu 205 Al a Ly s
Ser Lys 210 Ile Asn Leu Phe Thr 215 Gin Lys Me t Ly s Arg 220 Glu Ile Asp
Asp 225 Thr Asp Thr As p Gly 230 Asp Ser Ile Pro As p 235 Leu Trp Glu Glu
Gly Tyr Thr Ile Gin 245 Asn Arg Ile Al a Va 1 250 Ly s Trp Asp Asp Ser 255
Al a Ser Lys Gly 260 Tyr Thr Lys Phe Val 265 Ser Asn Pro Leu Glu 270 Ser
Thr Val Gly 275 Asp Pro Tyr Thr As p 280 Tyr Glu Ly s Al a Alá 285 Arg As p
Asp Leu 290 Ser Asn Al a Lys Glu 295 Thr Phe Asn Pro Leu 300 Val Al a Al a
Pro 305 Ser Val Asn Va 1 Ser 310 Me t Glu Lys Val Ile 315 Leu Ser Pro Asn
Asn Leu Ser Asn Ser 325 Val Glu Ser Hi s Ser 330 Ser Thr Asn Trp Ser 335
Thr Asn Thr Glu 340 Gly Al a Ser Val Glu 345 Al a Gly Ile Gly Pro 350 Lys
Ile Ser Phe 355 Gly Val Ser Val Asn 360 Tyr Gin Hi s Ser Glu 365 Thr Val
Gin Glu 370 Trp Gly Thr Ser Thr 375 Gly Asn Thr Ser Gin 380 Phe Asn Thr
Ser 385 Alá Gly Tyr Leu Asn 390 Al a Asn Val Arg Tyr 395 Asn Asn Val Gly
Gly Al a Ile Tyr Asp 405 Val Lys Pro Thr Thr 410 Ser Phe Val Leu Asn 415
Asp Thr Ile Al a 420 Thr Ile Thr Al a Lys 425 Ser Asn Ser Thr Al a 430 Leu
Ile Ser Pro 435 Gly Glu Ser Tyr Pro 440 Lys Lys Gly Gin Asn 445 Gly Ile
Ile Thr 450 Ser Me t Asp Asp Phe 455 Asn Ser Hi s Pro Ile 460 Thr Leu Asn
Lys 465 Gin Val Asp Asn Leu 470 Leu Asn Asn Lys Pro 475 Me t Me t Leu Glu
Asn Gin Thr Asp Gly 485 Val Tyr Lys Ile Lys 490 Asp Thr Hi s Gly Asn 495
Val Thr Gly Gly 500 Glu Trp Asn Gly Val 505 Ile Gl n Gin Ile Ly s 510 Al a
Pro
Glu
Asn
240
Leu
Hi s
Leu
Phe
Glu
320
Tyr
Gly
Al a
Al a
Thr
400
Asn
Asn
Al a
Lys
Thr
480
Ile
Lys
HU 222 264 Bl
Thr Al a Ser 515 Ile Ile Val Asp As p 520 Gly Glu Arg Val Al a 525 Glu Lys Arg
Val Al a 530 Al a Lys Asp Tyr Glu 535 Asn Pro Glu Asp Lys 540 Thr Pro Ser Leu
Thr 545 Leu Lys Asp Al a Leu 550 Lys Leu Ser Tyr Pro 555 Asp Glu Ile Lys Glu 560
Ile Glu Gly Leu Leu 565 Tyr Tyr Lys Asn Lys 570 Pro Ile Tyr Glu Ser 575 Ser
Val Me t Thr Tyr 580 Leu Asp Glu Asn Thr 585 Al a Ly s Glu Val Thr 590 Lys Gin
Leu Asn Asp 595 Thr Thr Gly Lys Phe 600 Lys Asp Val Ser Hi s 605 Leu Tyr Asp
Val Lys 610 Leu Thr Pro Lys Me t 615 Asn Val Thr Ile Lys 620 Leu Ser Ile Leu
Tyr 625 As p Asn Al a Glu Ser 630 Asn Asp Asn Ser Ile 635 Gly Lys Trp Thr Asn 640
Thr Asn Ile Val Ser 645 Gly G1 y Asn Asn Gly 650 Lys Lys Gin Tyr Ser 655 Ser
Asn Asn Pro Asp 660 Al a Asn Leu Thr Leu 665 Asn Thr Asp Al a Gin 670 Glu Lys
Leu Asn Lys 675 Asn Arg Asp Tyr Tyr 680 Ile Ser Leu Tyr Me t 685 Lys Ser Glu
Lys Asn 690 Thr Gin Cys Glu Ile 695 Thr Ile Asp Gly Glu 700 Ile Tyr Pro Ile
Thr 705 Thr Lys Thr Va 1 Asn 710 Val Asn Lys Asp Asn 715 Tyr Lys Arg Leu Asp 720
Ile Ile Ala Hi s Asn 725 Ile Lys Ser Asn Pro 730 Ile Ser Ser Leu His 735 Ile
Lys Thr Asn As p 740 Glu Ile Thr Leu Phe 745 Trp Asp Asp Ile Ser 750 Ile Thr
Asp Va 1 Al a 755 Ser Ile Lys Pro Glu 760 Asn Leu Thr Asp Ser 765 Glu Ile Lys
Gin Ile 770 Tyr Ser Arg Tyr Gly 775 Ile Lys Leu G1 u Asp 780 Gly Ile Leu Ile
Asp 785 Ly s Ly s Gly Gly Ile 790 Hi s Tyr Gly Glu Phe 795 Ile Asn Glu Al a Ser 800
Phe Asn Ile Glu Pro 805 Leu Gin Asn Tyr Val 810 Thr Ly s Tyr Glu Val 815 Thr
Tyr Ser Ser Glu 820 Leu G1 y Pro Asn Val 825 Ser As p Thr Leu Glu 830 Ser Asp
HU 222 264 Β1
Lys Ile Tyr 835 Ly s Asp Gly Thr Ile 840 Lys Phe As p Phe Thr 845 Ly s Tyr Ser
Lys Asn Glu Gin Gly Leu Phe Tyr As p Ser Gly Leu Asn Trp Asp Phe
850 855 860
Lys Ile Asn Al a Ile Thr Tyr Asp Gly Ly s Glu Me t Asn Val Phe Hi s
865 870 875 880
Arg Tyr Asn Lys
A 6. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia j ellemzői:
(A) Hossz: 2004 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (iv) Antiszenz: nem (vi) Eredeti fonás:
(A) Szervezet: Bacillus cereus (B) Törzs: AB78 (C) Egyedi izolátum: NRRL B-21058 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 1...2001 (D) Egyéb információ: /termék=„80 kD VIPlA(a) fehérje” /megjegyzés=„Ez a szekvencia azonos az 1. szá mú szekvenciában található 3126-5126. nukleotidok közötti résszel.” (xi) A 6. számú szekvencia leírása:
ATG AAA AGG GAA ATT GAT GAA GAC ACG GAT ACG GAT GGG GAC TCT ATT
Me t 885 Ly s Arg Glu Ile Asp 890 Glu As p Thr Asp Thr 895 As p Gly As p Ser Ile 900
CCT GAC CTT TGG GAA GAA AAT GGG TAT ACG ATT CAA AAT AGA ATC GCT
Pro Asp Leu Trp Glu 905 Glu Asn Gly Tyr Thr 910 Ile Gin Asn Arg Ile 915 Al a
GTA AAG TGG GAC GAT TCT CTA GCA AGT AAA GGG TAT ACG AAA TTT GTT
Val Lys Trp Asp 920 Asp Ser Leu Al a Ser 925 Lys Gly Tyr Thr Ly s 930 Phe Val
TCA AAT CCA CTA GAA AGT CAC ACA GTT GGT GAT CCT TAT ACA GAT TAT
Ser Asn Pro 935 Leu Glu Ser Hi s Thr 940 Val Gly Asp Pro Tyr 945 Thr Asp Tyr
GAA AAG GCA GCA AGA GAT CTA GAT TTG TCA AAT GCA AAG GAA ACG TTT
Glu Lys 950 Al a Al a Arg Asp Leu 955 As p Leu Ser Asn Al a 960 Ly s Glu Thr Phe
AAC CCA TTG GTA GCT GCT TTT CCA AGT GTG AAT GTT AGT ATG GAA AAG
Asn 965 Pro Leu Val Al a Al a 970 Phe Pro Ser Val Asn 975 Val Ser Me t Glu Lys 980
GTG ATA TTA TCA CCA AAT GAA AAT TTA TCC AAT AGT GTA GAG TCT CAT
Val Ile Leu Ser Pro 985 Asn Glu Asn Leu Ser 990 Asn Ser Va 1 Glu Ser 995 Hi s
144
192
240
288
336
HU 222 264 Β1
TCA Ser TCC Ser ACG Thr AAT TGG Asn Trp 1000 TCT Ser TAT Tyr ACA Thr AAT ACA Asn Thr 1005 GAA G1 u GGT Gly GCT Al a TCT GTT Ser Val 1010 GAA Glu
GCG GGG ATT GGA CCA AAA GGT ATT TCG TTC GGA GTT AGC GTA AAC TAT
Al a Gly Ile Gly Pro 1015 Ly s Gly Ile Ser Phe 1020 Gly Val Ser Val Asn 1025 Tyr
CAA CAC TCT GAA ACA GTT GCA CAA GAA TGG GGA ACA TCT ACA GGA AAT
Gin His Ser 1030 Glu Thr Val Ala Gin 1035 Glu Trp Gly Thr Ser 1040 Thr Gly Asn
ACT TCG CAA TTC AAT ACG GCT TCA GCG GGA TAT TTA AAT GCA AAT GTT
Thr Ser 1045 Gin Phe Asn Thr Ala 1050 Ser Ala Gly Tyr Leu 1055 Asn Ala Asn Val 1060
CGA TAT AAC AAT GTA GGA ACT GGT GCC ATC TAC GAT GTA AAA CCT ACA
Arg Tyr Asn Asn Val Gly 1065 Thr Gly Ala Ile Tyr 1070 Asp Val Lys Pro Thr 1075
ACA AGT TTT GTA TTA AAT AAC GAT ACT ATC GCA ACT ATT ACG GCG AAA
Thr Ser Phe Val Leu 1080 Asn Asn As p Thr Ile 1085 Al a Thr Ile Thr Ala 1090 Lys
TCT AAT TCT ACA GCC TTA AAT ATA TCT CCT GGA GAA AGT TAC CCG AAA
Ser Asn Ser Thr Ala 1095 Leu Asn Ile Ser Pro 1100 Gly Glu Ser Tyr Pro 1105 Lys
AAA GGA CAA AAT GGA ATC GCA ATA ACA TCA ATG GAT GAT TTT AAT TCC
Lys Gly Gin 1110 Asn Gly Ile Ala Ile 1115 Thr Ser Me t Asp Asp 1120 Phe Asn Ser
CAT CCG ATT ACA TTA AAT AAA AAA CAA GTA GAT AAT CTG CTA AAT AAT
His Pro 1125 Ile Thr Leu Asn Lys 1130 Lys Gin Val Asp Asn 1135 Leu Leu Asn Asn 1140
AAA CCT ATG ATG TTG GAA ACA AAC CAA ACA GAT GGT GTT TAT AAG ATA
Lys Pro Me t Met Leu Glu 1145 Thr Asn Gin Thr Asp 1150 Gly Val Tyr Lys Ile 1155
AAA GAT ACA CAT GGA AAT ATA GTA ACT GGC GGA GAA TGG AAT GGT GTC
Lys Asp Thr His Gly 1160 Asn Ile Val Thr Gly 1165 Gly Glu Trp Asn Gly 1170 Val
ATA CAA CAA ATC AAG GCT AAA ACA GCG TCT ATT ATT GTG GAT GAT GGG
Ile Gin Gin Ile Lys 1175 Al a Lys Thr Ala Ser 1180 Ile Ile Val Asp Asp 1185 Gly
GAA CGT GTA GCA GAA AAA CGT GTA GCG GCA AAA GAT TAT GAA AAT CCA
Glu Arg Val 1190 Ala Glu Ly s Arg Val 1195 Ala Ala Ly s Asp Tyr 1200 Glu Asn Pro
GAA GAT AAA ACA CCG TCT TTA ACT TTA AAA GAT GCC CTG AAG CTT TCA
Glu 1205 As p Ly s Thr Pro Ser Leu 1210 Thr Leu Lys Asp Ala 1215 Leu Lys Leu Ser 1220
TAT CCA GAT GAA ATA AAA GAA ATA GAG GGA TTA TTA TAT TAT AAA AAC
Tyr Pro As p Glu Ile 1225 Lys Glu Ile Glu Gly Leu 1230 Leu Tyr Tyr Lys 1235 Asn
384
432
480
528
576
624
672
720
768
816
864
912
960
1008
1056
HU 222 264 BI
AAA CCG ATA Ile TAC GAA Tyr Glu 1240 TCG AGC GTT ATG ACT TAC TTA GAT GAA AAT ACA Thr 1104
Lys Pr o Ser Ser Val Met Thr 1245 Tyr Leu Asp Glu Asn 1250
GCA AAA GAA GTG ACC AAA CAA TTA AAT GAT ACC ACT GGG AAA TTT AAA 1152
Al a Ly s Glu Val Thr 1255 Ly s Gin Leu Asn Asp 1260 Thr Thr Gly Lys Phe 1265 Lys
GAT GTA AGT CAT TTA TAT GAT GTA AAA CTG ACT CCA AAA ATG AAT GTT 1200
Asp Val Ser 1270 Hi s Leu Tyr Asp Val 1275 Lys Leu Thr Pro Lys 1280 Met Asn Val
ACA ATC AAA TTG TCT ATA CTT TAT GAT AAT GCT GAG TCT AAT GAT AAC 1248
Thr Ile 1285 Lys Leu Ser Ile Leu 1290 Tyr Asp Asn Alá Glu 1295 Ser Asn Asp Asn 1300
TCA ATT GGT AAA TGG ACA AAC ACA AAT ATT GTT TCA GGT GGA AAT AAC 1296
Ser Ile Gly Lys Trp Thr 1305 Asn Thr Asn Ile Val 1310 Ser Gly Gly Asn Asn 1315
GGA AAA AAA CAA TAT TCT TCT AAT AAT CCG GAT GCT AAT TTG ACA TTA 1344
Gly Lys Lys Gin Tyr 1320 Ser Ser Asn Asn Pro 1325 As p Al a Asn Leu Thr 1330 Leu
AAT ACA GAT GCT CAA GAA AAA TTA AAT AAA AAT CGT GAC TAT TAT ATA 1392
Asn Thr Asp Alá Gin 1335 Glu Lys Leu Asn Lys 1340 Asn Arg Asp Tyr Tyr 1345 Ile
AGT TTA TAT ATG AAG TCA GAA AAA AAC ACA CAA TGT GAG ATT ACT ATA 1440
Ser Leu Tyr 1350 Me t Lys Ser Glu Lys 1355 Asn Thr Gin Cys Glu 1 360 Ile Thr Ile
GAT GGG GAG ATT TAT CCG ATC ACT ACA AAA ACA GTG AAT GTG AAT AAA 1488
Asp Gly 1365 Glu Ile Tyr Pro Ile 1370 Thr Thr Lys Thr Val 1375 Asn Val Asn Lys 1380
GAC AAT TAC AAA AGA TTA GAT ATT ATA GCT CAT AAT ATA AAA AGT AAT 1536
Asp Asn Tyr Lys Arg Leu 1385 Asp Ile Ile Alá His 1390 Asn Ile Lys Ser Asn 1395
CCA ATT TCT TCA CTT CAT ATT AAA ACG AAT GAT GAA ATA ACT TTA TTT 1584
Pr o Ile Ser Ser Leu 1400 Hi s Ile Lys Thr Asn 1405 Asp Glu Ile Thr Leu 1410 Phe
TGG GAT GAT ATT TCT ATA ACA GAT GTA GCA TCA ATA AAA CCG GAA AAT 1632
Trp Asp Asp Ile Ser 1415 Ile Thr Asp Val Alá 1420 Ser Ile Lys Pro Glu 1425 Asn
TTA ACA GAT TCA GAA ATT AAA CAG ATT TAT AGT AGG TAT GGT ATT AAG 1680
Leu Thr Asp 1430 Ser Glu Ile Lys Gin 1435 Ile Tyr Ser Arg Tyr 1440 Gly Ile Lys
TTA GAA GAT GGA ATC CTT ATT GAT AAA AAA GGT GGG ATT CAT TAT GGT 1728
Leu Glu 1445 Asp Gly Ile Leu Ile 1450 Asp Lys Lys Gly Gly 1455 Ile Hi s Tyr Gly 1460
GAA TTT ATT AAT GAA GCT AGT TTT AAT ATT GAA CCA TTG CCA AAT TAT 1776
Glu Phe Ile Asn Glu Alá 1465 Ser Phe Asn Ile Glu 1470 Pro Leu Pro Asn Tyr 1475
HU 222 264 Bl
GTG Val ACC Thr AAA Lys TAT GAA Tyr Glu 1480 GTT Val ACT Thr TAT Tyr AGT AGT Ser Ser 1485 GAG Glu TTA Leu GGA Gly CCA AAC Pro Asn 1490 GTG Val 1824
AGT GAC ACA CTT GAA AGT GAT AAA ATT TAC AAG GAT GGG ACA ATT AAA 1872
Ser Asp Thr Leu Glu Ser Asp Lys Ile Tyr Lys Asp Gly Thr Ile Lys
1495 1500 1505
TTT GAT TTT ACC AAA TAT AGT AAA AAT GAA CAA GGA TTA TTT TAT GAC 1920
Phe Asp Phe Thr Lys Tyr Ser Lys Asn Glu Gin Gly Leu Phe Tyr Asp
1510 1515 1520
AGT GGA TTA AAT TGG GAC TTT AAA ATT AAT GCT ATT ACT TAT GAT GGT 1968
Ser Gly Leu Asn Trp Asp Phe Ly s Ile Asn Al a Ile Thr Tyr Asp Gly
1525 1530 1535 1540
AAA GAG ATG AAT GTT TTT CAT AGA TAT AAT AAA TAG 2004
Lys Glu Me t Asn Val Phe Hi s Arg Tyr Asn Ly s
1545 1550
A 7. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 667 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehéije (xi) A 7. számú szekvencia leírása:
Me t 1 Ly s Arg Glu Ile 5 As p Glu Asp Thr As p 10 Thr Asp Gly As p Ser 15 Ile
Pro Asp Leu Trp 20 Glu Glu Asn Gly Tyr 25 Thr Ile Gin Asn Arg 30 Ile Al a
Val Lys Trp 35 Asp Asp Ser Leu Al a 40 Ser Lys Gly Tyr Thr 45 Lys Phe Val
Ser Asn 50 Pro Leu Glu Ser His 55 Thr Val Gly As p Pro 60 Tyr Thr Asp Tyr
Glu 65 Lys Al a Al a Arg Asp 70 Leu As p Leu Ser Asn 75 Al a Lys Glu Thr Phe 80
Asn Pro Leu Val Al a 85 Al a Phe Pro Ser Val 90 Asn Val Ser Me t Glu 95 Ly s
Val Ile Leu Ser 100 Pro Asn Glu Asn Leu 105 Ser Asn Ser Val Glu 110 Ser Hi s
Ser Ser Thr 115 Asn Trp Ser Tyr Thr 120 Asn Thr Glu Gly Al a 125 Ser Val Glu
Al a Gly 130 Ile Gly Pro Lys Gly 135 Ile Ser Phe Gly Val 140 Ser Val Asn Tyr
Gin 145 Hi s Ser Glu Thr Val 150 Al a Gin Glu Trp Gly 155 Thr Ser Thr Gly Asn 160
Thr Ser Gin Phe Asn 165 Thr Al a Ser Al a Gly 170 Tyr Leu Asn Al a Asn 175 Val
HU 222 264 Bl
Arg Tyr Asn Asn 180 Val Gly Thr Gly Al a 185 Ile Tyr As p Val Lys 190 Pro
Thr Ser Phe 195 Val Leu Asn Asn Asp 200 Thr Ile Al a Thr Ile 205 Thr Al a
Ser Asn 210 Ser Thr Al a Leu Asn 215 Ile Ser Pro Gly Glu 220 Ser Tyr Pro
Ly s 225 Gly Gin Asn Gly Ile 230 Al a Ile Thr Ser Me t 235 Asp Asp Phe Asn
Hi s Pro Ile Thr Leu 245 Asn Lys Lys Gin Va 1 250 Asp Asn Leu Leu Asn 255
Lys Pro Me t Me t 260 Leu Glu Thr Asn Gin 265 Thr Asp Gly Val Tyr 270 Lys
Lys Asp Thr 275 Hi s Gly Asn Ile Val 280 Thr Gly Gly Glu Trp 285 Asn Gly
Ile Gin 290 Gin Ile Lys Al a Lys 295 Thr Al a Ser Ile Ile 300 Val Asp As p
Glu 305 Arg Val Al a Glu Lys 310 Arg Va 1 Al a Al a Ly s 315 As p Tyr Glu Asn
Glu Asp Lys Thr Pro 325 Ser Leu Thr Leu Ly s 330 Asp Al a Leu Lys Leu 335
Tyr Pro Asp Glu 340 Ile Lys Glu Ile Glu 345 Gly Leu Leu Tyr Tyr 350 Lys
Lys Pro Ile 355 Tyr Glu Ser Ser Val 360 Me t Thr Tyr Leu Asp 365 Glu Asn
Al a Lys 370 Glu Val Thr Ly s Gin 375 Leu Asn Asp Thr Thr 380 Gly Lys Phe
Asp 385 Val Ser Hi s Leu Tyr 390 As p Val Lys Leu Thr 395 Pro Lys Me t Asn
Thr Ile Lys Leu Ser 405 Ile Leu Tyr Asp Asn 410 Al a Glu Ser Asn As p 415
Ser Ile Gly Ly s 420 Trp Thr Asn Thr Asn 425 Ile Val Ser Gly Gly 430 Asn
Gly Lys Lys 435 Gin Tyr Ser Ser Asn 440 Asn Pro Asp Al a Asn 445 Leu Thr
Asn Thr 450 Asp Al a Gin Glu Lys 455 Leu Asn Lys Asn Arg 460 Asp Tyr Tyr
Ser 465 Leu Tyr Me t Lys Ser 470 Glu Lys Asn Thr Gin 475 Cy s Glu Ile Thr
Asp Gly Glu Ile Tyr Pro Ile Thr Thr Ly s Thr Val Asn Va 1 Asn
485 490 495
Thr
Lys
Lys
Ser
240
Asn
Ile
Val
Gly
Pro
320
Ser
Asn
Thr
Lys
Val
400
Asn
Asn
Leu
Ile
Ile
480
Lys
HU 222 264 Bl
Asp Asn Tyr Lys 500 Arg Leu Asp Ile Ile 505 Al a Hi s Asn Ile Ly s 510 Ser Asn
Pro Ile Ser Ser Leu His Ile Lys Thr Asn Asp Glu Ile Thr Leu Phe
515 520 525
Trp Asp Asp Ile Ser Ile Thr Asp Val Al a Ser Ile Lys Pro Glu Asn
530 535 540
Leu Thr Asp Ser Glu Ile Lys Gin Ile Tyr Ser Arg Tyr Gly Ile Lys
545 550 555 560
Leu Glu Asp Gl y Ile Leu Ile Asp Lys Lys Gly Gly Ile Hi s Tyr Gly
565 570 575
Glu Phe Ile Asn Glu Al a Ser Phe Asn Ile Glu Pro Leu Pro Asn Tyr
580 585 590
Val Thr Lys Tyr Glu Val Thr Tyr Ser Ser Glu Leu Gl y Pro Asn Val
595 600 605
Ser As p Thr Leu Glu Ser Asp Lys Ile Tyr Lys Asp Gly Thr Ile Lys
610 615 620
Phe Asp Phe Thr Lys Tyr Ser Lys Asn Glu Gin Gly Leu Phe Tyr Asp
625 630 635 640
Ser Gly Leu Asn Trp Asp Phe Ly s Ile Asn Al a Ile Thr Tyr Asp Gly
645 650 655
Lys Glu Me t Asn Val Phe Hi s Arg Tyr Asn Lys
660 665
A 8. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 16 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: peptid (iii) Hipotetikus: nem (v) Fragmentum típusa: N-terminális (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus cereus (B) Törzs: AB78 (C) Egyedi izolátum: NRRL B-21058 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1...16 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„az AB78 törzsből származó tisztított fehérje N-terminális szekvenciája” (xi) A 8. számú szekvencia leírása:
Lys Arg Glu Ile Asp Glu Asp Thr Asp Thr Asx Gly Asp Ser Ile Pro 15 10 15
A 9. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 21 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris
HU 222 264 Bl (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (iv) Antiszenz: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1...21 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„a 8. számú szekvencia 3-9. aminosavjain alapuló oligonukleotidpróba, a Bacillus thuringiensis kodon használatát alkalmazva” (xi) A 9. számú szekvencia leírása:
GAAATTGATC AAGATACNGA T 21
A 10. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 14 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: peptid (iii) Hipotetikus: nem (v) Fragmentum típusa: N-terminális (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus thuringiensis (B) Törzs: AB88 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1...14 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„23. anioncserélő (kisebb) frakcióként ismert fehéije N-terminális aminosavszekvenciája” (xi) A 10. számú szekvencia leírása:
Xaa Glu Pro Phe Val Ser Ala Xaa Xaa Xaa Gin Xaa Xaa Xaa 1 5 10
A 11. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 13 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: N-terminális (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus thuringiensis (xi) All. számú szekvencia leírása:
Xaa Glu Tyr Glu Asn Val Glu Pro Phe Val Ser Ala Xaa 1 5 10
A 12. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 14 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: N-terminális (vi) Eredeti fonás:
(A) Szervezet: Bacillus thuringiensis (xi) A 12. számú szekvencia leírása:
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Pro Thr Arg Ala Leu Pro 1 5 10
A 13. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 15 aminosav (B) Típus: aminosav
HU 222 264 Bl (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: peptid (iii) Hipotetikus: nem (v) Fragmentum típusa: N-terminális (vi) Eredeti fonás:
(A) Szervezet: Bacillus thuringiensis (B) Törzs: AB88 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1...15 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„az Agrotis ipsilon ellen aktív 35 kD VIP N-terminális aminosavszekven ciája” (xi) A 13. számú szekvencia leírása:
Alá Leu Ser Glu Asn Thr Gly Lys Asp Gly Gly Tyr Ile Val Pro 15 10 15
A 14. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 9 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: N-terminális (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus thuringiensis (xi) A 14. számú szekvencia leírása:
Met Asp Asn Asn Pro Asn Ile Asn Glu 1 5
A 15. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 9 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: peptid (iii) Hipotetikus: nem (v) Fragmentum típusa: N-terminális (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1.. .9 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„a 80 kD δ-endotoxin N-terminális szekvenciája” (xi) A 15. számú szekvencia leírása:
Met Asp Asn Asn Pro Asn Ile Asn Glu 1 5
A 16. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 11 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: peptid (iii) Hipotetikus: nem (v) Fragmentum típusa: N-terminális (vi) Eredeti forrás:
(A) Szervezet: Bacillus thuringiensis (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1... 11
HU 222 264 Bl (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„a 60 kD δ-endotoxin N-terminális szekvenciája” (xi) A 16. számú szekvencia leírása:
Met Asn Val Leu Asn Ser Gly Arg Thr Thr Ile 1 5 10
A 17. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2655 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (iv) Antiszenz: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1...2652 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„kukoricára optimált, az AB78-ból származó 100 kD VIPlA(a) fehérjét kódoló DNS-szekvencia” (xi) A 17. számú szekvencia leírása:
ATGAAGAACA TGAAGAAGAA GCTGGCCAGC GTGGTGACCT GCACCCTGCT GGCCCCCATG 60 TTCCTGAACG GCAACGTGAA CGCCGTGTAC GCCGACAGCA AGACCAACCA GATCAGCACC 120 ACCCAGAAGA ACCAGCAGAA GGAGATGGAC CGCAAGGGCC TGCTGGGCTA CTACTTCAAG 180 GGCAAGGACT TCAGCAACCT GACCATGTTC GCCCCCACGC GTGACAGCAC CCTGATCTAC 240 GACCAGCAGA CCGCCAACAA GCTGCTGGAC AAGAAGCAGC AGGAGTACCA GAGCATCCGC 300 TGGATCGGCC TGATCCAGAG CAAGGAGACC GGCGACTTCA CCTTCAACCT GAGCGAGGAC 360 GAGCAGGCCA TCATCGAGAT CAACGGCAAG ATCATCAGCA ACAAGGGCAA GGAGAAGCAG 420 GTGGTGCACC TGGAGAAGGG CAAGCTGGTG CCCATCAAGA TCGAGTACCA GAGCGACACC 480 AAGTTCAACA TCGACAGCAA GACCTTCAAG GAGCTGAAGC TTTTCAAGAT CGACAGCCAG 540 AACCAGCCCC AGCAGGTGCA GCAGGACGAG CTGCGCAACC CCGAGTTCAA CAAGAAGGAG 600 AGCCAGGAGT TCCTGGCCAA GCCCAGCAAG ATCAACCTGT TCACCCAGCA GATGAAGCGC 660 GAGATCGACG AGGACACCGA CACCGACGGC GACAGCATCC CCGACCTGTG GGAGGAGAAC 720 GGCTACACCA TCCAGAACCG CATCGCCGTG AAGTGGGACG ACAGCCTGGC TAGCAAGGGC 780 TACACCAAGT TCGTGAGCAA CCCCCTGGAG AGCCACACCG TGGGCGACCC CTACACCGAC 840 TACGAGAAGG CCGCCCGCGA CCTGGACCTG AGCAACGCCA AGGAGACCTT CAACCCCCTG 900 GTGGCCGCCT TCCCCAGCGT GAACGTGAGC ATGGAGAAGG TGATCCTGAG CCCCAACGAG 960 AACCTGAGCA ACAGCGTGGA GAGCCACTCG AGCACCAACT GGAGCTACAC CAACACCGAG 1020 GGCGCCAGCG TGGAGGCCGG CATCGGTCCC AAGGGCATCA GCTTCGGCGT GAGCGTGAAC 1080 TACCAGCACA GCGAGACCGT GGCCCAGGAG TGGGGCACCA GCACCGGCAA CACCAGCCAG 1140 TTCAACACCG CCAGCGCCGG CTACCTGAAC GCCAACGTGC GCTACAACAA CGTGGGCACC 1200 GGCGCCATCT ACGACGTGAA GCCCACCACC AGCTTCGTGC TGAACAACGA CACCATCGCC 1260 ACCATCACCG CCAAGTCGAA TTCCACCGCC CTGAACATCA GCCCCGGCGA GAGCTACCCC 1320 AAGAAGGGCC AGAACGGCAT CGCCATCACC AGCATGGACG ACTTCAACAG CCACCCCATC 1380 ACCCTGAACA AGAAGCAGGT GGACAACCTG CTGAACAACA AGCCCATGAT GCTGGAGACC 1440 AACCAGACCG ACGGCGTCTA CAAGATCAAG GACACCCACG GCAACATCGT GACCGGCGGC 1500 GAGTGGAACG GCGTGATCCA GCAGATCAAG GCCAAGACCG CCAGCATCAT CGTCGACGAC 1560 GGCGAGCGCG TGGCCGAGAA GCGCGTGGCC GCCAAGGACT ACGAGAACCC CGAGGACAAG 1620 ACCCCCAGCC TGACCCTGAA GGACGCCCTG AAGCTGAGCT ACCCCGACGA GATCAAGGAG 1680 ATCGAGGGCC TGCTGTACTA CAAGAACAAG CCCATCTACG AGAGCAGCGT GATGACCTAT 1740 CTAGACGAGA ACACCGCCAA GGAGGTGACC AAGCAGCTGA ACGACACCAC CGGCAAGTTC 1800 AAGGACGTGA GCCACCTGTA CGACGTGAAG CTGACCCCCA AGATGAACGT GACCATCAAG 1860 CTGAGCATCC TGTACGACAA CGCCGAGAGC AACGACAACA GCATCGGCAA GTGGACCAAC 1920 ACCAACATCG TGAGCGGCGG CAACAACGGC AAGAAGCAGT ACAGCAGCAA CAACCCCGAC 1980 GCCAACCTGA CCCTGAACAC CGACGCCCAG GAGAAGCTGA ACAAGAACCG CGACTACTAC 2040 ATCAGCCTGT ACATGAAGAG CGAGAAGAAC ACCCAGTGCG AGATCACCAT CGACGGCGAG 2100 ATATACCCCA TCACCACCAA GACCGTGAAC GTGAACAAGG ACAACTACAA GCGCCTGGAC 2160 ATCATCGCCC ACAACATCAA GAGCAACCCC ATCAGCAGCC TGCACATCAA GACCAACGAC 2220 GAGATCACCC TGTTCTGGGA CGACATATCG ATTACCGACG TCGCCAGCAT CAAGCCCGAG 2280 AACCTGACCG ACAGCGAGAT CAAGCAGATA TACAGTCGCT ACGGCATCAA GCTGGAGGAC 2340 GGCATCCTGA TCGACAAGAA GGGCGGCATC CACTACGGCG AGTTCATCAA CGAGGCCAGC 2400
HU 222 264 Β1
TTCAACATCG AGCCCCTGCA GAACTACGTG ACCAAGTACG AGGTGACCTA CAGCAGCGAG 2460 CTGGGCCCCA ACGTGAGCGA CACCCTGGAG AGCGACAAGA TTTACAAGGA CGGCACCATC 2520 AAGTTCGACT TCACCAAGTA CAGCAAGAAC GAGCAGGGCC TGTTCTACGA CAGCGGCCTG 2580 AACTGGGACT TCAAGATCAA CGCCATCACC TACGACGGCA AGGAGATGAA CGTGTTCCAC 2640 CGCTACAACA AGTAG 2655
A 18. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2004 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (iv) Antiszenz: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1.. .2004 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„kukoricára optimált, az AB78-ból származó 80 kD VIPlA(a) fehéijét kódoló DNS-szekvencia” (xi) A 18. számú szekvencia leírása:
ATGAAGCGCG AGATCGACGA GGACACCGAC GAGGAGAACG GCTACACCAT CCAGAACCGC AGCAAGGGCT ACACCAAGTT CGTGAGCAAC TACACCGACT ACGAGAAGGC CGCCCGCGAC AACCCCCTGG TGGCCGCCTT CCCCAGCGTG CCCAACGAGA ACCTGAGCAA CAGCGTGGAG AACACCGAGG GCGCCAGCGT GGAGGCCGGC AGCGTGAACT ACCAGCACAG CGAGACCGTG ACCAGCCAGT TCAACACCGC CAGCGCCGGC GTGGGCACCG GCGCCATCTA CGACGTGAAG ACCATCGCCA CCATCACCGC CAAGTCGAAT AGCTACCCCA AGAAGGGCCA GAACGGCATC CACCCCATCA CCCTGAACAA GAAGCAGGTG CTGGAGACCA ACCAGACCGA CGGCGTCTAC ACCGGCGGCG AGTGGAACGG CGTGATCCAG GTCGACGACG GCGAGCGCGT GGCCGAGAAG GAGGACAAGA CCCCCAGCCT GACCCTGAAG ATCAAGGAGA TCGAGGGCCT GCTGTACTAC ATGACCTATC TAGACGAGAA CACCGCCAAG GGCAAGTTCA AGGACGTGAG CCACCTGTAC ACCATCAAGC TGAGCATCCT GTACGACAAC TGGACCAACA CCAACATCGT GAGCGGCGGC AACCCCGACG CCAACCTGAC CCTGAACACC GACTACTACA TCAGCCTGTA CATGAAGAGC GACGGCGAGA TATACCCCAT CACCACCAAG CGCCTGGACA TCATCGCCCA CAACATCAAG ACCAACGACG AGATCACCCT GTTCTGGGAC AAGCCCGAGA ACCTGACCGA CAGCGAGATC CTGGAGGACG GCATCCTGAT CGACAAGAAG GAGGCCAGCT TCAACATCGA GCCCCTGCAG AGCAGCGAGC TGGGCCCCAA CGTGAGCGAC GGCACCATCA AGTTCGACTT CACCAAGTAC AGCGGCCTGA ACTGGGACTT CAAGATCAAC GTGTTCCACC GCTACAACAA GTAG
ACCGACGGCG ACAGCATCCC CGACCTGTGG 60 ATCGCCGTGA AGTGGGACGA CAGCCTGGCT 120 CCCCTGGAGA GCCACACCGT GGGCGACCCC 180 CTGGACCTGA GCAACGCCAA GGAGACCTTC 240 AACGTGAGCA TGGAGAAGGT GATCCTGAGC 300 AGCCACTCGA GCACCAACTG GAGCTACACC 360 ATCGGTCCCA AGGGCATCAG CTTCGGCGTG 420 GCCCAGGAGT GGGGCACCAG CACCGGCAAC 480 TACCTGAACG CCAACGTGCG CTACAACAAC 540 CCCACCACCA GCTTCGTGCT GAACAACGAC 600 TCCACCGCCC TGAACATCAG CCCCGGCGAG 660 GCCATCACCA GCATGGACGA CTTCAACAGC 720 GACAACCTGC TGAACAACAA GCCCATGATG 780 AAGATCAAGG ACACCCACGG CAACATCGTG 840 CAGATCAAGG CCAAGACCGC CAGCATCATC 900 CGCGTGGCCG CCAAGGACTA CGAGAACCCC 960 GACGCCCTGA AGCTGAGCTA CCCCGACGAG 1020 AAGAACAAGC CCATCTACGA GAGCAGCGTG 1080 GAGGTGACCA AGCAGCTGAA CGACACCACC 1140 GACGTGAAGC TGACCCCCAA GATGAACGTG 1200 GCCGAGAGCA ACGACAACAG CATCGGCAAG 1260 AACAACGGCA AGAAGCAGTA CAGCAGCAAC 1320 GACGCCCAGG AGAAGCTGAA CAAGAACCGC 1380 GAGAAGAACA CCCAGTGCGA GATCACCATC 1440 ACCGTGAACG TGAACAAGGA CAACTACAAG 1500 AGCAACCCCA TCAGCAGCCT GCACATCAAG 1560 GACATATCGA TTACCGACGT CGCCAGCATC 1620 AAGCAGATAT ACAGTCGCTA CGGCATCAAG 1680 GGCGGCATCC ACTACGGCGA GTTCATCAAC 1740 AACTACGTGA CCAAGTACGA GGTGACCTAC 1800 ACCCTGGAGA GCGACAAGAT TTACAAGGAC 1860 AGCAAGAACG AGCAGGGCCT GTTCTACGAC 1920 GCCATCACCT ACGACGGCAA GGAGATGAAC 1980
2004
A 19. számú szekvencia adatai: (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 4074 bázispár (B) Típus: nukleinsav
HU 222 264 Bl (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 1...1386 (D) Egyéb információ: /termék=„őíí-ből származó VIP2A(b)” (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 1394...3895 (D) Egyéb információ: /termék=„Btt-bő\ származó VIPlA(b)” (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1.. .4074 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„klónozott DNS-szekvencia „B/f-ből, amely tartalmazza mind a VIPla(b)-t, mind a VIP2A(b)-t kódoló gént” (xi) A 19. számú szekvencia leírása:
ATG CAA AGA ATG GAG GGA AAG TTG TTT GTG GTG TCA AAA ACA TTA CAA 48
Me t Gin Arg 670 Me t Glu Gly Lys Leu 675 Phe Val Val Ser Lys 680 Thr Leu Gin
GTA GTT ACT AGA ACT GTA TTG CTT AGT ACA GTT TAC TCT ATA ACT TTA 96
Val Val Thr Arg Thr Val Leu Leu Ser Thr Val Tyr Ser Ile Thr Leu
685 690 695
TTA AAT AAT GTA GTG ATA AAA GCT GAC CAA TTA AAT ATA AAT TCT CAA 144
Leu Asn Asn Val Val Ile Lys Al a Asp Gin Leu Asn Ile Asn Ser Gin
700 705 710 715
AGT AAA TAT ACT AAC TTG CAA AAT CTA AAA ATC CCT GAT AAT GCA GAG 192
Ser Ly s Tyr Thr Asn Leu Gin Asn Leu Lys Ile Pro Asp Asn Al a Glu
720 725 730
GAT TTT AAA GAA GAT AAG GGG AAA GCG AAA GAA TGG GGG AAA GAG AAA 240
Asp Phe Lys Glu Asp Lys Gly Ly s Al a Lys Glu Trp Gly Lys Glu Lys
735 740 745
GGG GAA GAG TGG AGG CCT CCT GCT ACT GAG AAA GGA GAA ATG AAT AAT 288
Gly Glu Glu Trp Arg Pro Pro Al a Thr Glu Ly s Gly Glu Me t Asn Asn
750 755 760
TTT TTA GAT AAT AAA AAT GAT ATA AAG ACC AAT TAT AAA GAA ATT ACT 336
Phe Leu Asp Asn Ly s Asn Asp Ile Lys Thr Asn Tyr Lys Glu Ile Thr
765 770 775
TTT TCT ATG GCA GGT TCA TGT GAA GAT GAA ATA AAA GAT TTA GAA GAA 384
Phe Ser Me t Al a Gly Ser Cys Glu Asp Glu Ile Lys Asp Leu Glu Glu
780 785 790 795
ATT GAT AAG ATC TTT GAT AAA GCC AAT CTC TCG AGT TCT ATT ATC ACC 432
Ile Asp Lys Ile Phe As p Lys Al a Asn Leu Se r Ser Ser Ile Ile Thr
800 805 810
TAT AAA AAT GTG GAA CCA GCA ACA ATT GGA TTT AAT AAA TCT TTA ACA 480
Tyr Lys Asn Val Glu Pro Al a Thr Ile Gly Phe Asn Lys Ser Leu Thr
815 820 825
GAA GGT AAT ACG ATT AAT TCT GAT GCA ATG GCA CAG TTT AAA GAA CAA 528
Glu Gly Asn Thr Ile Asn Ser As p Al a Me t Al a Gin Phe Lys Glu Gin
830 835 840
HU 222 264 Β1
TTT TTA GGT AAG GAT ATG Me t AAG TTT GAT AGT TAT CTA GAT ACT Thr CAT Hi s TTA Leu 576
Phe Leu Gly 845 Lys Asp Lys 850 Phe Asp Ser Tyr Leu 855 Asp
ACT GCT CAA CAA GTT TCC AGT AAA AAA AGA GTT ATT TTG AAG GTT ACG 624
Thr 860 Alá Gin Gin Val Ser 865 Ser Lys Lys Arg Val 870 Ile Leu Ly s Val Thr 875
GTT CCG AGT GGG AAA GGT TCT ACT ACT CCA ACA AAA GCA GGT GTC ATT 672
Val Pro Ser Gly Lys 880 Gly Ser Thr Thr Pro 885 Thr Lys Al a Gly Val 890 Ile
TTA AAC AAT AAT GAA TAC AAA ATG CTC ATT GAT AAT GGG TAT GTG CTC 720
Leu Asn Asn Asn 895 Glu Tyr Lys Met Leu 900 Ile Asp Asn Gly Tyr 905 Val Leu
CAT GTA GAT AAG GTA TCA AAA GTA GTA AAA AAA GGG ATG GAG TGC TTA 768
Hi s Val Asp 910 Lys Val Ser Lys Val Val 915 Lys Lys Gly Me t 920 Glu Cy s Leu
CAA GTT GAA GGG ACT TTA AAA AAG AGT CTC GAC TTT AAA AAT GAT ATA 816
Gin Val Glu 925 Gly Thr Leu Lys 930 Lys Ser Leu Asp Phe 935 Ly s Asn Asp Ile
AAT GCT GAA GCG CAT AGC TGG GGG ATG AAA ATT TAT GAA GAC TGG GCT 864
Asn 940 Alá Glu Al a Hi s Ser 945 Trp G1 y Me t Lys Ile 950 Tyr Glu Asp Trp Al a 955
AAA AAT TTA ACC GCT TCG CAA AGG GAA GCT TTA GAT GGG TAT GCT AGG 912
Lys Asn Leu Thr Al a 960 Ser Gin Arg Glu Al a 965 Leu Asp Gly Tyr Al a 970 Arg
CAA GAT TAT AAA GAA ATC AAT AAT TAT TTG CGC AAT CAA GGC GGG AGT 960
Gin Asp Tyr Lys 975 Glu Ile Asn Asn Tyr 980 Leu Arg Asn Gin Gly 985 Gly Ser
GGA AAT GAA AAG CTG GAT GCC CAA TTA AAA AAT ATT TCT GAT GCT TTA 1008
Gly Asn Glu 990 Lys Leu Asp Al a Gin Leu 995 Lys Asn Ile Ser Asp 1000 Al a Leu
GGG AAG AAA CCC ATA CCA GAA AAT ATT ACC GTG TAT AGA TGG TGT GGC 1056
Gly Lys Lys 1005 Pro Ile Pro G1u Asn Ile 1010 Thr Val Tyr Arg 1015 Trp Cys Gly
ATG CCG GAA TTT GGT TAT CAA ATT AGT GAT CCG TTA CCT TCT TTA AAA 1104
Met Pro Glu 1020 Phe Gly Tyr Gin 1025 Ile Ser Asp Pro Leu 1030 Pro Ser Leu Lys 1035
GAT TTT GAA GAA CAA TTT TTA AAT ACA ATT AAA GAA GAC AAA GGG TAT 1152
Asp Phe Glu Glu Gin Phe 1040 Leu Asn Thr Ile Lys 1045 Glu Asp Ly s Gly Tyr 1050
ATG AGT ACA AGC TTA TCG AGT GAA CGT CTT GCA GCT TTT GGA TCT AGA 1200
Me t Ser Thr Ser Leu 1055 Ser Ser Glu Arg Leu 1060 Al a Al a Phe Gly Ser 1065 Arg
AAA ATT ATA TTA CGC TTA CAA GTT CCG AAA GGA AGT ACG GGG GCG TAT 1248
Lys Ile Ile Leu Arg Leu G1 n Val Pro Lys Gly Ser Thr Gly Al a Tyr
1070 1075 1080
HU 222 264 Β1
TTA Leu AGT GCC Ser Alá 1085 ATT Ile GGT Gly GGA Gly TTT GCA Phe Alá 1090 AGT Ser GAA Glu AAA Ly s GAG ATC Glu Ile 1095 CTA Leu CTT Leu GAT Asp 1296
AAA GAT AGT AAA TAT CAT ATT GAT AAA GCA ACA GAG GTA ATC ATT AAA 1344
Lys Asp Ser Lys Tyr Hi s Ile Asp Lys Al a Thr Glu Val Ile Ile Lys
1100 1105 1110 1115
GGT GTT AAG CGA TAT GTA GTG GAT GCA ACA TTA TTA ACA AAT 1386
Gly Val Lys Arg Tyr Val Val Asp Al a Thr Leu Leu Thr Asn
1120 1125
TAAGGAG ATG AAA AAT ATG AAG AAA AAG TTA GCA AGT GTT GTA ACC TGT 1435
Me t Lys Asn Me t Lys Lys Lys Leu Al a Ser Val Val Thr Cys
1 5 10
ATG TTA TTA GCT CCT ATG TTT TTG AAT GGA AAT GTG AAT GCT GTT AAC 1483
Me t Leu Leu Al a Pro Me t Phe Leu Asn Gly Asn Val Asn Alá Val Asn
15 20 25 30
GCG GAT AGT AAA ATA AAT CAG ATT TCT ACA ACG CAG GAA AAC CAA CAG 1531
Al a Asp Ser Lys Ile Asn Gin Ile Ser Thr Thr Gin Glu Asn Gin Gin
35 40 45
AAA GAG ATG GAC CGA AAG GGA TTA TTG GGA TAT TAT TTC AAA GGA AAA 1579
Lys Glu Me t Asp Arg Lys Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Phe Ly s Gly Lys
50 55 60
GAT TTT AAT AAT CTT ACT ATG TTT GCA CCG ACA CGT GAT AAT ACC CTT 1627
Asp Phe Asn Asn Leu Thr Me t Phe Al a Pro Thr Arg Asp Asn Thr Leu
65 70 75
ATG TAT GAC CAA CAA ACA GCG AAT GCA TTA TTA GAT AAA AAA CAA CAA 1675
Me t Tyr Asp Gin Gin Thr Alá Asn Alá Leu Leu Asp Lys Lys Gin Gin
80 85 90
GAA TAT CAG TCC ATT CGT TGG ATT GGT TTG ATT CAG CGT AAA GAA ACG 1723
Glu Tyr Gin Ser Ile Arg Trp Ile Gly Leu Ile Gin Arg Ly s Glu Thr
95 100 105 110
GGC GAT TTC ACA TTT AAC TTA TCA AAG GAT GAA CAG GCA ATT ATA GAA 1771
Gly Asp Phe Thr Phe Asn Leu Ser Lys Asp Glu Gin Alá Ile Ile Glu
115 120 125
ATC GAT GGG AAA ATC ATT TCT AAT AAA GGG AAA GAA AAG CAA GTT GTC 1819
Ile Asp Gly Lys Ile Ile Ser Asn Lys Gly Ly s Glu Lys Gin Val Val
130 135 140
CAT TTA GAA AAA GAA AAA TTA GTT CCA ATC AAA ATA GAG TAT CAA TCA 1867
Hi s Leu Glu Lys Glu Lys Leu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gin Ser
145 150 155
GAT ACG AAA TTT AAT ATT GAT AGT AAA ACA TTT AAA GAA CTT AAA TTA 1915
Asp Thr Lys Phe Asn Ile Asp Ser Lys Thr Phe Lys Glu Leu Lys Leu
160 165 170
TTT AAA ATA GAT AGT CAA AAC CAA TCT CAA CAA GTT CAA CTG AGA AAC 1963
Phe Lys Ile Asp Ser Gin Asn Gin Ser Gin Gin Val Gin Leu Arg Asn
175 180 185 190
HU 222 264 Bl
CCT GAA TTT AAC AAA AAA GAA TCA CAG GAA TTT TTA GCA AAA GCA TCA
Pro Glu Phe Asn Lys 195 Lys Glu Ser Gin Glu 200 Phe Leu Al a Lys Al a 205 Ser
AAA ACA AAC CTT TTT AAG CAA AAA ATG AAA AGA GAT ATT GAT GAA GAT
Ly s Thr Asn Leu 210 Phe Lys Gin Lys Me t 215 Lys Arg Asp Ile Asp 220 Glu Asp
ACG GAT ACA GAT GGA GAC TCC ATT CCT GAT CTT TGG GAA GAA AAT GGG
Thr Asp Thr 225 Asp Gly As p Ser Ile 230 Pro Asp Leu Trp Glu 235 G1 u Asn Gly
TAC ACG ATT CAA AAT AAA GTT GCT GTC AAA TGG GAT GAT TCG CTA GCA
Tyr Thr 240 Ile Gin Asn Lys Val 245 Al a Val Lys Trp Asp 250 Asp Se r Leu Al a
AGT AAG GGA TAT ACA AAA TTT GTT TCG AAT CCA TTA GAC AGC CAC ACA
Ser 255 Ly s Gly Tyr Thr Ly s 260 Phe Val Ser Asn Pro 265 Leu Asp Ser Hi s Thr 270
GTT GGC GAT CCC TAT ACT GAT TAT GAA AAG GCC GCA AGG GAT TTA GAT
Val Gly Asp Pro Tyr 275 Thr Asp Tyr Glu Ly s 280 Al a Al a Arg As p Leu 285 Asp
TTA TCA AAT GCA AAG GAA ACG TTC AAC CCA TTG GTA GCT GCT TTT CCA
Leu Ser Asn Alá 290 Lys Glu Thr Phe Asn 295 Pro Leu Val Al a Al a 300 Phe Pro
AGT GTG AAT GTT AGT ATG GAA AAG GTG ATA TTA TCA CCA AAT GAA AAT
Ser Val Asn 305 Val Ser Me t Glu Ly s 310 Val Ile Leu Ser Pro 315 Asn Glu Asn
TTA TCC AAT AGT GTA GAG TCT CAT TCA TCC ACG AAT TGG TCT TAT ACG
Leu Ser 320 Asn Ser Val Glu Ser 325 Hi s Ser Ser Thr Asn 330 Trp Se r Tyr Thr
AAT ACA GAA GGA GCT TCC ATT GAA GCT GGT GGC GGT CCA TTA GGC CTT
Asn 335 Thr Glu Gly Al a Ser 340 Ile Glu Al a Gly Gly 345 G1 y Pro Leu Gly Leu 350
TCT TTT GGC GTG AGT GTT ACT TAT CAA CAC TCT GAA ACA GTT GCA CAA
Ser Phe Gly Val Ser 355 Val Thr Tyr Gin Hi s 360 Ser Glu Thr Val Al a 365 Gin
GAA TGG GGA ACA TCT ACA GGA AAT ACT TCA CAA TTC AAT ACG GCT TCA
Glu Trp Gly Thr 370 Se r Thr Gly Asn Thr 375 Ser Gin Phe Asn Thr 380 Al a Ser
GCG GGA TAT TTA AAT GCA AAT GTT CGG TAT AAC AAT GTA GGG ACT GGT
Alá Gly Tyr 385 Leu Asn Al a Asn Val 390 Arg Tyr Asn Asn Val 395 Gly Thr Gly
GCC ATC TAT GAT GTA AAA CCT ACA ACA AGT TTT GTA TTA AAT AAC AAT
Al a Ile 400 Tyr Asp Val Lys Pro 405 Thr Thr Ser Phe Val 410 Leu Asn Asn Asn
ACC ATC GCA ACG ATT ACA GCA AAA TCA AAT TCA ACA GCT TTA CGT ATA
Thr 415 Ile Al a Thr Ile Thr 420 Al a Lys Ser Asn Ser 425 Thr Al a Leu Arg Ile 430
2011
2059
2107
2155
2203
2251
2299
2347
2395
2443
2491
2539
2587
2635
2683
HU 222 264 Β1
TCT CCG GGG GAT AGT TAT CCA GAA ATA GGA GAA AAC GCT ATT GCG ATT
Ser Pro Gly Asp Ser 435 Tyr Pro Glu Ile Gly 440 Glu Asn Al a Ile Al a 445 Ile
ACA TCT ATG GAT GAT TTT AAT TCT CAT CCA ATT ACA TTA AAT AAA CAA
Thr Ser Me t Asp 450 Asp Phe Asn Ser Hi s 455 Pro Ile Thr Leu Asn 460 Lys Gin
CAG GTA AAT CAA TTG ATA AAT AAT AAG CCA ATT ATG CTA GAG ACA GAC
Gin Val Asn 465 Gin Leu Ile Asn Asn 470 Lys Pro Ile Me t Leu 475 Glu Thr Asp
CAA ACA GAT GGT GTT TAT AAA ATA AGA GAT ACA CAT GGA AAT ATT GTA
Gin Thr 480 Asp Gly Va 1 Tyr Lys 485 Ile Arg Asp Thr Hi s 490 Gly Asn Ile Val
ACT GGT GGA GAA TGG AAT GGT GTA ACA CAA CAA ATT AAA GCA AAA ACA
Thr 495 Gly Gly Glu Trp Asn 500 Gly Val Thr Gin Gin 505 Ile Lys Al a Lys Thr 510
GCG TCT ATT ATT GTG GAT GAC GGG AAA CAG GTA GCA GAA AAA CGT GTG
Al a Ser Ile Ile Val 515 Asp Asp Gly Lys Gin 520 Val Al a Glu Ly s Arg 525 Val
GCG GCA AAA GAT TAT GGT CAT CCA GAA GAT AAA ACA CCA CCT TTA ACT
Al a Ala Ly s Asp 530 Tyr Gly Hi s Pro Glu 535 Asp Ly s Thr Pr o Pro 540 Leu Thr
TTA AAA GAT ACC CTG AAG CTT TCA TAC CCA GAT GAA ATA AAA GAA ACT
Leu Lys Asp 545 Thr Leu Lys Leu Ser 550 Tyr Pro Asp Glu Ile 555 Ly s Glu Thr
AAT GGA TTG TTG TAC TAT GAT GAC AAA CCA ATC TAT GAA TCG AGT GTC
Asn Gly 560 Leu Leu Tyr Tyr Asp 565 Asp Lys Pro Ile Tyr 570 Glu Ser Ser Val
ATG ACT TAT CTG GAT GAA AAT ACG GCA AAA GAA GTC AAA AAA CAA ATA
Me t 575 Thr Tyr Leu Asp Glu 580 Asn Thr Al a Lys G1 u 585 Val Lys Lys Gin Ile 590
AAT GAT ACA ACC GGA AAA TTT AAG GAT GTA AAT CAC TTA TAT GAT GTA
Asn Asp Thr Thr Gly 595 Lys Phe Lys Asp Val 600 Asn Hi s Leu Tyr Asp 605 Val
AAA CTG ACT CCA AAA ATG AAT TTT ACG ATT AAA ATG GCT TCC TTG TAT
Lys Leu Thr Pro 610 Lys Me t Asn Phe Thr 615 Ile Lys Me t Al a Ser 620 Leu Tyr
GAT GGG GCT GAA AAT AAT CAT AAC TCT TTA GGA ACC TGG TAT TTA ACA
Asp Gly Ala 625 Glu Asn Asn Hi s Asn 630 Ser Leu Gly Thr Trp 635 Tyr Leu Thr
TAT AAT GTT GCT GGT GGA AAT ACT GGG AAG AGA CAA TAT CGT TCA GCT
Tyr Asn 640 Val Al a Gly Gly Asn 645 Thr Gly Lys Arg Gin 650 Tyr Arg Ser Al a
CAT TCT TGT GCA CAT GTA GCT CTA TCT TCA GAA GCG AAA AAG AAA CTA
Hi s 655 Ser Cys Al a Hi s Val 660 Al a Leu Ser Ser Glu 665 Al a Lys Lys Lys Leu 670
2731
2779
2827
2875
2923
2971
3019
3067
3115
3163
3211
3259
3307
3355
3403
HU 222 264 Β1
AAT CAA AAT GCG Al a AAT Asn 675 TAC TAT CTT AGC ATG TAT ATG AAG GCT Al a GAT Asp 685 TCT Ser 3451
Asn Gin Asn Tyr Tyr Leu Ser Me t 680 Tyr Me t Lys
ACT ACG GAA CCT ACA ATA GAA GTA GCT GGG GAA AAA TCT GCA ATA ACA 3499
Thr Thr Glu Pro 690 Thr Ile Glu Val Al a 695 Gly Glu Lys Ser Al a 700 Ile Thr
AGT AAA AAA GTA AAA TTA AAT AAT CAA AAT TAT CAA AGA GTT GAT ATT 3547
Ser Lys Lys 705 Val Ly s Leu Asn Asn 710 Gin Asn Tyr Gin Arg 715 Va 1 Asp Ile
TTA GTG AAA AAT TCT GAA AGA AAT CCA ATG GAT AAA ATA TAT ATA AGA 3595
Leu Val 720 Ly s Asn Ser Glu Arg 725 Asn Pro Me t As p Lys 730 Ile Tyr Ile Arg
GGA AAT GGC ACG ACA AAT GTT TAT GGG GAT GAT GTT ACT ATC CCA GAG 3643
Gly 735 Asn Gly Thr Thr Asn 740 Val Tyr Gly Asp Asp 745 Val Thr Ile Pro Glu 750
GTA TCA GCT ATA AAT CCG GCT AGT CTA TCA GAT GAA GAA ATT CAA GAA 3691
Val Ser Al a Ile Asn 755 Pro Al a Ser Leu Ser 760 Asp Glu Glu Ile Gin 765 Glu
ATA TTT AAA GAC TCA ACT ATT GAA TAT GGA AAT CCT AGT TTC GTT GCT 3739
Ile Phe Lys Asp 770 Ser Thr Ile Glu Tyr 775 Gly Asn Pro Ser Phe 780 Val Al a
GAT GCC GTA ACA TTT AAA AAT ATA AAA CCT TTA CAA AAT TAT GTA AAG 3787
Asp Al a Val 785 Thr Phe Ly s Asn Ile 790 Lys Pro Leu Gin Asn 795 Tyr Val Lys
GAA TAT GAA ATA TAT CAT AAA TCT CAT CGA TAT GAA AAG AAA ACG GTC 3835
Glu Tyr 800 Glu Ile Tyr Hi s Lys 805 Ser Hi s Arg Tyr Glu 810 Lys Lys Thr Val
TTT GAT ATC ATG GGT GTT CAT TAT GAG TAT AGT ATA GCT AGG GAA CAA 3883
Phe 815 Asp Ile Me t Gly Val 820 Hi s Tyr Glu Tyr Ser 825 Ile Al a Arg Glu Gin 830
AAG AAA GCC GCA TAATTTTAAA AATAAAACTC GTTAGAGTTT ATTTAGCATG 393 5
Lys Lys Alá Alá
GTATTTTTAA GAATAATCAA TATGTTGAAC CGTTTGTAGC TGTTTTGGAA GGGAATTTCA 3995 TTTTATTTGG TCTCTTAAGT TGATGGGCAT GGGATATGTT CAGCATCCAA GCGTTTNGGG 4055 GGTTANAAAA TCCAATTTT 4074
A 20. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 462 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehérje (xi) A 20. számú szekvencia leírása:
Met Gin Arg Met Glu Gly Lys Leu Phe Val Val Ser Lys Thr Leu Gin 15 10 15
Val Val Thr Arg Thr Val Leu Leu Ser Thr Val Tyr Ser Ile Thr Leu 20 25 30
HU 222 264 Bl
Leu Asn Asn 35 Val Val Ile Lys Al a 40 Asp Gin Leu Asn Ile 45 Asn Ser Gin
Ser Lys 50 Tyr Thr Asn Leu Gin 55 Asn Leu Lys Ile Pro 60 Asp Asn Al a Glu
Asp 65 Phe Lys Glu As p Lys 70 Gly Ly s Al a Lys Glu 75 Trp Gly Lys Glu Lys 80
Gly Glu Glu Trp Arg 85 Pro Pro Al a Thr Glu 90 Lys Gly Glu Me t Asn 95 Asn
Phe Leu Asp Asn 100 Ly s Asn Asp Ile Lys 105 Thr Asn Tyr Lys Glu 110 Ile Thr
Phe Ser Me t 115 Al a Gly Ser Cys G1 u 120 Asp Glu Ile Lys Asp 125 Leu Glu Glu
Ile Asp 130 Lys Ile Phe Asp Lys 135 Al a Asn Leu Se r Ser 140 Ser Ile Ile Thr
Tyr 145 Lys Asn Val Glu Pro 150 Al a Thr Ile Gly Phe 155 Asn Ly s Ser Leu Thr 160
Glu Gly Asn Thr Ile 165 Asn Ser Asp Al a Me t 170 Al a Gin Phe Ly s Glu 175 Gin
Phe Leu Gly Lys 180 As p Me t Lys Phe Asp 185 Ser Tyr Leu Asp Thr 190 Hi s Leu
Thr Al a Gin 195 Gin Val Ser Ser Lys 200 Lys Arg Val Ile Leu 205 Lys Val Thr
Val Pro 210 Ser Gly Lys Gly Ser 215 Thr Thr Pro Thr Lys 220 Al a Gly Val Ile
Leu 225 Asn Asn Asn Glu Tyr 230 Lys Me t Leu Ile As p 235 Asn Gly Tyr Val Leu 240
Hi s Val Asp Lys Val 245 Ser Lys Val Val Lys 250 Ly s Gly Me t Glu Cys 255 Leu
Gin Val G1 u Gly 260 Thr Leu Lys Lys Ser 265 Leu As p Phe Lys Asn 270 Asp Ile
Asn Al a Glu 275 Ala Hi s Ser Trp Gly 280 Me t Lys Ile Tyr Glu 285 Asp Trp Al a
Lys Asn 290 Leu Thr Al a Ser Gin 295 Arg Glu Al a Leu Asp 300 Gly Tyr Al a Arg
Gin 305 As p Tyr Lys Glu Ile 310 Asn Asn Tyr Leu Arg 315 Asn Gin Gly Gly Ser 320
Gly Asn Glu Lys Leu 325 Asp Al a Gin Leu Lys 330 Asn Ile Ser Asp Al a 335 Leu
Gly Ly s Lys Pro 340 Ile Pro Glu Asn Ile 345 Thr Val Tyr Arg Trp 350 Cy s Gly
HU 222 264 Bl
Me t Pro Glu Phe Gly Tyr Gin Ile Ser Asp Pro Leu Pro Ser Leu Lys
355 360 365
Asp Phe Glu Glu Gin Phe Leu Asn Thr Ile Lys Glu Asp Lys Gly Tyr
370 375 380
Me t Ser Thr Ser Leu Ser Ser Glu Arg Leu Al a Al a Phe Gly Ser Arg
385 390 395 400
Lys Ile Ile Leu Arg Leu Gin Val Pro Lys Gly Ser Thr Gly Al a Tyr
405 410 415
Leu Ser Al a Ile G1 y Gly Phe Al a Ser Glu Ly s Glu Ile Leu Leu Asp
420 425 430
Lys Asp Ser Lys Tyr Hi s Ile Asp Ly s Al a Thr Glu Va 1 Ile Ile Lys
435 440 445
Gly Val Lys Arg Tyr Val Val As p Al a Thr Leu Leu Thr Asn
450 455 460
A 21. számú szekvencia adatai: (i) A szekvencia jellemzői:
(A)Hossz: 834aminosav
(B) Típus: aminosav
(D) Topológia: lineáris
(ii) Molekula típusa: fehéije
(xi)A21 . számú szekvencia leírása
Me t Ly s Asn Me t Lys Lys Lys Leu Al a Ser Val Val Thr Cy s Me t Leu
1 5 10 15
Leu Al a Pro Me t Phe Leu Asn Gly Asn Val Asn Al a Val Asn Al a Asp
20 25 30
Ser Lys Ile Asn Gin Ile Ser Thr Thr Gin Glu Asn Gin Gin Lys G1 u
35 40 45
Me t Asp Arg Lys Gly Leu Leu G1 y Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Thr Me t Phe Al a Pro Thr Arg As p Asn Thr Leu Me t Tyr
65 70 75 80
Asp Gin Gin Thr Al a Asn Al a Leu Leu Asp Ly s Lys Gin Gin Glu Tyr
85 90 95
Gin Ser Ile Arg Trp Ile Gly Leu Ile Gin Arg Lys Glu Thr Gly Asp
100 105 110
Phe Thr Phe Asn Leu Ser Lys As p Glu Gin Al a Ile Ile Glu Ile Asp
115 120 125
Gly Lys Ile Ile Ser Asn Lys Gly Lys Glu Lys Gin Val Val Hi s Leu
130 135 140
Glu Lys Glu Lys Leu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gin Ser Asp Thr
145 150 155 160
Lys Phe Asn I1e As p Ser Lys Thr Phe Lys Glu Leu Lys Leu Phe Lys
165 170 175
HU 222 264 BI
Ile As p Ser Gin 180 As n Gin Ser Gin Gin 185 Val Gin Leu Arg Asn 190 Pro Glu
Phe Asn Lys 195 Ly s Glu Ser Gin Glu 200 Phe Leu Al a Lys Al a 205 Se r Lys Thr
Asn Leu 210 Phe Lys Gin Lys Me t 215 Lys Arg As p Ile Asp 220 Glu As p Thr Asp
Thr 225 Asp Gly Asp Ser Ile 230 Pro Asp Leu Trp Glu 235 Glu Asn G1 y Tyr Thr 240
Ile Gin Asn Lys Val 245 Al a Val Ly s Trp Asp 250 As p Ser Leu Al a Ser 255 Lys
Gly Tyr Thr Ly s 260 Phe Va 1 Ser Asn Pro 265 Leu As p Ser Hi s Thr 270 Val Gly
Asp Pro Tyr 275 Thr Asp Tyr Glu Lys 280 Al a Al a Arg Asp Leu 285 Asp Leu Ser
Asn Al a 290 Lys Glu Thr Phe Asn 295 Pro Leu Val Al a Al a 300 Phe Pro Ser Val
Asn 305 Val Ser Me t Glu Lys 310 Val Ile Leu Ser Pro 315 Asn Glu Asn Leu Ser 320
Asn Ser Val G1 u Ser 325 Hi s Ser Ser Thr Asn 330 Trp Ser Tyr Thr Asn 335 Thr
Glu Gly Al a Ser 340 Ile Glu Al a Gly Gly 345 Gly Pro Leu Gly Leu 350 Ser Phe
Gly Val Ser 355 Val Thr Tyr Gin Hi s 360 Ser Glu Thr Val Al a 365 Gin Glu Trp
Gly Thr 370 Ser Thr Gly Asn Thr 375 Ser Gin Phe As n Thr 380 Al a Ser Al a Gly
Tyr 385 Leu Asn Al a Asn Val 390 Arg Tyr Asn Asn Va 1 395 Gly Thr Gly Al a Ile 400
Tyr Asp Val Lys Pro 405 Thr Thr Ser Phe Val 410 Leu Asn Asn Asn Thr 415 Ile
Al a Thr Ile Thr 420 Al a Lys Ser Asn Ser 425 Thr Al a Leu Arg Ile 430 Ser Pro
Gly Asp Ser 435 Tyr Pro Glu Ile G1 y 440 Glu Asn Al a Ile Al a 445 Ile Thr Ser
Me t Asp 450 As p Phe Asn Ser Hi s 455 Pro Ile Thr Leu Asn 460 Ly s Gin Gin Val
Asn 465 Gin Leu Ile Asn Asn 470 Lys Pro Ile Me t Leu 475 Glu Thr Asp Gin Thr 480
Asp Gly Val Tyr Ly s 485 Ile Arg Asp Thr Hi s 490 Gly Asn Ile Val Thr 495 Gly
HU 222 264 Bl
Gly Glu Trp Asn 500 Gly Val Thr Gin Gin 505 Ile Lys Al a Lys Thr 510 Al a Ser
Ile Ile Val 515 Asp Asp Gly Lys Gin 520 Val Al a Glu Lys Arg 525 Val Al a Al a
Lys Asp 530 Tyr Gly Hi s Pro Glu 535 Asp Ly s Thr Pro Pro 540 Leu Thr Leu Lys
Asp 545 Thr Leu Lys Leu Ser 550 Tyr Pro Asp Glu Ile 555 Lys Glu Thr Asn Gly 560
Leu Leu Tyr Tyr Asp 565 Asp Lys Pro Ile Tyr 570 Glu Ser Ser Val Me t 575 Thr
Tyr Leu Asp Glu 580 Asn Thr Al a Lys Glu 585 Val Ly s Lys Gin Ile 590 Asn Asp
Thr Thr Gly 595 Lys Phe Lys Asp Val 600 Asn Hi s Leu Tyr Asp 605 Val Lys Leu
Thr Pro 610 Lys Me t Asn Phe Thr 615 Ile Lys Me t Al a Ser 620 Leu Tyr Asp Gly
Ala 625 Glu Asn Asn Hi s Asn 630 Ser Leu Gly Thr Trp 635 Tyr Leu Thr Tyr Asn 640
Val Al a Gly Gly Asn 645 Thr Gly Ly s Arg Gin 650 Tyr Arg Ser Al a Hi s 655 Ser
Cys Al a Hi s Val 660 Al a Leu Ser Ser Glu 665 Al a Lys Lys Lys Leu 670 Asn Gin
Asn Al a Asn 675 Tyr Tyr Leu Ser Me t 680 Tyr Me t Lys Al a Asp 685 Ser Thr Thr
Glu Pro 690 Thr Ile Glu Val Al a 695 Gly Glu Lys Ser Al a 700 Ile Thr Ser Lys
Lys 705 Va 1 Lys Leu Asn Asn 710 Gin Asn Tyr Gin Arg 715 Val Asp Ile Leu Val 720
Lys Asn Ser Glu Arg 725 Asn Pro Me t Asp Lys 730 Ile Tyr Ile Arg Gly 735 Asn
Gly Thr Thr Asn 740 Val Tyr Gly As p Asp 745 Val Thr Ile Pro Glu 750 Val Ser
Al a Ile Asn 755 Pro Al a Ser Leu Ser 760 Asp Glu Glu Ile Gin 765 Glu Ile Phe
Lys Asp 770 Ser Thr Ile Glu Tyr 775 Gly Asn Pro Ser Phe 780 Val Al a As p Al a
Val 785 Thr Phe Lys Asn Ile 790 Lys Pro Leu Gin Asn 795 Tyr Val Lys Glu Tyr 800
Glu Ile Tyr Hi s Lys 805 Ser Hi s Arg Tyr Glu 810 Lys Lys Thr Va 1 Phe 815 Asp
HU 222 264 BI
Ile Met Gly Val His Tyr Glu Tyr Ser Ile Alá Arg Glu Gin Lys Lys 820 825 830
Alá Alá
A 22. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 4041 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 1.. .4038 (D) Egyéb információ: /termék=„VIP lA(a)/VIP2A(a) fúziós termék” (xi) A 22. számú szekvencia leírása:
ATG AAA AGA ATG GAG GGA AAG Lys TTG TTT ATG GTG TCA AAA AAA Lys TTA CAA 48
Me t 835 Lys Arg Met Glu Gly 840 Leu Phe Me t Val 845 Ser Lys Leu Gin 850
GTA GTT ACT AAA ACT GTA TTG CTT AGT ACA GTT TTC TCT ATA TCT TTA 96
Val Val Thr Ly s Thr Va 1 Leu Leu Ser Thr Val Phe Ser Ile Ser Leu
855 860 865
TTA AAT AAT GAA GTG ATA AAA GCT GAA CAA TTA AAT ATA AAT TCT CAA 144
Leu As n Asn Glu Va 1 Ile Ly s Al a Glu Gin Leu Asn Ile Asn Ser Gin
870 875 880
AGT AAA TAT ACT AAC TTG CAA AAT CTA AAA ATC ACT GAC AAG GTA GAG 192
Ser Lys Tyr Thr Asn Leu Gin Asn Leu Lys Ile Thr Asp Lys Val G1 u
885 890 895
GAT TTT AAA GAA GAT AAG GAA AAA GCG AAA GAA TGG GGG AAA GAA AAA 240
Asp Phe Lys Glu As p Ly s Glu Lys Al a Lys Glu Trp Gly Lys Glu Lys
900 905 910
GAA AAA GAG TGG AAA CTA ACT GCT ACT GAA AAA GGA AAA ATG AAT AAT 288
Glu Lys Glu Trp Lys Leu Thr Al a Thr Glu Lys Gly Lys Me t Asn Asn
915 920 925 930
TTT TTA GAT AAT AAA AAT GAT ATA AAG ACA AAT TAT AAA GAA ATT ACT 336
Phe Leu Asp Asn Lys Asn Asp Ile Lys Thr Asn Tyr Lys Glu Ile Thr
935 940 945
TTT TCT ATG GCA GGC TCA TTT GAA GAT GAA ATA AAA GAT TTA AAA GAA 384
Phe Ser Me t Al a G1 y Ser Phe Glu Asp G1 u Ile Lys Asp Leu Lys Glu
950 955 960
ATT GAT AAG ATG TTT GAT AAA ACC AAT CTA TCA AAT TCT ATT ATC ACC 432
Ile Asp Lys Me t Phe Asp Lys Thr Asn Leu Ser Asn Ser Ile Ile Thr
965 970 975
TAT AAA AAT GTG GAA CCG ACA ACA ATT GGA TTT AAT AAA TCT TTA ACA 480
Tyr Lys Asn Val Glu Pro Thr Thr Ile Gly Phe Asn Lys Ser Leu Thr
980 985 990
GAA GGT AAT ACG ATT AAT TCT GAT GCA ATG GCA CAG TTT AAA GAA CAA 528
Glu Gly Asn Thr Ile Asn Ser Asp Al a Me t Al a Gin Phe Lys Glu Gin
995 1000 1005 1010
HU 222 264 Bl
TTT Phe TTA GAT AGG GAT ATT AAG TTT GAT
Leu Asp Arg Asp Ile 1015 Lys Phe Asp
ACT GCT CAA CAA GTT TCC AGT AAA GAA
Thr Al a Gin Gin Val Ser 1030 Ser Lys Glu 103:
GTT CCG AGT GGG AAA GGT TCT ACT ACT
Val Pro Ser Gly 1045 Lys Gly Ser Thr Thr 1050
TTA AAT AAT AGT GAA TAC AAA ATG CTC
Leu Asn Asn 1060 Ser Glu Tyr Ly s Me t 1065 Leu
CAT GTA GAT AAG GTA TCA AAA GTG GTG
His Val 1075 Asp Lys Val Ser Lys 1080 Val Val
CAA ATT GAA GGG ACT TTA AAA AAG AGT
Gin Ile Glu Gly Thr Leu 1095 Lys Ly s Ser
AAT GCT GAA GCG CAT AGC TGG GGT ATG
Asn Al a Glu Alá His Ser 1110 Trp Gly Me t 111
AAA GAT TTA ACC GAT TCG CAA AGG GAA
Lys Asp Leu Thr 1125 Asp Ser Gin Arg Glu 1130
CAA GAT TAT AAA GAA ATC AAT AAT TAT
Gin Asp Tyr 1140 Lys Glu Ile Asn Asn 1145 Tyr
GGA AAT GAA AAA CTA GAT GCT CAA ATA
Gly Asn 1155 Glu Lys Leu Asp Alá 1160 Gin Ile
GGG AAG AAA CCA ATA CCG GAA AAT ATT
Gly Lys Lys Pro Ile Pro 1175 Glu Asn Ile
ATG CCG GAA TTT GGT TAT CAA ATT AGT
Me t Pro Glu Phe Gly Tyr 1190 Gin Ile Ser 119:
GAT TTT GAA GAA CAA TTT TTA AAT ACA
Asp Phe Glu 1205 Glu Gin Phe Leu Asn Thr 1210
ATG AGT ACA AGC TTA TCG AGT GAA CGT
Me t Ser Thr 1220 Ser Leu Ser Ser Glu 1225 Arg
AAA ATT ATA TTA CGA TTA CAA GTT CCG
Lys Ile Ile Leu Arg Leu Gin Va 1 Pro
1235 1240
AGT TAT Ser Tyr 1020 CTA Leu GAT ACG CAT TTA His Leu 1025 576
Asp Thr
AGA GTT ATT TTG AAG GTT ACG 624
Arg Val Ile Leu Lys Val Thr 1040
CCA ACA AAA GCA GGT GTC ATT 672
Pro Thr Lys Al a Gly Val Ile
1055
ATT Ile GAT Asp AAT GGG Asn Gly 1070 TAT ATG GTC 720
Tyr Me t Val
AAA AAA GGG GTG GAG TGC TTA 768
Lys Lys Gly Val Glu Cys Leu
1085 1090
CTT GAC TTT AAA AAT GAT ATA 816
Leu Asp Phe Ly s Asn Asp Ile
1100 1105
AAG AAT TAT GAA GAG TGG GCT 864
Lys Asn Tyr Glu Glu Trp Al a
1120
GCT Al a TTA GAT GGG TAT Gly Tyr 1135 GCT Al a AGG Arg 912
Leu Asp
TTA AGA AAT CAA GGC GGA AGT 960
Leu Arg Asn Gin Gly 1150 Gly Ser
AAA AAT ATT TCT GAT GCT TTA 1008
Lys Asn Ile 1165 Ser Asp Al a Leu 1170
ACT GTG TAT AGA TGG TGT GGC 1056
Thr Val 1180 Tyr Arg Trp Cys Gly 1185
GAT CCG TTA CCT TCT TTA AAA 1104
Asp Pro Leu Pro Ser Leu Lys
1200
ATC Ile AAA Ly s GAA Glu GAC AAA GGA TAT Asp Lys Gly Tyr 1215 1152
CTT GCA GCT TTT GGA TCT AGA 1200
Leu Al a Alá Phe Gly Ser Arg
1230
AAA GGA AGT ACG GGT GCG TAT 1248
Lys Gly Ser Thr Gly Al a Tyr
1245 1250
HU 222 264 Bl
TTA Leu AGT Ser GCC Al a ATT Ile GGT GGA Gly Gly 1255 TTT Phe GCA Al a AGT Ser GAA AAA Glu Lys 1260 GAG Glu ATC Ile CTA Leu CTT GAT Leu Asp 1265
AAA GAT AGT AAA TAT CAT ATT GAT AAA GTA ACA GAG GTA ATT ATT AAA
Lys Asp Ser Lys Tyr His 1270 Ile Asp Lys Val Thr 1275 Glu Val Ile Ile Lys 1280
GGT GTT AAG CGA TAT GTA GTG GAT GCA ACA TTA TTA ACA AAT ATG AAA
Gly Val Lys Arg 1285 Tyr Val Val Asp Ala 1290 Thr Leu Leu Thr Asn 1295 Me t Lys
AAT ATG AAG AAA AAG TTA GCA AGT GTT GTA ACG TGT ACG TTA TTA GCT
Asn Met Lys 1300 Lys Lys Leu Ala Ser 1305 Val Val Thr Cys Thr 1310 Leu Leu Ala
CCT ATG TTT TTG AAT GGA AAT GTG AAT GCT GTT TAC GCA GAC AGC AAA
Pro Me t 1315 Phe Leu Asn Gly Asn 1320 Val Asn Ala Val Tyr 1325 Al a Asp Ser Lys 1330
ACA AAT CAA ATT TCT ACA ACA CAG AAA AAT CAA CAG AAA GAG ATG GAC
Thr Asn Gin Ile Ser Thr 1335 Thr Gin Lys Asn Gin 1340 Gin Ly s Glu Me t Asp 1345
CGA AAA GGA TTA CTT GGG TAT TAT TTC AAA GGA AAA GAT TTT AGT AAT
Arg Lys Gly Leu Leu Gly 1350 Tyr Tyr Phe Lys Gly 1355 Lys Asp Phe Ser Asn 1360
CTT ACT ATG TTT GCA CCG ACA CGT GAT AGT ACT CTT ATT TAT GAT CAA
Leu Thr Me t Phe 1365 Ala Pro Thr Arg Asp 1370 Ser Thr Leu Ile Tyr 1375 Asp Gin
CAA ACA GCA AAT AAA CTA TTA GAT AAA AAA CAA CAA GAA TAT CAG TCT
Gin Thr Ala 1380 Asn Lys Leu Leu Asp 1385 Lys Lys Gin Gin Glu 1390 Tyr Gin Ser
ATT CGT TGG ATT GGT TTG ATT CAG AGT AAA GAA ACG GGA GAT TTC ACA
Ile Arg 1395 Trp Ile Gly Leu Ile 1400 Gin Ser Lys Glu Thr 1405 Gly Asp Phe Thr 1410
TTT AAC TTA TCT GAG GAT GAA CAG GCA ATT ATA GAA ATC AAT GGG AAA
Phe Asn Leu Ser Glu Asp 1415 Glu Gin Al a Ile Ile 1420 Glu Ile Asn Gly Lys 1425
ATT ATT TCT AAT AAA GGG AAA GAA AAG CAA GTT GTC CAT TTA GAA AAA
Ile Ile Ser Asn Lys Gly 1430 Lys Glu Lys Gin Val 1435 Val Hi s Leu Glu Lys 1440
GGA AAA TTA GTT CCA ATC AAA ATA GAG TAT CAA TCA GAT ACA AAA TTT
Gly Lys Leu 144Í Val Pro Ile Lys Ile Glu 1450 Tyr Gin Ser Asp Thr 1455 Lys Phe
AAT ATT GAC AGT AAA ACA TTT AAA GAA CTT AAA TTA TTT AAA ATA GAT
Asn Ile Asp 1460 Ser Lys Thr Phe Lys 1465 Glu Leu Lys Leu Phe 1470 Lys Ile Asp
AGT CAA AAC CAA CCC CAG CAA GTC CAG CAA GAT GAA CTG AGA AAT CCT
Ser Gin 1475 Asn Gin Pro Gin Gin 1480 Val Gin Gin Asp Glu 1485 Leu Arg Asn Pro 1490
1296
1344
1392
1440
1488
1536
1584
1632
1680
1728
1776
1824
1872
1920
1968
HU 222 264 Bl
GAA Glu TTT Phe AAC Asn AAG Lys AAA GAA Lys Glu 1495 TCA Ser CAG Gin GAA Glu TTC TTA Phe Leu 1500 GCG Al a AAA Lys CCA Pro TCG AAA Ser Lys 1505
ATA AAT CTT TTC ACT CAA AAA ATG AAA AGG GAA ATT GAT GAA GAC ACG
Ile Asn Leu Phe Thr Gin 1510 Ly s Me t Lys Arg Glu 1515 Ile Asp Glu Asp Thr 1520
GAT ACG GAT GGG GAC TCT ATT CCT GAC CTT TGG GAA GAA AAT GGG TAT
Asp Thr Asp Gly 1525 Asp Ser Ile Pro Asp 1530 Leu Trp Glu Glu Asn 1535 Gly Tyr
ACG ATT CAA AAT AGA ATC GCT GTA AAG TGG GAC GAT TCT CTA GCA AGT
Thr Ile Gin 1540 Asn Arg Ile Alá Val 1545 Lys Trp Asp Asp Ser 1550 Leu Alá Ser
AAA GGG TAT ACG AAA TTT GTT TCA AAT CCA CTA GAA AGT CAC ACA GTT
Lys Gly 1555 Tyr Thr Lys Phe Val 1560 Ser Asn Pro Leu Glu 1565 Ser Hi s Thr Val 1570
GGT GAT CCT TAT ACA GAT TAT GAA AAG GCA GCA AGA GAT CTA GAT TTG
Gly Asp Pro Tyr Thr Asp 1575 Tyr Glu Lys Alá Alá 1580 Arg Asp Leu Asp Leu 1585
TCA AAT GCA AAG GAA ACG TTT AAC CCA TTG GTA GCT GCT TTT CCA AGT
Ser Asn Al a Lys Glu Thr 1590 Phe Asn Pro Leu Val 1595 Al a Al a Phe Pro Ser 1600
GTG AAT GTT AGT ATG GAA AAG GTG ATA TTA TCA CCA AAT GAA AAT TTA
Val Asn Val Ser 1605 Me t Glu Lys Val Ile 1610 Leu Ser Pro Asn Glu 1615 Asn Leu
TCC AAT AGT GTA GAG TCT CAT TCA TCC ACG AAT TGG TCT TAT ACA AAT
Ser Asn Ser 1620 Val Glu Ser His Ser 1625 Ser Thr Asn Trp Ser 1630 Tyr Thr Asn
ACA GAA GGT GCT TCT GTT GAA GCG GGG ATT GGA CCA AAA GGT ATT TCG
Thr Glu 1635 Gly Al a Ser Val Glu 1640 Al a Gly Ile Gly Pro 1645 Lys Gly Ile Ser 1650
TTC GGA GTT AGC GTA AAC TAT CAA CAC TCT GAA ACA GTT GCA CAA GAA
Phe Gly Val Ser Val Asn 1655 Tyr Gin His Ser Glu 1660 Thr Val Al a Gin Glu 1665
TGG GGA ACA TCT ACA GGA AAT ACT TCG CAA TTC AAT ACG GCT TCA GCG
Trp Gly Thr Ser Thr Gly 1670 Asn Thr Ser Gin Phe 1675 Asn Thr Alá Ser Alá 1680
GGA TAT TTA AAT GCA AAT GTT CGA TAT AAC AAT GTA GGA ACT GGT GCC
Gly Tyr Leu 168Í Asn Alá Asn Val Arg Tyr 1690 Asn Asn Val Gly Thr 1695 Gly Alá
ATC TAC GAT GTA AAA CCT ACA ACA AGT TTT GTA TTA AAT AAC GAT ACT
Ile Tyr Asp 1700 Val Lys Pro Thr Thr 1705 Ser Phe Val Leu 171C Asn 1 Asn Asp Thr
ATC GCA ACT ATT ACG GCG AAA TCT AAT TCT ACA GCC TTA AAT ATA TCT
Ile 1715 Al a Thr Ile Thr Alá Lys 1720 Ser Asn Ser Thr Alá 1725 Leu Asn Ile Ser 1730
2016
2064
2112
2160
2208
2256
2304
2352
2400
2448
2496
2544
2592
2640
2688
HU 222 264 Bl
CCT GGA GAA AGT TAC CCG AAA AAA GGA CAA AAT GGA ATC GCA ATA ACA 2736
Pro Gly Glu Ser Tyr Pro Lys Lys Gly Gin Asn Gly Ile Alá Ile Thr
1735 1740 1745
TCA ATG GAT GAT TTT AAT TCC CAT CCG ATT ACA TTA AAT AAA AAA CAA 2784
Ser Me t Asp Asp Phe Asn Ser His Pro Ile Thr Leu Asn Lys Lys Gin
1750 1755 1760
GTA GAT AAT CTG CTA AAT AAT AAA CCT ATG ATG TTG GAA ACA AAC CAA 2832
Val Asp Asn Leu Leu Asn Asn Lys Pro Met Met Leu Glu Thr Asn Gin
1765 1770 1775
ACA GAT GGT GTT TAT AAG ATA AAA GAT ACA CAT GGA AAT ATA GTA ACT 2880
Thr Asp Gly Val Tyr Lys Ile Lys Asp Thr His Gly Asn Ile Val Thr
1780 1785 1790
GGC GGA GAA TGG AAT GGT GTC ATA CAA CAA ATC AAG GCT AAA ACA GCG 2928
Gly Gly Glu Trp Asn Gly Val Ile Gin Gin Ile Lys Alá Lys Thr Alá
1795 1800 1805 1810
TCT ATT ATT GTG GAT GAT GGG GAA CGT GTA GCA GAA AAA CGT GTA GCG 2976
Ser Ile Ile Val Asp Asp Gly Glu Arg Val Alá Glu Lys Arg Val Alá
1815 1820 1825
GCA AAA GAT TAT GAA AAT CCA GAA GAT AAA ACA CCG TCT TTA ACT TTA 3024
Alá Lys Asp Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Lys Thr Pro Ser Leu Thr Leu
1830 1835 1840
AAA GAT GCC CTG AAG CTT TCA TAT CCA GAT GAA ATA AAA GAA ATA GAG 307 2
Lys Asp Alá Leu Lys Leu Ser Tyr Pro Asp Glu Ile Lys Glu Ile Glu
1845 1850 1855
GGA TTA TTA TAT TAT AAA AAC AAA CCG ATA TAC GAA TCG AGC GTT ATG 3120
Gly Leu Leu Tyr Tyr Lys Asn Lys Pro Ile Tyr Glu Ser Ser Val Me t
1860 1865 1870
ACT TAC TTA GAT GAA AAT ACA GCA AAA GAA GTG ACC AAA CAA TTA AAT 3168
Thr Tyr Leu Asp Glu Asn Thr Alá Lys Glu Val Thr Lys Gin Leu Asn
1875 1880 1885 1890
GAT ACC ACT GGG AAA TTT AAA GAT GTA AGT CAT TTA TAT GAT GTA AAA 3216
Asp Thr Thr Gly Lys Phe Lys Asp Val Ser His Leu Tyr Asp Val Lys
1895 1900 1905
CTG ACT CCA AAA ATG AAT GTT ACA ATC AAA TTG TCT ATA CTT TAT GAT 3264
Leu Thr Pro Lys Met Asn Val Thr Ile Lys Leu Ser Ile Leu Tyr Asp
1910 1915 1920
AAT GCT GAG TCT AAT GAT AAC TCA ATT GGT AAA TGG ACA AAC ACA AAT 3312
Asn Alá Glu Ser Asn Asp Asn Ser Ile Gly Lys Trp Thr Asn Thr Asn
1925 1930 1935
ATT GTT TCA GGT GGA AAT AAC GGA AAA AAA CAA TAT TCT TCT AAT AAT 3 360
Ile Val Ser Gly Gly Asn Asn Gly Lys Lys Gin Tyr Ser Ser Asn Asn
1940 1945 1950
CCG GAT GCT AAT TTG ACA TTA AAT ACA GAT GCT CAA GAA AAA TTA AAT 3408
Pro Asp Alá Asn Leu Thr Leu Asn Thr Asp Alá Gin Glu Lys Leu Asn
1955 1960 1965 1970
HU 222 264 Β1
AAA Lys AAT Asn CGT Arg GAC Asp TAT TAT Tyr Tyr 1975 ATA Ile AGT Ser TTA Leu TAT ATG Tyr Me t 1980 AAG Lys TCA Ser GAA Glu AAA AAC Lys Asn 1985
ACA CAA TGT GAG ATT ACT ATA GAT GGG GAG ATT TAT CCG ATC ACT ACA
Thr Gin Cys Glu Ile Thr 1990 Ile Asp Gly Glu Ile 1995 Tyr Pro Ile Thr Thr 2000
AAA ACA GTG AAT GTG AAT AAA GAC AAT TAC AAA AGA TTA GAT ATT ATA
Lys Thr Val Asn 2005 Val Asn Lys Asp Asn 2010 Tyr Lys Arg Leu Asp 2015 Ile Ile
GCT CAT AAT ATA AAA AGT AAT CCA ATT TCT TCA CTT CAT ATT AAA ACG
Al a His Asn 2020 Ile Lys Ser Asn Pro 2025 Ile Ser Ser Leu His 2030 Ile Lys Thr
AAT GAT GAA ATA ACT TTA TTT TGG GAT GAT ATT TCT ATA ACA GAT GTA
Asn Asp 2035 Glu Ile Thr Leu Phe 2040 Trp Asp Asp Ile Ser 2045 Ile Thr Asp Val 2050
GCA TCA ATA AAA CCG GAA AAT TTA ACA GAT TCA GAA ATT AAA CAG ATT
Al a Ser Ile Lys Pro Glu 2055 Asn Leu Thr Asp Ser 2060 Glu Ile Ly s Gin Ile 2065
TAT AGT AGG TAT GGT ATT AAG TTA GAA GAT GGA ATC CTT ATT GAT AAA
Tyr Ser Arg Tyr Gly Ile 2070 Lys Leu Glu Asp Gly 2075 Ile Leu Ile Asp Lys 2080
AAA GGT GGG ATT CAT TAT GGT GAA TTT ATT AAT GAA GCT AGT TTT AAT
Lys Gly Gly Ile 2085 His Tyr Gly Glu Phe 2090 Ile Asn Glu Alá Ser 2095 Phe Asn
ATT GAA CCA TTG CAA AAT TAT GTG ACC AAA TAT GAA GTT ACT TAT AGT
Ile Glu Pro 2100 Leu Gin Asn Tyr Val 2105 Thr Lys Tyr Glu Val 2110 Thr Tyr Ser
AGT GAG TTA GGA CCA AAC GTG AGT GAC ACA CTT GAA AGT GAT AAA ATT
Ser Glu 2115 Leu Gly Pro Asn Val 2120 Ser Asp Thr Leu Glu 2125 Ser Asp Lys Ile 2130
TAC AAG GAT GGG ACA ATT AAA TTT GAT TTT ACC AAA TAT AGT AAA AAT
Tyr Lys Asp Gly Thr Ile 2135 Ly s Phe Asp Phe Thr 2140 Ly s Tyr Se r Lys Asn 2145
GAA CAA GGA TTA TTT TAT GAC AGT GGA TTA AAT TGG GAC TTT AAA ATT
Glu Gin Gly Leu Phe Tyr 2150 Asp Ser Gly Leu Asn 2155 Trp Asp Phe Lys Ile 2160
AAT GCT ATT ACT TAT GAT GGT AAA GAG ATG AAT GTT TTT CAT AGA TAT
Asn AAT Al a AAA Ile 2165 TAG Thr Tyr Asp Gly Lys Glu 2170 Met Asn Val Phe 2175 Hi s Arg Tyr
Asn Lys 2180
3456
3504
3552
3600
3648
3696
3744
3840
3888
3936
3984
4032
4041
3792
HU 222 264 Β1
A 23. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 1346 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehérje (xi) A 23. számú szekvencia leírása:
Me t 1 Lys Arg Me t Glu 5 Gly Lys Leu Phe Me t 10 Val Ser Lys Ly s Leu 15 Gin
Val Val Thr Lys 20 Thr Val Leu Leu Ser 25 Thr Val Phe Ser Ile 30 Ser Leu
Leu Asn Asn 35 Glu Va 1 Ile Lys Al a 40 Glu Gin Leu Asn Ile 45 Asn Ser Gin
Ser Lys 50 Tyr Thr Asn Leu Gin 55 Asn Leu Lys Ile Thr 60 Asp Ly s Val Glu
Asp 65 Phe Lys Glu As p Lys 70 Glu Lys Al a Lys Glu 75 Trp Gly Ly s Glu Lys 80
Glu Ly s Glu Trp Lys 85 Leu Thr Al a Thr Glu 90 Lys Gly Lys Me t Asn 95 Asn
Phe Leu Asp Asn 100 Lys Asn Asp Ile Lys 105 Thr Asn Tyr Lys Glu 110 Ile Thr
Phe Ser Me t 115 Al a Gly Ser Phe Glu 120 Asp Glu Ile Lys Asp 125 Leu Lys Glu
Ile Asp 130 Lys Me t Phe Asp Lys 135 Thr Asn Leu Ser Asn 140 Ser Ile Ile Thr
Tyr 145 Lys Asn Val Glu Pro 150 Thr Thr Ile Gly Phe 155 Asn Lys Ser Leu Thr 160
Glu Gly Asn Thr Ile 165 Asn Ser Asp Al a Me t 170 Alá Gin Phe Lys Glu 175 Gin
Phe Leu Asp Arg 180 Asp Ile Lys Phe Asp 185 Ser Tyr Leu Asp Thr 190 Hi s Leu
Thr Al a Gin 195 Gin Val Ser Ser Ly s 200 Glu Arg Va 1 Ile Leu 205 Lys Val Thr
Val Pro 210 Ser Gly Lys Gly Ser 215 Thr Thr Pro Thr Lys 220 Al a Gly Val Ile
Leu 225 Asn Asn Ser Glu Tyr 230 Lys Me t Leu Ile Asp 235 Asn Gly Tyr Me t Val 240
His Val Asp Lys Val 245 Ser Lys Val Val Lys 250 Lys Gly Val Glu Cys 255 Leu
Gin Ile Glu Gly 260 Thr Leu Lys Lys Ser 265 Leu Asp Phe Lys Asn 270 Asp Ile
Asn Al a Glu 275 Al a Hi s Ser Trp Gly 280 Me t Ly s Asn Tyr Glu 285 Glu Trp Al a
HU 222 264 Bl
Lys Asp 290 Leu Thr Asp Ser Gin 295 Arg Glu Al a Leu Asp 300 Gly Tyr Al a Arg
Gin 305 Asp Tyr Lys Glu Ile 310 Asn Asn Tyr Leu Arg 315 Asn Gin Gly Gly Ser 320
Gly Asn Glu Lys Leu 325 Asp Al a Gin Ile Lys 330 Asn Ile Ser Asp Ala 335 Leu
Gly Lys Lys Pro 340 Ile Pro Glu Asn Ile 345 Thr Val Tyr Arg Trp 350 Cys Gly
Me t Pro Glu 355 Phe Gly Tyr Gin Ile 360 Ser Asp Pro Leu Pro 365 Ser Leu Lys
Asp Phe 370 Glu Glu Gin Phe Leu 375 Asn Thr Ile Lys Glu 380 Asp Ly s Gly Tyr
Me t 385 Ser Thr Ser Leu Ser 390 Ser Glu Arg Leu Al a 395 Al a Phe Gly Ser Arg 400
Lys Ile Ile Leu Arg 405 Leu Gin Val Pro Lys 410 Gly Ser Thr Gly Al a 415 Tyr
Leu Ser Al a Ile 420 Gly Gly Phe Al a Ser 425 Glu Lys Glu Ile Leu 430 Leu Asp
Lys Asp Ser 435 Lys Tyr Hi s Ile As p 440 Lys Val Thr Glu Val 445 Ile Ile Lys
Gly Val 450 Lys Arg Tyr Val Val 455 Asp Al a Thr Leu Leu 460 Thr Asn Me t Lys
Asn 465 Me t Lys Lys Lys Leu 470 Al a Ser Val Val Thr 475 Cys Thr Leu Leu Al a 480
Pro Me t Phe Leu Asn 485 Gly Asn Val Asn Ala 490 Val Tyr Al a Asp Ser 495 Lys
Thr Asn Gin Ile 500 Ser Thr Thr Gin Lys 505 Asn Gin Gin Lys Glu 510 Me t Asp
Arg Lys G1 y 515 Leu Leu Gly Tyr Tyr 520 Phe Lys Gly Lys Asp 525 Phe Ser Asn
Leu Thr 530 Me t Phe Al a Pro Thr 535 Arg Asp Ser Thr Leu 540 Ile Tyr Asp Gin
Gin 545 Thr Ala Asn Ly s Leu 550 Leu Asp Lys Lys Gin 555 Gin Glu Tyr Gin Ser 560
Ile Arg Trp Ile Gly 565 Leu Ile Gin Ser Lys 570 Glu Thr Gly Asp Phe 575 Thr
Phe Asn Leu Ser 580 Glu Asp Glu Gin Al a 585 Ile Ile Glu Ile Asn 590 Gly Lys
Ile Ile Ser Asn Lys Gly Lys Glu Lys Gin Val Val Hi s Leu Glu Lys
595 600 605
HU 222 264 Β1
Gly Ly s 610
Asn 625 Ile
Ser Gin
Glu Phe
Ile Asn
Asp Thr 690
Thr 705 Ile
Lys Gly
Gly As p
Ser Asn
Val Asn 770
Ser 785 Asn
Thr Glu
Phe Gly
Trp Gly
Gly Tyr 850
Ile 865 Tyr
Ile Al a
Pro Gly
Ser Me t
Leu Val
Asp Ser
Asn Gin
Asn Lys 660
Leu Phe 675
Asp Gly
Gin Asn
Tyr Thr
Pro Tyr 740
Alá Lys 755
Val Ser
Ser Val
Gly Alá
Val Ser 820
Thr Ser 835
Leu Asn
Asp Val
Thr Ile
Glu Ser 900
Asp Asp 915
Pro Ile
Lys Thr 630
Pro Gin 645
Lys Glu
Thr Gin
Asp Ser
Arg Ile 710
Lys Phe 725
Thr Asp
Glu Thr
Me t Glu
Glu Ser 790
Ser Val 805
Val Asn
Thr Gly
Alá Asn
Lys Pro 870
Thr Alá 885
Tyr Pro
Phe Asn
Lys Ile 615
Phe Lys
Gin Val
Ser Gin
Ly s Me t 680
Ile Pro 695
Alá Val
Val Ser
Tyr Glu
Phe Asn 760
Lys Val 775
His Ser
Glu Alá
Tyr Gin
Asn Thr 840
Val Arg 855
Thr Thr
Lys Ser
Lys Lys
Ser His 920
Glu Tyr
Glu Leu
Gin Gin 650
Glu Phe 665
Lys Arg
Asp Leu
Lys Trp
Asn Pro 730
Lys Alá 745
Pro Leu
I1e Leu
Ser Thr
Gly Ile 810
His Ser 825
Ser Gin
Tyr Asn
Ser Phe
Asn Ser 890
Gly Gin 905
Pro Ile
Gin Ser 620
Lys Leu 635
Asp Glu
Leu Alá
Glu Ile
Trp Glu 700
Asp Asp 715
Leu Glu
Alá Arg
Val Alá
Ser Pro 780
Asn Trp 795
Gly Pro
Glu Thr
Phe Asn
Asn Val 860
Val Leu 875
Thr Alá
Asn Gly
Thr Leu
Asp Thr
Phe Lys
Leu Arg
Lys Pro 670
Asp Glu 685
Glu Asn
Ser Leu
Ser His
Asp Leu 750
Alá Phe 765
Asn Glu
Ser Tyr
Lys Gly
Val Alá 830
Thr Alá 845
Gly Thr
Asn Asn
Leu Asn
Ile Alá 910
Asn Lys 925
Lys Phe
Ile Asp 640
Asn Pro 655
Ser Lys
Asp Thr
Gly Tyr
Alá Ser 720
Thr Val 735
Asp Leu
Pro Ser
Asn Leu
Thr Asn 800
Ile Ser 815
Gin Glu
Ser Alá
Gly Alá
Asp Thr 880
Ile Ser 895
Ile Thr
Lys Gin
HU 222 264 BI
Val Asp Asn Leu Leu Asn Asn Ly s Pro Me t Me t Leu Glu Thr 940 Asn Gin
930 935
Thr 945 Asp Gly Val Tyr Lys Ile 950 Lys Asp Thr Hi s 955 G1y Asn Ile Val Thr 960
Gly Gly Glu Trp Asn Gly Val 965 Ile Gin Gin 970 Ile Lys Alá Lys Thr 975 Alá
Ser Ile Ile Val Asp Asp Gly 980 Glu Arg Val 985 Al a Glu Lys Arg 990 Val Al a
Al a Lys Asp 995 Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Lys 1000 Thr Pro Ser Leu 1005 Thr Leu
Lys Asp Alá 1010 Leu Lys Leu Ser Tyr 1015 Pro Asp Glu Ile Lys Glu 1020 Ile Glu
Gly Leu Leu 1025 Tyr Tyr Lys Asn 1030 Lys Pro Ile Tyr Glu Ser Ser 1035 Val Me t 1040
Thr Tyr Leu Asp Glu Asn Thr 1045 Al a Lys Glu Val 1050 Thr Lys Gin Leu Asn 1055
Asp Thr Thr Gly Lys Phe Lys 1060 As p Val Ser 1065 Hi s Leu Tyr Asp Val 1070 Lys
Leu Thr Pro Lys Met Asn Val 1075 Thr Ile Lys 1080 Leu Ser Ile Leu 1085 Tyr Asp
Asn Alá Glu 1090 Ser Asn Asp Asn Ser 1095 Ile Gly Ly s Trp Thr Asn 1100 Thr Asn
Ile Val Ser 1105 Gly Gly Asn Asn 1110 Gly Lys Lys Gin Tyr Ser Ser 1115 Asn Asn 1120
Pr o Asp Alá Asn Leu Thr Leu 1125 Asn Thr Asp Alá 1130 Gin Glu Lys Leu Asn 1135
Ly s Asn Arg Asp Tyr Tyr Ile 1140 Ser Leu Tyr 1145 Me t Lys Ser Glu Lys 1150 Asn
Thr Gin Cys Glu Ile Thr Ile 1155 Asp Gly Glu 1160 Ile Tyr Pro Ile 1165 Thr Thr
Lys Thr Val 1170 Asn Val Asn Lys Asp 1175 Asn Tyr Ly s Arg Leu Asp 1180 Ile Ile
Al a 118 5 Hi s Asn Ile Lys Ser Asn 1190 Pro Ile Ser Ser 1195 Leu Hi s Ile Lys Thr 1200
Asn Asp Glu Ile Thr Leu Phe 1205 Trp Asp Asp Ile 1210 Ser Ile Thr Asp Val 1215
Al a Ser Ile Lys Pro Glu Asn 1220 Leu Thr Asp 1225 Ser Glu Ile Lys Gin 1230 Ile
Tyr Ser Arg Tyr Gly Ile Lys Leu Glu Asp G1 y Ile Leu Ile Asp Lys
1235 1240 1245
HU 222 264 Bl
Ly s Gly Gly 1250 Ile Hi s Tyr Gly Glu 1255 Phe Ile Asn Glu Ala 1260 Ser Phe Asn
Ile Glu Pro 1265 Leu Gin Asn Tyr Val 1270 Thr Lys Tyr Glu Val 1275 Thr Tyr Ser 1280
Ser Glu Leu Gly Pro Asn 1285 Val Ser Asp Thr Leu 1290 Glu Ser Asp Lys 1295 Ile
Tyr Lys Asp Gly Thr 1300 Ile Lys Phe Asp 1305 Phe Thr Lys Tyr Ser Lys 1310 Asn
Glu Gin Gly 1315 Leu Phe Tyr Asp Ser Gly 1320 Leu Asn Trp Asp Phe 1325 Lys Ile
Asn Al a Ile 1330 Asn Lys 1345 Thr Tyr Asp Gly Lys 1335 Glu Me t Asn Val Phe 1340 Hi s Arg Tyr
A 24. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 1399 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1... 1386 (D)Egyéb információ: /megjegyzés=„AB78-ból származó VIP2A(a) fehéijét kódoló, kukoricára optimált DNS-szekvencia” (xi) A 24. számú szekvencia leírása: ATGAAGCGCA TGGAGGGCAA GCTGTTCATG ACCGTGCTGC TGAGCACCGT GTTCAGCATC GAGCAGCTGA ACATCAACAG CCAGAGCAAG GACAAGGTGG AGGACTTCAA GGAGGACAAG GAGAAGGAGT GGAAGCTTAC CGCCACCGAG AAGAACGACA TCAAGACCAA CTACAAGGAG GACGAGATCA AGGACCTGAA GGAGATCGAC AGCATCATCA CCTACAAGAA CGTGGAGCCC GAGGGCAACA CCATCAACAG CGACGCCATG GACATCAAGT TCGACAGCTA CCTGGACACC GAGCGCGTGA TCCTGAAGGT GACCGTCCCC GCCGGCGTGA TCCTGAACAA CAGCGAGTAC CACGTGGACA AGGTGAGCAA GGTGGTGAAG ACCCTGAAGA AGAGTCTAGA CTTCAAGAAC ATGAAGAACT ACGAGGAGTG GGCCAAGGAC GGCTACGCCC GCCAGGACTA CAAGGAGATC GGCAACGAGA AGCTGGACGC CCAGATCAAG ATCCCCGAGA ACATCACCGT GTACCGCTGG AGCGACCCCC TGCCCAGCCT GAAGGACTTC GACAAGGGCT ACATGAGCAC CAGCCTGAGC AAGATCATCC TGCGCCTGCA GGTGCCCAAG GGCGGCTTCG CCAGCGAGAA GGAGATCCTG AAGGTGACCG AGGTGATCAT CAAGGGCGTG ACCAACTAGA TCTGAGCTC
GTGAGCAAGA AGCTCCAGGT GGTGACCAAG 60 AGCCTGCTGA ACAACGAGGT GATCAAGGCC 120 TACACCAACC TCCAGAACCT GAAGATCACC 180 GAGAAGGCCA AGGAGTGGGG CAAGGAGAAG 240 AAGGGCAAGA TGAACAACTT CCTGGACAAC 300 ATCACCTTCA GCATGGCCGG CAGCTTCGAG 360 AAGATGTTCG ACAAGACCAA CCTGAGCAAC 420 ACCACCATCG GCTTCAACAA GAGCCTGACC 480 GCCCAGTTCA AGGAGCAGTT CCTGGACCGC 540 CACCTGACCG CCCAGCAGGT GAGCAGCAAG 600 AGCGGCAAGG GCAGCACCAC CCCCACCAAG 660 AAGATGCTGA TCGACAACGG CTACATGGTG 720 AAGGGCGTGG AGTGCCTCCA GATCGAGGGC 780 GACATCAACG CCGAGGCCCA CAGCTGGGGC 840 CTGACCGACA GCCAGCGCGA GGCCCTGGAC 900 AACAACTACC TGCGCAACCA GGGCGGCAGC 960 AACATCAGCG ACGCCCTGGG CAAGAAGCCC 1020 TGCGGCATGC CCGAGTTCGG CTACCAGATC 1080 GAGGAGCAGT TCCTGAACAC CATCAAGGAG 1140 AGCGAGCGCC TGGCCGCCTT CGGCAGCCGC 1200 GGCAGCACCG GCGCCTACCT GAGCGCCATC 1260 CTGGACAAGG ACAGCAAGTA CCACATCGAC 1320 AAGCGCTACG TGGTGGACGC CACCCTGCTG 1380
1399
HU 222 264 Bl
A 25. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 19 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: peptid (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: peptid (B) Elhelyezkedés: 1...19 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„VIP2-nek sejtből történő kiválasztására szolgáló szekréciós szignálpep tid” (xi) A 25. számú szekvencia leírása:
Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Alá Alá Gly Val 15 10 15
His Cys Leu
A 26. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2655 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: egyéb nukleinsav (A) Leírás: /leírás=„szintetikusDNS” (iii) Hipotetikus: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1...2655 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„VIPlA(a)-t kódoló kukoricára optimált DNS-szekvencia” (xi) A 26. számú szekvencia leírása:
ATGAAGAACA TGAAGAAGAA GCTGGCCAGC GTGGTGACCT GCACCCTGCT GGCCCCCATG 60
TTCCTGAACG GCAACGTGAA CGCCGTGTAC GCCGACAGCA AGACCAACCA GATCAGCACC 120
ACCCAGAAGA ACCAGCAGAA GGAGATGGAC CGCAAGGGCC TGCTGGGCTA CTACTTCAAG 180
GGCAAGGACT TCAGCAACCT GACCATGTTC GCCCCCACGC GTGACAGCAC CCTGATCTAC 240
GACCAGCAGA CCGCCAACAA GCTGCTGGAC AAGAAGCAGC AGGAGTACCA GAGCATCCGC 300
TGGATCGGCC TGATCCAGAG CAAGGAGACC GGCGACTTCA CCTTCAACCT GAGCGAGGAC 360
GAGCAGGCCA TCATCGAGAT CAACGGCAAG ATCATCAGCA ACAAGGGCAA GGAGAAGCAG 420
GTGGTGCACC TGGAGAAGGG CAAGCTGGTG CCCATCAAGA TCGAGTACCA GAGCGACACC 480
AAGTTCAACA TCGACAGCAA GACCTTCAAG GAGCTGAAGC TTTTCAAGAT CGACAGCCAG 540
AACCAGCCCC AGCAGGTGCA GCAGGACGAG CTGCGCAACC CCGAGTTCAA CAAGAAGGAG 600
AGCCAGGAGT TCCTGGCCAA GCCCAGCAAG ATCAACCTGT TCACCCAGCA GATGAAGCGC 660
GAGATCGACG AGGACACCGA CACCGACGGC GACAGCATCC CCGACCTGTG GGAGGAGAAC 720
GGCTACACCA TCCAGAACCG CATCGCCGTG AAGTGGGACG ACAGCCTGGC TAGCAAGGGC 780
TACACCAAGT TCGTGAGCAA CCCCCTGGAG AGCCACACCG TGGGCGACCC CTACACCGAC 840
TACGAGAAGG CCGCCCGCGA CCTGGACCTG AGCAACGCCA AGGAGACCTT CAACCCCCTG 900
GTGGCCGCCT TCCCCAGCGT GAACGTGAGC ATGGAGAAGG TGATCCTGAG CCCCAACGAG 960
AACCTGAGCA ACAGCGTGGA GAGCCACTCG AGCACCAACT GGAGCTACAC CAACACCGAG 1020
GGCGCCAGCG TGGAGGCCGG CATCGGTCCC AAGGGCATCA GCTTCGGCGT GAGCGTGAAC 1080
TACCAGCACA GCGAGACCGT GGCCCAGGAG TGGGGCACCA GCACCGGCAA CACCAGCCAG 1140
TTCAACACCG CCAGCGCCGG CTACCTGAAC GCCAACGTGC GCTACAACAA CGTGGGCACC 1200
GGCGCCATCT ACGACGTGAA GCCCACCACC AGCTTCGTGC TGAACAACGA CACCATCGCC 1260
ACCATCACCG CCAAGTCGAA TTCCACCGCC CTGAACATCA GCCCCGGCGA GAGCTACCCC 1320
AAGAAGGGCC AGAACGGCAT CGCCATCACC AGCATGGACG ACTTCAACAG CCACCCCATC 1380
ACCCTGAACA AGAAGCAGGT GGACAACCTG CTGAACAACA AGCCCATGAT GCTGGAGACC 1440
AACCAGACCG ACGGCGTCTA CAAGATCAAG GACACCCACG GCAACATCGT GACGGGCGGC 1500
GAGTGGAACG GCGTGATCCA GCAGATCAAG GCCAAGACCG CCAGCATCAT CGTCGACGAC 1560
GGCGAGCGCG TGGCCGAGAA GCGCGTGGCC GCCAAGGACT ACGAGAACCC CGAGGACAAG 1620
ACCCCCAGCC TGACCCTGAA GGACGCCCTG AAGCTGAGCT ACCCCGACGA GATCAAGGAG 1680
HU 222 264 Bl
ATCGAGGGCT
CTAGACGAGA
AAGGACGTGA
CTGAGCATCC
ACCAACATCG
GCCAACCTGA
ATCAGCCTGT
ATATACCCCA
ATCATCGCCC
GAGATCACCC
AACCTGACCG
GGCATCCTGA
TTCAACATCG
CTGGGCCCCA
AAGTTCGACT
AACTGGGACT
CGCTACAACA
TGCTGTACTA
ACACCGCCAA
GCCACCTGTA
TGTACGACAA
TGAGCGGCGG
CCCTGAACAC
ACATGAAGAG
TCACCACCAA
ACAACATCAA
TGTTCTGGGA
ACAGCGAGAT
TCGACAAGAA
AGCCCCTGCA
ACGTGAGCGA
TCACCAAGTA
TCAAGATCAA
AGTAG
CAAGAACAAG
GGAGGTGACC
CGACGTGAAG
CGCCGAGAGC
CAACAACGGC
CGACGCCCAG
CGAGAAGAAC
GACCGTGAAC
GAGCAACCCC
CGACATATCG
CAAGCAGATA
AGGCGGCATC
GAACTACGTG
CACCCTGGAG
CAGCAAGAAC
CGCCATCACC
CCCATCTACG
AAGCAGCTGA
CTGACCCCCA
AACGACAACA
AAGAAGCAGT
GAGAAGCTGA
ACCCAGTGCG
GTGAACAAGG
ATCAGCAGCC
ATTACCGACG
TACAGTCGCT
CACTACGGCG
ACCAAGTACG
AGCGACAAGA
GAGCAGGGCC
TACGACGGCA
AGAGCAGCGT
ACGACACCAC
AGATGAACGT
GCATCGGCAA
ACAGCAGCAA
ACAAGAACCG
AGATCACCAT
ACAACTACAA
TGCACATCAA
TCGCCAGCAT
ACGGCATCAA
AGTTCATCAA
AGGTGACCTA
TTTACAAGGA
TGTTCTACGA
AGGAGATGAA
GATGACCTAT
CGGCAAGTTC
GACCATCAAG
GTGGACCAAC
CAACCCCGAC
CGACTACTAC
CGACGGCGAG
GCGCCTGGAC
GACCAACGAC
CAAGCCCGAG
GCTGGAGGAC
CGAGGCCAGC
CAGCAGCGAG
CGGCACCATC
CAGCGGCCTG
CGTGTTCCAC
1740
1800
1860
1920
1980
2040
2100
2160
2220
2280
2340
2400
2460
2520
2580
2640
2655
A 27. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 1389 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: egyéb nukleinsav (A) Leírás: /leírás=„szintetikus DNS” (iii) Hipotetikus: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 1.. .1389 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„VIP2A(a)-t kódoló kukoricára optimált DNS-szekvencia” (xi) A 27. számú szekvencia leírása: ATGAAGCGCA TGGAGGGCAA GCTGTTCATG ACCGTGCTGC TGAGCACCGT GTTCAGCATC GAGCAGCTGA ACATCAACAG CCAGAGCAAG GACAAGGTGG AGGACTTCAA GGAGGACAAG GAGAAGGAGT GGAAGCTTAC CGCCACCGAG AAGAACGACA TCAAGACCAA CTACAAGGAG GACGAGATCA AGGACCTGAA GGAGATCGAC AGCATCATCA CCTACAAGAA CGTGGAGCCC GAGGGCAACA CCATCAACAG CGACGCCATG GACATCAAGT TCGACAGCTA CCTGGACACC GAGCGCGTGA TCCTGAAGGT GACCGTCCCC GCCGGCGTGA TCCTGAACAA CAGCGAGTAC CACGTGGACA AGGTGAGCAA GGTGGTGAAG ACCCTGAAGA AGAGTCTAGA CTTCAAGAAC ATGAAGAACT ACGAGGAGTG GGCCAAGGAC GGCTACGCCC GCCAGGACTA CAAGGAGATC GGCAACGAGA AGCTGGACGC CCAGATCAAG ATCCCCGAGA ACATCACCGT GTACCGCTGG AGCGACCCCC TGCCCAGCCT GAAGGACTTC
Az 1. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2378 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa : DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem
GTGAGCAAGA AGCTCCAGGT GGTGACCAAG AGCCTGCTGA ACAACGAGGT GATCAAGGCC TACACCAACC TCCAGAACCT GAAGATCACC GAGAAGGCCA AGGAGTGGGG CAAGGAGAAG AAGGGCAAGA TGAACAACTT CCTGGACAAC ATCACCTTCA GCATAGCCGG CAGCTTCGAG AAGATGTTCG ACAAGACCAA CCTGAGCAAC ACCACCATCG GCTTCAACAA GAGCCTGACC GCCCAGTTCA AGGAGCAGTT CCTGGACCGC CACCTGACCG CCCAGCAGGT GAGCAGCAAG AGCGGCAAGG GCAGCACCAC CCCCACCAAG AAGATGCTGA TCGACAACGG CTACATGGTG AAGGGCGTGG AGTGCCTCCA GATCGAGGGC GACATCAACG CCGAGGCCCA CAGCTGGGGC CTGACCGACA GCCAGCGCGA GGCCCTGGAC AACAACTACC TGCGCAACCA GGGCGGCAGC AACATCAGCG ACGCCCTGGG CAAGAAGCCC TGCGGCATGC CCGAGTTCGG CTACCAGATC GAGGAGCAGT TCCTGAACAC CATCAAGGAG
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
HU 222 264 Β1 (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 9...2375 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„AB88-ból származó VIP3A(a) fehéijét kódoló natív DNS-szekvencia, ahogyan azt pCIB7104 tartalmazza” (xi) Az 1. számú szekvencia leírása:
AGATGAAC ATG AAC AAG AAT AAT ACT AAA TTA AGC ACA AGA GCC TTA CCA 50
Me t Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro
5 10
AGT TTT ATT GAT TAT TTT AAT Asn GGC Gly ATT Ile TAT GGA TTT Phe GCC Al a ACT Thr GGT Gly ATC Ile 30 98
Ser 15 Phe Ile Asp Tyr Phe 20 Tyr G1 y 25
AAA GAC ATT ATG AAC ATG ATT TTT AAA ACG GAT ACA GGT GGT GAT CTA 146
Lys Asp Ile Me t As n 35 Me t Ile Phe Lys Thr 40 Asp Thr Gly Gly Asp 45 Leu
ACC CTA GAC GAA ATT TTA AAG AAT CAG CAG TTA CTA AAT GAT ATT TCT 194
Thr Leu Asp Glu 50 Ile Leu Lys Asn Gin 55 Gin Leu Leu Asn Asp 60 Ile Ser
GGT AAA TTG GAT GGG GTG AAT GGA AGC TTA AAT GAT CTT ATC GCA CAG 242
Gly Lys Leu 65 Asp Gly Val Asn Gly 70 Ser Leu Asn Asp Leu 75 Ile Al a Gin
GGA AAC TTA AAT ACA GAA TTA TCT AAG GAA ATA TTA AAA ATT GCA AAT 290
Gly Asn 80 Leu Asn Thr Glu Leu 85 Ser Lys Glu Ile Leu 90 Ly s Ile Al a Asn
GAA CAA AAT CAA GTT TTA AAT GAT GTT AAT AAC AAA CTC GAT GCG ATA 338
Glu 95 Gin Asn Gin Val Leu 100 Asn Asp Val Asn Asn 105 Lys Leu Asp Al a Ile 110
AAT ACG ATG CTT CGG GTA TAT CTA CCT AAA ATT ACC TCT ATG TTG AGT 386
Asn Thr Me t Leu Arg 115 Val Tyr Leu Pro Ly s 120 Ile Thr Ser Me t Leu 125 Ser
GAT GTA ATG AAA CAA AAT TAT GCG CTA AGT CTG CAA ATA GAA TAC TTA 434
Asp Val Me t Lys 130 Gin Asn Tyr Al a Leu 135 Ser Leu Gin Ile Glu 140 Tyr Leu
AGT AAA CAA TTG CAA GAG ATT TCT GAT AAG TTG GAT ATT ATT AAT GTA 482
Ser Lys Gin 145 Leu Gin Glu Ile Ser 150 Asp Lys Leu Asp Ile 155 Ile Asn Val
AAT GTA CTT ATT AAC TCT ACA CTT ACT GAA ATT ACA CCT GCG TAT CAA 530
Asn Val 160 Leu Ile Asn Ser Thr 165 Leu Thr Glu Ile Thr 170 Pro Al a Tyr Gin
AGG ATT AAA TAT GTG AAC GAA AAA TTT GAG GAA TTA ACT TTT GCT ACA 578
Arg 175 Ile Lys Tyr Val Asn 180 Glu Lys Phe Glu Glu 185 Leu Thr Phe Ala Thr 190
GAA ACT AGT TCA AAA GTA AAA AAG GAT GGC TCT CCT GCA GAT ATT CTT 626
Glu Thr Ser Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Al a Asp Ile Leu
195 200 205
HU 222 264 Β1
GAT Asp GAG Glu TTA ACT GAG TTA ACT GAA CTA GCG AAA AGT GTA ACA AAA AAT 674
Leu Thr 210 Glu Leu Thr Glu Leu Alá 215 Lys Ser Val Thr 220 Lys Asn
GAT GTG GAT GGT TTT GAA TTT TAC CTT AAT ACA TTC CAC GAT GTA ATG 722
As p Val Asp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe Hi s Asp Val Me t
225 230 235
GTA GGA AAT AAT TTA TTC GGG CGT TCA GCT TTA AAA ACT GCA TCG GAA 770
Val Gly Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Al a Leu Lys Thr Al a Ser Glu
240 245 250
TTA ATT ACT AAA GAA AAT GTG AAA ACA AGT GGC AGT GAG GTC GGA AAT 818
Leu Ile Thr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser G1 u Val Gly Asn
255 260 265 270
GTT TAT AAC TTC TTA ATT GTA TTA ACA GCT CTG CAA GCC CAA GCT TTT 866
Val Tyr Asn Phe Leu Ile Val Leu Thr Al a Leu Gin Al a Gin Al a Phe
275 280 285
CTT ACT TTA ACA ACA TGC CGA AAA TTA TTA GGC TTA GCA GAT ATT GAT 914
Leu Thr Leu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Al a As p Ile Asp
290 295 300
TAT ACT TCT ATT ATG AAT GAA CAT TTA AAT AAG GAA AAA GAG GAA TTT 962
Tyr Thr Ser Ile Me t As n Glu Hi s Leu Asn Ly s Glu Lys Glu Glu Phe
305 310 315
AGA GTA AAC ATC CTC CCT ACA CTT TCT AAT ACT TTT TCT AAT CCT AAT 1010
Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn
320 325 330
TAT GCA AAA GTT AAA GGA AGT GAT GAA GAT GCA AAG ATG ATT GTG GAA 1058
Tyr Al a Lys Val Lys Gly Ser As p Glu Asp Al a Lys Me t Ile Val Glu
335 340 345 350
GCT AAA CCA GGA CAT GCA TTG ATT GGG TTT GAA ATT AGT AAT GAT TCA 1106
Al a Lys Pro Gly Hi s Al a Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser
355 360 365
ATT ACA GTA TTA AAA GTA TAT GAG GCT AAG CTA AAA CAA AAT TAT CAA 1154
Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu Al a Lys Leu Lys Gin Asn Tyr Gin
370 375 380
GTC GAT AAG GAT TCC TTA TCG GAA GTT ATT TAT GGT GAT ATG GAT AAA 1202
Val Asp Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Me t Asp Lys
385 390 395
TTA TTG TGC CCA GAT CAA TCT GAA CAA ATC TAT TAT ACA AAT AAC ATA 1250
Leu Leu Cys Pro Asp Gin Ser Glu Gin Ile Tyr Tyr Thr As n Asn Ile
400 405 410
GTA TTT CCA AAT GAA TAT GTA ATT ACT AAA ATT GAT TTC ACT AAA AAA 1298
Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys
415 420 425 430
ATG AAA ACT TTA AGA TAT GAG GTA ACA GCG AAT TTT TAT GAT TCT TCT 1346
Me t Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Al a Asn Phe Tyr Asp Ser Ser
435 440 445
HU 222 264 Bl
1394
ACA GGA GAA ATT GAC TTA AAT AAG AAA AAA GTA GAA TCA AGT GAA GCG
Thr Gly Glu Ile 450 Asp Leu Asn Lys Ly s 455 Lys Val Glu Ser Ser 460 Glu Al a
GAG TAT AGA ACG TTA AGT GCT AAT GAT GAT GGG GTG TAT ATG CCG TTA
Glu Tyr Arg 465 Thr Leu Ser Al a Asn 470 Asp As p Gly Val Tyr 475 Me t Pro Le u
GGT GTC ATC AGT GAA ACA TTT TTG ACT CCG ATT AAT GGG TTT GGC CTC
Gly Va 1 480 Ile Ser Glu Thr Phe 485 Leu Thr Pro Ile Asn 490 Gly Phe Gly Leu
CAA GCT GAT GAA AAT TCA AGA TTA ATT ACT TTA ACA TGT AAA TCA TAT
Gin 495 Al a Asp Glu Asn Ser 500 Arg Leu Ile Thr Leu 505 Thr Cys Ly s Ser Tyr 510
TTA AGA GAA CTA CTG CTA GCA ACA GAC TTA AGC AAT AAA GAA ACT AAA
Leu Arg Glu Leu Leu 515 Leu Al a Thr Asp Leu 520 Ser Asn Lys Glu Thr 525 Lys
TTG ATC GTC CCG CCA AGT GGT TTT ATT AGC AAT ATT GTA GAG AAC GGG
Leu Ile Val Pr o 530 Pro Ser Gly Phe Ile 535 Ser Asn Ile Val Glu 540 Asn Gly
TCC ATA GAA GAG GAC AAT TTA GAG CCG TGG AAA GCA AAT AAT AAG AAT
Ser Ile Glu 545 Glu Asp Asn Leu Glu 550 Pro Trp Lys Al a Asn 555 Asn Lys Asn
GCG TAT GTA GAT CAT ACA GGC GGA GTG AAT GGA ACT AAA GCT TTA TAT
Al a Tyr 560 Val Asp Hi s Thr Gly 565 Gly Val Asn Gly Thr 570 Lys Al a Leu Tyr
GTT CAT AAG GAC GGA GGA ATT TCA CAA TTT ATT GGA GAT AAG TTA AAA
Val 575 Hi s Lys Asp Gly Gly 580 Ile Ser Gin Phe Ile 585 Gly Asp Ly s Leu Lys 590
CCG AAA ACT GAG TAT GTA ATC CAA TAT ACT GTT AAA GGA AAA CCT TCT
Pro Lys Thr Glu Tyr 595 Val Ile Gin Tyr Thr 600 Val Lys Gly Ly s Pro 605 Ser
ATT CAT TTA AAA GAT GAA AAT ACT GGA TAT ATT CAT TAT GAA GAT ACA
Ile Hi s Leu Lys 610 Asp Glu Asn Thr Gly 615 Tyr Ile Hi s Tyr Glu 620 Asp Thr
AAT AAT AAT TTA GAA GAT TAT CAA ACT ATT AAT AAA CGT TTT ACT ACA
Asn Asn Asn 625 Le u Glu Asp Tyr Gin 630 Thr Ile Asn Lys Arg 635 Phe Thr Thr
GGA ACT GAT TTA AAG GGA GTG TAT TTA ATT TTA AAA AGT CAA AAT GGA
Gly Thr 640 Asp Leu Lys Gly Val 645 Tyr Leu Ile Le u Ly s 650 Ser Gin Asn Gly
GAT GAA GCT TGG GGA GAT AAC TTT ATT ATT TTG GAA ATT AGT CCT TCT
Asp 655 Glu Al a Trp Gly Asp 660 Asn Phe Ile Ile Leu 665 Glu Ile Ser Pro Ser 670
GAA AAG TTA TTA AGT CCA GAA TTA ATT AAT ACA AAT AAT TGG ACG AGT
Glu Ly s Leu Leu Ser 675 Pro Glu Le u Ile Asn 680 Thr Asn Asn Trp Thr 685 Ser
1442
1490
1538
1586
1634
1682
1730
1778
1826
1874
1922
1970
2018
2066
HU 222 264 Bl
ACG GGA TCA ACT AAT ATT AGC GGT AAT
Thr Gly Ser Thr 690 As n Ile Ser Gly Asn 695
GGA CGA GGG ATT CTA AAA CAA AAC CTT
Gly Arg Gly 705 Ile Leu Lys Gin Asn 710 Leu
TAT AGA GTG TAT TTT TCT GTG TCC GGA
Tyr Arg 720 Val Tyr Phe Ser Val 725 Ser Gly
AAT TCT AGG GAA GTG TTA TTT GAA AAA
Asn 735 Ser Arg Glu Val Leu 740 Phe Glu Lys
GAT GTT TCT GAA ATG TTC ACT ACA AAA
Asp Val Ser Glu Me t 755 Phe Thr Thr Lys
ATA GAG CTT TCT CAA GGG AAT AAT TTA
Ile Glu Leu Ser 770 Gin Gly Asn Asn Leu 775
TTT Phe TAC Tyr GAT Asp GTC Val TCT Ser ATT Ile AAG Lys TAA
785
ACA CTC ACT Thr CTT Leu TAT Tyr 700 CAG Gin GGA Gly 2114
Thr Leu
CAA TTA GAT AGT TTT TCA ACT 2162
Gin Leu Asp Ser 715 Phe Ser Thr
GAT GCT AAT GTA AGG ATT AGA 2210
As p Al.a Asn 730 Val Arg Ile Arg
AGA TAT ATG AGC GGT GCT AAA 2258
Arg Tyr 745 Me t Ser Gly Al a Lys 750
TTT GAG AAA GAT AAC TTT TAT 2306
Phe 760 Glu Lys Asp Asn Phe 765 Tyr
TAT GGT GGT CCT ATT GTA CAT 2354
Tyr Gly Gly Pro Ile Val Hi s
780
2378
A 2. számú szekvencia adatai: (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 789 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehétje (xi) A 2. számú szekvencia leírása: Met Asn Lys Asn Asn Thr 1 5 Lys Leu Ser
Ile Asp Tyr Phe 20 Asn Gly Ile Tyr Gly 25
Ile Me t Asn Me t 35 Ile Phe Lys Thr 40 Asp
Asp Glu Ile Leu 50 Lys Asn Gin 55 Gin Leu
Leu 65 Asp Gly Val Asn Gly 70 Ser Leu Asn
Leu Asn Thr Glu Leu 85 Ser Lys Glu Ile
Asn Gin Val Leu 100 Asn Asp Val Asn Asn 105
Me t Leu Arg Val 115 Tyr Leu Pro Lys 120 Ile
Thr 10 Arg Alá Leu Pro Ser 15 Phe
Phe Al a Thr Gly Ile 30 Lys Asp
Thr Gly Gly Asp 45 Leu Thr Leu
Leu Asn Asp 60 Ile Ser Gly Lys
As p Leu 75 Ile Al a Gin Gly Asn 80
Leu 90 Lys Ile Al a Asn Glu 95 Gin
Lys Leu Asp Al a Ile 110 Asn Thr
Thr Ser Me t Leu Ser Asp Val
125
HU 222 264 Bl
Me t Lys 130
Gin Leu 145
Leu 11 e
Lys Tyr
Ser Ser
Leu Thr 210
Asp Gly 225
Asn Asn
Thr Lys
Asn Phe
Leu Thr 290
Ser Ile 305
Asn Ile
Lys Val
Pro Gly
Val Leu 370
Lys Asp 385
Cys Pro
Pro Asn
Thr Leu
Gin Asn
Gin Glu
Asn Ser
Val Asn 180
Lys Val 195
Glu Leu
Phe Glu
Leu Phe
Glu Asn 260
Leu Ile 275
Thr Cys
Met Asn
Leu Pro
Lys Gly 340
His Alá 355
Lys Val
Ser Leu
Asp Gin
Glu Tyr 420
Arg Tyr 435
Tyr Alá
Ile Ser 150
Thr Leu 165
Glu Lys
Lys Lys
Thr Glu
Phe Tyr 230
Gly Arg 245
Val Lys
Val Leu
Arg Lys
Glu His 310
Thr Leu 325
Ser Asp
Leu Ile
Tyr Glu
Ser Glu 390
Ser Glu 405
Val Ile
Glu Val
Leu Ser 135
Asp Lys
Thr Glu
Phe Glu
Asp Gly 200
Leu Alá 215
Leu Asn
Ser Alá
Thr Ser
Thr Alá 280
Leu Leu 295
Leu Asn
Ser Asn
Glu Asp
Gly Phe 360
Alá Lys 375
Val Ile
Gin Ile
Thr Lys
Thr Alá 440
Leu Gin
Leu Asp
Ile Thr 170
Glu Leu 185
Ser Pro
Lys Ser
Thr Phe
Leu Lys 250
Gly Ser 265
Leu Gin
Gly Leu
Lys Glu
Thr Phe 330
Alá Lys 345
Glu Ile
Leu Lys
Tyr Gly
Tyr Tyr 410
Ile Asp 425
Asn Phe
Ile Glu 140
Ile Ile 155
Pro Alá
Thr Phe
Alá Asp
Val Thr 220
Hi s Asp 235
Thr Alá
Glu Val
Alá Gin
Alá Asp 300
Lys Glu 315
Ser Asn
Me t Ile
Ser Asn
Gin Asn 380
Asp Me t 395
Thr Asn
Phe Thr
Tyr Asp
Tyr Leu
Asn Val
Tyr Gin
Alá Thr 190
Ile Leu 205
Lys Asn
Val Met
Ser Glu
Gly Asn 270
Alá Phe 285
Ile Asp
Glu Phe
Pro Asn
Val Glu 350
Asp Ser 365
Tyr Gin
Asp Lys
Asn Ile
Lys Lys 430
Ser Ser 445
Ser Lys
Asn Val 160
Arg Ile 175
Glu Thr
Asp Glu
Asp Val
Val Gly 240
Leu 11e 255
Val Tyr
Leu Thr
Tyr Thr
Arg Val 320
Tyr Alá 335
Alá Lys
Ile Thr
Val Asp
Leu Leu 400
Val Phe 415
Met Lys
Thr Gly
HU 222 264 Bl
Glu Ile 450
Arg Thr 465
Ile Ser
Asp Glu
Glu Leu
Val Pro 530
Glu Glu 545
Val Asp
Lys Asp
Thr Glu
Leu Lys 610
Asn Leu 625
Asp Leu
Ala Trp
Leu Leu
Ser Thr 690
Gly Ile 705
Val Tyr
Arg Glu
Ser Glu
Asp Leu
Leu Ser
Glu Thr
Asn Ser 500
Leu Leu 515
Pro Ser
Asp Asn
His Thr
Gly Gly 580
Tyr Val 595
Asp Glu
Glu Asp
Lys Gly
Gly Asp 660
Ser Pro 675
Asn Ile
Leu Lys
Phe Ser
Val Leu 740
Me t Phe 755
Asn Lys
Ala Asn 470
Phe Leu 485
Arg Leu
Ala Thr
Gly Phe
Leu Glu 550
Gly Gly 565
Ile Ser
Ile Gin
Asn Thr
Tyr Gin 630
Val Tyr 645
Asn Phe
Glu Leu
Ser Gly
Gin Asn 710
Val Ser 725
Phe Glu
Thr Thr
Lys Lys 455
Asp Asp
Thr Pro
Ile Thr
Asp Leu 520
Ile Ser 535
Pro Trp
Val Asn
Gin Phe
Tyr Thr 600
Gly Tyr 615
Thr Ile
Leu Ile
Ile Ile
Ile Asn 680
Asn Thr 695
Leu Gin
Gly Asp
Lys Arg
Lys Phe 760
Val Glu
Gly Val
I1e Asn 490
Leu Thr 505
Ser Asn
Asn Ile
Lys Ala
Gly Thr 570
Ile Gly 585
Val Lys
Ile His
Asn Lys
Leu Lys 650
Leu Glu 665
Thr Asn
Leu Thr
Leu Asp
Ala Asn 730
Tyr Me t 745
Glu Lys
Ser Ser 460
Tyr 475 Me t
Gly Phe
Cys Lys
Ly s Glu
Val Glu 540
Asn 555 Asn
Lys Ala
As p Lys
Gly Ly s
Tyr Glu 620
Arg 635 Phe
Ser Gin
Ile Ser
Asn Trp
Leu Tyr 700
Ser 715 Phe
Val Arg
Ser Gly
Asp Asn
Glu Ala
Pro Leu
Gly Leu
Ser Tyr 510
Thr Lys 525
Asn Gly
Lys Asn
Leu Tyr
Leu Lys 590
Pro Ser 605
Asp Thr
Thr Thr
Asn Gly
Pro Ser 670
Thr Ser 685
Gin Gly
Ser Thr
Ile Arg
Ala Lys 750
Phe Tyr 765
Glu Tyr
Gly Val 480
Gin Ala 495
Leu Arg
Leu Ile
Ser Ile
Ala Tyr 560
Val His 575
Pro Lys
Ile His
Asn Asn
Gly Thr 640
Asp Glu 655
Glu Lys
Thr Gly
Gly Arg
Tyr Arg 720
Asn Ser 735
Asp Val
Ile Glu
HU 222 264 Bl
Leu Ser Gin Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr 770 775 780
Asp Val Ser Ile Lys
785
A 3. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2403 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: egyéb nukleinsav (A) Leírás: /leírás=„szintetikus DNS” (iii) Hipotetikus: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: vegyes jellemzők (B) Elhelyezkedés: 11...2389 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„VIP3A(a)-t kódoló kukoricára optimált DNS-szekvencia” (xi) A 3. számú szekvencia leírása:
GGATCCACCA ATGAACATGA ACAAGAACAA CACCAAGCTG AGCACCCGCG CCCTGCCGAG 60
CTTCATCGAC TACTTCAACG GCATCTACGG CTTCGCCACC GGCATCAAGG ACATCATGAA 120
CATGATCTTC AAGACCGACA CCGGCGGCGA CCTGACCCTG GACGAGATCC TGAAGAACCA 180
GCAGCTGCTG AACGACATCA GCGGCAAGCT GGACGGCGTG AACGGCAGCC TGAACGACCT 240
GATCGCCCAG GGCAACCTGA ACACCGAGCT GAGCAAGGAG ATCCTTAAGA TCGCCAACGA 300
GCAGAACCAG GTGCTGAACG ACGTGAACAA CAAGCTGGAC GCCATCAACA CCATGCTGCG 360
CGTGTACCTG CCGAAGATCA CCAGCATGCT GAGCGACGTG ATGAAGCAGA ACTACGCCCT 420
GAGCCTGCAG ATCGAGTACC TGAGCAAGCA GCTGCAGGAG ATCAGCGACA AGCTGGACAT 480
CATCAACGTG AACGTCCTGA TCAACAGCAC CCTGACCGAG ATCACCCCGG CCTACCAGCG 540
CATCAAGTAC GTGAACGAGA AGTTCGAAGA GCTGACCTTC GCCACCGAGA CCAGCAGCAA 600
GGTGAAGAAG GACGGCAGCC CGGCCGACAT CCTGGACGAG CTGACCGAGC TGACCGAGCT 660
GGCCAAGAGC GTGACCAAGA ACGACGTGGA CGGCTTCGAG TTCTACCTGA ACACCTTCCA 720
CGACGTGATG GTGGGCAACA ACCTGTTCGG CCGCAGCGCC CTGAAGACCG CCAGCGAGCT 780
GATCACCAAG GAGAACGTGA AGACCAGCGG CAGCGAGGTG GGCAACGTGT ACAACTTCCT 840
GATCGTGCTG ACCGCCCTGC AGGCCCAGGC CTTCCTGACC CTGACCACCT GTCGCAAGCT 900
GCTGGGCCTG GCCGACATCG ACTACACCAG CATCATGAAC GAGCACTTGA ACAAGGAGAA 960
GGAGGAGTTC CGCGTGAACA TCCTGCCGAC CCTGAGCAAC ACCTTCAGCA ACCCGAACTA 1020
CGCCAAGGTG AAGGGCAGCG ACGAGGACGC CAAGATGATC GTGGAGGCTA AGCCGGGCCA 1080
CGCGTTGATC GGCTTCGAGA TCAGCAACGA CAGCATCACC GTGCTGAAGG TGTACGAGGC 1140
CAAGCTGAAG CAGAACTACC AGGTGGACAA GGACAGCTTG AGCGAGGTGA TCTACGGCGA 1200
CATGGACAAG CTGCTGTGTC CGGACCAGAG CGAGCAAATC TACTACACCA ACAACATCGT 1260
GTTCCCGAAC GAGTACGTGA TCACCAAGAT CGACTTCACC AAGAAGATGA AGACCCTGCG 1320
CTACGAGGTG ACCGCCAACT TCTACGACAG CAGCACCGGC GAGATCGACC TGAACAAGAA 1380
GAAGGTGGAG AGCAGCGAGG CCGAGTACCG CACCCTGAGC GCGAACGACG ACGGCGTCTA 1440
CATGCCACTG GGCGTGATCA GCGAGACCTT CCTGACCCCG ATCAACGGCT TTGGCCTGCA 1500
GGCCGACGAG AACAGCCGCC TGATCACCCT GACCTGTAAG AGCTACCTGC GCGAGCTGCT 1560
GCTAGCCACC GACCTGAGCA ACAAGGAGAC CAAGCTGATC GTGCCACCGA GCGGCTTCAT 1620
CAGCAACATC GTGGAGAACG GCAGCATCGA GGAGGACAAC CTGGAGCCGT GGAAGGCCAA 1680
CAACAAGAAC GCCTACGTGG ACCACACCGG CGGCGTGAAC GGCACCAAGG CCCTGTACGT 1740
GCACAAGGAC GGCGGCATCA GCCAGTTCAT CGGCGACAAG CTGAAGCCGA AGACCGAGTA 1800
CGTGATCCAG TACACCGTGA AGGGCAAGCC ATCGATTCAC CTGAAGGACG AGAACACCGG 1860
CTACATCCAC TACGAGGACA CCAACAACAA CCTGGAGGAC TACCAGACCA TCAACAAGCG 1920
CTTCACCACC GGCACCGACC TGAAGGGCGT GTACCTGATC CTGAAGAGCC AGAACGGCGA 1980
CGAGGCCTGG GGCGACAACT TCATCATCCT GGAGATCAGC CCGAGCGAGA AGCTGCTGAG 2040
CCCGGAGCTG ATCAACACCA ACAACTGGAC CAGCACCGGC AGCACCAACA TCAGCGGCAA 2100
CACCCTGACC CTGTACCAGG GCGGCCGCGG CATCCTGAAG CAGAACCTGC AGCTGGACAG 2160
CTTCAGCACC TACCGCGTGT ACTTCAGCGT GAGCGGCGAC GCCAACGTGC GCATCCGCAA 2220
CAGCCGCGAG GTGCTGTTCG AGAAGAGGTA CATGAGCGGC GCCAAGGACG TGAGCGAGAT 2280
HU 222 264 Β1
GTTCACCACC AAGTTCGAGA AGGACAACTT CTACATCGAG CTGAGCCAGG GCAACAACCT 2340 GTACGGCGGC CCGATCGTGC ACTTCTACGA CGTGAGCATC AAGTTAACGT AGAGCTCAGA 2400 TCT 2403
A 4. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2612 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés: 118...2484 (D) Egyéb információ: /megjegyzés=„AB424-ből származó VIP3A(b)-t kódoló natív DNS-szekvencia” (xi) A 4. szekvencia leírása:
ATTGAAATTG ATAAAAAGTT ATGAGTGTTT AATAATCAGT AATTACCAAT AAAGAATTAA 60 GAATACAAGT TTACAAGAAA TAAGTGTTAC AAAAAATAGC TGAAAAGGAA GATGAAC 1 17
ATG Me t 790 AAC AAG AAT AAT Asn ACT AAA TTA AGC ACA AGA GCC Al a TTA Leu CCA AGT TTT Phe 805 165
Asn Lys Asn Thr 795 Lys Leu Ser Thr Arg 800 Pro Ser
ATT GAT TAT TTC AAT GGC ATT TAT GGA TTT GCC ACT GGT ATC AAA GAC 213
Ile Asp Tyr Phe Asn 810 Gly Ile Tyr Gly Phe 815 Al a Thr Gly Ile Lys 820 Asp
ATT ATG AAC ATG ATT TTT AAA ACG GAT ACA GGT GGT GAT CTA ACC CTA 261
Ile Me t Asn Me t 825 Ile Phe Lys Thr Asp 830 Thr Gly Gly Asp Leu 835 Thr Leu
GAC GAA ATT TTA AAG AAT CAG CAG CTA CTA AAT GAT ATT TCT GGT AAA 309
Asp Glu Ile 840 Leu Lys Asn Gin Gin 845 Leu Leu Asn Asp Ile 850 Ser Gly Lys
TTG GAT GGG GTG AAT GGA AGC TTA AAT GAT CTT ATC GCA CAG GGA AAC 357
Leu Asp 855 Gly Val Asn Gly Ser 860 Leu Asn Asp Leu Ile 865 Al a Gin Gly Asn
TTA AAT ACA GAA TTA TCT AAG GAA ATA TTA AAA ATT GCA AAT GAA CAA 405
Leu 870 Asn Thr Glu Leu Ser 875 Lys Glu Ile Leu Lys 880 Ile Al a Asn Glu Gin 885
AAT CAA GTT TTA AAT GAT GTT AAT AAC AAA CTC GAT GCG ATA AAT ACG 453
Asn Gin Val Leu Asn 890 Asp Val Asn Asn Ly s 895 Leu Asp Al a Ile Asn 900 Thr
ATG CTT CGG GTA TAT CTA CCT AAA ATT ACC TCT ATG TTG AGT GAT GTA 501
Me t Leu Arg Va 1 905 Tyr Le u Pro Lys Ile 910 Thr Ser Me t Leu Se r 915 Asp Va 1
ATG AAA CAA AAT TAT GCG CTA AGT CTG CAA ATA GAA TAC TTA AGT AAA 549
Me t Ly s Gin 920 Asn Tyr Al a Leu Ser 925 Leu Gin Ile Glu Tyr 930 Leu Ser Lys
CAA TTG CAA GAG ATT TCT GAT AAG TTG GAT ATT ATT AAT GTA AAT GTA 597
Gin Leu Gin Glu I le Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val
935 940 945
HU 222 264 BI
CTT ATT AAC TCT ACA CTT ACT GAA ATT Ile ACA CCT GCG TAT CAA AGG ATT 645
Leu 950 Ile Asn Ser Thr Leu 955 Thr Glu Thr Pro 960 Al a Tyr Gin Arg Ile 965
AAA TAT GTG AAC GAA AAA TTT GAG GAA TTA ACT TTT GCT ACA GAA ACT 693
Lys Tyr Val Asn Glu 970 Lys Phe Glu Glu Leu 975 Thr Phe Al a Thr Glu 980 Thr
AGT TCA AAA GTA AAA AAG GAT GGC TCT CCT GCA GAT ATT CGT GAT GAG 741
Ser Ser Lys Val 985 Lys Lys As p Gly Ser 990 Pro Al a As p Ile Arg 995 Asp Glu
TTA ACT GAG TTA ACT GAA CTA GCG AAA AGT GTA ACA AAA AAT GAT GTG 789
Leu Thr Glu Leu 1000 Thr Glu Leu Alá Lys 1005 Ser Val Thr Lys Asn 1010 Asp Val
GAT GGT TTT GAA TTT TAC CTT AAT ACA TTC CAC GAT GTA ATG GTA GGA 837
Asp Gly Phe 1015 Glu Phe Tyr Leu Asn 1020 Thr Phe His Asp Val 1025 Me t Val Gly
AAT AAT TTA TTC GGG CGT TCA GCT TTA AAA ACT GCA TCG GAA TTA ATT 885
Asn Asn 1030 Leu Phe Gly Arg Ser 1035 Al a Leu Lys Thr Alá 1040 Ser Glu Leu Ile 1045
ACT AAA GAA AAT GTG AAA ACA AGT GGC AGT GAG GTC GGA AAT GTT TAT 933
Thr Lys Glu Asn Val Lys 1050 Thr Ser Gly Ser Glu 1055 Val Gly Asn Val Tyr 1060
AAC TTC CTA ATT GTA TTA ACA GCT CTG CAA GCA AAA GCT TTT CTT ACT 981
Asn Phe Leu Ile Val 1065 Leu Thr Al a Leu Gin 1070 Al a Lys Al a Phe Leu 1075 Thr
TTA ACA CCA TGC CGA AAA TTA TTA GGC TTA GCA GAT ATT GAT TAT ACT 1029
Leu Thr Pro Cys 1080 Arg Lys Leu Leu Gly 1085 Leu Alá Asp Ile Asp 1090 Tyr Thr
TCT ATT ATG AAT GAA CAT TTA AAT AAG GAA AAA GAG GAA TTT AGA GTA 1077
Ser Ile Me t 1095 Asn Glu Hi s Leu Asn 1100 Lys Glu Ly s Glu Glu 1105 Phe Arg Val
AAC ATC CTC CCT ACA CTT TCT AAT ACT TTT TCT AAT CCT AAT TAT GCA 1125
Asn Ile 1110 Leu Pro Thr Leu Ser 1115 Asn Thr Phe Ser Asn 1120 Pro Asn Tyr Al a 1125
AAA GTT AAA GGA AGT GAT GAA GAT GCA AAG ATG ATT GTG GAA GCT AAA 1173
Lys Val Lys Gly Ser Asp 1130 Glu As p Al a Lys Me t 1135 Ile Val Glu Alá Lys 1140
CCA GGA CAT GCA TTG ATT GGG TTT GAA ATT AGT AAT GAT TCA ATT ACA 1221
Pro Gly Hi s Alá Leu 1145 Ile Gly Phe Glu Ile 1150 Ser Asn Asp Ser Ile 1155 Thr
GTA TTA AAA GTA TAT GAG GCT AAG CTA AAA CAA AAT TAT CAA GTC GAT 1269
Val Leu Lys Val 1160 Tyr Glu Al a Lys Leu 1165 Lys Gin Asn Tyr Gin 1170 Val Asp
AAG GAT TCC TTA TCG GAA GTT ATT TAT GGC GAT ATG GAT AAA TTA TTG 1317
Ly s Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Me t Asp Ly s Leu Leu
1175 1180 1185
HU 222 264 Β1
TGC CCA Cys Pro 1190 GAT Asp CAA Gin TCT Ser GGA CAA Gly Gin 1195 ATC Ile TAT Tyr TAT Tyr ACA AAT Thr Asn 1200 AAC Asn ATA Ile GTA Val TTT Phe 1205 1365
CCA AAT GAA TAT GTA ATT ACT AAA ATT GAT TTC ACT AAA AAA ATG AAA 1413
Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr 1210 Ly s Ile Asp Phe Thr 1215 Lys Lys Met Lys 1220
ACT TTA AGA TAT GAG GTA ACA GCG AAT TTT TAT GAT TCT TCT ACA GGA 1461
Thr Leu Arg Tyr Glu 1225 Val Thr Al a Asn Phe 1230 Tyr Asp Ser Ser Thr 1235 Gly
GAA ATT GAC TTA AAT AAG AAA AAA GTA GAA TCA AGT GAA GCG GAG TAT 1509
Glu Ile Asp Leu 1240 Asn Lys Lys Lys Val 1245 G1 u Ser Ser Glu Alá 1250 Glu Tyr
AGA ACG TTA AGT GCT AAT GAT GAT GGG GTG TAT ATG CCG TTA GGT GTC 1557
Arg Thr Leu 1255 Ser Al a Asn Asp Asp 1260 Gly Val Tyr Me t Pro 1265 Leu Gly Val
ATC AGT GAA ACA TTT TTG ACT CCG ATT AAT GGG TTT GGC CTC CAA GCT 1605
Ile Ser 1270 Glu Thr Phe Leu Thr 1275 Pro Ile Asn Gly Phe 1280 Gly Leu Gin Al a 1285
GAT GAA AAT TCA AGA TTA ATT ACT TTA ACA TGT AAA TCA TAT TTA AGA 1653
Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile 1290 Thr Leu Thr Cys Lys 1295 Ser Tyr Leu Arg 1300
GAA CTA CTG CTA GCA ACA GAC TTA AGC AAT AAA GAA ACT AAA TTG ATC 1701
Glu Leu Leu Leu Alá 1305 Thr Asp Leu Ser Asn 1310 Lys Glu Thr Lys Leu 1315 Ile
GTC CCG CCA AGT GGT TTT ATT AGC AAT ATT GTA GAG AAC GGG TCC ATA 1749
Val Pro Pro Ser 1320 Gly Phe Ile Ser Asn 1325 Ile Val Glu Asn Gly 1330 Ser Ile
GAA GAG GAC AAT TTA GAG CCG TGG AAA GCA AAT AAT AAG AAT GCG TAT 1797
Glu Glu Asp 1335 Asn Leu Glu Pro Trp 1340 Lys Al a Asn Asn Lys 1345 Asn Al a Tyr
GTA GAT CAT ACA GGC GGA GTG AAT GGA ACT AAA GCT TTA TAT GTT CAT 1845
Val Asp 1350 Hi s Thr Gly Gly Val 1355 Asn Gly Thr Lys Alá 1360 Leu Tyr Val Hi s 1365
AAG GAC GGA GGA ATT TCA CAA TTT ATT GGA GAT AAG TTA AAA CCG AAA 1893
Lys Asp Gly Gly Ile Ser Gin 1370 Phe Ile Gly Asp Lys 1375 Leu Lys Pro Lys 1380
ACT GAG TAT GTA ATC CAA TAT ACT GTT AAA GGA AAA CCT TCT ATT CAT 1941
Thr Glu Tyr Val Ile 1385 Gin Tyr Thr Val Lys 1390 Gly Lys Pro Ser Ile 1395 Hi s
TTA AAA GAT GAA AAT ACT GGA TAT ATT CAT TAT GAA GAT ACA AAT AAT 1989
Leu Lys Asp Glu 1400 Asn Thr Gly Tyr Ile 1405 Hi s Tyr Glu Asp Thr 1410 Asn Asn
AAT TTA GAA GAT TAT CAA ACT ATT AAT AAA CGT TTT ACT ACA GGA ACT 2037
Asn Leu Glu Asp Tyr Gin Thr Ile Asn Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
1415 1420 1425
HU 222 264 Bl
GAT TTA Asp Leu 1430 AAG Lys GGA Gly GTG Val TAT TTA Tyr Leu 1435 ATT Ile TTA Leu AAA Lys AGT CAA Ser Gin 1440 AAT Asn GGA Gly GAT Asp GAA Glu 1445 2085
GCT TGG GGA GAT AAC TTT ATT ATT TTG GAA ATT AGT CCT TCT GAA AAG 2133
Alá Trp Gly Asp Asn Phe Ile 1450 Ile Leu Glu Ile Ser 1455 Pro Ser Glu Lys 1460
TTA TTA AGT CCA GAA TTA ATT AAT ACA AAT AAT TGG ACG AGT ACG GGA 2181
Leu Leu Ser Pro Glu 1465 Leu Ile Asn Thr Asn 1470 Asn Trp Thr Ser Thr 1475 Gly
TCA ACT AAT ATT AGC GGT AAT ACA CTC ACT CTT TAT CAG GGA GGA CGA 2229
Ser Thr Asn Ile 1480 Ser Gly Asn Thr Leu 1485 Thr Leu Tyr Gin Gly 1490 Gly Arg
GGG ATT CTA AAA CAA AAC CTT CAA TTA GAT AGT TTT TCA ACT TAT AGA 2277
Gly Ile Leu 1495 Lys Gin Asn Leu Gin 1500 Leu Asp Ser Phe Ser 1505 Thr Tyr Arg
GTG TAT TTC TCT GTG TCC GGA GAT GCT AAT GTA AGG ATT AGA AAT TCT 2325
Val Tyr 1510 Phe Ser Val Ser Gly 1515 Asp Al a Asn Val Arg 1520 Ile Arg Asn Ser 1525
AGG GAA GTG TTA TTT GAA AAA AGA TAT ATG AGC GGT GCT AAA GAT GTT 2373
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys 1530 Arg Tyr Met Ser Gly 1535 Al a Lys Asp Val 1540
TCT GAA ATG TTC ACT ACA AAA TTT GAG AAA GAT AAC TTC TAT ATA GAG 2421
Ser Glu Me t Phe Thr 1545 Thr Lys Phe Glu Lys 1550 Asp Asn Phe Tyr Ile 1555 Glu
CTT TCT CAA GGG AAT AAT TTA TAT GGT GGT CCT ATT GTA CAT TTT TAC 2469
Leu Ser Gin Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val Hi s Phe Tyr
1560 1565 1570
GAT GTC TCT ATT AAG TAAGATCGGG ATCTAATATT AACAGTTTTT AGAAGCTAAT 2524 Asp Val Ser Ile Lys
1575
TCTTGTATAA TGTCCTTGAT TATGGAAAAA CACAATTTTG TTTGCTAAGA TGTATATATA 2584 GCTCACTCAT TAAAAGGCAA TCAAGCTT 2612
Az 5. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 789 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehéije (xi) Az 5. számú szekvencia leírása:
Me t Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Ar g Alá Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
11 e As p Tyr Phe As n Gly Ile Tyr Gly Phe Al a Thr G1 y Ile Lys Asp
20 25 30
11 e Me t Asn Me t Ile Phe Lys Thr Asp Thr G1 y Gly Asp Leu Thr Leu
35 40 45
HU 222 264 Bl
As p Glu 50 Ile Leu Lys Asn Gin 55 Gin Leu Leu Asn Asp 60 Ile Ser Gly Lys
Leu 65 As p Gly Val As n Gly 70 Ser Leu Asn Asp Leu 75 Ile Al a Gin Gly Asn 80
Leu Asn Thr Glu Leu 85 Ser Lys Glu Ile Leu 90 Ly s Ile Al a Asn Glu 95 Gin
Asn Gin Val Leu 100 Asn Asp Val Asn Asn 105 Lys Leu Asp Al a Ile 110 Asn Thr
Me t Leu Arg 115 Val Tyr Leu Pro Lys 120 Ile Thr Ser Me t Leu 125 Ser Asp Val
Me t Ly s 130 Gin Asn Tyr Al a Leu 135 Ser Leu Gin Ile Glu 140 Tyr Leu Ser Lys
Gin 145 Leu Gin Glu Ile Ser 150 Asp Lys Leu Asp Ile 155 Ile Asn Val Asn Val 160
Leu Ile Asn Ser Thr 165 Leu Thr G1 u Ile Thr 170 Pro Ala Tyr Gin Arg 175 Ile
Lys Tyr Val Asn 180 Glu Lys Phe Glu Glu 185 Leu Thr Phe Al a Thr 190 Glu Thr
Ser Ser Lys 195 Val Lys Lys Asp Gly 200 Ser Pro Al a Asp Ile 205 Arg Asp Glu
Leu Thr 210 Glu Leu Thr Glu Leu 215 Al a Lys Ser Val Thr 220 Ly s Asn Asp Val
Asp 225 Gly Phe Glu Phe Tyr 230 Leu Asn Thr Phe Hi s 235 Asp Val Me t Val Gly 240
Asn Asn Leu Phe Gly 245 Arg Se r Al a Leu Lys 250 Thr Al a Ser G1 u Leu 255 Ile
Thr Lys Glu Asn 260 Val Lys Thr Ser Gly 265 Ser Glu Val Gly Asn 270 Val Tyr
Asn Phe Leu 275 Ile Val Leu Thr Al a 280 Leu Gin Al a Ly s Al a 285 Phe Leu Thr
Leu Thr 290 Pro Cys Arg Lys Leu 295 Leu Gly Leu Al a Asp 300 Ile Asp Tyr Thr
Ser 305 Ile Me t Asn Glu His 310 Leu Asn Lys Glu Lys 315 Glu Glu Phe Arg Val 320
Asn Ile Leu Pro Thr 325 Leu Ser Asn Thr Phe 330 Ser Asn Pro Asn Tyr 335 Ala
Lys Val Lys Gly 340 Ser Asp Glu Asp Al a 345 Lys Me t Ile Val Glu 350 Al a Lys
Pro Gly Hi s 355 Al a Leu Ile Gly Phe 360 Glu Ile Ser Asn Asp 365 Ser Ile Thr
HU 222 264 Β1
Val Leu 370 Lys Val Tyr Glu Al a 375 Lys Leu Lys Gin Asn 380 Tyr Gin Val Asp
Lys 385 Asp Ser Leu Ser Glu 390 Val Ile Tyr Gly Asp 395 Me t Asp Lys Leu Leu 400
Cys Pro Asp Gin Ser 405 Gly Gin Ile Tyr Tyr 410 Thr Asn Asn Ile Val 415 Phe
Pro Asn Glu Tyr 420 Val Ile Thr Lys Ile 425 Asp Phe Thr Lys Lys 430 Me t Lys
Thr Leu Arg 435 Tyr Glu Val Thr Al a 440 Asn Phe Tyr Asp Ser 445 Ser Thr Gly
Glu Ile 450 Asp Leu Asn Lys Lys 455 Lys Val Glu Ser Ser 460 Glu Alá Glu Tyr
Arg 465 Thr Leu Ser Al a Asn 470 Asp Asp Gly Val Tyr 475 Me t Pro Leu Gly Val 480
Ile Ser Glu Thr Phe 485 Leu Thr Pro Ile Asn 490 Gly Phe Gly Leu Gin 495 Alá
Asp Glu Asn Ser 500 Arg Leu Ile Thr Leu 505 Thr Cys Lys Ser Tyr 510 Leu Arg
Glu Leu Leu 515 Leu Al a Thr Asp Leu 520 Ser Asn Ly s Glu Thr 525 Ly s Leu Ile
Val Pro 530 Pro Ser Gly Phe Ile 535 Ser Asn Ile Val Glu 540 Asn Gly Ser Ile
Glu 545 G1 u Asp Asn Leu Glu 550 Pro Trp Lys Al a Asn 555 Asn Lys Asn Al a Tyr 560
Val Asp Hi s Thr Gly 565 Gly Val Asn Gly Thr 570 Ly s Al a Leu Tyr Val 575 Hi s
Lys As p Gly Gly 580 Ile Ser Gin Phe Ile 585 Gly Asp Lys Leu Lys 590 Pro Lys
Thr Glu Tyr 595 Val Ile Gin Tyr Thr 600 Val Lys Gly Lys Pro 605 Ser Ile Hi s
Leu Ly s 610 Asp Glu Asn Thr Gly 615 Tyr Ile Hi s Tyr Glu 620 Asp Thr Asn Asn
Asn 625 Leu Glu Asp Tyr Gin 630 Thr Ile Asn Lys Arg 635 Phe Thr Thr Gly Thr 640
Asp Leu Lys Gly Val 645 Tyr Leu Ile Leu Lys 650 Se r Gin Asn Gly Asp 655 Glu
Al a Trp Gly Asp 660 Asn Phe Ile Ile Leu 665 Glu Ile Ser Pro Ser 670 Glu Lys
Leu Leu Ser 675 Pro Glu Leu Ile Asn 680 Thr Asn Asn Trp Thr 685 Ser Thr Gly
HU 222 264 BI
Ser Thr 690 Asn Ile Ser Gly Asn 695 Thr Leu Thr Leu Tyr 700 Gin Gly Gly Arg
Gly 705 Ile Leu Lys Gin Asn 710 Leu Gin Leu Asp Ser 715 Phe Ser Thr Tyr Arg 720
Val Tyr Phe Ser Val 725 Ser Gly Asp Al a Asn 730 Val Arg Ile Arg Asn 735 Ser
Arg Glu Val Leu 740 Phe Glu Lys Arg Tyr 745 Me t Ser Gly Al a Lys 750 As p Val
Ser Glu Me t 755 Phe Thr Thr Lys Phe 760 Glu Lys Asp Asn Phe 765 Tyr Ile Glu
Leu Ser 770 Gin Gly Asn Asn Leu 775 Tyr Gly Gly Pro Ile 780 Val Hi s Phe Tyr
Asp Val Ser Ile Lys
785
A 6. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 2444bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Szálasság: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: DNS (genomiális) (iii) Hipotetikus: nem (ix) Jellemzők:
(A) Név/kulcs: CDS (B) Elhelyezkedés :17.. .2444 (D) Egyéb információ: /termék=„3A(a) szintetikus:natív fúzió” (xi) A 6. számú szekvencia leírása:
GGATCCACCA ATGAAC ATG AAC AAG AAC AAC ACC AAG CTG AGC ACC CGC 49
Met Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg
5 10
GCC CTG CCG AGC TTC ATC GAC TAC TTC Phe 20 AAC GGC Asn Gly ATC Ile TAC GGC TTC Phe GCC Al a 97
Al a Leu Pro Ser 15 Phe Ile Asp Tyr Tyr Gly 25
ACC GGC ATC AAG GAC ATC ATG AAC ATG ATC TTC AAG ACC GAC ACC GGC 145
Thr Gly Ile Lys Asp Ile Me t Asn Me t Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly
30 35 40
GGC GAC CTG ACC CTG GAC GAG ATC CTG AAG AAC CAG CAG CTG CTG AAC 193
Gly Asp Leu Thr Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn Gin Gin Leu Leu Asn
45 50 55
GAC ATC AGC GGC AAG CTG GAC GGC GTG AAC GGC AGC CTG AAC GAC CTG 241
Asp Ile Ser Gly Ly s Leu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu
60 65 70 75
ATC GCC CAG GGC AAC CTG AAC ACC GAG CTG AGC AAG GAG ATC CTT AAG 289
Ile Al a Gin Gly Asn Leu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys
80 85 90
HU 222 264 Bl
ATC GCC AAC Asn GAG Glu 95 CAG AAC CAG GTG Val CTG AAC GAC GTG AAC AAC Asn 105 AAG Lys CTG Leu 337
Ile Al a Gin Asn Gin Leu 100 Asn Asp Val Asn
GAC GCC ATC AAC ACC ATG CTG CGC GTG TAC CTG CCG AAG ATC ACC AGC 385
Asp Al a Ile 110 Asn Thr Me t Leu Arg 115 Val Tyr Leu Pro Lys 120 Ile Thr Ser
ATG CTG AGC GAC GTG ATG AAG CAG AAC TAC GCC CTG AGC CTG CAG ATC 433
Me t Leu 125 Ser Asp Val Me t Lys 130 Gin Asn Tyr Al a Leu 135 Ser Leu Gin Ile
GAG TAC CTG AGC AAG CAG CTG CAG GAG ATC AGC GAC AAG CTG GAC ATC 481
Glu 140 Tyr Leu Ser Ly s Gin 145 Leu Gin Glu Ile Ser 150 Asp Lys Leu Asp Ile 155
ATC AAC GTG AAC GTC CTG ATC AAC AGC ACC CTG ACC GAG ATC ACC CCG 529
Ile Asn Val Asn Val 160 Leu Ile Asn Ser Thr 165 Leu Thr Glu Ile Thr 170 Pro
GCC TAC CAG CGC ATC AAG TAC GTG AAC GAG AAG TTC GAA GAG CTG ACC 577
Al a Tyr Gin Arg 175 Ile Lys Tyr Va 1 Asn 180 Glu Ly s Phe Glu Glu 185 Leu Thr
TTC GCC ACC GAG ACC AGC AGC AAG GTG AAG AAG GAC GGC AGC CCG GCC 625
Phe Al a Thr 190 Glu Thr Ser Ser Ly s 195 Val Lys Ly s Asp Gly 200 Ser Pro Al a
GAC ATC CTG GAC GAG CTG ACC GAG CTG ACC GAG CTG GCC AAG AGC GTG 673
Asp Ile 205 Leu Asp G1 u Leu Thr 210 Glu Leu Thr Glu Leu 215 Al a Ly s Ser Val
ACC AAG AAC GAC GTG GAC GGC TTC GAG TTC TAC CTG AAC ACC TTC CAC 721
Thr 220 Lys Asn Asp Val Asp 225 Gly Phe Glu Phe Tyr 230 Leu Asn Thr Phe Hi s 235
GAC GTG ATG GTG GGC AAC AAC CTG TTC GGC CGC AGC GCC CTG AAG ACC 769
Asp Val Me t Val Gly 240 Asn Asn Leu Phe Gly 245 Arg Ser Al a Leu Lys 250 Thr
GCC AGC GAG CTG ATC ACC AAG GAG AAC GTG AAG ACC AGC GGC AGC GAG 817
Alá Ser Glu Leu 255 Ile Thr Lys Glu Asn 260 Val Lys Thr Ser Gly 265 Ser Glu
GTG GGC AAC GTG TAC AAC TTC CTG ATC GTG CTG ACC GCC CTG CAG GCC 865
Val Gly Asn 270 Val Tyr Asn Phe Leu 275 Ile Val Leu Thr Al a 280 Leu Gin Al a
CAG GCC TTC CTG ACC CTG ACC ACC TGT CGC AAG CTG CTG GGC CTG GCC 913
Gin Alá 285 Phe Leu Thr Leu Thr 290 Thr Cys Arg Lys Leu 295 Leu Gly Leu Al a
GAC ATC GAC TAC ACC AGC ATC ATG AAC GAG CAC TTG AAC AAG GAG AAG 961
Asp 300 Ile Asp Tyr Thr Ser 305 Ile Me t Asn Glu Hi s 310 Leu Asn Lys Glu Lys 315
GAG GAG TTC CGC GTG AAC ATC CTG CCG ACC CTG AGC AAC ACC TTC AGC 1009
Glu Glu Phe Arg Val Asn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser
320 325 330
HU 222 264 Bl
AAC CCG AAC TAC GCC AAG GTG AAG GGC AGC Ser GAC GAG GAC GCC AAG ATG 1057
Asn Pro Asn Tyr 335 Ala Lys Val Lys Gly 340 Asp Glu Asp Al a 345 Lys Me t
ATC GTG GAG GCT AAG CCG GGC CAC GCG TTG ATC GGC TTC GAG ATC AGC 1105
Ile Val Glu Al a Ly s Pro Gly Hi s Al a Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser
350 355 360
AAC GAC AGC ATC ACC GTG CTG AAG GTG TAC GAG GCC AAG CTG AAG CAG 1153
Asn Asp Ser Ile Thr Val Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gin
365 370 375
AAC TAC CAG GTG GAC AAG GAC AGC TTG AGC GAG GTG ATC TAC GGC GAC 1201
Asn Tyr Gin Va 1 As p Lys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp
380 385 390 395
ATG GAC AAG CTG CTG TGT CCG GAC CAG AGC GAG CAA ATC TAC TAC ACC 1249
Me t Asp Lys Leu Leu Cys Pro Asp Gin Ser Glu Gin Ile Tyr Tyr Thr
400 405 410
AAC AAC ATC GTG TTC CCG AAC GAG TAC GTG ATC ACC AAG ATC GAC TTC 1297
Asn Asn Ile Val Phe Pro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe
415 420 425
ACC AAG AAG ATG AAG ACC CTG CGC TAC GAG GTG ACC GCC AAC TTC TAC 1345
Thr Ly s Lys Me t Lys Thr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Al a Asn Phe Tyr
430 435 440
GAC AGC AGC ACC GGC GAG ATC GAC CTG AAC AAG AAG AAG GTG GAG AGC 1393
Asp Ser Ser Thr Gly Glu Ile Asp Leu Asn Lys Ly s Lys Val Glu Ser
445 450 455
AGC GAG GCC GAG TAC CGC ACC CTG AGC GCG AAC GAC GAC GGC GTC TAC 1441
Ser Glu Al a Glu Tyr Arg Thr Leu Ser Al a Asn Asp Asp Gly Val Tyr
460 465 470 475
ATG CCA CTG GGC GTG ATC AGC GAG ACC TTC CTG ACC CCG ATC AAC GGC 1489
Me t Pro Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly
480 485 490
TTT GGC CTG CAG GCC GAC GAG AAC AGC CGC CTG ATC ACC CTG ACC TGT 1537
Phe Gly Leu Gin Al a Asp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys
495 500 505
AAG AGC TAC CTG CGC GAG CTG CTG CTA GCC ACC GAC CTG AGC AAC AAG 1585
Lys Ser Tyr Leu Arg Glu Leu Leu Leu Al a Thr Asp Leu Ser Asn Lys
510 515 520
GAG ACC AAG CTG ATC GTG CCA CCG AGC GGC TTC ATC AGC AAC ATC GTG 1633
Glu Thr Lys Leu Ile Val Pr o Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val
525 530 535
GAG AAC GGC AGC ATC GAG GAG GAC AAC CTG GAG CCG TGG AAG GCC AAC 1681
G1 u Asn G1 y Ser Ile Glu Glu As p Asn Leu Glu Pro Trp Ly s Al a Asn
540 545 550 555
AAC AAG AAC GCC TAC GTG GAC CAC ACC GGC GGC GTG AAC GGC ACC AAG 1729
Asn Lys Asn Al a Tyr Val Asp Hi s Thr Gly Gly Val Asn Gly Thr Lys
560 565 570
HU 222 264 Bl
GCC Al a CTG TAC GTG CAC AAG GAC GGC GGC ATC AGC Ser CAG Gin TTC Phe ATC Ile 585 GGC Gly GAC Asp 1777
Leu Tyr Val 575 Hi s Lys Asp Gly Gly 580 Ile
AAG CTG AAG CCG AAG ACC GAG TAC GTG ATC CAG TAC ACC GTG AAG GGC 1825
Lys Leu Lys 590 Pro Lys Thr Glu Tyr 595 Val Ile Gin Tyr Thr 600 Val Lys Gly
AAG CCA TCG ATT CAC CTG AAG GAC GAG AAC ACC GGC TAC ATC CAC TAC 1873
Lys Pro 605 Ser Ile Hi s Leu Lys 610 As p Glu Asn Thr Gly 615 Tyr Ile Hi s Tyr
GAG GAC ACC AAC AAC AAC CTG GAG GAC TAC CAG ACC ATC AAC AAG CGC 1921
Glu 620 Asp Thr Asn Asn Asn 625 Leu Glu Asp Tyr Gin 630 Thr Ile Asn Lys Arg 635
TTC ACC ACC GGC ACC GAC CTG AAG GGC GTG TAC CTG ATC CTG AAG AGC 1969
Phe Thr Thr Gly Thr 640 Asp Leu Ly s Gly Val 645 Tyr Leu Ile Leu Ly s 650 Ser
CAG AAC GGC GAC GAG GCC TGG GGC GAC AAC TTC ATC ATC CTG GAG ATC 2017
Gin Asn Gly Asp 655 Glu Al a Trp Gly Asp 660 Asn Phe Ile Ile Leu 665 Glu Ile
AGC CCG AGC GAG AAG CTG CTG AGC CCG GAG CTG ATC AAC ACC AAC AAC 2065
Ser Pro Ser 670 Glu Ly s Leu Leu Ser 675 Pro Glu Leu Ile Asn 680 Thr Asn Asn
TGG ACC AGC ACC GGC AGC ACC AAC ATC AGC GGC AAC ACC CTG ACC CTG 2113
Trp Thr 685 Ser Thr Gly Ser Thr 690 Asn Ile Ser Gly Asn 695 Thr Leu Thr Leu
TAC CAG GGC GGC CGG GGG ATT CTA AAA CAA AAC CTT CAA TTA GAT AGT 2161
Tyr 700 Gin Gly Gly Arg Gly 705 Ile Leu Lys Gin Asn 710 Leu Gin Leu Asp Ser 715
TTT TCA ACT TAT AGA GTG TAT TTT TCT GTG TCC GGA GAT GCT AAT GTA 2209
Phe Ser Thr Tyr Arg 720 Val Tyr Phe Ser Val 725 Ser Gly Asp Al a Asn 730 Val
AGG ATT AGA AAT TCT AGG GAA GTG TTA TTT GAA AAA AGA TAT ATG AGC 2257
Arg Ile Arg Asn 735 Ser Arg Glu Va 1 Leu 740 Phe Glu Ly s Arg Tyr 745 Me t Ser
GGT GCT AAA GAT GTT TCT GAA ATG TTC ACT ACA AAA TTT GAG AAA GAT 2305
Gly Al a Lys 750 Asp Va 1 Ser Glu Me t 755 Phe Thr Thr Lys Phe 760 Glu Lys Asp
AAC TTT TAT ATA GAG CTT TCT CAA GGG AAT AAT TTA TAT GGT GGT CCT 2353
Asn Phe 765 Tyr Ile Glu Leu Ser 770 Gin Gly Asn Asn Leu 775 Tyr Gly Gly Pro
ATT GTA CAT TTT TAC GAT GTC TCT ATT AAG NAA GAT CGG GAT CTA ATA 2401
Ile 780 Va 1 His Phe Tyr Asp 785 Va 1 Ser Ile Lys Xaa 790 As p Arg As p Leu Ile 795
TTA Leu ACA Thr GTT Val TTT Phe AAA Ly s AGC Ser NAA Xaa TTC Phe TTG Leu TAT Tyr AAT As n GTC Val CTT Leu GAT As p T 2444
800 805
HU 222 264 Β1
A 7. számú szekvencia adatai:
(i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 809 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (ii) Molekula típusa: fehéije (xi) A 7. számú szekvencia leírása:
Me t 1 Asn Lys Asn Asn 5 Thr Lys Leu
Ile As p Tyr Phe 20 Asn Gly Ile Tyr
Ile Me t Asn 35 Me t Ile Phe Lys Thr 40
Asp Glu 50 Ile Leu Ly s Asn Gin 55 Gin
Leu 65 As p Gly Val Asn Gly 70 Ser Leu
Leu Asn Thr Glu Leu 85 Ser Lys Glu
Asn Gin Val Leu 100 Asn Asp Val Asn
Me t Leu Arg 115 Val Tyr Leu Pro Ly s 120
Me t Lys 130 Gin Asn Tyr Al a Leu 135 Ser
G1 n 145 Leu Gin Glu Ile Ser 150 Asp Ly s
Leu Ile Asn Ser Thr 165 Leu Thr Glu
Ly s Tyr Val Asn 180 Glu Lys Phe Glu
Ser Ser Lys 195 Val Lys Ly s Asp Gly 200
Leu Thr 210 Glu Leu Thr Glu Leu 215 Al a
Asp 225 Gly Phe Glu Phe Tyr 230 Leu Asn
Asn Asn Leu Phe Gly 245 Arg Ser Al a
Thr Ly s Glu Asn 260 Va 1 Ly s Thr Ser
Asn Phe Leu 275 Ile Val Leu Thr Al a 280
Ser Thr 10 Arg Al a Leu Pro Ser 15 Phe
Gly 25 Phe Al a Thr Gly Ile 30 Lys Asp
Asp Thr Gly Gly Asp 45 Leu Thr Leu
Leu Leu Asn Asp 60 Ile Ser Gly Ly s
Asn As p Leu 75 Ile Al a Gin Gly Asn 80
Ile Leu 90 Ly s Ile Al a Asn Glu 95 Gin
Asn 105 Ly s Leu Asp Al a Ile 110 Asn Thr
Ile Thr Ser Me t Leu 125 Ser As p Val
Leu Gin Ile Glu 140 Tyr Leu Ser Lys
Leu Asp Ile 155 Ile Asn Val Asn Val 160
Ile Thr 170 Pro Al a Tyr Gin Arg 175 Ile
Glu 185 Leu Thr Phe Al a Thr 190 Glu Thr
Ser Pro Al a Asp Ile 205 Leu Asp Glu
Lys Ser Val Thr 220 Lys Asn Asp Val
Thr Phe Hi s 235 Asp Val Me t Val Gly 240
Leu Lys 250 Thr Al a Ser Glu Leu 255 Ile
Gly 265 Ser Glu Val Gly Asn 270 Val Tyr
Leu Gin Al a Gin Al a 285 Phe Leu Thr
HU 222 264 Bl
Leu Thr 290 Thr Cy s Arg Ly s Leu 295 Leu Gly Leu Al a Asp 300 Ile As p Tyr Thr
Ser 305 Ile Me t Asn Glu Hi s 310 Leu Asn Lys Glu Lys 315 Glu Glu Phe Arg Val 320
Asn Ile Leu Pro Thr 325 Leu Ser Asn Thr Phe 330 Ser Asn Pro Asn Tyr 335 Al a
Lys Val Lys Gly 340 Ser Asp Glu Asp Al a 345 Lys Me t Ile Val Glu 350 Al a Lys
Pro Gly Hi s 355 Al a Leu Ile Gly Phe 360 Glu Ile Ser Asn Asp 365 Ser Ile Thr
Val Leu 370 Lys Val Tyr Glu Al a 375 Ly s Leu Lys Gin Asn 380 Tyr Gin Val As p
Lys 385 Asp Ser Leu Ser Glu 390 Val Ile Tyr Gly Asp 395 Me t Asp Lys Leu Leu 400
Cy s Pro Asp Gin Ser 405 Glu Gin Ile Tyr Tyr 410 Thr Asn Asn Ile Val 415 Phe
Pro Asn Glu Tyr 420 Val Ile Thr Ly s Ile 425 As p Phe Thr Lys Ly s 430 Me t Lys
Thr Leu Arg 435 Tyr Glu Val Thr Al a 440 Asn Phe Tyr Asp Ser 445 Ser Thr Gly
Glu Ile 450 Asp Leu Asn Lys Lys 455 Lys Val Glu Ser Ser 460 Glu Al a Glu Tyr
Arg 465 Thr Leu Ser Al a Asn 470 Asp Asp Gly Val Tyr 475 Me t Pro Leu Gly Val 480
Ile Ser Glu Thr Phe 485 Leu Thr Pro Ile Asn 490 Gly Phe Gly Leu Gin 495 Al a
Asp Glu Asn Ser 500 Arg Leu Ile Thr Leu 505 Thr Cys Lys Ser Tyr 510 Leu Arg
Glu Leu Leu 515 Leu Al a Thr Asp Leu 520 Ser Asn Lys Glu Thr 525 Lys Leu Ile
Val Pro 530 Pro Ser Gly Phe Ile 535 Se r Asn Ile Val Glu 540 Asn Gly Ser Ile
Glu 545 Glu Asp Asn Leu Glu 550 Pro Trp Lys Al a Asn 555 Asn Lys Asn Al a Tyr 560
Val Asp Hi s Thr Gly 565 Gly Val Asn Gly Thr 570 Lys Al a Leu Tyr Val 575 Hi s
Lys Asp Gly Gly 580 Ile Ser Gin Phe Ile 585 Gly Asp Lys Leu Lys 590 Pro Lys
Thr Glu Tyr 595 Val Ile Gin Tyr Thr 600 Val Lys Gly Ly s Pro 605 Ser Ile Hi s
HU 222 264 Bl
Leu Lys Asp Glu 610 Asn Thr Gly 615 Tyr Ile Hi s Tyr Glu 620 As p Thr Asn Asn
Asn Leu Glu Asp Tyr Gin Thr Ile Asn Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr
625 630 635 640
Asp Leu Lys Gly Val Tyr Leu Ile Leu Lys Se r Gin Asn Gly Asp Glu
645 650 655
Al a Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile Leu Glu Ile Ser Pro Ser Glu Lys
660 665 670
Leu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly
675 680 685
Ser Thr Asn Ile Se r Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gin Gly Gly Arg
690 695 700
Gly Ile Leu Lys Gin Asn Leu Gin Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg
705 710 715 720
Val Tyr Phe Ser Va 1 Ser Gly Asp Al a Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser
725 730 735
Arg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Me t Ser Gly Al a Ly s Asp Val
740 745 750
Ser Glu Me t Phe Thr Thr Ly s Phe Glu Lys As p Asn Phe Tyr Ile G1 u
755 760 765
Leu Ser Gin Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val Hi s Phe Tyr
770 775 780
Asp Val Ser Ile Lys Xaa Asp Arg Asp Leu Ile Leu Thr Val Phe Ly s
785 790 795 800
Ser Xaa Phe Leu Tyr Asn Va 1 Leu Asp
805

Claims (32)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Peszticid fehérjét kódoló DNS-molekula, amely a Bacillus spp. vagy variánsai vegetatív növekedési fázisa alatt izolálható, vagy a fehérje peszticid aktivitását megőrző fragmentumai, amely fehérjét egy, az 1., 3. vagy 4. nukleotidszekvenciához 7% SDS-t tartalmazó 0,5 M nátrium-foszfát-pufferben hibridizáló nukleotidszekvencia kódolja, vagy amely fehérje keresztreakciót mutat 2. vagy 5. szekvenciájú proteinek elleni antitestekkel.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti DNS-molekula, amely egy 1., 2., 4., 5., 6. vagy 7. szekvenciájú fehérjét kódol.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti DNS-molekula, amely az 1., 3., 4. vagy 6. nukleotidszekvenciával rendelkezik.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti DNS-molekula, amely egy, részben vagy teljesen egy növényben való kifejeződéshez, a növény kitüntetett kodonjai felhasználásával, optimalizált nukleotidszekvenciát tartalmaz.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti DNS-molekula, amely a
    3. vagy 6. nukleotidszekvenciával rendelkezik.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti DNS-molekula, amely egy, részben vagy teljesen egy mikroorganizmusban való kifejeződéshez, a gazdaszervezet kitüntetett kodonjai felhasználásával, optimalizált nukleotidszekvenciát tartalmaz.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti DNS-molekula, amely a következő eljárással állítható elő:
    i) veszünk egy DNS-molekulát, amely egy peszticid fehérjét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz, ii) ezt a DNS-molekulát hibridizáljuk egy oligonukleotidmintával, amely az 1., 3., 4. vagy 6. szekvenciával rendelkező DNS-molekulából nyerhető és iii) izoláljuk a hibridizált DNS-t.
  8. 8. Expressziós kazetta, amely az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti DNS-molekulát tartalmaz működő91
    HU 222 264 Β1 képesen növényi expressziós szekvenciákhoz kötve, ideértve a transzkripciós és transzlációs szabályozószekvenciákat - amelyek a társult DNS-szerkezetek kifejeződéséhez szükségesek -, és adott esetben további szabályozószekvenciákat.
  9. 9. A 8. igénypont szerinti expressziós kazetta, amelynek gazdaszervezete egy növény.
  10. 10. Vektormolekula, amely a 8. igénypont szerinti expressziós kazettát tartalmazza.
  11. 11. Az 1. igénypont szerinti DNS-molekula által kódolt peszticid fehéije.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti peszticid fehéije, amelynek molekulatömege 60-100 kDa.
  13. 13. A12. igénypont szerinti peszticid fehéije, amelynek aminosavszekvenciája a 2. vagy az 5. szekvencia.
  14. 14. A 11. igénypont szerinti peszticid fehéije, amely a Bacillus thuringiensis AB88 (NRRL B-21225) vagy a Bacillus thuringiensis AB424 (NRRL B-21439) vegetatív növekedési fázisa alatt izolálható.
  15. 15. Gazdaszervezet, amely az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti DNS-molekulát, egy ezt tartalmazó expressziós kazettát vagy az expressziós kazettát tartalmazó vektormolekulát tartalmaz, előnyösen stabilan a gazdaszervezet genomjába beépítve.
  16. 16. A 15. igénypont szerinti gazdaszervezet, amely növény- vagy rovarsejt, baktérium, élesztő, bakulovírus, protozoon, nematóda vagy alga.
  17. 17. A 16. igénypont szerinti gazdaszervezet, amely egy, a 8. vagy 9. igénypont szerinti expressziós kazettával vagy egy 10. igénypont szerinti vektorral transzformáit mikroorganizmus, előnyösen növényeken szaporodó mikroorganizmus.
  18. 18. A 17. igénypont szerinti gazdaszervezet, amely mellett a mikroorganizmus a gyökéren telepet képező baktérium vagy egy Pseudomonas-törzs.
  19. 19. A 17. igénypont szerinti gazdaszervezet, amely mellett a mikroorganizmus a Bacillus thuringiensis AB88 (NRRL B-21225) vagy a Bacillus thuringiensis AB424 (NRRL B-21439).
  20. 20. Transzgén növény, ideértve részeit, utódait és magját, amely az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti DNS-molekulát vagy egy, a 9. igénypont szerinti expressziós kazettát tartalmaz.
  21. 21. A 20. igénypont szerinti növény, amely egy, a 11. igénypont szerinti peszticid fehéijét fejez ki.
  22. 22. A 21. igénypont szerinti növény, amely egy második, megkülönböztethető rovarkontrollanyagot is kifejez, amilyen a Bt δ-endotoxin.
  23. 23. A 20-22. igénypontok bármelyike szerinti növény, amely kukorica, ciroknád, búza, napraforgó, gyapot, rizs, szójabab, árpa vagy olajrepcemag.
  24. 24. A 23. igénypont szerinti növény, amely kukoricanövény.
  25. 25. A 23. igénypont szerinti növény, amely gyapotnövény.
  26. 26. A 20-25. igénypontok bármelyike szerinti növény, amely hibrid növény.
  27. 27. A 20-25. igénypontok bármelyike szerinti növényi mag, amelyet magvédő bevonattal láttunk el.
  28. 28. Eljárás az 1. igénypont szerinti DNS-molekula elkülönítésére, azzal jellemezve, hogy
    i) veszünk egy DNS-molekulát, amely egy peszticid fehéijét kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz, ii) ezt a DNS-molekulát hibridizáljuk egy oligonukleotidmintával, amelyet az 1., 3., 4. vagy 6. szekvenciájú DNS-molekulából nyerhetünk és iii) elkülönítjük a hibridizált DNS-t.
  29. 29. Eljárás a rovarcéltartomány növelésére, azzaljellemezve, hogy egy, a 8. igénypont szerinti expressziós kazettát kifejezünk egy növényben legalább 1 második rovarölő fehérjével együtt, amely különbözik az expressziós kazetta által kódolt peszticid fehéijétől.
  30. 30. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a második inszekticid fehéijét a Bt δ-endotoxinok, proteázinhibitorok, lektinek, α-amilázok és peroxidázok közül választjuk ki.
  31. 31. Eljárás növények rovar kártevők által okozott károsodással szembeni megvédésére, azzal jellemezve, hogy kiültetünk egy növényt, amely transzgén egy peszticid fehéqét kódoló DNS-molekula tekintetében, amely DNS-molekula mérsékelten szigorú körülmények között hibridizál egy oligonukleotidmintához, mi mellett utóbbi az 1. igénypont szerinti, 1., 3., 4. vagy 6. szekvenciájú DNS-molekulából nyerhető ki, és a növény kifejezi a peszticid fehéijét.
  32. 32. Eljárás peszticid fehéijét kifejező növény vagy növényi sejt előállítására, azzal jellemezve, hogy a növényt vagy növényi sejtet a 9. igénypont szerinti expressziós kazettával vagy a 10. igénypont szerinti vektormolekulával transzformáljuk.
HU9702268A 1994-09-28 1995-09-27 Új peszticid fehérjék és a termelő törzsek HU222264B1 (hu)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31459494A 1994-09-28 1994-09-28
US08/463,483 US5849870A (en) 1993-03-25 1995-06-05 Pesticidal proteins and strains
PCT/EP1995/003826 WO1996010083A1 (en) 1994-09-28 1995-09-27 Novel pesticidal proteins and strains

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT77449A HUT77449A (hu) 1998-04-28
HU222264B1 true HU222264B1 (hu) 2003-05-28

Family

ID=26979445

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9702268A HU222264B1 (hu) 1994-09-28 1995-09-27 Új peszticid fehérjék és a termelő törzsek

Country Status (24)

Country Link
US (9) US5849870A (hu)
EP (3) EP1382611A3 (hu)
JP (1) JPH10506532A (hu)
KR (1) KR100419438B1 (hu)
CN (1) CN1255539C (hu)
AT (1) ATE256743T1 (hu)
AU (1) AU692934B2 (hu)
BG (1) BG101384A (hu)
BR (1) BR9509099A (hu)
CA (1) CA2199049C (hu)
CZ (1) CZ290801B6 (hu)
DE (1) DE69532333T3 (hu)
DK (1) DK0792363T4 (hu)
ES (1) ES2213162T5 (hu)
HU (1) HU222264B1 (hu)
IL (2) IL115382A (hu)
MX (1) MX228013B (hu)
PH (2) PH11995051386B1 (hu)
PT (1) PT792363E (hu)
RO (1) RO119835B1 (hu)
RU (1) RU2196824C2 (hu)
SI (1) SI0792363T2 (hu)
TR (1) TR199501182A2 (hu)
WO (1) WO1996010083A1 (hu)

Families Citing this family (132)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6406690B1 (en) * 1995-04-17 2002-06-18 Minrav Industries Ltd. Bacillus firmus CNCM I-1582 or Bacillus cereus CNCM I-1562 for controlling nematodes
GB9600786D0 (en) * 1996-01-15 1996-03-20 Ciba Geigy Ag Method of controlling insect pests
US6677135B1 (en) * 1996-05-08 2004-01-13 Biogen, Inc. Ret ligand (RetL) for stimulating neutral and renal growth
GB9611777D0 (en) * 1996-06-06 1996-08-07 Ciba Geigy Ag Method of controlling insect pests
AU741036B2 (en) * 1996-07-01 2001-11-22 Mycogen Corporation Toxins active against pests
US6369213B1 (en) 1996-07-01 2002-04-09 Mycogen Corporation Toxins active against pests
US6242669B1 (en) 1996-10-30 2001-06-05 Mycogen Corporation Pesticidal toxins and nucleotide sequences which encode these toxins
KR20000053001A (ko) 1996-10-30 2000-08-25 칼튼 제이. 에이블 신규한 살충독소 및 이들 독소를 코드화하는 뉴클레오티드 서열
US7129212B2 (en) * 1996-10-30 2006-10-31 Mycogen Corporation Polynucleotides, pesticidal proteins, and novel methods of using them
US6603063B1 (en) 1999-05-07 2003-08-05 Mycogen Corp. Plants and cells transformed with a nucleic acid from Bacillus thuringiensis strain KB59A4-6 encoding a novel SUP toxin
US6002068A (en) * 1996-12-19 1999-12-14 Novartis Finance Corporation Methods for conferring insect resistance to a monocot using a perioxidase coding sequence
JP2001522238A (ja) * 1997-03-31 2001-11-13 アボツト・ラボラトリーズ 胃腸管の疾患の検出に有用な試薬および方法
AU727218B2 (en) 1997-04-03 2000-12-07 Syngenta Participations Ag Plant pest control
SK283036B6 (sk) 1997-05-09 2003-02-04 Agraquest, Inc. Biologicky čistá kultúra kmeňa Bacillus subtilis, metabolit, supernatant, prostriedok a spôsob ochrany alebo ošetrenia rastlín a plodov
US6103228A (en) 1997-05-09 2000-08-15 Agraquest, Inc. Compositions and methods for controlling plant pests
CA2291617A1 (en) * 1997-06-04 1998-12-10 Novartis Ag Pesticide screening system
US6027723A (en) * 1997-08-22 2000-02-22 Agraquest, Inc. Rhodococcus globerulus strain for controlling corn rootworm
US6015553A (en) * 1997-08-22 2000-01-18 Agraquest, Inc. Bacillus subtilis strain for controlling insect and nematode pests
US5906818A (en) * 1997-08-22 1999-05-25 Agraquest, Inc. Bacillus mycoides strain for controlling corn rootworm
US6001637A (en) * 1997-08-22 1999-12-14 Agraquest, Inc. Bacillus pumilus strain for controlling corn rootworm, nematode and armyworm infestations
GB9725556D0 (en) * 1997-12-03 1998-02-04 Ciba Geigy Ag Organic compounds
CA2335093A1 (en) * 1998-07-15 2000-01-27 The Horticulture And Food Research Institute Of New Zealand Limited Chimeric polypeptides allowing expression of plant-noxious proteins
AR020141A1 (es) * 1998-08-10 2002-04-10 Mycogen Corp Toxinas y genes pesticidas de cepas de bacillus laterosporus
US6468523B1 (en) 1998-11-02 2002-10-22 Monsanto Technology Llc Polypeptide compositions toxic to diabrotic insects, and methods of use
AUPP841199A0 (en) * 1999-02-02 1999-02-25 Pinnock, Professor Dudley Edwin Control of mange
JP4584461B2 (ja) 1999-03-30 2010-11-24 アグラクエスト インコーポレイテッド 植物の病気を制御するためのＢａｃｉｌｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓ菌株
US6245551B1 (en) 1999-03-30 2001-06-12 Agraquest, Inc. Strain of Bacillus pumilus for controlling plant diseases caused by fungi
GB9909796D0 (en) * 1999-04-28 1999-06-23 Plant Bioscience Ltd Pesticidal fumes
US6706860B2 (en) 2000-05-18 2004-03-16 Bayer Bioscience N.V. Toxins
US7091399B2 (en) * 2000-05-18 2006-08-15 Bayer Bioscience N.V. Transgenic plants expressing insecticidal proteins and methods of producing the same
GB2384309B8 (en) * 2000-10-13 2016-03-02 Irm Llc High throughput processing system and method of using
EP1988099B1 (en) * 2001-01-09 2012-11-14 Bayer CropScience NV Bacillus thuringiensis insecticidal proteins
AR035799A1 (es) 2001-03-30 2004-07-14 Syngenta Participations Ag Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos.
WO2003003653A2 (en) * 2001-06-26 2003-01-09 Versada Networks, Inc. Transcoding sms-based streamed messages to sip-based ip signals in wireless and wireline networks
US20030110840A1 (en) * 2001-07-24 2003-06-19 Arriaga Edgar A. Systems and methods for detecting a particle
DE60238949D1 (de) 2001-11-07 2011-02-24 Syngenta Participations Ag Promotoren zur regulierung der genexpression in pflanzenwurzeln
US6589524B1 (en) 2002-02-07 2003-07-08 Ecomicrobials, Llc Strains of Bacillus for biological control of pathogenic fungi
ES2348509T5 (es) * 2002-03-22 2014-07-14 Bayer Cropscience Nv Nuevas proteínas insecticidas de Bacillus thuringiensis
EP2213681A1 (en) * 2002-03-22 2010-08-04 Bayer BioScience N.V. Novel Bacillus thuringiensis insecticidal proteins
WO2004003148A2 (en) * 2002-06-26 2004-01-08 E.I. Du Pont De Nemours And Company Genes encoding proteins with pesticidal activity
US7462760B2 (en) * 2002-06-26 2008-12-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes encoding plant protease-resistant pesticidal proteins and method of their use
US7205454B2 (en) 2002-07-31 2007-04-17 Bayer Bioscience N.V. Corn root preferential promoters and uses thereof
GB0225129D0 (en) 2002-10-29 2002-12-11 Syngenta Participations Ag Improvements in or relating to organic compounds
US20040220268A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Yoe-Sik Bae Compound that directly stimulates phospholipase C activity
US7700094B1 (en) * 2003-09-23 2010-04-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Acetyl esterase producing strains and methods of using same
CN1886513A (zh) * 2003-12-01 2006-12-27 先正达公司 昆虫抗性棉花植株及对其进行探测的方法
WO2005107383A2 (en) 2003-12-16 2005-11-17 Monsanto Technology Llc Secreted insecticidal protein and gene compositions from bacillus thuringiensis and uses therefor
PT1863849E (pt) 2005-03-11 2011-05-10 Syngenta Ltd Controlo de pragas de roedores
AU2006225065B2 (en) * 2005-03-14 2012-08-16 Ectotec Pty Ltd Control of sucking lice
CN101151040A (zh) * 2005-03-14 2008-03-26 微生物产品私人有限公司 吸血虱的控制
ES2435079T3 (es) 2005-07-08 2013-12-18 Universidad Nacional Autonoma De Mexico Instituto Nuevas proteínas bacterianas con actividad plaguicida
RU2008112187A (ru) * 2005-08-31 2009-10-10 Монсанто Текнолоджи, Ллс (Us) Инсектицидные композиции и способы получения устойчивых к насекомым трансгенных растений
EP2455394B1 (en) 2006-06-15 2017-04-12 Athenix Corporation A family of pesticidal proteins and methods for their use
CA2658677C (en) * 2006-07-21 2014-04-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
US20080300210A1 (en) * 2007-05-16 2008-12-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of Controlling Insects and Virus Transmission
US20110023194A1 (en) * 2007-12-11 2011-01-27 Syngenta Participations Ag Engineering zymogen for conditional toxicity
US9133251B2 (en) 2008-02-22 2015-09-15 The Curators Of The University Of Missouri Bacillus based delivery system and methods of use
US8110608B2 (en) 2008-06-05 2012-02-07 Ecolab Usa Inc. Solid form sodium lauryl sulfate (SLS) pesticide composition
MX2010014379A (es) 2008-07-02 2011-05-19 Athenix Corp Axmi-115, axmi-113, axmi-005, axmi-163 y axmi-184: proteinas insecticidas vip3a de bacillus thuringiensis y metodos para su uso.
US20100199383A1 (en) * 2008-09-18 2010-08-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel Bacillus Thuringiensis Gene with Coleopteran Activity
US20100077507A1 (en) * 2008-09-22 2010-03-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel Bacillus Thuringiensis Gene with Lepidopteran Activity
US8084416B2 (en) 2008-12-23 2011-12-27 Athenix Corp. AXMI-150 delta-endotoxin gene and methods for its use
CA2751724A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Blended refuge deployment via manipulation during hybrid seed production
AU2010217915B2 (en) 2009-02-27 2016-03-17 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Pesticidal proteins and methods for their use
EP2666866A3 (en) 2009-03-06 2014-03-05 Athenix Corporation Methods and compositions for controlling plant pests
US20100298211A1 (en) 2009-03-11 2010-11-25 Athenix Corporation Axmi-001, axmi-002, axmi-030, axmi-035, and axmi-045: toxin genes and methods for their use
PL2449109T3 (pl) * 2009-07-02 2017-04-28 Athenix Corporation Gen pestycydowy AXMI-205 i sposoby jego stosowania
CA3062192C (en) 2009-07-31 2022-05-17 Athenix Corp. Axmi204 protein with pesticidal activity and methods of use thereof
RU2613778C2 (ru) 2009-10-02 2017-03-21 Зингента Партисипейшнс Аг Инсектицидные белки
CA2785208A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
AR079882A1 (es) 2009-12-23 2012-02-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
BR112012015690A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd.
BR112012015692A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicida inibidor de hppds.
ES2659085T3 (es) 2009-12-23 2018-03-13 Bayer Intellectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de HPPD
US8968757B2 (en) 2010-10-12 2015-03-03 Ecolab Usa Inc. Highly wettable, water dispersible, granules including two pesticides
WO2012092106A1 (en) 2010-12-28 2012-07-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
BR112013020380A2 (pt) 2011-02-11 2017-06-06 Pioneer Hi Bred Int polipeptídeo pesticida, polinucleotídeo, cassete de expressão, célula hospedeira, planta, semente transgênica, método para produzir uma planta que tem atividade pesticida aprimorada, composição pesticida, método para controlar um inseto-praga em uma área de cultivo e micro-organismo.
US8878007B2 (en) 2011-03-10 2014-11-04 Pioneer Hi Bred International Inc Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
KR20140033354A (ko) 2011-03-25 2014-03-18 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 Hppd 억제 제초제에 대해서 내성인 유전자이식 농작물의 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 n-(테트라졸-4-일)- 또는 n-(트리아졸-3-일)아릴카복사미드 또는 그의 염의 용도
CA2830802A1 (en) 2011-03-25 2012-10-04 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of n-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)benzamides for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to hppd inhibitor herbicides
EP2794887A2 (en) 2011-03-30 2014-10-29 Universidad Nacional Autonoma De Mexico Mutant bacillus thuringiensis cry genes and methods of use
EP2694659B1 (en) * 2011-04-05 2019-06-12 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Axmi115 variant insecticidal gene and methods for its use
EP2705153A1 (en) 2011-05-02 2014-03-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacterial mrna screen strategy for novel pesticide-encoding nucleic acid molecule discovery
WO2013015993A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Syngenta Participations Ag Methods and compositions for controlling nematode pests
CN103173370B (zh) * 2011-12-06 2015-02-18 高小文 芽胞杆菌Gxw4-2培育及其防治害虫方法
EA031448B1 (ru) 2012-02-16 2019-01-31 Зингента Партисипейшнс Аг Сконструированные пестицидные белки
MX362455B (es) 2012-03-08 2019-01-18 Athenix Corp Gen de la toxina axmi335 de bacillus thuringiensis y sus metodos de uso.
US9644213B2 (en) 2012-03-09 2017-05-09 Board Of Trustees Of Michigan State University Method of enhancing plant drought tolerance by expression of NDR1
CN102633884B (zh) * 2012-04-21 2013-07-31 中国农业科学院植物保护研究所 苏云金芽胞杆菌vip1like1、vip2like1基因组合及其应用
WO2013181647A2 (en) 2012-06-01 2013-12-05 Danisco Us Inc. Compositions and methods of producing isoprene and/or industrrial bio-products using anaerobic microorganisms
WO2014036238A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Athenix Corp. Axmi-234 and axmi-235 toxin genes and methods for their use
US9783820B2 (en) 2012-10-15 2017-10-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions to enhance activity of Cry endotoxins
CN103039494A (zh) * 2012-12-05 2013-04-17 北京大北农科技集团股份有限公司 控制害虫的方法
US9458374B2 (en) * 2012-12-18 2016-10-04 Schlumberger Technology Corporation Cystine proteases for bacterial control
US9783817B2 (en) 2013-03-04 2017-10-10 Arkansas State University Methods of expressing and detecting activity of expansin in plant cells
WO2014138339A2 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Athenix Corp. Toxin genes and methods for their use
US9573980B2 (en) 2013-03-15 2017-02-21 Spogen Biotech Inc. Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants from pathogens, and immobilizing Bacillus spores on plant roots
MX358780B (es) 2013-08-08 2018-09-04 Pioneer Hi Bred Int Polipeptidos insecticidas con actividad de espectro amplio y usos de estos.
CN104651377A (zh) 2013-11-25 2015-05-27 浙江大学 新型的杀虫蛋白
ES2806473T3 (es) * 2014-02-07 2021-02-17 Pioneer Hi Bred Int Proteínas insecticidas y métodos para su uso
NZ726117A (en) 2014-06-20 2017-10-27 Dow Agrosciences Llc Vegetative insecticidal proteins useful for control of insect pests
US20160010062A1 (en) * 2014-07-09 2016-01-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Isolated Spodoptera Frugiperda Multiple Nucleopolyhedroviruses and Methods for Killing Insects
RU2017113002A (ru) * 2014-09-17 2018-10-17 Байер Кропсайенс Лп Композиции, содержащие рекомбинантные клетки bacillus и фунгицид
US9845342B2 (en) 2014-09-17 2017-12-19 Spogen Biotech Inc. Fusion proteins, recombinant bacteria, and methods for using recombinant bacteria
US10480008B2 (en) 2014-10-16 2019-11-19 Poineer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having broad spectrum activity and uses thereof
MX2017004814A (es) 2014-10-16 2017-08-02 Pioneer Hi Bred Int Polipeptidos insecticidas que tienen un espectro de actividad mejorado y sus usos.
EA038931B9 (ru) 2014-11-20 2022-02-18 Йиссум Рисерч Дивелопмент Компани Оф Зе Хебрю Юниверсити Оф Иерусалим Лтд. Композиции и способы получения полипептидов с модифицированным профилем гликозилирования в клетках растений
US10480006B2 (en) 2014-12-22 2019-11-19 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
BR112017022383A2 (pt) 2015-04-17 2018-07-17 Agbiome Inc polipeptídeo recombinante, composição, molécula de ácido nucleico recombinante, ácido nucleico recombinante, célula hospedeira, construto de dna, vetor, método para controlar uma população de pragas, método para produzir um polipeptídeo, planta, semente transgênica da planta, método para proteger uma planta, método para aumentar o rendimento em uma planta
CN108064234A (zh) 2015-04-22 2018-05-22 农业生物群落股份有限公司 杀虫基因和使用方法
RU2017144238A (ru) * 2015-05-19 2019-06-19 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки и способы их применения
US10364439B2 (en) 2015-06-03 2019-07-30 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
WO2016209708A1 (en) * 2015-06-22 2016-12-29 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
HRP20211858T1 (hr) * 2015-07-30 2022-03-04 Monsanto Technology, Llc Novi proteini za inhibiciju insekata
BR112018012893A2 (pt) 2015-12-22 2018-12-04 AgBiome, Inc. genes pesticidas e métodos de uso
EP3442994A4 (en) 2016-04-14 2019-11-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. INSECTICIDES POLYPEPTIDES WITH IMPROVED EFFICIENCY SPECTRUM AND USES THEREOF
US11028407B2 (en) 2016-04-19 2021-06-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal combinations of polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof
KR20190045293A (ko) 2016-09-06 2019-05-02 아그바이오메, 인크. 살충 유전자 및 사용 방법
MX2019005835A (es) 2016-11-23 2019-10-30 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Genes de toxinas axmi669 y axmi991 y metodos para su uso.
CN110506117A (zh) 2017-01-30 2019-11-26 农业生物群落股份有限公司 杀虫基因及使用方法
BR112019021380A2 (pt) 2017-04-11 2020-05-05 Agbiome Inc genes pesticidas e métodos de uso
BR112019024827A2 (pt) 2017-05-26 2020-06-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Construto de dna, planta transgênica ou progênie da mesma, composição e método para controlar uma população de pragas de insetos
EP3661950A2 (en) 2017-08-03 2020-06-10 Agbiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
US10743535B2 (en) 2017-08-18 2020-08-18 H&K Solutions Llc Insecticide for flight-capable pests
BR112020012477A2 (pt) 2017-12-19 2020-11-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. polipeptídeo recombinante; polipeptídeo inseticida recombinante; composição agrícola; construto de dna; célula hospedeira; planta transgênica; método para inibir o crescimento ou exterminar uma praga de inseto ou população de praga; método para controlar a infestação de praga; e método para melhorar o rendimento de uma cultura
US10907173B2 (en) 2017-12-22 2021-02-02 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
CN112218952A (zh) 2018-04-20 2021-01-12 农业生物群落股份有限公司 杀虫基因及使用方法
US11780890B2 (en) 2020-11-24 2023-10-10 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
BR112023023044A2 (pt) 2021-05-06 2024-01-23 Agbiome Inc Genes pesticidas e métodos de uso
WO2022256695A1 (en) 2021-06-03 2022-12-08 Mazen Animal Health Inc. Oral administration of coronavirus spike protein for altering cytokine levels and providing passive immunity to newborn pigs
WO2023107943A1 (en) 2021-12-07 2023-06-15 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
WO2024044596A1 (en) 2022-08-23 2024-02-29 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3651215A (en) * 1968-08-12 1972-03-21 Juro Morita Bacterial mosouito larva-killing agent
US3632747A (en) * 1968-08-20 1972-01-04 Juro Morita Bacterial fly-larva-killing agent
NZ201918A (en) 1981-09-18 1987-04-30 Genentech Inc N-terminal methionyl analogues of bovine growth hormone
US4886664A (en) 1982-06-18 1989-12-12 Rhone-Poulenc, S.A. Low-water-activity inocula for biological control
EP0192319B1 (en) 1985-01-22 1992-07-15 Mycogen Corporation Cellular encapsulation of biological pesticides
DE3541893A1 (de) * 1985-11-27 1987-06-11 Basf Ag Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus
US5024837A (en) * 1987-05-06 1991-06-18 Donovan William P Coleopteran active microorganisms, related insecticide compositions and methods for their production and use
US4996155A (en) * 1988-03-04 1991-02-26 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin
US5011685A (en) * 1988-04-06 1991-04-30 Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. Baculovirus proteins and viral pesticides containing same
GB8910624D0 (en) * 1989-05-09 1989-06-21 Ici Plc Bacterial strains
TR26973A (tr) * 1990-04-16 1994-09-12 Ecogen Inc Bacillus thuringiensis cryie geni ve lepidoptera takimindan böceklere karsi zehirli protein.
WO1991016432A1 (en) * 1990-04-18 1991-10-31 Plant Genetic Systems N.V. Modified bacillus thuringiensis insecticidal-crystal protein genes and their expression in plant cells
GB9023735D0 (en) * 1990-11-01 1990-12-12 Ici Plc Bacterial strain
US5277905A (en) * 1991-01-16 1994-01-11 Mycogen Corporation Coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
CA2059897A1 (en) * 1991-02-25 1992-08-26 Kenneth E. Narva Bacillus thuringiensis genes encoding novel coleopteran-active protein toxins
US5262158A (en) * 1991-04-30 1993-11-16 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis isolates for controlling acarida
UA48104C2 (uk) 1991-10-04 2002-08-15 Новартіс Аг Фрагмент днк, який містить послідовність,що кодує інсектицидний протеїн, оптимізовану для кукурудзи,фрагмент днк, який забезпечує направлену бажану для серцевини стебла експресію зв'язаного з нею структурного гена в рослині, фрагмент днк, який забезпечує специфічну для пилку експресію зв`язаного з нею структурного гена в рослині, рекомбінантна молекула днк, спосіб одержання оптимізованої для кукурудзи кодуючої послідовності інсектицидного протеїну, спосіб захисту рослин кукурудзи щонайменше від однієї комахи-шкідника
US5384924A (en) * 1992-08-03 1995-01-31 Mallinckrodt Medical, Inc. Warming blanket having multiple inlets
CZ290301B6 (cs) * 1993-03-25 2002-07-17 Novartis Ag Pesticidní proteiny, kmeny které je obsahují, nukleotidové sekvence které je kódují a rostliny jimi transformované
GB9324529D0 (en) * 1993-11-30 1994-01-19 Univ Singapore Biological control agents

Also Published As

Publication number Publication date
IL115382A (en) 2010-06-16
US5888801A (en) 1999-03-30
EP0792363B1 (en) 2003-12-17
EP0792363B2 (en) 2012-09-26
SI0792363T1 (en) 2004-04-30
CZ290801B6 (cs) 2002-10-16
ES2213162T3 (es) 2004-08-16
KR100419438B1 (ko) 2004-07-05
EP1382611A2 (en) 2004-01-21
JPH10506532A (ja) 1998-06-30
AU3743395A (en) 1996-04-19
SI0792363T2 (sl) 2013-01-31
AU692934B2 (en) 1998-06-18
RO119835B1 (ro) 2005-04-29
US5866326A (en) 1999-02-02
US5872212A (en) 1999-02-16
CN1160420A (zh) 1997-09-24
PH11995051386B1 (en) 2002-09-18
EP1754789A3 (en) 2009-11-11
EP0792363A1 (en) 1997-09-03
US5840868A (en) 1998-11-24
EP1754789A2 (en) 2007-02-21
HUT77449A (hu) 1998-04-28
DK0792363T3 (da) 2004-04-26
PH12002000307B1 (en) 2004-01-21
CZ90897A3 (cs) 2000-02-16
WO1996010083A1 (en) 1996-04-04
US6066783A (en) 2000-05-23
CA2199049A1 (en) 1996-04-04
DE69532333T2 (de) 2004-10-07
US5770696A (en) 1998-06-23
RU2196824C2 (ru) 2003-01-20
MX228013B (es) 2005-05-25
US5990383A (en) 1999-11-23
CN1255539C (zh) 2006-05-10
DE69532333T3 (de) 2013-03-14
US5849870A (en) 1998-12-15
BG101384A (en) 1997-10-31
IL146109A0 (en) 2002-07-25
US5889174A (en) 1999-03-30
PT792363E (pt) 2004-05-31
IL115382A0 (en) 1995-12-31
EP1382611A3 (en) 2004-03-31
BR9509099A (pt) 1997-09-30
CA2199049C (en) 2012-03-13
MX9702212A (es) 1997-06-28
DE69532333D1 (de) 2004-01-29
ES2213162T5 (es) 2013-02-12
TR199501182A2 (tr) 1996-06-21
DK0792363T4 (da) 2013-01-07
ATE256743T1 (de) 2004-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU222264B1 (hu) Új peszticid fehérjék és a termelő törzsek
AU684068B2 (en) Novel pesticidal proteins and strains
US20140182018A1 (en) Combinations of Cry1Ab and Cry1Fa as an insect resistance management tool
CN117051017A (zh) 新型昆虫抑制性蛋白
MX2011004154A (es) Proteinas derivadas de genes cry de bacillus thuringiensis.
TW496896B (en) An insect-specific protein or a protein enhancing the activity of an insect-specific protein, DNA molecule encoding same, and methods for producing sames

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20030319

HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: SYNGENTA PARTICIPATIONS AG, CH

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees